JPS6217599B2 - - Google Patents
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- JPS6217599B2 JPS6217599B2 JP54056587A JP5658779A JPS6217599B2 JP S6217599 B2 JPS6217599 B2 JP S6217599B2 JP 54056587 A JP54056587 A JP 54056587A JP 5658779 A JP5658779 A JP 5658779A JP S6217599 B2 JPS6217599 B2 JP S6217599B2
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- JP
- Japan
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- herbicidin
- substance
- methanol
- substances
- culture
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は新抗生物質ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆ
およびＧ物質ならびにその製造法に関するもので
ある。 本発明のハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物
質は次の式を有する。 但し、式中、 ハービサイジンＣ物質はR1およびR2が共に水
素原子を示し、 同Ｅ物質はR1が１−メチルエチルカルボニル
およびＧ物質ならびにその製造法に関するもので
ある。 本発明のハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物
質は次の式を有する。 但し、式中、 ハービサイジンＣ物質はR1およびR2が共に水
素原子を示し、 同Ｅ物質はR1が１−メチルエチルカルボニル
【式】R2がメチルを示し、
同Ｆ物質はR1が１−メチル−１−プロペニル
カルボニル
カルボニル
【式】R2がメチルを
示し、同Ｇ物質はR1が１−メチル−１−プロペ
ニルカルボニル
ニルカルボニル
【式】R2が水素
原子を示す。
本発明のハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物
質は次の理化学的性質および生物学的性質を有す
る (1) 外観
質は次の理化学的性質および生物学的性質を有す
る (1) 外観
【表】
(2) 融点または分解点
ハービサイジンＣ 165〜169℃（分解）
〃 Ｅ 172〜173℃
〃 Ｆ 150〜154℃（分解）
〃 Ｇ 142〜146℃（分解）
(3) 元素分析（％）
【表】
(4) 紫外部吸収スペクトル
【表】
(5) 赤外部吸収スペクトル
臭化カリウム錠中で測定したハービサイジン
Ｃ、Ｅ、ＦおよびＧ物質の吸収スペクトルをそ
れぞれ第１図、第２図、第３図および第４図に
示す (6) 核磁気共鳴吸収スペクトル 重クロロホルム中、60MHzで測定したハー
ビサイジンＣテトラアセテート体のスペクトル
を第５図に示す。重アセトンと重メタノールの
混合溶媒中、100MHzで測定したハービサイジ
ンＥのスペクトルを第６図に示す。重アセトン
中、60MHzで測定したハービサイジンＦのス
ペクトルを第７図に示す。第７図中、2.05ppm
のシグナルは溶媒に用いた重アセトンによるも
のである。重クロロホルムと重メタノールの混
合溶媒中、60MHzで測定したハービサイジン
Ｇメチルエステル体のスペクトルを第８図に示
す。第８図中、3.18ppmのシグナルは溶媒に用
いた重メタノールによるものである。 (7) 分子量 ハービサイジンＥ 537 （FDマススペクト
ル） ハービサイジンＦ 535 （FDマススペクト
ル） (8) 溶解性 ハービサイジンＣ：メタノール、エタノール、
アセトンに可溶 ハービサイジンＥ：温水、温メタノールに可溶 ハービサイジンＦ：水、メタノール、エタノー
ル、アセトン、酢酸エチル、メチレンクロラ
イドに可溶 ハービサイジンＧ：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルに可溶 (9) 安定性 ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆ、Ｇとも酸および
アルカリに不安定 (10) シリカゲル・クロマトグラフイー 薄層クロマト用シリカゲル・プレート（ガラ
ス板、螢光指示薬含有、メルク社製）上で、ク
ロロホルム：メタノール（７：３）で展開し、
紫外線下で観察するとハービサイジンＣ、Ｅ、
ＦおよびＧ物質のＲf値は、それぞれ0.30、
0.69、0.72および0.53である。 (11) 生物学的活性 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質はい
ずれも殺藻作用および抗菌力を有する。殺藻活
性については、ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよ
びＧ物質はいずれもアナシステイス・ニデユラ
ンスに対する最小発育阻止濃度は100〜200μ
ｇ／mlであつた。またこのほか、ハービサイジ
ンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質は次のような生物学
的活性を有する。 ハービサイジンＣ： 12.5γ／mlでコマツナの発芽を阻止し、キヤ
ンデイダ・リポリテイカおよびクロエケラ・オ
ピキユラタに対し、抗菌力を有する。 ハービサイジンＥ： 25γ／mlでコマツナの発芽を阻止し、トリコ
フイートン・メンタグロフイーテス、キヤンデ
イダ・リポリテイカ、スタキボトリス・アトラ
に対し抗菌力を有する。 ハービサイジンＦ： 第１表に示す抗菌力を有する
Ｃ、Ｅ、ＦおよびＧ物質の吸収スペクトルをそ
れぞれ第１図、第２図、第３図および第４図に
示す (6) 核磁気共鳴吸収スペクトル 重クロロホルム中、60MHzで測定したハー
ビサイジンＣテトラアセテート体のスペクトル
を第５図に示す。重アセトンと重メタノールの
混合溶媒中、100MHzで測定したハービサイジ
ンＥのスペクトルを第６図に示す。重アセトン
中、60MHzで測定したハービサイジンＦのス
ペクトルを第７図に示す。第７図中、2.05ppm
のシグナルは溶媒に用いた重アセトンによるも
のである。重クロロホルムと重メタノールの混
合溶媒中、60MHzで測定したハービサイジン
Ｇメチルエステル体のスペクトルを第８図に示
す。第８図中、3.18ppmのシグナルは溶媒に用
いた重メタノールによるものである。 (7) 分子量 ハービサイジンＥ 537 （FDマススペクト
ル） ハービサイジンＦ 535 （FDマススペクト
ル） (8) 溶解性 ハービサイジンＣ：メタノール、エタノール、
アセトンに可溶 ハービサイジンＥ：温水、温メタノールに可溶 ハービサイジンＦ：水、メタノール、エタノー
ル、アセトン、酢酸エチル、メチレンクロラ
イドに可溶 ハービサイジンＧ：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルに可溶 (9) 安定性 ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆ、Ｇとも酸および
アルカリに不安定 (10) シリカゲル・クロマトグラフイー 薄層クロマト用シリカゲル・プレート（ガラ
ス板、螢光指示薬含有、メルク社製）上で、ク
ロロホルム：メタノール（７：３）で展開し、
紫外線下で観察するとハービサイジンＣ、Ｅ、
ＦおよびＧ物質のＲf値は、それぞれ0.30、
0.69、0.72および0.53である。 (11) 生物学的活性 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質はい
ずれも殺藻作用および抗菌力を有する。殺藻活
性については、ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよ
びＧ物質はいずれもアナシステイス・ニデユラ
ンスに対する最小発育阻止濃度は100〜200μ
ｇ／mlであつた。またこのほか、ハービサイジ
ンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質は次のような生物学
的活性を有する。 ハービサイジンＣ： 12.5γ／mlでコマツナの発芽を阻止し、キヤ
ンデイダ・リポリテイカおよびクロエケラ・オ
ピキユラタに対し、抗菌力を有する。 ハービサイジンＥ： 25γ／mlでコマツナの発芽を阻止し、トリコ
フイートン・メンタグロフイーテス、キヤンデ
イダ・リポリテイカ、スタキボトリス・アトラ
に対し抗菌力を有する。 ハービサイジンＦ： 第１表に示す抗菌力を有する
【表】
【表】
このほかアルテルナリア・アルテルナータ、
ポリステイクタス・シンナバリウス、スタキボ
トリス・アトラ、トラメーテス・サンギネア、
キヤンデイダ・リポリテイカ、シゾサツカロミ
セス・ポンベに対し抗菌力を有する。 ハービサイジンＧ： トリコフイートン・メンタグロフイーテスに
対する最小阻止濃度は50μｇ／mlであり、この
ほかキヤンデイダ・リポリテイカ、シゾサツカ
ロミセス・ポンベに対し抗菌力を有する。 以上のようなハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよび
Ｇ物質の理化学的性質あるいは生物学的性質か
ら、既存抗生物質中にはこれに該当するものはな
く、ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質は新
規な抗生物質と認められる。 また前述の生物学的活性から、ハービサイジン
Ｃ、Ｅ、ＦおよびＧ物質は抗菌剤、殺藻剤として
使用することが期待される。 本発明のハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物
質は、これらの物質を生産しうるストレプトマイ
セス属に属する微生物を培養し、培養物中にハー
ビサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質を生成せし
め、これらを採取することにより製造される。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質を生産
しうる微生物の具体例としては、ストレプトマイ
セス・サガノネンシスNo.4075があり、本菌株の菌
学的性質については、すでにジヤーナル・オブ・
アンテイビオテイツクス（Ｊ・Antibiotics）29
巻863頁（1976年）に報告されており、また本菌
株は通産省工業技術院微生物工業技術研究所に寄
託されており、その微生物受託番号は微工研菌寄
第1821号である。また本菌株を人工的に変異せし
めたストレプトマイセス・サガノネンシス
M403、同M403R、同m17−403株はハービサイジ
ンＣ、Ｅ、ＦおよびＧの生産性がさらに良好であ
り、これらの菌も通産省工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されており、その寄託番号はそれ
ぞれ、微工研菌寄第4974号、第4975号および第
4976号である。 本発明で用いる菌株は、他のストレプトマイセ
ス属の菌株にみられるように、その性状は変化し
やすく、例えば、紫外線、エツクス線、高周波、
放射線、薬品等を用いる人工的変異手段で変異し
うるものであり、この菌を人工的方法で変異させ
た菌株は勿論、ストレプトマイセス属に属する微
生物であつて、ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよび
Ｇ物質生産能を有するものはすべて本発明の方法
に使用することができる。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質生産の
ための生産菌の培養法としては、前記菌株を、通
常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地で
培養する。栄養源としては、従来ストレプトマイ
セス属の菌の培養に利用されている公知のものが
使用できる。例えば、炭素源として、グルコー
ス、シユクロース、デンプン、グリセリン、水あ
め、糖みつ、大豆油などを使用しうる。また窒素
源としては、大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペプ
トン、酵母菌体、コーンスチープリカー、硫酸ア
ンモニウム、硝酸ナトリウム等を使用しうる。こ
のほか、必要に応じて炭酸カルシウム、食塩、塩
化カリ、リン酸塩等の無機塩類を添加するほか、
菌の発育を助け、ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよ
びＧ物質の生産を促進するがごとき有機および無
機物を適当に添加することができる。 培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同
じく、液体培養法、とくに深部培養法が最も適し
ている。培養は好気的条件下で行なわれ、培養に
適当な温度は22〜30℃であるが、多くの場合、24
℃付近で培養する。ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆお
よびＧの生産は、振盪培養、タンク培養ともに５
〜10日で最高値に達する。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質の検定
にあたつては、次の方法が用いられる。 薄層クロマトグラフ用シリカゲル・プレート
（ガラス板、螢光指示薬含有、メルク社製）に、
培養液を適当に希釈した試料を５マイクロリツ
ターつけ、クロロホルム：メタノール（７：３）
の混合溶媒で展開し、それぞれの標準品のスポツ
トとともに、二波長クロマト・スキヤナー（サン
プル波長258nｍ、レフアレンス波長380nｍ）に
かけて紫外線吸収を測定する。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質を培養
物から採取するに当つては、活性炭、アルミナ、
シリカゲルなどの吸着剤、ダイヤイオンHP−20
（三菱化成社製）などの合成吸着剤、そのほかイ
オン交換樹脂、イオン交換ゲル過剤などが使用
されるが、以下に示す採取方法が最も効率的であ
る。 培養液より、菌体そのほかの固形物をけいそう
土等の過助剤を用いて別し、つづいて液中
の有効成分をダイヤイオンHP−20に吸着させ
る。樹脂部を水洗後、含水アルコールを用いて溶
出する。溶出液中の活性区分を減圧濃縮してアル
コールを留去する。得られた濃縮液からはブタノ
ール、メチレンクロライド、酢酸エチルなどで有
効成分を抽出し、それぞれの有機溶媒を留去する
ことにより、有効成分の粗粉末が得られる。ハー
ビサイジン類のうち、Ｆ物質は前記の粗粉末をメ
タノールで再結することにより結晶状に得られる
が、ＣおよびＥ物質はシリカゲルクロマトの後に
メタノール再結で、Ｇ物質はセフアデツクスLH
−20にかけた後、酢酸エチル再結でいずれも結晶
状に得られる。 実施例 １ ストレプトマイセス・サガノネンシスM403株
を、可溶性デンプン（ラスターゲンFK）２％、
大豆粉２％、グルコース１％、KH2PO41％、
CaCO30.3％、デイスフオームCB442 0.02％PH6.5
に調整してある前培養培地で３日、および１日、
27℃で培養し、可溶性デンプン２％、大豆粉８
％、グルコース１％、KH2PO41％、CaCO30.3
％、NH4Cl0.5％、MgSO4・7H2O0.02％、
ZnSO4・7H2O0.1％、デイスフオームCB442 0.02
％の本培養媒地に、その３％相当容量の種培養ブ
ロスを移殖した。本培養タンクは、内圧１Kg／cm2
に保ち、毎分等量の通気を行ない、溶存酸素を
2ppmになるよう撹拌を行なつた。培養温度は、
２日間30℃に保ち、３日目から24℃に下げ、培養
液中のグルコース濃度を１％に保つよう、グル
コースを添加しつつ13日間培養を行なつた。 ここで得られた培養液120に過助剤（セラ
イト）を10Kg加えて加圧過し、得られた液85
、ダイヤイオンHP−20 8.5を入れたカラム
にSV4で吸着せしめて、このカラムを80の水で
SV4で洗浄し、つづいて10％メタノール80で
SV4で洗浄する。しかる後に50％メタノール80
でSV2でハービサイジンＡおよびＢを溶出し、そ
の後で90％メタノール20でSV2でハービサイジ
ンＥ物質を溶出する。ここでＥ物質を含有するフ
ラクシヨンは合計10になる。これを減圧下50℃
で0.5まで濃縮する。この濃縮液を0.5のメチ
レンクロライドで５回抽出し、抽出液2.5を得
る。これを250ｇのNa2SO4で脱水後、メチレンク
ロライドを留去し、油状物18.5ｇをうる。これ
を、クロロホルムで充填してあるシリカゲル250
mlのカラムに吸着せしめ、クロロホルム１で
SV1で洗浄、つづいて１％メタノール含有クロロ
ホルム１でSV1で洗浄する。しかる後に２％メ
タノール含有クロロホルム２でSV1で溶出す
る。その有効フラクシヨン２を減圧下50℃で留
去し、残査を10mlの酢酸エチルに溶解し、ｎ−ヘ
キサン50mlを加えて冷蔵するとハービサイジンＥ
物質600mgが結晶状に得られた。 実施例 ２ ストレプトマイセス・サガノネンシスM403R
株を実施例１と同様にして培養を行なつた。ただ
し、本培養地は、可溶性デンプン２％、大豆粉
4.5％、グルコース１％、KH2PO41％、CaCO30.3
％、NH4Cl0.5％、MgSO4・7H2O0.02％、
ZnSO4・7H2O0.1％、デイスフオームCB442 0.02
％、PH6.5であり、培養日数は14日間である。 ここで得られた培養液800にセライト64Kgを
加え、加圧過して600の液を得る。これ
を、ダイヤイオンHP−20を60充填してあるカ
ラムにSV4で吸着させ、600の水でSV4で水洗
し、10％メタノール600で洗浄する。つづいて
50％メタノールで溶出すると初めの40でハービ
サイジンＣ物質が溶出され、つづいてハービサイ
ジンＡおよびＢが溶出してくる。つぎにハービサ
イジンＣを含有する区分40を減圧下、55℃で濃
縮し、濃縮液６をうる。これを６のｎ−ブタ
ノールで２回抽出し、その抽出液14に水を添加
しつつ減圧下、55℃で濃縮すると100ｇの粗粉末
が得られる。そのうちの４ｇを５mlのメタノール
に溶解し、クロロホルムで充填してある200mlの
シリカゲルカラムに吸着し、クロロホルム500ml
で洗浄（SV1）し、つづいて10％メタノール含有
クロロホルム4000mlで溶出（SV1）し、ハービサ
イジンＡおよびＢ物質を除く。つづいて20％メタ
ノール含有クロロホルム2000mlで溶出し、有効区
分２をうる。これを減圧下50℃で溶媒を留去
し、残査を20mlのメタノールで再結することによ
りハービサイジンＣ物質200mgが結晶性粉末とし
て得られる。 実施例 ３ ストレプトマイセス・サガノネンシスm17−
403株を実施例１と同様にして５日間培養した。
ただし、本培養培地は、可溶性デンプン２％、脱
脂大豆粉２％、グルコース１％、KH2PO41％、
CaCO30.3％、生イースト２％、NH4Cl0.5％、
MgSO4・7H2O0.02％、ZnSO4・7H2O0.1％、PH
6.5である。 ここで得られたブロス30に2.4Kgのセライト
を添加して加圧過を行ない、液20をうる。
これをダイヤイオンHP−20を２充填してある
カラムに吸着（SV5）し、10の水で洗浄
（SV5）し、つづいて40％メタノーリ10で洗浄
（SV5）し、つぎに45％メタノールで溶出
（SV3）してＧ物質含有区分15をうる。つづい
て、70％メタノールで溶出（SV3）し、Ｆ物質含
有区分20をうる。 Ｆ物質含有区分は減圧下45℃で３まで濃縮す
る。これを３のメチレンクロライドで３回抽出
し、９の抽出液をうる。芒硝１Kgで脱水後、メ
チレンクロライドを留去し、500mlのメタノール
に溶解し、５ｇの炭末で脱色し、これを濃縮する
と12ｇのハービサイジンＦ物質が結晶として得ら
れる。 Ｇ物質含有区分は減圧下45℃で３まで濃縮
し、３の酢酸エチルで３回抽出し、抽出液10
をうる。これを芒硝で脱水し、溶媒を留去すると
粗粉末5.8ｇをうる。これを５mlのメタノールに
溶解し、メタノールで充填してある700mlのセフ
アデツクスLH−20にかけ、SV0.1でメタノール
を流して、Ｇ物質含有区分を集めると300mlであ
る。溶媒を留去し、酢酸エチルで再結するとハー
ビサイジンＧ物質190mgが結晶として得られる。
ポリステイクタス・シンナバリウス、スタキボ
トリス・アトラ、トラメーテス・サンギネア、
キヤンデイダ・リポリテイカ、シゾサツカロミ
セス・ポンベに対し抗菌力を有する。 ハービサイジンＧ： トリコフイートン・メンタグロフイーテスに
対する最小阻止濃度は50μｇ／mlであり、この
ほかキヤンデイダ・リポリテイカ、シゾサツカ
ロミセス・ポンベに対し抗菌力を有する。 以上のようなハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよび
Ｇ物質の理化学的性質あるいは生物学的性質か
ら、既存抗生物質中にはこれに該当するものはな
く、ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質は新
規な抗生物質と認められる。 また前述の生物学的活性から、ハービサイジン
Ｃ、Ｅ、ＦおよびＧ物質は抗菌剤、殺藻剤として
使用することが期待される。 本発明のハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物
質は、これらの物質を生産しうるストレプトマイ
セス属に属する微生物を培養し、培養物中にハー
ビサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質を生成せし
め、これらを採取することにより製造される。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質を生産
しうる微生物の具体例としては、ストレプトマイ
セス・サガノネンシスNo.4075があり、本菌株の菌
学的性質については、すでにジヤーナル・オブ・
アンテイビオテイツクス（Ｊ・Antibiotics）29
巻863頁（1976年）に報告されており、また本菌
株は通産省工業技術院微生物工業技術研究所に寄
託されており、その微生物受託番号は微工研菌寄
第1821号である。また本菌株を人工的に変異せし
めたストレプトマイセス・サガノネンシス
M403、同M403R、同m17−403株はハービサイジ
ンＣ、Ｅ、ＦおよびＧの生産性がさらに良好であ
り、これらの菌も通産省工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されており、その寄託番号はそれ
ぞれ、微工研菌寄第4974号、第4975号および第
4976号である。 本発明で用いる菌株は、他のストレプトマイセ
ス属の菌株にみられるように、その性状は変化し
やすく、例えば、紫外線、エツクス線、高周波、
放射線、薬品等を用いる人工的変異手段で変異し
うるものであり、この菌を人工的方法で変異させ
た菌株は勿論、ストレプトマイセス属に属する微
生物であつて、ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよび
Ｇ物質生産能を有するものはすべて本発明の方法
に使用することができる。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質生産の
ための生産菌の培養法としては、前記菌株を、通
常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地で
培養する。栄養源としては、従来ストレプトマイ
セス属の菌の培養に利用されている公知のものが
使用できる。例えば、炭素源として、グルコー
ス、シユクロース、デンプン、グリセリン、水あ
め、糖みつ、大豆油などを使用しうる。また窒素
源としては、大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペプ
トン、酵母菌体、コーンスチープリカー、硫酸ア
ンモニウム、硝酸ナトリウム等を使用しうる。こ
のほか、必要に応じて炭酸カルシウム、食塩、塩
化カリ、リン酸塩等の無機塩類を添加するほか、
菌の発育を助け、ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆおよ
びＧ物質の生産を促進するがごとき有機および無
機物を適当に添加することができる。 培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同
じく、液体培養法、とくに深部培養法が最も適し
ている。培養は好気的条件下で行なわれ、培養に
適当な温度は22〜30℃であるが、多くの場合、24
℃付近で培養する。ハービサイジンＣ、Ｅ、Ｆお
よびＧの生産は、振盪培養、タンク培養ともに５
〜10日で最高値に達する。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質の検定
にあたつては、次の方法が用いられる。 薄層クロマトグラフ用シリカゲル・プレート
（ガラス板、螢光指示薬含有、メルク社製）に、
培養液を適当に希釈した試料を５マイクロリツ
ターつけ、クロロホルム：メタノール（７：３）
の混合溶媒で展開し、それぞれの標準品のスポツ
トとともに、二波長クロマト・スキヤナー（サン
プル波長258nｍ、レフアレンス波長380nｍ）に
かけて紫外線吸収を測定する。 ハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質を培養
物から採取するに当つては、活性炭、アルミナ、
シリカゲルなどの吸着剤、ダイヤイオンHP−20
（三菱化成社製）などの合成吸着剤、そのほかイ
オン交換樹脂、イオン交換ゲル過剤などが使用
されるが、以下に示す採取方法が最も効率的であ
る。 培養液より、菌体そのほかの固形物をけいそう
土等の過助剤を用いて別し、つづいて液中
の有効成分をダイヤイオンHP−20に吸着させ
る。樹脂部を水洗後、含水アルコールを用いて溶
出する。溶出液中の活性区分を減圧濃縮してアル
コールを留去する。得られた濃縮液からはブタノ
ール、メチレンクロライド、酢酸エチルなどで有
効成分を抽出し、それぞれの有機溶媒を留去する
ことにより、有効成分の粗粉末が得られる。ハー
ビサイジン類のうち、Ｆ物質は前記の粗粉末をメ
タノールで再結することにより結晶状に得られる
が、ＣおよびＥ物質はシリカゲルクロマトの後に
メタノール再結で、Ｇ物質はセフアデツクスLH
−20にかけた後、酢酸エチル再結でいずれも結晶
状に得られる。 実施例 １ ストレプトマイセス・サガノネンシスM403株
を、可溶性デンプン（ラスターゲンFK）２％、
大豆粉２％、グルコース１％、KH2PO41％、
CaCO30.3％、デイスフオームCB442 0.02％PH6.5
に調整してある前培養培地で３日、および１日、
27℃で培養し、可溶性デンプン２％、大豆粉８
％、グルコース１％、KH2PO41％、CaCO30.3
％、NH4Cl0.5％、MgSO4・7H2O0.02％、
ZnSO4・7H2O0.1％、デイスフオームCB442 0.02
％の本培養媒地に、その３％相当容量の種培養ブ
ロスを移殖した。本培養タンクは、内圧１Kg／cm2
に保ち、毎分等量の通気を行ない、溶存酸素を
2ppmになるよう撹拌を行なつた。培養温度は、
２日間30℃に保ち、３日目から24℃に下げ、培養
液中のグルコース濃度を１％に保つよう、グル
コースを添加しつつ13日間培養を行なつた。 ここで得られた培養液120に過助剤（セラ
イト）を10Kg加えて加圧過し、得られた液85
、ダイヤイオンHP−20 8.5を入れたカラム
にSV4で吸着せしめて、このカラムを80の水で
SV4で洗浄し、つづいて10％メタノール80で
SV4で洗浄する。しかる後に50％メタノール80
でSV2でハービサイジンＡおよびＢを溶出し、そ
の後で90％メタノール20でSV2でハービサイジ
ンＥ物質を溶出する。ここでＥ物質を含有するフ
ラクシヨンは合計10になる。これを減圧下50℃
で0.5まで濃縮する。この濃縮液を0.5のメチ
レンクロライドで５回抽出し、抽出液2.5を得
る。これを250ｇのNa2SO4で脱水後、メチレンク
ロライドを留去し、油状物18.5ｇをうる。これ
を、クロロホルムで充填してあるシリカゲル250
mlのカラムに吸着せしめ、クロロホルム１で
SV1で洗浄、つづいて１％メタノール含有クロロ
ホルム１でSV1で洗浄する。しかる後に２％メ
タノール含有クロロホルム２でSV1で溶出す
る。その有効フラクシヨン２を減圧下50℃で留
去し、残査を10mlの酢酸エチルに溶解し、ｎ−ヘ
キサン50mlを加えて冷蔵するとハービサイジンＥ
物質600mgが結晶状に得られた。 実施例 ２ ストレプトマイセス・サガノネンシスM403R
株を実施例１と同様にして培養を行なつた。ただ
し、本培養地は、可溶性デンプン２％、大豆粉
4.5％、グルコース１％、KH2PO41％、CaCO30.3
％、NH4Cl0.5％、MgSO4・7H2O0.02％、
ZnSO4・7H2O0.1％、デイスフオームCB442 0.02
％、PH6.5であり、培養日数は14日間である。 ここで得られた培養液800にセライト64Kgを
加え、加圧過して600の液を得る。これ
を、ダイヤイオンHP−20を60充填してあるカ
ラムにSV4で吸着させ、600の水でSV4で水洗
し、10％メタノール600で洗浄する。つづいて
50％メタノールで溶出すると初めの40でハービ
サイジンＣ物質が溶出され、つづいてハービサイ
ジンＡおよびＢが溶出してくる。つぎにハービサ
イジンＣを含有する区分40を減圧下、55℃で濃
縮し、濃縮液６をうる。これを６のｎ−ブタ
ノールで２回抽出し、その抽出液14に水を添加
しつつ減圧下、55℃で濃縮すると100ｇの粗粉末
が得られる。そのうちの４ｇを５mlのメタノール
に溶解し、クロロホルムで充填してある200mlの
シリカゲルカラムに吸着し、クロロホルム500ml
で洗浄（SV1）し、つづいて10％メタノール含有
クロロホルム4000mlで溶出（SV1）し、ハービサ
イジンＡおよびＢ物質を除く。つづいて20％メタ
ノール含有クロロホルム2000mlで溶出し、有効区
分２をうる。これを減圧下50℃で溶媒を留去
し、残査を20mlのメタノールで再結することによ
りハービサイジンＣ物質200mgが結晶性粉末とし
て得られる。 実施例 ３ ストレプトマイセス・サガノネンシスm17−
403株を実施例１と同様にして５日間培養した。
ただし、本培養培地は、可溶性デンプン２％、脱
脂大豆粉２％、グルコース１％、KH2PO41％、
CaCO30.3％、生イースト２％、NH4Cl0.5％、
MgSO4・7H2O0.02％、ZnSO4・7H2O0.1％、PH
6.5である。 ここで得られたブロス30に2.4Kgのセライト
を添加して加圧過を行ない、液20をうる。
これをダイヤイオンHP−20を２充填してある
カラムに吸着（SV5）し、10の水で洗浄
（SV5）し、つづいて40％メタノーリ10で洗浄
（SV5）し、つぎに45％メタノールで溶出
（SV3）してＧ物質含有区分15をうる。つづい
て、70％メタノールで溶出（SV3）し、Ｆ物質含
有区分20をうる。 Ｆ物質含有区分は減圧下45℃で３まで濃縮す
る。これを３のメチレンクロライドで３回抽出
し、９の抽出液をうる。芒硝１Kgで脱水後、メ
チレンクロライドを留去し、500mlのメタノール
に溶解し、５ｇの炭末で脱色し、これを濃縮する
と12ｇのハービサイジンＦ物質が結晶として得ら
れる。 Ｇ物質含有区分は減圧下45℃で３まで濃縮
し、３の酢酸エチルで３回抽出し、抽出液10
をうる。これを芒硝で脱水し、溶媒を留去すると
粗粉末5.8ｇをうる。これを５mlのメタノールに
溶解し、メタノールで充填してある700mlのセフ
アデツクスLH−20にかけ、SV0.1でメタノール
を流して、Ｇ物質含有区分を集めると300mlであ
る。溶媒を留去し、酢酸エチルで再結するとハー
ビサイジンＧ物質190mgが結晶として得られる。
第１図、第２図、第３図および第４図はそれぞ
れハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質の赤外
部吸収スペクトルを示す。第５図はハービサイジ
ンＣテトラアセテート体の、第６図および第７図
はそれぞれハービサイジンＥおよびＦの、また第
８図はハービサイジンＧメチルエステル体の核磁
気共鳴吸収スペクトルを示す。
れハービサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質の赤外
部吸収スペクトルを示す。第５図はハービサイジ
ンＣテトラアセテート体の、第６図および第７図
はそれぞれハービサイジンＥおよびＦの、また第
８図はハービサイジンＧメチルエステル体の核磁
気共鳴吸収スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の式を有する抗生物質ハービサイジンＣ、
Ｅ、ＦおよびＧ物質。 但し、式中、 ハービサイジンＣ物質はR1およびR2が共に水
素原子を示し、 同Ｅ物質はR1が１−メチルエチルカルボニ
ル、R2がメチルを示し、 同Ｆ物質はR1が１−メチル−１−プロペニル
カルボニル、R2がメチルを示し、 同Ｇ物質はR1が１−メチル−１−プロペニル
カルボニル、R2が水素原子を示す。 ２ ストレプトマイセス属に属するハービサイジ
ンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質生産菌を好気的に培養
し、得られた培養物からハービサイジンＣ、Ｅ、
ＦおよびＧ物質を採取することを特徴とするハー
ビサイジンＣ、Ｅ、ＦおよびＧ物質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5658779A JPS55149297A (en) | 1979-05-09 | 1979-05-09 | Antibiotic herbicidin c, e, f, and g and its preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5658779A JPS55149297A (en) | 1979-05-09 | 1979-05-09 | Antibiotic herbicidin c, e, f, and g and its preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55149297A JPS55149297A (en) | 1980-11-20 |
| JPS6217599B2 true JPS6217599B2 (ja) | 1987-04-18 |
Family
ID=13031304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5658779A Granted JPS55149297A (en) | 1979-05-09 | 1979-05-09 | Antibiotic herbicidin c, e, f, and g and its preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55149297A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108048490A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-05-18 | 无锡市拜沃特环保科技有限公司 | 一种链霉菌溶藻活性物质提取方法 |
| CN113337553B (zh) * | 2019-05-31 | 2022-10-21 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | Herbicidin生物合成基因簇及其应用 |
-
1979
- 1979-05-09 JP JP5658779A patent/JPS55149297A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55149297A (en) | 1980-11-20 |
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