JPS62185023A - 多糖体ｍａ９の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の前用 炎丘公１ 本発明は多糖体ＭＡ９の改良された製造方法に関するも
のである。

さらに訂しくは、本発明は、メリア・アザジラクタ樹皮
を特定の条件下で熱水抽出し、精製処理して多糖体ＭＡ
９を製造り゛る方法に関する。

多糖体ＭＡ９は抗ｌｌ！！瘍剤として有用であり、本発
明によれば多糖体ＭＡ９を工業的に有利に製造すること
ができる。

友往致庸 本発明者等は先にメリア・アザジラクタ樹皮の熱水抽出
物が抗ＩＩＩ作用を有することおよびこの抽出物を精製
して得られる多糖体ＭＡ９は一層強い抗腫瘍作用を有す
ることを見い出し、種々の抽出・Ｒ’ｊｌＪ’ｔｋ’ｉ
：Ｒ’Ｘシタ（特１ｆｌｌ　ｌ１ｉ（５７−３８７２０
、同５７−４８９２０　、同５７−４８９２１、同５７
−１７６９１４、同５７−１７６９１５、同５８−１４
４３２０１同５８−１４４３２１および同５８−１４４
３２２）。尚、多糖体ＭＡ９は上記特許公開公報にａ３
いては多糖体Ｎ９Ｇｌと命名されているが両者は同一物
質である。上記の公知方法によれば、多糖体ＭＡ９はメ
リア・ア１ｆジラクタ樹皮を熱水で抽出し、該抽出物を
例えばアルコール沈澱法で精製し、得られた精製物をさ
らにゲルろ過し、３つに分れる多糖体画分のうち、最初
の両分を採取して得られる。しかしながらゲルろ過はよ
く知られているにうに人聞処理には適しＣいないので多
糖体ＭＡ９のＪ：り工業的な油出・精製法の出現が望ま
れていた。

■１発明の目的 本発明は多糖体Ｍ　Ａ　９の］−業的生産に適した製造
方法を提供することを目的とする。

寸なわら本発明は特別の装置を必要とせず、簡便な操作
で多糖体ＭＡ９を抽出・精製する方法を提供することを
目的とする。

かする本発明の目的は、メリア・アザジラクタ樹皮を加
圧煮沸下に水で抽出し、該抽出液をｐＨ１〜３に調整し
たのりアルコールを加え、生成する沈澱を採取すること
からなる多糖体ＭＡ９の製法によって達成される。上記
加圧煮沸を１〜３気圧（ゲージ圧）とし、また、アルコ
ールとしてメタノールまたはエタノールを使用すること
により上記目的はより良く達成される。

■１発明の詳細な説明 本発明の方法はメリア・ア１ｆジラクタ樹皮を加圧煮沸
下に水で抽出し、該抽出液に酸を加えてｐＨ１〜３とし
、これにアルコールを加え、生成する沈澱を採取するこ
とによって実施される。原ｆ＋１植物であるメリア拳ア
ヂジラクタは学名をメリア・アザジラクタ・リンネ（Ｈ
ｅｌｉａ　　ａｚａｄｉｒａｃｈｔａＬｉｎｎ、　）ま
たはアブジラクタ・インディカ・ジ１シス（Ａｚａｄｉ
ｒａｃｈｔａ　　１ｎｄｉｃａ　　Ｊｕｓｓ）といい、
熱帯地域に自生する高さ１０７ＦＬ以上に達する木本植
物である。本発明の方法においては、メリア・ア番アジ
ラクタ樹皮、好ましくは乾燥樹皮を原料として使用する
。抽出操作は加圧煮沸下に行うこと以外は、常法に従っ
て行われる。すなわち、細断した樹皮に水または熱水を
加え、密封下に加熱沸騰さけることによって実施される
。加熱は沸騰水浴中または直火で行うことができる。加
圧は１ないし３気圧程度が適当であり、この範囲ではＭ
Ａ９の収率は抽出時の圧力の上ガとともに向上するが３
気圧以上加圧しても収率は殆んど変らない。従って設備
費やエネルギー効率を考慮すると２気圧加圧程度が好ま
しい。抽出時間は原料の品質等によっても異なるが通常
１回〜１０時間、好ましくは２〜３時間であり２〜５回
繰り返して行う、２′＠間２回の抽出で７０〜８０％の
ＭＡ９が抽出される。抽出終了後抽出混合物をろ過する
ことにより熱水抽出液が得られる。

このような熱水抽出に先立っで、該樹皮を有機溶媒およ
び（または）常温の水で抽出前処理することにより、不
要成分を予め除去しておくことも望ましい。抽出前処理
に使用する溶媒としてはメタノール、エタノール、ブＯ
パノール、ピリジン、アｔ？トンのような極性有機溶媒
、ベンぜン、トルエン、キシレン、ｎ−へキリン、クロ
ロホルム、四塩化炭素、酢酸エチルのよう゛むノ１極性
右機溶媒があげられる。

かくして得られた熱水抽出液にはなお多品の不純物が含
まれているので、油出液にアルコールを加え、生成した
沈澱を採取して精製する。抽出液は通常ｐＨ！ｉ、ａで
あり、これにそのま）アルコールを加えることらできる
が、本発明者客は、アルコールの添加に先立って抽出液
のｐＨを１〜３に調整すると精製度が飛躍的に向上する
ことを知った。

ｐＨの調整は、塩酸、ｔＩｉＩ！ＩＩ　１！Ｊ　ンＭ′
５（７）　Ｋ　ＨヲＪｄｌ　出液に添加することによっ
て行う。沈澱を生成するために添加するアルコールとし
てはメタノール、エタノールが好適であり、抽出液中の
アルコール濃度が２０〜９０％、特に８０％前後とな、
る聞加えるのが望ましい。抽出液中に生成した沈澱は常
法により、例えば遠心分離により採取される。採取した
沈澱を上記と同じ濃度のアルコール水溶液で洗い、さら
に所望により１００％に近いアルコール、次いでエーテ
ルで洗浄し、乾燥する。

本発明の方法においては、熱水抽出液をアルコール沈澱
法で精製する前に透析脱法または限外ろ適法により精製
することもできる。透析膜法により精製゛する場合は、
該抽出液を透析膜に入れ、水につけて透析し、透析内液
を所望により＆Ｉ岬乾固するかまたは凍結乾燥して抽出
物を得る。透析膜としては分画分子ｆｆ１５０，０００
以下のもの、例えばスベク１−ラ・ボア１〜６（商品名
、スベクｌ〜ラム・メアイカル・インダストリーズ＞Ｉ
　’ＩＪ品）、ビス−１ング・チューブ（商品名、ユニ
オンカーバイト社製品）が使用される。あるいは、分画
分子（ｆｉがｓ、ｏｏｏ〜１０．０００捏度のホローフ
ァイバー型透析蔦を用いてもよい。例えばチル七株式会
和製品のクリランスＴＥ−１５（商品名）、アミコン礼
のＩＩＩＰ　５（商品名、分画分子ｆｆｉ、５，０００
）またはＩＩ［Ｐｌｏ　　（商品名、分画分子量１０，
０００）を用いることができる。

限外ろ過払で精製する場合は分両分子番約１０，０００
乃至１００，０００の限外ろ過膜を用い、常法に従って
加圧下に実施される。ろ過膜は、上記の分画分子Ｒを右
するものであればよく材ｖｌ等に特に制限はないが、合
成高分子を不織布等にキｔ・スディ゛ングしたものが好
適に使用される。このようなろ過膜の例としては、たと
えばロ東電エネ１製のＮＴＵ３５１００Ｐ１８Ｂ　（分
画分子量１００，０００）　、東洋傅達工業（■製品（
１）　ＴＳＫ−Ｏｒ膜：　ＩＳ−１０（分画分子１１０
，０００）、ｌ５−３０（同３０．０００）　、ＴＳ−
５０（同５Ｇ、Ｇｏｏ）およびアミコン社製品の限外ろ
過膜：　ＹＨｌｏ　（分画分子量１０．０００）　、Ｐ
ｌｏ（同１０，０００）　、　ＹＨ３０（Ｉｉｉ１３Ｇ
、００Ｇ）、ＰＨ３０（ｊｉ１３０．０００　）　７３
　、Ｊ：、　ＣＦ　ＸＨ３Ｏ（同５０．０００　）が挙
げられる。ろ過に際しての加Ｊは約０．１〜２に９／１
２が適当である。限外ろ過により熱水抽出液の濃縮と低
分子夾雑物の陥入が同時に達成される。

濃縮液のｉｌＵは５−２０ｍｇ／　ｍｌ、好適には１０
・−１５１１１９／ｄである。

前記アルコール沈澱法にＪ：って１ワられる多糖体ＭＡ
９の物理化学的特性は標品のもの、例えば特開昭６０−
１９７１７号公報に記載の多糖体Ｎ９Ｇ　ｌの物理化学
的特性と一致する。

参考までに、上で得られた多糖体を分画分子予約１Ｘ１
０３〜２Ｘ１０５乃至１Ｘ１０３〜３ｘ１０５のゲルろ
過剤を充填し！、：カラムにかり、蒸留水で溶離すると
多糖体が２つの両分に分画される。最初に溶出する画分
を多糖体ＭＡ９ａ、後に溶出Ｊる多糖体をＭΔ９ｂとす
る。上記ゲルろ過剤としてはデキストランゲル、ポリア
クリルアミドゲル、ポリビニル系のポリマーゲル、多孔
性ガラスピーズ等が使用される。これらは例えばセファ
デックスＧ−２００、セファクリルＳ−３００（商品名
、ファルマシア社製品、スエーデン）バイオゲルｐ−３
００（商品名、バイオラット社製品、米国）、トヨパー
ルＩＩＷ−６０（商品名、東）■・凸達工業相製品、日
本〉等の製品名で市販されている。

本発明の多糖体ＭＡ９は上記多糖体ＭＡ９ａおよび多糖
体ＭＡ９ｂの混合物とみることができ、薬理試験の結果
、ザルコーマ１８０固形型マウス移植腫瘍およびメスＡ
固形型マウス移稙ｉ瘍に対して顕茗な化１作用を右する
ことが確認された。また上記多糖体ＭＡ９ａおよびＭ　
Ａ　９１）も同様の薬理活性を示した。

従って抗腫瘍剤どして使用する場合には、本発明の多糖
体ＭΔ９をさらに多糖体ＭＡ９ａと多糖体ＭΔ９ｂとに
分離する必要はなく、両者の混合物の状態で、叩ら、本
発明に多糖体ＭＡ９の状態で使用づ゛るのが実際的であ
る。

次に実施例を示して本発明をざらに具体的に説明する。

実／Ｉ！！例　１ メリア・ア１アジラクタ樹皮（［１ツ１へＩＩ＆＋１：
３．３にシ、ロット庵２：２．５にぴ、Ｌ１ット陽３：
５００ｇ）に７５％メタノールを樹皮の１０倍ｍ加え、
加熱還流下で、１回２１Ｌ’ｉ間、晶１２ＬＤ抽出処理
を行った。抽出混合物から抽出液をろ去し、残漬に水を
樹皮の１０侶呈加え、２気圧に加圧して煮沸（１３２℃
）した。

１回２時間、計４回抽出を行った。各ロットの熱水抽出
物を分画分子ｆｉ１０，０００〜１００゜０００の中空
糸限外ろ過ｌ１ｌ（日東Ｊエネ１．％ｌ、ＮＴＵ３５１
００Ｐ１８Ｂ＞　ヲ用いて室温（２０〜３０℃）で限外
ろ過した。この濃縮液をエバポレーターを用いてさらに
濃縮し、不溶分を遠心して除いた。この上清液に希硫酸
を加えて液のｐＨを２．０に調整したのち、メタノール
を液の４倍δ（メタノール終＆１度８０％）またはエタ
ノールを液の２倍椿（エタノール終濃度６７％）加え、
１昼夜静置した。生成した沈澱を８０％メタノールまた
はエタノールで洗浄し、６０℃で２昼夜減Ｊ］：乾燥し
、多糖体ＭＡ９を得た。

比較のため、従来法に従ってロット１１＆１．１お上び
庵３の１部について熱水抽出を常１１煮沸下で１回４時
間、計４回行い、またアルコール沈澱をｐｌ＋調整をし
ないぐぞのま）（ｐＨ５，８）で行い、多糖体ＭＡ９を
得た。

本発明法おにび従来法により’Ｅｌられた各多糖体ＭＡ
９をヒフ７デツクスＧ１００にかけ、ゲルろ過を行ない
、全溶出多糖体中におりる多糖体ＭＡ９（第１ピーク）
の百分率を求めたところ、本発明法にＪｊいては９９．
２％、従来法においては７２．５％であった。この結果
から、本発明の方法によれば、極めて高純度で目的とす
る多糖体ＭＡ９を得ることができることが明らかＣある
。

また本発明法と従来法にＪｊ　４Ｊる多糖体ＭＡ９の収
率はぞれぞれ次のとおりであった。

多糖体ＭＡ９の乾燥粉末の色は、本発明法によるらのは
微黄色、従来法によるものは微褐色であり、水溶液の色
は、本発明法によるものは微黄色、従来法によるしのは
褐色であった。

ＩＶ、発明の４体的効果 本発明の方法は、メリア・ア＋ｆジラクタ樹皮を加圧煮
沸下に水で抽出し、該抽出液をｐＨ１〜３に調整したの
ちアルコールを加え、生成する沈澱を採取して多糖体Ｍ
Ａ９を’ＦＪ造することからなり、熱水抽出を加圧煮沸
下で行い、かつ、熱水抽出液ｔｐＨ１〜３に調整したの
ちにアルコール沈澱を行う点が従来法と責なっている。

従来法にＪｊいてはアルコール沈澱法だけでは精製がネ
ト分であるため、さらにゲルろ過による精製を必要どす
るが、本発明方法においてはアルコール沈澱法により多
糖体ＭＡ９が極めて高純度で得られ、着色不純物も少な
いので、ゲルろ過による［４を必要としない。従って本
発明の方法は従来法より少ない工程数で収率Ｊ：り多糖
体ＭＡ９を得ることができ、工業的生産に適している。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）メリア・アザジラクタ樹皮を加圧煮沸下に水で抽
   出し、該抽出液をｐＨ１〜３に調整したのちアルコール
   を加え、生成する沈澱を採取することを特徴とする多糖
   体ＭＡ９の製法。
2. （２）前記加圧煮沸が１〜３気圧（ゲージ圧）である特
   許請求の範囲第１項記載の多糖体ＭＡ９の製法。
3. （３）前記アルコールがメタノールまたはエタノールで
   ある特許請求の範囲第１項または第２項記載の多糖体Ｍ
   Ａ９の製法。