JPS62282588A - ヒトのチロトロピン−β−サブユニツトをコ−ドしている遺伝子の単離法 - Google Patents
ヒトのチロトロピン−β−サブユニツトをコ−ドしている遺伝子の単離法Info
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- JPS62282588A JPS62282588A JP61296501A JP29650186A JPS62282588A JP S62282588 A JPS62282588 A JP S62282588A JP 61296501 A JP61296501 A JP 61296501A JP 29650186 A JP29650186 A JP 29650186A JP S62282588 A JPS62282588 A JP S62282588A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
又匪吸水裏
この発明はヒトの甲状腺刺激ホルモンのβ鎖またはβ−
サブユニット（ｈＴＳＨ−β）及びそれを産生ずる遺伝
子に関する。さらにこの発明はこの遺伝子の応用に関す
る。
サブユニット（ｈＴＳＨ−β）及びそれを産生ずる遺伝
子に関する。さらにこの発明はこの遺伝子の応用に関す
る。
背景と先行技術
甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）はゴナドトロピン、黄体
形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、絨毛ゴナドトロピン
を含む一群の糖タンパクホルモンの一員である。例えば
、クーライズ等の「レコード・オブ・プロ・プレス・イ
ン・ホルモン・リサーチ」第４０巻、７９−１２０頁（
１９８４年）参照。
形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、絨毛ゴナドトロピン
を含む一群の糖タンパクホルモンの一員である。例えば
、クーライズ等の「レコード・オブ・プロ・プレス・イ
ン・ホルモン・リサーチ」第４０巻、７９−１２０頁（
１９８４年）参照。
上に掲げたホルモンはそれぞれ非共有結合で結合したα
−とβ−の２つの異なったサブユニットで構成されてい
ることがわかっている。
−とβ−の２つの異なったサブユニットで構成されてい
ることがわかっている。
個々の種属において、上記のホルモンは全てα−サブユ
ニットは同じであるがβ−ユニットは異なることも知ら
れている。これらホルモンに生物学的あるいは免疫学的
特異性を与えるのはβ−サブユニットである。さらに同
一の種属においては、β−サブユニット間で相同性の強
い領域がある６ ピアース〔「エンドクリノロジー」第８９巻、１３３１
頁（１９７１年）〕やピアース等〔「アニュアル・レヴ
ユー・オブ・バイオケミストリー」第５０巻、４６５頁
（１９８１年）〕は、ある〕β−サブユニッに対しどの
α−サブユニットを結合しても完全なホルモンを与える
ことを示している。ショウム等〔「ジャーナル・オブ・
クリニカル・エンドクリノロジー・アンド・メタボリズ
ム」第３６巻。
ニットは同じであるがβ−ユニットは異なることも知ら
れている。これらホルモンに生物学的あるいは免疫学的
特異性を与えるのはβ−サブユニットである。さらに同
一の種属においては、β−サブユニット間で相同性の強
い領域がある６ ピアース〔「エンドクリノロジー」第８９巻、１３３１
頁（１９７１年）〕やピアース等〔「アニュアル・レヴ
ユー・オブ・バイオケミストリー」第５０巻、４６５頁
（１９８１年）〕は、ある〕β−サブユニッに対しどの
α−サブユニットを結合しても完全なホルモンを与える
ことを示している。ショウム等〔「ジャーナル・オブ・
クリニカル・エンドクリノロジー・アンド・メタボリズ
ム」第３６巻。
６１８頁（１９８３年）〕、モルガン等〔「ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」第２５０巻、
５２４７頁（１９７５年）〕、バーケン等〔［ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリーＪ第２５２巻
、５３８６頁（１９７７年）］、コイトマン等〔「ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」第２５
２巻、５３９３頁（１９７７年）及び「バイオケミカル
・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーション」
第９０巻、８４２頁（１９７９年）〕などは、絨毛ゴナ
ドトロピンと黄体形成ホルモンのβ−サブユニットとが
非常によく似ていて、８２％のアミノ酸配列相同性を有
していることを示している。その他のβ−サブユニット
はアミノ酸配列の相同性が低く、２５〜４０％の範囲に
ある〔ピアース等既出（１９８１年）。〕 ヒトの糖タンパクホルモンのα−サブユニットをコード
している単一の遺伝子はすでに分離されている。フィデ
ス等〔ｒジャーナル・オブ・モルキュクー・アンド・ア
プライド・ジェネティクス」第１巻、３頁（１９８１年
）〕、ブースビー等〔「ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー」第２５６巻、５１２１頁（１９８
１年）〕参照。
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」第２５０巻、
５２４７頁（１９７５年）〕、バーケン等〔［ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリーＪ第２５２巻
、５３８６頁（１９７７年）］、コイトマン等〔「ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」第２５
２巻、５３９３頁（１９７７年）及び「バイオケミカル
・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーション」
第９０巻、８４２頁（１９７９年）〕などは、絨毛ゴナ
ドトロピンと黄体形成ホルモンのβ−サブユニットとが
非常によく似ていて、８２％のアミノ酸配列相同性を有
していることを示している。その他のβ−サブユニット
はアミノ酸配列の相同性が低く、２５〜４０％の範囲に
ある〔ピアース等既出（１９８１年）。〕 ヒトの糖タンパクホルモンのα−サブユニットをコード
している単一の遺伝子はすでに分離されている。フィデ
ス等〔ｒジャーナル・オブ・モルキュクー・アンド・ア
プライド・ジェネティクス」第１巻、３頁（１９８１年
）〕、ブースビー等〔「ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー」第２５６巻、５１２１頁（１９８
１年）〕参照。
さらに、７つのヒト絨毛ゴナドトロピンβ−サブユニッ
トの遺伝子と、１つのヒト黄体形成ホルモンβ−サブユ
ニットの遺伝子が単離されている。タルマッシ等（ｒＤ
ＮＡＪ第２巻、２８１頁（１９８３年）〕、ポリカスド
ロ等〔「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー」第２５８巻、１１４９２頁（１９８３年）〕参照
。これらのβ−サブユニットの遺伝子は全て高い相同性
を示し、ヒトの第１９染色体のフラグメントに塩基数５
０キロ以下の長さで連接されている。
トの遺伝子と、１つのヒト黄体形成ホルモンβ−サブユ
ニットの遺伝子が単離されている。タルマッシ等（ｒＤ
ＮＡＪ第２巻、２８１頁（１９８３年）〕、ポリカスド
ロ等〔「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー」第２５８巻、１１４９２頁（１９８３年）〕参照
。これらのβ−サブユニットの遺伝子は全て高い相同性
を示し、ヒトの第１９染色体のフラグメントに塩基数５
０キロ以下の長さで連接されている。
ヒトの甲状腺刺激ホルモンのβ・・サブユニットに関し
ては、今日まではこのサブユニットを発現する遺伝子が
得られていない。これはマウスのＴＳＨ−β−サブユニ
ットのｃ Ｄ Ｎ Ａが合成されクローン化され、そし
てマウスの遺伝子が単離されているという事実があるに
も拘らずである。
ては、今日まではこのサブユニットを発現する遺伝子が
得られていない。これはマウスのＴＳＨ−β−サブユニ
ットのｃ Ｄ Ｎ Ａが合成されクローン化され、そし
てマウスの遺伝子が単離されているという事実があるに
も拘らずである。
得られた遺伝子は種属間交雑実験によって性質が調べら
れている〔クーラ等、「プロシーディンゲス・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス」第８０
巻、２１２２頁（１９８３年）；クーライズ等、既出（
１９８４年）〕。ラットとウシのＴＳＨのβ−サブユニ
ットのｃＤＮＡもクローン化されている〔クロイル等、
ｒＤＮＡＪ第３巻、２３１頁（１９１１１４年）；マウ
レル等、〔「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー」第２５９巻、５０２４頁（１９８４年）〕。
れている〔クーラ等、「プロシーディンゲス・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス」第８０
巻、２１２２頁（１９８３年）；クーライズ等、既出（
１９８４年）〕。ラットとウシのＴＳＨのβ−サブユニ
ットのｃＤＮＡもクローン化されている〔クロイル等、
ｒＤＮＡＪ第３巻、２３１頁（１９１１１４年）；マウ
レル等、〔「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー」第２５９巻、５０２４頁（１９８４年）〕。
今、すでにクローン化されたマウスとウシのｃＤＮＡを
使って、ヒトの甲状腺刺激ホルモンのβ鎖を発現してい
る遺伝子が得られた。
使って、ヒトの甲状腺刺激ホルモンのβ鎖を発現してい
る遺伝子が得られた。
希望する遺伝子を得るのには、その希望する遺伝子を転
写することによって産生されるｍＲＮＡを単離するのが
通例である。一度これが得られれば、ｃＤＮＡ合成する
ことができ、相補的な遺伝子を単離するためのハイブリ
ダイゼーション・プローブ（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏ
ｎ ｐｒｏｂｅ）として使用できる。これを行う方法は
、この分野ではよく知られている。ヒトのＴＳＨのβ−
サブユニットの場合には、この方法は実行不可能である
ことが証明されている。ヒトの脳下垂体から死後であっ
ても手術後であっても分解されていないｍＲＮＡを得る
ことができなかった。
写することによって産生されるｍＲＮＡを単離するのが
通例である。一度これが得られれば、ｃＤＮＡ合成する
ことができ、相補的な遺伝子を単離するためのハイブリ
ダイゼーション・プローブ（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏ
ｎ ｐｒｏｂｅ）として使用できる。これを行う方法は
、この分野ではよく知られている。ヒトのＴＳＨのβ−
サブユニットの場合には、この方法は実行不可能である
ことが証明されている。ヒトの脳下垂体から死後であっ
ても手術後であっても分解されていないｍＲＮＡを得る
ことができなかった。
しかし、ここにある困難はいまや克照された。
別種の、すなわちマウスやウシのｃＤＮＡを頼りに、ヒ
トの甲状腺刺激ホルモンのβ−サブユニットを発現する
遺伝子を得ることが可能となった。
トの甲状腺刺激ホルモンのβ−サブユニットを発現する
遺伝子を得ることが可能となった。
望ましい具体例の詳細な記載
白血球細胞のＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼＥｃｏＲ
Ｉで部分消化し、その部分的に消化された染色体をファ
ージのλシャロン４Ａに挿入することによって得たヒト
の染色体ライブラリーを用いた。このライブラリーをウ
シとネズミのＴＳＨ−βに対するｃＤＮＡを含むプラス
ミドをもつプローブで検索した〔用いた方法については
ベントン等、「サイエンス」第１９６巻、１８０頁（１
９７７年）参照〕。そのプラスミドプローブはリグビー
等の方法〔「ジャーナル・オブ・モルキュクー・バイオ
ロジー」第１１３巻、２３７頁（１９７７年）〕に従っ
て、ニックトランスレーションにより〔α３２Ｐ ］−
ｄＣＴＰで標識された。
Ｉで部分消化し、その部分的に消化された染色体をファ
ージのλシャロン４Ａに挿入することによって得たヒト
の染色体ライブラリーを用いた。このライブラリーをウ
シとネズミのＴＳＨ−βに対するｃＤＮＡを含むプラス
ミドをもつプローブで検索した〔用いた方法については
ベントン等、「サイエンス」第１９６巻、１８０頁（１
９７７年）参照〕。そのプラスミドプローブはリグビー
等の方法〔「ジャーナル・オブ・モルキュクー・バイオ
ロジー」第１１３巻、２３７頁（１９７７年）〕に従っ
て、ニックトランスレーションにより〔α３２Ｐ ］−
ｄＣＴＰで標識された。
ベントンとデーヴイスによって記述された検素性を３Ｘ
１０’個のファージを試験するために用い、マウスとウ
シのｃＤＮＡとハイブリダイズする３個のファージを得
た。その３種のファージはよく似ており、その制限酵素
地図を第１図に示す。
１０’個のファージを試験するために用い、マウスとウ
シのｃＤＮＡとハイブリダイズする３個のファージを得
た。その３種のファージはよく似ており、その制限酵素
地図を第１図に示す。
消化後、ハイブリダイズする断片２種をプラスミドｐＢ
Ｒ３２２にサブクローン化し、その新しいプラスミドを
用いてＥ、ｃｏｌｉ ８８１０１株を形質転換させた（
ハナハン、「ジャーナル・オブ・モルキュクー・バイオ
ロジー」第１６６巻、５５７頁（１９８３年）参照〕。
Ｒ３２２にサブクローン化し、その新しいプラスミドを
用いてＥ、ｃｏｌｉ ８８１０１株を形質転換させた（
ハナハン、「ジャーナル・オブ・モルキュクー・バイオ
ロジー」第１６６巻、５５７頁（１９８３年）参照〕。
その断片は０．９にｂ （Ｂａｍ）ＩＩ−ＥｃｏＲＩ）
と３．６Ｋｂ（ＥｃｏＲＩ）と測定された。この断片は
隣合っており、第１図に※印で示されている。
と３．６Ｋｂ（ＥｃｏＲＩ）と測定された。この断片は
隣合っており、第１図に※印で示されている。
これら断片はそれ自体地図上に示され、部分的に配列が
決められている〔マキサム等、「メソノズ・イン・エン
ザイモロジー」第６５巻、４９９頁（１９８０年）参照
〕。その決められたヌクレオチド配列はヒトＴＳＨ−β
を発現する遺伝子として明確に同定されるアミノ酸配列
を推定させた。
決められている〔マキサム等、「メソノズ・イン・エン
ザイモロジー」第６５巻、４９９頁（１９８０年）参照
〕。その決められたヌクレオチド配列はヒトＴＳＨ−β
を発現する遺伝子として明確に同定されるアミノ酸配列
を推定させた。
このプラスミドと形質転換されたＥ、ｃｏｌｉ細胞は、
スローンーケッタリングインスティテユートカンサーリ
サーチに寄託されていて、コミッショナーによって資格
ありと認められた者には利用できる。さらに、このプラ
スミドと細胞株はこれらの特許発行前に公的な寄託機関
に寄託されるであろう。
スローンーケッタリングインスティテユートカンサーリ
サーチに寄託されていて、コミッショナーによって資格
ありと認められた者には利用できる。さらに、このプラ
スミドと細胞株はこれらの特許発行前に公的な寄託機関
に寄託されるであろう。
第２図は０．９にｂと３．６Ｋｂの領域をもつヌクレオ
チド配列と、それらがコードしているアミノ酸配列を示
している。０．９Ｋｂ領域は分泌ＴＳＨ−βの３４個の
アミノ酸がその後に続＜２０個のアミノ酸の疎水性シグ
ナルの発現をコードするエクソンを含んでいる。３．６
Ｋｂの断片はＴＳＨ−βの残りの８４アミノ酸を発現す
るエクソンを含んでいた。
チド配列と、それらがコードしているアミノ酸配列を示
している。０．９Ｋｂ領域は分泌ＴＳＨ−βの３４個の
アミノ酸がその後に続＜２０個のアミノ酸の疎水性シグ
ナルの発現をコードするエクソンを含んでいる。３．６
Ｋｂの断片はＴＳＨ−βの残りの８４アミノ酸を発現す
るエクソンを含んでいた。
この２つのエクソンを分けるのは約４００〜４５０塩基
対のイントロンであった。
対のイントロンであった。
ＢａｍＨＩ−ＥｃｏＲＩで切り出される０、９Ｋｂ断片
は、ヒトの全染色体ＤＮＡ中のＴＳＨβ遺伝子の構造を
研究するためのプローブとして使われた。この実験の結
果は第３図に示されている。簡単に言えば、エンドヌク
レアーゼで消化された胎盤のＤＮＡ試料を１％アガロー
スゲルで解析し、それからサザンの方法〔「ジャーナル
・オブ・モルキュクー・バイオロジー」第９８巻、５０
３頁（１９７５年）参照〕でニトロセルロースフィルタ
ーに転写した。
は、ヒトの全染色体ＤＮＡ中のＴＳＨβ遺伝子の構造を
研究するためのプローブとして使われた。この実験の結
果は第３図に示されている。簡単に言えば、エンドヌク
レアーゼで消化された胎盤のＤＮＡ試料を１％アガロー
スゲルで解析し、それからサザンの方法〔「ジャーナル
・オブ・モルキュクー・バイオロジー」第９８巻、５０
３頁（１９７５年）参照〕でニトロセルロースフィルタ
ーに転写した。
転写の後、０，９Ｋｂ断片を含む３２ｐ標識されたプロ
ーブを濾紙に結合したＤＮＡに加えた。ヒトＤＮＡの各
消化物は１つだけプローブとハイブリダイズするバンド
を示し、その大きさはファージから得られたものと一致
した。このことから、ヒトのＴＳＨ−βは１つの遺伝子
で発現されていると結論できる（第３図参照）。
ーブを濾紙に結合したＤＮＡに加えた。ヒトＤＮＡの各
消化物は１つだけプローブとハイブリダイズするバンド
を示し、その大きさはファージから得られたものと一致
した。このことから、ヒトのＴＳＨ−βは１つの遺伝子
で発現されていると結論できる（第３図参照）。
ヌクレオチド配列から推察されるアミノ酸配列は、次の
示すような例外もあるが、すでに報告されているヒトの
ＴＳＨ−β遺伝子の配列と一致している。すなわち、残
基８と９がセイラム等の報告〔「カナディアン・ジャー
ナル・オブ・バイオケミストリー」第５５巻、７５５頁
（１９７７年）参照〕と比較して転位し、スレオニン−
メチオニンとなっていること、残基８９がセイラムでは
アスパラギン酸であるのに対してアスパラギンであるこ
と、また、ここに示された配列は既報の配列に比べてＣ
末端に６個のアミノ酸が付加的に含まれていることであ
る。
示すような例外もあるが、すでに報告されているヒトの
ＴＳＨ−β遺伝子の配列と一致している。すなわち、残
基８と９がセイラム等の報告〔「カナディアン・ジャー
ナル・オブ・バイオケミストリー」第５５巻、７５５頁
（１９７７年）参照〕と比較して転位し、スレオニン−
メチオニンとなっていること、残基８９がセイラムでは
アスパラギン酸であるのに対してアスパラギンであるこ
と、また、ここに示された配列は既報の配列に比べてＣ
末端に６個のアミノ酸が付加的に含まれていることであ
る。
ＴＳＨ−βサブユニットに対するヒトの遺伝子は、１１
８個のアミノ酸に加えて２０個のアミノ酸のＮ末端のリ
ーダー配列をもったペプチドをコードしている。 ２０
個のアミノ酸のリーダー配列は糖タンパクホルモンのβ
−サブユニットの特徴である〔例えばタルマッシ等、「
ネイチャー」第３０７巻、３７頁（１９８４年）；ジェ
イムソン等「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー」第２５９巻、１５４７４頁（１９３４年）な
ど参照〕。ペプチド中のアミノ酸の数（＝１１８）はマ
ウス、ラット、ウシなどのＴＳＨ−β−サブユニットに
みられる数と同一である。ブール等〔「プロシーデイン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイ
エンス」第８０巻、２１２２頁（１９８３年）〕、クロ
イル等〔「ＤＮＡ」第３巻、２３１頁（１９８４年）〕
、マウレル等〔「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・
ケミストリー」第２５９巻、５０２４頁（１９８４年）
〕などによって提出されたマウス、ウシ、ラットのＴＳ
ＨのｃＤＮＡの相当する領域と比較すると、ヒトの遺伝
子のこのタンパクをコードしている領域はそれぞれ８４
％、９０％、８３％の同一性を示した。
８個のアミノ酸に加えて２０個のアミノ酸のＮ末端のリ
ーダー配列をもったペプチドをコードしている。 ２０
個のアミノ酸のリーダー配列は糖タンパクホルモンのβ
−サブユニットの特徴である〔例えばタルマッシ等、「
ネイチャー」第３０７巻、３７頁（１９８４年）；ジェ
イムソン等「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー」第２５９巻、１５４７４頁（１９３４年）な
ど参照〕。ペプチド中のアミノ酸の数（＝１１８）はマ
ウス、ラット、ウシなどのＴＳＨ−β−サブユニットに
みられる数と同一である。ブール等〔「プロシーデイン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイ
エンス」第８０巻、２１２２頁（１９８３年）〕、クロ
イル等〔「ＤＮＡ」第３巻、２３１頁（１９８４年）〕
、マウレル等〔「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・
ケミストリー」第２５９巻、５０２４頁（１９８４年）
〕などによって提出されたマウス、ウシ、ラットのＴＳ
ＨのｃＤＮＡの相当する領域と比較すると、ヒトの遺伝
子のこのタンパクをコードしている領域はそれぞれ８４
％、９０％、８３％の同一性を示した。
この遺伝子を研究することで、分泌タンパクのアミノ酸
３４と３５の間にイントロンが存在することが明らかと
なる。この位置はヒト及びラットの黄体形成ホルモンの
β−サブユニットにも存在している３′一方向のイント
ロンに対して保持された場所である〔タルマッシ等；既
出（１９８４年〕、ジェイムソン等、既出（１９８４年
）参照〕。
３４と３５の間にイントロンが存在することが明らかと
なる。この位置はヒト及びラットの黄体形成ホルモンの
β−サブユニットにも存在している３′一方向のイント
ロンに対して保持された場所である〔タルマッシ等；既
出（１９８４年〕、ジェイムソン等、既出（１９８４年
）参照〕。
ヒトのＴＳＨ−βのｍＲＮＡを未分解のまま得ることが
困難なために、遺伝子の５′側と３′側の翻訳されてな
い領域を同定することは遺しい。停止コドンのすぐ下流
側の配列は、マウス、ウシ、及びラットのＴＳＨ−βの
ｃＤＮＡの３′側の翻訳されない領域と非常に相同性が
高いことが知られている。それ故３′側非翻訳領域はそ
のクローンの中に存在しているものと思われる。反対に
、はじめのメチオニンのコドンの上流側の配列は、種属
の間でみると５′側の非翻訳領域に対して類似性が見ら
れない。このことはこの領域がイントロンであるという
仮説を支持している。
困難なために、遺伝子の５′側と３′側の翻訳されてな
い領域を同定することは遺しい。停止コドンのすぐ下流
側の配列は、マウス、ウシ、及びラットのＴＳＨ−βの
ｃＤＮＡの３′側の翻訳されない領域と非常に相同性が
高いことが知られている。それ故３′側非翻訳領域はそ
のクローンの中に存在しているものと思われる。反対に
、はじめのメチオニンのコドンの上流側の配列は、種属
の間でみると５′側の非翻訳領域に対して類似性が見ら
れない。このことはこの領域がイントロンであるという
仮説を支持している。
上記した内容はｐＢＲ３２２を用いて調製されたプラス
ミドについて述べているが、この技術に精通した者にと
ってはサブクローニングに使うことのできる多くのプラ
スミドがあることは理解できよう。これらプラスミドは
天然に存在し。
ミドについて述べているが、この技術に精通した者にと
ってはサブクローニングに使うことのできる多くのプラ
スミドがあることは理解できよう。これらプラスミドは
天然に存在し。
または実験室で合成することもできる。
さらに、この技術分野に通じた者は、この発明を原核生
物でも真植生物でもその細胞の形質転換に応用できるこ
とを理解できよう。すでに記述したように、Ｅ、ｃｏｌ
ｉ Ｈ８１０１株はヒトのＴＳＨ−β遺伝子の断片でサ
ブクローン化したプラスミドｐＢＲ３２２により形質転
換された。同じやり方でＥ、ｃｏｌｉやその他の原核生
物は形質転換されよう。
物でも真植生物でもその細胞の形質転換に応用できるこ
とを理解できよう。すでに記述したように、Ｅ、ｃｏｌ
ｉ Ｈ８１０１株はヒトのＴＳＨ−β遺伝子の断片でサ
ブクローン化したプラスミドｐＢＲ３２２により形質転
換された。同じやり方でＥ、ｃｏｌｉやその他の原核生
物は形質転換されよう。
さらにつけ加えれば、この技術分野の状態は真核生物の
細胞がヒトのＴＳＨ−β遺伝子を含むウィルスのような
適当なベクターによって形質転換されうるという状況に
ある。このことはイン・ビイトロで糖鎖のついた形でこ
のタンパクを作り出すことを可能にしている。この分野
の技術で知られる増幅手段によって、このタンパクの産
生を高いレベルに増やすことも可能である。
細胞がヒトのＴＳＨ−β遺伝子を含むウィルスのような
適当なベクターによって形質転換されうるという状況に
ある。このことはイン・ビイトロで糖鎖のついた形でこ
のタンパクを作り出すことを可能にしている。この分野
の技術で知られる増幅手段によって、このタンパクの産
生を高いレベルに増やすことも可能である。
おそらく、単離されたこの遺伝子の最も興味深い用途は
診断においてである。いろいろな内分泌異常は甲状腺刺
激ホルモンを含むホルモンの過剰生産または生産不足に
よって特徴づけられている。甲状腺の疾患が甲状腺その
ものの病気によるのかあるいは中枢の下垂体または視床
下部の病気によるのかを判定するために１組換えＤＮＡ
手法で作られたｈＴＳ）ｌをヒトに投与することができ
よう。
診断においてである。いろいろな内分泌異常は甲状腺刺
激ホルモンを含むホルモンの過剰生産または生産不足に
よって特徴づけられている。甲状腺の疾患が甲状腺その
ものの病気によるのかあるいは中枢の下垂体または視床
下部の病気によるのかを判定するために１組換えＤＮＡ
手法で作られたｈＴＳ）ｌをヒトに投与することができ
よう。
ここに使われてきた語句や表現は、説明の目的のために
用いられたもので、本発明を限定するものではない。ま
た、これらの語句や表現の使用は、これと同等の意味内
容を排除するものではない。つまり、この発明の範囲に
はいろいろな変法が包含される。
用いられたもので、本発明を限定するものではない。ま
た、これらの語句や表現の使用は、これと同等の意味内
容を排除するものではない。つまり、この発明の範囲に
はいろいろな変法が包含される。
第１図はクローン化されたｈＴＳＨ−βの制限酵素切断
部位の地図である。 第２図はｈＴＳＨ−βのタンパクをコードしているエク
ソンのヌクレオチド配列と、それから推定されるアミノ
酸配列である。 第３図はヒトの染色体ＤＮＡにおけるｈＴＳＨ−β遺伝
子の制限酵素解析の結果を示す図である。 特許出願人スローンーケッタリングインステイテユート
フォーキャンサーリサーチ 代理人弁理士月 村 茂外１名′ｙｏＯし口 ６・）−１ ０，５６◆ Ｆ１９．３゜
部位の地図である。 第２図はｈＴＳＨ−βのタンパクをコードしているエク
ソンのヌクレオチド配列と、それから推定されるアミノ
酸配列である。 第３図はヒトの染色体ＤＮＡにおけるｈＴＳＨ−β遺伝
子の制限酵素解析の結果を示す図である。 特許出願人スローンーケッタリングインステイテユート
フォーキャンサーリサーチ 代理人弁理士月 村 茂外１名′ｙｏＯし口 ６・）−１ ０，５６◆ Ｆ１９．３゜
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒト甲状腺刺激ホルモンのβサブユニットを発現す
るほゞ純粋なＤＮＡ。 ２、【遺伝子配列があります】 のヌクレオチド配列を含み、次に約４００〜４５０ヌク
レオチドの配列があり、 【遺伝子配列があります】 の配列で終了する特許請求の範囲第１項記載のＤＮＡ。 ３、【遺伝子配列があります】 のヌクレオチド配列を含む特許請求の範囲第１項記載の
ＤＮＡ。 ４、【遺伝子配列があります】 のヌクレオチド配列を含む特許請求の範囲第１項記載の
ＤＮＡ。 ５、ヒトの甲状腺刺激ホルモンβ−サブユニットを発現
するＤＮＡを含む遺伝子操作で作られたプラスミド。 ６、そのプラスミドがｐＢＲ３２２を含んでいる特許請
求の範囲第５項記載のプラスミド。 ７、そのプラスミドが原核生物細胞を形質転換するのに
有用な特許請求の範囲第５項記載のプラスミド。 ８、真核生物細胞を形質転換するのに有用であって、ｈ
ＴＳＨ−β−サブユニットを発現するＤＮＡを含む遺伝
子操作で作られたベクター。 ９、ヒトの甲状腺刺激ホルモンのβ−サブユニットを発
現する形質転換細胞。 １０、その細胞が原核細胞である特許請求の範囲第９項
記載の細胞。 １１、その細胞がＥ．ｃｏｌｉである特許請求の範囲第
１０項記載の細胞。 １２、そのＥ．ｃｏｌｉ細胞がＥ、ｃｏｌｉ ＨＢ１０
１株である特許請求の範囲第１１項記載の細胞。 １３、そのＨＢ１０１細胞が甲状腺刺激ホルモンのβ鎖
を発現するＤＮＡを含むプラスミドｐＢＲ３２２で形質
転換される特許請求の範囲第１２項記載の細胞。 １４、真核生物の細胞を含む特許請求の範囲第９項記載
の細胞。 １５、特許請求の範囲第９項記載の細胞で作られた甲状
腺刺激ホルモンβ鎖。 １６、患者に組換えＤＮＡ技法で調製されたヒトの甲状
腺刺激ホルモンを投与し、甲状腺刺激ホルモンの投与に
よる患者の甲状腺活性の有無を調べ、甲状腺疾患が脳下
垂体あるいは視床下部の病気に由来するものであるか（
活性変化あり）、あるいは甲状腺そのものの疾患である
か（活性変化なし）を観察することを含む甲状腺疾患の
原因を調べる方法。 １７、遺伝子操作で作られたβ−サブユニットを含む実
質的に純粋なヒト甲状腺刺激ホルモン。 １８、特許請求の範囲第５項記載のプラスミドによって
作られたβ−サブユニットを含む実質的に純粋なヒト甲
状腺刺激ホルモン。 １９、特許請求の範囲第８項記載のベクターで作られた
β−サブユニットを含む実質的に純粋なヒト甲状腺刺激
ホルモン。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14/875,251 US20160026869A1 (en) | 1986-12-11 | 2015-10-05 | Information processing apparatus and method, information processing system, and providing medium |
| US15/149,299 US20160253845A1 (en) | 1986-12-11 | 2016-05-09 | Information processing apparatus and method, information processing system, and providing medium |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US80800485A | 1985-12-11 | 1985-12-11 | |
| US808004 | 1991-12-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62282588A true JPS62282588A (ja) | 1987-12-08 |
Family
ID=25197634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61296501A Pending JPS62282588A (ja) | 1985-12-11 | 1986-12-11 | ヒトのチロトロピン−β−サブユニツトをコ−ドしている遺伝子の単離法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US5840566A (ja) |
| EP (1) | EP0228604A3 (ja) |
| JP (1) | JPS62282588A (ja) |
| CA (1) | CA1310286C (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04501802A (ja) * | 1989-01-11 | 1992-04-02 | アメリカ合衆国 | 生物学的に活性な合成チロトロピンおよびそれを製造するためのクローン化遺伝子 |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6562052B2 (en) * | 1995-08-24 | 2003-05-13 | Sutura, Inc. | Suturing device and method |
| US7649084B2 (en) | 2003-11-12 | 2010-01-19 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Recombinant glycoproteins related to feline thyrotropin |
| DK1971361T3 (da) * | 2005-12-23 | 2014-09-08 | James D Kelly | Forbedrede glycoformer af thyroidstimulerende hormonreceptor-polypeptidagonist til behandling af metabolisk syndrom |
| DK2063909T3 (da) * | 2006-09-19 | 2013-01-02 | Genzyme Corp | Formuleringer til terapeutisk administration af thyroid-stimuleringshormon (TSH) |
| US20110052591A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Board Of Regents Of The University Of Texas System | Variants of Thyroid Stimulating Hormone Beta |
| JP6255348B2 (ja) | 2011-12-19 | 2017-12-27 | ジェンザイム・コーポレーション | 甲状腺刺激ホルモン組成物 |
| KR101789509B1 (ko) * | 2015-11-05 | 2017-10-26 | 주식회사 프로젠 | 재조합 인간 갑상선 자극 호르몬을 포함하는 조성물 및 상기 재조합 인간 갑상선 자극 호르몬의 생산 방법 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2640096B2 (ja) * | 1985-07-17 | 1997-08-13 | 潔 宮井 | 新規なヒト甲状腺刺激ホルモンのβサブユニットのＤＮＡ配列 |
-
1986
- 1986-12-06 EP EP86116983A patent/EP0228604A3/en not_active Withdrawn
- 1986-12-11 JP JP61296501A patent/JPS62282588A/ja active Pending
- 1986-12-11 CA CA000525065A patent/CA1310286C/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-01-19 US US08/006,208 patent/US5840566A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-10-24 US US08/957,545 patent/US6114144A/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-03-01 US US09/516,352 patent/US6365127B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-03-05 US US10/091,706 patent/US20030198596A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04501802A (ja) * | 1989-01-11 | 1992-04-02 | アメリカ合衆国 | 生物学的に活性な合成チロトロピンおよびそれを製造するためのクローン化遺伝子 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0228604A2 (en) | 1987-07-15 |
| EP0228604A3 (en) | 1988-10-12 |
| US6114144A (en) | 2000-09-05 |
| CA1310286C (en) | 1992-11-17 |
| US20030198596A1 (en) | 2003-10-23 |
| US5840566A (en) | 1998-11-24 |
| US6365127B1 (en) | 2002-04-02 |
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