JPS6312285A - Ｂ細胞分化因子をコードする遺伝子 - Google Patents
Ｂ細胞分化因子をコードする遺伝子Info
- Publication number
- JPS6312285A JPS6312285A JP61157227A JP15722786A JPS6312285A JP S6312285 A JPS6312285 A JP S6312285A JP 61157227 A JP61157227 A JP 61157227A JP 15722786 A JP15722786 A JP 15722786A JP S6312285 A JPS6312285 A JP S6312285A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- base sequence
- formula
- polypeptide
- factor
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5412—IL-6
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
Ｅ′Ｒ，明の利用分野］
本発明は、Ｂｍｍ胞化化因子関する。さらに詳しくは、
マウスのＴ１１１胞ハイプリドーマが産生ずるＢ細胞分
化因子および該因子をコードするＯＮ＾配列に関する。
マウスのＴ１１１胞ハイプリドーマが産生ずるＢ細胞分
化因子および該因子をコードするＯＮ＾配列に関する。
［従来の技術］
ＢＩＩＩｌｌｌａ分化囚子（ＴＲＩ’因子 Ｔ ｃｅｌ
ｌ ＲｅｐｌａｃｉｎｇＦａｃｔｏｒとも呼ばれる）は
、血液中の■細胞系列から産生されＢ細胞に直接作用し
、これを抗体産生細胞に分化・誘導するポリペプチドか
らなる因子である。
ｌ ＲｅｐｌａｃｉｎｇＦａｃｔｏｒとも呼ばれる）は
、血液中の■細胞系列から産生されＢ細胞に直接作用し
、これを抗体産生細胞に分化・誘導するポリペプチドか
らなる因子である。
抗体は、生体に侵入する細菌、ウィルスあるいは癌細胞
などの生体異物と反応し、これらを不活性化したり排除
したりする機能をもっている。
などの生体異物と反応し、これらを不活性化したり排除
したりする機能をもっている。
Ｂ細胞分化因子（以下ＴＲＦと略づ）は、特定抗原（牛
体異物）に特異的な８細胞クローン即ら特定抗原に感作
されたＢ細胞クローンを抗体産生細胞に誘導して、該抗
原に対する抗体を産生さぜることから、ＴＩＩＦは、種
々の感染症および癌の治療の面から有用な物質である。
体異物）に特異的な８細胞クローン即ら特定抗原に感作
されたＢ細胞クローンを抗体産生細胞に誘導して、該抗
原に対する抗体を産生さぜることから、ＴＩＩＦは、種
々の感染症および癌の治療の面から有用な物質である。
即ら、ｒＲＦは、この因子の生体内での過少によってひ
きおこされると考λられる自己免疫疾患や免疫不全症等
の診所、治療のみならず種々の感染症や癌の治療に利用
できることが期待される。
きおこされると考λられる自己免疫疾患や免疫不全症等
の診所、治療のみならず種々の感染症や癌の治療に利用
できることが期待される。
ＴＲＦに関してはこれまでいくつかの研究がなされてい
る。例えば、［Ｒ「産生細胞として知られているＴｉ１
ｌ胞ハイブリドーマ８１５１に１２株の培養液がらＴｎ
Ｆ活性を有する物質の精製が試みられ、温度およびＭ性
ｐＨで比較的安定な、単量体の分子印が１８．０００乃
至１９．０００の糖蛋白質であろうと惟定されている（
Ｔａｋａｔｓｕ、に、 ｅｔ、 ａｔ、、 Ｊ、Ｉｎ
＋ｍｕｎｏ１．１３４３８２、１９８５．１ｌａｒａｄ
ａ、 Ｎ、 ａｔ、 ａｌ、、 Ｊ、Ｉ＋＋＋ｎ＋ｕｎ
ｏｌ。
る。例えば、［Ｒ「産生細胞として知られているＴｉ１
ｌ胞ハイブリドーマ８１５１に１２株の培養液がらＴｎ
Ｆ活性を有する物質の精製が試みられ、温度およびＭ性
ｐＨで比較的安定な、単量体の分子印が１８．０００乃
至１９．０００の糖蛋白質であろうと惟定されている（
Ｔａｋａｔｓｕ、に、 ｅｔ、 ａｔ、、 Ｊ、Ｉｎ
＋ｍｕｎｏ１．１３４３８２、１９８５．１ｌａｒａｄ
ａ、 Ｎ、 ａｔ、 ａｌ、、 Ｊ、Ｉ＋＋＋ｎ＋ｕｎ
ｏｌ。
虱３９４４．１９８５および特開昭６０−２３７０２２
など〕。
など〕。
しかしながら、培養液中のＴＲＦ含聞は少なく、多段の
精製過程（硫安沈澱、陰イオン交換クロマト、グル濾過
、ＩＩＰＬｃ１スラブ電気泳りＪ１逆相１１ＰＬｃ、レ
クヂンアフィニティー力ラムクロマトなど）を経て分取
できる物質は極微量であるため、その構造（アミノ酸配
列）も物理化学的性質も明確にされるには↑っていない
、、また、ＴＲＩ’の生産に関与する遺伝子（ＤＮＡ配
列）も知られていない。なお、上述先行技術の精製ＴＲ
ｒは、ＢＣＧＦ （Ｂ ｃｅｌｌ ｃｒｏｗｔｈＦａｃ
ｔｏｒ ： Ｂ Ｉｔ胞増殖囚因子■の活性も有するこ
とが示されている。また、複数のＴＩｔＦの存在も示唆
されている。
精製過程（硫安沈澱、陰イオン交換クロマト、グル濾過
、ＩＩＰＬｃ１スラブ電気泳りＪ１逆相１１ＰＬｃ、レ
クヂンアフィニティー力ラムクロマトなど）を経て分取
できる物質は極微量であるため、その構造（アミノ酸配
列）も物理化学的性質も明確にされるには↑っていない
、、また、ＴＲＩ’の生産に関与する遺伝子（ＤＮＡ配
列）も知られていない。なお、上述先行技術の精製ＴＲ
ｒは、ＢＣＧＦ （Ｂ ｃｅｌｌ ｃｒｏｗｔｈＦａｃ
ｔｏｒ ： Ｂ Ｉｔ胞増殖囚因子■の活性も有するこ
とが示されている。また、複数のＴＩｔＦの存在も示唆
されている。
このように、従来Ｂ細胞を分化・誘導する因子（ＴＲ「
）の構造は明らかでなく、てれを天吊に生産して実用に
供することは不可能であった。
）の構造は明らかでなく、てれを天吊に生産して実用に
供することは不可能であった。
［発明が解決しようとする問題点］
即ち、本発明は、ＴＲｒ高生産細胞からＴ ＲＦ ｍ
Ｉｔ Ｎ八を単離し、ＴＩＩＦ生産を支配Ｊる［旧遺伝
子（［」１らＤＮＡ配列）を明らかにすると共に、１８
１分子の構造（アミノ酸配列）を明らかにすることによ
り、組換えＤＮＡ技術でＴＲＩの人ｍ生産および医９５
等への応用の可能性を提供しようとするものである。
Ｉｔ Ｎ八を単離し、ＴＩＩＦ生産を支配Ｊる［旧遺伝
子（［」１らＤＮＡ配列）を明らかにすると共に、１８
１分子の構造（アミノ酸配列）を明らかにすることによ
り、組換えＤＮＡ技術でＴＲＩの人ｍ生産および医９５
等への応用の可能性を提供しようとするものである。
［問題点を解決するための貝休的手段］本発明者らは、
既に５ｉｄＯｒａＳ、 Ｐ、らによって樹立されている
ＤＩＧ１誘導囚子８Ｃ叶γ産生細胞である一ｒｍ胞ラビ
ライン２．１９（Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｉｕｕｎｏｌ、、
ｌ５５８６〜５９３．１９８５）が、従来用いられてい
るＴｌ胞ハイブリドーマ８１５１に１２株よりもＴＩ）
を約１００倍Ｍ生産することを見出した。そこでこのＴ
細胞ライン２．１９を用いて上記の問題点を解決すべく
鋭意研究の結果本発明を完成するに至った。
既に５ｉｄＯｒａＳ、 Ｐ、らによって樹立されている
ＤＩＧ１誘導囚子８Ｃ叶γ産生細胞である一ｒｍ胞ラビ
ライン２．１９（Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｉｕｕｎｏｌ、、
ｌ５５８６〜５９３．１９８５）が、従来用いられてい
るＴｌ胞ハイブリドーマ８１５１に１２株よりもＴＩ）
を約１００倍Ｍ生産することを見出した。そこでこのＴ
細胞ライン２．１９を用いて上記の問題点を解決すべく
鋭意研究の結果本発明を完成するに至った。
本発明のＤＮＡを調製するには、まずＴＩ［Ｉ胞うイン
２．１９からｍＲＮＡ画分を常法により調製し、１）Ｏ
ＩＶ（Ａ） ’ ＲＮＡを用いて既に開発されている方
法（Ｎｏｍａ、 ’ｆ、 ａｔ、 ａｌ、 Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１９ ６４０〜６４６゜１９８Ｇ）に従いｃＤＮ
＾ＤＮＡラリーを作製する。このライブラリーから得ら
れる各ｃＤＮＡクローンのプラスミドＤＮＡを制限ｈデ
糸Ｓａｌ 丁で直線化した後。
２．１９からｍＲＮＡ画分を常法により調製し、１）Ｏ
ＩＶ（Ａ） ’ ＲＮＡを用いて既に開発されている方
法（Ｎｏｍａ、 ’ｆ、 ａｔ、 ａｌ、 Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１９ ６４０〜６４６゜１９８Ｇ）に従いｃＤＮ
＾ＤＮＡラリーを作製する。このライブラリーから得ら
れる各ｃＤＮＡクローンのプラスミドＤＮＡを制限ｈデ
糸Ｓａｌ 丁で直線化した後。
ｉｎ ｖｉｔｒｏの系でＳＦ３１１８Ａポリメラーゼで
転写させてｍＲＮＡを得る。このようにして作製された
ｍＲＮＡをアフリカッメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ）の卵
母細胞（ｏｏｃｙｔｅ ）に注射して培養し、培養上清
に分泌されてくるｍＲＮＡからの翻訳産物（蛋白質）の
Ｔｉ１ｌ’活性およびＢＣＧＦ Ｉ活性の有無を測定す
る（Ｇｒｏｎｏｗｉｃｚ、 Ｅ、 ｅｔ、 ａｔ、、
［ｕｒ、 Ｊ、 Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１．６５８８〜５９０
．１９７６Ｊ３よびＴａｋａｔＳｕ、に、 ａｔ、 ａ
ｔ、。
転写させてｍＲＮＡを得る。このようにして作製された
ｍＲＮＡをアフリカッメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ）の卵
母細胞（ｏｏｃｙｔｅ ）に注射して培養し、培養上清
に分泌されてくるｍＲＮＡからの翻訳産物（蛋白質）の
Ｔｉ１ｌ’活性およびＢＣＧＦ Ｉ活性の有無を測定す
る（Ｇｒｏｎｏｗｉｃｚ、 Ｅ、 ｅｔ、 ａｔ、、
［ｕｒ、 Ｊ、 Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１．６５８８〜５９０
．１９７６Ｊ３よびＴａｋａｔＳｕ、に、 ａｔ、 ａ
ｔ、。
Ｊ、 Ｉａｍｕｎｏｌ、 １２５ ２６４６〜２６５３
．１９８０） 、尚、ここで述べるＴＩＩＦ活性および
ＢＣＧＦ Ｉｆ活竹は、各々下記の活性を有することに
よって定義される。
．１９８０） 、尚、ここで述べるＴＩＩＦ活性および
ＢＣＧＦ Ｉｆ活竹は、各々下記の活性を有することに
よって定義される。
八） ＴＲＦ活性：
１）マウス慢性Ｂ白血病細胞（ＢＣＬｌ）をＩｆＪ１４
抗体産生細胞に分化させる活性、 ２）抗原（ＧＮＰ−にＬ）１）感作させたマウス膵臓内
Ｂ細胞を抗原（ＤＮＰ−オブアルブミン）で刺激し、特
異的抗体（抗ＤＮＰ−１（ＩＧ）産生細胞に分化させる
活性、または ３） ｉｎ ｖｉｖｏで活”？＋ １．：Ｂ １［１胞
ブラストのｔｇＨ／合成誘導活性。
抗体産生細胞に分化させる活性、 ２）抗原（ＧＮＰ−にＬ）１）感作させたマウス膵臓内
Ｂ細胞を抗原（ＤＮＰ−オブアルブミン）で刺激し、特
異的抗体（抗ＤＮＰ−１（ＩＧ）産生細胞に分化させる
活性、または ３） ｉｎ ｖｉｖｏで活”？＋ １．：Ｂ １［１胞
ブラストのｔｇＨ／合成誘導活性。
Ｂ） ＢＣＧｒ［活性：
１） ＢＣＬ１細胞の分裂促進、または２）デキスト
ラン硫酸刺激休止Ｂ細胞の分裂促進。
ラン硫酸刺激休止Ｂ細胞の分裂促進。
上記の活性測定法の内、特に八）−１）およびＢ）−１
）の活性を指標にして、ｉｎ ＶｉｔｒＯで転写される
ｍＲＮへのＴＲＦ活性およびＢＣＧｔ” ■活性の測定
を行ない、［Ｒ［のｃＤＮ八を有するクローンを前記ｃ
ＤＮ＾ＤＮＡラリーから選択するのが便利である。次に
選択されたクローン（ｐｓＰ６Ｋ−ｍｒＲ「２３）のプ
ラスミドＤＮＡに挿入されているｃＤＮＡ１ｇｉ片の塩
基配列は公知の方法（後記実施例に記載するジデオキシ
法およびユニディレクシコブルディリージョン法）によ
り決定しく第１図参照〉、愈味のあるオーブンリーディ
ングフレーム（ポリペプチドを−１−ドする１！！基配
列）を探しＴｌｔ［のアミノ酸配列を定めることができ
る。この際、選択されたクローンｐｓＰ６Ｋ一部Ｔｌ１
ｒ２３のｔｐ人ＤＮＡ領域には、１３３個と６２個のア
ミノ酸からなるポリペプチドをコードする二秤のオーブ
ンリーディングフレームが見出されるが、後右（第１図
中５４４番目から７２９番目の塩基配列に相当）のポリ
ペプチドは、■分子量が約６．５００であって、この値
は２．１’１１１胞から産生されるＴｉｌ「の単吊体分
子量（約１８，０００）に比べたとえ糖鎖が０勺されて
いるとしても小さすぎること、および■このオーブンリ
ーディングフレーム中に存在するＡＣＣＩ切断目−位を
当該制限酵素で切断して作製されたクローンから調製さ
れるｍＲＮ八が、アフリカッメガエルの卵母細胞でＴＲ
Ｆ産生能を失わないことから、［旧ポリペプチドではな
い。従って、２．１９ａｌｌ胞がその生体内でまず産生
ずるｒＲＦは、１３３個のアミノ酸からなるポリペプチ
ドであると決定される（第１図参照）。尚、このポリペ
プチドのＮ末端にあるＮｅｔ（メチオニン）は、翻訳後
修飾過程（ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍ
ｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ）で、フＡル
ミル化やアセチル化されることがあり、またＮｅｔが取
り除かれたりすることもある。
）の活性を指標にして、ｉｎ ＶｉｔｒＯで転写される
ｍＲＮへのＴＲＦ活性およびＢＣＧｔ” ■活性の測定
を行ない、［Ｒ［のｃＤＮ八を有するクローンを前記ｃ
ＤＮ＾ＤＮＡラリーから選択するのが便利である。次に
選択されたクローン（ｐｓＰ６Ｋ−ｍｒＲ「２３）のプ
ラスミドＤＮＡに挿入されているｃＤＮＡ１ｇｉ片の塩
基配列は公知の方法（後記実施例に記載するジデオキシ
法およびユニディレクシコブルディリージョン法）によ
り決定しく第１図参照〉、愈味のあるオーブンリーディ
ングフレーム（ポリペプチドを−１−ドする１！！基配
列）を探しＴｌｔ［のアミノ酸配列を定めることができ
る。この際、選択されたクローンｐｓＰ６Ｋ一部Ｔｌ１
ｒ２３のｔｐ人ＤＮＡ領域には、１３３個と６２個のア
ミノ酸からなるポリペプチドをコードする二秤のオーブ
ンリーディングフレームが見出されるが、後右（第１図
中５４４番目から７２９番目の塩基配列に相当）のポリ
ペプチドは、■分子量が約６．５００であって、この値
は２．１’１１１胞から産生されるＴｉｌ「の単吊体分
子量（約１８，０００）に比べたとえ糖鎖が０勺されて
いるとしても小さすぎること、および■このオーブンリ
ーディングフレーム中に存在するＡＣＣＩ切断目−位を
当該制限酵素で切断して作製されたクローンから調製さ
れるｍＲＮ八が、アフリカッメガエルの卵母細胞でＴＲ
Ｆ産生能を失わないことから、［旧ポリペプチドではな
い。従って、２．１９ａｌｌ胞がその生体内でまず産生
ずるｒＲＦは、１３３個のアミノ酸からなるポリペプチ
ドであると決定される（第１図参照）。尚、このポリペ
プチドのＮ末端にあるＮｅｔ（メチオニン）は、翻訳後
修飾過程（ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍ
ｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ）で、フＡル
ミル化やアセチル化されることがあり、またＮｅｔが取
り除かれたりすることもある。
このように決定されるポリペプチドのＮ末端領域には、
分泌蛋白質に特有のリーダー配列（第１図中、Ｎ末端か
ら約２０番目までのアミノ酸配列に相当する疎水性の強
いペプチド領域）が存在している。このことは２．１９
＠Ｉ！１培養上清にＴＲＩが分泌される事実と合致す
る。通常、リーダー配列は、生体内でプロセシング（シ
グナルベブブダーぜによる切断など）を受け、その領域
が取り除かれた成熟ポリペプチドになることが知られて
いる。
分泌蛋白質に特有のリーダー配列（第１図中、Ｎ末端か
ら約２０番目までのアミノ酸配列に相当する疎水性の強
いペプチド領域）が存在している。このことは２．１９
＠Ｉ！１培養上清にＴＲＩが分泌される事実と合致す
る。通常、リーダー配列は、生体内でプロセシング（シ
グナルベブブダーぜによる切断など）を受け、その領域
が取り除かれた成熟ポリペプチドになることが知られて
いる。
これまで知られているリーダー配列の切断部位〔一般に
アラニン（＾ｌａ）やグリシン（Ｇｌｙ）などのアミノ
酸のＣ末端側；Ｗａｔｓｏｎ、 Ｈ，Ｅ、 ［、、Ｎｕ
ｃｌ。
アラニン（＾ｌａ）やグリシン（Ｇｌｙ）などのアミノ
酸のＣ末端側；Ｗａｔｓｏｎ、 Ｈ，Ｅ、 ［、、Ｎｕ
ｃｌ。
Ａｃ１ｄ、 Ｒｅｓ、 １２ ５１４５〜５１６４．１
９８４参照］から、質（糖蛋白質）は、第１図に示すア
ミノ酸配列中の各々１９番目、２１番目或いは２２番目
から１３３番目までのポリペプチドを含む分子であると
考えられる。このことは、１１（「が糖蛋白質であるこ
とから考え、これらのポリペプチドの分子量（およそ１
２．３００〜１２，７００）の点からｂ妥当である。即
ち、このポリペプチドから８１０される分子量（約１２
．３００）は、オーブンリーディングフレーム（第１図
中４４番目から４４２番目までの塩基配列）に対応する
アミノ酸配列中に存在する３ケ所のＮ−グリコジル化可
能部位（第１図中の下線を引いたアミノ酸配列）から考
え矛盾はない。尚、上記のようなプロセシングを受けて
生じたポリペプチドのＮ末端のアミノ酸残基は、さらに
アレチル化されたり、またぞれ／ｌｌ？ＧＩＵ（グルタ
ミン酸）の場合はピロル化されたりすることがある。
９８４参照］から、質（糖蛋白質）は、第１図に示すア
ミノ酸配列中の各々１９番目、２１番目或いは２２番目
から１３３番目までのポリペプチドを含む分子であると
考えられる。このことは、１１（「が糖蛋白質であるこ
とから考え、これらのポリペプチドの分子量（およそ１
２．３００〜１２，７００）の点からｂ妥当である。即
ち、このポリペプチドから８１０される分子量（約１２
．３００）は、オーブンリーディングフレーム（第１図
中４４番目から４４２番目までの塩基配列）に対応する
アミノ酸配列中に存在する３ケ所のＮ−グリコジル化可
能部位（第１図中の下線を引いたアミノ酸配列）から考
え矛盾はない。尚、上記のようなプロセシングを受けて
生じたポリペプチドのＮ末端のアミノ酸残基は、さらに
アレチル化されたり、またぞれ／ｌｌ？ＧＩＵ（グルタ
ミン酸）の場合はピロル化されたりすることがある。
ざらに、生体内で産生されるポリペプチドは、そのＣ末
端が生体内での７１ルシングの過程で欠失されることが
あることが知られており、第１図で示したポリペプチド
のＣ末端のアミノ酸あるいはペプチドの一部が欠失して
いることもあると考えられる。
端が生体内での７１ルシングの過程で欠失されることが
あることが知られており、第１図で示したポリペプチド
のＣ末端のアミノ酸あるいはペプチドの一部が欠失して
いることもあると考えられる。
これらのポリペプチドは、第１図に示すＤＮＡ 。
特に翻訳終止コドン（ＩＯＡ、）を含む１へ・１３３ま
でのアミノ酸配列に対応する塩基配列、あるいはこれと
実質的に同等な１！ｉ基配列を有するＤＮＡを適当な発
現ベクターに挿入し、これを適当な微生物ヤ）動物宿主
細胞に導入（形質転換）して、その形質転換体を培養Ｊ
−ることにより、これまでの細胞培養に比べ効率的Ｈつ
大覆に生産することができる。
でのアミノ酸配列に対応する塩基配列、あるいはこれと
実質的に同等な１！ｉ基配列を有するＤＮＡを適当な発
現ベクターに挿入し、これを適当な微生物ヤ）動物宿主
細胞に導入（形質転換）して、その形質転換体を培養Ｊ
−ることにより、これまでの細胞培養に比べ効率的Ｈつ
大覆に生産することができる。
以下、実施例でもって本発明をさらに詳しく説明する。
［実 施 例］
（１） ＴＩｔＦｍＲＮ＾の調製
ＴＲＦ産生細胞どしては、■細胞ライン２．１９を用い
た。本細胞ラインは５ｉｄＯｒａＳ、 Ｐ、らによって
既に樹立されているものである（Ｓｉｄａｒａｓ、 Ｐ
。
た。本細胞ラインは５ｉｄＯｒａＳ、 Ｐ、らによって
既に樹立されているものである（Ｓｉｄａｒａｓ、 Ｐ
。
ａｔ、 ａｌ、 Ｅｕｒ、 Ｊ、 ｌｌ１ｉｌｌＪｎＯ
１，、１５，５８６＝５９３゜１９８５）。
１，、１５，５８６＝５９３゜１９８５）。
まず、Ｃｏｎ＾（コンカッ゛バリンＡ）で活性化した２
、１９ＴＩｉｌ胞からＮ０ＩＩｌａ、 Ｙ、らの方法（
ＮａｔＬＩｒＱ。
、１９ＴＩｉｌ胞からＮ０ＩＩｌａ、 Ｙ、らの方法（
ＮａｔＬＩｒＱ。
３１９ ６４０〜６４６．１９８６ ） Ｉ、：、にイ
ｐｏｌｙ（Ａ）” ＲＮＡ（ＩＩＩＲＨＡ画分）を抽出
し、５〜２２％の濃度勾配を用いた蔗糖密度勾配遠心法
（３６，０００ｒｐｍ、１５時間）によりｐｏｌｙ（＾
）” ＲＮＡ抽出液を１６の両分に分画分取した。次に
、各分画の適当量をアフリカッメガエル（Ｘｃｎｏｐｕ
ｓ）の卵１’Ｈ１１１Ｊ１１ （ＯＯＣＶｔＯ）に注射
し、２０℃で３６ｒＸ１間培養俊その培養液についてＴ
ＲＩ’活性およびＢＣＧＦＩＩ活竹を測定した。
ｐｏｌｙ（Ａ）” ＲＮＡ（ＩＩＩＲＨＡ画分）を抽出
し、５〜２２％の濃度勾配を用いた蔗糖密度勾配遠心法
（３６，０００ｒｐｍ、１５時間）によりｐｏｌｙ（＾
）” ＲＮＡ抽出液を１６の両分に分画分取した。次に
、各分画の適当量をアフリカッメガエル（Ｘｃｎｏｐｕ
ｓ）の卵１’Ｈ１１１Ｊ１１ （ＯＯＣＶｔＯ）に注射
し、２０℃で３６ｒＸ１間培養俊その培養液についてＴ
ＲＩ’活性およびＢＣＧＦＩＩ活竹を測定した。
ＴｆｌＦ活竹の測定は、卵母細胞培養上清シンブルを、
１．５Ｘ １０ 個のＢＣ１１１Ｂ胞を含む０．２ｍ
（ｌのＲＩＴＣ培地（血清フリーで５１Ｒｇ／ｌｄの生
血清アルブミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール
、抗生物質を含む）で培養した培地に加え、２日後、Ｇ
ｒｏｎｏｗｉｃｚ、 Ｅ、らのプロティンΔプラーク測
定法（Ｅｕｒ、 Ｊ、 ｌｌ１ｌｎｌｕｎＯ１，６５８
８〜５９０．１９７６ ）により、Ｉｇ＋４分泌産生細
胞数を測定することにより行った。一方、ＢＣＧＦＩＩ
活性の測定は、上記ＢＣＬ１ｉｌｌ胞の増殖度を２日培
養の最後の６時間に３ト１デミジンを加えて上記ＢＣＬ
１１１１胞に取り込まれる ｌ−１デミジン県で測定す
ることにより行った。
１．５Ｘ １０ 個のＢＣ１１１Ｂ胞を含む０．２ｍ
（ｌのＲＩＴＣ培地（血清フリーで５１Ｒｇ／ｌｄの生
血清アルブミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール
、抗生物質を含む）で培養した培地に加え、２日後、Ｇ
ｒｏｎｏｗｉｃｚ、 Ｅ、らのプロティンΔプラーク測
定法（Ｅｕｒ、 Ｊ、 ｌｌ１ｌｎｌｕｎＯ１，６５８
８〜５９０．１９７６ ）により、Ｉｇ＋４分泌産生細
胞数を測定することにより行った。一方、ＢＣＧＦＩＩ
活性の測定は、上記ＢＣＬ１ｉｌｌ胞の増殖度を２日培
養の最後の６時間に３ト１デミジンを加えて上記ＢＣＬ
１１１１胞に取り込まれる ｌ−１デミジン県で測定す
ることにより行った。
その結果、第２図に示す如く、ＢＣＧＦ ＩＩ活性（図
中の黒枠）は、９Ｓおよび１６３のｍＲＮ＾ＲＮＡみら
れ、■１（「活性（図中の白枠）は、１６３のｍＲＩ画
分のみにみられた。尚、同図中、Ｐは、Ｔｌ１ｌ’ 、
￥；生株の１つであるＴｉｌ＋胞ハイブリドーマ８１５
１に１２株の培養上清を５０％の濃度で上記ＢＣＬ１培
差培地に加えたポジティブコントロールを示し、Ｎは、
ｍＲＮ＾ＲＮＡ代りにリン酸バッファーを卵母細胞に注
入して培養したネガティブコントロールを各々示す。
中の黒枠）は、９Ｓおよび１６３のｍＲＮ＾ＲＮＡみら
れ、■１（「活性（図中の白枠）は、１６３のｍＲＩ画
分のみにみられた。尚、同図中、Ｐは、Ｔｌ１ｌ’ 、
￥；生株の１つであるＴｉｌ＋胞ハイブリドーマ８１５
１に１２株の培養上清を５０％の濃度で上記ＢＣＬ１培
差培地に加えたポジティブコントロールを示し、Ｎは、
ｍＲＮ＾ＲＮＡ代りにリン酸バッファーを卵母細胞に注
入して培養したネガティブコントロールを各々示す。
各
９３ ｍＲＮＡの分炒サイズはインターロイキン（ＩＬ
） −４のｍＲＮＡサイズに相当すること（ＮＯｌａ、
Ｙ。
） −４のｍＲＮＡサイズに相当すること（ＮＯｌａ、
Ｙ。
ａｔ、 ａｌ、 Ｎａｔｕｒｅ、 ３１９ ６４０〜６
４６．１９８６） 、および９５ｍＲＮＡ画分にはＢ叶
、増殖促進活性はあるが、ＢＣ１１ＨＡ胞の［（ＩＮ分
泌産生細胞への分化活性かみられないことから、本発明
化らは、２．１９ Ｔ細胞の１６３ ｍｌｌＮＡ画分に
丁Ｒｒ ｍＲＮＡが存在すると判断し、次にｃＤＮ＾Ｄ
ＮＡラリーの作製を試みた。
４６．１９８６） 、および９５ｍＲＮＡ画分にはＢ叶
、増殖促進活性はあるが、ＢＣ１１ＨＡ胞の［（ＩＮ分
泌産生細胞への分化活性かみられないことから、本発明
化らは、２．１９ Ｔ細胞の１６３ ｍｌｌＮＡ画分に
丁Ｒｒ ｍＲＮＡが存在すると判断し、次にｃＤＮ＾Ｄ
ＮＡラリーの作製を試みた。
（２） ＣＤＮ＾ＤＮＡラリー調製とＴＲＦｃＤＮＡ
クローンの選択 Ｃｏｎ＾で活性化した２、１９Ｔｌｌ胞の全Ｐｏ１ｙ（
Ａ）”ＲＮへのＣＯＭＡライブラリーは、ＳＰＧプロ［
−ターを３むプラスミドを用いたＮ０ＩＩｌａ、 Ｙ、
らの方法（Ｎａｔｕｒｅ、３１９ ６４０−６４９．１
９８６）に準じて調製し、約５ Ｘ １０’個のｃＤＮ
Ａクローン（１ｌｓＰ６ＫｃＯＮ＾ＤＮＡラリー）を４
！また。
クローンの選択 Ｃｏｎ＾で活性化した２、１９Ｔｌｌ胞の全Ｐｏ１ｙ（
Ａ）”ＲＮへのＣＯＭＡライブラリーは、ＳＰＧプロ［
−ターを３むプラスミドを用いたＮ０ＩＩｌａ、 Ｙ、
らの方法（Ｎａｔｕｒｅ、３１９ ６４０−６４９．１
９８６）に準じて調製し、約５ Ｘ １０’個のｃＤＮ
Ａクローン（１ｌｓＰ６ＫｃＯＮ＾ＤＮＡラリー）を４
！また。
次に、これらのクローンのプラスミドＤＮへの混合物を
、Ｓａｃ ＩとＳａｌ ■で各々消化してプラスミドを
直線化さけた後、試験管内（ｉｎ ＶｉｔｒＯ）で５Ｐ
６ＲＮＡポリメラービを用いて１ｌｔＮ＾を合成させた
。
、Ｓａｃ ＩとＳａｌ ■で各々消化してプラスミドを
直線化さけた後、試験管内（ｉｎ ＶｉｔｒＯ）で５Ｐ
６ＲＮＡポリメラービを用いて１ｌｔＮ＾を合成させた
。
このように調製したＩＲＮ＾ＲＮＡアフリカッメガエル
（Ｘｃｎｏｐｕｓ）の卵母細胞（ｏｏｃｙｔｃ）にｔｒ
ＤＡｔ、、２０℃で３６時間培養後培養液中に分泌され
た生成物を集め、実施例（１）で示した測定法によりＴ
Ｒｒ活性およびＢＣＧＦ Ｉｔ活性を測定した。その結
果、Ｓａｔ ■で消化したＯＮ八へ片から調製した１Ｒ
ＮＡには両活竹が観察されたが、Ｓａｃ Ｉで消化した
ＤＮＡ［、片からのｌｌｌＲＮＡにはいずれの活性も認
められなかった。
（Ｘｃｎｏｐｕｓ）の卵母細胞（ｏｏｃｙｔｃ）にｔｒ
ＤＡｔ、、２０℃で３６時間培養後培養液中に分泌され
た生成物を集め、実施例（１）で示した測定法によりＴ
Ｒｒ活性およびＢＣＧＦ Ｉｔ活性を測定した。その結
果、Ｓａｔ ■で消化したＯＮ八へ片から調製した１Ｒ
ＮＡには両活竹が観察されたが、Ｓａｃ Ｉで消化した
ＤＮＡ［、片からのｌｌｌＲＮＡにはいずれの活性も認
められなかった。
次に、上記２．１９ Ｔ細胞ラインのｍＲＮＡから調製
されたｐＳＰ６ＫｃＤＮ＾ＤＮＡラリーを１８のプール
に分け（１ブール約３，０００り【］−ジン、各々につ
いて上記の方法に従いＴＩＩＦ活性およびＢＣＧｒ Ｉ
Ｉ活性を測定した。その結果、１つのプール［、，１７
）のみが両活性を示した。そこで、このプールをさらに
サブグループに分け、同様な方法でＴＲＦおよびＢＣＧ
「ＩＩ活性を測定し、６０個のクローンからなるポジテ
ィブな活性を持つ一つのグループを１ツた。
されたｐＳＰ６ＫｃＤＮ＾ＤＮＡラリーを１８のプール
に分け（１ブール約３，０００り【］−ジン、各々につ
いて上記の方法に従いＴＩＩＦ活性およびＢＣＧｒ Ｉ
Ｉ活性を測定した。その結果、１つのプール［、，１７
）のみが両活性を示した。そこで、このプールをさらに
サブグループに分け、同様な方法でＴＲＦおよびＢＣＧ
「ＩＩ活性を測定し、６０個のクローンからなるポジテ
ィブな活性を持つ一つのグループを１ツた。
続いて、これらのクローンのプラスミドＤＮＡに挿入さ
れたＤＮＡに片（ｃＤＮＡ）が、ＩＫＩ１以上でその塩
基配列中Ｓａｃ Ｉ切断部位がありＳａｌ Ｉ切断部位
がないことを確かめ、上記６０クローンから７クローン
（クローン陽１６．１８．２３．２７．４２．５１およ
び５３）を得た。これら７りＯ−ンのｒｌｌｌ’活性（
１（１Ｍプラーク形成細胞数）およびＢＣＧ「Ｕ活性（
３Ｈブーミジン取込み吊）については第１表に示した。
れたＤＮＡに片（ｃＤＮＡ）が、ＩＫＩ１以上でその塩
基配列中Ｓａｃ Ｉ切断部位がありＳａｌ Ｉ切断部位
がないことを確かめ、上記６０クローンから７クローン
（クローン陽１６．１８．２３．２７．４２．５１およ
び５３）を得た。これら７りＯ−ンのｒｌｌｌ’活性（
１（１Ｍプラーク形成細胞数）およびＢＣＧ「Ｕ活性（
３Ｈブーミジン取込み吊）については第１表に示した。
これらの７クローンの内、ル、２３のり［１−ンが最も
強い活性を示したのでこのクローンのプラスミドをｐＳ
Ｐ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３ （第３図参照）と名付は以後の
解析を行った。尚、このプラスミドによって形質転換さ
れた大腸菌１１８１０１／ｐｓＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３は
、［５ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｔＳＢＨ２８５と命
名し、微工研にｒＬＲＨＰ−８８２８の受託番号を１９
で寄託されている。
強い活性を示したのでこのクローンのプラスミドをｐＳ
Ｐ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３ （第３図参照）と名付は以後の
解析を行った。尚、このプラスミドによって形質転換さ
れた大腸菌１１８１０１／ｐｓＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３は
、［５ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｔＳＢＨ２８５と命
名し、微工研にｒＬＲＨＰ−８８２８の受託番号を１９
で寄託されている。
（３） ＣＯＭＡ！！ｔ、を配列の解析とＴＲ，Ｆポ
リペプチド＋１ｓＰ６Ｋ−ＩＴＲＦ２３ニｅｌｌ 人す
レ／、＝ ＣＤＮ八ハへ一旦ｐＵｃＩ８ＩラスミドのＢ
ａｍ１ｌ Ｉサイトにリブクローニングし、ンデＡキシ
法（Ｓａｎｇｅｒ、 Ｆ、 ｅｔ、 ａｌ、、 Ｐｒｏ
ｃ。
リペプチド＋１ｓＰ６Ｋ−ＩＴＲＦ２３ニｅｌｌ 人す
レ／、＝ ＣＤＮ八ハへ一旦ｐＵｃＩ８ＩラスミドのＢ
ａｍ１ｌ Ｉサイトにリブクローニングし、ンデＡキシ
法（Ｓａｎｇｅｒ、 Ｆ、 ｅｔ、 ａｌ、、 Ｐｒｏ
ｃ。
ａｔｌ、 ＡＣａｄ、 Ｓｃｉ、 ｕｓ＾、 ７４ ５
４６３〜５４６９．１’）７７）３よびユニディレクシ
ョナル ディリージョン法二ｕｎｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎ
ａｌ ｄｅｌｅｔｉｏｎ 法、 ＹａｎｉＳＣｈ
−ｅｒｒｏｎ、 ｃ、Ｏｔ ａｌ、、 Ｇｅｎ８３３
１０３〜１１９．１９８５ ）二を組合わせ、その塩基
配列を決定した。塩基配Ｊ決定のストラテジーを第４図
に示した。その結］、第１図に示すようにｐｏｌｙ＾テ
ール領域を除く５３３の塩基対からなる配列を得た。
４６３〜５４６９．１’）７７）３よびユニディレクシ
ョナル ディリージョン法二ｕｎｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎ
ａｌ ｄｅｌｅｔｉｏｎ 法、 ＹａｎｉＳＣｈ
−ｅｒｒｏｎ、 ｃ、Ｏｔ ａｌ、、 Ｇｅｎ８３３
１０３〜１１９．１９８５ ）二を組合わせ、その塩基
配列を決定した。塩基配Ｊ決定のストラテジーを第４図
に示した。その結］、第１図に示すようにｐｏｌｙ＾テ
ール領域を除く５３３の塩基対からなる配列を得た。
この塩基配列を詳細に解析した結果、１３３個の−ミノ
酸残基（第１図中、４４番目から４４２番目ま−の塩基
配列）と６２個のアミノ酸残塁（第１図中、４４番目か
ら７２９番目の塩基配列）からなる２つ１オーブンリー
デイングフレームが見出されたが、ｉ） ＴＲＦポリベ
ブヂド（糖蛋白質）は、２．１９ Ｔ胞うインおよび当
該ｍＲＮ＾が注射された卵母細胞ら分泌産生され、その
単ｍ体（ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動による
解析ンは、約１８．０００の分子量を有すること、（ｉ
ｉ）６２個のアミノ酸残基からなるオーブンリーディン
グフレーム中に存在する＾ｃｃ Ｉ明所部位（第１図中
６２４−６２’ｌの塩括配列）を当該酵素で切断して直
線化したＯＮ八からの０１８Ｎ八が卵母細胞においてＴ
ＲＦおよびＢＣＧｒ産生能があること（ｉｉｉ） ６２
個のアミノ酸残塁からなるポリペプチドの分子量（約６
．５００）は、ＴＲＦ生ｍ体の堆定分子吊約１８，００
０に比べ、たとえ糖鎖が付加されたとしても（当該配列
中１個のＮ−グリコジル化のシグリル配列あり）、小さ
過ぎることなどから、２．１９Ｔ細胞ラインでまず産生
されるＴＲｒまたはＢＣＧＦ ＩＩ活性を有するポリペ
プチド（ＴＲＩ’ポリペプチドと略す）は、第１図に示
１１３３個のアミノ酸配列からイすると判断された。但
し、このポリペプチドのＮ末端にあるＨａｔ（メチオニ
ン）は、翻訳１１修飾過程（ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｌａ
ｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓ
ｓ）により、フォルミル化されたりアセデル化されたり
或いはＭｅｔ残基が取り除かれたりすることが、これま
で報告されている生体内ポリペプチドの柊飾過稈から考
えられる。
酸残基（第１図中、４４番目から４４２番目ま−の塩基
配列）と６２個のアミノ酸残塁（第１図中、４４番目か
ら７２９番目の塩基配列）からなる２つ１オーブンリー
デイングフレームが見出されたが、ｉ） ＴＲＦポリベ
ブヂド（糖蛋白質）は、２．１９ Ｔ胞うインおよび当
該ｍＲＮ＾が注射された卵母細胞ら分泌産生され、その
単ｍ体（ＳＯＳポリアクリルアミドゲル電気泳動による
解析ンは、約１８．０００の分子量を有すること、（ｉ
ｉ）６２個のアミノ酸残基からなるオーブンリーディン
グフレーム中に存在する＾ｃｃ Ｉ明所部位（第１図中
６２４−６２’ｌの塩括配列）を当該酵素で切断して直
線化したＯＮ八からの０１８Ｎ八が卵母細胞においてＴ
ＲＦおよびＢＣＧｒ産生能があること（ｉｉｉ） ６２
個のアミノ酸残塁からなるポリペプチドの分子量（約６
．５００）は、ＴＲＦ生ｍ体の堆定分子吊約１８，００
０に比べ、たとえ糖鎖が付加されたとしても（当該配列
中１個のＮ−グリコジル化のシグリル配列あり）、小さ
過ぎることなどから、２．１９Ｔ細胞ラインでまず産生
されるＴＲｒまたはＢＣＧＦ ＩＩ活性を有するポリペ
プチド（ＴＲＩ’ポリペプチドと略す）は、第１図に示
１１３３個のアミノ酸配列からイすると判断された。但
し、このポリペプチドのＮ末端にあるＨａｔ（メチオニ
ン）は、翻訳１１修飾過程（ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｌａ
ｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓ
ｓ）により、フォルミル化されたりアセデル化されたり
或いはＭｅｔ残基が取り除かれたりすることが、これま
で報告されている生体内ポリペプチドの柊飾過稈から考
えられる。
第１図に示１１３３個のアミノ酸残りからなるポリペプ
チドのＮ末端には、２０個前後のアミノ酸残基からなる
疎水性の強いペプチドが存在している。
チドのＮ末端には、２０個前後のアミノ酸残基からなる
疎水性の強いペプチドが存在している。
この配列（リーダー配列）は、分泌蛋白質がもつ特有の
ものであり、蛋白質が細胞内から分泌される際、この配
列が除去されることが知られている。
ものであり、蛋白質が細胞内から分泌される際、この配
列が除去されることが知られている。
一般にアラニン（Ａｌａ）やグリシン（Ｇｌｙ）などの
アミノ酸残塁のＣ末端が切断されることが多いこと（１
４ａｔＦｉＯｎ、 Ｈ，Ｅ、 Ｅ、、 ＮＩＪＣ＋、＾
ｃｉｄ、 Ｒｃｓ、 １２５１４５〜５１６４．１９８
４） 、またリーダー配列は通常２０Ｉｌ１前後のペプ
チドであることなどから、本発明におけるＴＲｒまたは
８ＣＧｒＩ［活性を右づ°るポリペプチドは、第１図中
に示すアミノ酸配列中の１９番目、２１番目或いは２２
番目から１３３番目までのポリペプチドを含む分子であ
ると考えられる。これらのポリペプチドの分子ｆｆ１（
およそ１２，３００へ、１２．γ００）は、ＴＲＦの単
ｍ体が分子聞約１８，０００の糖蛋白であることとほぼ
一致する。
アミノ酸残塁のＣ末端が切断されることが多いこと（１
４ａｔＦｉＯｎ、 Ｈ，Ｅ、 Ｅ、、 ＮＩＪＣ＋、＾
ｃｉｄ、 Ｒｃｓ、 １２５１４５〜５１６４．１９８
４） 、またリーダー配列は通常２０Ｉｌ１前後のペプ
チドであることなどから、本発明におけるＴＲｒまたは
８ＣＧｒＩ［活性を右づ°るポリペプチドは、第１図中
に示すアミノ酸配列中の１９番目、２１番目或いは２２
番目から１３３番目までのポリペプチドを含む分子であ
ると考えられる。これらのポリペプチドの分子ｆｆ１（
およそ１２，３００へ、１２．γ００）は、ＴＲＦの単
ｍ体が分子聞約１８，０００の糖蛋白であることとほぼ
一致する。
また、上記のようにリーダー配列が除去されて生じたポ
リペプチドのＮ末端のアミノ酸は、さらに生体内でアセ
チル化されたり、またそれがグルタミン１（Ｇｌｕ）の
場合はビＯル化されたりすることがあることは、これま
で生体内から見出されているペプチドの構）告からみて
当然考えられる。
リペプチドのＮ末端のアミノ酸は、さらに生体内でアセ
チル化されたり、またそれがグルタミン１（Ｇｌｕ）の
場合はビＯル化されたりすることがあることは、これま
で生体内から見出されているペプチドの構）告からみて
当然考えられる。
（４） ｐＳＰ６Ｋ−ｍｌＲＦ２３プラスミドのＴＲ
Ｆ活性ｐｓＰＧに一５ＴＲＦ２３プラスミドＯＮ八から
５Ｐ６１１Ｎ＾ポリメラーゼによって転写されたｍ１ｔ
Ｎ＾が、注入され、培養された卵母１１１胞の培養上清
のＴＲＦ活性（ＢＣＬ１ｉｌｌ胞のｒｇＨ分泌産生細胞
への分化活性）と８ＣＧＦ ７Ｉ活４６ （ＢＣＬ１細
胞への３日チミジンの取込み吊）は第１表に示した。
Ｆ活性ｐｓＰＧに一５ＴＲＦ２３プラスミドＯＮ八から
５Ｐ６１１Ｎ＾ポリメラーゼによって転写されたｍ１ｔ
Ｎ＾が、注入され、培養された卵母１１１胞の培養上清
のＴＲＦ活性（ＢＣＬ１ｉｌｌ胞のｒｇＨ分泌産生細胞
への分化活性）と８ＣＧＦ ７Ｉ活４６ （ＢＣＬ１細
胞への３日チミジンの取込み吊）は第１表に示した。
さらに、Ｔａｋａｔｓｕ、 Ｋ、ら（Ｊ、 Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、 １２５２６４６〜２６５３．１９８０）の方法
に従い、上記卵母細胞生産物（γＴＲＦと略す）の抗Ｄ
ＮＰ−ＩＱＧ抗体産生応答反応の促進効果について調べ
た。まずＢＡＬＢ／ＣマウスをＤＮＰ−キイホールリン
ペットヘモシアニン（にｅｙｈｏｌｃ Ｉｉｍｐｃｔ
ｈｅｌｏｃｙａｎｉｎ ；に１１１）で感作し、６〜８
週間後、膵臓細胞を集め抗’ｒｈｙ １．２抗体と補体
処理によりＢ１１１胞をエンリッチし、γＴＲ「の抗Ｄ
ＮＰ−１（ＩＧプラーク形成細胞促進能を調べた。
ｏｌ、 １２５２６４６〜２６５３．１９８０）の方法
に従い、上記卵母細胞生産物（γＴＲＦと略す）の抗Ｄ
ＮＰ−ＩＱＧ抗体産生応答反応の促進効果について調べ
た。まずＢＡＬＢ／ＣマウスをＤＮＰ−キイホールリン
ペットヘモシアニン（にｅｙｈｏｌｃ Ｉｉｍｐｃｔ
ｈｅｌｏｃｙａｎｉｎ ；に１１１）で感作し、６〜８
週間後、膵臓細胞を集め抗’ｒｈｙ １．２抗体と補体
処理によりＢ１１１胞をエンリッチし、γＴＲ「の抗Ｄ
ＮＰ−１（ＩＧプラーク形成細胞促進能を調べた。
その結果、γＴＲＩ’は抗原（ＤＮＰ−オボアルブミン
二〇ＮＰ−０＾）存在下、ＯＮＰ感作されたＢ細胞を刺
激し、明らかに抗ＤＮＰ−１（ＩＧ産生細胞へ分化させ
る活性を示したく第２表）。さらにデータは示さないが
、７１ＲＩは、ｉｎ ｖｉｖｏで活性化されたＢ１１１
胞ブラストのＩ（ＪＨ合成ＸＩ性をも示した。尚、１１
−１ 、 Ｉｔ−２、１１−３およびＢＳＦ−１の活性
はいずれも丞さなかっだ。これらの結果から、本発明に
おいてｐＳＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３にり０−ン化されたｃ
ＤＮＡ（第１図参照）がＴＲＦボリベブヂドの産生を支
配していることが確認できＩζ０ 尚、ｐｓＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３りｏ−＞はＢＣＬ１細胞
の１（１Ｍプラーク形成細胞促准活性とＢＣＬ１増殖促
進活竹どを常に有していること（第１表参照）から、Ｔ
ＲＦ 、！：ＢＣＧＦＩＩは同じ分子であることが示唆
された。
二〇ＮＰ−０＾）存在下、ＯＮＰ感作されたＢ細胞を刺
激し、明らかに抗ＤＮＰ−１（ＩＧ産生細胞へ分化させ
る活性を示したく第２表）。さらにデータは示さないが
、７１ＲＩは、ｉｎ ｖｉｖｏで活性化されたＢ１１１
胞ブラストのＩ（ＪＨ合成ＸＩ性をも示した。尚、１１
−１ 、 Ｉｔ−２、１１−３およびＢＳＦ−１の活性
はいずれも丞さなかっだ。これらの結果から、本発明に
おいてｐＳＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３にり０−ン化されたｃ
ＤＮＡ（第１図参照）がＴＲＦボリベブヂドの産生を支
配していることが確認できＩζ０ 尚、ｐｓＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３りｏ−＞はＢＣＬ１細胞
の１（１Ｍプラーク形成細胞促准活性とＢＣＬ１増殖促
進活竹どを常に有していること（第１表参照）から、Ｔ
ＲＦ 、！：ＢＣＧＦＩＩは同じ分子であることが示唆
された。
第 ２ 表
γ丁ＲＩ’による抗ＤＮＰ −１（ＩＧプラーク形成の
促進効果−ＤＮＰ −ＫＬｌｌ ０
１７９２十 なし ０１２７ ＋ ＤＮＰ−ＫＬＩＩ Ｏ１９９十
開Ｐ−〇へ 〇９２−４−
［ＩＮＰ−０八 １
６９５十〇ＮＰ−ＯＡ
０．５ ８８４＋ ＤＮＰ−Ｏ
Ａ ０．２５ ５！ｉ５
促進効果−ＤＮＰ −ＫＬｌｌ ０
１７９２十 なし ０１２７ ＋ ＤＮＰ−ＫＬＩＩ Ｏ１９９十
開Ｐ−〇へ 〇９２−４−
［ＩＮＰ−０八 １
６９５十〇ＮＰ−ＯＡ
０．５ ８８４＋ ＤＮＰ−Ｏ
Ａ ０．２５ ５！ｉ５
第１図は、Ｉ）Ｓｒ１に一１１１ＴＲＦ２３にトＯ入さ
れたｃＤＮへの塩基配列とＴＲＩポリペプチド領域のア
ミノ酸配列を示す図であり、 第２図は、ａ＋ＲＮＡ画分のＴＲＦ活性（プラーク形成
細胞： ＰｒＣ）とＢＣＧＦ Ｉ活性（３Ｈチミジンの
取込み）を示すグラフであり、 第３図（八）は、ｐｓＰ６Ｋ−ｍＴＩＩＦ２３クローン
のプラスミドの概略図であり、第３図（Ｂ）は第３図（
＾）のインリートｃＤＮへ周辺の概略図であり、第４図
はｐｓＩ）６Ｋ−ｍＴＲＦ２３に挿入されたｃＤＨＡの
塩基配列決定のストラブジーを示１図である。 特 許 出 願 人 本 庶
佑代理人 弁理士 ４ よ え Ｊ′−］二１（外
５名）
れたｃＤＮへの塩基配列とＴＲＩポリペプチド領域のア
ミノ酸配列を示す図であり、 第２図は、ａ＋ＲＮＡ画分のＴＲＦ活性（プラーク形成
細胞： ＰｒＣ）とＢＣＧＦ Ｉ活性（３Ｈチミジンの
取込み）を示すグラフであり、 第３図（八）は、ｐｓＰ６Ｋ−ｍＴＩＩＦ２３クローン
のプラスミドの概略図であり、第３図（Ｂ）は第３図（
＾）のインリートｃＤＮへ周辺の概略図であり、第４図
はｐｓＩ）６Ｋ−ｍＴＲＦ２３に挿入されたｃＤＨＡの
塩基配列決定のストラブジーを示１図である。 特 許 出 願 人 本 庶
佑代理人 弁理士 ４ よ え Ｊ′−］二１（外
５名）
Claims (18)
- （１）次式 I ： 【塩基配列があります】（ I ） 〔式中、￥ＳＴＰ￥は翻訳終止コドンを表わす。〕で表
わされる塩基配列またはその５′末端の一部が６３番の
Ｇまでの間で一部欠失した塩基配列を有するＢ細胞分化
活性因子をコードするＤＮＡ。 - （２）次式 I ： 【塩基配列があります】（ I ） 〔式中、￥ＳＴＰ￥は翻訳終止コドンを表わす。〕で表
わされる塩基配列またはその５′末端の一部が６３番の
Ｇまでの間で一部欠失した塩基配列を有するＢ細胞分化
活性因子をコードするＤＮＡを含むプラスミド。 - （３）ｐＳＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３で表わされる特許請求
の範囲第２項記載のプラスミド。 - （４）次式 I ： 【塩基配列があります】（ I ） 〔式中、￥ＳＴＰ￥は翻訳終止コドンを表わす。〕で表
わされる塩基配列またはその５′末端の一部が６３番の
Ｇまでの間で一部欠失した塩基配列を有するＢ細胞分化
活性因子をコードするＤＮＡの転写物であるｍＲＮＡが
真核または原核細胞内で翻訳されて生じるポリペプチド
をポリペプチド成分として有する、Ｂ細胞分化活性を有
する因子。 - （５）ＧＣＧＦII活性も有する特許請求の範囲第４項記
載の因子。 - （６）ポリペプチドのアミノ酸配列が式II：【アミノ酸
配列があります】（II） 〔式中、ＸはＨ（水素原子）、ｆＭｃｔ（フォルミルメ
チオニン）、ＡｃＭｅｔ（アセチルメチオニン）または
Ｍｃｔ（メチオニン）を表わす。〕 で表わされる特許請求の範囲第４項記載の因子。 - （７）次式III： 【アミノ酸配列があります】（III） 〔式中、Ｙは、Ｈ（水素原子）、ＭｅｔまたはＴｈｒ−
Ａｌａ−Ｍｅｔを表わすが、但し、Ｎ末端のアミノ酸は
アセチル化されていても良く、或いはＹがＨの場合のＮ
末端のＧｌｕはピロル化されていても良い。〕 で表わされるアミノ酸配列を有し、特許請求の範囲第６
項で与えられた式IIで表わされるポリペプチドのＮ末端
側のペプチドが真核または原核細胞内でプロセシングを
受けて生じたポリペプチドをポリペプチド成分として有
する、Ｂ細胞分化活性を有する特許請求の範囲第４項記
載の因子。 - （８）ＢＣＤＦII活性も有する特許請求の範囲第７項記
載の因子。 - （９）次式 I ： 【塩基配列があります】（ I ） 〔式中、￥ＳＴＰ￥は翻訳終止コドンを表わす。〕で表
わされる塩基配列またはその５′末端の一部が６３番の
Ｇまでの間で一部欠失した塩基配列を有するＢ細胞分化
活性因子をコードするＤＮＡを含むプラスミドが導入さ
れた形質転換細胞。 - （１０）プラスミドがｐＳＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３である
特許請求の範囲第９項記載の形質転換細胞。 - （１１）次式 I ： 【塩基配列があります】（ I ） 〔式中、￥ＳＩＰ￥は翻訳終止コドンを表わす。〕で表
わされる塩基配列またはその５′末端の一部が６３番の
Ｇまでの間で一部欠失した塩基配列を有するＢ細胞分化
活性因子をコードするＤＮＡを含むプラスミドが導入さ
れた形質転換細胞を培養し、ポリペプチドをポリペプチ
ド成分として有するＢ細胞分化活性因子を製造する方法
。 - （１２）製造される因子がＢＣＧＦII活性も有する特許
請求の範囲第１１項記載の方法。 - （１３）プラスミドがｐＳＰ６Ｋ−ｍＴＲＦ２３である
特許請求の範囲第１１項記載の方法。 - （１４）上記式IIで表わされるポリペプチドをコードし
ている上記式 I で表わされる塩基配列と生物学的に同
等な機能を有するＤＮＡ。 - （１５）上記実質的に同等なＤＮＡの全部または一部を
含むプラスミド。 - （１６）上記特許請求の範囲第１５項記載のプラスミド
が導入された形質転換細胞を培養し、Ｂ細胞分化活性を
有する因子を製造する方法。 - （１７）製造される因子がＢＣＧＦII活性も有する特許
請求の範囲第１６項記載の方法。 - （１８）式IIまたは式IIIで表わされるポリペプチドで
ある特許請求の範囲第１６項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61157227A JP2514631B2 (ja) | 1986-07-04 | 1986-07-04 | Ｂ細胞分化因子をコ―ドする遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61157227A JP2514631B2 (ja) | 1986-07-04 | 1986-07-04 | Ｂ細胞分化因子をコ―ドする遺伝子 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7195345A Division JP3022950B2 (ja) | 1995-07-31 | 1995-07-31 | Ｂ細胞分化因子 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6312285A true JPS6312285A (ja) | 1988-01-19 |
| JP2514631B2 JP2514631B2 (ja) | 1996-07-10 |
Family
ID=15645005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61157227A Expired - Fee Related JP2514631B2 (ja) | 1986-07-04 | 1986-07-04 | Ｂ細胞分化因子をコ―ドする遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2514631B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994004170A1 (en) * | 1992-08-24 | 1994-03-03 | Kremers-Urban Company | Method of treating epstein-barr virus infection |
-
1986
- 1986-07-04 JP JP61157227A patent/JP2514631B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| THE JOURNAL 0F IMMUNOLOGY=1985 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994004170A1 (en) * | 1992-08-24 | 1994-03-03 | Kremers-Urban Company | Method of treating epstein-barr virus infection |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2514631B2 (ja) | 1996-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2515308B2 (ja) | ヒト免疫インタ−フエロン | |
| JP4001604B2 (ja) | 新規蛋白質及びこれを使用した薬剤の製法 | |
| KR920006879B1 (ko) | 고정제 단백질의 제조방법 | |
| JP2561131B2 (ja) | 細胞接着活性ポリペプチド | |
| CA1335360C (en) | Recombinant natural killer cell activator | |
| CN101434651A (zh) | 重组胸腺素β4二串体蛋白及其制备方法 | |
| JPS6299399A (ja) | ヒトγ−インタ−フエロンの生物活性誘導体 | |
| JP2636864B2 (ja) | 免疫グロブリンｅに対するポリペプチド競争体 | |
| CN111499764B (zh) | 一种具有促红细胞生成素活性的长效融合蛋白 | |
| WO1989010133A1 (en) | Stem cell inhibitors | |
| JPH08103279A (ja) | 組換え人ミオグロビンの製造方法 | |
| CN113735960A (zh) | 一种fgf重组蛋白治疗nash的应用 | |
| WO1990002183A1 (en) | Production of a novel lymphokine exhibiting differentiation inhibitory activity | |
| JPS6312285A (ja) | Ｂ細胞分化因子をコードする遺伝子 | |
| EA017377B1 (ru) | Слитый белок эритропоэтина | |
| EP0171000A2 (en) | Process for producing heterologous matured protein or peptide | |
| JPH03502322A (ja) | ヒトコロニー形成刺激因子の非グリコシル化類似体 | |
| Hansen et al. | New approaches to therapy and diagnosis of diabetes | |
| JP3022950B2 (ja) | Ｂ細胞分化因子 | |
| EP0211321A2 (en) | Amino-acid composition, method for its production and medical composition containing it | |
| JP3068026B2 (ja) | Ｂ細胞分化因子の製造方法 | |
| EP0341100B1 (en) | DNA coding for thymosin and TNF | |
| JP2623807B2 (ja) | セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼ遺伝子 | |
| EP0213463B1 (en) | Interleukin 2 receptor and a method for its production | |
| JP3786433B2 (ja) | 均一なｎ末端を有する組換え型ヒトインターロイキン６及びその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |