JPS62201573A - 家禽用インフルエンザワクチン - Google Patents
家禽用インフルエンザワクチンInfo
- Publication number
- JPS62201573A JPS62201573A JP4382486A JP4382486A JPS62201573A JP S62201573 A JPS62201573 A JP S62201573A JP 4382486 A JP4382486 A JP 4382486A JP 4382486 A JP4382486 A JP 4382486A JP S62201573 A JPS62201573 A JP S62201573A
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- JP
- Japan
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- strain
- virus
- influenza virus
- poultry
- influenza
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- Pending
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野]
この発明は、新規な家禽用インフルエンザワクチン(不
活化ワクチン)に関する。
活化ワクチン)に関する。
[発明の背景]
家禽のインフルエンザウィルスによる感染はきわめて激
しく、感染家禽のほとんど100%が死亡し、伝染性も
極めて激烈である。このインフルエンザは昔から家禽ベ
ストとして非常に恐れられており、現在家禽の法定伝染
病に指定されている。
しく、感染家禽のほとんど100%が死亡し、伝染性も
極めて激烈である。このインフルエンザは昔から家禽ベ
ストとして非常に恐れられており、現在家禽の法定伝染
病に指定されている。
諸外国では、七面鳥を中心とする家禽インフルエンザの
発生が毎年報告されており、特に、1983年4月から
アメリカ合衆国ペンシルバニア州の養鶏場を中心に大流
行したインフルエンザは養鶏家に大きな被害を与えた。
発生が毎年報告されており、特に、1983年4月から
アメリカ合衆国ペンシルバニア州の養鶏場を中心に大流
行したインフルエンザは養鶏家に大きな被害を与えた。
[発明が解決しようとする問題点コ
我が国に於いては、幸いここ数10年間、インフルエン
ザウィルスに基づく家禽病の大流行は報告されていない
。しかしながら、最近のウィルス学の発達により、家禽
インフルエンザの多くはカモ類を中心とする渡り鳥によ
って感染することが判明した為、渡り鳥が多数飛来する
我が国に於いては、かかる家禽インフルエンザに対する
警戒をおろそかにすることは許されない。事実、我が国
で捕獲された渡り鳥が種々の抗原型のインフルエンザウ
イルスを保有していることが、本発明者らの研究によっ
て確認されており[アクタ・バイオロッカ(Acta
virol、 )28 : 524、+984]、かつ
、家禽に感染するインフルエンザウィルスの抗原型は時
代と共に変化していくので、新しい抗原型ウィルスに対
するワクチンの開発は、当業界に多大の貢献をなすもの
と期待されている。
ザウィルスに基づく家禽病の大流行は報告されていない
。しかしながら、最近のウィルス学の発達により、家禽
インフルエンザの多くはカモ類を中心とする渡り鳥によ
って感染することが判明した為、渡り鳥が多数飛来する
我が国に於いては、かかる家禽インフルエンザに対する
警戒をおろそかにすることは許されない。事実、我が国
で捕獲された渡り鳥が種々の抗原型のインフルエンザウ
イルスを保有していることが、本発明者らの研究によっ
て確認されており[アクタ・バイオロッカ(Acta
virol、 )28 : 524、+984]、かつ
、家禽に感染するインフルエンザウィルスの抗原型は時
代と共に変化していくので、新しい抗原型ウィルスに対
するワクチンの開発は、当業界に多大の貢献をなすもの
と期待されている。
[問題点を解決するための手段]
本発明者らは、我が国に飛来する渡り鳥から、従来の古
典的な家禽のインフルエンザウィルス株と抗原型を異に
する新しいインフルエンザウィルスH5N、株を分離す
ることに成功し[アクタ・バイオロッカ(AcLa v
、1ro1. )28 : 524.1984](この
H’s N 3株は、広島市南区宇品神田町!−590
在、広島県衛生研究所つィルス研究室武井直己氏に分譲
されている。分譲日:昭和61年2月21日)、更に、
このウィルスト1.N3株を培養し、その培養液に不活
化剤を添加してウィルスを不活化し、次いで遠心してそ
の上清を分離することによって不活化ワクチンを製造し
たところ、この不活化ワクチンは接種後約2〜3日目で
家禽の免疫活性を高めること、およびその免疫活性は長
く体内で持続することを確認し、かかる不活化ワクチン
は家禽のインフルエンザ感染を予防するのに極めて有用
であることを見い出した。
典的な家禽のインフルエンザウィルス株と抗原型を異に
する新しいインフルエンザウィルスH5N、株を分離す
ることに成功し[アクタ・バイオロッカ(AcLa v
、1ro1. )28 : 524.1984](この
H’s N 3株は、広島市南区宇品神田町!−590
在、広島県衛生研究所つィルス研究室武井直己氏に分譲
されている。分譲日:昭和61年2月21日)、更に、
このウィルスト1.N3株を培養し、その培養液に不活
化剤を添加してウィルスを不活化し、次いで遠心してそ
の上清を分離することによって不活化ワクチンを製造し
たところ、この不活化ワクチンは接種後約2〜3日目で
家禽の免疫活性を高めること、およびその免疫活性は長
く体内で持続することを確認し、かかる不活化ワクチン
は家禽のインフルエンザ感染を予防するのに極めて有用
であることを見い出した。
即ち、本発明は、不活化されたインフルエンザウィルス
H8N、株培養液の遠心上清を有効成分とする家禽用イ
ンフルエンザワクチンを提供するものである。
H8N、株培養液の遠心上清を有効成分とする家禽用イ
ンフルエンザワクチンを提供するものである。
本発明に係るインフルエンザ不活化ワクチンの製造法を
以下に詳述する。
以下に詳述する。
インフルエンザウィルスHs、N 3株の分離採取した
新鮮なコハクチョウの糞を大量の抗生物質(ペニシリン
:8 、 OOOU/mQおよびストレプトマイシン:
8,000μg/mσ)を含む燐酸緩衝[(pH7,2
)に混じて乳剤を調製し、この乳剤を10日口の発育鶏
卵に接種する。33℃で3日間インキュベートした後漿
尿液を採取し、角界血球の凝集性を調べることによりウ
ィルス分離の有無を判定する。角界血球凝集性を有する
漿尿液を3゜000回転で約30分間遠心して残渣を除
くと、上清からウィルスH3N、株(A/コハクチジウ
/島根/499/83株)が得られる。
新鮮なコハクチョウの糞を大量の抗生物質(ペニシリン
:8 、 OOOU/mQおよびストレプトマイシン:
8,000μg/mσ)を含む燐酸緩衝[(pH7,2
)に混じて乳剤を調製し、この乳剤を10日口の発育鶏
卵に接種する。33℃で3日間インキュベートした後漿
尿液を採取し、角界血球の凝集性を調べることによりウ
ィルス分離の有無を判定する。角界血球凝集性を有する
漿尿液を3゜000回転で約30分間遠心して残渣を除
くと、上清からウィルスH3N、株(A/コハクチジウ
/島根/499/83株)が得られる。
不活化ワクチンの製造
分離したウィルスHs N 、株を郷卵の漿尿腔または
培養細胞に接種し、30〜40℃(好ましくは34〜3
9℃)で増殖させ、漿尿液(卵黄を除きさえすれば、胎
児と漿尿液の混液でもよい)または培養細胞による増殖
液に不活化剤を添加して不活化する。ここで使用する培
養細胞としては、鶏、コハクチョウ、ウズラ、ハト、七
面鳥などの細胞が挙げられるが、これらに限定されるも
のではない。不活化剤としては、ホルマリン、石炭酸、
マーゾニン、マーゾニンと石炭酸との混合液、またはク
リスタルバイオレットなどを使用するのが好ましい。
培養細胞に接種し、30〜40℃(好ましくは34〜3
9℃)で増殖させ、漿尿液(卵黄を除きさえすれば、胎
児と漿尿液の混液でもよい)または培養細胞による増殖
液に不活化剤を添加して不活化する。ここで使用する培
養細胞としては、鶏、コハクチョウ、ウズラ、ハト、七
面鳥などの細胞が挙げられるが、これらに限定されるも
のではない。不活化剤としては、ホルマリン、石炭酸、
マーゾニン、マーゾニンと石炭酸との混合液、またはク
リスタルバイオレットなどを使用するのが好ましい。
不活化増殖液から遠心により岬卵の残渣または細胞を除
くと、上清(遠心上清という)に目的とする不活化ワク
チンが得られる。通常、この様にして得られた不活化ワ
クチンに、免疫活性を増強六仕るために水酸化アルミニ
ウムゲル、燐酸アルミニウムゲル、燐酸カルシウムゲル
または明ばんなどのアジュバントを加える。アジュバン
トの量は適当量でよく、ワクチンlOO容量中に1〜9
5容量入っていればよい。本明細書に於いて「不活化ワ
クチン」とは、この様なアジュバントを含むもの、およ
び含まないもの、の両者を意味するものとする。
くと、上清(遠心上清という)に目的とする不活化ワク
チンが得られる。通常、この様にして得られた不活化ワ
クチンに、免疫活性を増強六仕るために水酸化アルミニ
ウムゲル、燐酸アルミニウムゲル、燐酸カルシウムゲル
または明ばんなどのアジュバントを加える。アジュバン
トの量は適当量でよく、ワクチンlOO容量中に1〜9
5容量入っていればよい。本明細書に於いて「不活化ワ
クチン」とは、この様なアジュバントを含むもの、およ
び含まないもの、の両者を意味するものとする。
本発明の不活化ワクチンは、雑菌の繁殖を抑制するため
の防腐剤を含んでいてもよい。好ましい防腐剤としては
、マーゾニン、タイロシン、安息香酸、ホルマリン、サ
リチル酸、クリスタルバイオレット、ベンゼトニウムク
ロライドなどの界面活性剤、ポリミキシンまたはグラミ
シジンなどが挙げられる。
の防腐剤を含んでいてもよい。好ましい防腐剤としては
、マーゾニン、タイロシン、安息香酸、ホルマリン、サ
リチル酸、クリスタルバイオレット、ベンゼトニウムク
ロライドなどの界面活性剤、ポリミキシンまたはグラミ
シジンなどが挙げられる。
以上、インフルエンザウィルスHs N 3株を培養し
て得られる家禽用インフルエンザワクチンの製造法につ
いて説明したが、Hs N 3株と共通の抗原を有する
インフルエンザウィルス株を使用しても、同様の不活化
ワクチンを得ることができる。従つて、本発明は、Hs
N s株という特定のウィルスの培養上清から得られ
る不活化ワクチンに限定されるものではなく、Hs N
s株と共通の抗原を有するインフルエンザウィルスか
ら得られるものをも包含するものと解釈されねばならな
い。
て得られる家禽用インフルエンザワクチンの製造法につ
いて説明したが、Hs N 3株と共通の抗原を有する
インフルエンザウィルス株を使用しても、同様の不活化
ワクチンを得ることができる。従つて、本発明は、Hs
N s株という特定のウィルスの培養上清から得られ
る不活化ワクチンに限定されるものではなく、Hs N
s株と共通の抗原を有するインフルエンザウィルスか
ら得られるものをも包含するものと解釈されねばならな
い。
本発明に係る不活化ワクチンは単独で、あるいは他のワ
クチンと混合した混合ワクチンの形で、鶏、七面鳥、ア
ヒル、ウズラなどのあらゆる家禽類に使用することがで
きる。投与法に特に制限はなく、筋肉内注射、皮下注射
または皮内注射のいずれであってもよい。投与量は家禽
1羽当り0.1〜1 、 OmQとするのが好ましい。
クチンと混合した混合ワクチンの形で、鶏、七面鳥、ア
ヒル、ウズラなどのあらゆる家禽類に使用することがで
きる。投与法に特に制限はなく、筋肉内注射、皮下注射
または皮内注射のいずれであってもよい。投与量は家禽
1羽当り0.1〜1 、 OmQとするのが好ましい。
以下に実施例および試験例を挙げ、本発明を更に詳細に
説明する。
説明する。
[実施例コ
ウィルスHs N 1株約10’EID5゜を9〜11
日目の岬卵の漿尿腔に接種し、33℃の詳卵器で約3日
間増殖させた。郷卵の漿尿液を取り出し、この漿尿液に
0,05%の濃度になるようにホルマリンを添加し、4
℃で7日間放置した。この漿尿液を3,000回転で約
30分間遠心し、郷卵の残渣を除いてLI s N 3
上清を得、以下の不活化ワクチンを調製した。
日目の岬卵の漿尿腔に接種し、33℃の詳卵器で約3日
間増殖させた。郷卵の漿尿液を取り出し、この漿尿液に
0,05%の濃度になるようにホルマリンを添加し、4
℃で7日間放置した。この漿尿液を3,000回転で約
30分間遠心し、郷卵の残渣を除いてLI s N 3
上清を得、以下の不活化ワクチンを調製した。
1)4%不活化ワクチン
上記の方法で得たH s N G上清(ウィルスI(S
N5株約10@〜107EI05G/d)4.0容量と
水酸化アルミニウムゲル50容量を混合し、その混合液
に滅菌燐酸緩衝食塩水46容量を加えた。
N5株約10@〜107EI05G/d)4.0容量と
水酸化アルミニウムゲル50容量を混合し、その混合液
に滅菌燐酸緩衝食塩水46容量を加えた。
2)7.5%不活化ワクチン
上記のHs N 3上清7゜5容量と水酸化アルミニウ
ムゲル50容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食
塩水42.5容量を加えた。
ムゲル50容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食
塩水42.5容量を加えた。
3)7.5%不活化ワクチン
上記のHs N s上清7.5容量と燐酸アルミニウム
ゲル50容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩
水42.5容量を加えた。
ゲル50容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩
水42.5容量を加えた。
4)10%不活化ワクチン
上記のHa N s上清10容量と水酸化アルミニウム
ゲル50容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩
水40容虫を加えた。
ゲル50容量を混合し、その混合液に滅菌燐酸緩衝食塩
水40容虫を加えた。
これらの不活化ワクチンを8〜9週令の鶏のヒナに筋肉
的接種し、インフルエンザに対する免疫活性を判定した
。免疫活性の判定は、Nl抗体価(赤血球凝集抑制)お
上びNl抗体価(ノイラミニダーゼ抑制)の測定により
行なった。
的接種し、インフルエンザに対する免疫活性を判定した
。免疫活性の判定は、Nl抗体価(赤血球凝集抑制)お
上びNl抗体価(ノイラミニダーゼ抑制)の測定により
行なった。
(1)Nl抗体価の測定法
マイクロプレート(12X8穴)に燐酸緩衝液0゜02
5m12を分注した後、抗血清を加えて2倍段階希釈の
抗血清希釈列を作った。次いで、燐酸緩衝液で赤血球凝
集抑制が4l−(A単位含まれるように調製したウィル
ス液を0.025mQずつ加えた。
5m12を分注した後、抗血清を加えて2倍段階希釈の
抗血清希釈列を作った。次いで、燐酸緩衝液で赤血球凝
集抑制が4l−(A単位含まれるように調製したウィル
ス液を0.025mQずつ加えた。
十分にマイクロプレートを振盪させた後、室温に1時間
静置した。次に0.5%鶏赤血球浮遊液を0.05m1
2加え、振盪後、室温に1時間静置して判定した。赤血
球凝集を抑制した抗血清の最大希釈倍数の逆数に4を乗
じた数値をHI抗体価とした。
静置した。次に0.5%鶏赤血球浮遊液を0.05m1
2加え、振盪後、室温に1時間静置して判定した。赤血
球凝集を抑制した抗血清の最大希釈倍数の逆数に4を乗
じた数値をHI抗体価とした。
(2)Nl抗体価の測定法
0.15M NaCQ液を用いて調製した2倍段階希釈
の抗血清液とウィルス液をそれでれ0.025m12ず
つ試験管に入れ、37℃で1時間感作した後、O、l
mQのフェツインを加えた。十分に混合した後、37℃
の恒温器に静置した。18時間後、約20℃に冷却し、
O、l mQの過ヨード酸試薬を入れてただちに混合し
た後、20°Cに保った。20分後に1.om(2の亜
砒酸試薬を入れ、茶褐色が消失するまで振盪した。次に
、チオバルビッール酸試薬2 、5 mQを加え、混合
後15分間煮沸した。
の抗血清液とウィルス液をそれでれ0.025m12ず
つ試験管に入れ、37℃で1時間感作した後、O、l
mQのフェツインを加えた。十分に混合した後、37℃
の恒温器に静置した。18時間後、約20℃に冷却し、
O、l mQの過ヨード酸試薬を入れてただちに混合し
た後、20°Cに保った。20分後に1.om(2の亜
砒酸試薬を入れ、茶褐色が消失するまで振盪した。次に
、チオバルビッール酸試薬2 、5 mQを加え、混合
後15分間煮沸した。
次に、氷水中につけて急冷した後、4mf2のブタノー
ル試薬を入れて十分に混合した。約t、oooppI1
1で5分間遠沈を行ない、その上清を採取し、分光光度
計を用い、549nmの波長における吸光度を測定した
。(ウィルス+正常血清)の吸光度に対する(ウィルス
+免疫血清)の吸光度の割合が50%以下に抑制される
血清の最終希釈をNl抗体価とした。
ル試薬を入れて十分に混合した。約t、oooppI1
1で5分間遠沈を行ない、その上清を採取し、分光光度
計を用い、549nmの波長における吸光度を測定した
。(ウィルス+正常血清)の吸光度に対する(ウィルス
+免疫血清)の吸光度の割合が50%以下に抑制される
血清の最終希釈をNl抗体価とした。
実験結果
前記の不活化ワクチンの内、3種についてHI抗体価お
上びNl抗体価を測定し、結果を第1図および第2図に
示した。第1図は水酸化アルミニウムゲルを用いて製造
した7、5%(・)および4%(0)不活化ワクチンを
鶏のヒナに投与した時に産生されるH I抗体価(1群
の幾何平均値)を、第2図は燐酸アルミニウムゲルを用
いて製造した7゜5%不活化ワクチンを鶏のヒナに投与
した時に産生されるH I抗体価(○)およびNl抗体
価(・)(いずれも1群の幾何平均値)を示している。
上びNl抗体価を測定し、結果を第1図および第2図に
示した。第1図は水酸化アルミニウムゲルを用いて製造
した7、5%(・)および4%(0)不活化ワクチンを
鶏のヒナに投与した時に産生されるH I抗体価(1群
の幾何平均値)を、第2図は燐酸アルミニウムゲルを用
いて製造した7゜5%不活化ワクチンを鶏のヒナに投与
した時に産生されるH I抗体価(○)およびNl抗体
価(・)(いずれも1群の幾何平均値)を示している。
これらの図から、本発明の不活化ワクチンが、家禽のイ
ンフルエンザの予防に有効であることがわかる。
ンフルエンザの予防に有効であることがわかる。
第1図は、本発明の不活化ワクチンを鶏のヒナに接種し
た時に産生されるF(I抗体価とその推移を示すグラフ
、第2図は、第1図の場合とは異なる本発明の不活化ワ
クチンを接種した場合のト【r抗体価およびN「抗体価
と、それらの推移を示すグラフである。 特許出願人 塩野義製薬株式会社 代 理 人 弁理士 青白 葆 外1名第1図 葎罐後逼収 第2図 #種を通我
た時に産生されるF(I抗体価とその推移を示すグラフ
、第2図は、第1図の場合とは異なる本発明の不活化ワ
クチンを接種した場合のト【r抗体価およびN「抗体価
と、それらの推移を示すグラフである。 特許出願人 塩野義製薬株式会社 代 理 人 弁理士 青白 葆 外1名第1図 葎罐後逼収 第2図 #種を通我
Claims (3)
- (1)インフルエンザウイルスH_5N_3株またはそ
のウィルス株と共通の抗原を有するインフルエンザウイ
ルス株を不活化した不活化ウィルス。 - (2)インフルエンザウイルスH_5N_3株またはそ
のウィルス株と共通の抗原を有するインフルエンザウイ
ルス株を不活化することを特徴とする不活化ウィルスの
製造法。 - (3)インフルエンザウイルスH_5N_3株またはそ
のウィルス株と共通の抗原を有するインフルエンザウイ
ルス株を不活化した不活化ウィルスを有効成分とする家
禽用インフルエンザワクチン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4382486A JPS62201573A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 家禽用インフルエンザワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4382486A JPS62201573A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 家禽用インフルエンザワクチン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62201573A true JPS62201573A (ja) | 1987-09-05 |
Family
ID=12674496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4382486A Pending JPS62201573A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 家禽用インフルエンザワクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62201573A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009514841A (ja) * | 2005-11-04 | 2009-04-09 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | 粒子状アジュバントと免疫増強物質との組合せを含むインフルエンザワクチン |
| US10149901B2 (en) | 2009-02-10 | 2018-12-11 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccines with reduced amounts of squalene |
| US10842867B2 (en) | 2005-11-04 | 2020-11-24 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
| US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
-
1986
- 1986-02-27 JP JP4382486A patent/JPS62201573A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ACTA.VIROL=1984 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11707520B2 (en) | 2005-11-03 | 2023-07-25 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
| JP2009514841A (ja) * | 2005-11-04 | 2009-04-09 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | 粒子状アジュバントと免疫増強物質との組合せを含むインフルエンザワクチン |
| JP2012140470A (ja) * | 2005-11-04 | 2012-07-26 | Novartis Vaccines & Diagnostics Srl | 粒子状アジュバントと免疫増強物質との組合せを含むインフルエンザワクチン |
| US8697087B2 (en) | 2005-11-04 | 2014-04-15 | Novartis Ag | Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators |
| US10842867B2 (en) | 2005-11-04 | 2020-11-24 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
| US10149901B2 (en) | 2009-02-10 | 2018-12-11 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccines with reduced amounts of squalene |
| US11246921B2 (en) | 2009-02-10 | 2022-02-15 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccines with reduced amounts of squalene |
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