JPS6295463A - 生物学的反応生成物の分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 光凱■旦血 主粟上辺且里豆■ 本発明は、生物学的反応において得られる生物学的反応
生成物／未反応物混合液から、固液分離器具をもちいて
生物学的反応生成物のみを簡便に分離取得するＢ／Ｆ分
離方法に関する。

丈来立皮逝 生物学的反応を利用する典型的な分析法においては、測
定すべきアナライトを相互作用性物質と接触させて反応
させ、その反応の度合いに応じて検出可能な変化を生じ
させ、この変化を光学的にあるいはその他の適切な手段
で検出する。

アナライトと相互作用性物質との反応生成物（単にｒＢ
Ｊ又は「Ｂ成分」とも言う）から検出可能な変化を導く
、例えば、酵素免疫法のサンドインチ法等において、Ｂ
と共存する未反応標識物（単に「Ｆ」又は「Ｆ成分」と
も言う）からＢのみを分離取得する必要があり、当業者
はいかに効率よ＜　Ｂ／Ｆ分離を遂行するかに腐心して
いる。ろ紙による分離は、ろ紙の目づまりを生じて非効
率的である。そのためポリスチレンボール、ガラスピー
ズ、ナイロンビーズ等に相互作用性物質を固定化して、
反応生成物（Ｂ）を物理的大粒子として取得する方法が
提案された。この方法によれば３〜７嘗鳳の粒子径をも
つビーズ（Ｂ成分）を用いて、ピンセットによりＢ成分
のみを選別することができ、Ｂ／Ｆ分離に不可欠な次の
水洗操作も簡便に行うことができる。しかしながら、粒
子径を大きくすると、相対的に表面積が小さくなり、固
定化すべき相互作用性物質の量は少なくなる。その結果
、生物学的反応に長時間を要したり、反応温度を高くす
る必要が生じる。

相互作用性物質の量を増やして反応効率を高めようとす
れば、ビーズの粒子径を１０〜１０００μｍ程度に小さ
くしなければならないが、その場合には遠心分離等によ
ってＢ／Ｆ分離を行う必要がある。又、このような小粒
子径のビーズをロスなく効率的に洗浄することはガレい
。このように、従来技術においては、反応効率を高める
ためにはＢ／Ｆ分離及び水洗の効率を犠牲にしなければ
ならず、Ｂ／Ｆ分離や水洗工程の改良を図ろうとすれば
、反応効率アップをあきらめなければならないという相
反する解決手段に頼らざるを得なかった。一方、本発明
者等は先に特定素材により特定の構造に設計されたろ渦
層を特徴とする固液分離器具を案出した（特開昭５９−
１５８７８４）。この固液分離器具を用いると、液体の
固形分が体積ろ渦現象により、ろ渦層の体積全体にわた
って立体的に収容される結果、液体のみを効率よく分離
取得することができる。

衾肌皇且力 本発明は、体積ろ渦現象を利用することにより、生物学
的反応終了後に得られるＢ／Ｆ混合液から、未反応アナ
ライ）　（Ｆ）を含む液体成分を除き、反応生成物（Ｂ
）のみを分離取得することを目的とする。

また、本発明は遠心分離を行うことなく、ビーズの粒子
径に左右されない、反応生成物（Ｂ）の簡便な分離取得
法を提供することを目的とする。

また、本発明は、その使用に際し何らｙ１４東を要する
ことなく　Ｂ／Ｆ含佇液体からＢを効率よく分離取得す
ることができるＢ／Ｆ分離方法を提供することを目的と
する。本発明はまた、簡便にかつ短時間でＢ／Ｆ分離を
行うＢ／Ｆ分離方法を提供することを目的とする。

衾且夏盪戊 本発明は、液体の注入口及び排出口を備えた固液分離器
具を用いて、Ｂ／Ｆ含有生物学的反応混合物液体からＢ
を分離するＢ／Ｆ分離方法において、（１）固液分離器
具が繊維質素材からなる粒子収容層とこの粒子収容層よ
り密な多孔性層とからなる分離シート、及びこの分離シ
ートを収納する、液体不透過性の材料よりなる支持部材
からなり、（２）粒子収容層の空隙率が約９０％以上で
あり、（３）多孔性層の空隙率が約６５〜９５％であり
、（４）支持部材の内壁と分離シートとの接触面が密着
状態を形成しており、 （５）Ｂ／Ｆ含有反応混合物液体を前記注入口と排出口
との圧力差が、約０．００１〜１．０気圧の間の圧力差
で送液し、 （６）次いで、分離シートを水洗する、ことを特徴とす
る。

本発明において、■「生物学的反応」■「反応生成物」
■「Ｂ」または「Ｂ成分」とは、それぞれ■生物学的活
性物質の結合反応、例えば、抗原抗体反応、ホルモン等
とその受容体の反応、もしくは、蛋白質特異結果合反応
等、■前記反応により生成した物質、■前記反応により
生成した反応結合物をいう。

また、「未反応アナライト」、「Ｆ成分」とは前記反応
における未反応物質で固相に固定されていない物質、例
えば、抗原、抗体、ホルモン等、受容体、特異結合性蛋
白質、およびこれらの標識物質をいう。

さらにｒＢ／Ｆ含有生物学的反応混合物液体」あるいは
、ｒＢ／Ｆ含有液体」とは、上記生物学的反応を、それ
に関与するいずれかの成分を固相に結合せしめた条件下
で反応させた時の反応混合物を含有する液体をいう。そ
の結果生じた固相上の反応結合物が上記ｒＢＪまたは「
Ｂ成分」に相当する。

本発明方法において使用される固液分離器具は、一端に
液体注入口及び液体排出口を備えた、液体不浸透性材料
からなる中空支持部材；及びこの中空支持部材の内部空
間を前記注入口側と前記排出口例とに仕切るように延び
、かつ、該中空支持部材に固定されている分離シートか
ら構成される。

本発明において、分離シートは、中空支持部材の内部空
間をその横断面によって仕切るように、横断面全域に亘
って延び、内部空間を液体の注入口側空間と排出口側空
間とに分割し、かつ、中空支持部材の内壁に密着して固
定されている。本発明において「固定」とは、中空支持
部材の内壁と分離シートとが接触して作る接触面が、液
体の流れに耐えることができる程度に不動伏態を維持し
ていることを意味する。

分離シートは繊維質素材からなる粒子収容層及びこの粒
子収容層より密な多孔性層とを好ましくは一体化して構
成される。分離シートは、その粒子収容層が液体注入口
側空間に多孔性層が液体排出口側空間に向かうように、
支持部材内壁に密着固定される。粒子収容層が繊維質素
材から構成され、繊維質素材がつくる空隙はランダムに
配置されている。従って、Ｂ／Ｆ含有液体を注入口から
供給すると、Ｂ成分はそのランダム配置の空隙に立体的
に収容される。これに対し、Ｆ成分は、排出口に向かっ
て方向性をもった流れを作るので、Ｂ成分とＦ成分との
移動に一種のラグが生じる。

その際、適当な加圧又は減圧手段により、注入口側と排
出口側との間に若干の圧力差を与えることが重要である
。この圧力差によって、Ｆ成分は粒子収容層のボイド内
に滞留することなく、速やかに排出口側に設けられた多
孔性層に移動する。

言うまでもないことであるが、本発明における固定は、
前記接触面において、液体がＢ成分を含んだまま排出口
へ移動するバイパスを与えてはならない。すなわち、分
離シートは、液体のそのようなバイパスを許さないよう
に、中空支持部材の内壁に対して密着していることが重
要である。

分離シートの粒子収容層に使用することができる繊維質
素材としては、ガラス繊維、石綿などの無機繊維；木綿
、パルプ、絹などの天然有機繊維；ビスコースレーヨン
、を同アンモニアレーヨン、セルロースアセテート、部
分ホルマール化ポリビニルアルコール、ポリエチレン、
ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリ
エステル類（ポリエチレンテレフタレート等）などの半
合成繊維；合成繊維；これらの繊維から作られた織物、
編物又は不織布；あるいはこれらの繊維から作られた網
目状素材の積層体等が典型的である。

粒子収容層に用いろる織物生地（織布）としては特開昭
５５−１６４３５６、特開昭５７−６６３５９等に記載
された広範囲の種類の織物生地があげられる。

織物生地のうちではたて（経）糸とよこ（緯）糸とで織
った平織物が好ましく、平織物のうちでは細布生地、全
中生地、ブロード生地、ボブリン生地等が好ましい。

織物生地を構成する糸としては後述する編物生地を構成
する糸と同様の素材からなる糸があげられる。糸の形態
としてはフィラメント糸、紡績糸（加捻糸）のいずれを
も用いることができ、これらのううでは紡績糸が好まし
い。織物生地の糸の太さは綿紡績糸番手で表して約２Ｏ
３から１５Ｏ３、好ましくは約４Ｏ３から約１２Ｏ３相
当の範囲、または絹糸デニールで表して約３５Ｄから３
００Ｄ、好ましくは約４５Ｄから約１３０Ｄ相当の範囲
、織物生地の厚さは約１００μｍから約５００μｍ、好
ましくは約１２０μｍから約３５０μｍの範囲である。

また粒子収容層に用いろる編物生地（編布）としては広
範囲の種類の編物生地があげられ、それらのうちではた
て（経）メリヤスとよこ（緯）メリヤスが好ましい。た
てメリヤスとしては一重アトラス場生地、トリコット編
生地、ダブルトリコット編生地、ミラニーズ編生地、ラ
ッシェル編生地等を用いることができ、よこメリヤスと
しては平場生地、パール編生地、ゴム編生地、両面編生
地等を用いることができる。編物生地を編成する糸とし
ては綿、絹、羊毛等の天然繊維の糸、ビスコースレーヨ
ン、キュプラ等の再生セルロース、セルロースジアセテ
ート、セルローストリアセテート等の半合成有機ポリマ
ー、ポリアミド（各種のナイロン類）、アセタール化ポ
リビニルアルコール（ビニロン等）ポリアクリロニトリ
ル、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリ
プロピレン、ポリウレタン等の合成有機ポリマーの細繊
維からなる糸または単繊維からなる糸、天然繊維と再生
セルロース、半合成または合成有機ポリマー繊維との混
合繊維からなる糸があげられる。糸の形態としてはフィ
ラメント糸、紡績糸（加捻糸）のいずれをも用いること
ができ、これらのうちでは紡績糸が好ましい。編物生地
の糸の太さは綿紡績糸番手で表して約４Ｏ３から約１５
Ｏ３、好ましくは約６Ｏ３から約１２Ｏ３相当の範囲、
または絹糸デニールで表して約３５Ｄから約１３０Ｄ、
好ましくは約４５Ｄから約９０Ｄ相当の範囲である。編
物生地の編成工程時のゲージ数としては、約２０から約
５０の範囲、編物生地の厚さは約１００μｍから約６０
０μｍ、好ましくは約１５０μｍから約４００μｍの範
囲である。

これらの織物または編物生地は水洗等の脱脂処理により
少なくとも糸′！Ａ造時または織物装造時または編物編
成時に供給または付着した油脂類を実質的に除去した織
物または編物生地である。その織物または編物生地は特
開昭５７−６６３５９に開示の物理的活性化処理（好ま
しくはグロー放電処理またはコロナ放電処理等）を生地
の少なくとも片面に施すか、あるいは特開昭５５−１６
４３５６、特開昭５７−６６３５９等に開示の親水性ポ
リマー含ｔ％処理等の親水化処理、またはこれらの処理
工程を逐次実施することにより、親水化することができ
る。

これらの繊維質素材で構成される粒子収容層は、空隙率
として、約９０％以上、好ましくは９５％以上、さらに
好ましくは９５〜９８％程度のものが実用的である。又
これらの繊維質素材は、約０．１〜５μｍの太さ、約１
００〜４０００μｍの長さをもつものが本発明の目的に
有利であり、常法によって、例えば１０〜２００メツシ
ユ（タイラー規格）程度のフルイを用いて分級すること
により、所望の繊維質素材を得ることができる。空隙率
は収容すべきＢ成分の粒径等により選択されるべきであ
る。例えばＢ成分の粒径が約１０μｍ程度であって、繊
維質素材がガラス繊維の場合、約０．　　Ｏｌ　〜０．
　２５　ｇ／ｃ＋ｄの密度、特に０．０５〜０．１ｇ／
ｃｕｔの密度をもつものが望ましい。

分離シートを得るには、例えば密度０．０６ｇ／ｃｊに
調製されたガラス繊維を円板状に打ち抜いて粒子収容層
とし、これを約０．２１ｇ／ｃｒＡの密度を持つように
調製されたガラス繊維を同しく円板状に打ち抜いて得ら
れる多孔性層に積層すればよい。この際、抄紙によって
粒子収容層と多孔性層とを一体成形してもよい（特開昭
５９−５１７１７参照）。

本発明において固液分離器具に用いられる中空支持部材
は、その内部に前記分離シートを収容することができる
空間をもっており、液体不ｉＵＭ性材料から構成される
。中空支持部材の形状は、分離シートを収容することが
でき、かつ、分離シートとの接触面において前記のよう
な液体のバイパスを作らないように、その内壁に分離シ
ートを密着固定した状態を維持できるものであれば、ど
のような形状であってもよい。最も簡便で使い腓手のよ
い形状は、細長い円筒状のものである。排出口を本体よ
り小さい孔径に設計してもよい。

中空支持部材は、その一端に液体の注入口を備え、他端
に排出口を備えている。前記分離シートは、該支持部材
の横断面の全域に亘って延びており、その内壁に固定さ
れることによって、内部空間を注入口側と排出口側とに
分割する。注入口は、液体を供給することができる開口
部を形成していれば十分であり、その形状や構造を問わ
ない。

中空支持部材を構成する材料は、液体不’／Ｌｉ３性、
不遇過性であり、例えば、常温以上のガラス転移点を有
する高分子物質、プラスチック、ガラス、セラミック等
から適宜選択される。

分離シートは、粒子収容層の下に、すなわち、排出口側
表面にさらに多孔性層を有する。多孔性層には、粒子収
容層に収容されない未反応アナライトが補足される。多
孔性層はより粗な粒子収容層と一体化されているため生
じる吸引力により、Ｆ成分が粒子収容層から多孔性層へ
と移動する動きを促進する作用をもっている。多孔性層
は、繊維質又は非繊維質多孔性材料から構成される。多
孔性層は、Ｂ成分を収容するのに使用される粒子収容層
よりも密であり、空隙率で言えば、繊維質素材がガラス
繊維の場合、約６５〜９５％程度、好ましくは７０〜９
３％の範囲が実用的である。例えば、繊維質素材がガラ
ス繊維の場合、このガラス繊維でできた多孔性層は、Ｏ
９１〜０．５ｇ／Ｃ−程度の密度をもつものが望ましい
。多孔性層に使用される繊維質素材としては、粒子収容
層の構成材料として例示した繊維質素材を、圧縮等によ
り、上記密度あるいは空隙率の範囲に調整して使用する
ことができる。非繊維質多孔性材料の典型的なものとし
ては、ポリカーボネート、ポリアミド、セルロースエス
テル等のポリマーから公知の方法で得られるプラッシュ
ポリマーがある。プラッシュポリマーとしては「ミクロ
フィルター」　（商品名、富士写真フィルム製）、「ミ
リポアー」　（商品名、ミリポア・コーポレーション裂
）、「メジリセル」　（商品名、ゲルマン・インストル
メント社製）として市販されているもの等が適当である
。これらの多孔性材料については、特開昭４９−５３８
８８、同１６４３５６／８０、米国特許３，９９２．１
５８号等に詳説されている。また、これらの多孔性材料
を用いる層形成の詳細は、本発明者らの前記出願に記載
されている。

Ｂ／Ｆ含有液体、例えば、サンドインチ法によってえら
れるＢ／Ｆ含有液体試料は、液体注入口から、直接に、
あるいは、例えば、ピペット、ディスペンサ、注射器等
の適当な供給器具を用いて分離シートに供給される。供
給された試料は、粒子収容層において体積ろ過を受ける
結果、その内部にＢ成分が収容され、Ｆ成分だけが、多
孔性層へ移動してい（。この際、本発明においては、Ｆ
成分の移動を促進するために、適当な加圧又は減圧手段
により、ゆるやかな圧力差を生じさせるのが好ましい。

加圧又は減圧手段は、通常、外部から加圧又は減圧のた
めの慣用装置を用いて行われる。本発明においては、固
液分離器具がそのような加圧又は減圧手段を備えていて
もよい。

Ｆ成分を多孔性層から排出口へ向かってより迅速に移動
させるためのこの圧力差は、Ｂ／Ｆ分離が体積ろ渦現象
に基づいて行われるためにはじめて可能となった。表面
ろ過によってＢ／Ｆ−７３−離が遂行される従来技術に
あっては、加圧又は減圧を試みると、ろ渦層の表面にと
どまった状態のＢ成分が圧力等によって膜面上に集積し
て膜面を被覆し、時間の経過と共に、ろ渦層の目づまり
が生しる。その結果、さらにろ過を続行することは不可
能である。

本発明において、固液分離器具にかかる圧力差は、液体
試料の粘度、粒子収容層や多孔性層の素材、密度、空隙
率等によって適宜選択されるが、その上限は圧力差にし
て約１気圧である。

圧力下、Ｆ成分はこうして分離シートから排出され、分
離シートには粒子収容層のランダム空間に立体的に収容
された状態でＢ成分が残る。次いで、液体注入口から水
を供給し、分離シートの洗浄を行うために重要な操作で
ある。この水ｆｃｔｆｆｉ作により、粒子収容層に吸着
されて残っているかもしれないＦ成分やその他の妨害物
質を完全に除去することができる。Ｂ成分は粒子収容層
の空間に立体的に捕捉されているので、洗浄操作を相当
ラフに行っても何ら支障がなく、しがち充分に洗浄を行
うことができる。

洗浄後、分離シート中に分離取得された状態のＢ成分は
固液分離器具に装着したまま直接、あるいは分離シート
のみを取り出して常法により分析に付される。

昨月 本発明のＢ／Ｆ分離法によれば、従来種々の工夫を要し
ていたＢ／Ｆ分離が極めて簡便に行われる。従ってＢ成
分だけを非常に効率よく分離取得できるので信号形成反
応の環境を同一化することができ、常に同一条件で信号
を読みとることができる。その結果、再現性に優れた正
確な分析結果を得ることができる。

！ＪｔＬＬ １−１９粒子収容層の調製： 東洋ろ紙製ガラス繊維ろ紙ＧＡ−１００をカッターで２
ｍ／ｍ角に裁断し、その２ｇを水８００ｍ１に加え、エ
ースホモゲナイザー（日本精機製作新製ＡＭＩＩ型）で
分散（１５０００ｒｐｍ、１０分間）した。分散物は、
タイラー規格のふるい（メツシュ寛１２）を用いてこし
わけ、繊維のかたまりを除去した。分散物１０ｍ１を取
って乾燥して秤量したところ、分散物中の固形分量は１
５ｍｇであった。

次にこの分散物を攪拌下その２ｍｌを取り、ミリタイタ
ープレート　（０，２２μｍメンブランフィルタ−底の
マイクロタイクープレート（９６穴川）：ミリボアー社
製）の一つの穴に供給しつつ、吸引ろ過しガラス繊維抄
ＩＥ層を形成させる。必要な数だけ抄紙した後凍結乾燥
して、粒子収容層をそなえたミリタイタープレートを得
た。この場合粒子収容層の厚みは７００μｍ、空隙率は
約９６％であった。

１−２．Ｔ４抗体固定化アガロースの調製二ＣＮ　Ｂ　
ｒ　活性化セファロース４Ｂ（ファルマシアファインケ
ミカルズ社ｉＩｉ！りに常法により抗Ｔ４抗血清（抗Ｔ
、ウサギ血清：特開昭５８−１８１６７、実施例（Ｉ−
３）の方法により調製）から開裂したＩｇＧフラクショ
ンを固定化し、Ｔ４抗体固定化アガロースを調製した。

固定化Ｉｇ　Ｇｉは、５ｍｇ１５０ｍｉ！（ｗｅｔ）湿
潤セファロースゲルであった。

１−３３粒子収容層を用いたＢ／Ｆ分離とそれを用いた
イムノアッセイ法： 実施例１−２で開裂したＴ、、抗体固体化アガロースｗ
ｅｔゲル１ｍｆｆを１０ｍｌのＯ，ＩＭグリンン＃’Ａ
　ｆ！ｉ　ｌ夜ｐｔ（９，０に分散したものから、１ｍ
ｌずつを試験管に分注し、これに、西洋ワサビ由来のペ
ルオキシダーゼ（シグマ社製）にＴ４標識したもの（特
開昭５７−２００８６２　、実施例１−（２）の方法に
よる。）をペルオキシダーゼ活性でｌ　　ＩＵずつを添
加し、さらにそれぞれＴ４を０．１．０．２．０，４．
０，８．０゜１６．０　　μｇ／ｄ　ｊ２　　含有の上
記グリシン緩衝液（０゜１％ＢＳＡ含有）を各２００μ
βずつ添加し、３７℃で１５分間反応させた。

次に反応混合物を、実施例１−１で調製したミリタイタ
ープレートを用いて固形分ろ過を行い、さらに、上記緩
衝液１ｍＩ！で洗浄した。

ついで、３／１０００％　Ｈ２Ｏ２，４／１００％、オ
ルト・フェニレンジアミン含有のｐｉ（５，０１Ｍ・ク
エン酸・リン酸・謹衝、Ｙｅｉ、２００μ２をミリタイ
タープレートに分圧し、２５℃で１０分反応させる。正
確に３０分後に５００μｌの２．ｌｌ−Ｈ２ＳＯ４を各
穴に圧下し、反応を停止し、蒸留水１ｍｌで各穴に洗浄
し、反応液、洗浄液を混合して各穴ごとに補集する。補
集した液を波長４９２ｎｍで吸光度を測定した。結果を
下記第１表に示す。

なお、ミリタイタープレートを用いるがわりに、セファ
ロースゲルを遠心分離じ、細心の注意をはらって洗浄し
、試験管内で同量のペルオキシダーゼ基質と停止液を用
いた場合の上澄の吸光度の結果を参考例として第１表に
列記した。

」」二に 本発明 ０Ｄ４９２ｎＩ＋、　　１．２１５　１．０７０　０．
８８９　０．７１．２　０．４８２　０．３０２参考例 ○Ｄ４ｇ２１１１ＩＩＯ，６３７０，６２８０，４５９
０，３７５０，３２６０，３１０第１表より、本発明は
参考例に比べて、検出反応の効率もよく、又、洗浄効果
がよいため、検量線のグイナミノクレンジが大きく取れ
ていることがわかった。

災施凱Ｉ ２−１．抗体（抗体α−フェトプロティ刈固定化マイク
ロカプセルの開裂： ポリスチレンスルホン酸（平均分子量３０．０００）１
０％水溶液２５ｇに、尿素２．５ｇ、レヅルシン０゜２
５ｇ及び塩化アンモニウムＱ、３ｇを添加し、攪拌熔解
した。また、ジインプロピルナフタレン５０ｇ１塩素化
パラフイン１．５ｇの混合物を２５ｇ取り、上記水溶液
中に混合、乳化し、ドロップサイズが約５μｍになるよ
うに調製した。更に３７％ホルムアルデヒド水／８液６
．４ｇを加え、６０℃で２ｈｒ加熱した。

生成したカプセルは、蒸留水で２回洗浄した。

得られたカプセル１．０ｇを採り、１０ｍ１のリン酸緩
衝液（ｐｔ！７．　５）　　１０ｍ７！にサスペンドし
、次に２５％グルタルアルデヒド水／８液を１００μ７
！を昆合し、２５°Ｃでｌｈｒ反応させた。反応後、リ
ン酸緩衝液で洗浄した。次に、抗α−フェトプロティン
抗体（マイルス社製）２ｍｇ相当を１ｍｌの生理的食塩
水に溶解し、上記カプセル２ｍｎ　　（０，２５％）と
混合し、３７°Ｃでｌｈｒインキユヘートした。

反応後、−昼夜冷蔵庫に放置し、０．２％グリシン含有
食塩水で２回洗浄し、次いで、１ｍｌの３％牛血清アル
ブミンを含むリン酸緩衝液で再浮遊してカプセル試薬を
得た。

２−２゜ 種々の６７度（０，０，２，Ｏ１５，１，０，２，０゜
５．０．１０．Ｏｎｇ／ｍｎ）にα−フェトプロティン
を含有する試料２００μｌを試験管に取り、上記マイク
ロカプセル試薬を１００μβずつ添加した。

さらに、ＰＯＤ標識抗α−フェトプロティン抗体（マイ
ルス社製）をＰＯＤ活性として２Ｕずつ添加し、３７℃
で１時間インキュベーションした。これを、実施例１−
１で調製した固体分離層を有するマイクロタイタープレ
ートでろ過し、ついで、実施例１−３と同様の方法で固
定化した。回収されたＰＯＤ活性を測定した。その結果
を第２表に示す（ただし、ＰＯＤ発色時間は３０分）。

思じし芝 本性では、遠心分離によるマイクロブセルの洗浄は、き
わめて困Ｈで、定量的な」１定：よ期待できなかった。

主■旦墾ｌ ／！、宛明の３／Ｆ分雅万去：＝、煩准；通口・分難１
咋を不要二ニー、ノイズの；い３式５・の分難を１式す
る。木宛舅の方法：＝、エンザイムイムノアフセイ、去
や、状争的免笈叉芯、サンドインチ！：″４の生功学を
反芯終了後ＤＢ　／　Ｆ含有皮体かる３式分を分難取溝
するのに有用である。また、本宛男の方法を２羽じた店
柔得ろれるＢ成分保育多几住１：＝、Ｂ２２式そ検出す
るためのシグナル又：＝ングナル蒲駆体８生式させる１
叉芯に対して６力て：ｆにのよい場を与える。ぢＩ上の
制杓二こよってもつぼるＢｉ分を」１定するシステムを
采用するナンドインチ去にδいて、本宛男、：￥Ｆ：こ
効果的である。

弁理土砂用五部 （＋Ｈ力ＩＩ危〕

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、液体の注入口及び排出口を備えた固液分離器具を用
   いて、Ｂ／Ｆ含有生物学的反応混合物液体からＢを分離
   するＢ／Ｆ分離方法において、 （１）固液分離器具が繊維質素材からなる粒子収容層と
   この粒子収容層より密な多孔性層とからなる分離シート
   、及びこの分離シートを収納する、液体不透過性の材料
   よりなる支持部材からなり、（２）粒子収容層の空隙率
   が約９０％以上であり、（３）多孔性層の空隙率が約６
   ５〜９５％であり、（４）支持部材の内壁と分離シート
   との接触面が密着状態を形成しており、 （５）Ｂ／Ｆ含有生物学的反応混合物液体を前記注入口
   と排出口との圧力差が、約０．００１〜１．０気圧の間
   の圧力差で送液し、 （６）次いで、分離シートを水洗する、 ことを特徴とするＢ／Ｆ含有生物学的反応混合物液体か
   らＢを分離するＢ／Ｆ分離方法。