JPS6219086A - ヒトのβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラグメント - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は、ヒトのβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラ
グメントに関する。

〔発明の背景〕

アクチンは真核細胞中綴も多量に存在する蛋白質である
。を推動物のアクチンには少くとも６種のイソタイプが
知られており、４種の筋肉型アクチン（骨格筋アクチン
、心筋アクチン、大動脈平滑筋アクチン、胃平滑筋アク
チン）と２種の非筋肉型アクチン（細胞質β−アクチン
及び同γ−アクチン）がある。筋肉型アクチンは組織特
異性があり、４１１能的に筋肉の収縮に関与している。

他方、細胞質アクチンはあらゆる細胞に存在し、多種の
細胞機能に関与している。β−アクチンは鼻筋性の代表
的細胞質アクチンとして知られ、脳や肝臓といった組織
及び培養細胞等に於て主要構造蛋白質の一つとして存在
する。

アクチンは、一般に、筋肉収縮運動を掌とる主要構造蛋
白質として知られているが、また、他の２０種類以上も
の調節蛋白質と作用して夫々異なった働きを示す等、多
岐にわたる機能をもったユニークな蛋白質である。それ
故、アクチンは細胞の発生分化に伴う細胞形態、運動性
、細胞間相互作用などの変化にも中心的役割を担ってい
るものと考えられており、また、一方では、細胞の分化
、癌化とアクチンのイソタイプの交換に相関性があるこ
とも知られてきている。

従って、アクチンの遺伝子の構造及び編成を解明するこ
とは、その発現の制御機構１分化の問題を始めとして、
その異常発現の疾病に於ける役割、発癌の機構、等の究
明に多大な寄与をもたらすことは必定であり、その解明
が待たれていた。

〔発明の目的〕

本発明は、−ヒ記した如き現状に鑑みなされたもので、
アクチンの遺伝子の構造及び編成を解明することにより
、その発現の制御機構、疾病に於ける役割、分化、発癌
の機構等を究明するべく、ヒト細胞質β−アクチン遺伝
子を含むＤＮＡフラグメントを提供することにより、こ
れを達せしめんとするものである。

〔発明の構成〕

本発明は、エクソン及びイントロン、並びに該エクソン
に隣接した５°末端側約２５０個の核酸塩基配列を含ん
で成るヒトβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラグメン
トの発明である。

本発明者らは、遺伝子組換えの手法を用いて、これまで
、鋭意アクチン遺伝子の構造についての研究を重ねてき
たが、今般、ヒトのβ−アクチンの遺伝子をクローニン
グすることに成功し１本発明を完成するに到った。

本発明に係るヒトβ−アクチン遺伝子のヌクレオチド配
列から推定されるアミノ酸配列は、ヒト線維芽細胞のβ
−アクチンのアミノ酸配列と完全に一致する。

本発明に係るヒトβ−アクチン遺伝子は、６個のエクソ
ン（遺伝情報をコードした領域）と５個のイントロン　
（介在配列）を含む。即ち、第１エクソンに続いて１つ
の大きなイントロンが存在し、第２エクソンはＡＴＧ開
始コドンの上流に６つの５′非翻訳領域ヌクレオチドが
存在し、４つのイントロンが４１／４２番目、　１２１
／１２２番［１、２６７番目、３２７／３２８番目のア
ミノ酸に相当するコーディング領域に存在する。また、
本発明のβ−アクチン遺伝子は、第１エクソンに隣接し
た５゛末端側に約２５０個の核酸塩基配列を含む。アミ
ノ酸をコードする領域は第２〜第６までのエクソンに存
在し、非翻訳領域は第１、第２及び第６エクソンに存在
する。

本発明のヒトβ−アクチン遺伝子には、ヒト心筋アクチ
ン遺伝子、大動脈平滑筋アクチン遺伝子及び胃平滑筋ア
クチン遺伝子などとは反対に。

成熟蛋白のＮ末端アミノ酸のコドンとＡＴＧ開始コドン
との間に存在する（４ｓコドンがない。本発明のヒトβ
−アクチン遺伝子に於けるコーディング領域、及び３°
非翻訳領域、並びに第一エクソンとそれに続く５°末端
側フランキング領域のＣＣＡＡＴボックスとＴＡＴＡボ
ックスとの間（ＯＤＮＡ塩基配列は、ラットβ−アクチ
ン及びニワトリβ−アクチン遺伝子のＤＮＡ塩基配列と
非常に相補性が高い。また、特筆に値することとして、
本発明のヒトβ−アクチン遺伝子のイントロン■の塩基
配列は、ラットβ−アクチン遺伝子のイントロンのそれ
と高い相補性を示す。

本発明のヒトβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラグメ
ントは概路次のようにして得られる。

即ち、薬剤処理により株化したヒト由来の培養細胞ＨＵ
　Ｔ　−１４（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈａｍ、、　２５
５．　ｌＢ５０−１８８１（１１３８０））のＤＮＡを
ＥｃｏＲＩで部分分解したものを入ファージに組み込み
、ヒトの遺伝子ライブラリーを作製する。次いで、既に
得られているβ−アクチン偽偽造遺伝子Ｔｈｅ　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ、
　９５．　Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　ｐ、２２３ａ　（１９８
２））のコーディング領域の一部であるｃａ　Ｏ，３ｋ
ｂｐ　Ｈｉｎｆ　１フラグメントと、同遺伝子の３”末
端側の非コーディング領域の一部であるｃａ　Ｏ，２ｋ
ｂｐ　Ｈｉｎｆ　Ｉフラグメントをプローブとして、Ｂ
ｅｎｔｏｎとＤａｖｉｓの方法　（Ｓｃｉｅｎｃｅ、　
１９８．１８０−１８２　（１１１７７））によりｌ５
ｉｔｕ　　プラークハイブリダイゼーションを行い、ス
クリーニングすると２０〜３０種のポジティブなりロー
ンが単離される。

これらのクローンは当然のことながら、β−アクチンの
偽造遺伝子やイソタイプのアクチン遺伝子を含むものな
ど様々である。そこでβ−アクチン遺伝子と他のイソア
クチン及び関連遺伝子とを区別するために、β−アクチ
ン遺伝子に特異的な核酸塩ｇ配列ＣＴＧＡＣＣＡＴＧＧ
ＡＴＧＡＴＧＡＴＡＴＣＧＣＣ（Ｍｏｌ。

Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、、　３．７８７−７９５　（１
８８３））を化学合成した合成りＮＡフラグメントをプ
ローブとして、各ファージから単離したＤＮＡをＣｏｎ
ｎｅｒらの方法（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、
　Ｓｃｉ、、　８０．２７８−２８２　（＋９８３））
によりハイブリダイゼーションアッセイする。そうする
と、強くポジティブなシグナルを出すクローン１個が得
られる。そのファージから単離したＤＮＡを常法に従っ
て制限酵素で分解して、挿入されているＥｃｏＲＩフラ
グメントの制限酵素地図を作成し、更に、Ｍａｘａｍと
Ｇ１１ｂｅｒｔの方法（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃ
ａｄ、　Ｓｃｉ、、　７４．５６０−５８４　（１９７
？））により全核酸塩基配列を決定する。

本発明のヒトβ−アクチン遺伝子は、当然予想されるこ
とではあるが、他のイソタイプアクチン遺伝子と強い相
同性を示す。即ち、アクチン蛋白をコードする領域では
８０％以上が同一で、遺伝子全体の構造も６個のエクソ
ンから成るなどの類似性を有する。従って、本発明のヒ
トβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラグメントは、他
のイソタイプのアクチン遺伝子や異種アクチン遺伝子の
クローニングやｍＲＮＡの定量等にアクチン特異的プロ
ーブとして広く利用できるものである。また１本発明の
ヒトβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラグメントは、
遺伝子発現のコントロールとしても極めて有用であり、
細胞の分化や発癌の機構等を解明する上に於ても必要不
可欠のものである。更に、本発明によりβ−アクチン遺
伝子のＤＮＡ塩基配列が決定されたことからプロモータ
ーに続く５°末端上流に公知のコンセンサスシーフェン
ス　（ＴＡＴＡボックス、ＣＣＡＡ↑ボックス等）の存
在が判り、β−アクチン遺伝子のプロモーター及びフラ
ンキングシーフェンスの設定ができたことも今後の研究
に寄与するところが大きい。

以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。

〔実施例〕

（１）材料及び方法 ｆｉｌ材料 制限酵素はＢｅｔｈｅｓｄａ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

の Ｉｎｃ　、製のもの及びＮｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉ
ｏｌａｂｓ製のべ使用。Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ
とＤＮＡポリメラーゼ■ラージフラグメント（Ｋｌｅｎ
ｏｗ断片）はＢｉｉｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ
製のものを使用。

牛胸腺ターミナルトランスフェラーゼはＰ−ＬＢｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ、ｓ製のもの、ジーン・スクリーン・プ
ラス膜はＮｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ製の
もの、″Ｐ放射性ヌクレオチドはＡｍｅｒｓｈａｍ　Ｒ
ａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ製のものを夫々使用した。

また、オリゴヌクレオチド　ＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴ
ＧＡＴＧＡＴＡＴＣＧＣＣは、ヒトβ−アクチア　ｍ　
ＲＮ　Ａに対応するｃＤＮＡの塩基配列データに基づい
てＣｒａａｔｉｖｅＢｉｏＭｏｌｅｃｕｌｅｓで合成さ
れたものをＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて５°
末端をラベルして、β−アクチン遺伝子に特異的なプロ
ーブとして用いた。

ヒト遺伝子ライブラリーは、化学発癌剤で株化した細胞
株１（ＵＴ−１４をＥｃｏＲＩで部分的に切断して得た
ＤＮＡを入７７−ジ（Ｓｈａｒｏｎ　４Ａ）に組込み作
製した。

アクチン遺伝子検索のためのプローブは、本発明者らが
先に分離したβ−アクチンの偽造遺伝子のコーディング
領域及び３°非翻訳領域から夫々分離された０、３ｋｂ
ｐ　Ｈｉｎｔ　Ｉ断片及び０．２ｋｂｐ　Ｈｉｎｆ　Ｉ
断片をラベルして作製した。

上述ヒト遺伝子ライブラリーのスクリーニングは、Ｂｅ
ｎｔｏｎとＤａｖｉｓの方法（Ｓｃｉｅｎｃｅ、　１ｆ
１８．１８０−１８２　（１９７？））に従って、１回
目は０．３ｋｂｐの旧ｎｆ工断片を、２回目は０．２ｋ
ｂｐの旧ｎｆＩ断片をプローブとして、　ｉｎ　５ｉｔ
ｕ　　プラークハイブリダイゼーションを行なった。

（１１）制限酵素地図、サザン・ブロッティング及びＤ
ＮＡ塩基配列の決定 上述スクリーニングから得られたファージからＤＮＡを
抽出し、ファージＤＮＡを制限酵素で切断して０．７％
アガロースゲルで電気泳動し、サザンの方法（Ｊ、　Ｍ
ｏ１．　Ｂｉｏ＋、、　１３８．５０３−５１７（１９
７５））に従ってサザンブロッティングを行い、各組換
えファージにβ−アクチン関連遺伝子がいかに組込まれ
ているかを調べた。サザンブロッティングのプローブと
しては、上記０．２ｋｂｐ　Ｈｉｎｔ　Ｉ断片のほか、
新たにβ−アクチン偽偽造伝子のコーディング領域の５
“末端から分離した０、２ｋｂｐ　Ｔａｑ　Ｉ断片を用
いた。その結果をもとにファージに組込まれたアクチン
遺伝子を含むＤＮＡ断片の制限酵素地図を作成した。Ｈ
ＵＴ−１４細胞のＤＮＡは制限酵素で切断し、アガロー
スゲルで電気泳動後、上述のプローブを用いサザンブロ
ツテイング４こよって検出した。

１ｎ基配列決定は、ト述制限酵素地図に従い、Ｍａｘａ
ｍとＧ１１ｂｅｒｔの方法（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　
Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ、　７４．５８０−５８４　（１９７？））に従
って行った。塩基配列データは、Ｗｉ　１ｂｕｒとＬｉ
ｐｍａｎの作成したプログラム　（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ
ｌ、　Ａｃａｄ、　ＵＳＡ、、　８０．７２８−７３０
（１９８３））を使い分析した。

組換えファージを含む実験は、全て、ＮＩＨ組換えＤＮ
Ａ指針に従ってこれを行った。

（２）結果 （１）クローンの分離と制限地図 β−アクチン遺伝子のヌクレオチド配列が他の７クチン
遺伝子のものと非常によく似ていることと、細胞質アク
チンに関連した遺伝子（大部分偽造遺伝子のようである
が、）が複数存在することが最近の知見により示唆され
ていることから、他のアクチン・イソフオーム遺伝子及
び偽造遺伝子から機能的β−アクチン遺伝子を分けるの
に３段階のスクリーニングを行った。

先ず始めに、β−アクチン偽偽造伝子のコーディング領
域由来のプローブで、ヒトのＤＮＡライブラリーをスク
リーニングしたところ、多数のポジティブなりローンが
得られた。次に、これらのクローンなβ−アクチン遺伝
子により特異的な３′非翻訳債域由来の第２のプローブ
を用いてスクリーニングした。厳密に相補的なりＮＡ塩
基配列を検出するような条件の下で第２のプローブとＤ
ＮＡの相補的な結合により２５個のクローンを検出した
。更に、この２５個のクローンのファージＤＮＡを制限
酵素で切断し、第２のプローブのほか新たにβ−アクチ
ン偽偽造伝子の５′末端側のコーディング領域由来の０
．２ｋｂｐ　（Ｔａｑ　Ｉ断片）のプローブを用いてハ
イブリダイゼーション分析した結果、２５個のクローン
を８種の異なるβ−アクチン関連遺伝子群に分類するこ
とができた。

第３のプローブとしては、５゛非翻訳領域の６ヌクレオ
チド、ＡＴＧ開始コドンとそれに統〈β−ド　ＧＴＧＡ
ＣＣＡＴＧＧＡＴ利ＡＴＧＡＴＡＴＣＧＣＣをプローブ
として、Ｃａｎｎｅｔ等の方法（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ
、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ、　８０．２７８−２８２　（１１３８３））４
．：従ッテハイフリダイゼーション分析を行った。その
結果、λＨａ　１８０と名付けられたクローン１個だけ
が、フィルターを０、Ｉ　Ｘ　５ＳＣ（０，０１５Ｍ　
ＮａＣ１１０，００１５Ｎクエン酸ナトリウム、　ｐＨ
７）などの洗浄液で８５℃で洗うという苛酷な条件でも
、このオリゴヌクレオチドと強くハイブリダイズした。

（１１）コーディング領域の塩基配列 λＨａ　１８０に組込まれたβ−アクチン遺伝子を含む
ＤＮＡ断片とその制限酵素地図を第１図（ａ）。

（ｂ）に示す。第１図（ｂ）に従って決定されたＤＮＡ
塩基配列は第２図に示す。第２図（ａ）、（ｂ）に示し
たβ−アクチンのコーディング領域の塩基配列から推論
されるアミノ酸配列は、本発明者らが既に報告したヒト
β−アクチンのアミノ酸配列と同一であった（Ｃｅ１１
．２２．８９３−８９９　（１９８０））　、まｌま た、公知のヒトβ−アクチンｍＲＮＡのものと完全に一
致した（Ｎｕｃｌｅｉｃ　ＡｃｔｄｓＲｅｓ、、　１２
．　ｔ８８７−１８９８（１９８４））。第１図（ｃ）
に本発明に係る遺伝子を図式的に示した。図より明らか
な如く核酸塩基−７７９／−６と、４１／４２番目、１
２１／１２２番目、２６７番目、　３２７／３２８番目
　のコーディング領域を中断する４個のイントロンと計
５個のイントロンが存在する。エクソン・イントロン境
界配列は、スプライシングサイトのＧＴ−ＡＧルールに
一致する。

以上の結果は、入Ｈａ　１８０が機能的ヒトβ−アクチ
ン遺伝子を完全に含むことを示している。

本発明に係るβ−アクチン遺伝子には、ラット及びニワ
トリのβ−アクチン遺伝子同様、成熟蛋白のＮ末端アミ
ノ酸のコドンとＡＴＧ開始コドンとの間に存在するＣｙ
ｓコドンが無いことも特徴の一つである。

（ｉｉｉｌ　５　’非翻訳領域 ヒトβ−アクチン遺伝子のヌクレオチド配列とヒトβ−
アクチンｃＤＮＡクローンのそれ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａ
ｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、、　１２．１ｆｔＢ？−Ｉｎ２　（
１９８４））を比較すると、大きなイントロンがＡＴＧ
開始コドンの上流の６つ目のヌクレオチドから始まり、
−７７３の位置まで続いて存在していることが判る（第
２図（ａ））。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ−Ｈｏｇｎｅ＋ｓボッ
クス　（Ａｎｎ。

Ｒｅｖ、　ＢｉｏｃｈｅＩｌ、、　５０．３４９−３８
３　（１９８１）他）に相当するＴＡＴＡＡＡＡ配列は
ヌクレオチド　−８７９（下線部）で確認され、ＣＣＡ
ＡＴＣ配列（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓＲｅｓ、、　
　８．１２７−１４２　（１１１８０））はＴＡＴＡボ
ックスの１−流のヌクレオチド６１番目の位置に確認さ
れた。

また、二つの推定−ヒのキャップ位置配列ＣＡＣは、Ｔ
ＡＴＡボックスの下流の２５番目と２８番目のヌクレオ
チドの位置に存在した。従って、第一エクソンに隣接し
た５′末端側約２５０個の核酸塩基配列はフランキング
シーフェンスと推定される。

ｒｎ／１３’非翻訳領域 ヒトβ−アクチン遺伝子の３°非翻訳領域のヌクレオチ
ド配列（第２図（ｂ）参照）は、既知のヒトβ−アクチ
アＣＤＮＡのそれ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓＲｅｓ
、、　１２．１８８７−１８１１８　（１１３８４））
と完全に一致した。従って、ヒトβ−アクチン遺伝子の
３°非翻訳領域には、イントロンは存在しない、想定上
のポリアゾニレ−ジョン暗号　ＡＡＴＡＡＡ　（Ｎａｔ
ｕｒｅ、　２８３゜２１１−２１４　（ＩＩ３？ｆり）
はヌクレオチド　２４８０に位置する　（第２図（ｂ）
）。ｃＤＮＡのポリ（Ａ）鎖はポリアゾニレ−ジョン暗
号の下流の１９番目のヌクレオチドにあると報告されて
いる　（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓＲｅｓ、、　１２
．１８８７−１８１１８　（１１１１８４））が、遺伝
子ＤＮＡでは５個のＡ残基がこの位置に存在している。

従って、ポリアゾニレ−ジョンはこれらの残基のどれに
でも、また全てにでも起り得る。

Ｍヒトβ−アクチン遺伝子のサザンプロット分析 機能的β−アクチン遺伝子の数を、β−アクチン遺伝子
中最大のイントロンであるイントロンＩ及びイントロン
■をプローブとして用いて検索した。

第１のプローブ、即ち、イントロン■の一部と、５°非
翻訳領域の６塩基を含む０．３ｋｂｐ　Ｘ５ａＩ−Ｎｅ
ｏ　Ｉ断片は、ヒト遺伝子ＤＮＡをどの制限酵素で切断
した場合でも単一の強いバンドを生じた。

プローブにハイブリダイズしたバンドのＤＮＡ分子サイ
ズは、クローニングしたＤＮＡの制限酵素地図から予測
されたサイズと一致した（Ｓｍａ　Ｉ切断では０．３ｋ
ｂｐ、　ＥｃｏＲＩ切断では１４．５ｋｂｐ、　Ｅｃｏ
ＲＩ　−ＢａｍＨに型切断では８．５ｋｂｐ）。

第２のプローブ、即ち、イントロン■の一部を含む０．
２ｋｂｐ　Ｈｉｎｆ　Ｉ断片も、各制限酵素切断ＤＮＡ
に対し単一バンドを生じた。

ハイブリダイズしたバンドの分子サイズは、クローン化
したＤＮＡの制限酵素地図から予測されたサイズと一致
した（Ｓｍａ　Ｉ切断では９．０ｋｂｐ）。

以」−の結果から、ヒト遺伝子のβ−アクチンには一個
の機能的遺伝子しか存在しないことが判った。

また、イントロンエと５゛非翻訳領域の大部分を含む０
．８ｋｂｐ　Ｘ＋＊ａＩ断片を使用したところ、一つの
大きなバンドの他に少なくとも一個の弱いバンドが認め
られた。公知のβ−アクチン偽偽造遺伝子、いずれも５
゛非翻訳領域に相同的な短い配列を有することから、こ
れらの余分のバンドはこのプロ ０−ブのβ−アクチン偽偽造遺伝子の弱いハイブリダイ
ゼーション能力によるものと推測される。

（３）入Ｈａ　ＩＥＩＯが機能的なβ−アクチン遺伝子
を含んでいることの証明としては、入Ｈａ　１１３０の
塩基配列上の次の掲げる四つの特徴が挙げられる。

■コーディング領域の核酸塩基配列から想定されるアミ
ノ酸配列が公知のヒトのβ−アクチンのアミノ酸配列に
完全に一致する。

■エクソンとイントロンの境界核酸塩基配列が全てＧＴ
−ＡＣルールに従っている。

■第１エクソン上流に見られるＴＡＴＡボックスとＣＣ
ＡＡＴボックスの配列の相対的位置か他の７クチン遺伝
子のそれとよく一致する。

■ポリアゾニレージョン暗号が３′非翻訳領域中に存在
する。

〔発明の効果〕

以上述べた如く、本発明は機能的ヒトβ−アクチン遺伝
子（偽造遺伝子ではない）を含むＤＮＡフラグメントを
初めて提供するものであり、本発明のヒトβ−アクチン
遺伝子を含むＤＮＡフラグメントは、他のイソタイプの
アクチン遺伝子や異種アクチン遺伝子のクローニングに
、またｍＲＮＡの定量に、アクチン特異的プローブとし
て広く使用し得るものであると共に、遺伝子発現のコン
トロールとしても極めて有用であり、細胞の分化や発癌
の機構等を解明する上に於ても必要且つ欠くべからざる
ものであって、斯業に貢献するところ甚だ大なる発明で
ある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係るヒトβ−アクチン遺伝子の構造地
図であり、（ａ）はファージ入Ｈａ１６０ＤＮＡに組込
まれたヒトβ−アクチン遺伝子の制限酵素地図を示し、
（ｂ）はファージ入Ｈａ　１８０に組込まれたヒトβ−
アクチン遺伝子を含むＤＮＡの詳細な制限酵素地図であ
る。但し、　（ａ）　、　（ｂ）に於てＡＩはＡＶａＩ
、ＡはＡＶａＩＩ、ＢはＢａ＋ｍＨ１，ＥはＥｃｏＲＩ
　、　Ｆは旧ｎｆＩ、ＨはＨｐａｌｌ、ＮはＮｃｏｌ、
ＰはＰｖｕｌ［、ＲはＲｓａｌ、Ｓは５ａＴＩ、ＸはＸ
ｏ＋ａＩを夫々表わす。 また、（Ｃ）はβ−アクチン遺伝子の構造を図式化した
ものであり、囲った部分はエクソンを示し、そのうち白
い部分は非翻訳領域を示し、黒い部分はβ−アクチンの
コーディング領域を示す。 また、細い線の部分はイントロン及びそれに続くＤＮＡ
部分を示す。 第２図は本発明に係るヒトβ−アクチン遺伝子の核酸配
列であり、（ａ）は５°非翻訳領域、（ｂ）はコーディ
ング領域及び３°非翻訳領域を夫々表わす。核酸はＡＴ
Ｇ開始コドンのＡから数えた番号〆つけられている。ヒ
トβ−アクチンのアミノ酸配列は核酸配列の上部に示さ
れている。ＣＣＡＡＴボックス、ＴＡＴＡボックス、キ
ャップ位置及びポリアゾニレ−ジョン暗号に係る推定上
の配列には下線を施した。斜線はエクソンとイントロン
との接合点を示している。 特許出願人　和光純薬工業株式会社 第２図（ａ） ＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＣＣＡＡＣ；ＧＣＣＧＣＣＡＡＣ
ＣＣＣＡＡＡＡＣＴＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＣ
ＣＴＣＡＡＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＧＣＴＣＴＴＴＴｍＴ
ＴＴＴｃＧＣＡＡＡＡＣＧＡＧＣＣＣＡＧＡ１０５Ｏ；
ＣＴＡＡＡＡＡＡＡＴＧＣＴＣＣＡＣＴＧ丁ＣＣＣＧＣ
ＣＡＡＣＣＣＣＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＧＧｃｃｎｃｃｃ
ｃｃａＴｃｃＡｃＡｃｃｃｃｃｃｃｙＣＴｃａｃｃｃｃ
ｃＡｃｃｃ弱ｃｃｃａズ詰Ｔα℃ＣαＺＡＡＣＣＧＣＡ
ＣＣＧＣＣＧＴＣＣＧＧＣＧＣＧＣＧＧＧ　ＡＧＡ　Ａ
ＧＣＣＣＣＴＣｃｃＣＣＴＣＣＣ；Ｃ；ＡＧ　Ａ　ＴＯ
（＆ＧＣＡ　ＣＡＣＣＣＣＡ　ＣＯＣＣＡＩＩ；ＴＴＣ
ＣＣＡＣＣＣｌｌ：　ＣＯＡＧＯＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣ
ＧＣＣＧＣＣＧＣＧＣＴＣＣＣＣＧＣＣ丁ＧＣＣＧＣＴ
ＣＴＣＧＧＣＧＣＣＣＧＧＯＣＡＡＣＣＧＣＣＧＧＣＧ
ＴＣＴＴＴＣＴＣＴＧＡＣＣＣＣＣＧＣＴＣＴＴＣＣＣ
ＡＡＴＧＧＧＧＡＴＣＧＣＡＣＧ（ｉＴＧＷＣ（ｉｃｃ
ＣｃＧＴＡｃｃｃｃｃｃＧＴＣＡＧＣＣＣＣｃｃＴＯＣ
ＧＯ（ｉＣＴＣＣＣＧＣＣ；ＣＣＡＴＣＣＯＣＣＴＧＣ
ｌｌ：ＣＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＴＣＧｃＣＣＣＴＡＡＣ
ＴＣＣＣＴＣＣＣ；Ｃｆ：ＣＴｃｃｃＡＡＴＴＷＣＣＣ
ＴＡＡＴＴＧＣＧＣＯＴＯＣＣＣＣＣＴ（Ｘ：ＣＡＣＴ
ＣＡＡＴＧＧＣＣＣＴＡＡＴＣＧＣＧＣ（：ＴＧＣＯＴ
ＴＣＴ（：ＣＣＧＣＣＣＧＣｃＣＣＣＴＴＣＣＧＣＣＡ
ＣｎＣＣＴＧＣＣＣＧＡＣＣＣＧＣＴＧＧＣＧＣＣＣＣ
；ＡＣＧＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＧＴＣＣＧＣＧＣ
ＣＣＧＣＣＡＣＣＣＣＧＴＣＣＣ丁ＣＴｒＴＣＡＡＣＣ
ＣＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣＴＣ；ＧＣＣＣＣＣＧ
ＣＴＴＧＧＣＡＣＣＣＣＣＴＴＧＧＧＣＣ（Ｗ；ＣＴＴ
ＣＣＴＧＣＣＧＣＯＣＯＣＣＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＴ
ＣＣＯＡＣＣＡＣ丁ＣＴＴＴＣ；ＣＣＴｍＡＴＣＧＴＡ
ＡＴＡＡＣＧＣＣ；ＧＣα刀ＣＣα℃Ｃ゛ロ’ＣＣ’ロ
°７Ｑ７に（Ｃ（，１７７ｃｔｌＡｃｃｃｃｃｃｃα：
ｃｃｃｃｃｃｃｃｃｙ−１５０−１ｏ。 ＱＣＣＣＣＣＣＴＡＡＧＯＡＣＴＯＣＣＣＣＣＣ；ＣＣ
Ｃ；ＣＡＡＧＴＣｃＣＣＡＧｃｅＣＩＣＣＧＡＣＴＴＣ
ＯＯ口’ＣＡＣＡＧＣＧＣＣＣＣＣＷＣＴＡη’ＣＴＣ
ＧＣＡ（：　／　ＣＴＣＡＣＣＡＴＣ１ｑ　　　　　　
　辷　　　　　　　　　　　　　Ｊ！Ｊｕ　　　　　　
　ｈ−亡　　５女　　　ご　　＞Ｄ　　　−戸図面の浄
書（内容に変更なし） 第２図（ｂ３） ＾ＴＧＡＣＴＴＡ（ｉＴＴＣＣＧＴＴＡＣＡＣＣＣＴＴ
ＴＣＴＴＣＡＣＡＡＡＡＣＣＴ八＾ＣＴＴＧＣＣＣＡＣ
＾＾＾＾ＣＡＡＣＡＴＣＡＣＡＴＴＧＣへＡＴＧＣＣＡ
ＣＣＴＴＡＡＡＡＡＴＣＡｍＣＣＡＡＧＴＧＴＣＡＣＴ
ＴＴＯｉｃｃｖｃｔｃｃｃｒｃｃｃｖｖｃｃｃｃｃｃ＾
ｃｃｘｃＡｃｃｃｉａ手続補正書補正側 昭和６０年１１月　７日 ｌ　事件の表示 昭和６０年特許願第１５５８４９号 ２　発明の名称 ヒトのβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラグメント３
　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 連絡装置　０１２７０−８５７１ ４　補正命令の日付　　（発送日） 昭和６０年１０月２９日 ５、補正の対象 明細書の図面の簡単な説明の欄、及び図面。 ６、補正の内容 （１）　　明細書２０頁７行目に記載の「（ｂ）は」を
ｒ　（ｂｌ）−（ｂａ）は」と補正する。 （２）　　明細書２０頁８行目から同頁９行目にかけて
記載の「夫々表わす。」を「夫々表わす（但し、（ｂ２
）は（ｂｌ）のつづきであり、（ｂ３）は（ｂ２）のつ
づきである）。」と補正する。 （３）第２図（ｂ）を別紙のとおり第２図（ｂｌ）〜（
ｂ３）と補正する。 以上

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. エクソン及びイントロン、並びに該エクソンに隣接した
   ５′末端側約２５０個の核酸塩基配列を含んで成るヒト
   のβ−アクチン遺伝子を含むＤＮＡフラグメント。