JPS6258993A - 細胞の組織培養によるラウウオルフイア系アルカロイドの製造法 - Google Patents
細胞の組織培養によるラウウオルフイア系アルカロイドの製造法Info
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- JPS6258993A JPS6258993A JP60196108A JP19610885A JPS6258993A JP S6258993 A JPS6258993 A JP S6258993A JP 60196108 A JP60196108 A JP 60196108A JP 19610885 A JP19610885 A JP 19610885A JP S6258993 A JPS6258993 A JP S6258993A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は植物細胞の組織培養によるラウウオルフイア系
アルカロイドの製造法に関し、詳しくはラウウオルフイ
ア属植物の組織片の組織培養によって多量のラウウオル
フイア系アルカロイドを製造する方法に関し、さらに詳
しくは、ラウウオルフイア属植物の組織片の組織培養に
よって多量のラウウオルフイア系アルカロイドを安定的
に製造する方法に関する。
アルカロイドの製造法に関し、詳しくはラウウオルフイ
ア属植物の組織片の組織培養によって多量のラウウオル
フイア系アルカロイドを製造する方法に関し、さらに詳
しくは、ラウウオルフイア属植物の組織片の組織培養に
よって多量のラウウオルフイア系アルカロイドを安定的
に製造する方法に関する。
〔技術の背景および従来技術の説明〕
ラウウオルフィア系アルカロイドは、キョウチクトウ科
の植物の主として根に生成し、血圧降下作用を存する他
に、神経系に働いて鎮静および催眠作用を発現し、さら
に精神安定作用を有する医桑として広く使用されている
。
の植物の主として根に生成し、血圧降下作用を存する他
に、神経系に働いて鎮静および催眠作用を発現し、さら
に精神安定作用を有する医桑として広く使用されている
。
これまでに、ラウウオルフイア系アルカロイドは、ラウ
ウオルフイア・セルベンチナ（インド蛇木） （Ｒａ
ｕｒａｌｆｆａ ５ｅｒｐｅｎｔｌｎａ） 、ラウウオ
ルフイア・カネセンス（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｃａｎｅ
ｓｃｅｎｓ ） 、ラウウオルフイア・ミクランタ（Ｒ
ａｕｖａｌｆｉａｍｉｃｒａｎｔｈａ ） 、ラウウオ
ルフイア・ボミトリア（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｖｏｍｉ
ｔｒｉａ ）等の植物の根から抽出されてきたが、最近
では原料植物の生産量が低下し、植物の採取が回前にな
っている。
ウオルフイア・セルベンチナ（インド蛇木） （Ｒａ
ｕｒａｌｆｆａ ５ｅｒｐｅｎｔｌｎａ） 、ラウウオ
ルフイア・カネセンス（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｃａｎｅ
ｓｃｅｎｓ ） 、ラウウオルフイア・ミクランタ（Ｒ
ａｕｖａｌｆｉａｍｉｃｒａｎｔｈａ ） 、ラウウオ
ルフイア・ボミトリア（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｖｏｍｉ
ｔｒｉａ ）等の植物の根から抽出されてきたが、最近
では原料植物の生産量が低下し、植物の採取が回前にな
っている。
近年、植物細胞の組織培養が行なわれるようになり、イ
ンド蛇木から分前選別したカルスを静置培養または通気
撹拌培養することにより、幼植物体に分化させ、それに
よってラウウオルフイア系アルカロイドを製造すること
が提案されている。
ンド蛇木から分前選別したカルスを静置培養または通気
撹拌培養することにより、幼植物体に分化させ、それに
よってラウウオルフイア系アルカロイドを製造すること
が提案されている。
（特開昭４８−８０７８９号公報）
さらに植物細胞の組織培養において、α−ナフタレン酢
酸を含む栄養培曲を使用して、アルカロイドを生産する
ことも提案されている。（特公昭５６−２８５１５号公
報） 本発明者らは、植物細胞の組織培養について永年研究を
続けているが、ラウウオルフイア属植物の粗織から誘導
したカルスの培養において、順調に生育したカルスをα
−ナフタレン酢酸、およびベンジルアデニンおよびカイ
ネチンからなるサイ１〜カイニン類を含む栄ｉ＄培地に
おいて培養して、−たんその生育を悪化させ、生育の悪
化したカルスを再び順調に生育するｉ′３曲に戻して、
培養することからなるラウウオルフイア系アルカロイド
の製造法を提案した。（特願昭５８−１８７１１１号）
本発明者らは、さらにラウウオルフイア属植物の１音養
細１泡を光を遮っ１こ暗所において培養した後、光を照
射した条件の下において培養し、それによって多はのラ
ウウオルフイア系アルカロイドを生産する方法を耶水１
．？ごへ （特開昭６０−１４１５０４号）一方におい
て、培養細胞の二次化ｍ生産物の生合成に対する光の効
果について、アントシアニンのｇ積が古色光によって促
進されること〔マツモト・ティー、ニシダ・ケー、ノグ
チ・エム、およびタマキ・イー：アグリカルチュラル・
バイオロジカル・ケミストリ （Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ
Ｔ、 、 ＮｆｓｈｆｄａＫ、、 Ｎｏｇｕｃｈｌ Ｍ
＆ Ｔａｍａｋｉ Ｅ、： Ａｇｒｉｃ、 ｎ１ｏｌ。
酸を含む栄養培曲を使用して、アルカロイドを生産する
ことも提案されている。（特公昭５６−２８５１５号公
報） 本発明者らは、植物細胞の組織培養について永年研究を
続けているが、ラウウオルフイア属植物の粗織から誘導
したカルスの培養において、順調に生育したカルスをα
−ナフタレン酢酸、およびベンジルアデニンおよびカイ
ネチンからなるサイ１〜カイニン類を含む栄ｉ＄培地に
おいて培養して、−たんその生育を悪化させ、生育の悪
化したカルスを再び順調に生育するｉ′３曲に戻して、
培養することからなるラウウオルフイア系アルカロイド
の製造法を提案した。（特願昭５８−１８７１１１号）
本発明者らは、さらにラウウオルフイア属植物の１音養
細１泡を光を遮っ１こ暗所において培養した後、光を照
射した条件の下において培養し、それによって多はのラ
ウウオルフイア系アルカロイドを生産する方法を耶水１
．？ごへ （特開昭６０−１４１５０４号）一方におい
て、培養細胞の二次化ｍ生産物の生合成に対する光の効
果について、アントシアニンのｇ積が古色光によって促
進されること〔マツモト・ティー、ニシダ・ケー、ノグ
チ・エム、およびタマキ・イー：アグリカルチュラル・
バイオロジカル・ケミストリ （Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ
Ｔ、 、 ＮｆｓｈｆｄａＫ、、 Ｎｏｇｕｃｈｌ Ｍ
＆ Ｔａｍａｋｉ Ｅ、： Ａｇｒｉｃ、 ｎ１ｏｌ。
Ｃｈｅｗ、 ） 第３７巻、ｚ ５６１ ｅｚ （１９
７３年）〕、カロチノイドの蓄積が光によって促進され
ること〔プラント・ニー・ビ一二ビオフイジ力（口ｒａ
ｎｄｔ Ａ、Ｂ、： １３ｔｏｆｆｚｉｃａ ） ｍ
３巻、第６５９田（１９５８年）〕およびポリフェノー
ルのＷ［が元によって促進されること〔デービス・エム
・イー：プランタ（Ｄａｖｌｅｓ Ｍ、Ｅ−： Ｐｌａ
ｎｔａ ）第１０４巻、第５０百（１９７２年）〕が知
られている。
７３年）〕、カロチノイドの蓄積が光によって促進され
ること〔プラント・ニー・ビ一二ビオフイジ力（口ｒａ
ｎｄｔ Ａ、Ｂ、： １３ｔｏｆｆｚｉｃａ ） ｍ
３巻、第６５９田（１９５８年）〕およびポリフェノー
ルのＷ［が元によって促進されること〔デービス・エム
・イー：プランタ（Ｄａｖｌｅｓ Ｍ、Ｅ−： Ｐｌａ
ｎｔａ ）第１０４巻、第５０百（１９７２年）〕が知
られている。
本発明者らは、さらに研究を重ね、光の照射の下におけ
るラウウオルフイア属躯物の種培養細胞の培養において
、光源の光の色調によって種培養細胞の生育速度および
レセルピンの蓄積量が変化することを県出し、これらの
知見に基づいて本発明に到達した。
るラウウオルフイア属躯物の種培養細胞の培養において
、光源の光の色調によって種培養細胞の生育速度および
レセルピンの蓄積量が変化することを県出し、これらの
知見に基づいて本発明に到達した。
本発明の目的は、ラウウオルフイア系アルカロイドを効
率的に生産しうる方法を提供することにあり、詳しくは
、細胞の組織培養によって、ラウウオルフイア系アルカ
ロイドを効率的に生産しうる方法を提供することにある
。
率的に生産しうる方法を提供することにあり、詳しくは
、細胞の組織培養によって、ラウウオルフイア系アルカ
ロイドを効率的に生産しうる方法を提供することにある
。
本発明は、ラウウオルフイア属植物の培養細胞を、緑色
光蛍光灯または黄色光蛍光灯の照射の下に培養し、それ
によって培養細胞のラウウオルフイア系アルカロイドの
蓄積量を増大することからなるラウウオルフイア系アル
カロイドの製造法である。
光蛍光灯または黄色光蛍光灯の照射の下に培養し、それ
によって培養細胞のラウウオルフイア系アルカロイドの
蓄積量を増大することからなるラウウオルフイア系アル
カロイドの製造法である。
本発明において、ラウウオルフイア属植物の培養細胞の
培養を、緑色光蛍光灯の照射の下に！６〜２８日間行な
うこと、または黄色光蛍光灯の照射の下に２０〜２８日
間行なうことが好ましい。これによってラウウオルフイ
ア系アルカロイドの生産量を増加することができる。
培養を、緑色光蛍光灯の照射の下に！６〜２８日間行な
うこと、または黄色光蛍光灯の照射の下に２０〜２８日
間行なうことが好ましい。これによってラウウオルフイ
ア系アルカロイドの生産量を増加することができる。
本発明は、また光を遮った暗所、あるし１４よ緑色光蛍
光灯、黄色光蛍光灯または赤色光蛍光灯の照射の下に継
代培養したラウウオルフイア属植物の培養細胞を、青色
光蛍光灯または複写用蛍光灯の照射の下に培養し、それ
によって培養細胞のラウウオルフイア系アルカロイドの
蓄積量を増加することからなるラウウオルフイア系アル
カロイドの製造法である。
光灯、黄色光蛍光灯または赤色光蛍光灯の照射の下に継
代培養したラウウオルフイア属植物の培養細胞を、青色
光蛍光灯または複写用蛍光灯の照射の下に培養し、それ
によって培養細胞のラウウオルフイア系アルカロイドの
蓄積量を増加することからなるラウウオルフイア系アル
カロイドの製造法である。
本発明において、前記の継代培養を行なったラウウオル
フイア属植物の培養細胞を、青色光蛍光灯の照射の下に
１６〜２８日間行なうこと、または複写用蛍光灯の照射
の下に２０〜２８日間行なうことが好ましい。これによ
ってラウウオルフイア系アルカロイドの生産量を増加す
ることができる。
フイア属植物の培養細胞を、青色光蛍光灯の照射の下に
１６〜２８日間行なうこと、または複写用蛍光灯の照射
の下に２０〜２８日間行なうことが好ましい。これによ
ってラウウオルフイア系アルカロイドの生産量を増加す
ることができる。
本発明によるラウウオルフイア系アルカロイドの製造は
、ラウウオルフイア・セルペンチナ（インド蛇木）また
はラウウオルフイア・ボミトリアの培養細胞によるレセ
ルピンの製造に利用することができる。
、ラウウオルフイア・セルペンチナ（インド蛇木）また
はラウウオルフイア・ボミトリアの培養細胞によるレセ
ルピンの製造に利用することができる。
光の波長は光の色調によって変化する。すなわち蛍光灯
の光源からの光を長波長側からみると、赤色光蛍光灯、
黄色光蛍光灯、緑色光蛍光灯、青色光蛍光灯、複写用蛍
光灯および紫外線殺菌灯の順序に光源からの光のピーク
波長が短かくなるとされているっこれらの蛍光灯の光の
波長に応じた光の強さの分布は第１図に示すとおりであ
って、ヨコ軸は光源からの光の波長であり、タテ軸は光
の比エネルギーであって、Ｕｖは紫外線殺菌灯、■は複
写用蛍光灯、Ｂｉ、を青色光蛍光灯、Ｇは緑色光蛍光灯
、Ｙは苗色光蛍光灯モしてＲは赤色光蛍光灯のそれぞれ
の光の強さの分布を示す。この光の強さの分布曲線によ
ると、これらの蛍光灯のピーク波長は次のとおりである
。
の光源からの光を長波長側からみると、赤色光蛍光灯、
黄色光蛍光灯、緑色光蛍光灯、青色光蛍光灯、複写用蛍
光灯および紫外線殺菌灯の順序に光源からの光のピーク
波長が短かくなるとされているっこれらの蛍光灯の光の
波長に応じた光の強さの分布は第１図に示すとおりであ
って、ヨコ軸は光源からの光の波長であり、タテ軸は光
の比エネルギーであって、Ｕｖは紫外線殺菌灯、■は複
写用蛍光灯、Ｂｉ、を青色光蛍光灯、Ｇは緑色光蛍光灯
、Ｙは苗色光蛍光灯モしてＲは赤色光蛍光灯のそれぞれ
の光の強さの分布を示す。この光の強さの分布曲線によ
ると、これらの蛍光灯のピーク波長は次のとおりである
。
赤色光蛍光灯（Ｒ） ６５８ｎｍ苗色光蛍光灯（
Ｙ） ５９５ｎｍ緑色光蛍光灯（Ｇ） ５
３０ｎｍ青色光蛍光灯（Ｂ） ４５０ｎｍ複写用
蛍光灯（Ｖ） ３７０ｎｍ紫外線殺菌灯（ＵＶ）
２５４ｎｍ本発明者らの実験によると、青色光蛍
光灯または複写用蛍光灯を光源とする光の照射の下にラ
ウウオルフイア属植物の培養細胞を培養すると、細胞の
生前速度は、光を遮った暗所におけるｆｇｉ善の場合ま
たはそれ以外の光源の光の照射の下における培養の場合
よりも低下するが、細胞中のラウウオルフイア系アルカ
ロイドの蓄＠量は著るしく向上し、それによってラウウ
オルフイア系アルカロイドの全生産量が増加する。また
緑色光蛍光灯または黄色光蛍光灯の照射の下に培養する
と、細胞中のラウウオルフイア系アルカロイドの蓄Ｍ量
は、光を遮った暗所における培養の場合または赤色光蛍
光灯の照射の下における培養の場合よりも向上するが、
細胞の生育速度はそれ程低下しないから、この場合もラ
ウウオルフイア系アルカロイドの全生産量は増加する。
Ｙ） ５９５ｎｍ緑色光蛍光灯（Ｇ） ５
３０ｎｍ青色光蛍光灯（Ｂ） ４５０ｎｍ複写用
蛍光灯（Ｖ） ３７０ｎｍ紫外線殺菌灯（ＵＶ）
２５４ｎｍ本発明者らの実験によると、青色光蛍
光灯または複写用蛍光灯を光源とする光の照射の下にラ
ウウオルフイア属植物の培養細胞を培養すると、細胞の
生前速度は、光を遮った暗所におけるｆｇｉ善の場合ま
たはそれ以外の光源の光の照射の下における培養の場合
よりも低下するが、細胞中のラウウオルフイア系アルカ
ロイドの蓄＠量は著るしく向上し、それによってラウウ
オルフイア系アルカロイドの全生産量が増加する。また
緑色光蛍光灯または黄色光蛍光灯の照射の下に培養する
と、細胞中のラウウオルフイア系アルカロイドの蓄Ｍ量
は、光を遮った暗所における培養の場合または赤色光蛍
光灯の照射の下における培養の場合よりも向上するが、
細胞の生育速度はそれ程低下しないから、この場合もラ
ウウオルフイア系アルカロイドの全生産量は増加する。
このような培養中の光の照射における光源の変更による
細胞中のラウウオルフイア系アルカロイドの蓄積量およ
び細胞の生育速度の変化は光源から出る光の波長の変化
に基づくものであることｉは充分に予想できることであ
る。
細胞中のラウウオルフイア系アルカロイドの蓄積量およ
び細胞の生育速度の変化は光源から出る光の波長の変化
に基づくものであることｉは充分に予想できることであ
る。
本発明において、ラウウオルフイア＄セルペンヂナ（イ
ンド蛇木）の茎剪部位の組織を用いて培養細胞（カルス
）を誘導するには、リンスマイヤー・スクーグ培地（１
、Ｓ培地）またはムラシゲ・スクーグ改変培地（λＩｓ
培曲）に２，４−ジクロロフェノキシ酢酸１〜３ｐｐｍ
（好ましくは１．７〜２．４ｐｐＩ１１）またはインド
ール−３−酢酸１〜３ｐｐｍ（好ましくは１．５〜２．
Ｉｐｐｍ）および寒天粉末０・８〜１％を加えて得た固
形培地に組職片を１ｎ床し、２５°Ｃ前後の温度におい
て培養する。
ンド蛇木）の茎剪部位の組織を用いて培養細胞（カルス
）を誘導するには、リンスマイヤー・スクーグ培地（１
、Ｓ培地）またはムラシゲ・スクーグ改変培地（λＩｓ
培曲）に２，４−ジクロロフェノキシ酢酸１〜３ｐｐｍ
（好ましくは１．７〜２．４ｐｐＩ１１）またはインド
ール−３−酢酸１〜３ｐｐｍ（好ましくは１．５〜２．
Ｉｐｐｍ）および寒天粉末０・８〜１％を加えて得た固
形培地に組職片を１ｎ床し、２５°Ｃ前後の温度におい
て培養する。
このようにして得られた培養細胞（カルス）は、リンス
マイヤー・スクーグ改変培地（ＬＳ改変培Ｉｔ！＋）ま
たはムラシゲ・スクーグ改変培地（ＭＳ培地）に２，４
−ジクロロフェノキシ酢酸と必要に応じてカイネチンを
加え、そのｐＨを５〜７にした後、寒天粉末０・８〜１
％をさらに加えて得た培地に植え付け、光を遮った暗所
、あるいは赤色光蛍光灯、ｅＱ色元蛍光汀または緑色光
蛍光灯の照射の下に、２５°Ｃ前後の温度において、３
週間前後の期間毎継代する継代培養により保存されるが
、一般的には継代培養を光を遮った暗所において行なう
ことが好ましい。また培養細胞（カルス）の保存を、寒
天を使用しない液体培地における２〜４過間毎の継代培
養によって行なうこともできる。培養細胞（カルス）の
簸体培養は、一般に使用される往復振とう培養器、遊回
培養器または通気式ジャーファーメンタ−などを用いて
、固体培養と同様に、２５℃前後の温度において行なわ
れるが、液体培養において、培養細胞（カルス）は分散
し、小集塊状の細胞または遊ｍＮＥ胞になり、継代にお
いてこれらをは別して、次の液体培地に植えｆ寸ける。
マイヤー・スクーグ改変培地（ＬＳ改変培Ｉｔ！＋）ま
たはムラシゲ・スクーグ改変培地（ＭＳ培地）に２，４
−ジクロロフェノキシ酢酸と必要に応じてカイネチンを
加え、そのｐＨを５〜７にした後、寒天粉末０・８〜１
％をさらに加えて得た培地に植え付け、光を遮った暗所
、あるいは赤色光蛍光灯、ｅＱ色元蛍光汀または緑色光
蛍光灯の照射の下に、２５°Ｃ前後の温度において、３
週間前後の期間毎継代する継代培養により保存されるが
、一般的には継代培養を光を遮った暗所において行なう
ことが好ましい。また培養細胞（カルス）の保存を、寒
天を使用しない液体培地における２〜４過間毎の継代培
養によって行なうこともできる。培養細胞（カルス）の
簸体培養は、一般に使用される往復振とう培養器、遊回
培養器または通気式ジャーファーメンタ−などを用いて
、固体培養と同様に、２５℃前後の温度において行なわ
れるが、液体培養において、培養細胞（カルス）は分散
し、小集塊状の細胞または遊ｍＮＥ胞になり、継代にお
いてこれらをは別して、次の液体培地に植えｆ寸ける。
継代培養において、培地に添加する２、４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸は、０．１〜２．２ ｐｐｍの金において
添加することが好ましく、またカイネチンは０〜０．２
２ ｐＨｍｌの量において添加することが好ましい。
ェノキシ酢酸は、０．１〜２．２ ｐｐｍの金において
添加することが好ましく、またカイネチンは０〜０．２
２ ｐＨｍｌの量において添加することが好ましい。
このような継代培養によって保存された培養細胞（カル
ス）は継代培地と同様な培地に植え付け、青色光蛍光灯
、複写用蛍光灯、緑色光蛍光灯または青色光蛍光灯の照
射の下に、２５°Ｃ前後の温度においてｆＦＩ養し、ラ
ウウオルフイア系アルカロイド含台ｉＨ（の高い培養細
胞（カルス）が得られる。
ス）は継代培地と同様な培地に植え付け、青色光蛍光灯
、複写用蛍光灯、緑色光蛍光灯または青色光蛍光灯の照
射の下に、２５°Ｃ前後の温度においてｆＦＩ養し、ラ
ウウオルフイア系アルカロイド含台ｉＨ（の高い培養細
胞（カルス）が得られる。
培養の時１ｆｆｉは光源のＡＨ類によって異なるが、青
色光蛍光灯の場合は１６〜２８日間（好ましくは２０〜
２４日間）、複写用蛍光灯の場合は、２０〜２８日間（
好ましくは２２〜２８日間）、緑色光蛍光灯の場合は１
６〜２８日間（好ましくは１８〜２６日間）そして青色
光蛍光灯の場合は１６〜２８日間（好ましくは１８〜２
４日間）とすると、ラウウオルフイア系アルカロイド含
何電の高い培養細胞（カルス）が得られる。
色光蛍光灯の場合は１６〜２８日間（好ましくは２０〜
２４日間）、複写用蛍光灯の場合は、２０〜２８日間（
好ましくは２２〜２８日間）、緑色光蛍光灯の場合は１
６〜２８日間（好ましくは１８〜２６日間）そして青色
光蛍光灯の場合は１６〜２８日間（好ましくは１８〜２
４日間）とすると、ラウウオルフイア系アルカロイド含
何電の高い培養細胞（カルス）が得られる。
ラウウオルフイア属植物の培養細胞（カルス）の培養に
使用する培地は、培養細胞（カルス）が生育しうるもの
であれば、いかなるものであっても、これを（史用する
ことができるが、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸およ
びカイネチンを含むものであるのが好ましい。
使用する培地は、培養細胞（カルス）が生育しうるもの
であれば、いかなるものであっても、これを（史用する
ことができるが、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸およ
びカイネチンを含むものであるのが好ましい。
青色光蛍光灯または複写用蛍光灯の照射の下に培養した
培養細胞（カルス）を新しい培地に植え付け、再び同じ
条件において培養すると、その生育速度が低下している
ので、充分なラウウオルフイア系アルカロイドの生産を
することが回覧であるが、緑色光蛍光灯または黄色光蛍
光灯の照射の下に培養した培養細胞（カルス）は、新し
い培地に値え付け、再び同じ条件において培養しても、
その生育速度の低下は軽微であるから、必ずしも継代培
養における種培養畑胞（カルス）の保存および補給をし
なくても、ラウウオルフイア系アルカロイドの生産を続
けることができる。
培養細胞（カルス）を新しい培地に植え付け、再び同じ
条件において培養すると、その生育速度が低下している
ので、充分なラウウオルフイア系アルカロイドの生産を
することが回覧であるが、緑色光蛍光灯または黄色光蛍
光灯の照射の下に培養した培養細胞（カルス）は、新し
い培地に値え付け、再び同じ条件において培養しても、
その生育速度の低下は軽微であるから、必ずしも継代培
養における種培養畑胞（カルス）の保存および補給をし
なくても、ラウウオルフイア系アルカロイドの生産を続
けることができる。
培養細胞（カルス）に含まれるラウウオルフイア系アル
カロイドは、常法によって分離し、車前される。
カロイドは、常法によって分離し、車前される。
培養細胞（カルス）を誘導するラウウオルフイア属植物
は、前記のラウウオルフイア・セルペンチナ（Ｒａｕｖ
ａｌｆｉａ ５ｅｒｐｅｎｔｌｎａ ）の他に、ラウウ
オルフイア・ボミトリア（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｖｏｍ
ｉｔｒｉａ ）、ラウウオルフイア・カネセンス（Ｒａ
ｕｖａｌｆｉａｅａｎｅｓｃｅｎｓ ） 、ラウウオル
フイア・ミクランク（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｍ１ｃｒａ
ｎｔｈａ ）または他のラウウオルフイア系アルカロイ
ドを含む植物であってもよい。
は、前記のラウウオルフイア・セルペンチナ（Ｒａｕｖ
ａｌｆｉａ ５ｅｒｐｅｎｔｌｎａ ）の他に、ラウウ
オルフイア・ボミトリア（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｖｏｍ
ｉｔｒｉａ ）、ラウウオルフイア・カネセンス（Ｒａ
ｕｖａｌｆｉａｅａｎｅｓｃｅｎｓ ） 、ラウウオル
フイア・ミクランク（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｍ１ｃｒａ
ｎｔｈａ ）または他のラウウオルフイア系アルカロイ
ドを含む植物であってもよい。
以下において、実験例および実用例を示して本発明をさ
らに詳細に説明する。
らに詳細に説明する。
実験例
３００冠容のエルレンマイヤーフラスコに実施例１の組
成の栄養培地５０−を入れ、これに実施例Ｉの種培養細
胞２．０ｇを値え付け、光を遮った暗所において、２５
°Ｃの温度における培養を行なった。
成の栄養培地５０−を入れ、これに実施例Ｉの種培養細
胞２．０ｇを値え付け、光を遮った暗所において、２５
°Ｃの温度における培養を行なった。
第１図の横軸に示す日数の経過後に培養細胞を取り出し
、秤１して、フラスコ当りの培養細胞の増殖倍数を算出
した。
、秤１して、フラスコ当りの培養細胞の増殖倍数を算出
した。
培養細胞の培養を、紫外線殺菌灯（ＵＶ）、複写用蛍光
灯（Ｖ）、青色光蛍光灯（Ｂ）、緑色光蛍光灯（Ｇ）、
黄色光蛍光灯（Ｙ）および赤色光蛍光灯（Ｒ）のそれぞ
れの照射の下に行なったこと以外は前記と同様にして、
それぞれの光源の光の照射の下における培養細胞の増殖
倍数を算出した。
灯（Ｖ）、青色光蛍光灯（Ｂ）、緑色光蛍光灯（Ｇ）、
黄色光蛍光灯（Ｙ）および赤色光蛍光灯（Ｒ）のそれぞ
れの照射の下に行なったこと以外は前記と同様にして、
それぞれの光源の光の照射の下における培養細胞の増殖
倍数を算出した。
次に培養細胞を、実施例１の「レセルピン含有率の測定
」と同様にして、それぞれのレセルピン含有率を算出し
た。
」と同様にして、それぞれのレセルピン含有率を算出し
た。
これらの実験の結果は第２図および第３図に示すとおり
であった。第２図は培養細胞の生育速度を示し、第３図
は培養細胞のレセルピン含有率を示す。
であった。第２図は培養細胞の生育速度を示し、第３図
は培養細胞のレセルピン含有率を示す。
第２図におけるヨコ軸は培養日数（日）であり、タテ軸
は培養細胞の増殖倍数（倍）であり、第３図におけるヨ
コ軸は培養日数（日）であり、タテ軸はレセルピン含有
率（％）である。第２図におけるＵＶの実線における（
−Ｘ−）は紫外線殺菌灯の、■の実線における（−〇−
）は複写用蛍光灯の、Ｂの点線における（−〇−）は青
色光蛍光灯の、Ｇの一点鎖線における（−〇−）は緑色
光蛍光灯の、Ｙの点線における（−Δ−）は黄色光蛍光
灯の、モしてＲの一点鎖線における（−へ−）は赤色光
蛍光灯のそれぞれの光の照射の下における培養細胞の生
育速度を示す。第３図における同じ記号は、それぞれの
光の照射の下における培養細胞のレセルピン含有率を示
す。
は培養細胞の増殖倍数（倍）であり、第３図におけるヨ
コ軸は培養日数（日）であり、タテ軸はレセルピン含有
率（％）である。第２図におけるＵＶの実線における（
−Ｘ−）は紫外線殺菌灯の、■の実線における（−〇−
）は複写用蛍光灯の、Ｂの点線における（−〇−）は青
色光蛍光灯の、Ｇの一点鎖線における（−〇−）は緑色
光蛍光灯の、Ｙの点線における（−Δ−）は黄色光蛍光
灯の、モしてＲの一点鎖線における（−へ−）は赤色光
蛍光灯のそれぞれの光の照射の下における培養細胞の生
育速度を示す。第３図における同じ記号は、それぞれの
光の照射の下における培養細胞のレセルピン含有率を示
す。
実施例１
（１）栄養培地の組成
ＳＩｇＳＯ−７８０３７０ｐｐｍ
ＣａＣ１・２１１０ ４４０ ｐｐ＋ｎＫ
ＮＯ６，０７０ｐｐｍ Ｋｌｌ Ｐｏ １７０ ｐｐｍＦ
ｅＳ０ ・７ＨＯ２７，８ｐｐｍ Ｎａ ＥＤＴＡ ３７−３ ｐｐ
ｍＭｎ５Ｏ吻４１（０２２＋３ ｐｐｍ ＺｎＳ０ ・７ＨＯ８，６ｐｐｍ ＣｕＳ０ ・５ＨＯ０，０２５ｐｐｍ ＣｏＣＩ 慟６Ｈ００，０２５ｐｐｍ Ｋｌ ０．８３ ｐｐｍＨ
８０６・２ ｐｐｍ Ｎａ ＭｏＯ−２Ｉ Ｏ０，２５ｐｐｍミオイノシトー
ル １００ ｐｐｍ塩酸チアミン
１．０ ｐｐｍショ糖 ３０，
０００ ｐｐｍ２．４− Ｄ Ｏ
・２２ ｐｐｍ（２）種培養細胞 インド蛇木（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ５ｅｒｐｅｎｔｉｎ
ａ Ｂｅｎｔｈ ）の茎起源の培養細胞を（１）の栄養
培地に植え付け、光を遮った暗所において、２５’Ｃに
おける３週間毎の継代培養を続行して、以下の実験にお
ける種培養細胞とした。
ＮＯ６，０７０ｐｐｍ Ｋｌｌ Ｐｏ １７０ ｐｐｍＦ
ｅＳ０ ・７ＨＯ２７，８ｐｐｍ Ｎａ ＥＤＴＡ ３７−３ ｐｐ
ｍＭｎ５Ｏ吻４１（０２２＋３ ｐｐｍ ＺｎＳ０ ・７ＨＯ８，６ｐｐｍ ＣｕＳ０ ・５ＨＯ０，０２５ｐｐｍ ＣｏＣＩ 慟６Ｈ００，０２５ｐｐｍ Ｋｌ ０．８３ ｐｐｍＨ
８０６・２ ｐｐｍ Ｎａ ＭｏＯ−２Ｉ Ｏ０，２５ｐｐｍミオイノシトー
ル １００ ｐｐｍ塩酸チアミン
１．０ ｐｐｍショ糖 ３０，
０００ ｐｐｍ２．４− Ｄ Ｏ
・２２ ｐｐｍ（２）種培養細胞 インド蛇木（Ｒａｕｖａｌｆｉａ ５ｅｒｐｅｎｔｉｎ
ａ Ｂｅｎｔｈ ）の茎起源の培養細胞を（１）の栄養
培地に植え付け、光を遮った暗所において、２５’Ｃに
おける３週間毎の継代培養を続行して、以下の実験にお
ける種培養細胞とした。
（３）実験方法
３−１）光の照射の下における培養
１０〇−容エルレンマイヤーフラスコに、２５艷の（１
）の組成の栄養培地を入れ、これに、新鮮型で１・Ｏｇ
の種培養細胞を植え付け、第１表に示す光の照射の下に
、２５〜２８６ｃの温度において、１００ ｒｐＩＩ＋
の魔回培養を２１日間行ない、その後培養液を濾過して
、培養１８Ｊ胞を採取し、その新鮮型より細胞の増殖量
を算出した。
）の組成の栄養培地を入れ、これに、新鮮型で１・Ｏｇ
の種培養細胞を植え付け、第１表に示す光の照射の下に
、２５〜２８６ｃの温度において、１００ ｒｐＩＩ＋
の魔回培養を２１日間行ない、その後培養液を濾過して
、培養１８Ｊ胞を採取し、その新鮮型より細胞の増殖量
を算出した。
３−２）光を遮った暗所における培養
光を照射することなく、暗所において培養を行なったこ
と以外は３−１）と同様にして、培養を行ない、細胞の
増殖量を算出した。
と以外は３−１）と同様にして、培養を行ない、細胞の
増殖量を算出した。
上記の培養により得られた培養細胞を１００’Ｃにおい
て乾熾し、乾爆重を求めた。次に乾燥細胞３０ｍｇを秤
取し、これにメチルアルコール５イを加え、５０℃にお
いて３時間アルカロイドを含む成分を抽出した。得られ
たメチルアルコール抽出液を減圧濃縮し、濃縮敲をデシ
ケータ−中で充分に乾Ｑした後、これをノルマルヘキサ
ン９０重量部、エチルアルコール１０重量部、酢酸０．
５重量部およびトリエチルアミン０・３重量部からなる
溶雛岐に溶解し、得られた溶離液について液体高速クロ
マトグラフィーを行ない、標市レセルピンの検１線から
レセルピン含有率を求め、レセルピン含有率を算出した
。
て乾熾し、乾爆重を求めた。次に乾燥細胞３０ｍｇを秤
取し、これにメチルアルコール５イを加え、５０℃にお
いて３時間アルカロイドを含む成分を抽出した。得られ
たメチルアルコール抽出液を減圧濃縮し、濃縮敲をデシ
ケータ−中で充分に乾Ｑした後、これをノルマルヘキサ
ン９０重量部、エチルアルコール１０重量部、酢酸０．
５重量部およびトリエチルアミン０・３重量部からなる
溶雛岐に溶解し、得られた溶離液について液体高速クロ
マトグラフィーを行ない、標市レセルピンの検１線から
レセルピン含有率を求め、レセルピン含有率を算出した
。
（４）実験の結果
実験の結果は第１表に示すとおりであった。
（以下余白）
第】表 実施例１の実験条件と実験の結果実施例２
（１）固形栄養培地（継代培養）の組成Ｍｇ５Ｏ・７Ｈ
Ｏ３７０ｐｐｍ ＣａＣ１−２ＨＯ４４０ｐｐｍ ＫＮＯ１，９００ｐｐｍ Ｎｉｌ Ｎｏ １，６５０ ｐｐｍ
ＫＨＰｏ １７０ ｐ
ｐｍＦｅＳ０ ・７１１ ０
２７．８ ｐｐｍＮａ ＥＤＴＡ
３７−３ ｐｐｍＭｎ５０
・ ４ＨＯ２２，３ｐｐｍＺｎＳ０ ・７１１ ０
８−６ ＴＩＴＩＩ＋Ｃ
ｕＳ０ ・ ５ＨＯ０，０２５ｐｐｍＣｏＣ１・ ６
Ｈ００，０２５ｐｐｍ Ｋｌ Ｏ
，８３ｐｐｍ＋１ ８０
６−２ ｐｐ＊Ｎａ ＭｏＯ・２１１
０ ０．２５ ｐｇミオイ
ノシトール １００ ｐｐｍニコチン酸
０．５ｐ＆Ｉ＆塩酸ピリドキシン
０．５ ｐｐ■塩酸チアミン １．
Ｏｐｐ菖ダグリシン ２．０ ｐｐｍ
ショｆｉｌ ３０＋０００９ｐＨ
１２，４−Ｄ ０．２２ ｐｐｍ
カイネチン ０．２２ ｐｐｍ寒天
０．９％ （２）種培養細胞 ラウウオルフイア・ボミトリア （Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｖｏｍｉｔｏｒｉａ Ａｆｚ、
）の根起源のカルスを（１）の固形栄養培地に植え付
け、光を遮った暗所において、２５℃における３週間毎
の継代培養を行ない、以下の実験における種培養細胞と
した。
Ｏ３７０ｐｐｍ ＣａＣ１−２ＨＯ４４０ｐｐｍ ＫＮＯ１，９００ｐｐｍ Ｎｉｌ Ｎｏ １，６５０ ｐｐｍ
ＫＨＰｏ １７０ ｐ
ｐｍＦｅＳ０ ・７１１ ０
２７．８ ｐｐｍＮａ ＥＤＴＡ
３７−３ ｐｐｍＭｎ５０
・ ４ＨＯ２２，３ｐｐｍＺｎＳ０ ・７１１ ０
８−６ ＴＩＴＩＩ＋Ｃ
ｕＳ０ ・ ５ＨＯ０，０２５ｐｐｍＣｏＣ１・ ６
Ｈ００，０２５ｐｐｍ Ｋｌ Ｏ
，８３ｐｐｍ＋１ ８０
６−２ ｐｐ＊Ｎａ ＭｏＯ・２１１
０ ０．２５ ｐｇミオイ
ノシトール １００ ｐｐｍニコチン酸
０．５ｐ＆Ｉ＆塩酸ピリドキシン
０．５ ｐｐ■塩酸チアミン １．
Ｏｐｐ菖ダグリシン ２．０ ｐｐｍ
ショｆｉｌ ３０＋０００９ｐＨ
１２，４−Ｄ ０．２２ ｐｐｍ
カイネチン ０．２２ ｐｐｍ寒天
０．９％ （２）種培養細胞 ラウウオルフイア・ボミトリア （Ｒａｕｖａｌｆｉａ ｖｏｍｉｔｏｒｉａ Ａｆｚ、
）の根起源のカルスを（１）の固形栄養培地に植え付
け、光を遮った暗所において、２５℃における３週間毎
の継代培養を行ない、以下の実験における種培養細胞と
した。
（３）実験方法
３−１）固形栄養培地（生産培養）の組成Ｍｇ５Ｏ仲７
ＨＯ３７０ｐｐｍ ＣａＣ１・２ＨＯ４４０ｐｐｍ ＫＮＯ１，９００ｐｐｍ ＮＨＮｏ １，６５０ ｐｐｍＫｔ
ｌ Ｐｏ １７０ ｐｐｍＦｅＳ
Ｏ・７Ｈ０２７，８ｐｐｍ Ｎａ ＥＤＴＡ ３７．３ ｐｐ
ｍ１４ｎｓｏ Φ４ＨＯ２２，３ｐｐｍ ＺｎＳＯ−７Ｈ０８＋６ ｐｐｍ ＣｕＳＯ−５Ｈ００，０２５ｐｐｍ ＣｏＣ１ｊ ６Ｈ００，０２５ＴＩｎｆｆｉＫＩ
０．８３ ｐｐ
ｍＮａ Ｍｏ０ ・２［１００，２５ｐｐｍミオイ
ノシトール １００ ｐｐｍニコチン酸
０・５ ｐｐｍ塩酸ピリドキシン
０．５ ｐｐｍ塩酸チアミン １．０
ｐｐｍグリシン ２・Ｏｐｐｍシ
ョ糖 ３０，０００ ｐｐｍα−ナ
フタレン酢酸 ２・Ｏｐｐｍベンジルアデニン
２・Ｏｐｐｍ寒天 ０．９９６ ３−２）光の照射の下における培養 １００艷容エルレンマイヤーフラスコに２５鰭の３−１
）の固形栄養培地（生産培養）を入れ、これに新鮮型で
１．０ｇの種培養細胞を植え付け、実施例１と同様にし
て、培養し、細胞の増殖量を算出した。
ＨＯ３７０ｐｐｍ ＣａＣ１・２ＨＯ４４０ｐｐｍ ＫＮＯ１，９００ｐｐｍ ＮＨＮｏ １，６５０ ｐｐｍＫｔ
ｌ Ｐｏ １７０ ｐｐｍＦｅＳ
Ｏ・７Ｈ０２７，８ｐｐｍ Ｎａ ＥＤＴＡ ３７．３ ｐｐ
ｍ１４ｎｓｏ Φ４ＨＯ２２，３ｐｐｍ ＺｎＳＯ−７Ｈ０８＋６ ｐｐｍ ＣｕＳＯ−５Ｈ００，０２５ｐｐｍ ＣｏＣ１ｊ ６Ｈ００，０２５ＴＩｎｆｆｉＫＩ
０．８３ ｐｐ
ｍＮａ Ｍｏ０ ・２［１００，２５ｐｐｍミオイ
ノシトール １００ ｐｐｍニコチン酸
０・５ ｐｐｍ塩酸ピリドキシン
０．５ ｐｐｍ塩酸チアミン １．０
ｐｐｍグリシン ２・Ｏｐｐｍシ
ョ糖 ３０，０００ ｐｐｍα−ナ
フタレン酢酸 ２・Ｏｐｐｍベンジルアデニン
２・Ｏｐｐｍ寒天 ０．９９６ ３−２）光の照射の下における培養 １００艷容エルレンマイヤーフラスコに２５鰭の３−１
）の固形栄養培地（生産培養）を入れ、これに新鮮型で
１．０ｇの種培養細胞を植え付け、実施例１と同様にし
て、培養し、細胞の増殖量を算出した。
３−３）光を遮った暗所における培養
光を照射することなく、暗所において培養を行なったこ
と以外は３−２）と同様にして、培養を行ない、細胞の
増殖量を算出した。
と以外は３−２）と同様にして、培養を行ない、細胞の
増殖量を算出した。
３−４）レセルピン含有量の測定
実施例１と同様にして、乾燥細胞の量を測定し、さらに
レセルピン含有量を求め、そしてレセルピン含有量を算
出した。
レセルピン含有量を求め、そしてレセルピン含有量を算
出した。
（４）実験の結果
実験の結果は第２表に示すさおりであった。
（以下余白）
〔発明の効果〕
細胞の組織培養によってラウウオルフイア系アルカロイ
ドを効率よく生産することができる。
ドを効率よく生産することができる。
細胞の組織培養によってラウウオルフイア系アルカロイ
ドを永続的に安定して生産することができる。
ドを永続的に安定して生産することができる。
第１図は、蛍光灯の光の波長と強度分布の関係を示す図
表、第２図は、培養細胞の培養日数と生育の関係を示す
図表、そして第３図は、培養細胞の培養日数とレセルピ
ン含有率の関係を示す２表である。
表、第２図は、培養細胞の培養日数と生育の関係を示す
図表、そして第３図は、培養細胞の培養日数とレセルピ
ン含有率の関係を示す２表である。
Claims (8)
- （１）ラウウオルフイア属植物の培養細胞を、光の照射
の下に培養するに際して、培養を、緑色光蛍光灯または
黄色光蛍光灯の照射の下に行ない、それによって培養細
胞におけるラウウオルフイア系アルカロイドの蓄積量を
増大すること、および培養細胞からラウウオルフイア系
アルカロイドを分層採取することを特徴とするラウウオ
ルフイア系アルカロイドの製造法。 - （２）培養を緑色光蛍光灯の照射の下に１６〜２８日間
行なうことを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の
ラウウオルフイア系アルカロイドの製造法。 - （３）培養を黄色光蛍光灯の照射の下に２０〜２８日間
行なうことを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の
ラウウオルフイア系アルカロイドの製造法。 - （４）ラウウオルフイア属植物が、ラウウオルフイア・
セルペンチナまたはラウウオルフイア・ボミトリアであ
り、そしてラウウオルフイア系アルカロイドが、レセル
ピンであることを特徴とする特許請求の範囲第１項ない
し第３項のいずれかに記載のラウウオルフイア系アルカ
ロイドの製造法。 - （５）光を遮った暗所、あるいは緑色光蛍光灯、黄色光
蛍光灯または赤色光蛍光灯の照射の下に継代培養したラ
ウウオルフイア属植物の培養細胞を、青色光蛍光灯また
は複写用蛍光灯の光の照射の下に培養し、それによって
培養細胞におけるラウウオルフイア系アルカロイドの蓄
積量を増加すること、および培養細胞からラウウオルフ
イア系アルカロイドを分離採取することを特徴とするラ
ウウオルフイア系アルカロイドの製造法。 - （６）培養を青色光蛍光灯の照射の下に１６〜２８日間
行なうことを特徴とする特許請求の範囲第５項に記載の
ラウウオルフイア系アルカロイドの製造法。 - （７）培養を、複写用蛍光灯の照射の下に２０〜２８日
間行なうことを特徴とする特許請求の範囲第５項に記載
のラウウオルフイア系アルカロイドの製造法。 - （８）ラウウオルフイア属植物がラウウオルフイア・セ
ルペンチナまたはラウウオルフイア・ボミトリアであり
、そしてラウウオルフイア系アルカロイドがレセルピン
であることを特徴とする特許請求の範囲第５項ないし第
７項のいずれかに記載のラウウオルフイア系アルカロイ
ドの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60196108A JPS6258993A (ja) | 1985-09-06 | 1985-09-06 | 細胞の組織培養によるラウウオルフイア系アルカロイドの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60196108A JPS6258993A (ja) | 1985-09-06 | 1985-09-06 | 細胞の組織培養によるラウウオルフイア系アルカロイドの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6258993A true JPS6258993A (ja) | 1987-03-14 |
| JPS6351680B2 JPS6351680B2 (ja) | 1988-10-14 |
Family
ID=16352366
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60196108A Granted JPS6258993A (ja) | 1985-09-06 | 1985-09-06 | 細胞の組織培養によるラウウオルフイア系アルカロイドの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6258993A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2002306436A1 (en) | 2001-02-12 | 2002-10-15 | Asm America, Inc. | Improved process for deposition of semiconductor films |
| US7186630B2 (en) | 2002-08-14 | 2007-03-06 | Asm America, Inc. | Deposition of amorphous silicon-containing films |
-
1985
- 1985-09-06 JP JP60196108A patent/JPS6258993A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6351680B2 (ja) | 1988-10-14 |
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