JPS6217657A - バニルマンデル酸およびホモバニリン酸の同時分析法 - Google Patents
バニルマンデル酸およびホモバニリン酸の同時分析法Info
- Publication number
- JPS6217657A JPS6217657A JP15678185A JP15678185A JPS6217657A JP S6217657 A JPS6217657 A JP S6217657A JP 15678185 A JP15678185 A JP 15678185A JP 15678185 A JP15678185 A JP 15678185A JP S6217657 A JPS6217657 A JP S6217657A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vma
- acid
- mobile phase
- urine
- detector
- Prior art date
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- Pending
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（イ）産業上の利用分野
この発明はバニルマンデル酸およびホモバニリン酸の同
時分析法に関する。さらに詳しくは、高速液体クロマト
グラフィーと電気化学検出器を用いるバニルマンデル酸
（以下ＶＭＡ）およびホモバニリン酸（以下ＨＶＡ）の
同時分析法に関する。
時分析法に関する。さらに詳しくは、高速液体クロマト
グラフィーと電気化学検出器を用いるバニルマンデル酸
（以下ＶＭＡ）およびホモバニリン酸（以下ＨＶＡ）の
同時分析法に関する。
（ロ）従来技術
小児ガンの一種である神経芽細胞腫の早期発見法として
、尿中のＶＭＡとＨＶＡの二成分を測定する方法が有用
であることが知られており、これは、通常高速液体りＯ
マドグラフィーを用いて行なわれている。
、尿中のＶＭＡとＨＶＡの二成分を測定する方法が有用
であることが知られており、これは、通常高速液体りＯ
マドグラフィーを用いて行なわれている。
高速液体クロマトグラフィーにより分離し、蛍光検出器
により分析する従来技術によるＶＭＡおよびＨＶＡ同時
分析法においては、移動相としてｐＨ２〜３．５の酸性
緩衝液とアセトニトリルの混合溶媒が用いられている。
により分析する従来技術によるＶＭＡおよびＨＶＡ同時
分析法においては、移動相としてｐＨ２〜３．５の酸性
緩衝液とアセトニトリルの混合溶媒が用いられている。
ｐＨ２〜３．５と酸性にするのはＶＭＡと尿中夾雑物質
（蛍光物質）との分離を効率良く達成するためである。
（蛍光物質）との分離を効率良く達成するためである。
（ハ）発明が解決しようとする問題点
上記に示したように、蛍光検出器を用いる場合には、ｐ
Ｈ２〜３．５の酸性条件下で行なう必要があった。しか
しながら酸性度を強めるとＶＭＡ％ＨＭＡ共に検出感度
が著しく低下する傾向がある（第４図参照）。従って、
分離が良好に行なわれても、分析の精度が低下するとい
う問題点があった。
Ｈ２〜３．５の酸性条件下で行なう必要があった。しか
しながら酸性度を強めるとＶＭＡ％ＨＭＡ共に検出感度
が著しく低下する傾向がある（第４図参照）。従って、
分離が良好に行なわれても、分析の精度が低下するとい
う問題点があった。
そこで、蛍光検出器よりも高感度なアンベロメトリやク
ーロメトリを用いた、いわゆる電気化学検出器を用いる
方法が考えられる。
ーロメトリを用いた、いわゆる電気化学検出器を用いる
方法が考えられる。
しかしながら蛍光検出器を用いる従来技術の移動相と同
じもの、すなわち−２〜３．５の酸性！１衝液とアセト
ニトリルの混合溶媒からなる移動相と電気化学検出器と
組合せた場合には、他の夾雑物のピークことに尿中の夾
雑物ピークによってＶＭＡのピークが妨害され定量困難
となる不都合が生じる（第２図参照）。
じもの、すなわち−２〜３．５の酸性！１衝液とアセト
ニトリルの混合溶媒からなる移動相と電気化学検出器と
組合せた場合には、他の夾雑物のピークことに尿中の夾
雑物ピークによってＶＭＡのピークが妨害され定量困難
となる不都合が生じる（第２図参照）。
このために各ピーク間隔を広げる目的でアはトニトリル
の添加量を減少させることも考えられるが、この場合に
はＶＭＡのピークが明瞭に得られても、ＨＭＡの溶出時
間が長＜（４０分以上）実用には到庇適さない（第３図
参照）。
の添加量を減少させることも考えられるが、この場合に
はＶＭＡのピークが明瞭に得られても、ＨＭＡの溶出時
間が長＜（４０分以上）実用には到庇適さない（第３図
参照）。
この点に関し、発明者らは鋭意研究を行なった結果、移
動相の−を４〜８滅で上昇させることにより、分析時間
の増大を１＆ ＜ことなく ＨＶ ＡおよびＶＭＡと尿
中夾雑物（電気化学的陽性物質）の分離が達成され、さ
らにＶＭＡの感度自体も茗しく向上することができると
いう事実を見出した。
動相の−を４〜８滅で上昇させることにより、分析時間
の増大を１＆ ＜ことなく ＨＶ ＡおよびＶＭＡと尿
中夾雑物（電気化学的陽性物質）の分離が達成され、さ
らにＶＭＡの感度自体も茗しく向上することができると
いう事実を見出した。
（ニ）問題点を解決ザるための手段および作用かくして
この発明によればバニルマンデル酸およびホモバニリン
酸を含み得る試料を高速液体クロマトグラフィーに付す
ことからなり、該クロマトグラフィーにおける移動相と
して、水と混合しつる有機溶媒を任意に含むｐＨ４〜８
のリン酸緩衝液を用いかつ検出器として電気化学検出器
を用いて分離分析を行なうことを特徴とするバニルマン
デル酸およびホモバニリン酸の同時分析法が提供される
。
この発明によればバニルマンデル酸およびホモバニリン
酸を含み得る試料を高速液体クロマトグラフィーに付す
ことからなり、該クロマトグラフィーにおける移動相と
して、水と混合しつる有機溶媒を任意に含むｐＨ４〜８
のリン酸緩衝液を用いかつ検出器として電気化学検出器
を用いて分離分析を行なうことを特徴とするバニルマン
デル酸およびホモバニリン酸の同時分析法が提供される
。
この発明に使用する移動相は、−４〜８に調製したリン
酸緩衝液または有機溶媒−リン酸緩衝液の混合溶媒が使
用でき、リンＦ１１Ｍ’に液としては例えば、リン酸ナ
トリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液などが使用可能
である。
酸緩衝液または有機溶媒−リン酸緩衝液の混合溶媒が使
用でき、リンＦ１１Ｍ’に液としては例えば、リン酸ナ
トリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液などが使用可能
である。
リン酸緩衝液に任意に含ませてよい有機溶媒は水と混合
しうるちのであればよく、例えばアセトニトリル、メタ
ノール等である。
しうるちのであればよく、例えばアセトニトリル、メタ
ノール等である。
有機溶媒のリン酸緩衝液に対する割合は、０〜ａｗｔ％
であることが適切である。ａｗｔ％を越えると−をこの
範囲で低めてもＶＭＡが迅速に溶出されすぎて好ましく
ない。すなわち有機溶媒の岱は、ＶＭＡが少なくとも明
瞭に保持され、溶媒のピークやインジェクションショッ
クのピークに極端に近接しないように規定するのが好ま
しい。
であることが適切である。ａｗｔ％を越えると−をこの
範囲で低めてもＶＭＡが迅速に溶出されすぎて好ましく
ない。すなわち有機溶媒の岱は、ＶＭＡが少なくとも明
瞭に保持され、溶媒のピークやインジェクションショッ
クのピークに極端に近接しないように規定するのが好ま
しい。
電気化学検出器は当該分野に用いられるものはいずれも
使用できて、例えばアンベロメトリ、クーロメトリ等が
使用できる。電解電圧は＋０．２〜＋ ０．５ ｍＶｖ
ｓＰｂ極に設定するのが適している。
使用できて、例えばアンベロメトリ、クーロメトリ等が
使用できる。電解電圧は＋０．２〜＋ ０．５ ｍＶｖ
ｓＰｂ極に設定するのが適している。
かかる電気化学検出器はクーロケム５１００Ａ ＜米国
ＥＳＡ社）等の名称で入手可能である。
ＥＳＡ社）等の名称で入手可能である。
カラムとしては、通常の逆相液体クロマトグラフィー用
のカラムが使用できて、例えばいわゆるＯＤＳカラム、
Ｃ８カラムまたはＴＭＳカラムが使用可能であり、ＯＤ
Ｓカラムが好ましい。
のカラムが使用できて、例えばいわゆるＯＤＳカラム、
Ｃ８カラムまたはＴＭＳカラムが使用可能であり、ＯＤ
Ｓカラムが好ましい。
（ホ、）実施例
以下この発明を実施例によって説明するが、この発明を
限定するものではない。
限定するものではない。
下記の条件下でＶＭＡおよびＨＶＡの同時分析を行なっ
た。
た。
（ω 分析条件
カラム：Ｓ旧ｍ −ｐａｃｋ ＣＬＣ−ＯＤＳ（６，
ＯＭ ［、Ｄ、 Ｘ１５ａｌＬ、 。
ＯＭ ［、Ｄ、 Ｘ１５ａｌＬ、 。
島津製作所製）
カラム温度：４０℃
流Δ：１．０１／分
検出器：クーロケム５１００Ａ
移動相：ＰＨ５，０の１０ ｍＭリン酸ナナトリウム緩
衝液９７５容量％とアセトニトリル ２．５容量％の混合溶媒 ＋ｂ） サンプル 生後約３カ月児の尿を採尿し、この１１ノに酢酸エチル
および塩酸を加え、Ｉｊ！拌し、有機層を分取し、蒸発
乾固し、これを２００ｄの移動相に溶解したものを注入
用試料とした。
衝液９７５容量％とアセトニトリル ２．５容量％の混合溶媒 ＋ｂ） サンプル 生後約３カ月児の尿を採尿し、この１１ノに酢酸エチル
および塩酸を加え、Ｉｊ！拌し、有機層を分取し、蒸発
乾固し、これを２００ｄの移動相に溶解したものを注入
用試料とした。
上記この発明の方法において得られたクロマトダラムを
第１図に示した。図中（１）はＶＭＡ （以下同じ）、
（２１１，１ＨＭＡ（以下同じ）である。このようにこ
の発明によれば、ＶＭＡ付近の夾雑物とＶＭＡの分離も
良く、さらにＶＭＡ、ＨＶＡの高感度で適正なピークを
短時間で得られていることがわかる。
第１図に示した。図中（１）はＶＭＡ （以下同じ）、
（２１１，１ＨＭＡ（以下同じ）である。このようにこ
の発明によれば、ＶＭＡ付近の夾雑物とＶＭＡの分離も
良く、さらにＶＭＡ、ＨＶＡの高感度で適正なピークを
短時間で得られていることがわかる。
第２図および第３図は移動相として蛍光検出器を用いる
従来技術の移動相（第２図・・・・・・ＰＨ３，０のリ
ン１％９１０１Ｍナトリウム緩衝液９６．５容量％とア
セトニトリル３．５容量％の混合溶媒、第３図・・・・
・・−３，０のリン１％１０１Ｍナトリウム緩衝液９７
．５容量％とアセトニトリル２．５容量％の混合溶媒）
を用いた比較例である。
従来技術の移動相（第２図・・・・・・ＰＨ３，０のリ
ン１％９１０１Ｍナトリウム緩衝液９６．５容量％とア
セトニトリル３．５容量％の混合溶媒、第３図・・・・
・・−３，０のリン１％１０１Ｍナトリウム緩衝液９７
．５容量％とアセトニトリル２．５容量％の混合溶媒）
を用いた比較例である。
第２図は、溶出に要する時間は第１図に比較して長いに
もかかわらず、ＶＭＡ付近の夾雑物とＶＭＡの分離が充
分ではない。
もかかわらず、ＶＭＡ付近の夾雑物とＶＭＡの分離が充
分ではない。
第３図は、ＶＭＡ付近の夾雑物とＶＭＡの分離は良くな
っているがＨＭＡの溶出時間が非常に長い。
っているがＨＭＡの溶出時間が非常に長い。
このように比較例はともに実用性のないものである。
（へ）発明の効果
この発明の方法によれば、ＶＭＡおよびＨＶＡの分析に
おいてシャープなピークを得ることができて、従来にな
い定量性の蟲い分析を行なうことができる。またこれに
あわせて溶出時間の短縮化の効果も得られる。
おいてシャープなピークを得ることができて、従来にな
い定量性の蟲い分析を行なうことができる。またこれに
あわせて溶出時間の短縮化の効果も得られる。
第１図はこの発明の方法の実施例で得られるクロマトグ
ラム図、第２図および第３図は比較例のクロマトグラム
図、第４図はＶＭＡおよびＨＶＡの−による蛍光スペク
トルの影響をあられす図である。 第１図 溶を時間（ｅ） 第３図 ３ＣＯ３５０４ＪＪｎｍ １ｇ４図 ■＝ＰＨ５，０ ■＝ＰＨ４，５ Ｏ＝ＰＨ４，０ ■＝ＰＨ３，５ （＞ ＰＨ３，０
ラム図、第２図および第３図は比較例のクロマトグラム
図、第４図はＶＭＡおよびＨＶＡの−による蛍光スペク
トルの影響をあられす図である。 第１図 溶を時間（ｅ） 第３図 ３ＣＯ３５０４ＪＪｎｍ １ｇ４図 ■＝ＰＨ５，０ ■＝ＰＨ４，５ Ｏ＝ＰＨ４，０ ■＝ＰＨ３，５ （＞ ＰＨ３，０
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、バニルマンデル酸およびホモバニリン酸を含み得る
試料を高速液体クロマトグラフィーに付すことからなり
、 該クロマトグラフィーにおける移動相として、水と混合
しうる有機溶媒を任意に含むｐＨ４〜８のリン酸緩衝液
を用いかつ検出器として電気化学検出器を用いて分離分
析を行なうことを特徴とするバニルマンデル酸およびホ
モバニリン酸の同時分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15678185A JPS6217657A (ja) | 1985-07-15 | 1985-07-15 | バニルマンデル酸およびホモバニリン酸の同時分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15678185A JPS6217657A (ja) | 1985-07-15 | 1985-07-15 | バニルマンデル酸およびホモバニリン酸の同時分析法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6217657A true JPS6217657A (ja) | 1987-01-26 |
Family
ID=15635169
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15678185A Pending JPS6217657A (ja) | 1985-07-15 | 1985-07-15 | バニルマンデル酸およびホモバニリン酸の同時分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6217657A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01217263A (ja) * | 1988-02-26 | 1989-08-30 | Showa Denko Kk | カテコールアミン及び／又はその代謝物の分析方法と電気化学検出器 |
| JPH01131157U (ja) * | 1988-03-02 | 1989-09-06 |
-
1985
- 1985-07-15 JP JP15678185A patent/JPS6217657A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01217263A (ja) * | 1988-02-26 | 1989-08-30 | Showa Denko Kk | カテコールアミン及び／又はその代謝物の分析方法と電気化学検出器 |
| JPH01131157U (ja) * | 1988-03-02 | 1989-09-06 |
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