JPS62181717A - 増加された多芽形成による微細植物体の増殖方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明ぽ、郡官組織培養による多芽形成（ｍｕｌｔｉｐ
ｘｅ　５ｈｏｏｔ　＜６ｒｍａｔｉｏｎ）によって植物
をクローン増殖させる方法に関する。

多数の植物が組域培文法によって商業的に増殖される。

この方法によれば、所望の皿物の選択された組織が組織
の増殖を起される培地上で生材せしめられる。これらの
増ｔｔａされた組織は、分割され、そして分割物は、器
官２よびその他の構造を急速にＪ’ｌｌ加させる他の培
地の上で培養されて最終的に完全な再生された植物を生
じさせる。

植物の再生は、芽、茎の断片、茎頂、分裂組織？よひそ
の他の器官のような組織された細ｈ’ｒＥ。

系の培養によって達成されうる。再生は、カルス２よび
浮遊４誉されたＩ！ｔｌｌ麿のような未組織の糸を使用
しても−Ａ成されうる。植物の真正のクローンは、組織
された系よりの腋芽による再生植物から大抵容易に得ら
れ、そのような系は、通常商業的な微細植物体増殖（ｍ
ｉｒｏｐｌａｎｔｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　）のための
出発物質として使用される。

組織された系よりの多芽形成による植物増殖の効率は、
上記系よりの多数の芽の急速な形成に依存する。本発明
は、組織され丸糸より芽が形成される速度を増加させる
方法の発見に基づくものである。更に、本発明の方法社
、根≧よびその他の構造の形成速度を者しく向上させ、
それによって完全な再生植物の形成速度を促進させるも
のである。

先年、フォックス；　（Ｆｏｘ　ｅｔ　ａｉ、）は、オ
ナモミＰよびその他の組織の生長が培地へのトウモｏ＝
＋シ浸漬水（Ｃｏｒｎ　ａｔｅｅｐｗａｔｅｒ　）の添
加によって促進されることを報告した（　ＰｌａｎｔＰ
ｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、　５７７−５７９（１９５ｇ）参
照）。

し゛かしながら、かれらは、本発明者らが見出したよう
表多芽形成または多根端形成を報じていなかった。

本発明によれば、浸漬水を含有する培地で組織を培養す
ることを包含する組織培養によって植物増殖における芽
形成の速度？：増加させる方法が提供される。

更に、本発明によれば、次の各工程、すなゎち： バレイショ７囁物体の芽を津漬水を含有する節増殖培地
上で多節（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｎｏｄｅｓ）が生するま
で培養し； 培養された材料を単一の節を含む部分に切断し；そして 単一の節を含む各部分を浸漬水を含有する節増殖培地上
で継代培養してバレイクヨ植物体の多数のコピーを得る
、 という各工程を包含するバレイショ植物体の増殖方法が
提供される。

組織培養による植物の増殖の一般的方法はよく知られて
おり、そして文制に広範に記載されている。例えば、ム
ラシゲ（Ｔ、Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ）により［組織培養に
よる４に？１ｌｔ１９ｔｉ　（Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｐａ
−ｇａｔｉＯｎ　Ｔｈｒｏｕｇｈ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ
１ｔｕｒｅｓ）　Ｊと題する広範な評Ｂ　（Ａｎｎ、Ｒ
ｅｖ、Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２５　。

１５５−１６６（１９７４））を参照されたい。各種植
物の増殖のために使用された培地、温度、光の条件、２
よび使用された培養の瑣類を含む諸条件の記述は、その
中に詳細に言及されている。

トウモロコシの湿式シリング法もまたよく知られて２す
、文献中に広乾に記載されている。

例えば、カーク−オスマー編化学技術６科φ典第５版ジ
ョン、ウィリー社１９８５年刊ｂａ　０％ｗ　Ｙｏｒｋ
　（１９８５）の第２１巻第４９２貝以下のホイツスラ
ー（Ｒ，Ｌ、Ｗｈｉｓｔｌｅｒ）　？よびダニｘ　ル（
、Ｔ、ＲｏＤａｎｉｅｌ）　ＩＣよる１デンプン”と題
する章を参照されたい。コムギ２よびツルガムのような
他の穀粒もまた湿式堂リング法Ｋかけることができる。

トウモロコシが湿式シリング法にかけられる場合には、
穀粒はまず通常夕波の二酸化イオウを含有する温水［９
される。コムギが湿式シリング法Ｋかけられる場合には
、二重化イオウは、通常水には添加されない。何故なら
ば、それはコムギのグルテンの活力を破訣するからであ
る。

穀粒が除去された後、穀粒から浸出した種々の物′Ａｔ
を含有する残りの水酊牧は、しばしば浸漬水と称される
。本明細書中で使用する、場合、１潅水（ｓｔｅｅｐｗ
ａｔｅｒ　）”という用語は、また蒸発によってはう６
された浴液を包含し、また蒸発が完全に行なわれる場合
に！Ａ留する浸漬水固形物に対しても使用される。

本発明の′４施に当っては、浸漬水は、組絨層養物がそ
の上で成育する栄養培地と混合される。

乾燥固形物基準で約ｏ、ｏ　ｓ　、ｙないし約５Ｉの浸
漬水が培地１１当りに添加される。これは、小林の浸漬
水約０．０１％ないし約１％を含有する培地に相当する
。というのは、トウモロコシ浸療液と呼ばれることもあ
る市販の？！ｉ２漬水は、水約５０％である。培地中の
浸漬水の好ましい濃度は％培地１ｌ当９乾床固形物基準
で反噴水約０．５ｇないし約５ｇである。

本発明の方法に２いて便用されるべき特に望ましい浸漬
水に、市販の浸漬水を限外Ｐ遇にかけることによって得
られる。過当な生成物は、原料を１０００の分子量を分
画する濾過膜を通して９：１の透過物対残留物の比に２
いて処理される。

本発明に従って増殖されうる植物には、寥内用鉢植草花
、装飾用２よひ瓶賞用禽木２よび高木、２よび漬作物２
よび樹木、以下のものを含むがこれらに限定されるわけ
ではないが、例えば、ラン、シダ類、キク類、イモ類、
ユリ類、ウキフサ類、クローバ−２よびリンゴ、アーモ
ンド、マツおよびパパイアの木が包含される。

以下の例は１本発明のいくつかの具体化例を例示するも
のである。特記しない限り、すべての比および百分率は
、Ｎ量基準で表示されている。

例　　１ バレイショの塊茎の芽から切取った茎頂からバレイショ
の芽の培養を開始した。４葉ないし６葉のビモリーダを
伴なう】頁端部よりなる切取られた茎頂を、第１戎に記
載された茎葉形成培地の上に置いた。これらの培養物が
４ないし８個の節を形成し之ときに、個々の節を含むセ
グメントを分離しそして節増殖培地上で継代培養した。

節増殖培地の組成は、キネチンＰよびインドール酢酸が
省略され、そして１−イノシトール１ｏ　ａｑ／ｇ　、
　ＮａＨ，ＰＯ，、Ｈ，ＯＯ，１７９／ｌｔ＞よひ種々
の址の浸漬水が添加さまたことを除いては、茎葉形成培
地に類似するものであった。

８２槓水は、シーピーシ−社（ｃｐｃ工ｎｔｅｒｎａｔ
ｉ−Ｏｎａｌ工ｎｃ、　Ｍｎｇｌｅｗｏｏｄ　ＣＩＬｆ
ｆａ、Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ）から［８０１’アルボ（
ＡＲＧＯ■）浸漬水の商品名の下に市販されている。使
用された試料は、４．６のｐＨ値を有し、そして固形物
５２．５％を含有していた。分析は、乾燥固形り基準で
、それは以下リン酸塩９．９％：フイチンｒ便９．５％
：灰分１８．６′７２；趙元糖１．８％；２よび■金属
２０　ｐｐｍ以下。

第１表 芽形ｇ培地 処　　　方　　　　　　　　　　ｔｎ９／１１．６５Ｏ ＮＨ４Ｎｏ。

１．９００ 尺Ｎｏ。

ＣａＣ！ｌ！２’２Ｈ２０４４０ Ｍ！ＪＳＯ４・７Ｈ２０５７０ ＫＨ２ＰＯ４ ３７，５ Ｎａ２　ｆ！−ＤＴＡ Ｆ’ｅ８０４．７Ｈ２０２７，８ ６，２ ）ｉ５ＢＯＡ Ｍｎ８０　ａ　’　）が培地１ｌ０　　　　　　　　　
　１１Ｓ−９＆６ Ｚｎ８０４−７）ｔ２０ に／　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｑ、１３５Ｎ
ａ２ＭｏＯ４，２Ｈ２０が培地 １ｌ５α０２５ ０ｕ８０４−５が培地１ｌ０ ＣｏＯ１が培地１ｌ，６ｋが培地１ｌ０　　　　　　　
　　　０．０２５蔗　　　砧　　　　　　　　　　５α
０００チｒミン−ＨＣｌ１（Ｌ４キネチン　　　　　　
　　　　　　１・０インドール酢［’−’ １０個の複裂試瀘管にそれぞれ単一の芽を接Ｐ！ｊ　し
た。％’ｆｚ　（２５ｘ１５０＋ｕｍ　）には、閉６．
０に、＋＋、’ｉ　！ｖされそして１％の禅天で固めら
れた培地２０−が入れられていた。密封した試験管を２
５０２−ト燭の光の下に２５℃に一定に１６時間保った
。接種の３０日後に芽を数えそして第１の袖代培誉物と
して記録した。各々の試験管の内容物を各節が単一の芽
をもつように節に切断した。これらの芽を次に新鮮な培
地に移した。更に５０日後に、芽の故を再び数え上げ、
そ、して第２の継代培養物として記録した。結果を第１
１表に示す。

実暎を繰返したが、ただし使用された浸漬水は１次のよ
うにして６Ａ製された限外−過保留物でめった。プレコ
ートフィルターを通して濾過された市販の浸漬水の希薄
溶液を、１００００分子世で分画するハ〔オスモニツク
ス・セパ−オー・ポリスルホ７　（Ｏｓｍｏｎｉｃｅ　
５ｅｐａ−Ｏｐｏｘｙｅｕｘｆｏｎｅ）　）を使用する
限外濾過装置を通して９：１の透過物対保留物の比に２
いて処理した。操作圧力は、約１０℃の装置において１
００　ｐｓｉであった。保留物を次に５０〜６０℃に２
いて減圧下に乾燥固形物４６．２％の謹直％；灰分９．
４％；２よび還元ｇｏ、ａ％を含有していたことを示し
た。これらの実験の結果もまた５ｇＩ表に安約して示す
。

対照実験に２いては、培地が浸漬水を含有しないことを
除いては同じ条件の下で節増殖培地上で芽を培養した。

第■表に示されたこれらの実験の結果は、浸漬水を含有
する培地上で培養された芽は、浸漬水を添加しなかった
培地上で培養された芽に比べしてかなりより多数の新し
い芽を形成することを示している。これらの結果は、史
に、培地中の浸漬水の固形物の最適の割合は、培地が培
地１ｌ当り約２．５ｇであることを示す。

第に表 バレイショの芽冶髪における芽形成速度に及ぼす浸漬水
の影響 なしく対ｆｉ）　　　　　　　７９　　　　　５４６０
．０５　　　　　　　８９　　　　　　６４４０．５　
　　　　　　　９１　　　　　　７７５２．５　　　　
１１５　　　　　　（ＩＬ）５．０８８　　　　　５８
６ ０、（１５ｇ０６０７ （１種外−過） ０．５０　　　　　　１１０　　　　　　７９５（限外
濾過） ２．５　　　　　　　１０８　　　　　　９９９（限外
濾過） ５．０　　　　　　　１１６　　　　　　８１５（限外
濾過） （ａ）汚染された培養物 例　　２ 異なったバッチの浸漬水から調製された培地を使用して
例１の方法を繰返した。４↓１の継代培養は４週間培養
された。次に個々の芽を分離しそして新鮮な培地上で培
養した。更に４週間後に、植物を取り入れそして芽２よ
び機端の改を各植物について数えた。第１ＩＩ表に示さ
れた結果は、浸漬水を含有す、る培地上で培養さルた芽
から得られた植物は、より高度に分岐して浸漬水を含有
しない同じ培地上で培養された植物に比較してより多く
の芽を形成することを示している。更に、浸漬水金含有
する培地上で培養された植物は、高度に分岐しそして、
多数の機端を・口゛する活力ある根糸を有していた。

第　　門　　表 形成速波に及ぼす浸薗水の影響 なしく対照）８４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、組織培養による植物増殖における芽形成の速度を増
   大させる方法において、浸漬水を含有する増殖培地上で
   組織を培養することを特徴とする上記芽形成速度の増大
   方法。 ２、培地が培地１ｌ当り浸漬水固形物０．０５ｇないし
   ５ｇ含有する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、浸漬水が培地に添加される前にまず限外ろ過にかけ
   られる特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４、植物がバレイショ植物でありそして器官の組織がバ
   レイショの塊茎の芽から得られた茎芽頂である特許請求
   の範囲第２項記載の方法。 ５、下記の各工程：すなわち、 バレイショ植物体の芽を、浸漬水を含有する節増殖培地
   上で多数の節が生ずるまで培養し；培養された材料を単
   一の節を含む部分に切断し；そして 単一の節を含む各部分を、浸漬水を含有する節増殖培地
   上で継代培養してバレイショ植物体の多数のコピーを得
   る、 という各工程を包含することを特徴とする上記バレイシ
   ョ植物体の増殖方法。 ６、培地がこの培地１ｌ当り０．０５ｇないし５ｇ、好
   ましくは０．５ｇないし５ｇの浸漬水固形物を含有する
   特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７、浸漬水が培地に添加される前にまず限外ろ過にかけ
   られる特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８、下記の各工程：すなわち、 （１）バレイショ植物体からのバレイショ塊茎の芽から
   茎端を切り取り； （２）切取られた茎端を芽形成培地上に置き；（３）上
   記の芽形成培地上の上記茎端をこれらの茎端が多節を形
   成するまで培養し； （４）多節を有する芽を、それぞれ個々の節を有する別
   々の芽に切断し； （５）個々の節を有する芽を、浸漬水を含有する節増殖
   培地上で芽が再び多節を形成する まで培養し； （６）継代培養された材料をそれぞれ単一の節を有する
   部分に切断し；そして （７）単一の節を有する各々の部分を、浸漬水を含有す
   る節増殖培地上で継代培養してバ レイショ植物体の多数のコピーを得る、 という各工程からなることを特徴とするバレイショ植物
   体のクローナル増殖方法。 ９、培地がこの培地１ｌ当り０．０５ｇないし５ｇ、好
   ましくは０．５ｇないし５ｇの浸漬水固形物を含有する
   特許請求の範囲第８項記載の方法。