JPS6224077B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、４−アンドロステン−３，17−ジオ
ンをコリネスポラ・カシコラ（Corynespora
cassicola）ATCC16718の培養液と共に醗酵させ
ることよりなる、９α−ヒドロキシ−４−アンド
ロステン−３，17−ジオンの製法に関する。

９α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，
17−ジオンは、抗アントロゲン及び抗エストロゲ
ン作用が優れており、更に、４，９（11）−アン
ドロスタジエン−３，17−ジオン製造用の重要な
中間体であり、それ自体公知方法で多くの薬物学
的に重要なステロイドに変じることができる公知
の物質である（J.Amer.Chem.Soc.80巻、1958
年、6148頁参照）。

従来公知方法による４−アンドロステン−３，
17−ジオンからこの化合物を微生物学的に製造す
る際には、比較的低い収率でのみ反応生成物が得
られる（Biotechnology and Bioengeneering XI
1969年1183頁、米国特許第3080298号及び同第
3116200号明細書参照）。

これに反して、本発明方法によれば、高い基質
濃度の４−アンドロステン−３，17−ジオンを高
い収率で９α−ヒドロキシ−４−アンドロステン
−３，17−ジオンに変じることができる。

本発明方法は、通例ステロイドの微生物学的ヒ
ドロキシル化の際に使用する条件下に実施され
る。

通例使用される培養条件下で適当な栄養培地中
で通気下に液中培養する。次いでこの培養液に４
−アンドロステン−３，17−ジオン（溶剤中に溶
かすか又は有利に乳化した形で）を加え、最大基
質変換率に達するまで醗酵させる。

好適な基質溶剤は、例えばメタノール、エタノ
ール、グリコールモノメチルエーテル、ジメチル
ホルムアミド又はジメチルスルホキシドである。
基質の乳化は、例えば、これを微細形で又は水と
混ざりうる溶剤（例えばメタノール、エタノー
ル、アセトン、グリコールモノメチルエーテル、
ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシ
ド）中に溶かし、激しい渦動下に水（有利に脱石
灰され、通例乳化助剤を含有する）中に吹き込む
ことにより実施することができる。好適な乳化助
剤は非イオン性乳化剤例えばポリグリコール類の
エチレンオキシ添加物又は脂肪酸エステルであ
る。好適な乳化剤の例としては、市販の湿油剤テ
ギン（Tegin^(R)）、ツイーン（Tween^(R)）及び
スパン（Span^(R)）が挙げられる。

最適の基質濃度、基質添加時間及び醗酵時間
は、使用醗酵条件に依り決まる。それらの値は、
微生物学的ステロイド変換時に一般に必要である
ような値であるべきであり、個々の場合に、当業
者にとつて公知の予備実験により確かめるべきで
ある。

次に実施例につき本発明の方法を説明する。

例 １ 液体デンプン糖
６％（固体グルコース３％に相当） コーンステイープリカー １％ 硝酸ナトリウム 0.2％ 燐酸二水素カリウム 0.1％ 燐酸水素二カリウム 0.2％ 硫酸マグネシウム 0.05％ 硫酸鉄（） 0.002％ 塩化カリウム 0.05％ よりなる２−エーレンマイヤーフラスコ中の滅
菌培地500mlにコリネスポラ・カシコラ
（Corynespora Cassicola）ATCC16718の１〜２
週間斜面寒天培養物の洗液を接種する。

回転振動器上、30℃で３日生長の後に、このミ
セル懸濁液を30実験醗酵器（これは同じ組成の
滅菌培地25を有する）の接種のための接種体と
して使用する。29℃、１分当り25の通気、220
回／minの撹拌速度で醗酵させ、場合により消泡
剤としてのポリオール2000を添加する。48時間後
に培養液1.5を無菌条件下に、同じ大きさの醗
酵器（これは同じ組成の滅菌栄養液23.5を有す
る）に移し、同じ工業的条件下に作動させる。６
時間後に、ジメチルホルムアミド100ml中の４−
アンドロステン−３，17−ジオン12.5gの滅菌濾
過溶液を加える。この基質添加を15時間及び20時
間で繰り返すと、1.5g／の基質濃度に達する。
この変換は、数回試料を取つて管理し、この試料
をメチルイソブチルケトンで抽出し、シリカゲル
プレートメルク（Merck）60F−254での薄層ク
ロマトグラフイにより分析する（クロロホルム／
メタノール９＋１で展開）。約38時間の醗酵時間
の後に、出発物質は完全に変換されている。醗酵
器内容物を取り出し、ここでミセルを遠心分離
し、メチルイソブチルケトンで３回抽出する。ミ
セルを同様にメチルイソブチルケトンで洗浄す
る。集めた抽出物及び洗浄液を真空中で濃縮し、
その際純粋な生成物を晶出させ、濾過する。
13.1g（融点217／219〜221℃）。

抽出濃縮物を濃縮乾涸させ、残分からヘキサン
で消泡剤がなくなるまで洗浄し、酢酸エステルか
ら再結晶させる。第一結晶及び第二結晶としてな
お14.4g（融点217／218〜220℃）が得られる。ス
ペクトルデータによれば、生成物は、９α−ヒド
ロキシ−４−アンドロステン−３，17−ジオンよ
り成る。全収率は理論量の69.5％である。

例 ２ 例１に記載と同じ条件で、コリネスポラ・カシ
コラATCC16718の良好に生長させた培養液13
を作り、これに、15時間、20時間、25時間及び30
時間に基質懸濁液各500mlを装入する。ボールミ
ル中で２％ツイーン80−溶液各500ml中で各37.5g
を２時間粉砕することにより基質懸濁液を作る。
この基質懸濁液を100℃で低温滅菌する。

92時間の合計醗酵時間の後に、基質は変換され
ている。これを例１の記載と同様に取り出し、後
処理する。メチルイソブチルケトン−抽出物の濃
縮時に、粗生成物30gが得られるから、これを酢
酸エステルから再結晶させると純粋生成物25gが
得られる。ミセルの洗浄により得られた50gの粗
生成物は酢酸エステルから再結晶させると、更に
純粋生成物41gを生じる。融点218／219〜221
℃。全収率は理論量の70％である。母液のクロマ
トグラフイ浄化により、更に生成物量が得られ
る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ４−アンドロステン−３，17−ジオンをコリ
   ネスポラ・カシコラATCC16718の培養液と共に
   醗酵させることを特徴とする、９α−ヒドロキシ
   −４−アンドロステン−３，17ジオンの製法。