JPS63129999A - γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法 - Google Patents

γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法

Info

Publication number
JPS63129999A
JPS63129999A JP27521986A JP27521986A JPS63129999A JP S63129999 A JPS63129999 A JP S63129999A JP 27521986 A JP27521986 A JP 27521986A JP 27521986 A JP27521986 A JP 27521986A JP S63129999 A JPS63129999 A JP S63129999A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
substrate
gamma
activity
glutamyl
solubility
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP27521986A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH07108240B2 (ja
Inventor
Yasuhiko Noguchi
野口 保彦
Tatsuhiko Tanaka
龍彦 田中
Shinji Muroga
室賀 慎二
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHINOTESUTO KENKYUSHO KK
Shino Test Corp
Original Assignee
SHINOTESUTO KENKYUSHO KK
Shino Test Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHINOTESUTO KENKYUSHO KK, Shino Test Corp filed Critical SHINOTESUTO KENKYUSHO KK
Priority to JP61275219A priority Critical patent/JPH07108240B2/ja
Publication of JPS63129999A publication Critical patent/JPS63129999A/ja
Publication of JPH07108240B2 publication Critical patent/JPH07108240B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野1 本発明は、γ−グルタミルトランスペプチダーゼの活性
測定方法に関する。
[従来の技術〕 γ−グルタミルトランスペプチグーゼ(以下、γ−GT
Pと略記する)は生体内でグルタチオンや他のγ−グル
タミルペプチドからγ−グルタミル基をアミノ酸、ペプ
チドなどの受容体に転移する酵素で肝、腎、膵などの各
臓器に多く存在する。
臨床的には閉塞性黄痘、慢性活動性肝炎、肝癌、アルコ
ール性肝炎などの肝臓疾患にγ−〇TP活性の上昇がみ
ちれる。従って、その活性測定は肝臓疾患の診断として
今日法〈実施されるようになっている。
γ−GTPの活性測定法には、種々の基質を用いた方法
が発表されているが、従来のし一γ−グルタミル−p−
ニトロアニリド(以下、本基質と略記する)を用いる方
法が依然として広く行なわれている。しかしながら、本
基質は溶解性と安定性に重大な問題を有していることは
周知の通りである。BrIち、本基質は酵素反応の至3
1ipHである中性付近において極めて溶解性が悪く、
そのため溶解度が比較的高い酸性側pHにて基質を予め
充分溶解しておき、使用時、中性付近の緩衝液と混合し
て使用する酸溶解法をとっている。
この方法では、本基質は溶液中の強酸により加水分解を
うけ、遊離したp−二)ロアニリドが増太し、ブランク
上昇が起こり、試薬調製後の安定性が1日以内である。
このため、本基質の溶解性に対する改善が種々試みられ
ている次第である。
例えば、シクロデキストリン(以下、CDと略記する)
の包接力を利用して本基質の水に対する溶解性を高める
ことがイテなわれている。ところが、この方法はα−C
D、β−CD又はγ−CDを単独に用いた場合、或いは
それらを混合物として用いた場合、低温域での溶解性は
決して満足できるものではない。こうした問題に対して
、メチル基で修飾されたβ−CDを用いることにより、
低温における溶解性を改善させることが行なわれている
(特開昭61−1399号公報)。
しかしながら、その方法−二おける本基質の可溶化の改
善では充分ではない。水に対する溶解性という点では、
メチル化CDは一応の改善がなされているが、温度が高
くなるにつれ、その溶解性が低下するという欠、αを有
しているからである。
[発明が解決しようとする問題点J 本発明者らは前記の欠点を解消するγ−GTP活性の測
定法を提供することを河的として、研究を重ねた結果、
既存のCDにマルトースを結合させたマルトシルCDを
使用すれば、CDの特徴である包接能を維持したまま、
水への溶解性が飛躍的に向上することを見出し、この知
見に基づいて本発明を完成するに至った。
[問題点を解決するための手段] 本発明は、L−γ−グルタミル−p−ニトロアニリドを
基質に用いるγ−GTP活性測定法において、マルトシ
ルCDを基質の可溶化創として使用することを特徴とす
るγ−GTPの活性測定方法である。
本発明は、マルトシルCDを本基質のL−γ−グルタミ
ル−p−二Fロアニリドト共にγ−GTPの酵素反応系
に存在させればよく、γ−GTP活性の測定繰作は受容
体のグリシルグリシン及びトリス−塩酸緩衝液等を月い
た公知の試薬中で悸なう。
本発明で使用するマルトシルCDとは、一般式0式%) −CD又はγ−〇(グルコース)o −CDで表わさル
この場合、ms n及び0は通常2〜3であるが、2以
上でかつMlN及びOが1〜2であればそれぞれ整数で
なくても溶解度を損なうことはない。
又、α型、β型又はγ型のCDはいずれも単独で使用す
ることができ、かつそれらの混合物としても使用するこ
とが可能である。
そして、それらのマルトシルCDは、CDとマルトース
を原料とし、酵素プルラナーゼを利用して結合させる方
法により製造することができる(特開昭61−1976
02公報)。
[作用効果1 本発明のマルトシルCDの包接作用を利用することによ
り、本基質の基質溶解性が改善された。
特にメチル化CDにみられた高温における溶解性の低下
を防止することが可能になり、基質溶解後の基質液の安
定性も改善された。(表1及び2参照) 表1 水に対する溶解度 以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれ
らによって限定されるものではない。
実施例1 (1)試薬の調製 ■緩衝液 トリスヒレ口キシメチルアミ7メタン19.8gとグリ
シルグリシン16.1gを約9001Llの精製水に溶
解し、塩酸を用いてpH8,2(20°C)とした後、
vi製氷を加えて全filo00胛nとする。
■基質液 クエン酸2.1gを約900zfの精製水で溶解した後
、水酸化ナトリウムを用いてpH5,0とし、マルトシ
ルーα−CD50g、!−L−γ−グルタミル−4−ニ
トロアニリド3.46gを加えた後、精製水で全量10
00zfとする。
(2)i!M定操作 上記■の緩衝液2.1*fに試料(γ−GTP酵素溶液
) 90μlを加え、約2〜3分予備加温しく37℃)
、これに上記■の基質液1.2zI!を加えよく混和し
た後、分光光度計にて415nmにおける1分間あたり
の吸光度の増加を測定する。
(3)単位(活性)の計算 1分間当たりの吸光度の増加量をXとすると(4)結果 第2表に従来の酸溶解法を比較対照として示した。
一ドーL−ぐ 実施例2 実施例1のマルトシル−α−CDをマルトシル−β−C
Dに代え、他は実施例1と同様に行なう。この結果を表
2に示す。
実施例3 実施例ユのマルトシル−α−CDをノマルトシルーβ−
CDに代え、他は実施例1と同様に行なう。この結果を
表2に示す。
実施例4

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. L−γ−グルタミル−p−ニトロアニリドを基質に用い
    るγ−グルタミルトランスペプチダーゼ活性測定法にお
    いて、マルトシルシクロデキストリンを基質の可溶化剤
    として使用することを特徴とするγ−グルタミルトラン
    スペプチダーゼの活性測定方法。
JP61275219A 1986-11-20 1986-11-20 γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法 Expired - Lifetime JPH07108240B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP61275219A JPH07108240B2 (ja) 1986-11-20 1986-11-20 γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP61275219A JPH07108240B2 (ja) 1986-11-20 1986-11-20 γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS63129999A true JPS63129999A (ja) 1988-06-02
JPH07108240B2 JPH07108240B2 (ja) 1995-11-22

Family

ID=17552360

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP61275219A Expired - Lifetime JPH07108240B2 (ja) 1986-11-20 1986-11-20 γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JPH07108240B2 (ja)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS611399A (ja) * 1984-05-21 1986-01-07 Wako Pure Chem Ind Ltd r−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法
JPS61197602A (ja) * 1985-02-28 1986-09-01 Nikken Kagaku Kk 新規分岐サイクロデキストリンおよびその製造方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS611399A (ja) * 1984-05-21 1986-01-07 Wako Pure Chem Ind Ltd r−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法
JPS61197602A (ja) * 1985-02-28 1986-09-01 Nikken Kagaku Kk 新規分岐サイクロデキストリンおよびその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
JPH07108240B2 (ja) 1995-11-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pétra [31] Bovine procarboxypeptidase and carboxypeptidase A
EP0110306B1 (de) Chromogene Verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
Bünning et al. Functional residues at the active site of angiotensin converting enzyme
Koshland Jr et al. Enzyme Catalysis and Enzyme Specificity-Combination of Amino Acids at the Active Site of PHOSPHOGLUCOMUTASE1
JPS63129999A (ja) γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法
Plummer Jr Evidence for a carboxyl group at the active center of bovine carboxypeptidase B
JP3193085B2 (ja) アンギオテンシン変換酵素阻害剤含有組成物の製造方法
IT8149830A1 (it) Procedimento per la produzione di enzimi semisintetici e prodotto ottenuto
JPS61260900A (ja) γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性測定方法
JPH0584074A (ja) オリゴ糖酸化酵素、オリゴ糖酸化酵素の製造方法、オリゴ糖の測定方法、オリゴ糖酸の製造方法及びアミラーゼ活性測定法
JP3064031B2 (ja) 新規オリゴ糖およびその製造法
JPS60120984A (ja) 耐熱性サイクロデキストリン・グリコシルトランスフェラ−ゼ及びその製造方法
CN1371426A (zh) 通过酶水解制备假叶树甾类糖苷衍生物的方法
Carty et al. The papain-catalyzed synthesis of hippuryl anilide I. General properties of the enzyme system
JP3055931B2 (ja) ガラクトシル―マルトオリゴ糖誘導体、その製造法及びそれを用いたヒト膵臓型及び唾液型α―アミラーゼの分別定量方法
Yabuuchi et al. The mode of action of a carboxypeptidase from malt
JP2741031B2 (ja) アミラーゼ測定方法
JPS6440B2 (ja)
JP3511211B2 (ja) アミラーゼ活性測定用試薬
JPH0423995A (ja) トランスペプチデーション用試薬及び方法
JP2860797B2 (ja) グルコアミラーゼ活性測定法
JP3667470B2 (ja) 酸性カルボキシペプチダーゼ活性の測定法及び測定試薬
JPH03160997A (ja) L―アスパラギンのアミド結合の水解方法及び試薬
JPS611399A (ja) r−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法
JP3637088B2 (ja) ヘテロオリゴ糖3糖類の製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term