JPS6169792A - 抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 恢暑↓のトリ用分り！Ｅ 本発明は抗生物質、特に新規なベータラクタム抗生物質
およびこｉｔらの製造方、すｉに関オろ。

従来の技術 および 魚懸処朕火見長うと４−ろ１１η逆卓 へ一タラクタムは特に正反な抗生物質群を構成し、誼抗
生物質群に関しては、新規な抗生化合物を製造１−る目
的で…当な研究かなされている。

以−ハリン、Ｖ−ノステイノおよびＶ−α−アミノアノ
ピノ酸からのイノベニンリンＮの生合成はトリペプチド
、δ−（Ｌ−α−アミノアノビル−Ｌ−ンステイニルー
Ｄ〜バリンを経て（本明細書ではアノピン酸から誘導さ
れる一価残屑は「アノヒル」て示す）、酵素イノペニノ
リンＮノンセターゼの該トリペプチドへの作用によって
お二なわれろ。別のトリペプチド、δ−（レーα−アミ
ノアノビル）−Ｌ−ノスティニルーＤ−イノロイノン、
δ−（し−α−アミノアノビル）−Ｌ−メス−α−アミ
ノアノビル）−Ｌ−ノステイニルーＤ−（α−アミノブ
チレート）に対オろ、イソペニシリンＮノ／セターゼの
作用は、この転化に対する１、（質持５１埼評４ｍ才ろ
目的で研究されている（ハハーグー（ｎ　ａｌ＋ａｄｕ
ｒ）　、づｉ−ルトウ、ｆノ（ｒｌ、Ｉｌｄｗｉｎ’）
。

アノ＋　　（Ｕｓｈｅｒ）、Ｊ、Ａ、Ｃ，Ｓ、、ｌ　９
８１゜１０３．７６５０’、Ｓ即）。これらのペプチド
はいｔイｔら酵素によってベニノリノ分−トに変換され
てわり、まｆ二ごれらの化合物は英国生乳：１下２０５
２１８６Ａ号に包含ご１代る乙のでｊ５ろ１戸、イｌベ
ニノリノＮのこれらの新規アルキル類似体の特異的す佃
困活性：ｉイノペニンリノＮ自体より乙かなり低い。

本発明１５′ｔよ、１゛ν定の、注ひ深く選定さｉｔた
一肝の折現トリベブヂト類をイノペニノリノＮシンセタ
ーゼに対するＪＡ質として使用することによって、ｉｔ
り来公知の類似体よＩ）乙一般に高い特異釣部［−１活
性を存する抗生分子か、ＩＭＩ製されることを見出しｒ
二。

問題点を解決するｆこめの手段 即ち本発明には、一般式（１） （式中、Ｘ：よ硫Ｕ？県丁またはメチレン」舌を示し、
Ｒ１は水素原子、アミノ病、またはアノル化らしくはカ
ルバモル化アミノ堰を示し、Ｒ２は水、＋〕原原子上口
はアルキル括を示し、１え、はアルコキノ基を示す） て、１２１つされろ化合物かａよれる。

二のようｔベニノリノ化合物（１）は、ペナム（ｐｅｎ
ａｍ）系の２−（ケに通常Ｊ）２個のアルキル括（メチ
ル！ｌｒ、）の代りに、アルコキノ梧と水素原子らしく
：よアＦしキル１，１ｇをｒ「十ろ占て−ＩＩ富に例外
的てｊろ。

ベニノリノ（１）にアノいて、Ｘ：ユ屹黄原ｒて。５る
よりしメヂレノ括であるのｉ＋−好ましい。Ｒ１がアミ
ノ病よノこはアノル化乙しくはカルバミル化アミノ括て
あろ化Ｑｉ物；」特に重要である。好よしい置換アミノ
基は式ＲＣＯＮ　Ｈ−らしくはＲＮＨＣＯＮ　Ｈ−（式
中、Ｒは水素原子らしくは炭素原子数１〜５、好ましく
は１〜３の低級アルキル基、またはフェニル基もしくは
置換フェニル基を示す）で表わされる乙のである。置換
フェニル基は、アルキル基およびアルコキシ基、例えば
炭素原子数１．２らしくは３またはＲ１に関して以下に
説明するそれ以上の炭素ね子数のアルキル基およびアル
コキン基（特にメチル基およびメトキンａｔ；）を含む
ｌらしくはそれ以上の種々のタイプの置換基を含有して
いてらよく、また置換基はハロゲン残基、もしくはハロ
ゲン置換基、例えば臭素、塩素および弗素、ＣＦ、のよ
うなハロゲン置換アルキル基、遊離らしくは置換アミノ
基、例えばジメチルアミノ基、ヒトミキノ基、ニトロ基
、および当該分野で既知の他のベンゼン環置換基等であ
ってもよい。

しかしながら一般に、Ｒ１が未置換アミノ基である化合
物の方が、Ｒ１が置換アミノ基である化合物よりも重要
である。

Ｒ２はアルキル基であるのが好ましく、Ｒ２とＲ３は各
々別々に炭素原子数１〜５、特に１〜３もしくは４のア
ルキル基から成る群から選択するのが好ましい。このよ
っな基は直鎖アルキル話し１、＜はこれらを含有する基
であるのが好ましく、より小さな柄、例えばイソプロピ
ル基、ブａピル法、特にエチル基、就中メチル基、およ
びイソプロポキノ基、プロポキノ基、特にエトキン基、
就中メトキン基、が最し好ましい。

ペニノリン（Ｉ）は、例えば水に対する溶解度を高める
ために生理γ的に許容されろ塩の形態にするのが有利で
ある。このような塩形成にはアミノ基および生理学的に
許容される無機酸らしくは何機酸、または１個もしくは
２１１！Ｉのカルボキシル基および生理学的に許容され
る無機塩基らしくは有機塩基を必要とするが、例えばペ
ニノリン化合物（Ｉ）のナトリウム塩およびカリウム塩
が重要である。Ｒ１が水素原子以外の場合のベニノリノ
（１）立体化学に関しては、１１．とＣ０１１（か結合
した不整炭素原子において２つのコンフィグレーノヨン
が可能であるが、しコンタイプレーンジンが好ましい。

Ｒ７およびＲｉｌこ関して乙、１１＋まｌ二は■１３か
隣接力ルボキノル暴に対して同し空間的配置、１７をと
るかどうかによって、これらの基か結合しｆこ不整炭素
原子において２つのコノフィグレーノヨノがｕＩ詣でｆ
）：８が、後との場合か特に重侠である。

就中、１ｔ、がアルキル驕り場合は、どれらの５１ご外
体が以下に詳述するよ−“）に、本発明方法にょ−て直
接製造することかできるので重要てうる。

本発明による持資の式（１）で表わされろベニノリノ化
合物は、Ｘｉノ’Ｗ黄原子またはメチレノ」、Ｉ、を示
し、Ｒ１が水素原子またはアミノ基を示し、１１　ｙか
水素原子、メチル基またはエチル基を示し、Ｒ１かメト
キノ梧またはエトキノＪ、Ｉ）を示す化合物で、特にＲ
２が水素原子またはメチル桔を示し、［Ｒ３かメトキノ
塙である化合物か含まれ、次の化合物か例２ｊにされろ ２−メトキノ−２−メチル−６−６−（し−α−アミノ
アッパミド）−３−カルボキノベナム、２−メトキノ−
２−メチルー６−δ−（店−α−アミノアッパミド）−
３−カルポキノベナｚ、、２−メトキノ−２−メチル−
６−δ−アッパミド−３−カルボキノベナム、２−メト
キノ−２−メチルー６−δ（Ｌ−５−カルボキノメチレ
ノスティニル）−３−カルボキノベナム、２〜メトキノ
−６−δ−（ｋ−α−アミノアッパミド）−３−カルボ
キノベナム、２−メトキノ−６−δ−（Ｄ−α−アミノ
アッパミド）−３−カルボキノベナム、２−メトキン−
６−δ−アッパミド−３−カルボキノベナムおよび２−
メトキン−６−δ−（Ｌ−５−カルポキノメチルノステ
イニル）−３−カルボキノベナムっこれらの特定のベニ
ノリン（１）、就中ＩＲ，かアルキル基である化合物は
、チアゾリド／環の２−位および３−　ＦＬのアルコキ
シ基およびカルホキノ基がｃｐコンフィグレーノヨノと
して同Ｌ’Ｑの空間的配置を打ずろ立体異性体、印らア
ルコキノ２ジ一異性体として！■要である。２Ｓ−２−
メトキノ−２−メチル−６−δ−（し−アミノアッパミ
ド）−３−カルボキノベナムの（１が竜を以下の式（■
）に示す。式（［１）においては、隣（をするアミノ基
とカル十キン４ξは通當仔在する双極性イオノとして、
ｉ：　４−　。

Ｒ６が水素原子まｆ纂よアミノ括であるペニシリン（１
）は、一般式（■ン （式中、Ｘは硫黄原子またはメチレノ括を示し、Ｒ１は
水索峨子またはアミノ堰を示し、Ｒ２は水Ａ−除子上た
はアルキル堪を示し、Ｒ１はアルコキノ基を示す） て表わされろ対応するトリペプチドから、酵素イノペニ
ノリンＮシンセターゼの作用によって調製するのが便？
１１である。トリペプチドの立体化学に関しては、Ｒ１
とＣｏ、Ｉ−［が結合した炭素原子が非対称の場合には
、この原子上でのコノタイグレーノゴノはトリペプチド
（口１）からペニシリン（夏）への転化において保持さ
れろと考えられ、従って、使用するトリペプチドはこの
点にわいてペニシリンと同し立体化学を資するのが好都
合である。Ｒ２が水素原子であるかアルキル騒てのるか
には関係なく、前述のように、ペニシリン（りはチアシ
リトノ環のＣ２位の括の配置が異なった２種の立体異性
体てＩｆ　（Ｉ：４−る。Ｒ２が）′ルキル括の場合、
トリペプチド（ＩＩＩ）は同様に相当する位置に非対称
炭稟原子を有し、また、イソペニノリンＮンンセターゼ
を用いろトリペプチド（［１）からペニシリン（【）へ
の効果的な変換は、２−位にＲ−コンフィグレーション
を有ずろトリペプチドの場合にのみおこり、このコンフ
ィグレーションは変換中に保Ｆｌｆされて、２−位にＳ
−コンフィグレーションを有する立体化合的に同等のペ
ニシリンが得られろ。

Ｒ２が水素原子の場合、トリペプチドの相当する位置の
炭素原子は非対称でないので、得られるペニシリンはＣ
１位が畏なった２１ｉｌの立体異性体の混合物と考えら
れる。

Ｉ＼−ノリ／（１）のユ１．１製に使用・１ろトリペプ
チド（Ｉｌｌ　）は新規化合物である。、随一）で、モ
ノメリック乙しくはノスルフィドｌｌｊ　ｊ３のこ１Ｌ
らの化合物（ノスルフィト形咋のトリペプチドは後述の
ようにノヂオスレイトールを使用してモノメリック形聾
に変換されろ）は、１個らしくはそれ以上の官能仄か保
護されｆここれらの誘導体と共に本発明の範囲内に包含
されろ。中央部のノステイニル残屑のスルフィドリル基
、Ｃ−末端残活のカルボキノＪ、（、およびＮ−末端残
渣のカルボキノＪ＋１とアミ）基（存在４−る場合）は
、例えばペプヂド化学において猟ＩＩＩ　ｊれる保護Ｊ
λによって保護さ１％てらよく、圭ｆニ実飄例で説明計
るように、これっの保護されノこトリペプチドは保護、
、５れでいない最終的な！・リベブチトＣＩ＋）の合成
に使用される。本発明による特ｒＴノ）トリペプチド（
１、式（１１１）に」５いて、Ｘか硫黄す；Ｌ子または
メチレンｈ１を示し、Ｒ１か水素原子またはアミノＪ、
（を示し、Ｒ２か水素原子、メチル堰またはエチル括を
示し、ＲつかメトキノＪ占まｌ二はエトキノＪ古を示す
化合物で、特に［Ｌ、か水素原子またはメチル’＋’ｒ
　’２小し、ＩＬｌかメトキ７括を、、、、４゛化合物
が含まれ、次の化合物か例示されろδ　（ＩＬ　　α　
アミノアノビル）ＩＬ　　ノステイニル−（２１Ｎ−２
−アミノ−３−メトキノ−ブチル酸）、δ−（囚−α−
アミノアジピル）−見−７ステイニルー（２１ｔ−２−
アミノ−３−メトキン−ブチル酸）、δ−アジピル−Ｖ
−ンステイニル（２ｒｔ−２−アミノ−３−メトキノニ
ブチル酸）、δ−（Ｉ、−Ｓ−カルホキノメチルノステ
イニル）−レーノス子イニル−（２１−２−アミノ−３
−メトキノブチル酸）、δ−（ｋ−α−アミノアノビル
）−Ｌ−ンステイニルー（Ｄ−セリン０−メチルエーテ
ル）、δ−（切〜α−アミノアノビル）−シ＝ノステイ
ニルー（Ｄ−セリノＯ−メチルエーテル）、δ−アノビ
ル−Ｌ−ンステイニルーＤ−セリン０−メチルエーテル
）およびδ−（Ｌ−５−カルボキノメチルーツステイニ
ル）−１，−７ステイニルー（Ｄ−セリノ０−メチルエ
ーテル）。Ｃ−末端アミノ酸残璃のβ−炭素原子上にア
ルコキノ仄とアルキルＪｌ（を（ｒ４°るこれらのトリ
ペプチドの場合、萌述の理由から、このアルコ１キノ拮
とα−カルボキノ基は９ユフノフィグレ−ノヨノに配置
されろの１ノ１非１・；シに好ましい。上述の４種の化
合物の第１のグループの場合、２ｎ、３Ｒ−２−アミノ
−３−メトキンブチル酸残鳥５はＣ−末端が非常に好ま
しい。

δ−（１２−α−アミノアノビル）−見−ンステイニル
−（２Ｒ，３ｆｌ−２−アミノ−３−メトキノブチル酸
）の構造を式（ｍに示す。この場合、隣接するアミノ基
とカルボキノ基は通常存在する双極性イオンで示す。

トリペプチド（ｌｌＩ）はトリペプチド化学の標党的な
方法によって容易に合成できる。適当な合成ルートは一
般に、トリペプチドを構成する個々のアミノ酸の保護形
聾でのカラプリノブとその後の脱保護を含む。適当な保
護基はペプチド合成の分野で常用されているものから選
択すればよく、例えばアミノＪ、１．はヘンノルオキツ
カルーニル括らしく（工類似の誘導す、として保護し、
カル１．キノＪＩＩ；は／＼ノノル」古らしくは他の」
−スーノール括どし一ζＣ４：、ρし、またスルフィド
リル基はへノノル誘導駅として保護する。これらのルー
トはトリペプチド類、δ−（↓２−α−アミノアノビル
）−レーノステイニル−（２尺、３１１−２−アミノ−
３−メトキノブチル酸）およびδ−（Ｖ−α−アミノア
ノビル）−レーノステイニル−（見−セリン０−メチル
エーテル）のＪｌ製に関する実施例において説明する。

ペニシリン化合物（１）を製造するためには、トリペプ
チド（ｆｉｌ）をイノベニノリンＮシンセターゼを用い
て処理ずろ。この酵素は←Ｒ々の微生物、例えばペニシ
リン・クリソゲヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｃｈｒｙｓ
ｏｇｅｎｕｍ）およびストレプトマイセス・クラブリゲ
ニス（Ｓ　ｔｒｅｐＬｏｍｙｃｅｓ　ｃｌａｖｕ±１Ｅ
ｃｎｉｓ）から生産されろか、好ましい生産源はセファ
ロスポリウム会アクレモニウム（以肛駐頃すｏｒｉｕｍ
　ａｃｒｐｍｏｎｉｐｍ）である。セファロスポリウム
・アクレモニウムは広範囲から入手可能であり、池の生
産源は別として、いくつかの菌［未かアメリカン・クイ
ブ・カルチャー・フレクノヨノから入手可ｊ＆である。

このような菌昧としてはＡＴＣＣ２０３３９（セファロ
スポリウム（ＣｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕＩＩ）　ｓｐ
　　菌ＩＪｉＦ、＋２）、ＡＴＣＣ１４５５３（セファ
ロスポリウム・アクレモニウム（Ｃｃｐｈａｌｏｓｐｎ
ｒｉｕｍ　ａｃｒｃｍｏｎｉｕｍ））およびＡＴＣＣ３
６２５５（アクレモニウム・ストリフツム（Ａｃｒｅｍ
ｏｎｉｕｍ　ｓｔｒｉｃｔｕｍ））が例示される。

細胞を適当な条件Ｆて培養し、細胞不含抽出物を蛋白質
精製の分野で既知の方法を組合Ｕて精製してらよい。適
当な精製法は実施例において説明ｔろか、これによって
トリペプチドを抗生化合物に変換ずろのに適した酵素か
得られ、アルキル盾Ｉｔ、を含６゛オろトリペプチドに
対する変換率は約２０％らしくはそれ以上である。この
方法によって得られろ純度の酵素は、、イソペニシリン
段階を越入る変換をもたらす活性はａさない。水性媒体
中で該化合物を酵素を用いて培養するのに一般に適した
条件は次の通りである　・Ｉ）Ｈ７，０〜８０（例えば
７５）、温度２５〜２８°Ｃ（例えば２７℃）、時間３
０〜６０分間（例えば、′３０分間）、培養後、抗生化
合物は常法によって？ｎ離ごれろ。

酵素の、古注を最適化ζるた、ｙ）には１種らしくはそ
４を以上の補足因子、特に秩（就中、例えばＩＪＣ酸第
−鉄によ−、て供給される第一鉄イオノ）、アスコルビ
ノ酸塩イオノ（例えばアスコルビン酸７Ｊ・ら供給され
ろしの）およびノチオスレイトールのうりの１種乙しく
けそれ以上、持に′３ト■を（重用、Ｉ−ろのｊ）＼好
上しい。カタラーゼを培養培地にｔ６加４゛ろのら（＃
効て己う７＋９　これらのｌ（′：加成分を（・Ｕ用す
る方法は実！＋１！！例で説明４゛る。

アノル化らしく：よりルバミル化されたアミノシを含Ｃ
Ｔ　ｄ−ろペニシリン（１）は…当するアミノ捨金（Ｔ
ペニシリン（Ｉ）を適当なアノル化剤（例えば適当な酸
または塩化物や無水物のようなこれらの酸誘導体）、ま
ｒこは適当なカルバミル化剤（例えばｊ適当なアルカリ
金属ノアネート）で処理することによってノ、！１製す
るのか簡便である。塩は適当な血眼らしくはａ機酸乙１
．＜は塩括を用いて調製ずろのが簡便である。

本発明によろベニンリノ化、′７物、特にベニノリノコ
Ｓ−２−メトキノ−２−メチル−ら−δ−（ｋα　−１
′ミノアツパミド）−：う−カルホキノベナムオノノ、
び２−メトキノ−６６−（Ｌ、−α−アミノアッパミド
）−３−カルホキノベナムはスタフィ〔ノコックス・ア
ウレウス（Ｓ　ｃａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｃ、
ｕｓ、）を用いる試験において非１トに′に有用な結果
を１１え、またダラム陰性とクラム陽Ｖ１．の広範囲の
細菌、例えばエノエリノア・コリ（ＩＥｓｃｈｒｉｃｈ
ｉａ蝦）、ザルモ不う・チフィムリウム（Ｓ　ａｌｍｏ
ｎｃｌ−ｌａ！−γ］ｐｈｉｍｕｒｉＣ＋ｍ）およびバ
ノルス・メガテリウム（Ｉ３ａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａ
ｔｅｒｉシｍ）の抑制においてら非塁にｆｒ用である。

また、活性度は少なくとらイソペニノリンｔＪ自体の活
性度に匹敵し、従って、こイｔらの化合物は抗生物質の
有用な別の入手源となる。

これらの化合物は獣医用またはヒト用の医薬として種々
の方法で配合してもよいが、通んは生理学的に許容され
る希釈剤らしく：ｉキャリヤーの使用を含む。例えば液
状希釈剤と配合して水性組成物、活性組成物または乳化
組成物として使用して乙よく、このよ−）な組成物は通
’Ｍは非経Ｅ１投すごれｉｏりて殺菌処理に１．Ｆされ
、ピロゲンを含まない。

−）ろいは、これらの化合物（よ液状系＃＜〜ｊと配合
して軽ロ投１−多しで乙よいか、ＬＬｌｉπ５はこのＵ
的のノーめには固体状キャリヤー、例えばスクーチ、ラ
クトース、デキストランまたはステアリン酸マグネノウ
ムのような常套の１司体状キャリヤーと配合したｒｌｌ
ｌ巻成物用４〜ろのか＆ｒましい。

組成物を単位投与形態、即ち単位投与量ごとに区分しｆ
口形でき、−！ｎ位投与量の複数倍らしくは複数分の１
二区分した形態に配合してもよい。活性化合物の投与量
は、組成物に配合される個々の化合物の特性を含む種々
のファクターに左右されるが、指針としては、現７７：
するベニノリノの場合とほぼ同はのレヘルである。即ち
、成人に対する一日あたりの投与Ｍは２５０ｍｇ〜５ｇ
のオーダーで（多くの場合５００ｍｇ〜２ｇ）、通常は
＋ａ敗回にわＣノで投与されろ。ららろん、場合によっ
てはこれらの投与爪上りら多Ｍらしくは少量用いてもよ
い。

子供お及び獣医の分野においてら類似の投与基孕（ｍｇ
７　Ｋ　ｇ）１ノ・一般にノ凶用さ、（１ろ、南栄によ
り５本発明による化合物の１種以上を医薬組成物ζこ配
合してらｋく、うろいは池の活性化合物を配合して乙よ
いわ １ＩＬ−で本プこ明には、前述の化合物（１）および’
ＬＩｌｌＩ′；′１白（こ、：’ｌ”’ｉｉ、Ｌ−れろ
イ〒、１１＜重ししく：１キ）・リヤ　・２；’；　（
ｆ　４−ろ医薬組成物か含まれろ。さらに本発明に：↓
、イ（１１菌性感染症１上１８に前述の化合物（１）を
、１□２霊染ｆ１Ｅにｌ・ｔしてｒｊ効ム１投！ハるこ
とを含む細ＩＸｉ性「ム染症＋１１貨の治療方法か含ま
４ｔ４つ以下、本発明を実施例によ−て説明する。

実施例 那ｖＩ３ クロトン＠（８、６ｇ、　　Ｉ　ＯＯＩＩ１ｍｏ／！、
）をメタノール（５０ｍえ）に〆１°ｉｑさｔＬ、ｓ−
ブロムアセトアミＦ’（１３，８ｇ、ｌＯｍｍｏ、Ｊ）
を゛３０分間で添加しｆ−０得られた溶液を２５℃で１
５時間撹拌し、溶媒を、；へ発さＱ）−後、残ｌへをジ
エチル」９　アルと水にり）配さｔ！ｆ−０上−チル層
を乾燥Ｊｕ、濾過処理に付し１．！＼発処理にｆ＝Ｌし
た後、残渣をス留して表記化合物をｊｌｌ（Ｌｊ４オイ
ル（ｂ、ｐ、　　Ｉ（Ｆｌ−ＲＱ°／’　０　、５　ｍ
ｍ）として得ｙ＝（１４，３ｇ、　７２％）。

２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ、３Ｓ−２−ブロモ３−メトキ
ノブチル酸（１４ｇ、　７１ｍｍｏｆｌ）をアンモニア
と比重Ｏ、ａ　Ｓ、２５０　ｍ乏）に溶解さけ、混合物
をオートクレーブ中、９５℃て８時間加熱した反応混合
物を２５°Ｃまて冷却し、ｆ発処理に付した後、残渣を
アセトノに懸濁さＵ、得られｆ二俺色固体を濾別し、ア
セトンで洗浄して表記化合物を、残余臭化アンモニウム
含ｈ−ｍ色固体（ｍ、ｐ、　　Ｉ　８０〜１８・１°Ｃ
（分解）として得た（１２．１ｇ）。

（３）２ｆ１．３Ｒ−および２５．３Ｓ　　Ｎ−ヘンノ
ルオキノ力ルホニルー２−アミノ−３−メトキノブチル
酸、ベンノルエステル −メトキノブチルｅ（３，Ｉｇ）を、水酸化ナトリウム
１Ｍ溶液（２７ｍ、ｅ）、水（２０ｓｆ）およびノオキ
サン（４０ｍＪ２．）から成る混合物に溶解さ亡た。

得られた溶液にノオキザン（２０ｓｆ）にベンノルクロ
ロフォーメート（３，８ｌａ克、２２ｍ５ｏｆ）を加え
た溶液および水酸化ナトリウム１Ｍ溶液（２７麟克）を
別々に同一の添加速度で２５分間かけて添加した。得ら
れた混合物を１時間撹拌した後、エチルアセテートで抽
出しく３ｘ２００ｍ児）、２Ｎ塩酸を用いて抽出物を酸
性化しくｐＨ１）、次いでエチルアセテートで再抽出し
た（３ｘ２００ｍ児）。

有機抽出物を一緒にし、乾燥、濾過および蒸発の各処理
に付して得られたオイルを乾燥ツメチルフォルムアミド
（２０ｍ、ｅ）に溶解させ、この溶液に炭酸水素ナトリ
ウム（３，１４ｇ、　４１ｍｍｏ、ｉ）　、臭化ベンツ
７１／（３，８ｓ、ｉ、　３３ｍ５ｏｆ）、無水硫酸ナ
トリウム（２００＋ｓｇ）およびヨウ化ナトリウム（１
０ｉｎｇ）を添加し、混合物を２５℃で２４時間撹拌し
た。

次いて混合物をジクロロメタン（２００Ｊ、’ｌて抽出
し、水洗後（４ｘ３００　ｌｌ１ｉ）、乾燥しく硫酸ナ
トリウノ、）、濾過よ３１−び蒸発処理に付１−１た。

エチルアセテートと石油エーテルを連続溶離液と才ろノ
リ力ゲルとでのクロマトグラフィー精５νによ−て、表
記化合物をｊｌｉ（色オイル（４２ｇ、６５％）として
得た。該オイルは放置４−ると固化した（ｍ、ｐ４４℃
）。

エステル ２Ｒ，３Ｒおよび２Σ、３Ｓ　　Ｎ−ベンノルオキノカ
ルボニルー２−アミノ−３−メトキノブチル酸、ベンノ
ルエステル（５００ｍｇ、　　１．４ｍ５ｏ、りを乾燥
ジクロロメタン（３ｄ）に溶解させ、臭化水素酸（４５
％酢酸溶液、２軒）を添加した。得られた混合物をアル
ゴン雰囲気下で２０分間撹拌した後、蒸発処理に付した
。残渣をジクロロメタンに溶解させ（３Ｘ３ｍＮ）、再
蒸発処理に付しく３×）、残渣をキルンに溶解させＬ後
（２×３１１１え）、さ１、に：１′、定処理（、二４
１１．八（２Ｘ）、、イ１浦Ｓ、　チル（）ｆｆｉｆ）
を添加後、生成物を５分間Ｉ＋／！り砕さ、ＩＪ：液を
廃棄した後、固体状残渣をジクロロメタン（５ｍｆｆｉ
）に溶解さＵた。二のノクロロメタン溶液にトリエチル
アミン（Ｉｎ、りを添加し、２分間撹拌後、；４発処理
に付し、残渣をジクロロメタ／に溶解さｔ）（３×５ｍ
ｌ）、再に発処理に付して（３×）、得られた残渣をノ
エチルエーテル（５＃σ）とノ１に１’／　Ｑ砕いた。

１１１られノー固体を濾別し、ノエヂルエ　チルを用い
て再抽出した（２Ｘ５ｍ、９）。−堵にしたエーテル層
を熟発処理に付して表記化合物を１以色オイルとして得
た（２９０１℃１ｇ、　９３％）。

２焦、３焦−および２以、３ジー２−アミノ−３−メト
キノブチル酸、べ／ジルエステル（１７７ｍｇ。

０．７９ｗｏＪＪ）を乾燥ノ’ｙｏ口Ｊり７（１０ｍ４
）に溶解さＵ−１２−１’、ｌ・キノ　＼　−１トキノ
カル十ニル−１，２−ノヒトロキノリン（１９５Ｂ、　
０７９ｍｍｏｆｆｉ）わよびボールドウィン（ＩＪａｌ
ｄｗｉｎ）ッｙ）方法（ジャーナル・オブ・ザ・ケミカ
ル・ノサイエテ　ｒ　　（、Ｉｏｕｒｎａｌ　　Ｏｒ　
　ｔｈｅ　　Ｃｈｒ＋ｍ１ｃａｌ　　５ｎｃｉＯｔｙツ
バ−キン（Ｐｅｒｋｉｎ）１．ｌ　９８１．２２５３参
照）によって調製したメーベンノルスキンカルボニルー
α−へンノルーδ−（１，−α−アミノアノビル）Ｓ　
へノジル　し−ノステイノ（４５（ｒ　ｍｇ、　０　。

７９畦０兇）および硫酸ナトリウムＮＯＯｍｇ）を、′
６加し、混合物を２４時間撹拌した。溶液を；へ発処理
に付し、残渣をエチルアセテ−１−（Ｉ　５０　Ｉｌｌ
りに溶解させ、このエチルアセテート溶液を２Ｍ塩酸（
５０ｓｆ）、炭酸水素ナトリウム飽和溶液（５０ｍｌ１
）およびブライン（５０Ｊ）を用いて順次洗浄し、９２
．爆接、濾過および蒸発処理に１・ｔした。

連続溶離液としてエチルアセテートとヘキサンを用いろ
ノリ力ゲルヒてのタロマ）・グラフィー精製によって表
記化合物を無色固体として＋８０ｆ１ｇ（２９％）得た
（１１１．１）、＋１（１〜１１８゛、　−α−・″′
Ｄ −１１７°Ｃｃ　ｌ　、　ＣｌＩＣえ、））。２　ｎ　
、　３１え化合物）よ池の２　ｆ４−、３５　異性体り
りら極性は弱円Ｎ−ヘノノルオキノ力ルポニルーα−ヘ
ノツルーδ−（１，−α−アーノアノビル）−８−ヘノ
ツルー坏−ノステイニル−（２馬、３焦−２−アミノ−
３−メトキノブヂル酸）、ヘンノルエステル（２００ｍ
ｇ、０．２６　ｍｌ　）をテトラヒドロフラン（ＩＯＪ
）および乾燥液体アノモニア（３０ｍＪｌ）に溶解さｔ
）り。パーマネントブルー呈色が１０分間持続するまで
ナトリウムを少量づつ添加し、溶液が無色になるまて乾
燥硫酸アノモニウムを添加して溶液を冷却した。溶媒を
蒸発さけ、残渣を５０ｍＭ硫酸（２０ｍｆｆｉ）に溶解
ごＬ１ホプキンス試藁（０，０５ｍｌ、十−ルトウイン
らの前記文献参照）を添加しｒ為水酸化アンモニウムを
用いて溶液のｐｉ−１を４まで高め、得られた沈殿物を
水洗しく３×２０ｍ、９）、水（ＩＯｆｆｌＪｌ）にｊ
％Ｈさｌ、ｉだ後、過剰の硫化氷水を用いて処理しｆ３
随化第２水泪を、−３過Ｌｆ二後、凍結乾燥によって表
記化合物を白色固体として６７Ｂ（６８％）をｉ’、ｌ
ｊ為’１１ｎ、ｍ、ｒ　　のデータ（Ｄ、０、外部基べ
）！　Ｔ　Ｍ　Ｓ、δ値（ｐ、ｐ、ｍ、））は次の通り
てあろ　ｌ　、　０　：Ｏ（３Ｈ、ｄ、　、１　８　ｔ
（ｚ）。

１．６０〜！　、９０（４１１，ｍ）、　２．２５（２
１１，Ｌ。

、＋　　８　１１７）、　２．８０（２１１，ｇｌ）　
、　３．２５（３＋１゜ｓ）、　３．７５−３．９０（
２１＋、　ｍ）、　４．４０（Ｉ　Ｈ。

ｍ）。

この化合物の収量は既知量のノオキサノを添加し、１．
０５ノグナル（ＣＨＣＨｊ　プロトノ）に対１−るスタ
ンダードのｎ、ｍ、ｒ、晴分によって決定した。この方
法によれば、通常約Ｉθ％の残余アンモニウム塩がトリ
ペプチド中に検出された。この不純物は、実施例３に記
載するように、イノペニノリンＮシンセターゼ酵素との
培養において回し割合でメトキノル化ベニノリノを生成
する。

Ｕ方主 （１いＪｐ−メトギ／へ７）？レオキノカル」；ニへ（
ガツト（Ｗｔ：Ｙｇ、Ｉｎｄ）とハノガー（ＩＩｕｎｇ
ｃｒ）の方、去（ヘリノヒテ（Ｉ３ｅｒｉｃｈｔｅ）、
　　ｌ　９６２．９５□（１）、１参詔）によって６０
９０の収率て調伎乙たｊ！！！　（Ｑ　Ｆ＋’）固体（
ｍ、ｐ、　　９　ｆ’ｉ　〜（］　７　’Ｃ，）　Ｎ　
　ｐ　　メト−１−ノヘノノルオキノ力ルホニルーＤ−
セリノ（３３９ｍｇ、２．ＯＯ開ｏ、Ｊ）をメタノ″−
ルに溶解さけ、炭酸カリウム（１３８ＩＩｇ、　　ｌ　
、００ｍｍｏｊＬ）をＩｌ（（２ｍえ）に加えた溶液を
用いて処理しｒ二。混合物を乾燥；に全処理に付し、Ｎ
、Ｎ−ツメチル−フォルムアミド（Ｄ　ＭＦ　）を添加
ｉ糸、再ＦＡＲ処理しく２×２ｍえ）、固体状残渣を乾
燥加温１）　Ｍ　Ｆに溶Ｉｉ　、５　Ｌ！′、臭化ヘノ
ノル（２４８μｍ、２．１ｍｍｏｊｕ）を添１１＋ｌ　
シｒ二溶液を乾燥閉鎖フラスコ中、５０°Ｃで１　ｎｌ
ｉ間加；７．Ａ　Ｌ　ｆこ１．得らイーた混、１物・鷹
」−一子ル（１０ｍ児）と水（ｌｏｍｆ）に分配さＵ、
水性層をエーテルで抽出したＣ２ｘｌＯＴＩｌｊＬ）。

−２とにしｆ−抽出物を・Ｆ炭酸ナトリウ１、飽和水溶
液（うｆｆ１Ｊｌ）および飽和ブライン（５ＩＩｌ之）
を用いて、先庁トし、乾灼）後１、ｋ介弓−２ｈ’、さ
ｕ’　ｒ二。、容離液として　ｌ　　：　　ｌ　　ｖ／
ｖエチルアセテート　　石油エーテルを用いろノリカゲ
ルカラノ、Ｉでの残７Ｑ　ｙ）精製に、ニー・てノ〈記
化合物を均一・性オイル（３９０ｍｇ、８２り６）とし
て得ｆこ。該オイルは枚Ｊｌによって結晶化しＩｌ［色
固体とｔニー、ノニ（ｍ、ｌｌ、　６７−６８’Ｃ（］
」−］チル上−ゴルから１１）結晶）、丁α：”−６，
３°（ρ・１．０　、　ＣｌＩＣ０，、））う乙ｊ訣 Ｎｐ−メトキノヘノノルオキ７カルナニルーＤ−セリノ
へノノルエステル＜７２０１１ｇ、　　２．００ｍｍｏ
　ｉＬ　）を１苑燥ノクロロメクノ（２０ｍ児）に溶解
さＵ゛、溶液をトライアイス／′アセトノで冷却さケｒ
−。

ポロノトルフルオライトエーテレート（１００μ見）を
ｉＫ　ｆｉｌｌ　’ｆｔ、ノアｆメンノ（ＣＩＬＣ４１
２０ｇｈｌ中に３０ｍｍｏｆｌ含ＩＴ’）を滴下した。

約３０分後、溶液を濾過処理に付し、水（ｔｏｆｆｌえ
）を用いて１回洗浄後、・乾燥しくｘ＋ｇｓ　Ｏ＋）、
　、：；：発乾燥処理にＨした、（’Ｊられｌニジ父渣
を、店内「、【々としてクロロホルムを便［１１Ａ−ろ
ノリカッｒルＩ−てのご′〔１マド′ｒラーノｒ　処■
甲にイーして純粋ｔｈ表記化合物をオイルとして５２０
１Ｉｇ（７０％）得へ〇該オイルは放置によって結晶化
して１１１［色の固体と％−ｓた（　ｍ、　ｐ、　　Ｇ
　８−６９°Ｃ１′α１′□’　−ｌ　、３”　（ｃ　
４　、ｔｌ　、　０１１Ｃえ、））。

ヒトロタロラで１・ Ｎ−１１−メトキノヘノノルオキノカルポニルー〇−メ
チル−１）−セリノｌ＼ノノルエステル（１３０ｍｇ。

０　、３５　ｍｍｏｌ）に、冷ｌ・リフルオロ酢酸（Ｔ
Ｆへ）６アニノールの混合物（４８１〜／ｖ）（０６１
Ｉｌｌ）を添加しノニ。↑固形分か溶解するよで、こす
つ混合物を水浴上で震盪さＵｏ、Ｔ　Ｆ　Ａを最初は回
転アノ・ボレーター（０８Ｃ）を用いて蒸発、５１．！
、最後に高ｒｔ空ポツプを用いて留去さＵｏた。得られ
た残渣を、溶離液として９８　　：　２　ｖ／ｖクロロ
ホルム　メタノールを用いるノリカゲル上でのクロマト
グラフｆ−によって精製して表記の屑本化合物を帯０７
色オイル（３８ｍｇ、　　５５％）として得た。該オイ
ルは白色固体のヒドロクロリド塩に変換されろ（ｎ、ｐ
、１００〜１０１″（゛、］α　’−１１，Ｄ℃Ｉ） （ｃ　　２．０．　　ＣＨ３０１１）　　’）。

１ζ−ルー・ウィンらの方法（Ｉｉｉｉ　、尼文献参即
）によって調製した（Ｎ−ヘノノルオキノ力ルポニルー
α−へ７ノルーδ−１−−α−アミノアノビル）−５−
ヘンツルーし一ノステイノ（１５０ｍｇ、０２６ｍ＋ｎ
ｏｉ、）才ｊよびＯ−メチル−Ｄ−セリノヘノノルエス
テル、ヒト（！タロリド塩（６３Ｂ、０　、２６　ｍｍ
ｏ克）を、トリエチルアミ：／（３６ｕ　ｌ、　　０．
２６ｍｍｏ、ｆｊ）含（ｆノクロロメタノ（８１１１児
）に溶解さ什ｆ二。２−エトキノ−Ｎ−工トキノ力ルホ
ニルー１．２−ノヒトロキノ゛リノ（６４Ｄ）を添加し
、溶液を２４時間撹拌ざＵた。この溶ｌ戊を蒸発処理に
付し、残渣をクロロホルム（１０＋＋４）に溶解さけ、
溶液を０　、１　Ｍ塩酸（Ｉ　ＯＪ）および炭酸水素ナ
トリウム飽和溶液（１０ｍえ）を用いて洗浄し、乾燥後
（＼Ｉ？、ＳＯ，）、１１・と過ｒｊよび蒸発処理に付
した。残渣を溶４１液として９８　　：　　２　ｖ／ｖ
クロロホルムメタノ＝−レを用いるノリカゲル上でのク
ロマトグラフィー精製処ｐ１１に付したｊ（、エチルア
セテートからの結晶化によって表記化合物を嘩色の固体
としてｌ　５０ｍｇ（７Ｇ％）ｉすた（　ｍ、ｐ、　１
５１−１５２℃。

Ｕα］！。−１３，９′（ｃ　１．０．Ｃｌｌ０！、、
））、。

１目ｎ、ｍ、ｒ　　のう１−タ（ＣＩ）ｉｃ＼、外ｒ’
ＡＩ　ＩＡ　／Ａ　′ｒ　ＭＳ、δ（直（ｐ、ｐ、ｍ、
））ｔ１次の通りでのる　　１５〜２３（溶媒のピーク
を貧む）、２．７２（２Ｈ。

／＼ＢＸオクテツト、　　Ｊ　　　ｌ　３．５．　　、
ｊ、ＸＸＢ ７　．４　　、　　　Ｊ　　Ｂｘ　　　Ｆ）　　、ＯＨ
ｚ　　）−３，２０（３Ｈ，ｓ　　１３．５６（ｌ　ｌ
（、ＡＢＸ！Ｊ）Ａ部分、　　１．、Ｂ　９．２゜ＪＡ
Ｘ３．２Ｈｚ　）、　：３．７３（３Ｈ，ｓ　）、　３
．７７（ｌＨ，Ａｌ３Ｘの８部分、ＪＢＸ　、１．０Ｈ
２）。

４．２，４．５２．４．６０（３ｘ　Ｉｆ−１，ｍ　）
、５．１Ｃ（ｉＨ，ｍ’）、６．１３，６．６８，７．
１７（３ＸＩＩ（）、７．３５（２０Ｈ，ｍ）。

（Ｎ−ヘノノルオキノ力ルホニルーα−ヘノツルーδ−
Ｌ−α−アミノアノビルノー（Ｓ−ヘノツルー甲−７ス
テイニル）〜（０−メチルーリーセリノヘノノルエステ
ル）（８０＋ｕｇ、　　０　、　ｌ　Ｏｍｍｏ、９）を
テトラヒトロフラ７（１ｍｌ）および乾燥液体アンモニ
アＣ３０ｍ１）に溶Ｒ’Ｎ　Ｊ　ｉｔた。溶液ノ；’１
　（Ｂ呈色がう分間１テ続するよてナトリウムを少Ｈ，
＋ずつ添＋１１１した後１．′み液かｊ１色にζるよで
乾燥硫酸アンモニウムを［エト）て冷却さｕ′ｆ二。浩
媒を■発させた残渣を水（５ｍ、９）＋こ溶解さけ、水
酸化アンモニウムを添加して溶液ＪつｐＨを８に高めｒ
こ後、酸素を４時間通気しｆ二。分取電気泳動ｆｈ　Ｄ
’Ｊ法（ｐＨ３，５，３Ｋｖ、２時間）によって７スル
フイト形聾の表記化合物を（！）を色固体としてｉすた
（ｌｏｍｇ、２６％）。

’Ｈｎ、ｍ、ｒ　　のデータ（Ｄ、０、外部仄学１ｉＳ
。

δ値（ｐ、ｐ、ｍ、））！１次の通りである　　１５〜
１８（４Ｈ，１１１）　、　　２．２５（２１Ｌ　Ｌ　
、　　Ｊ　　７．ＯＨｚ）。

２．７３（２１−１，ｍ）　、　　３．１９（３Ｈ，ｓ
）、　　３．６５（２Ｈ，ＡＢＸ、、Ｊ　　　ｌ　Ｏ，
５，ＪＡＸ　３．９゜１〜Ｂ Ｊ　　　５．５　　Ｈｚ）、３．８４（ＩＩｌ、Ｌ、Ｊ
　　６．２１Ｘ １−１ｚ　）、４１０（ｌ　Ｈ，Ｌ、、＋　　５．８Ｈ
７）、−１，＝１７（ｌＩｌ、ｍ）。

甚１Ｕ）− ムの調製 実施例日こ記載しｆこようにして′Ａ製したδ−（見−
α−アミノアノビル）−Ｖ−ノスティニルー（２Ｒ，３
Ｒ−２−アミノ−３−メトキノブヂル酸（２１０μｇ）
を、Ｎｌｉ足因子ジチオスレイトール（２，１Ｉ　ｔｈ
Ｍ）、アスコルビン酸（ｌ　、０６　ｍＭ）、Ｖξ酸第
−鉄（０、ｌ　ｌ　　ｍｉ’、Ｉ）よｊよびカタラーゼ
（生の肝臓、１８００ノグマユニＪト）の存在下に精）
ソイソベニンリンさＪ、ノンセターゼ（後述のようにし
て得られろ１　ｌユニット）と共に、トリス−ｕｃｆｆ
ｉＢＬ衝液（５０ｍＭ、　　ｐＨ７，５：　　トリスは
２−アミノル２−ヒトロキノメヂルプロバノ１゜３−）
オールを示す）中で培痒さｕ′ｆこ（老体積１１１え）
６培谷はＣ盪器（２５０ｒｐ、ｍ、）内において空気に
３０分間さらし、２７℃でおこな一１為混合物にアセト
ノを添加することによ−て（アセトノ濃変７０容８Ｊｋ
％）、蛋白質を成心さＵ、沈−７物を遠心分離によ−て
分離し、Ｌ澄みを凍結乾燥さＵ゛た。凍結乾燥物を水（
５００μりに＋Ｉｊ溶解さＵ、９０％ｖ／ｖ　５０ｍ　
ＫＩｌ＋ＰＯ＋／　ｌ　Ｏ％ｖ／ｖメタノールを溶離浩
媒とずろＨＰ　Ｌ　Ｃ（つ十−ターズ（Ｗａｔｅｒｓ）
社ツソ　　ラノアル・バック（Ｒｑｄｉａｌ−Ｐａｋ）
　Ｃ１ｅ　　ｌ　Ｏカートリッジを備えたＺモノユ−ル
ラジアルコノプレッノヨンセパレーターノステム）によ
って生成物を精製し、２２０開におけるその吸収から抗
生物質を検出した。このようにしてｉｒＪられｔソＩ−
代物を直ちに凍結乾燥処理に付して表記化合物を調製し
た。

この１．Ｊ＋枯乾燥物質のｎ、ｍ、ｒ　　スペクトルを
測定し、上述の溝造式（ＩＶ）におけろ種々のプロトノ
ノブナルの帰属を以下に示す。

ノブナル　　　プロトノ １．４７　　　　７−ＣＩｌ、− １，６４β−ＣＩ−１、− １，７＝ｌ　　　　　Ｃ１１３−（Ｃ−２）２１３　　
　　　δ　　１１・ ３　１３　　　　　ＣＩｌ、Ｏ−（Ｃ−２’）３．４９
　　　　　　　ｒｒ　　　Ｃｌ１−４．２４　　　　　
１−１−３ ５、ｌＧ　　　　　　ｌｌ−５ ５，３２８−６ 核オーバーハウザー実験によって、該化合物の２−位に
おけろ立体化学が表記の通りて己うろことを確認した。

１．７４　　ｐ、ｐ、ｍ　　におけろノンブレット（メ
チル猜）に昭射することによって、β−コノフｆグレー
ノヨノにおけるメチル居に一致ずろ１　２４　１）、ｐ
、ｍ　　（ＩＩ−３）における別のスベ”　トル中のノ
ブナルを高める（典型的には１９％）（イノペンＮおよ
びベノＧの場合、１３−メチル清の昭羽増大卒居よ典型
的にはそ１１ぞれ２１％わ上び２５？６である）。高速
原子ｉ÷「撃（ＦＡＢ）条件下てｉｊｌ、ＩＩ定したこ
の化合物のマススペクトルは分子イオン１−Ｍ１ビ１３
７Ｇｍ／ｅを示しｌ−０３２１ｍ／ｃにわけろスベタト
ルビークは次のベニンリノフラグメノトの特性ビークで
３５ろう フ壇−−セフ　ｌ・（Ｆ　ａｗｃｅｔｔ）らの方法（バ
イオケｌ、（旦］巴回ｍ、）　　Ｊ、、＋９７６、　Ｌ
立デ、６５１−［’ｉ　Ｇ　Ｏｔ’昭）によってセフア
ロスポリン・アクレモニウムＣ０７２８の引１１胞を培
篠させｌ二（但し、水通水の代′）に１留水を使用し、
ｒ−）。１′ノペニノリノＮシンセターゼを以下のステ
ーノブ（実施温ｊり２〜４°Ｃ）によって純粋な彩で１
１１離しｆこ。

（Ｉ）ｆｌｌｌフッソ物の調製 １η糸←１：（待合９６／定児■Ｉの開始後約１０時間
）＋Ｆ　２市層のヂーズクロスを用いろ、ｌｌ過によっ
て採ｉ［Ｚ　Ｌ　を二。ｉ采取さ（−ｆ二州１胞を３ｘ
（ｖ／ｗ）７へ留水に＋Ｔｉ”ｊ’　ｌ’ｉ＋Ｉ　ａ　
ｔｉ、ヒユーヒナ−漏斗に敷いｆ−ポワットマノ（Ｗｈ
ａｔｍａｎ）　ＩＩ！祇（Ｎｏ、　５２　））−て吸引
乾燥さけ１こ。Ｏｌ）引’：’Ｌ　ｊ％　ｔ’＋１糸体
をｔ″Ｊ３　Ｘ　（ｖ／　Ｗ）＝）　５０　ｍＭ　　ｔ
−リス−ＨＣえｆＡ衝液（ｐトＩ８０）に７局させ、ダ
イン（Ｄｙｎｏ）　　ミル（ウィリー・エイ・ベーコフ
ｊノ・アーゲー・マノー不ノー１７ブリータ（Ｗｉｌｌ
ｙＡ　Ｂａｃｏｒｅｎ　ＡＧ　Ｍａｓｃｈｉｎｅｎｆａ
ｂｒｉｋ）、バーゼル（Ｂａｓａｌ））中で、ガラスヘ
ット（６０ｆ）ｌＩｌｌ）内において３０００　ｒ、ｐ
、ｍ　　で撹拌されたガラスピーズ（０，２５ｍｍ）　
５００　ｍａｌを用いて粉砕した。

（？つ４＠ｐＬ７’　ｃｚクーＬ匹分−別一前記のホモ
ツユネートに１／４体積の硫酸ブロクミノ溶液（６％ｗ
／ｖ蒸留水水溶液）を添加しＬ０得られた溶液を２０分
間撹拌後、３０分間の遠心分離処理（ｉｏ、ｏｏＯｇ）
に付して沈殿物を除去した。

（３）硫酸アンモニウムの分別 Ｍ記の捕集上澄み液に硫酸アンモニウム（ノグマ（ＳＩ
ｇｍａ）社、グ１ノードＩ　）を５５％飽和さけ、沈殿
物を遠心分離処理（１０，０００ｇ、　３０分間）によ
って除去した。次いて上澄み液に硫酸アンモニウムを８
５％飽和さけ、虚心分離処理（１０，０００ｇ。

４５分間）によって酵素蛋白質を沈殿物として回収しＬ
ｏ （４）セフｌデ・ノクス（Ｓ＋：ｐｈａｄ＋＋ｘ　）Ｇ
−７５カラム久三マドグラフイー ５５〜８５％の硫酸アンモニウムの分別後に得られた沈
殿物を最小らｌのトリス−ＨＣ見緩衝液（５０ｍＭ、ｐ
Ｌ＋７．５，０．０１５％ｖ／ｖアノトナトリウ！・）
に溶解させ、蛋白質の最終５１隻を約４０１！１ｇ／ｍ
乏とじた。この蛋白質溶液８０ｍ克を、同しトリス−Ｈ
ｃｔｌ緩衝液を用いて予め平衡化処理したセファデック
スＧ−７５（ファーマノア（Ｐｌ＋ａｒｍａｃｉａ封Ｊ
：のコース（ｃｏａｒｓｅ）品カラム（３７ｃｍＸ　ｌ
　ｌ　Ｏｃｍ）Ｉこかけｆこ。イソペニシリンＮシンセ
ターゼ活性を有するフラクションを捕集し、８５％ｖ／
ｖ硫酸アノモニウムを用いる沈殿およびその後の遠心分
離（１０，０００ｇ、　４５分間）によ−て酵素蛋白質
を濃縮した。

セファデックスＧ７５カラムクロマトグラフイーから酵
素フラクションをイオン交換クロマトグラフィー処理に
付すことによって高純度の酵素凋ツ１ノ物が得らＡ１ろ
、活性−フラクションを捕集し、トリス−［ｔｃｔ緩衝
ｉ＆（５０ｍＭ、ｐＨ７，５，ｏ、。

１５％Ｗ／Ｖアットナトリウム）用いてｆ−め事後（化
処理したＤＥＡＥ　セファロースＣＬ−６［３カラム（
５ＣＩＲＸ　ｌ　１．５ｃｍ）に直接かけた。同しトリ
ス−ｏ　ｃ　ｉ、緩衝液を溶媒とする５　０　ｍＭ　Ｎ
ａＣえ溶液約５００Ｊを用いてカラムを洗浄して未結合
物質を除去した。このカラムを、緩衝液を溶媒とするＮ
ａｃｋの傾斜溶離に付したところ（５０ｍ〜Ｉ＝２５０
　ｉＭ、全容積８００Ｉｌｆｌ、−次傾斜）、活性酵素
は約Ｉ　００　ｍＭ　ＮａＣ克で溶離した。カラムから
得られた酵素調製物は直接使用するのに適している。

酵素の活性度はイソベニノリノＮシンセターゼ活性ユニ
ットを用いて定量的に表示してらよく、このようなユニ
１トの１つは、面部の培養条件と同様の培養条件を用い
る標べへ的なアッセイ法に４Ｊいて、イノベニノリノＮ
が２７°Ｃて１分間あたり１μｍｏｌｅ生成するのに必
要な酵素活性度として定義されろらのである。

実施例４ 実施例２に記載のようにしてＲ製したδ−（Ｌ−α−ア
ミノアノビル）−見−ノステイニルー（以−セリノー０
−メチルエーテル）を、実宿例３に記載のようにして得
られた精製イノペニノリンＮノンセターゼと」（、に培
養した。培養培地は水中てＪ＾１製しｒこ以下の種々の
成分溶液７）・ら成るトリペプチド（１０Ｉ＋１ｇ／！
Ｔｌえ）　１００μ克硫酸第−鉄（５ｍＭ）　　　　　
　１００μ、９し一アスコルヒノ酸（５ｍＭ）　　１０
０μＬノチオスレイトール（ｌＯＱｍＭ）　　　５０μ
え水酸化ナトリウム　（１００１ＩＩＭ）　　　３０μ
！最終的な容積はトリス緩衝液（ｐＨ７，５）を用いて
５Ｊに５μ整した。ペプチド溶液の代りに水１００μえ
用いてコノトロール試験をおこなった。

培養は空気にさらしたδ（９器（２５０ｒ、ｐ、ｍ、）
内において、３０℃で３０分間おこなった。アセトノを
ｌム加４′ることによ−で（アセト）Ｃ度７ｏ％ｖ／ｖ
）混合物から蛋白質を沈殿さ１．遠心分離（５，００Ｏ
ｒ、ｐ、ｍ、Ｉ　０分間）によ・て分離させ、さらに上
澄み液をアセトン除去後、貞空下で凍結乾燥させて表記
化合物を得た。この化合物は、２Ｂ−異性体と２５−！
Ａｌ性体との混合物と考えられる。

凍結乾燥物質の’Ｈｎ、ｍ、ｒ、スペクトル（２５０Ｍ
Ｈｚ、ＨＯＤ抑制Ｄ　ｔ　Ｏ、外部基準ＴＭＳ。

δ値（ｐ、ｐ、繭、））は次の通りである　５．２３（
ＡＢ−カルチット）、　　５．４５（２Ｈ，Ｊ＝３．９
５Ｈｚ）。

実施例５ ノベナム 実施例３に記載のようにして、トリペプチド２１０μｇ
から得た凍結乾燥生成物をトリス緩衝液（ｐｔｌ　７　
、５　）に溶解させ、溶液の全容積を１ｍえとじたウニ
の溶液１００μＬを、表−１に示を種々の微生物に一ノ
いてホ　ルブレ　ト抑制アブセイ（ｈｏｌｅ−ｐｌａｔ
Ｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ）に使用した。こ
れらの微ＩＪ物にスト１゛ろベニノリノの抗生活Ｖ１は
表−１に示す結果から明確に説明されろ。個々の尚生物
にχ↑して同じ抑制レベルを与えるのに必要なイソペニ
ノリノＮの呈し表−１に示す。ベニノリン２ジー２−メ
トキン〜２−メチル−６−β−（■、−α−アミノアジ
パミド）−３−カルボキノペナムの活性は、トリペプチ
ドからの５０％変換速変に基づいて、イソベニノリンの
活性にほぼ匹敵する。

表−１ （＊）負号は抑制の欠如を示す。

（２）２　メトキノ−６δ　（１，−α　アミノ実施例
４に記載のようにして：Ｊ？Ｊ製され八ｌ・リペプチド
５００μｇから得られた凍結乾燥生成物を水２００　Ｉ
ｔ　ｉ　ニｌ’）４’ｌ解さｕ、ｌ　ノｔｉｉｍ　ｌ　
１１０　μｆｌを、バノルス虐セレウス（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ）５６９　／　Ｈ／　９からのβ−
ラクタマーゼをイｌ′ｌ（添加らしくは添加したスタフ
ィロコックス・アウレウスに対して、ホール・ブしノー
ト・アッセイによって培養した。この溶液の残りの１０
０μ！をさらに水１００μえで希釈し、この希択溶液１
００μσをスタフィロコブクス・アウレウスにχｒして
アッセイした。この手順を繰り返して一連の／ｉＩ沢閲
をｉすた。凍結乾燥固体を含イ１しないコツト（Ｊ−ル
し使用した。得られｆこ結果を表−２に示す。〕（−２
から明らかなように、β−ラクタマ〜ゼの不＋’ｒ：　
（１゜での化合物の抗酸活性は、この酵讃の作用によっ
て損われろ。

表−２ 特許出願人　ナショナル・リサーチ・ ディベロップメント・

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｘは硫黄原子またはメチレン基を示し、Ｒ＿１
   は水素原子、アミノ基またはアシル化もしくはカルバミ
   ル化アミノ基を示し、Ｒ＿２は水素原子またはアルキル
   基を示し、Ｒ＿３はアルコキシ基を示す） で表わされる化合物または該化合物の生理学的に許容さ
   れる塩。 ２、Ｘがメチレン基を示す第１項記載の化合物。 ３、Ｒ＿１が未置換アミノ基を示す第１項もしくは第２
   項記載の化合物。 ４、Ｒ＿２がアルキル基を示す第１項から第３項いずれ
   かに記載の化合物。 ５、Ｒ＿２が炭素原子数１〜５のアルキル基を示す第１
   項から第４項いずれかに記載の化合物。 ６、Ｒ＿２がメチル基またはエチル基を示す第１項から
   第５項いずれかに記載の化合物。 ７、Ｒ＿３が炭素原子数１〜５のアルコキシ基を示す第
   １項から第６項いずれかに記載の化合物。 ８、Ｒ＿３がメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基ま
   たはイソプロポキシ基を示す第１項から第７項いずれか
   に記載の化合物。 ９、生理学的に許容され得る塩の形態である第１項から
   第８項いずれかに記載の化合物。 １０、Ｒ＿３が３−カルボキシル基に対して同じ空間的
   配置を有する第１項から第９項いずれかに記載の化合物
   。 １１、Ｘが硫黄原子らしくはメチレン基、Ｒ＿１が水素
   原子またはアミノ基を示し、Ｒ＿２が水素原子、メチル
   基またはエチル基を示し、Ｒ＿３がメトキシ基またはエ
   トキシ基を示す第１項から第１０項いずれかに記載の化
   合物。 １２、化合物が２−メトキシ−２−メチル−６−δ−（
   ￥Ｌ￥−α−アミノアジパミド）−３−カルボキシペナ
   ム、２−メトキシ−２−メチル−６−δ−（￥Ｄ￥−α
   −アミノアジパミド）−３−カルボキシペナム、２−メ
   トキシ−２−メチル−６−δ−アジパミド−３−カルボ
   キシペナム、２−メトキシ−２−メチル−６−δ（￥Ｌ
   ￥−Ｓ−カルボキシメチルシステイニル）−３−カルボ
   キシペナム、２−メトキシ−６−δ−（￥Ｌ￥−α−ア
   ミノアジパミド）−３−カルボキシペナム、２−メトキ
   シ−６−δ−（￥Ｄ￥−α−アミノアジパミド）−３−
   カルボキシペナム、２−メトキシ−６−δ−アジパミド
   −３−カルボキシペナムまたは２−メトキシ−６−δ−
   （￥Ｌ￥−Ｓ−カルボキシメチルシステイニル）−３−
   カルボキシペナムである第１項記載の化合物。 １３、２−メトキシ基がＳコンフィグレーションを有す
   る第１２項記載の化合物。 １４、第１項から第１３項いずれかに記載の化合物およ
   び生理学的に許容され得る希釈剤もしくはキャリヤーを
   含有する医薬組成物。 １５、投与形態の第１４項記載の組成物。 １６、第１項から第１３項いずれかに記載の化合物を細
   菌性感染症患者に該感染症に対して有効量投与すること
   を含む細菌性感染症患者の治療方法。 １７、一般式（III）： ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、Ｘは硫黄原子またはメチレン基を示し、Ｒ＿１
   は水素原子もしくはアミノ基を示し、Ｒ＿２は水素原子
   またはアルキル基、Ｒ＿３はアルコキシ基を示す） で表わされるトリペプチドを酵素イソペニシリンＮシン
   セターゼで処理することを含む第１項記載の化合物［式
   （ I ）中、Ｒ＿１は水素原子またはアミノ基を示す］
   の製造方法。 １８、トリペプチド（III）が、式（ I ）で表わされる
   化合物のチアゾリドン環のＲ＿２に相当する位置にアル
   キル基を有し、該アルキル基がトリペプチド中でＲコン
   フィグレーションを有する第１７項記載の方法。 １９、イソペニシリンＮシンセターゼがペニシリン・ク
   リソゲヌム、ストレプトマイセス・クラブリゲニスまた
   はセファロスポリウム・アクレモニウムから入手可能な
   第１８項記載の方法。 ２０、酵素がアメリカン・タイプ・カルチャー・コレク
   ションにＡＴＣＣ２０３３９、ＡＴＣＣ１４５５３また
   はＡＴＣＣ３６２５５として寄託されている微生物菌株
   から入手可能な第１７項から第１９項いずれかに記載の
   方法。 ２１、１種もしくはそれ以上の補足因子の存在下でおこ
   なう第１７項から第２０項いずれかに記載の方法。 ２２、実施例のいずれかに実質上記載された第１項記載
   の化合物の製造方法。 ２３、モノメリックもしくはジスルフィド形態で存在す
   る式（III）： ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、Ｘは硫黄原子またはメチレン基を示し、Ｒ＿１
   は水素原子またはアミノ基、Ｒ＿２は水素原子またはア
   ルキル基、Ｒ＿３はアルコキシ基を示す）で表わされる
   トリペプチド、または１個もしくはそれ以上の官能基が
   保護された該トリペプチドの誘導体。 ２４、１個らしくはそれ以上のスルフィドリル基、Ｃ−
   末端残基のカルボキシ基、およびＮ−末端残基のカルボ
   キシ基およびアミノ基（存在する場合）が保護された第
   ２３項記載の化合物。 ２５、Ｘが硫黄原子またはメチレン基を示し、Ｒ＿１が
   水素原子またはアミノ基を示し、Ｒ＿２が水素原子、メ
   チル基またはエチル基を示し、Ｒ＿３がメトキシ基また
   はエトキシ基を示す第２３項または第２４項記載の化合
   物。 ２６、化合物がδ−（Ｌ−α−アミノアジピル）−￥Ｌ
   ￥−システイニル−（￥２Ｒ￥−２−アミノ−３−メト
   キシ−ブチル酸）、δ−（￥Ｄ￥−α−アミノアジピル
   ）−￥Ｌ￥−システイニル−（￥２Ｒ￥−２−アミノ−
   ３−メトキシ−ブチル酸）、δ−アジピル−Ｌ−システ
   イニル（￥２Ｒ￥−２−アミノ−３−メトキシ−ブチル
   酸）、δ−（￥Ｌ￥−Ｓ−カルボキシメチルシステイニ
   ル）−￥Ｌ￥−システイニル−（￥２Ｒ￥−２−アミノ
   −３−メトキシブチル酸）、δ−（￥Ｌ￥α−アミノア
   ジピル）−￥Ｌ￥−システイニル−（Ｄ−セリンＯ−メ
   チルエーテル）、δ−（￥Ｄ￥−α−アミノアジピル）
   −Ｌ−システイニル−（Ｄ−セリンＯ−メチルエーテル
   ）、δ−アジピル−￥Ｌ￥−システイニル−Ｄ−セリン
   Ｏ−メチルエーテル）またはδ−（￥Ｌ￥−Ｓ−カルボ
   キシメチル−システイニル）−￥Ｌ￥−システイニル−
   （Ｄ−セリンＯ−メチルエーテル）である第２３項から
   第２５項いずれかに記載の化合物。 ２７、Ｒ＿２がアルキル基を示しＲ＿３がアルコキシ基
   を示し、Ｒ＿２とα−カルボキシ基が￥ｃｉｓ￥−コン
   フィグレーションを有する第２３項から第２６項いずれ
   かに記載の化合物。