JPS63127761A - 移植組成物及びその製造方法 - Google Patents
移植組成物及びその製造方法Info
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- JPS63127761A JPS63127761A JP61273156A JP27315686A JPS63127761A JP S63127761 A JPS63127761 A JP S63127761A JP 61273156 A JP61273156 A JP 61273156A JP 27315686 A JP27315686 A JP 27315686A JP S63127761 A JPS63127761 A JP S63127761A
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- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
- C08H1/06—Macromolecular products derived from proteins derived from horn, hoofs, hair, skin or leather
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/24—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2310/00—Prostheses classified in A61F2/28 or A61F2/30 - A61F2/44 being constructed from or coated with a particular material
- A61F2310/00005—The prosthesis being constructed from a particular material
- A61F2310/00365—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は移植組成物及びその製造方法に関する。
本発明は、移植組成物において、
ヘキサメチレンジイソシアナートにより架橋した架橋７
テロコラーゲンを水性分散液とすることにより、 容量保持性にすぐれ、低免疫原性であるのに加えて、細
胞毒性を示さない移植組成物を得ることができるように
したものである。
テロコラーゲンを水性分散液とすることにより、 容量保持性にすぐれ、低免疫原性であるのに加えて、細
胞毒性を示さない移植組成物を得ることができるように
したものである。
動物の皮膚、血管、角膜、１建、骨、歯などいわゆる結
合組織を構成している主要なタンパク質であるコラーゲ
ンは、体内でコラーゲン合成細胞によって生合成され、
周囲組織のコラーゲン線維組織に組み込まれ、時間の経
過とともに分子間架橋が生成され、不溶性コラーゲンに
変化していく。
合組織を構成している主要なタンパク質であるコラーゲ
ンは、体内でコラーゲン合成細胞によって生合成され、
周囲組織のコラーゲン線維組織に組み込まれ、時間の経
過とともに分子間架橋が生成され、不溶性コラーゲンに
変化していく。
この不溶性コラーゲンは希酸水溶液によっては溶解抽出
が不可能である。しかし、この不溶性コラーゲンは、タ
ンパク質分解酵素例えばペプシンで処理することによっ
て分子間架橋が切断され、可溶性となって溶解抽出が可
能となる。このペプシン処理の際、コラーゲン分子の両
末端に存在するテロペプチドと呼ばれる部分が消化され
て、テロペプチドが除去されたコラーゲンとなる。この
コラーゲンをアテロコラーゲンと呼んでいる。テロペプ
チドは通常のコラーゲンの抗原性の主要因となっている
。テロペプチドが除去うされたアテロコラーゲンは抗原
性を殆んどもだないため、医用材料として利用する場合
極めて好都合である。
が不可能である。しかし、この不溶性コラーゲンは、タ
ンパク質分解酵素例えばペプシンで処理することによっ
て分子間架橋が切断され、可溶性となって溶解抽出が可
能となる。このペプシン処理の際、コラーゲン分子の両
末端に存在するテロペプチドと呼ばれる部分が消化され
て、テロペプチドが除去されたコラーゲンとなる。この
コラーゲンをアテロコラーゲンと呼んでいる。テロペプ
チドは通常のコラーゲンの抗原性の主要因となっている
。テロペプチドが除去うされたアテロコラーゲンは抗原
性を殆んどもだないため、医用材料として利用する場合
極めて好都合である。
このアテロコラーゲンを水性分散液の状態で移植物質と
して組織の欠損部に注入し、周囲組織を切開することな
（組織欠損部を充填することが提案されている。その際
、免疫原性をさらに低下させるため及び耐吸収性（容量
保持性）を向上させるために、主としてグルタルアルデ
ヒドにより架橋されたアテロコラーゲンを用いることが
行われている。（特開昭５８−１７０７９６号公報、特
公昭６０−５４２８８号公報）また、Ｆｒａｎｋ Ｄｅ
Ｌｕｓｔｒ。
して組織の欠損部に注入し、周囲組織を切開することな
（組織欠損部を充填することが提案されている。その際
、免疫原性をさらに低下させるため及び耐吸収性（容量
保持性）を向上させるために、主としてグルタルアルデ
ヒドにより架橋されたアテロコラーゲンを用いることが
行われている。（特開昭５８−１７０７９６号公報、特
公昭６０−５４２８８号公報）また、Ｆｒａｎｋ Ｄｅ
Ｌｕｓｔｒ。
の“Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ５ｔｕｄｙ ｏｆ
ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｍｅｄｉｃ
ａｌ ｄｅｖｉｃｅｓｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ
ｄｅｒｍａｌ ｃｏｌｌａｇｅｎ ”、 Ｊｏｕｒ
ｎａｌｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉ
ａｌｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ＋ Ｖｏｌ、１０＋２０
、 １０９〜１２０（１９８６） ； Ｒ，Ｆ、０１
ｉｖｅｒらの Ｈｉｓｔｏｌｏ−ｇｉｃａｌ ５ｔｕ
ｄｉｅｓ ｏｆ ５ｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａ
ｎｄ １ｎｔｒａｐｅｒｉ−ｔｏｎｅａｌ ｉｍｐｌ
ａｎｔｓ ｏｆ ｔｒｉｐｓｉｎ−ｐｒｅｐａｒｅ
ｄ ｄｅｒｍａｌｃＯｌｌａｇｅｎ ａｌｌｏｇｒ
ａｆｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔｓ ”、 Ｃｌ
１ｎ。
ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｍｅｄｉｃ
ａｌ ｄｅｖｉｃｅｓｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ
ｄｅｒｍａｌ ｃｏｌｌａｇｅｎ ”、 Ｊｏｕｒ
ｎａｌｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉ
ａｌｓ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ＋ Ｖｏｌ、１０＋２０
、 １０９〜１２０（１９８６） ； Ｒ，Ｆ、０１
ｉｖｅｒらの Ｈｉｓｔｏｌｏ−ｇｉｃａｌ ５ｔｕ
ｄｉｅｓ ｏｆ ５ｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａ
ｎｄ １ｎｔｒａｐｅｒｉ−ｔｏｎｅａｌ ｉｍｐｌ
ａｎｔｓ ｏｆ ｔｒｉｐｓｉｎ−ｐｒｅｐａｒｅ
ｄ ｄｅｒｍａｌｃＯｌｌａｇｅｎ ａｌｌｏｇｒ
ａｆｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔｓ ”、 Ｃｌ
１ｎ。
Ｏｒｔ、ｈｏｐ Ｒｅ１． Ｒｅｓ、、 １１５ 、
２９１〜３０２（１９７６）及びＭ、Ｊ、Ｔａｖｉｓの
Ｇｒａｆｔ ａｄｈａｒｅｎｃｅ ｔｏ ｄｅ−ｅｐｉ
ｔｈｅ−１ｉａｌｉｚｅｄ ５ｕｒｆａｃｅｓ ：
Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ５ｔｕｄｙ”。
２９１〜３０２（１９７６）及びＭ、Ｊ、Ｔａｖｉｓの
Ｇｒａｆｔ ａｄｈａｒｅｎｃｅ ｔｏ ｄｅ−ｅｐｉ
ｔｈｅ−１ｉａｌｉｚｅｄ ５ｕｒｆａｃｅｓ ：
Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ５ｔｕｄｙ”。
Ａｎｎ、Ｓｕｒｇ、、 １８４ 、５９４〜６００（１
９７６）の各報告には、グルタルアルデヒド架橋コラー
ゲンが未架橋コラーゲンに比べて移植￥ｙＪ質として容
量保持性及び抗原性の点ですぐれていることが記載され
ている。
９７６）の各報告には、グルタルアルデヒド架橋コラー
ゲンが未架橋コラーゲンに比べて移植￥ｙＪ質として容
量保持性及び抗原性の点ですぐれていることが記載され
ている。
しかしながら、グルタルアルデヒドは重合し易く、した
がって、グルタルアルデヒドを架橋剤として用いて得ら
れた架橋アテロコラーゲンを生体に移植した場合、グル
タルアルデヒド重合物が生体内で長期間に亘って徐々に
解重合を起こし、生体に対して細胞毒性を示す傾向があ
った。
がって、グルタルアルデヒドを架橋剤として用いて得ら
れた架橋アテロコラーゲンを生体に移植した場合、グル
タルアルデヒド重合物が生体内で長期間に亘って徐々に
解重合を起こし、生体に対して細胞毒性を示す傾向があ
った。
本発明の目的は、生体内ですぐれた容量保持性と低抗原
性を示し、さらに細胞毒性のない移植組成物を提供する
ことである。
性を示し、さらに細胞毒性のない移植組成物を提供する
ことである。
前記の目的を達成するため、本発明者らはグルタルアル
デヒドに代わる架橋剤について種々検討を行った結果、
本発明を完成するに至った。
デヒドに代わる架橋剤について種々検討を行った結果、
本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、緩衝液により生理的な状態に調節され
たアテロコラーゲン含を水性分散液からなり、アテロコ
ラーゲンの６０〜１００重量％がヘキサメチレンジイソ
シアナートで架橋された架橋アテロコラーゲンであるこ
とを特徴とする移植組成物に係る。
たアテロコラーゲン含を水性分散液からなり、アテロコ
ラーゲンの６０〜１００重量％がヘキサメチレンジイソ
シアナートで架橋された架橋アテロコラーゲンであるこ
とを特徴とする移植組成物に係る。
本発明の移植組成物において、架橋アテロコラーゲンは
全アテロコラーゲンの６０重量％以上であることが特に
容量保持性及び低免疫原性の点から必要である。この移
植組成物の全アテロコラーゲン量は２５〜６５ｍｇ／ｎ
ｕであることが好ましい。
全アテロコラーゲンの６０重量％以上であることが特に
容量保持性及び低免疫原性の点から必要である。この移
植組成物の全アテロコラーゲン量は２５〜６５ｍｇ／ｎ
ｕであることが好ましい。
また、架橋アテロコラーゲンの粒径は約５０〜２００μ
ｍであることが、微細注射針による生体内への注入には
好適であるが、これ以上の粒径であっても適当な注入装
置による生体内への移植はもちろん可能である。
ｍであることが、微細注射針による生体内への注入には
好適であるが、これ以上の粒径であっても適当な注入装
置による生体内への移植はもちろん可能である。
本発明はまた、前記移植組成物の製造方法に係り、この
方法は、 （ａ） アテロコラーゲンの酸性水溶液を中和して再
構成線維アテロコラーゲンを含有した水性分散液を得る
こと、 （ｂ） 水性分散液をアルコール置換により脱水して
、再構成線維アテロコラーゲン含有アルコール分散液を
得ること、 （ｃ） アルコール分散液中の再構成線維アテロコラ
ーゲンをヘキサメチレンジイソシアナートにより架橋さ
せること、 （ｄ） アルコール分散液を過剰のアルコールで洗浄
し、遊離のヘキサメチレンジイソシアナートを除去する
こと、 （ｅ） アルコール分散液を水置換により脱アルコー
ルを行って水性分散液とし、次いで、未架橋アテロコラ
ーゲンが全アテロコラーゲン量の４０重量％以下となる
ように未架橋アテロコラーゲン水溶液を加えた後、緩衝
液により生理的な状態に調節すること、 からなる。
方法は、 （ａ） アテロコラーゲンの酸性水溶液を中和して再
構成線維アテロコラーゲンを含有した水性分散液を得る
こと、 （ｂ） 水性分散液をアルコール置換により脱水して
、再構成線維アテロコラーゲン含有アルコール分散液を
得ること、 （ｃ） アルコール分散液中の再構成線維アテロコラ
ーゲンをヘキサメチレンジイソシアナートにより架橋さ
せること、 （ｄ） アルコール分散液を過剰のアルコールで洗浄
し、遊離のヘキサメチレンジイソシアナートを除去する
こと、 （ｅ） アルコール分散液を水置換により脱アルコー
ルを行って水性分散液とし、次いで、未架橋アテロコラ
ーゲンが全アテロコラーゲン量の４０重量％以下となる
ように未架橋アテロコラーゲン水溶液を加えた後、緩衝
液により生理的な状態に調節すること、 からなる。
再構成線維アテロコラーゲンをヘキサメチレンジイソシ
アナートで架橋する際、得られる架橋率は反応条件、特
に架橋剤濃度、反応の温度と時間の影響を受ける。反応
はアルコール（例、エタノ 。
アナートで架橋する際、得られる架橋率は反応条件、特
に架橋剤濃度、反応の温度と時間の影響を受ける。反応
はアルコール（例、エタノ 。
−ル）中で通常、室温で０．５〜７２時間行われ、ヘキ
サメチレンジイソシアナートはコラーゲン１ｇ （乾燥
重量）当り０．５〜５００ｍｇの量で使用され、反応混
合物中での濃度は０．０１〜０．５％が好ましい。所望
時間反応させた後、反応混合物を過剰のアルコールで洗
浄して反応を停止させ、この洗浄により遊離の架橋剤を
除去する。次いで水洗浄によりアルコールを水で置換し
、コラーゲン濃度が約３０〜１０ｍｇ７ｍ１になるまで
遠心分離機により濃縮する。この濃縮物（水性分散液）
をホモジナイザーといった粉砕機で、架橋アテロコラー
ゲンを粉砕し、粒径５０〜２００μｍの粒子とする。
サメチレンジイソシアナートはコラーゲン１ｇ （乾燥
重量）当り０．５〜５００ｍｇの量で使用され、反応混
合物中での濃度は０．０１〜０．５％が好ましい。所望
時間反応させた後、反応混合物を過剰のアルコールで洗
浄して反応を停止させ、この洗浄により遊離の架橋剤を
除去する。次いで水洗浄によりアルコールを水で置換し
、コラーゲン濃度が約３０〜１０ｍｇ７ｍ１になるまで
遠心分離機により濃縮する。この濃縮物（水性分散液）
をホモジナイザーといった粉砕機で、架橋アテロコラー
ゲンを粉砕し、粒径５０〜２００μｍの粒子とする。
架橋アテロコラーゲン含有水性分散液は最終的にはリン
酸緩衝液、例えばＫ）１ｚＰＯ４−ＫＨ２ＰＯ４、ＫＨ
２ＰＯ４−Ｎａｚ）ＩＰＯｎ及びＮａＨｚＰＯ４−Ｎａ
ＪＰＯａの各組み合わせから成る群から選択された緩衝
液を添加して、生理的な状態に調節されると共に、全ア
テロコラーゲン濃度を２５〜６５ｍｇ／＋ｎｊ２に調製
される。
酸緩衝液、例えばＫ）１ｚＰＯ４−ＫＨ２ＰＯ４、ＫＨ
２ＰＯ４−Ｎａｚ）ＩＰＯｎ及びＮａＨｚＰＯ４−Ｎａ
ＪＰＯａの各組み合わせから成る群から選択された緩衝
液を添加して、生理的な状態に調節されると共に、全ア
テロコラーゲン濃度を２５〜６５ｍｇ／＋ｎｊ２に調製
される。
以下、実施例に基づいて本発明の詳細な説明する。
去１ｕ１１
新鮮な仔牛の背部の皮を切り取り、その周縁部を切り落
とした後、この背部の皮を水道水で洗浄して皮の外部に
付着している汚れを落とし、さらにパイロジエンフリー
水で洗浄した。こうして得られた皮を７０％エタノール
に浸漬した後、カミソリを用いて毛根部を残さないよう
に、毛及び皮の上面を削ぎ落とした。このとき新たに現
われた真皮の表面に汚れが付着しないように注意する。
とした後、この背部の皮を水道水で洗浄して皮の外部に
付着している汚れを落とし、さらにパイロジエンフリー
水で洗浄した。こうして得られた皮を７０％エタノール
に浸漬した後、カミソリを用いて毛根部を残さないよう
に、毛及び皮の上面を削ぎ落とした。このとき新たに現
われた真皮の表面に汚れが付着しないように注意する。
一方、皮の裏面もカミソリで削ぎ落とし、こうして仔牛
皮の真皮層のみを、汚染させないように取り出した。こ
の真皮層を７０％アルコールに１夜浸漬後、過剰のアル
コールを除去した後、無菌的に粉砕した。次にパイロジ
エンフリーの５％ＮａＣｅ水で洗浄し、遠心脱水し、さ
らにパイ口ジエンフリー水で洗浄後、７０％アルコール
に１夜浸漬した。遠心脱液により過剰のアルコールを除
去し、粉砕真皮を無菌の溶解槽に入れ、パイロジエンフ
リー水を加え、さらに、パイロジエンフリー水に溶解し
かつ濾過除菌したペプシンを加えた。この際、ペプシン
は粉砕真皮に対し０．５％（乾燥重量基準で）を加えた
。また、粉砕真皮の濃度を約０．５〜０．９％、ｐＨを
１ｌｆｌにより３に調節し、温度を２０°Ｃに維持した
。この溶解槽内の混合物を２０℃で３日間ゆるやかに攪
拌処理し、真皮不溶性コラーゲンを完全に溶解して、ア
テロコラーゲン溶液を得た。このアテロコラーゲン溶液
を孔径１μ、０．６５μおよび０．４５μのフィルター
で順次濾過し、得られた濾過溶液にＮ ａ Ｏｔｌを加
えてｐＨを１１．０に調節してペプシンを失活させた。
皮の真皮層のみを、汚染させないように取り出した。こ
の真皮層を７０％アルコールに１夜浸漬後、過剰のアル
コールを除去した後、無菌的に粉砕した。次にパイロジ
エンフリーの５％ＮａＣｅ水で洗浄し、遠心脱水し、さ
らにパイ口ジエンフリー水で洗浄後、７０％アルコール
に１夜浸漬した。遠心脱液により過剰のアルコールを除
去し、粉砕真皮を無菌の溶解槽に入れ、パイロジエンフ
リー水を加え、さらに、パイロジエンフリー水に溶解し
かつ濾過除菌したペプシンを加えた。この際、ペプシン
は粉砕真皮に対し０．５％（乾燥重量基準で）を加えた
。また、粉砕真皮の濃度を約０．５〜０．９％、ｐＨを
１ｌｆｌにより３に調節し、温度を２０°Ｃに維持した
。この溶解槽内の混合物を２０℃で３日間ゆるやかに攪
拌処理し、真皮不溶性コラーゲンを完全に溶解して、ア
テロコラーゲン溶液を得た。このアテロコラーゲン溶液
を孔径１μ、０．６５μおよび０．４５μのフィルター
で順次濾過し、得られた濾過溶液にＮ ａ Ｏｔｌを加
えてｐＨを１１．０に調節してペプシンを失活させた。
次に、この溶液にｌＩＣｆｆを加えてｐｌ＋を７．０に
調節して、アテロコラーゲンを沈殿させ、遠心分離器に
かけてこれを集めた。
調節して、アテロコラーゲンを沈殿させ、遠心分離器に
かけてこれを集めた。
得られたアテロコラーゲンをパイロジエンフリー水で洗
浄した後、ｐＨ３のパイロジエンフリー塩酸水に溶解さ
せ、次いでＮ ａ ＯＨでｐＨを７に調節して再構成線
維アテロコラーゲンを沈殿させて、分散液を得た。この
アテロコラーゲンのアミノ基を活性化するためさらに分
散液にＮ ａ ＯＨを加えてｐｉ（を１０，０に調整し
た。この水性分散液をエタノール置換により脱水し、エ
タノール濃度が酒精度肝で９５度以上を示すまで、エタ
ノール置換を繰り返した。
浄した後、ｐＨ３のパイロジエンフリー塩酸水に溶解さ
せ、次いでＮ ａ ＯＨでｐＨを７に調節して再構成線
維アテロコラーゲンを沈殿させて、分散液を得た。この
アテロコラーゲンのアミノ基を活性化するためさらに分
散液にＮ ａ ＯＨを加えてｐｉ（を１０，０に調整し
た。この水性分散液をエタノール置換により脱水し、エ
タノール濃度が酒精度肝で９５度以上を示すまで、エタ
ノール置換を繰り返した。
エタノール中のコラーゲン濃度が１％の分散液を調製し
、コラーゲンＩｇ（乾燥重量）当り３００ｍｇのヘキサ
メチレンジイソシアナートを加え、２０℃で２０時間反
応を行った。反応後、分散液を過剰のエタノールで洗浄
して遊離のヘキサメチレンジイソシアナートを除去した
。次いで、分散液のエタノールを水置換により除去し、
遠心分離によりコラーゲン濃度４０ｍｇ／ｍＪまで濃縮
した。次いで、この濃縮物をガラスホモジナイザーで処
理して、コラーゲンを粒径約５０〜１００μｍの粒子に
粉砕した。この濃縮物に含まれたコラーゲンの架橋率を
ＴＮＢＳ法（２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン
酸比色法）で測定したところ、６９％であった。粉砕処
理後の濃縮物にリン酸緩衝液Ｉ ＭＮａＪＰＯ４−Ｎａ
Ｈ２ＰＯａを加えて０．１ ＭＮａｚＨＰＯｇ−ＮａＨ
ｚＰ０４、ＰＨ７，０及び全コラーゲン濃度３５ｍｇ／
ｉＡの移植組成物を得た。
、コラーゲンＩｇ（乾燥重量）当り３００ｍｇのヘキサ
メチレンジイソシアナートを加え、２０℃で２０時間反
応を行った。反応後、分散液を過剰のエタノールで洗浄
して遊離のヘキサメチレンジイソシアナートを除去した
。次いで、分散液のエタノールを水置換により除去し、
遠心分離によりコラーゲン濃度４０ｍｇ／ｍＪまで濃縮
した。次いで、この濃縮物をガラスホモジナイザーで処
理して、コラーゲンを粒径約５０〜１００μｍの粒子に
粉砕した。この濃縮物に含まれたコラーゲンの架橋率を
ＴＮＢＳ法（２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン
酸比色法）で測定したところ、６９％であった。粉砕処
理後の濃縮物にリン酸緩衝液Ｉ ＭＮａＪＰＯ４−Ｎａ
Ｈ２ＰＯａを加えて０．１ ＭＮａｚＨＰＯｇ−ＮａＨ
ｚＰ０４、ＰＨ７，０及び全コラーゲン濃度３５ｍｇ／
ｉＡの移植組成物を得た。
本発明の移植組成物について、移植試験、細胞毒性試験
及びコラーゲン分解酵素（コラゲナーゼ）に対する安定
性試験を行った。
及びコラーゲン分解酵素（コラゲナーゼ）に対する安定
性試験を行った。
上り換且拭辰
前記実施例で得られた移植組成物を用いて矯正治療を必
要とする患者５０４人にスキンテストを行い、５人（１
，０％）に陽性反応が認められた。
要とする患者５０４人にスキンテストを行い、５人（１
，０％）に陽性反応が認められた。
残りの４９９人にこの移植組成物を用いて移植治療を行
ったところ、アレルギー性反応（赤斑）を現わした患者
はわずかに３名（０，６％）であった。
ったところ、アレルギー性反応（赤斑）を現わした患者
はわずかに３名（０，６％）であった。
一方、未架橋アテロコラーゲン水溶液を用いて同様の患
者６０８人にスキンテストを行い、２４人（３，９％）
に陽性反応が認められた。残りの５８４人に未架橋アテ
ロコラーゲン水溶液を用いて移植治療を行ったところ、
アレルギー性反応（赤斑）を現わした患者は１１人（１
，９％）であった。
者６０８人にスキンテストを行い、２４人（３，９％）
に陽性反応が認められた。残りの５８４人に未架橋アテ
ロコラーゲン水溶液を用いて移植治療を行ったところ、
アレルギー性反応（赤斑）を現わした患者は１１人（１
，９％）であった。
以上の結果から明らかな通り、本発明の移植組成物は未
架橋アテロコラーゲンに比べて免疫原性の低下が認めら
れる。
架橋アテロコラーゲンに比べて免疫原性の低下が認めら
れる。
２）週１１■ＩＫ隨
ヒト線維芽細胞のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ
）培養試験を行った。培養皿に各種コラーゲン液を塗布
し、風乾後に培養皿１枚にっき１×１０Ｓ個の細胞を播
いて７日間培養し、細胞数を数え、細胞形態の観察を行
った。参考のため、全くコラーゲンを塗布しない培養皿
を用いた試験も行った。
）培養試験を行った。培養皿に各種コラーゲン液を塗布
し、風乾後に培養皿１枚にっき１×１０Ｓ個の細胞を播
いて７日間培養し、細胞数を数え、細胞形態の観察を行
った。参考のため、全くコラーゲンを塗布しない培養皿
を用いた試験も行った。
用いたアテロコラーゲンの種類及び結果を次表に示した
。
。
アテロコラーゲンの種 廠ｌ玖 旦良展皿１
、 ヘキサメチレンジイソシアナート ８．
４×１０Ｓ 正常架橋（本発明） ２、グルタルフルテヒド 架橋 ２．７ Ｘ
１０５ 著しく悪い３、未架橋
５．４ Ｘ １０’ 正常４、コラーゲンなし
４．７ Ｘ １０’ 正常以上の結果から
明らかな通り、本発明の移植組成物には細胞毒性は認め
られなかった。
、 ヘキサメチレンジイソシアナート ８．
４×１０Ｓ 正常架橋（本発明） ２、グルタルフルテヒド 架橋 ２．７ Ｘ
１０５ 著しく悪い３、未架橋
５．４ Ｘ １０’ 正常４、コラーゲンなし
４．７ Ｘ １０’ 正常以上の結果から
明らかな通り、本発明の移植組成物には細胞毒性は認め
られなかった。
３）コラーゲン＼” 、（コラゲナーゼ）に対土ゑに足
箪拭駅 生体内での容量保持性を示す尺度として、菌由来のコラ
ゲナーゼを用いて、前記実施例の移植組成物を処理した
ところ、約６７．５％の架橋アテロコラーゲンが分解さ
れた。
箪拭駅 生体内での容量保持性を示す尺度として、菌由来のコラ
ゲナーゼを用いて、前記実施例の移植組成物を処理した
ところ、約６７．５％の架橋アテロコラーゲンが分解さ
れた。
一方、同じコラゲナーゼにより未架橋アテロコラーゲン
はほぼ１００％が分解された。
はほぼ１００％が分解された。
したがって、未架橋アテロコラーゲンに比べて架橋アテ
ロコラーゲンはコラーゲン分解酵素に対する安定性がす
ぐれているので、生体内での容量保持性も高いことがわ
かる。
ロコラーゲンはコラーゲン分解酵素に対する安定性がす
ぐれているので、生体内での容量保持性も高いことがわ
かる。
失施貫主
実施例１の移植組成物を得る際に調製された、粒径約５
０〜１００μｍの架橋アテロコラーゲン含有濃縮物に未
架橋アテロコラーゲン水溶液を、未架橋アテロコラーゲ
ンの量が全アテロコラーゲン量の２０重量％となるよう
に加えた後、実施例１と同様にリン酸緩衝液を加えて移
植組成物を得た。
０〜１００μｍの架橋アテロコラーゲン含有濃縮物に未
架橋アテロコラーゲン水溶液を、未架橋アテロコラーゲ
ンの量が全アテロコラーゲン量の２０重量％となるよう
に加えた後、実施例１と同様にリン酸緩衝液を加えて移
植組成物を得た。
この移植組成物について、前記と同様の移植試験及び細
胞毒性試験を行い、実施例１と同様の結果が得られた。
胞毒性試験を行い、実施例１と同様の結果が得られた。
本発明は以上説明したように、アテロコラーゲンを含む
移植組成物において、アテロコラーゲンがヘキサメチレ
ンジイソシアナートで架橋されているために、すぐれた
容量保持性と抵抗原性を有する上に細胞毒性がないので
、軟組織の強化並びに先天性異常及び後天性欠損の治療
や矯正治療などにおける移植物質としてすぐれた効果を
発揮する。
移植組成物において、アテロコラーゲンがヘキサメチレ
ンジイソシアナートで架橋されているために、すぐれた
容量保持性と抵抗原性を有する上に細胞毒性がないので
、軟組織の強化並びに先天性異常及び後天性欠損の治療
や矯正治療などにおける移植物質としてすぐれた効果を
発揮する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、緩衝液により生理的な状態に調節されたアテロコラ
ーゲン含有水性分散液からなり、アテロコラーゲンの６
０〜１００重量％がヘキサメチレンジイソシアナートで
架橋された架橋アテロコラーゲンであることを特徴とす
る移植組成物。 ２、分散液中の全アテロコラーゲン量が２５〜６５ｍｇ
／ｍｌであることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
載の移植組成物。 ３、架橋アテロコラーゲンの粒径が約５０〜２００μｍ
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項又は第２
項記載の移植組成物。 ４、緩衝液により生理的な状態に調節されたアテロコラ
ーゲン含有水性分散液からなり、アテロコラーゲンの６
０〜１００重量％がヘキサメチレンジイソシアナートで
架橋された架橋アテロコラーゲンである移植組成物の製
造方法において、（ａ）アテロコラーゲンの酸性水溶液
を中和して再構成線維アテロコラーゲンを含有した水性
分散液を得ること、 （ｂ）水性分散液をアルコール置換により脱水して、再
構成線維アテロコラーゲン含有アルコール分散液を得る
こと、 （ｃ）アルコール分散液中の再構成線維アテロコラーゲ
ンをヘキサメチレンジイソシアナートにより架橋させる
こと、 （ｄ）アルコール分散液を過剰のアルコールで洗浄し、
遊離のヘキサメチレンジイソシアナートを除去すること
、 （ｅ）アルコール分散液を水置換により脱アルコールを
行って水性分散液とし、次いで、未架橋アテロコラーゲ
ンが全アテロコラーゲン量の４０重量％以下となるよう
に未架橋アテロコラーゲン水溶液を加えた後、緩衝液に
より生理的な状態に調節すること、 からなることを特徴とする移植組成物の製造方法。 ５、生理的な状態に調節された水性分散液中の全アテロ
コラーゲン量が２５〜６５ｍｇ／ｍｌであることを特徴
とする特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６、架橋アテロコラーゲンの粒径が約５０〜２００μｍ
であることを特徴とする特許請求の範囲第４項又は第５
項記載の方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61273156A JPH0712375B2 (ja) | 1986-11-17 | 1986-11-17 | 移植組成物及びその製造方法 |
| EP87309974A EP0268421A3 (en) | 1986-11-17 | 1987-11-11 | An implant composition and a method of preparing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61273156A JPH0712375B2 (ja) | 1986-11-17 | 1986-11-17 | 移植組成物及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63127761A true JPS63127761A (ja) | 1988-05-31 |
| JPH0712375B2 JPH0712375B2 (ja) | 1995-02-15 |
Family
ID=17523889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61273156A Expired - Lifetime JPH0712375B2 (ja) | 1986-11-17 | 1986-11-17 | 移植組成物及びその製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0268421A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0712375B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210048151A (ko) | 2019-10-23 | 2021-05-03 | 허동욱 | 중력 주조기 작동방법 |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01265970A (ja) * | 1988-04-19 | 1989-10-24 | Shiseido Co Ltd | ヒアルロン酸を含有させたコラーゲン水溶液又は水分散液 |
| US5395620A (en) * | 1989-01-31 | 1995-03-07 | Coletica | Biodegradable microcapsules having walls composed of crosslinked atelocollagen and polyholoside |
| US5256418A (en) * | 1990-04-06 | 1993-10-26 | Organogenesis, Inc. | Collagen constructs |
| US5378469A (en) * | 1990-04-06 | 1995-01-03 | Organogenesis, Inc. | Collagen threads |
| US5314874A (en) * | 1991-04-19 | 1994-05-24 | Koken Co., Ltd. | Intracorporeally injectable composition for implanting highly concentrated cross-linked atelocollagen |
| GB9215002D0 (en) * | 1992-07-15 | 1992-08-26 | Univ Singapore | Method of fixing biological tissue |
| US5676698A (en) * | 1993-09-07 | 1997-10-14 | Datascope Investment Corp. | Soft tissue implant |
| JP3486758B2 (ja) * | 1994-06-24 | 2004-01-13 | 株式会社高研 | 注入可能な涙小管閉鎖剤 |
| JP3799626B2 (ja) * | 1995-04-25 | 2006-07-19 | 有限会社ナイセム | 心臓血管修復材及びその製造方法 |
| GB2329181B (en) * | 1997-09-11 | 2002-03-13 | Johnson & Johnson Medical | Bioabsorbable Wound Dressing Materials |
| EP1407787B1 (en) * | 2001-06-20 | 2009-04-29 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Method of promoting nucleic acid transfer |
| CN115252898B (zh) * | 2022-08-19 | 2023-08-18 | 江苏西宏生物医药有限公司 | 一种长效微粒ⅰ型与ⅴ型胶原蛋白复合植入剂 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3020611C2 (de) * | 1980-05-30 | 1983-01-05 | Chemokol Gesellschaft zur Entwicklung von Kollagenprodukten, 5190 Stolberg | Verfahren zur Herstellung von Kollagenmaterial für chirurgische Zwecke |
| US4424208A (en) * | 1982-01-11 | 1984-01-03 | Collagen Corporation | Collagen implant material and method for augmenting soft tissue |
| GB8413319D0 (en) * | 1984-05-24 | 1984-06-27 | Oliver Roy Frederick | Biological material |
-
1986
- 1986-11-17 JP JP61273156A patent/JPH0712375B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-11-11 EP EP87309974A patent/EP0268421A3/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210048151A (ko) | 2019-10-23 | 2021-05-03 | 허동욱 | 중력 주조기 작동방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0712375B2 (ja) | 1995-02-15 |
| EP0268421A3 (en) | 1988-08-03 |
| EP0268421A2 (en) | 1988-05-25 |
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