JPS62208292A - 細胞培養による植物化学物質の半連続製造法 - Google Patents
細胞培養による植物化学物質の半連続製造法Info
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- JPS62208292A JPS62208292A JP61289735A JP28973586A JPS62208292A JP S62208292 A JPS62208292 A JP S62208292A JP 61289735 A JP61289735 A JP 61289735A JP 28973586 A JP28973586 A JP 28973586A JP S62208292 A JPS62208292 A JP S62208292A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、インビトロで培養され几植物細胞による植物
化学物質の半連続製造法に関する。
化学物質の半連続製造法に関する。
現在まで、一般的実施法は、静止生育相中において細胞
から抽出によりそのような植物化学ｖ！Ｊ５Ａを産生ず
るものであった。通常、産生け、細胞が生育培地から産
生培地に移され几後にのみ達成される。細胞中の代謝物
蓄積の後に、それらは所望生成物の抽出の究めに採取さ
れる。引続いて、細胞の新らしいバッチが最初の接種物
から生育させなければならず、従ってそのような方法は
不連続で′ｈり、普通４〜５週間の培！４！物発育およ
び代謔物蓄積を必要とする。従って、それら一般的実施
法は、（ａ）細＠を生育培地から産生培地に移す必要性
、（ｂ）植物化学物質の産生を誘導するのに必要とされ
る時間の長さく通常１４日まで）、および細胞を殺すこ
とにより細胞から植物化学＠＊’ｒ抽出し、そして生育
のために培養物を更新する必要性の問題を包含している
。
から抽出によりそのような植物化学ｖ！Ｊ５Ａを産生ず
るものであった。通常、産生け、細胞が生育培地から産
生培地に移され几後にのみ達成される。細胞中の代謝物
蓄積の後に、それらは所望生成物の抽出の究めに採取さ
れる。引続いて、細胞の新らしいバッチが最初の接種物
から生育させなければならず、従ってそのような方法は
不連続で′ｈり、普通４〜５週間の培！４！物発育およ
び代謔物蓄積を必要とする。従って、それら一般的実施
法は、（ａ）細＠を生育培地から産生培地に移す必要性
、（ｂ）植物化学物質の産生を誘導するのに必要とされ
る時間の長さく通常１４日まで）、および細胞を殺すこ
とにより細胞から植物化学＠＊’ｒ抽出し、そして生育
のために培養物を更新する必要性の問題を包含している
。
本発明は、生育培地から産生培地へ細ｍｔ−移す必要性
の除去、植物化学物質の促進された産生に関し、更に培
地からの植物化学物質の抽出および過剰の細胞の採取に
関する。
の除去、植物化学物質の促進された産生に関し、更に培
地からの植物化学物質の抽出および過剰の細胞の採取に
関する。
誘発に対する最初の応答としての培養物の褐色化は、一
般的にフェノール酸化と引続く細胞損傷の結果として説
明される。しかしながら、誘発剤（ｅｌｉｃｉｔｏｒ
） Ｋ ２４〜４８時間さらされた細胞は構造上の変化
を受けず；かくして褐色化は完全な細胞から放出される
フェノール性ｇＪ７Ｊの酸化によるものであることがア
イラード（ＩＩ！１ｎｅｒｔ ）およびコンスタベル（
Ｃｏｎ５ｔａｂｅｌ ）により見出され比。誘発剤に対
する細胞の７２時間の露出は、若干の細胞損傷を導き、
誘発剤に対する細胞の９６時間の露出は、一般に細胞の
死を生じる。褐色培養＠を導き、そして最終的に壊死を
生じる誘発された細胞の観察された傾向は、細胞のどの
ような貴使用も不可能とするように思われる。
般的にフェノール酸化と引続く細胞損傷の結果として説
明される。しかしながら、誘発剤（ｅｌｉｃｉｔｏｒ
） Ｋ ２４〜４８時間さらされた細胞は構造上の変化
を受けず；かくして褐色化は完全な細胞から放出される
フェノール性ｇＪ７Ｊの酸化によるものであることがア
イラード（ＩＩ！１ｎｅｒｔ ）およびコンスタベル（
Ｃｏｎ５ｔａｂｅｌ ）により見出され比。誘発剤に対
する細胞の７２時間の露出は、若干の細胞損傷を導き、
誘発剤に対する細胞の９６時間の露出は、一般に細胞の
死を生じる。褐色培養＠を導き、そして最終的に壊死を
生じる誘発された細胞の観察された傾向は、細胞のどの
ような貴使用も不可能とするように思われる。
発明の要約
時磯會えた培地補充および誘発された生凧物の再採取、
ならびに同じ完全な細胞を使用する繰返し誘発−採取一
補充一採取は有効であることが見出され九。最良の結果
のためには、何誘発は、細胞の再調整に充分な誘発剤な
しに、新たな生育培地中への誘発され九細胞の回収を必
秩とする（九とえは、第２のまたは引続く誘発剤飽加の
前約４８時間の間隔における培地の少くとも６回の交換
）。
ならびに同じ完全な細胞を使用する繰返し誘発−採取一
補充一採取は有効であることが見出され九。最良の結果
のためには、何誘発は、細胞の再調整に充分な誘発剤な
しに、新たな生育培地中への誘発され九細胞の回収を必
秩とする（九とえは、第２のまたは引続く誘発剤飽加の
前約４８時間の間隔における培地の少くとも６回の交換
）。
本発明は、細胞生育培地中で培養され九債物細胞金使用
する植物化学物質の製造法に関し、該植物細胞は選択さ
れた誘発剤により刺激し九とき植物化学物質を産生する
ように選択され、該方法は、（ａ） 植物細胞を含有
する培地中に選択された誘発剤を導入し、それによって
その中に含有された細胞が植物化学物質を産生ずるよう
に誘導し：（ｔ）ｌ 工程（ｄ）により産生された植
物化学物質および完全な細胞を回収し； （Ｃ） 該培地全補光し、そして過剰の細胞があれば
除去し； そして、 （（１１植物化学ｖｌＪ質の蓄積の後に、植物化学物ｉ
ｉｔを再び回収する工程からなるものである。
する植物化学物質の製造法に関し、該植物細胞は選択さ
れた誘発剤により刺激し九とき植物化学物質を産生する
ように選択され、該方法は、（ａ） 植物細胞を含有
する培地中に選択された誘発剤を導入し、それによって
その中に含有された細胞が植物化学物質を産生ずるよう
に誘導し：（ｔ）ｌ 工程（ｄ）により産生された植
物化学物質および完全な細胞を回収し； （Ｃ） 該培地全補光し、そして過剰の細胞があれば
除去し； そして、 （（１１植物化学ｖｌＪ質の蓄積の後に、植物化学物ｉ
ｉｔを再び回収する工程からなるものである。
工程（Ｃ）および（ａ）は、完全な細胞について、誘発
剤効果が消えてしまうまで繰返すことができる。
剤効果が消えてしまうまで繰返すことができる。
引続く誘発剤添加を、完全な細胞に対し行いうる。
好ましくは、工程（ｄ）からｔｄｌ １でに引続いて次
の工程を行う： （ｅｌ 該完全な細胞ｔ−再調整するのに充分に工程
（ｅ）を繰返し、ついで工程＋ａ）および（ｔ）ｌ ’
ｋ ｆｉ返し、最も好１しくは工程（ｄ）から＋４１
！でｔ繰返す。
の工程を行う： （ｅｌ 該完全な細胞ｔ−再調整するのに充分に工程
（ｅ）を繰返し、ついで工程＋ａ）および（ｔ）ｌ ’
ｋ ｆｉ返し、最も好１しくは工程（ｄ）から＋４１
！でｔ繰返す。
使用される植物細胞は、好１しくは医薬的および工業的
に！矢な植物の細胞である種子植物細胞である。適当な
植物は、パパベル・ソムニ７エルオレ：ｙ ス（Ｒｕｔ
ａ ｇｒａｖｓｏｌｅｎｓ ） 、ならびに、１マイク
ロバイアル・テクノロジー” （” Ｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ” ）、第２版、１９７９．
１巻、アカデミツク・プＶ ス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ ） 、４０９頁の表ｎ中、および１アプライ
ド・アンド・ファンダメンタル・アスベクツ・オプ・プ
ラント・セル・ティッシュ・アンド−オルガン・カルテ
ニア”（” Ａｐｐｌｉｅａ ＆ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔ
ａｌ Ａａｐｅｃｔｓ Ｏｆ ＰｌａｎｔＣｅｌｌ Ｔ
ｉ５ｓｕｅ ＆ Ｏｒｇａｎ Ｃｕ１ｔｕｒｅ ’ ）
、ライナート（Ｊ、 Ｒｅ１ｎｅｒｔ ）およびバヤｊ
、 （Ｙ、 Ｐ、 ８． Ｂａｊａｊ）編、スプリンガ
ー＊７ｚルラーク（８ｐｒｉｎｇｅｔ −Ｖｅｒｌａｇ
） 、第３章、６６８〜６９６員、１９７７、プツチ
ャ−（Ｄ、 Ｎ、 Ｂｕｔｃｈｅｒ ）の表１中に列記
されたものを包含する。リトスペルムム・エリスロリゾ
ｙ （Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ ｅｒ７ｔｈｒｏｒｈ
ｌｏｎ ） （シ：１ニンを生成）およびコゾチス・ジ
ャポニカ（Ｃｏｐｔｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ） （ベ
ルベリンを生成）がまた過当である。
に！矢な植物の細胞である種子植物細胞である。適当な
植物は、パパベル・ソムニ７エルオレ：ｙ ス（Ｒｕｔ
ａ ｇｒａｖｓｏｌｅｎｓ ） 、ならびに、１マイク
ロバイアル・テクノロジー” （” Ｍｉｃｒｏｂｉａ
ｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ” ）、第２版、１９７９．
１巻、アカデミツク・プＶ ス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ ） 、４０９頁の表ｎ中、および１アプライ
ド・アンド・ファンダメンタル・アスベクツ・オプ・プ
ラント・セル・ティッシュ・アンド−オルガン・カルテ
ニア”（” Ａｐｐｌｉｅａ ＆ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔ
ａｌ Ａａｐｅｃｔｓ Ｏｆ ＰｌａｎｔＣｅｌｌ Ｔ
ｉ５ｓｕｅ ＆ Ｏｒｇａｎ Ｃｕ１ｔｕｒｅ ’ ）
、ライナート（Ｊ、 Ｒｅ１ｎｅｒｔ ）およびバヤｊ
、 （Ｙ、 Ｐ、 ８． Ｂａｊａｊ）編、スプリンガ
ー＊７ｚルラーク（８ｐｒｉｎｇｅｔ −Ｖｅｒｌａｇ
） 、第３章、６６８〜６９６員、１９７７、プツチ
ャ−（Ｄ、 Ｎ、 Ｂｕｔｃｈｅｒ ）の表１中に列記
されたものを包含する。リトスペルムム・エリスロリゾ
ｙ （Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ ｅｒ７ｔｈｒｏｒｈ
ｌｏｎ ） （シ：１ニンを生成）およびコゾチス・ジ
ャポニカ（Ｃｏｐｔｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ） （ベ
ルベリンを生成）がまた過当である。
本方法は、細ｌａｓ濁物中に含有される植物細胞、カル
スｌ九は不動化細胞系について笑施しうる。
スｌ九は不動化細胞系について笑施しうる。
誘発剤は、植物中の防禦磯栴を誘導しｆ几は引き金を引
く生物学的誘導剤／触媒であり、植物化学物質の一生全
包含し、その多くは防禦化学物鵞である。ざルターズ（
Ｂ、 Ｗｏｌｔｅｒｓ ）およびアイラード（Ｕ、ｍ
１ｌｅｒｔ ）は、ドイチ、ユ番アボト・ツアイトウン
ク（Ｄｔｓｃｈ、 ＡｐＯｔｈ、 Ｚｅｉｔｇ、 ）
１２３．６５９〜６６７（１９８３）中において、誘
発剤として作用しうる化学物質および物理的条件の広範
な隊列のほんのいくつかを列記している。
く生物学的誘導剤／触媒であり、植物化学物質の一生全
包含し、その多くは防禦化学物鵞である。ざルターズ（
Ｂ、 Ｗｏｌｔｅｒｓ ）およびアイラード（Ｕ、ｍ
１ｌｅｒｔ ）は、ドイチ、ユ番アボト・ツアイトウン
ク（Ｄｔｓｃｈ、 ＡｐＯｔｈ、 Ｚｅｉｔｇ、 ）
１２３．６５９〜６６７（１９８３）中において、誘
発剤として作用しうる化学物質および物理的条件の広範
な隊列のほんのいくつかを列記している。
誘発剤は選択された濃度範囲内で最も有効であるので、
使用する誘発剤の濃度は選択し元植物化学物質の産生を
誘導する範囲内で選択しなければならない。
使用する誘発剤の濃度は選択し元植物化学物質の産生を
誘導する範囲内で選択しなければならない。
を示す。
発明の詳細な記述
ここに開示する方法は、生物誘発剤および（筐たは）卵
生ｖＪ＃発剤に対する植物細胞培養物の露出を使用し、
そしである時間内に生底物形成を生じる（たとえは、カ
タランツス・ロゼウス細胞中のインドールアルカロイド
蓄積については１２〜２４時間）。それは、植物化学物
質の合成が生育培地中圧おける誘発の結果として得られ
う、るので、特異産生培地への［１１！１細胞の移転を
必要としない。
生ｖＪ＃発剤に対する植物細胞培養物の露出を使用し、
そしである時間内に生底物形成を生じる（たとえは、カ
タランツス・ロゼウス細胞中のインドールアルカロイド
蓄積については１２〜２４時間）。それは、植物化学物
質の合成が生育培地中圧おける誘発の結果として得られ
う、るので、特異産生培地への［１１！１細胞の移転を
必要としない。
本方法の更に他の利点は、多量の植物化学物質がそれら
を常法により抽出しうる取囲Ｃ培地中に細胞により放出
されるという事実中に見出される。
を常法により抽出しうる取囲Ｃ培地中に細胞により放出
されるという事実中に見出される。
従って、現在普通の実技である抽出目的での細胞の全部
の採取はもはや必要ではなく、かくして細胞生育および
代謝物産生に必要な時間が有効に短縮される。細胞の生
存性は、もしも培地が細胞に依存し約２４〜７２時間内
に置換されるならば、誘発剤処理により影４１されず、
細抱再詞整−生成ｗＪ銹発−生成物合成一生底物回収の
循環過程は、他の因子が方法の休止七必弛としない限り
、半連続方法で繰返しうる。最初に、ｔａＩｌｌの誘発
剤処理は、培養物が充分な細胞密度に達した（通常７〜
１０日）後、首尾よく遂行しうる。生成物収量は常法を
使用して得られる量に等しいが、そうするのに必要な時
間は２７３１でに短縮しうる。
の採取はもはや必要ではなく、かくして細胞生育および
代謝物産生に必要な時間が有効に短縮される。細胞の生
存性は、もしも培地が細胞に依存し約２４〜７２時間内
に置換されるならば、誘発剤処理により影４１されず、
細抱再詞整−生成ｗＪ銹発−生成物合成一生底物回収の
循環過程は、他の因子が方法の休止七必弛としない限り
、半連続方法で繰返しうる。最初に、ｔａＩｌｌの誘発
剤処理は、培養物が充分な細胞密度に達した（通常７〜
１０日）後、首尾よく遂行しうる。生成物収量は常法を
使用して得られる量に等しいが、そうするのに必要な時
間は２７３１でに短縮しうる。
細胞全生育培地から産生培地へ格子必要のないことの発
見は、該植物細胞からの植物化学物質の産生方法を大き
く簡易化する。
見は、該植物細胞からの植物化学物質の産生方法を大き
く簡易化する。
誘発は、ストレス、特に種子植物細胞と外来物との接触
によって生じるストレスに対する種子植物の細胞の遷移
反応であるらしい。それ自体として、その現象が同じ細
胞に対し、植物化学物質の産生において同様の繰返し応
答で繰返しうろことは予測できないことである。繰返し
可能応答は、そのような植物化学物質の産生のための半
連続方法の開発のｔめに探索される。
によって生じるストレスに対する種子植物の細胞の遷移
反応であるらしい。それ自体として、その現象が同じ細
胞に対し、植物化学物質の産生において同様の繰返し応
答で繰返しうろことは予測できないことである。繰返し
可能応答は、そのような植物化学物質の産生のための半
連続方法の開発のｔめに探索される。
示した実施例は、本方法が檀々の型の細胞に広い適用を
有すること、および必要な誘発剤の量および型が様々で
あることを説明する。選択し九植物化学物質の産生を誘
導するのに必要とされる誘発剤の葉は、使用する誘発剤
（ホモジネートマたは限定された化学物質）の純度、お
よび選択し几誘発剤に対する植物細胞の感受性に依存す
る。しかしながら、一般的に、最適応答を与える誘発剤
の量を決定するための英語的方法においては、実験者は
誘発剤の最適量のために０．１％から５％Ｖ／Ｙ ’！
！での範囲内で作業しなければならない。
有すること、および必要な誘発剤の量および型が様々で
あることを説明する。選択し九植物化学物質の産生を誘
導するのに必要とされる誘発剤の葉は、使用する誘発剤
（ホモジネートマたは限定された化学物質）の純度、お
よび選択し几誘発剤に対する植物細胞の感受性に依存す
る。しかしながら、一般的に、最適応答を与える誘発剤
の量を決定するための英語的方法においては、実験者は
誘発剤の最適量のために０．１％から５％Ｖ／Ｙ ’！
！での範囲内で作業しなければならない。
また、各工程に必要とされる時間は様々であり、そして
任意の他の細胞−誘発剤−植物化学物質の組合せのため
に、それら時間は実験および最適化により決定しなけれ
はならない。いかにしはしは誘発が必要であるか、いか
にしはしは〃ｒらしい培地を加えなければならないか、
およびいかにしはしは培地および植物化学物質を除去で
きるかはまた、選択し几特定の細胞−誘発剤−植物化学
物質系で、実験の問題である。回収期間を心安とする前
に、いかにしばしば細胞金七のように処理しうるかはま
た、実験および最適化の問題である。
任意の他の細胞−誘発剤−植物化学物質の組合せのため
に、それら時間は実験および最適化により決定しなけれ
はならない。いかにしはしは誘発が必要であるか、いか
にしはしは〃ｒらしい培地を加えなければならないか、
およびいかにしはしは培地および植物化学物質を除去で
きるかはまた、選択し几特定の細胞−誘発剤−植物化学
物質系で、実験の問題である。回収期間を心安とする前
に、いかにしばしば細胞金七のように処理しうるかはま
た、実験および最適化の問題である。
示し几実施例のプロトコールにおいて、生成物回収のた
めの培地の繰返し短期間交換は、連続生成物抽出により
置換しうる。
めの培地の繰返し短期間交換は、連続生成物抽出により
置換しうる。
植物組織培養法の領域における一般的技術のために１使
用者は１プラント・ティッシュ・カルテ：Ｌ ７− メ
７’オズ（” Ｐｌａｎｔ Ｔｉ５ｓｕｅ Ｃｕｌｔｕ
ｒｅＭｅｔｈｏａｓ”）、つｘ ：ｙ ｐ −（ＴＪ、
Ｒ−Ｗｅｔｔｅｒ ）およびコｙスｐべ／ｌ／ （ｙ
、 ｃｏｎｓｔａｂｅｌ）編、第２改訂版、ナショナル
・リサーチ・カランシル・オプパカナダ（Ｈａｔｌｏｎ
ａＩＢｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｔｘ ｏｆＣａｎａ
ａａ）（１９Ｂ２）ｔ−参照することができる。
用者は１プラント・ティッシュ・カルテ：Ｌ ７− メ
７’オズ（” Ｐｌａｎｔ Ｔｉ５ｓｕｅ Ｃｕｌｔｕ
ｒｅＭｅｔｈｏａｓ”）、つｘ ：ｙ ｐ −（ＴＪ、
Ｒ−Ｗｅｔｔｅｒ ）およびコｙスｐべ／ｌ／ （ｙ
、 ｃｏｎｓｔａｂｅｌ）編、第２改訂版、ナショナル
・リサーチ・カランシル・オプパカナダ（Ｈａｔｌｏｎ
ａＩＢｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｔｘ ｏｆＣａｎａ
ａａ）（１９Ｂ２）ｔ−参照することができる。
以下に示す実施例において、誘発剤ホモジネートの製造
法は、アイラー） （Ｕ、 Ｋ１１ｅｒｔ ）等により
シェープラント・フィシオル（、Ｔ、 Ｐｌａｎｔ。
法は、アイラー） （Ｕ、 Ｋ１１ｅｒｔ ）等により
シェープラント・フィシオル（、Ｔ、 Ｐｌａｎｔ。
ＰｈｙｅｉＯｌ、 Ｌ １１９．６５〜７６（１９８
５）中に記載されている。この文献は’Ｅ ｆｃｓ植物
化学物質の抽出、および他の過当な誘発剤／植物細胞／
生成物系の詳細金示している。細肥ホモジネート工程は
、過剰の細胞を採取したときにのみ使用された＠ 若干の場合（たとえば、実施例の２つ）、培地の置換は
、各回誘発剤の添加を伴う必要がなく、即ち誘発された
細胞は記憶または履歴効果を有し、そして補充培地に植
物化学物質を産生じ続ける。
５）中に記載されている。この文献は’Ｅ ｆｃｓ植物
化学物質の抽出、および他の過当な誘発剤／植物細胞／
生成物系の詳細金示している。細肥ホモジネート工程は
、過剰の細胞を採取したときにのみ使用された＠ 若干の場合（たとえば、実施例の２つ）、培地の置換は
、各回誘発剤の添加を伴う必要がなく、即ち誘発された
細胞は記憶または履歴効果を有し、そして補充培地に植
物化学物質を産生じ続ける。
以下の実施例で説明する。
例 １
１ Ｂ５Ｃ培地にパパベル・ソムニフエルム細胞の懸濁
液を接種し、そして７日間生育させ、その時間の終りに
細胞をオートクレーブ処理ボツリチス培養物ホモジネー
ト１％’Ｉｒ／Ｖで誘発した。更に４８時Ｍ後に、ベン
ジルインキノリンアルカロイドを含有する培地を取り出
し、そして新らしい生育培地を加えた。この培地および
生成’ｍｔ＝取り出し、セして新らしい生育培地を加え
る方法は、次の誘発の前に、細胞が約１０日間の回収期
ＩｔｆＪを必要とするのに先立ち４８時間間隔で更に４
回１で繰返しうるので、新らしい培地循環過程での充填
を行った。
液を接種し、そして７日間生育させ、その時間の終りに
細胞をオートクレーブ処理ボツリチス培養物ホモジネー
ト１％’Ｉｒ／Ｖで誘発した。更に４８時Ｍ後に、ベン
ジルインキノリンアルカロイドを含有する培地を取り出
し、そして新らしい生育培地を加えた。この培地および
生成’ｍｔ＝取り出し、セして新らしい生育培地を加え
る方法は、次の誘発の前に、細胞が約１０日間の回収期
ＩｔｆＪを必要とするのに先立ち４８時間間隔で更に４
回１で繰返しうるので、新らしい培地循環過程での充填
を行った。
この系での更に他の試験を、次の如く行った。
カぎ誘発剤製剤
ボッリテス種（Ｐ′ＲＬ ＋ ２０４２ ）金、プラン
ト・バイオテクノロジー・インステテユート（Ｐｌａｎ
ｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ工ｎ５ｔｉｔｕｔｅ
） ／ Ｎ、ＲＣ。
ト・バイオテクノロジー・インステテユート（Ｐｌａｎ
ｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ工ｎ５ｔｉｔｕｔｅ
） ／ Ｎ、ＲＣ。
サスカンーン（５ａａｋａｔｏｏｎ ）のフンガル参カ
ルテニア・コレクション（ｆｕｎｇａｌ Ｃｕ１ｔｕｒ
ｅ ｃｏｕｅｃｔｌｏｎ）から受取り九〇 ２．４−
ＤなしにＢ５−寒天培地に生育させ九菌糸坏の１−２片
金、液体Ｂ５−培地１００−に接種するために使用した
。それら培養＠を、回転振盪＠ （１５０ｒｐｍ ）に
、連続低光線中、室温において６日間保った。この培地
（１００祷）中の菌糸体をホモジナイズし、そして２０
分間（１２１°０）オートクレーブ処理して、誘発剤製
剤が生成した＠ 誘発実験 アルカロイド形成の誘導のために、誘発剤１−を、５日
日のパパペル―ンムニフエルムＩ、、、 ｃｖ。
ルテニア・コレクション（ｆｕｎｇａｌ Ｃｕ１ｔｕｒ
ｅ ｃｏｕｅｃｔｌｏｎ）から受取り九〇 ２．４−
ＤなしにＢ５−寒天培地に生育させ九菌糸坏の１−２片
金、液体Ｂ５−培地１００−に接種するために使用した
。それら培養＠を、回転振盪＠ （１５０ｒｐｍ ）に
、連続低光線中、室温において６日間保った。この培地
（１００祷）中の菌糸体をホモジナイズし、そして２０
分間（１２１°０）オートクレーブ処理して、誘発剤製
剤が生成した＠ 誘発実験 アルカロイド形成の誘導のために、誘発剤１−を、５日
日のパパペル―ンムニフエルムＩ、、、 ｃｖ。
マリアンヌ（Ｍａｒｉａｎｎｅン培地１［］ＣＩｄに加
えた。
えた。
４８時間後に培地全滅菌条件下に取出し、そしてそのア
ルカロイドプロフィルおよび含ｉｔ−決定した。湿潤Ｍ
胞の新鮮３１ｆｉｉｃを測定し、ついで細胞全納らしい
Ｉ Ｂ５Ｃ培地に蕎懸濁し、そして培養物全史に継代培
養のために１００１に調節した。数回（６〜７回）の追
加培地交換を、同じ方法で、４８時間間隔で行った。２
０日間の１０回の培地交換の後に、培養物をもとの細胞
密度（１５〜２０ｇ ＦＷ／１［］ＱｍＪ）に希釈し、
２．５！ｆｃは１０日に継代培養し、そして誘発剤処理
と引続く培地交換の循環過程を繰返した。
ルカロイドプロフィルおよび含ｉｔ−決定した。湿潤Ｍ
胞の新鮮３１ｆｉｉｃを測定し、ついで細胞全納らしい
Ｉ Ｂ５Ｃ培地に蕎懸濁し、そして培養物全史に継代培
養のために１００１に調節した。数回（６〜７回）の追
加培地交換を、同じ方法で、４８時間間隔で行った。２
０日間の１０回の培地交換の後に、培養物をもとの細胞
密度（１５〜２０ｇ ＦＷ／１［］ＱｍＪ）に希釈し、
２．５！ｆｃは１０日に継代培養し、そして誘発剤処理
と引続く培地交換の循環過程を繰返した。
アルカロイド抽出および分析
培地からのアルカロイド抽出のために、５祷全Ｑ、ｌ
Ｎ ＮａＯＨでｐＨ９にした。酢酸エチル畝ｎを加え、
そして２分間ホモジナイズし比。層分離の後、酢酸エテ
ルＪＶｌ’！ｉ−除去し、そして抽出全繰返し友。
Ｎ ＮａＯＨでｐＨ９にした。酢酸エチル畝ｎを加え、
そして２分間ホモジナイズし比。層分離の後、酢酸エテ
ルＪＶｌ’！ｉ−除去し、そして抽出全繰返し友。
合＜た酢酸エチル画分を窒素下に濃縮し、セして定住的
および定量的アルカロイド分析に使用した。
および定量的アルカロイド分析に使用した。
アルカロイドパターンは、シリカケ９ル〔ベーカー（Ｂ
ａｋｅｒ ） ８１ ２５ ［Ｉ Ｆ ）上、溶媒系（
１）酢酸エテル／ＭｅＯＨ（９０： １０ ） ： （
ｕ）酢改エテル甲のＴＩ、Ｃにより決定し友。アルカロ
イドは５６６祷ｍおよび２５４ ｎｍのＵｖ−光線そし
てまた太陽光線、およびドラーデンドルフ噴霧試薬を使
用して検出した＠ リテスーホモジネートの存在において、７日間培養し友
。日々の顕微鏡試験は、大部分の細胞が最初の４８〜９
６時間に褐色化にもかかわらす生残するが、ついで細晧
劣化が認められるようになり、そして５〜７日後には生
きた細胞が殆んど認められなくなること金示した。最初
の誘発の後の４８時間間隔における６回の連続培地交換
は、細胞の生存を許容し友。今や、誘発剤処理細胞の継
代培養は成功しｆｃｏｊ４地のアルカロイドプロフィル
を分析し、七して追跡した。表Ｉは１つの代表的実験の
結果を示す。サンイナリンが誘発剤重加の４８および９
６時間後の培地中の王アルカロイドであった。９６時間
後に、第２の培地、即ち１回目の置換培地中に、化合物
ジヒドロサ／イナリンが認められ友。６日後、紀３の培
地、即ち２回目の置換培地中に、この化合物が主軟なア
ルカロイドになり友。ジヒドロサンギナリンが主要なア
ルカロイドになるプロフィルの変化は、培地ばかりでな
く細胞中にもヱ几住じ九。他のアルカロイドは、細胞ま
たは培地中に検出きれなかった。
ａｋｅｒ ） ８１ ２５ ［Ｉ Ｆ ）上、溶媒系（
１）酢酸エテル／ＭｅＯＨ（９０： １０ ） ： （
ｕ）酢改エテル甲のＴＩ、Ｃにより決定し友。アルカロ
イドは５６６祷ｍおよび２５４ ｎｍのＵｖ−光線そし
てまた太陽光線、およびドラーデンドルフ噴霧試薬を使
用して検出した＠ リテスーホモジネートの存在において、７日間培養し友
。日々の顕微鏡試験は、大部分の細胞が最初の４８〜９
６時間に褐色化にもかかわらす生残するが、ついで細晧
劣化が認められるようになり、そして５〜７日後には生
きた細胞が殆んど認められなくなること金示した。最初
の誘発の後の４８時間間隔における６回の連続培地交換
は、細胞の生存を許容し友。今や、誘発剤処理細胞の継
代培養は成功しｆｃｏｊ４地のアルカロイドプロフィル
を分析し、七して追跡した。表Ｉは１つの代表的実験の
結果を示す。サンイナリンが誘発剤重加の４８および９
６時間後の培地中の王アルカロイドであった。９６時間
後に、第２の培地、即ち１回目の置換培地中に、化合物
ジヒドロサ／イナリンが認められ友。６日後、紀３の培
地、即ち２回目の置換培地中に、この化合物が主軟なア
ルカロイドになり友。ジヒドロサンギナリンが主要なア
ルカロイドになるプロフィルの変化は、培地ばかりでな
く細胞中にもヱ几住じ九。他のアルカロイドは、細胞ま
たは培地中に検出きれなかった。
繰返し誘発剤処理に対する培養物の応答細胞の希釈およ
び倉らしい１−Ｂ３Ｃ培地中における２回の１０日間隔
の標準継代培養の後に、１回目の誘発剤処理細胞のアル
カロイド含量は比較的低くなった。七れら細胞に対する
誘発剤の冷加は、先に誘発させなかった培養物で観察さ
れるのに比しより弱くそしてよりゆつくりした細胞およ
び培地の褐色化応答を生じた。丹び、培地全誘発の各４
８時間後に交換し、そしてアルカロイド含量を追跡した
（表ｎ）。再誘発の前にはジヒドロサンギナリ／が主要
化合物であったけれども、再誘発の４８時間後にサンギ
ナリン水準が増加し、そしてジヒドロサンギナリンの水
準をおさえた。
び倉らしい１−Ｂ３Ｃ培地中における２回の１０日間隔
の標準継代培養の後に、１回目の誘発剤処理細胞のアル
カロイド含量は比較的低くなった。七れら細胞に対する
誘発剤の冷加は、先に誘発させなかった培養物で観察さ
れるのに比しより弱くそしてよりゆつくりした細胞およ
び培地の褐色化応答を生じた。丹び、培地全誘発の各４
８時間後に交換し、そしてアルカロイド含量を追跡した
（表ｎ）。再誘発の前にはジヒドロサンギナリ／が主要
化合物であったけれども、再誘発の４８時間後にサンギ
ナリン水準が増加し、そしてジヒドロサンギナリンの水
準をおさえた。
更に４８〜９６時間後に、アルカロイドプロフィルはジ
ヒドロサンギナリン形成に徐々に復帰した（衣ｎ）。
ヒドロサンギナリン形成に徐々に復帰した（衣ｎ）。
表 Ｉ
第１の誘発の２日後、ならびに１回目および２回目の培
地交換の２日後のパパベル・ンムニフエル０ム細抱の培
養培地のアルカロイド含量誘発後の サン
イナリン ジヒドロサンイ時間間隔 培 地 μＶ
１００− ナリン（日） 培養物
μｇ／１００１１ｊＯ−２誘発剤 添加培地 ３６３ ５８２−４１回目
の 又換培地 １７５１９ １１０８４−６２回目
の 交換培地 ４２０６ ７４４２対照 （非誘発培養＠） セルライン：＃２００９．２０ｇ ＦＷ／１０［１ｍ培
養物、０．７５％ボッリテス ーーアルカロイドは検出されない Ｂ５および８５Ｃ培地は、ギャンボルグ（Ｇａｍｂｏｒ
ｇ）等ニヨク、エクセプ・セル・レス（］ｌ！２ｘｐ、
Ｃｅ１ｌＲｅａ、 ）、５０ ：１５１〜１５８頁、
１９６８に記載されている。
地交換の２日後のパパベル・ンムニフエル０ム細抱の培
養培地のアルカロイド含量誘発後の サン
イナリン ジヒドロサンイ時間間隔 培 地 μＶ
１００− ナリン（日） 培養物
μｇ／１００１１ｊＯ−２誘発剤 添加培地 ３６３ ５８２−４１回目
の 又換培地 １７５１９ １１０８４−６２回目
の 交換培地 ４２０６ ７４４２対照 （非誘発培養＠） セルライン：＃２００９．２０ｇ ＦＷ／１０［１ｍ培
養物、０．７５％ボッリテス ーーアルカロイドは検出されない Ｂ５および８５Ｃ培地は、ギャンボルグ（Ｇａｍｂｏｒ
ｇ）等ニヨク、エクセプ・セル・レス（］ｌ！２ｘｐ、
Ｃｅ１ｌＲｅａ、 ）、５０ ：１５１〜１５８頁、
１９６８に記載されている。
略語：
ＦＷ−細胞新鮮重量
ａｇｅ ｍ サンギナリン
Ｄａｇｅ ｍ ジヒドロサンイナリン
表 ｎ
新らしい誘発剤処理後４８時間間隔で置換し几再誘発培
養物からの培養培地のアルカロイド含量時間間隔 サン
イナリンジヒドロサンギナリン 比 率（日）
μｇ／１００ ｒｄ ｐｌｉ／１００１１Ｌｔ
Ｂｇｅ７フｓｇｅ対照培地
２９３ −−０−２ り００
２０６ １：０．７２−４ １
３１ １２０６ １：９４−６・ 微
量 １７２ − ６−８ １０ ４１１ １：
４１８−１０ ３１ ３５０２
１ ：１１２セルライン： ＝＃２００９、再誘発；
１５ｇＦＷ／１００−培養’！！２Ｉ： ０．７５％ボ
ツリテス誘発剤；対照細胞のアルカ Ｄａｇｅ ： ２１ ｆｉｌｌ ／ 、ｉｉｌ
ＦＷベンゾフェナンスリジン類の 。 生表ｍは、
繰返し誘発により連続的にベンゾフェナンスリジン類を
産生するための１つの代表的長時間実験の結果を示す。
養物からの培養培地のアルカロイド含量時間間隔 サン
イナリンジヒドロサンギナリン 比 率（日）
μｇ／１００ ｒｄ ｐｌｉ／１００１１Ｌｔ
Ｂｇｅ７フｓｇｅ対照培地
２９３ −−０−２ り００
２０６ １：０．７２−４ １
３１ １２０６ １：９４−６・ 微
量 １７２ − ６−８ １０ ４１１ １：
４１８−１０ ３１ ３５０２
１ ：１１２セルライン： ＝＃２００９、再誘発；
１５ｇＦＷ／１００−培養’！！２Ｉ： ０．７５％ボ
ツリテス誘発剤；対照細胞のアルカ Ｄａｇｅ ： ２１ ｆｉｌｌ ／ 、ｉｉｌ
ＦＷベンゾフェナンスリジン類の 。 生表ｍは、
繰返し誘発により連続的にベンゾフェナンスリジン類を
産生するための１つの代表的長時間実験の結果を示す。
誘発および１回の再誘発循環過程を受けさせた細胞の１
週間培養物を、再び誘発剤で処理し、そして培地を４８
時間ごとに交換した。１２日間、細胞は、１日基準で培
地７５−中に、細胞新鮮ｌ量１１当り１５から５０μｍ
１までの間のアルカロイドを排泄し九。アルカロイド水
準は、２回目および５回目の培地中で最高であった。６
回目の培地交換、再誘発の１２日後に、細胞を５日間継
代培養し、ついで新らしい誘発剤で処理した。培養物は
、増加したベンゾフェナンスリジン排泄で応答した；ジ
ヒドロサンギナリンが王女アルカロイドであった。再誘
発の後に、より高いサンヤナリン形成への遷移接続が再
び観察された。産生は時と共に低下し比ので、細胞は最
初の細胞密度に希釈し、そして再誘発し友。
週間培養物を、再び誘発剤で処理し、そして培地を４８
時間ごとに交換した。１２日間、細胞は、１日基準で培
地７５−中に、細胞新鮮ｌ量１１当り１５から５０μｍ
１までの間のアルカロイドを排泄し九。アルカロイド水
準は、２回目および５回目の培地中で最高であった。６
回目の培地交換、再誘発の１２日後に、細胞を５日間継
代培養し、ついで新らしい誘発剤で処理した。培養物は
、増加したベンゾフェナンスリジン排泄で応答した；ジ
ヒドロサンギナリンが王女アルカロイドであった。再誘
発の後に、より高いサンヤナリン形成への遷移接続が再
び観察された。産生は時と共に低下し比ので、細胞は最
初の細胞密度に希釈し、そして再誘発し友。
蓄積は１０倍増加したが、次の時間間隔の間に、先に観
察されたよりも若干急速に低下した。
察されたよりも若干急速に低下した。
例 ２
１８５培地にカタランツス・ロゼウス細胞の懸濁＠全接
種し、そして１０日間生育させ、その時間の終りに細胞
を５％ｖ７ｖオートクレーブ処理２ｊウム培養物ホモジ
ネートで誘発した。更に１８時間後に、インドールアル
カロイド全含有する培地を取出し、そして新らしい生育
培地を加え友。この培地および生成物を取出し、そして
新らしい生育培地を加える方法は、誘発、培地および生
成物の取出しの他の循環過程の前に、細胞が約１０日の
回収期間に先立ち更に２回繰返すことができ（過剰の細
胞は１友、最後の機会に取出した）、新らしい培地の充
填を行うごとができる。
種し、そして１０日間生育させ、その時間の終りに細胞
を５％ｖ７ｖオートクレーブ処理２ｊウム培養物ホモジ
ネートで誘発した。更に１８時間後に、インドールアル
カロイド全含有する培地を取出し、そして新らしい生育
培地を加え友。この培地および生成物を取出し、そして
新らしい生育培地を加える方法は、誘発、培地および生
成物の取出しの他の循環過程の前に、細胞が約１０日の
回収期間に先立ち更に２回繰返すことができ（過剰の細
胞は１友、最後の機会に取出した）、新らしい培地の充
填を行うごとができる。
カタランツス・ロゼウスの５つのセルラインを各種力？
のホモジネート七してまた化学的に限定されたフィトア
レキシン誘発剤で処理する更に他の試験において、１つ
（アルカロイド非産生＃９１６）？除きすべては、６〜
２４時間内に褐色化およびトリプタミンの蓄積に応答し
た。セルライン＃６１５は、トリプタミンはかりでな（
Ｎ−アセチルトリプタミン、ストリクトシジンラクタム
、アジュマリシン、タベルンニン、ロヒネリシンおよび
カタランチンの蒸積にも１ｆｃ応答した。
のホモジネート七してまた化学的に限定されたフィトア
レキシン誘発剤で処理する更に他の試験において、１つ
（アルカロイド非産生＃９１６）？除きすべては、６〜
２４時間内に褐色化およびトリプタミンの蓄積に応答し
た。セルライン＃６１５は、トリプタミンはかりでな（
Ｎ−アセチルトリプタミン、ストリクトシジンラクタム
、アジュマリシン、タベルンニン、ロヒネリシンおよび
カタランチンの蒸積にも１ｆｃ応答した。
蓄積し友アルカロイドの量に基き、セルライン＃ホモジ
ネートで処理するとき、最良に実行された。
ネートで処理するとき、最良に実行された。
５％のピチウムホモジネート濃度および０．５％のロド
トルラホモジネート濃度は最高のアルカロイド収量を与
え、かくして次の試験に使用した。それらは１２〜２４
時間の処理の後に、細胞およびそれらの培地中のアルカ
ロイドの水準の１時的増加を明らかにした。１０日日間
式培養物は、それより若いものおよび古いものに比しよ
りよく応答し九０アルカロイドの誘発剤刺激蓄積および
アルカロイド組°成は、１−Ｂｓ’ｚ友はアルカロイド
産生培地の使用に依存しなかつ元。バイオリアクター
７．５４！中で生育させそして５％ピチウムホモジネー
トで１８時間処理しｘ＋６１５の細胞懸濁物５）は、ス
トリクトシジンラクタム、アジュマリクンおよびカメラ
／テンをそれぞれ２７．１０および１６μｇ／１１
ＤＷの濃度において含有することか見出され、培地は総
アジュマリシン４２％金含有し几。
トルラホモジネート濃度は最高のアルカロイド収量を与
え、かくして次の試験に使用した。それらは１２〜２４
時間の処理の後に、細胞およびそれらの培地中のアルカ
ロイドの水準の１時的増加を明らかにした。１０日日間
式培養物は、それより若いものおよび古いものに比しよ
りよく応答し九０アルカロイドの誘発剤刺激蓄積および
アルカロイド組°成は、１−Ｂｓ’ｚ友はアルカロイド
産生培地の使用に依存しなかつ元。バイオリアクター
７．５４！中で生育させそして５％ピチウムホモジネー
トで１８時間処理しｘ＋６１５の細胞懸濁物５）は、ス
トリクトシジンラクタム、アジュマリクンおよびカメラ
／テンをそれぞれ２７．１０および１６μｇ／１１
ＤＷの濃度において含有することか見出され、培地は総
アジュマリシン４２％金含有し几。
例 ６
接種し、そして１４日間生育させ、その時間の終ジに細
胞をオートクレーブ処理ロドトルラ培養物ホモジエネー
ト０．６％Ｖ／Ｖで誘発し友。更に６日後に、過剰の細
胞およびアクリドンアルカロイドを含有する培地全取出
し、そして新らしい生育培地を加えた。細＠ｔ１更に他
の誘発、ならびに培地、細胞および生Ｗ、＠の取出し前
に、約１４日に回収し、新らしい培地循環過程の充填を
行った。
胞をオートクレーブ処理ロドトルラ培養物ホモジエネー
ト０．６％Ｖ／Ｖで誘発し友。更に６日後に、過剰の細
胞およびアクリドンアルカロイドを含有する培地全取出
し、そして新らしい生育培地を加えた。細＠ｔ１更に他
の誘発、ならびに培地、細胞および生Ｗ、＠の取出し前
に、約１４日に回収し、新らしい培地循環過程の充填を
行った。
’＄”；ｉ Ａ実施例６のそれぞれ図式プロトコールで
ある。
ある。
Claims (14)
- （１）細胞生育培地中で培養される植物細胞を使用する
植物化学物質の製造法において、植物細胞は選択された
誘発剤により刺激されるとき植物化学物質を産生するよ
うに選択されるものであり、（ａ）植物細胞を含有する
培地中に選択された誘発剤を導入し、それによつてその
中に含有された細胞が植物化学物質を産生するように誘
導し；（ｂ）工程（ａ）において産生された植物化学物
質および完全な細胞を回収し； （ｃ）該培地を補充し、そして過剰の細胞があれば除去
し； そして、 （ｄ）植物化学物質を再び回収することからなる方法。 - （２）（ｅ）工程（ｃ）および（ｄ）を少くとも１回繰
返す、特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （３）該培地を補充し、そして該細胞を再調整するのに
充分なように過剰の細胞を除去する、特許請求の範囲第
２項記載の方法。 - （４）再誘発および更に植物化学物質の回収からなる、
特許請求の範囲第３項記載の方法。 - （５）該植物細胞が医薬的および工業的に重要な植物に
由来する種子植物細胞である、特許請求の範囲第１項記
載の方法。 - （６）該医薬的および工業的に重要な植物の細胞が￥パ
パベル￥、￥ソムニフエルム￥（￥Ｐａｐａｖｅｒ￥
￥ｓｏｍｎｉｆｅｒｕｍ￥）、￥カタランツス￥・￥ロ
ゼウス￥（￥Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ￥ ￥ｒｏｓｅ
ｕｓ￥）および￥ルタ￥・￥グラベオレンス￥（￥Ｒｕ
ｔａ￥ ￥ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ￥）からなる群から選
択される、特許請求の範囲第５項記載の方法。 - （７）細胞懸濁物、カルスまたは不動化細胞系の１つを
含有する植物細胞を使用する、特許請求の範囲第１項記
載の方法。 - （８）工程（ａ）において使用される誘発剤の濃度が選
択された植物化学物質の最適産生を誘導するのに必要で
あると認められる範囲内である、特許請求の範囲第１項
記載の方法。 - （９）誘発剤の濃度が０．１％から５％ｖ／ｖまでの間
で選択される、特許請求の範囲第８項記載の方法。 - （１０）植物細胞が￥パパベル￥・￥ゾムニフエルム￥
細胞であり、誘発剤がオートクレーブ処理ボツリチス（
￥Ｂｏｔｒｙｔｉｓ￥）培養物ホモジネートであり、そ
して誘発剤の濃度が約１％ｖ／ｖである、特許請求の範
囲第８項記載の方法。 - （１１）植物細胞が￥カタランツス￥・￥ロゼウス￥細
胞であり、誘発剤がオートクレーブ処理￥ピチウム￥（
￥Ｐｙｔｈｉｕｍ￥）培養物ホモジネートであり、そし
て誘発剤の濃度が約５％ｖ／ｖである、特許請求の範囲
第８項記載の方法。 - （１２）植物細胞が￥ルタ￥、￥グラベオレンス￥細胞
であり、誘発剤がオートクレーブ処理￥ロドトルラ￥（
￥Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ￥）培養物ホモジネートであ
り、そレ誘発剤の濃度が約０．３％ｖ／ｖである、特許
請求の範囲第８項記載の方法。 - （１３）該植物化学物質を工程（ｂ）および（ｄ）の培
地の取出した部分から抽出する、特許請求の範囲第１項
記載の方法。 - （１４）再誘発および植物化学物質の回収を、植物化学
物質の収率が不充分となるまで同じ細胞で繰返す、特許
請求の範囲第４項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CA496984 | 1985-12-05 | ||
| CA000496984A CA1259938A (en) | 1985-12-05 | 1985-12-05 | Repeated elicitor treatment, a method for semicontinuous metabolite production by plant cells cultured in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62208292A true JPS62208292A (ja) | 1987-09-12 |
Family
ID=4132023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61289735A Pending JPS62208292A (ja) | 1985-12-05 | 1986-12-04 | 細胞培養による植物化学物質の半連続製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0226354A3 (ja) |
| JP (1) | JPS62208292A (ja) |
| CA (1) | CA1259938A (ja) |
| DK (1) | DK576286A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3801023A1 (de) * | 1988-01-13 | 1989-07-27 | Schering Ag | Verfahren zur steigerung von enzym-aktivitaeten und der syntheseleistung von organismen |
| FR2816318B1 (fr) * | 2000-11-03 | 2005-01-07 | Oreal | Production de metabolites d'interet par co-culture de cellules vegetales et de cellules non vegetales |
| CN101805383B (zh) * | 2010-04-09 | 2012-07-25 | 浙江大学 | 异胡豆苷内酰胺类衍生物及制备和用途 |
-
1985
- 1985-12-05 CA CA000496984A patent/CA1259938A/en not_active Expired
-
1986
- 1986-11-25 EP EP86309182A patent/EP0226354A3/en not_active Withdrawn
- 1986-12-01 DK DK576286A patent/DK576286A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-12-04 JP JP61289735A patent/JPS62208292A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1259938A (en) | 1989-09-26 |
| DK576286D0 (da) | 1986-12-01 |
| DK576286A (da) | 1987-06-06 |
| EP0226354A2 (en) | 1987-06-24 |
| EP0226354A3 (en) | 1989-05-24 |
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