JPS63159452A - 膜組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、分子量１万以上のヒアルロン酸またはその無
毒性塩、好ましくはヒアルロン酸産生微生物からの分子
量１万以上のヒアルロン酸を主成分としてなるヒアルロ
ン酸を有効成分とした膜組成物に関するもので、本発明
のヒアルロン酸を有効成分とした膜組成物は化粧用バッ
ク剤、炎症の治癒あるいは止血を目的として炎症部位や
傷口等の創面に貼付する医薬用貼付剤として、親和性の
優れた膜組成物である。　。

〈従来の技術〉 従来ヒアルロン酸またはその無毒性塩は水性皮膚化粧料
の基剤中に混和配合され、感触官能効果、荒れ肌改善効
果、角質改善効果を奏する化粧料として利用されている
。

化粧用パック剤や医薬用貼付剤として有用な膜形成剤は
、表皮の形成能、抗原性、毒性、生分解性や創面への密
着性、創面からの剥離の容易性等の優れたものが好まし
く、従来よりの膜形成剤としては、ガム質、ゼラチン、
ペクチン、コラーゲン等の天然高分子、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン、アセテートポリマー、
ヒドロキシアクリルポリマー、ポリアミノ酸等の合成高
分子が使用されている。さらに近年、ニワトリの８冠、
ウシの関節、クジラの軟骨等の動物細胞の結合組織内に
存在している天然のヒアルロン酸を抽出法にて回収し、
これをポリウレタン、ポリオレフィン、ビニルポリマー
、ポリアミド、ポリエステル、ポリシロキサン等のポリ
マー原料に包含させた膜組成物が知られている（特開昭
６０−１３０６２３号公報、特開昭６０−１３０６３８
号公報）。

〈発明が解決しようとする問題点〉 しかしこれらの天然高分子や合成高分子の膜は、生体適
応生が悪く、また使用時において塗布した後に乾燥して
充分な膜となるまでに時間を要する膜形成性の欠点があ
った。また特に合成高分子の膜においては、抗原性、毒
性、生分解性の点において必ずしも適したものではなか
った。さらに天然のヒアルロン酸をポリマー原料に包含
させた膜組成物においても、天然のヒアルロン酸自体を
、合成ポリマーを使用しないで単独での膜形成は成し難
く、そのため成形加工された合成ポリマーに塗布する方
法しかないものであり、上記と同様の問題を含むもので
あった。

従って、生体適応性や膜形成性がよく、さらに表皮の形
成能、抗原性、毒性、生分解性や創面への密着性、創面
からの剥離の容易性等の優れた膜組成物が望まれている
。

く問題点を解決するための手段〉 本発明者らは、このような要望を充足すべき優れた膜組
成物について、鋭意研究した結果、意外にも、分子量１
万以上のヒアルロン酸またはその無毒性塩、好ましくは
ヒアルロン酸産生微生物、例えばストレプトコッカス属
に属するヒアルロン酸度生菌であるストレプトコッカス
・エクイまたはストレプトコッカス・ズーエピデミカス
からの分子量１万以上のヒアルロン酸を主成分としてな
るヒアルロン酸を有効成分とした用いることにより、簡
便に膜状物が得られ、かつこのようにして得られた膜組
成物は、生体適応性、膜形成性の点で優れ、さらに表皮
の形成能もよく、抗原性、毒性も見られず、生分解性や
創面への密着性、創面からの剥離の容易性等の優れた化
粧用パック剤、炎症の治癒あるいは止血を目的として炎
症部位や傷口等の創面に貼付する医薬用貼付剤として優
れ、さらに塗布面の組織に対しても親和性の優れた膜組
成物であることを見出した。さらにこのヒアルロン酸に
ムコ多糖体であるコンドロイチン硫酸を混合したものに
おいても、同様に優れた膜組成物が得られることを知っ
た。

本発明は、上記の知見に基づいて完成されたもので、分
子量１万以上のヒアルロン酸またはその無毒性塩を主成
分としてなるヒアルロン酸を有効成分とした膜組成物で
ある。

まずヒアルロン酸としては、例えばニワトリの鶏冠、ブ
タの尾、ウシの関節、クジラの軟骨や魚類の眼球ガラス
体等の魚類を含む動物細胞、その他の動物組織からの抽
出、精製［ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ｊ、Ｂｉ。

１、Ｃｈｅｍ、）１８６．４９５〜５１１．（１９５０
）　、バイオケミ力・エト・バイオロジカル ｃｔａ）１５８．１７〜３０．（１９６６）、特開昭５
２−１４５５９４号公報、特開昭５５−７４７９６号公
報］、ヒアルロン酸産生微生物からの醗酵、抽出、精製
により得られるもので、本発明においてはヒアルロン酸
産生微生物からのヒアルロン酸を用いることが目的とす
るヒアルロン酸の容易な精製、回収や再現性のある規格
化等の点で好ましい、ヒアルロン酸産生微生物としては
、例えばストレプトコッカス属に属するヒアルロン酸産
生菌株としてストレプトコッカス・エクイ（Ｓｔｏｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｅｑｕｉ）、ストレプトコッカ
ス・ピオゲネス（Ｓｔｏｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｐ
ｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・エクイシミリ
ス（Ｓｔｏｒｅｐｔ。

ｃｏｃｃｕｓ　　ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）、ストレプ
トコッカス・ディスガラクチイエ（Ｓｔｏｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ　　ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプ
トコッカス・ズーエピデミカス（Ｓｔｏｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　　ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）［キリパー
−ボルフ、エト・オール（Ｋｉｌｉｐｐｅｒ−Ｂａｌｚ
　　ｅｔ　　ａｌ）エフ・イー・エム・ニス・マイクロ
バイオロジー・レターズ（Ｆ、Ｅ、Ｍ、Ｓ、Ｍｉ　ｃ　
ｒｏｂ　ｉ　。

１部ｇｙ　　Ｌｅｔｔｅｒｓ）、２４．３５５〜３６４
．１９８４．ファロウ・ジエー・ニー・イー、エト・オ
ール（Ｆａｒｒｏｗ　　Ｊ、Ａ、Ｅ、ｅｔ　　ａｌ）シ
ステマティック・アンド・アプライド・マイクロバイオ
ロジー（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　ａｎｄ　　Ａｐｐｌ
ｉｅｄ　　Ｍｉｃｒｏｂｉ。

１部ｇｙ）、５．４８３〜４９３．１９８４．ブリデエ
ッグ・ビー・ディ、エト・オール（Ｂｒｉｄｅｇ　　Ｐ
、Ｄ、ｅｔ　　ａｌ）ジャーナル・オブ・ジェネラル・
マイクロバイオロジー（Ｊｕｏｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｇ
ｅｎｅｒａｌ　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、１２９
．５６５〜５９７．１９８３］が挙げられ、これらの醗
酵、抽出、精製法は、例えばアクタ・バンロジカエ・ミ
クロビオロジ力・スカンジナビ力・セクション・Ｂ（Ａ
ｃｔａ、Ｐａｔｈ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、５ｃａｎｄ。

５ｅｃｔｉｏｎ　　Ｂ）８４．１６２〜１６４．（１９
７６）、特開昭５８−５６６９２号公報、特表昭６０−
５００５９７号公報、特開昭６１−１５６９８号公報等
を参照して得ればよい、特に、ストレプトコッカス・エ
クイまたはストレプトコッカス・ズーエピデミカスから
得られたヒアルロン酸（平均分子量が約１００万、８０
％の信頼限界で約１２万〜約３５０万）やこのヒアルロ
ン酸をヒアルロニダーゼで４０分間処理して得られるヒ
アルロン酸く平均分子量が約１０万、８０％の信頼限界
で約３万〜約２５万）が好ましく、このようなヒアルロ
ン酸またはこのヒアルロン酸をヒアルロニダーゼで６０
分間以内処理して得られるヒアルロン酸が使用できる。

なおこのヒアルロン酸を９０ないし１５０分間またはそ
れ以上の時間でのヒアルロニダーゼ処理して得られるヒ
アルロン酸は、１万以下のヒアルロン酸成分が多くなり
使用に適さなくなるため、少なくとも分子量が１万以上
のヒアルロン酸を主成分として含有するヒアルロン酸で
あればよい、またヒアルロン酸の無毒性塩としては、そ
のナトリウム、カリウム塩が挙げられる。さらにこのよ
うなヒアルロン酸に。

ヒアルロン酸以外のムコ多糖体、例えばコンドロイチン
硫酸、デルマタン硫酸、グラタン硫酸、ヘパラン硫酸等
を、ヒアルロン酸１部当たり０．１〜１０部を混合して
用いてもよく、特にコンドロイチン硫酸が好ましい。

次いで本発明の膜組成物を得るに当たり、例えばヒアル
ロン酸の０．５％以上、好ましくは１〜１０部程度の水
溶液を調製し、これを任意の形状の膜形成用トレイに適
宜の厚さ、好ましくは１ｍｍ以上、好ましくは１〜１５
ｍｍ程度になるように注入し、その後水分を除去すれば
よく、簡便には常温、加温条件での通風乾燥、温風乾燥
、熱風乾燥するかまたは凍結条件下で凍結乾燥して水分
を除去して所望の膜組成物を得ればよい、さらにトレイ
の代わりにガーゼやろ紙等の布紙類、コラーゲン等の皮
膚類似物等の膜支持体の上で、同様の方法にて膜形成し
てもよい。

さらに本発明の膜組成物を得るに当たり水溶性ビタミン
類、脂溶性ビタミン類、レシチン、γ−リルン酸、ホル
モン類、酵素、酵素阻害剤、殺菌剤その他の生理活性物
質、紫外線吸収剤、紫外線除去剤、角質軟化剤、保湿剤
等化粧用、医薬用貼付剤に使用し得る添加物を予め添加
するか、または膜成形後に塗布または含浸せしめてもよ
い。

さらに、ヒアルロン酸を希釈して使用するに当たり、必
要に応じて、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリ
ドン等の無毒性高分子水溶性ポリマーを用いてもよい。

このようにして得られたヒアルロン酸を有効成分として
なる膜組成物は、生体適応性、膜形成性の点で優れ、さ
らに表皮の形成能もよく、抗原性、毒性も見られず、生
分解性や創面への密着性、創面からの剥離の容易性等の
優れた化粧用パック剤、炎症の治癒あるいは止血を目的
として炎症部位や傷口等の創面に貼付する医薬用貼付剤
として優れ、さらに塗布面の組織に対しても親和性の優
れたものである。

〈実施例〉 次いで本発明の実施例を挙げるが、本発明は何らこれに
よって限定されるものではない。

実施例１ −１２０℃、２０分間加熱殺菌したグルコース２％、ペ
プトン１．５％、コーンスチープリ力−２％含有培地２
０Ｌ　（ｐＨ７，２）を有する３０Ｌ用ジャーファーメ
ンタ−に、予めグルコース１％、イーストエキス０．５
％、ペプトン１．５％含有培地Ｉして培養したストレプ
トコッカス・エクイ（ＡＴＣＣ９５２７）の培養物全量
を移植した、培養は、窒素ガスを吹き込むことにより撹
拌しなからＩＯＮ水酸化ナトリウムを用いてｐＨ６゜８
〜７．５に調製しながら３７℃、１日間行った、培養終
了後、培養液を１００℃、３０分間加熱処理後、遠心分
離にて菌体およびその他の夾雑物を除去し、得られた上
清液に４ＯＬのエタノールを撹拌下加えて繊維状物質を
沈澱せしめた。これをろ取後、エタノールで充分洗浄後
、再び水に溶解し、セチルピリジウムクロライドを加え
、生じた沈澱物質をろ取し、水および０．１Ｍ塩化ナト
リウム水溶液にて十分洗浄後、５Ｌの０．５Ｍ塩化すｌ
・リウム水溶液にてヒアルロン酸を抽出し、その溶液に
エタノールＩＯＬを加え、生じた繊維状物質をろ取し、
この繊維状物質を７５％エタノール水、次いでエタノー
ルで十分洗浄後、真空乾燥して培養液ＩＬ当たり３９の
ヒアルロン酸（本島の高速液体クロマトグラフィーによ
る分子量分４Ｉは第１図に示す、なお高速液体クロマト
グラフィーは溶出液として０．１Ｍリン酸カリウム水溶
液を用い、流量０．３ｍｌ／分で２０８ｎｍで検出した
。また第１図における保持時間５８分のピークは塩化ナ
トリウムピークである。この結果、木晶は極めて均質な
平均分子量約１００万のヒアルロン酸を主成分としたも
のである。）を得た。

さらに本島を水酸化ナトリウム水溶液に加えて、常法に
より、ヒアルロン酸ナトリウム塩を得た。

次いでこのヒアルロン酸ナトリウム塩ｌ＆を１００ｍ１
の水溶液に添加して溶解し、これを１０×１００ｍ２の
トレイに厚さ５　ｍ　ｍになるよう注入した。さらにこ
れを、通風乾燥して厚さ約０゜５　ｒｏ　ｍの膜を得た
。このようにして得られた膜は、膜形成性や生体組織へ
の親和適応性、表皮の形成能、抗原性、毒性、生分解性
や創面への密着性、創面からの剥離の容易性等の優れた
膜組成物であった。

実施例２ 上記実施例１と同様にして得た、菌体および夾雑物を除
去した上清液を、限外ろ過（分子量排除限界１３０００
　：旭化成社製）して分子量１万以下の培養上滑液に含
有されている成分を除去し、濃縮した０次いで、この濃
縮液５Ｌに、エタノールＩＯＬを加え、生じた繊維状物
質をろ取し、さらにエタノールで十分洗浄後、再び水に
溶解し、セチルピリジウムクロライドを加え、生じた沈
澱物質をろ取し、水およびＯ，１Ｍ塩化ナトリウム水溶
液にて十分洗浄後、１０Ｌの０．５Ｍ塩化ナトリウム水
溶液にてヒアルロン酸を抽出し、再び限外ろ過（分子量
排除限界６０００）して水、セチルピリジウムクロライ
ドを除去し、濃縮した。

濃縮液５ＬにエタノールＩＯＬを加え、生じた繊維状物
質をろ取し、この繊維状物質を７５％エタノール水、次
いでエタノールで十分洗浄後、真空乾燥して培養液ＩＬ
当たり２．５ｇのヒアルロン酸（本島の高速液体クロマ
トグラフィーによる分子及分布は第２図に示すもので、
第１図に比較し分子ｆｆｉ　１０００前後の物質が完全
に除去されたもので、かつ水晶は極めて均質な平均分子
量約１００万のヒアルロン酸を主成分としたものである
。

なお高速液体クロマトグラフィーは実施例１の場合と同
一条件である。）を得た。さらに氷晶を水酸化ナトリウ
ム水溶液に加えて、常法により、ヒアルロン酸ナトリウ
ム塩を得た。

次いでこのヒアルロン酸ナトリウム塩１ｇを１００ｍ１
の水溶液に添加して溶解し、これを１０Ｘ１０ｃｒｎ２
のトレイに厚さ５ｍｍになるよう注入した。さらにこれ
を、温風乾燥して厚さ約０゜５　ｒｎ　ｍの膜を得た。

このようにして得られた膜は、上記実施例１で得られた
膜組成物に比較して、若干膜形成性や創面への密着性が
よく、さらに生体組織への親和適応性、表皮の形成能、
抗原性、毒性、生分解性や創面からの剥離の容易性等の
優れた膜組成物であった。

実施例３ 実施例】と同様にして得られたヒアルロンｅ１５％水溶
液を調製し、これを実施例１と同様にしてｌ・レイに厚
さ４　＋ｎ　ｍになるよう注入した。さらにこれを、温
風乾燥して厚さ約０．９ｍｍの膜形成性や生体組織への
親和適応性、表皮の形成能、抗原性、毒性、生分解性や
創面への密着性、創面からの剥離の容易性等の優れた膜
組成物かえられた実施例４ 実施例１と同様にして得られたヒアルロン酸１部とコン
ドロイチン硫酸１部との混合物の５％水溶液を、実施例
１と同様のトレイに注入し、乾燥して膜強度が良好で、
かつ膜形成性や生体組織への親和適応性、表皮の形成能
、抗原性、毒性、生分解性や創面への密着性、創面から
の１．す離の容易性等の優れた膜組成物を得た。

実施例５ 実施Ｍｌと同様にして得られたヒアルロン酸１部とコン
ドロイチン硫酸４部との混合物の５％水溶液を、実施例
１と同様のトレイに注入し、乾燥して膜強度が良好で、
かつ膜形成性や生体組織への親和適応性、表皮の形成能
、抗原性、毒性、生分解性や創面への密着性、創面から
の剥離の容易性等の優れた膜組成物を得た。

実施例６ 実施例１と同様にして得られたヒアルロン酸１部とコン
ドロイチン硫１’！！１部との混合物の５％水溶液を、
コラーゲン４Ｊｌ維の上に流し込み、次いでこれを凍結
乾燥し°ζ水分を除去して、コラーゲン繊維上にヒアル
ロン酸膜を形成せしめた。

実施例７ 実施例１と同様にして得られたヒアルロン酸１部とコン
ドロイチン硫酸４部との混合物の５％水溶液を、ガーゼ
上に流し込み、次いでこれを凍結乾燥して水分を除去し
て、カーゼ上にヒアルロン酸膜を形成せしめた。

実施例８ 実施ＰＡｌと同様にして得られたヒアルロン酸１部とポ
リビニルアルコール２部との混合物の１５％水溶液を、
ガーゼの上に流し込み、次いでこれ凍結乾燥して水分を
除去して、ガーゼ上にヒアルロン酸膜を形成せしめた。

実施例９ 実施例１と同様にして得られたヒアルロン酸１部とポリ
ビニルピロリドン１部、コンドロイチン硫酸１部との混
合物の７％水溶液を、コラーゲン繊維の１に流し込み、
次いでこれを凍結乾燥して水分を除去して、コラーゲン
繊維上にヒアルロン酸膜ご形成せしめた。

実施例１０ 実施例１と同様にして得られたヒアルロン酸１部とポリ
ビニルピロリドン４部との混合物の２０％水溶液を、実
施例１と同様のトレイに注入し、乾燥してヒアルロン酸
膜を形成せしめた。

〈発明の効果〉 本発明は、分子量１万以上のヒアルロン酸またはその無
毒性塩を主成分としてなるヒアルロン酸を有効成分とす
る膜組成物であって、従来の膜形成剤に比較して膜形成
性の点で優れ、さらに表皮の形成能もよく、抗原性、毒
性も見られず、生分解性や創面への密着性、０１面から
の剥離の容易性等の優れた化粧用パック剤、炎症の治癒
あるいは止血を目的として炎症部位や傷口等の創面に貼
付する医薬用貼付剤として優れ、さらに塗布面の組織に
対しても親和性の優れた生体適応性の良好な膜組成物で
ある。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、ヒアルロン酸産生菌株であるス
トレプト；１ツカス・エクイによるヒアルロン酸の高速
液体クロマトグラフィーのチャートを示す。 、特許出題人　東洋醸造株式会社 第１図 第２図

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）分子量１万以上のヒアルロン酸またはその無毒性
   塩を主成分としてなるヒアルロン酸を有効成分とした膜
   組成物。
2. （２）分子量１万以上のヒアルロン酸またはその無毒性
   塩を主成分としてなるヒアルロン酸が、ヒアルロン酸産
   生微生物からのヒアルロン酸である特許請求の範囲第１
   項記載の膜組成物。
3. （３）ヒアルロン酸産生微生物が、ストレプトコッカス
   属に属するヒアルロン酸産生菌である特許請求の範囲第
   ２項記載の膜組成物。
4. （４）ストレプトコッカス属に属するヒアルロン酸産成
   菌が、ストレプトコッカス・エクイまたはストレプトコ
   ッカス・ズーエピデミカスである特許請求の範囲第３項
   記載の膜組成物。
5. （５）分子量１万以上のヒアルロン酸またはその無毒性
   塩を主成分としてなるヒアルロン酸が、動物組織からの
   ヒアルロン酸である特許請求の範囲第１項記載の膜組成
   物。
6. （６）動物組織からのヒアルロン酸が、ニワトリ、ブタ
   、ウシ、クジラまたは魚類からのヒアルロン酸である特
   許請求の範囲第５項記載の膜組成物。
7. （７）分子量１万以上のヒアルロン酸が、分子量約１２
   万〜約３５０万である特許請求の範囲第１項記載の膜組
   成物。
8. （８）コンドロイチン硫酸を混合した分子量１万以上の
   ヒアルロン酸またはその無毒性塩を主成分としてなるヒ
   アルロン酸を用いてなる特許請求の範囲第１項記載の膜
   組成物。