JPS62116519A - 人胎盤抽出細胞代謝活性化物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔イ〕発明の目的 本発明は、ヒト又は牛の正常分娩（出産）後の胎盤から
抽出された、新規な水溶性蛋白質、及びその抽出法、並
びに、肝炎ウィルスの不活化法に関する。

（産業上の利用分野） 胎盤エキスには、組織代謝賦活作用、組織再生修復能が
知られており、強肝、抗潰瘍剤、損傷修復剤として利用
されてきた。

本発明による新規な水溶性蛋白質は、分子量がヒトの胎
盤から抽出されたものでは、９万２千で、さらに、牛の
胎盤から抽出されたものでは、８万と２万５千にあり、
細胞代謝活性化作用が顕著である。すなわち、本発明に
よる水溶性蛋白質は、繊維芽細胞の増殖と伸展を促進し
、又、ヒトの胎盤から抽出されたものでは、マクロファ
ージの伸展を促進して、責食作用を促進する。よって本
発明による新規な水溶性蛋白質は、例えば、医薬品とし
て、強肝剤、胃、十二指腸潰瘍剤、損傷修復剤、免疫賦
活剤等に直接又は配合剤として利用出来る。又、近年癌
治療に於て、従来の抗癌剤は正常細胞に対する毒性作用
も強く、生体の免疫機能も低下させることが知られ、免
疫系を強化する物質が注目されているが、本発明による
新規な水溶性蛋白質を、癌治療に当って、併用する事は
有用であると考えられる。

（従来の技術） 各種基原（動物種属）の胎盤を出発原料となし、これよ
り各種の抽出法を採用して得られたそのエキス、又はそ
の有効成分を分離して、医薬品や化粧品に用いることは
、古くから知られている。そのなかから、水溶性成分に
ついて、その応用や、抽出法について調査すれば、例え
ば、第１表に示すごとくの公知刊行物がある。

１第１表」公知刊行物（日本国特許庁発行）又、第１表
に示される様な胎盤からの水溶性成分の抽出物について
、これをそれぞれの抽出操作法から調べてみると、その
共通点としては、有機溶媒、強酸又は強アルカリが用い
られていることである。さらにこの他、蛋白分解酵素な
どを用いるなどの方法も知られている。

そして、これらの抽出物の薬理学的作用とじては、抗潰
瘍作用、組織代謝賦活作用が知られており、医薬品では
、注射剤や内服剤の形態で、強肝剤、胃又は十二指腸潰
瘍治療剤として用いられている。又、化粧品では、肌の
老化防止（シワ防止）、シミの防止Ｃメラニン色素生成
抑制）の目的で、外用塗布剤の形態で用いられている。

つまり、従来から、胎盤中には組織再生修復能を有する
物質の存在が知られており、その作用又は効果の判定に
は、モルモットの皮膚などの組織片を用い、これに抽出
したエキス又は成分を添加して、ワールブルグの検圧針
などにより、消費される酸素の量を求める方法などが採
用されてきた。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明者は、胎盤抽出物に関する、前記の組織代謝賦活
作用又は組織再生修復能に注目すると共に、これらの従
来の抽出方法による抽出物の再評価のための、より的確
な試験法をもとに、試験を開始した。

胎盤由来の抽出成分の治療的効果は、それを用いた臨床
学的報告によって、前述した作用が知られているが、こ
れを細胞レベルでの増Ｍ能等から立証されたものは見あ
たらないでいた。

本発明者は、受精卵を１０ケ月の胎内にあって、１億数
千万倍に成長促進させる、胎盤の重要な機能に着目し、
直接、細胞に対する増殖作用の定量的な検索法を開発し
、これをもとに、胎盤由来の細胞代謝活性化物質の検索
に当った。

本発明者による検索法は、次項に示すごとくであるが、
これによって、前記の第１表で示すごとくの抽出物には
、そのいずれもが、細胞に対して高い増殖能を有するも
のではないことがわかった。この原因については、その
１つに、従来法による抽出法及びエキス抽出のための処
理法に起因していることがわかった。つまり、本物質が
、熱と有機溶媒に対して不安定であることと関係してい
ることである。

すなわち、従来の胎盤エキス又は抽出成分の有する、こ
れまでに知られている臨床治験における抗潰瘍作用、組
織代謝賦活作用等は、本試験法による検討からは、少な
くとも直接細胞を増殖促進させることによって、治療的
効果が得られたことよりは、別の作用機序から組織の代
謝を活性化することによって効果が得られたものである
と考えられた。

そこで、本発明者らは、細胞に対して直接増殖促進作用
を有する物質について、胎盤中から見出すための抽出手
段として、いかなる操作を用いたらよいか、又、従来の
公知な方法による抽出エキス又は単離成分が、なぜ細胞
増殖促進作用が小さいか又はないのか、この２点から研
究を続け、その結果、高い細胞増殖促進作用を有する抽
出物を得ることが出来たのである。

（細胞増殖促進作用の測定等に関する注解）細胞増殖促
進作用を表現する方法は、今日一般に知られている生長
因子でも、的確に効力を表現する方法はない、細胞毒性
を表現する方法としては、さまざまな方法が示され、増
殖率の抑制として、細胞数、蛋白量等で定量的に示され
る。

本発明者は、対照の細胞増殖率を死滅しないまでも、ゼ
ロ近くに抑制することにより、目的物質の細胞増殖作用
を、定量的に表現する方法を開発した。この方法をより
具体的に示せば、添加する牛胎児血清（ＦＢＳ）の量を
調節することにより達成した。

一方、本発明者は、この作用物質の細胞増殖促進作用を
、さまざまの株細胞で検討してきたが、それらは正常細
胞とは異なる。そこで、ここでは、正常皮膚から取り出
した初代ｍ胞で検索することとした。すなわち、モルモ
ットの皮膚から無菌的に細胞を分離し、一定期間継代し
た変異していない細胞を対象として、目的物質の細胞増
殖度を表現する事とした。以下にその方法を述べる。

皮膚の細胞には表皮細胞、ｌａ、維芽細胞があるが、た
とえばモルモット（ハートレー系、雌）から採取した繊
維芽細胞は、５％牛脂児血清ＣＦＢＳ）を添加したイー
グルのＭＥＭ培地中で盛んに分裂増殖し、その倍数増殖
時間は、′第３図、に示すごとく、約４８時間である。

この細胞は、採取後、約１年間で株化した。

そこで本発明の目的物質の細胞増殖率表現のためには、
出来るだけ正常に近い細胞という条件から、採取後６ケ
月までに増殖継代した細胞を、凍結保存する事により、
目的物質の分離、及び熱処理に対する安定化法等の検討
の為に、順次使用した。

その方法は、まず、直径　３．５ｃｍのベトリディッン
ユ（フーニング社製）に、１ｍｌあたり４〜５Ｘ１０’
個の細胞を植え、低濃度のＦＢＳを添加した、イーグル
のＭＥＭ培地を２〜３日目ごとに交換する。ｍ胞数は、
２〜３日目ごとにビュルケルチュルクの血球計算盤を用
いて測定する。尚、この際、同時に蛋白量、核酸量を測
定しても良い。

目的物質は蛋白量にて調整（ＷＩ濱）Ｌ、、培地あたり
１０分の１の量を、培地交換の都度添加し、対照（フン
トロール）には、同量の生理食塩水のみを添加する。

ぎらに本発明者らは免疫系の細胞として、ここではマウ
スの腹腔から無菌的に採取したマクロファーンについて
、これに対する作用を＠養容器への付着性及び（＋展性
を示標として、検討した。

〔口〕発明の構成 本発明は、胎盤から抽出した水溶性蛋白質の分子量が、
ヒトの正常分娩後の胎盤から抽出したものでは、９万２
千であり、牛の正常出産後の胎盤から抽出されたもので
は、８万と、２万５千である細胞代謝活性化物質と、そ
の抽出法、きらにその抽出操作の過程で、硫酸アンモニ
ウムの６０％飽和濃度で沈澱する沈澱物を加熱処理する
ことを特徴とする、水溶性蛋白質（細胞代謝活性化物質
）の、ウィルス不活化法にある。

（問題点を解決するための手段） 本発明の要旨は、前記したごとくであるが、より具体的
に示すために、以下に実施例及び作用について述べる。

尚、実施例を示すに当り、本発明による基本的な要点を
示すと次のごとくである。

（イ　　） 抽出法における、出発原料は、ヒト又は牛の胎盤を用い
る。ヒトの胎盤又は牛の胎盤については、正常分娩（出
産）後の新鮮な胎盤を用い、これは凍結又は低温保存し
たものを用いる。又、必要によっては、豚などの畜産動
物類の胎盤などを用いることも出来るが、それは、月い
る対象となる動物種の、治療又は医薬的な用途、化粧料
等々の用途に応して選択すれば良い。

（ロ） 実施例では、特定した抽出条件下で、もっとも簡易な方
法を示すも、その抽出工程における操作のポイントは、
熱を加えないこと、有機溶媒による抽出操作はさけるこ
と０強酸、強アルカリ分解、各種の蛋白分解酵素を用い
ないことが必要である。すなわち、これらの処理操作は
、目的物質の活性を失活させるので、用いてはならない
のである。これにしたがえば、遠心分離法、塩析分画法
、ゲル濾過法、透析法、低温又は真空濃縮法、凍結乾燥
法などの、従来の生体成分を抽出する、さまざまの方法
の組合わせによって得ることが出来る。すなわち、本発
明による胎盤からの抽出法の特徴は、従来の公知な胎盤
エキス又は単離成分の抽出操作に用いた、有Ｊｊｉ溶媒
、強酸、強アルカリ、酵素などを、工程中に一切用いな
いことにある。

〔実施例−１〕 ここでは、ヒトの正常分娩後の胎盤、又は、牛の正常出
産後の胎盤を洗浄の前処理なしに細切し、低温下にてホ
モジナイザー等でホモジネートする。これに対して水又
は緩衝液、たとえば塩化ナトリウム含有の低イオン濃度
リン酸緩衝液を添加して撹拌し、６時間から１昼夜放置
した後、遠心分離して上清液を得る０次にこの上清液に
対して、出発原料がヒトの胎盤であるときは、４０％飽
和の濃度になる様に、一方、出発原料が牛の胎盤である
ときは、上清液に対して、２０％飽和のａ度になる様に
、硫酸アンモニウムを添加後、遠心分離して、その上清
液を回収し、次にこの上清液に対して、６０％飽和の濃
度になる様に、再び硫酸アンモニウムを添加し、これに
よって発生する沈澱物を回収する。

沈澱物は、少量の水又は生理食塩水などに溶解した後、
脱塩操作を行う。

脱塩操作には、ゲル濾過、限外濾過、透析などの方法が
あるが、そのいずれの方法を採用しても良い、ここでは
、たとえば透析チューブに入れて、充分量の生理食塩水
などに、１昼夜以上透析する方法により、ヒトの胎盤を
出発原料とするときでは、９万２千の分子量を有する、
水溶性蛋白質を含む液体を得た。

一方、牛の胎盤を出発原料とするときでは、８万及び２
万５千の分子量を有する、水溶性蛋白質を含む液体を得
た。

〔実施例−２〕 実施例１で得られた上述の細胞増殖促進作用の高い抽出
物は、その用いる用途を考慮するとき、ウィルスの不活
化について充分な配慮が必要である。たとえば、肝炎ウ
ィルスを不活化するには、６０°Ｃ１１０時間の加熱処
理が有効とされている。実施例１で得られた液体を凍結
乾燥したものについて、水又は生理食塩水に溶解許せた
後、６０℃、１０時間の加熱処理を行ったところ、ウィ
ルスの不活化には有効であっても、細胞増殖促進作用も
１００％失活することがわかった。又、この新規水溶性
蛋白質は、６０°Ｃ１３０分間の加熱処理によって、細
胞増殖促進作用が完全に失活してしまうことが特徴であ
る。

そこで本発明者らは、本物質の有する細胞増殖促進作用
が持続し、肝炎ウィルスのみ、不活化するための手段と
して、長時間の高温下で処理にたえられる安定化法につ
いて、種々の研究に入った。そして、その手段として、
例えばグルコース、７７／−ス％のｉｍａ、シ！！糖、
マルトース等の２糖類などを添加して加熱処理を行い、
検討を加えたが、同様に失活してしまうことがわかった
０本発明者らは、溶解した状態で６０℃の加熱処理を行
うと、この処理によって目的物質蛋白の高次構造に不可
逆的な変性をきたし、これによって失活したものと推定
すると共に、これに対応する手段として、次に高濃度塩
類溶液中等で、あらかじめ蛋白の構造を変化扮せ、沈澱
きせた状態で加熱することによって、蛋白の不可逆的な
変性を最小限に抑制することが可能ではないか、との発
想のもとに実施例３で示すごとくの新規な加熱処理方法
を完成した。この方法は、当然きまざまの従来の公知な
血液及び臓器由来成分の、熱安定化法としても利用出来
る、有利な方法である。

〔実施例−３〕 実施例１で得られた液体を凍結乾燥し、これを６０％硫
醜アンモニウム飽和溶液に懸濁したもの又はその沈澱物
を分取し、６０℃、１０時間加熱処理を施した。

この方法によれば、肝炎ウィルスの不活化がなると共に
、細胞に対する増殖促進作用が、８０〜９０％残存する
ことが解った。

第４図及び第５図は、実施例３による処理後の目的物質
の細胞増殖作用について、実施例１で得られたものと対
比して測定した結果を示す。

つまり加熱処理に対して、細胞増殖作用を失活させない
ための手段が、実施例３で示した方法である。

尚、実施例２〜３は、血清及び各種臓器由来の蛋白質製
剤における、公知な肝炎ウィルスの不活化法をもとに、
６０°Ｃ１１０時間を前提に行ったときのものであるが
、その工程中で採用した、高濃度塩類溶液による、沈澱
又は懸濁化法によれば、温度は、きらに高くすることに
より、処理時間も短縮することがもちろん可能である。

〔実施例−４〕 ここで前記実施例１又は３で得られた蛋白質は、本発明
が目的とする、細胞に対して直接代謝活性化作用を有す
る抽出物であり、そのまま従来の胎盤エキスの公知な使
用分野（医薬、化粧品など）に利用することが出来るが
、これを必要によっては、さらにゲル′ａ過、イオンク
ロマトを組み合わせ、分画することによって精製する。

ゲルａ過に用いられる担体としては、セファデックス、
アガロース、セファクリル等があげられるが、たとえば
セファデックスを例にして、まず、ヒトの胎盤から得ら
れた水溶性蛋白質について分画する。〔１〕樹脂：セフ
ァデックスＧ　−２００カラムザイズ：３０Ｘ　ｓｓｏ
ｍｍ 溶媒　：Ｏ，０１Ｍリン酸バッファ−（０，１４Ｍ　　
ＮａＣ１含）ｐＨ７，４流速・４ｃｍ／ｌ＋ｒ 上記〔１〕によって得られた活性フラクションを、さら
にイオン交換樹脂によって分画する。イオン交換に用い
られる担体としては、セファデックス、セファロース、
セファクリル等の陽、陰イオン交換体等があげられるが
、たとえばＤＥＡＥ−セファデンクスを例にして分画す
る。

〔２〕樹脂：ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５カラム
サイズ：２０Ｘ　２００１ｆｆＱ溶媒：　Ｏ，ＬＭ−０
，０５Ｎ）リス塩酸バッフチー（ｐＨ７，４）溶出条件
：ＮａＣｌｆｉ度０　→０．５Ｍ上記〔２〕によって得
られたＮａＣ１濃度０．１→Ｑ、１５Ｍで流出するフラ
クションを、きらにセファデックスＧ−２００等でゲル
濾過し、これによって得られる活性フラクションを分取
して、分子量９万２千の水溶性蛋白質を得る。又、さら
に、この精製化法においては、実施例１によって得られ
たものでは、肝炎ウィルスは不活化されていないので、
ここで得られた分子量９万２千の水溶性蛋白質に対して
は、６０％硫酸アンモニウム飽和溶液中に入れて、沈澱
きせ、この沈澱物を加熱処理することによって、肝炎ウ
ィルスは不活化出来ると共に、目的となす、細胞代謝活
性化能は、安定に保持される。

一方、前記実施例１又は３で得られた、牛の胎盤から得
られた水溶性蛋白質についての分画け、先の、ヒトの胎
盤からの水溶性蛋白質における方法に準じて、次の条件
下で、順次、その精製に当った。

（１）　　ＩＭ詣：セファデックスＧ−２００カラムサ
イズ：３１Ｘ３７０ｍｍ 溶媒：０．０１Ｍリン酸バッファー （０，１４Ｍ　　ＮａＣ１含）ｐＨ７，４流速：２ｃｍ
／ｈｒ 〔２〕　樹脂：ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−５０カラ
ムサイズ：２０Ｘ２００ｎｎ 溶媒：　０．１Ｍ−０，０５Ｎ　トリス塩酸バッファー
　　（ｐＨ８，０） 上記〔２〕によって得られた、ＮａＣ１濃度０．０５→
０、ＩＭ及び０．２−０．２５Ｍで流出する２つのフラ
クションを、さらにセファデックスＧ−２００等でゲル
濾過し、これによって得られる活性フラクションを分取
して、分子量８万及び２万５千の水溶性蛋白質を得る。

尚、この牛の胎盤から抽出精製されたものについての、
ウィルスに対する不活化は、先に示したと同様の操作に
より、６０％硫酸アンモニウム飽和溶液中に入れて、沈
澱させ、沈澱物を加熱処理することによって、不活化出
来る。また、この処理きれたものは、目的となす、細胞
代謝活性化能は、失活移れることなく、安定に保持され
ている。

収量は、ヒトの胎盤１ｋｇから約１００〜２００■、牛
の胎盤１ｋｇからは、約１５０〜３００■が得られた。

〔ハ〕発明の効果 本発明は、ヒト又は牛の胎盤から得られた新規な水溶性
の蛋白質にある。そして、この蛋白質は、直接に細胞の
代謝活性化作用が高いことにある。

従来の公知な胎盤抽出エキス又は抽出物質と、その抽出
条件から対比すると、従来の公知な抽出エキス又は抽出
物質は、その工程中で、有機溶媒、強酸、強アルカリ、
蛋白分解酵素等の薬剤が用いられてきたが、その結果は
、これらの薬剤によって、胎盤中の細胞増殖促進作用物
質が失活されていたことである。又、従来法における特
徴は、抽出操作の前処理として、胎盤又はホモジナイズ
した胎盤を洗浄していたが、その結果は、木目的物質を
洗い流していたことである。もちろん、加熱処理によっ
ても失活きれてしまっていた１本発明＋１、ヒト又は牛
の胎盤中に存在する細胞増殖促進作用物質を、細胞に添
加して、その増殖能を、直接定量的に細胞の数で立証し
た。そして、さらに、従来の抽出法による胎盤エキス、
又はその電離物質が、なぜ細胞増殖作用を示さないのか
、その原因を追求した結果、抽出のために用いられる薬
剤や、加熱処理の工程で失活させていたことを見出すと
共に、本発明を完成することが出来たのである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、６０％硫酸アンモニウムで沈澱した沈澱物を
加熱処理した物の、セファデックスＧ−２００を用いた
ゲル濾過による溶出曲線である。 第１図中、□（実線）は、ヒトの胎盤から抽出された水
溶性蛋白質、−−−−（点線）は、牛の胎盤から抽出き
れた水溶性蛋白質。 第２図は、アルドラーゼ（分子量１５８０００　）−図
中Ａ、牛血清アルブミン（分子量６７０００　）−図中
Ｂ、α−キモトリプシノーゲンＡ（分子量２５０００　
）−図中Ｃ１をマーカー蛋白質として作製したＫａｖ値
による標準線である。 第３図は、本発明において用いた細胞の増殖曲線を示し
たものである。 第４図は、ヒトの胎盤から抽出された水溶性蛋白質の、
熱処理する前と熱処理した後の、細胞増殖促進作用を示
したものである。 図中イは熱処理する前の抽出物の、添加による細胞増殖
曲線、口は熱処理した後の抽出物の、話力口による細胞
増殖曲線、ハは対照群（生理食塩水添加群）の細胞増殖
曲線である。 第５図は、牛の胎盤から抽出された水溶性蛋白質の熱処
理する前と熱処理した後の、細胞増殖促進作用を示した
ものである。 図中イは熱処理する前の抽出物の、添加による細胞増殖
曲線、口は熱処理した後の抽出物の、添加による細胞増
殖曲線、ハは対照群（生理食塩水添加群）の細胞増殖曲
線である。 第６図は、ヒトの胎盤から抽出された水溶性蛋白質の、
ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５による溶出曲線である
。 第７図は、牛の胎盤から抽出された水溶性蛋白質の、Ｄ
ＥＡＥセフアゾ７クスＡ−５０による溶出曲線である。 第８図、及び第９図は、牛の胎盤から抽出された水溶性
蛋白質の、ＤＥＡＥセファデックスＡ−５０で分画され
た、２つの活性フラクションの、セフアゾ７クスＧ−２
００を用いたゲノし濾過（こよる、溶出曲線である。 第１０図は、ヒトの胎盤から抽出きれた水溶性蛋白質の
、マウス腹腔マクロファージに添加した際のマクロファ
ージの状態の顕微鏡図である。 図中ａは牛血清を添加したもの、図中すは本発明による
、ヒトの胎盤から抽出された水溶性蛋白質を添加したも
のである。添加量は蛋白質量で培地あたりそれぞれ６　
ｍ　ｇ　／　ｍり、３０μｇ　／　ｍ　１である。ｂは
ａに比して細胞の伸展が盛んなことを示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１） 胎盤から抽出された水溶性蛋白質が、ヒトの正常分娩後
   の胎盤から抽出されたものであるときは、その推定分子
   量が９万２千、等電点が５．５〜６．０付近であり、又
   は、胎盤から抽出された水溶性蛋白質が、牛の正常出産
   後の胎盤から抽出されたものであるときは、その推定分
   子量が８万、等電点が６．５〜７．０、及び推定分子量
   が２万５千、等電点が５．０〜５．５付近であることを
   特徴とする、胎盤由来の水溶性蛋白質からなる、細胞代
   謝活性化物質。
2. （２） 出発原料がヒト正常分娩後の胎盤、又は、牛の正常出産
   後の胎盤を用い、これを細切し、低温下でホモジネート
   した後、塩化ナトリウム含有の、低イオン濃度リン酸緩
   衝液を添加して、６時間〜一昼夜放置した後、遠心分離
   して得られる上清液を分取し、次に上清液に対して、出
   発原料がヒトの正常分娩後の胎盤であるときは、４０％
   飽和の濃度になる様に、硫酸アンモニウムを添加し、一
   方、出発原料が牛の正常出産後の胎盤であるときは、２
   ０％飽和の濃度になる様に、硫酸アンモニウムを添加し
   、その上清液を分取し、さらに上清液に対して、６０％
   飽和の濃度になる様に硫酸アンモニウムを添加し、これ
   によって沈澱する沈澱物を、ゲル濾過、イオン交換クロ
   マトを組み合せることによって精製された、ヒトの正常
   分娩後の胎盤由来の、水溶性蛋白質の推定分子量が９万
   ２千であり、等電点が５．５〜６．０付近にあるか、又
   は、牛の正常出産後の胎盤由来の、水溶性蛋白質の推定
   分子量が８万、等電点が６．５〜７．０、及び推定分子
   量が２万５千、等電点が５．０〜５．５付近であること
   を特徴とする、特許請求の範囲第１項記載の、細胞代謝
   活性化物質の製造法。
3. （３） 出発原料がヒトの正常分娩後の胎盤、又は、牛の正常出
   産後の胎盤を用い、これを細切し、低温下でホモジネー
   トした後、塩化ナトリウム含有の、低イオン濃度リン酸
   緩衡液を添加して、６時間〜１昼夜放置した後、遠心分
   離して得られる上清液を分取し、次に上清液に対して、
   出発原料がヒトの正常分娩後の胎盤であるときは、４０
   ％飽和の濃度になる様に硫酸アンモニウムを添加し、一
   方、出発原料が牛の正常出産後の胎盤であるときは、２
   ０％飽和の濃度になる様に硫酸アンモニウムを添加し、
   その上清液を分取し、さらに上清液に対して、６０％飽
   和の濃度になる様に硫酸アンモニウムを添加し、これに
   よって沈澱する沈澱物を加熱処理するか、又は、沈澱物
   をさらにゲル濾過、イオン交換クロマトを組み合せるこ
   とによって精製されたところの水溶性蛋白質を、硫酸ア
   ンモニウムの６０％飽和の濃度にした溶液中に加えて沈
   澱させ、この沈澱物を加熱処理することを特徴とする、
   特許請求の範囲第１項記載の、細胞代謝活性化物質の活
   性が安定な、ウィルス不活化法。