JPS6322794B2 - - Google Patents
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- JPS6322794B2 JPS6322794B2 JP4587680A JP4587680A JPS6322794B2 JP S6322794 B2 JPS6322794 B2 JP S6322794B2 JP 4587680 A JP4587680 A JP 4587680A JP 4587680 A JP4587680 A JP 4587680A JP S6322794 B2 JPS6322794 B2 JP S6322794B2
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は酵母菌体の新規な製造法に関するも
のであり、さらに詳細にはエタノール資化性酵母
を培養液中の溶存酸素濃度を１mg／以下に制限
しつつ、培地成分の供給量および酸素供給速度を
可能な限り高めて連続培養することからなる高濃
度酵母菌体の新規な製造法に関するものである。
のであり、さらに詳細にはエタノール資化性酵母
を培養液中の溶存酸素濃度を１mg／以下に制限
しつつ、培地成分の供給量および酸素供給速度を
可能な限り高めて連続培養することからなる高濃
度酵母菌体の新規な製造法に関するものである。
従来、酵母菌体を連続培養によつて製造する場
合、炭素源、窒素源、無機塩等の培地成分のいず
れか１つ以上を制限して培養を行うため、その成
分が酵母菌の増殖至適濃度以下に抑えられること
になり、このため得られる酵母菌体濃度も例えば
キヤンデイダ ブラシカエ（Candida
brassicae）の場合、５ｇ／以下と低かつた。
合、炭素源、窒素源、無機塩等の培地成分のいず
れか１つ以上を制限して培養を行うため、その成
分が酵母菌の増殖至適濃度以下に抑えられること
になり、このため得られる酵母菌体濃度も例えば
キヤンデイダ ブラシカエ（Candida
brassicae）の場合、５ｇ／以下と低かつた。
この発明者等は酵母菌体濃度の増大をはかるた
め鋭意研究の結果、培養時に炭素源、窒素源、無
機塩等の培地成分を制限因子とせず、培養液中の
溶存酸素濃度を１mg／以下に制限しつつ、培地
成分量および酸素供給速度を可能な限り高めて連
続培養すると酵母菌体濃度が飛躍的に増大すると
いう新知見を得、さらに研究を進めた結果、この
発明を完成した。
め鋭意研究の結果、培養時に炭素源、窒素源、無
機塩等の培地成分を制限因子とせず、培養液中の
溶存酸素濃度を１mg／以下に制限しつつ、培地
成分量および酸素供給速度を可能な限り高めて連
続培養すると酵母菌体濃度が飛躍的に増大すると
いう新知見を得、さらに研究を進めた結果、この
発明を完成した。
この発明で使用するエタノール資化性酵母とし
ては例えばキヤンデイダ ブラシカエ
ATCC32196（IFO1664）等が挙げられる。
ては例えばキヤンデイダ ブラシカエ
ATCC32196（IFO1664）等が挙げられる。
この発明で使用する培地は酵母菌の連続培養の
培地として通常使用される培地がそのまま使用さ
れる。すなわち、炭素源としての例えばエタノー
ルに窒素、りん、カリウム、マグネシウム、硫黄
等の主要無機栄養源、鉄、亜鉛、マンガン、銅、
カルシウム等の微量無機栄養源、コバルト、ほう
素、モリブデン、よう素等の極微量栄養源が添加
され、また必要に応じて酵母エキス等の有機栄養
源が添加される。
培地として通常使用される培地がそのまま使用さ
れる。すなわち、炭素源としての例えばエタノー
ルに窒素、りん、カリウム、マグネシウム、硫黄
等の主要無機栄養源、鉄、亜鉛、マンガン、銅、
カルシウム等の微量無機栄養源、コバルト、ほう
素、モリブデン、よう素等の極微量栄養源が添加
され、また必要に応じて酵母エキス等の有機栄養
源が添加される。
そのような培地成分の具体例としては、例えば
窒素源として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウム等、りん源として例えばリン
酸、リン酸カリウム、リン酸アンモニウム、リン
酸ナトリウム等が、カリウム源として例えば水酸
化カリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫
酸カリウム等が、マグネシウム源として硫酸マグ
ネシウム、塩化マグネシウム等、硫黄源として例
えばナトリウム、アンモニウム、マグネシウム等
の硫酸塩等が挙げられる。
窒素源として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウム等、りん源として例えばリン
酸、リン酸カリウム、リン酸アンモニウム、リン
酸ナトリウム等が、カリウム源として例えば水酸
化カリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫
酸カリウム等が、マグネシウム源として硫酸マグ
ネシウム、塩化マグネシウム等、硫黄源として例
えばナトリウム、アンモニウム、マグネシウム等
の硫酸塩等が挙げられる。
またコバルトとして塩化コバルト等、モリブデ
ンとしてはモリブデン酸アンモン等、ほう素とし
てはほう酸、ほう酸塩等が、よう素としてはよう
化カリウム等が挙げられる。
ンとしてはモリブデン酸アンモン等、ほう素とし
てはほう酸、ほう酸塩等が、よう素としてはよう
化カリウム等が挙げられる。
この発明においてはこのような培地成分の供給
量を可能な限り高めて連続培養を行うが、例えば
以下に示す培地組成の場合、希釈率を通常、0.3
程度にすることが好ましい。エタノール200、リ
ン酸２水素カリウム36.0、リン酸水素２カリウム
3.0、リン酸水素２ナトリウム（12水化物）3.0、
硫酸アンモニウム6.0、塩化アンモニウム1.5、酵
母エキス18.0、硫酸マグネシウム（７水化物）
7.2、硫酸第１鉄（７水化物）0.12、塩化カルシ
ウム（２水化物）0.12、硫酸マンガン（水化物）
0.03、塩化アルミニウム（６水化物）0.03、塩化
コバルト（６水化物）0.0012、硫酸亜鉛（７水化
物）0.006、モリブデン酸ナトリウム（２水化物）
0.006、塩化第２銅（２水化物）0.003およびほう
酸0.0015（いずれもｇ／）。
量を可能な限り高めて連続培養を行うが、例えば
以下に示す培地組成の場合、希釈率を通常、0.3
程度にすることが好ましい。エタノール200、リ
ン酸２水素カリウム36.0、リン酸水素２カリウム
3.0、リン酸水素２ナトリウム（12水化物）3.0、
硫酸アンモニウム6.0、塩化アンモニウム1.5、酵
母エキス18.0、硫酸マグネシウム（７水化物）
7.2、硫酸第１鉄（７水化物）0.12、塩化カルシ
ウム（２水化物）0.12、硫酸マンガン（水化物）
0.03、塩化アルミニウム（６水化物）0.03、塩化
コバルト（６水化物）0.0012、硫酸亜鉛（７水化
物）0.006、モリブデン酸ナトリウム（２水化物）
0.006、塩化第２銅（２水化物）0.003およびほう
酸0.0015（いずれもｇ／）。
また酸素供給速度を可能な限り高めて連続培養
する際の通気量は通常0.1〜0.5vvm程度ではじめ
るが、定常状態になると５〜10vvmまで高められ
る。またこのような通気量の増大による方法では
酸素供給が不充分になる場合が多くそのような場
合純酸素ガスを通気することが好ましい。撹拌速
度は300〜1500rpmの範囲から適当に選択される。
する際の通気量は通常0.1〜0.5vvm程度ではじめ
るが、定常状態になると５〜10vvmまで高められ
る。またこのような通気量の増大による方法では
酸素供給が不充分になる場合が多くそのような場
合純酸素ガスを通気することが好ましい。撹拌速
度は300〜1500rpmの範囲から適当に選択される。
またこの発明において培養液中の溶存酸素濃度
を１mg／以下に制限する場合、例えばDO―
statと名付けた装置〔ジヤーナル オブ フアー
メンテーシヨン テクノロジー（Journal of
Fermentation Technology）第56巻第４号第416
〜420頁、1978参照〕を使用することによつて培
養液中の溶存酸素濃度を１mg／以下に容易に制
御することができる。
を１mg／以下に制限する場合、例えばDO―
statと名付けた装置〔ジヤーナル オブ フアー
メンテーシヨン テクノロジー（Journal of
Fermentation Technology）第56巻第４号第416
〜420頁、1978参照〕を使用することによつて培
養液中の溶存酸素濃度を１mg／以下に容易に制
御することができる。
培養温度は通常37℃で行われる。
この発明の方法により、エタノール資化性酵母
を連続培養することにより、従来の培地成分を制
限因子とする連続培養法に比べて、後期実施例に
示すように飛躍的に増大した高濃度菌体を得るこ
とができる。
を連続培養することにより、従来の培地成分を制
限因子とする連続培養法に比べて、後期実施例に
示すように飛躍的に増大した高濃度菌体を得るこ
とができる。
次にこの発明を実施例により説明する。
実施例 １
エタノール10、りん酸２水素カリウム12.0、り
ん酸水素２カリウム1.0、りん酸水素２ナトリウ
ム（12水化物）1.0、硫酸アンモニウム2.0、塩化
アンモニウム0.5、酵母エキス6.0、硫酸マグネシ
ウム（７水化物）2.4、硫酸第１鉄（７水化物）
0.04、塩化カルシウム（２水化物）0.04、硫酸マ
ンガン（水化物）0.01、塩化アルミニウム（６水
化物）0.01、塩化コバルト（６水化物）0.0004、
硫酸亜鉛（７水化物）0.002、モリブデン酸ナト
リウム（２水化物）0.002、塩化第２銅（２水化
物）0.001およびほう酸0.0005（いづれもｇ／）
の組成の培地50mlを250ml容三角フラスコに入れ、
120℃で15分間滅菌したのち、エタノール0.5mlを
無菌的に加えキヤンデイダ ブラシカエ
ATCC32196を一白金耳接種し、ロータリーシエ
ーカーで回転数240rpmの回転振とうを与えなが
ら37℃で、14時間前培養する。
ん酸水素２カリウム1.0、りん酸水素２ナトリウ
ム（12水化物）1.0、硫酸アンモニウム2.0、塩化
アンモニウム0.5、酵母エキス6.0、硫酸マグネシ
ウム（７水化物）2.4、硫酸第１鉄（７水化物）
0.04、塩化カルシウム（２水化物）0.04、硫酸マ
ンガン（水化物）0.01、塩化アルミニウム（６水
化物）0.01、塩化コバルト（６水化物）0.0004、
硫酸亜鉛（７水化物）0.002、モリブデン酸ナト
リウム（２水化物）0.002、塩化第２銅（２水化
物）0.001およびほう酸0.0005（いづれもｇ／）
の組成の培地50mlを250ml容三角フラスコに入れ、
120℃で15分間滅菌したのち、エタノール0.5mlを
無菌的に加えキヤンデイダ ブラシカエ
ATCC32196を一白金耳接種し、ロータリーシエ
ーカーで回転数240rpmの回転振とうを与えなが
ら37℃で、14時間前培養する。
別にりん酸２水素カリウム36.0、りん酸水素２
カリウム3.0、りん酸水素２ナトリウム（12水化
物）3.0、硫酸アンモニウム6.0、塩化アンモニウ
ム1.5、酵母エキス18.0、硫酸マグネシウム（７
水化物）7.2、硫酸第１鉄（７水化物）0.12、塩
化カルシウム（２水化物）0.12、硫酸マンガン
（水化物）0.03、塩化アルミニウム（６水化物）
0.03、塩化コバルト（６水化物）0.0012、硫酸亜
鉛（７水化物）0.006、モリブデン酸ナトリウム
（２水化物）0.006、塩化第１銅（２水化物）
0.003およびほう酸0.0015（いずれもｇ／）の組
成の培地350mlをMD―150型培養槽（丸菱理化
製）に入れ常法により滅菌した後、エタノール２
mlを加え前記前培養物を接種し（合計400ml）、33
％アンモニア水でPH5.5に保ちかつエタノールを
１時間に２mlの割合で注加しつつ37℃で、10時間
回分培養する（このときの菌体濃度：乾燥菌体と
して30ｇ／）。その後希釈率0.2で連続培養を開
始しエタノール供給量を最初の３時間は６ml／時
間、次の４時間は11ml／時間、さらに次の４時間
は16ml／時間とし、通気速度：7.8vvm（純酸素ガ
ス）、撹拌速度：1300rpm、PH：33％アンモニア
水を供給することにより5.5に保つ、の条件で連
続培養を行うと連続培養を開始してから11時間後
に定常状態に達し、そのときの培養液中の菌体濃
度を測定したところ、90ｇ／であり、またDO
―Statを用いて培養液中の溶存酸素濃度を測定し
たところ１mg／以下であつた。さらにエタノー
ル供給速度を16ml／時間に保ちつつ希釈率0.2で
連続培養を18時間継続したところ、この間溶存酸
素濃度はほとんど０に近いことが確認され、菌体
濃度は90ｇ／であつた。
カリウム3.0、りん酸水素２ナトリウム（12水化
物）3.0、硫酸アンモニウム6.0、塩化アンモニウ
ム1.5、酵母エキス18.0、硫酸マグネシウム（７
水化物）7.2、硫酸第１鉄（７水化物）0.12、塩
化カルシウム（２水化物）0.12、硫酸マンガン
（水化物）0.03、塩化アルミニウム（６水化物）
0.03、塩化コバルト（６水化物）0.0012、硫酸亜
鉛（７水化物）0.006、モリブデン酸ナトリウム
（２水化物）0.006、塩化第１銅（２水化物）
0.003およびほう酸0.0015（いずれもｇ／）の組
成の培地350mlをMD―150型培養槽（丸菱理化
製）に入れ常法により滅菌した後、エタノール２
mlを加え前記前培養物を接種し（合計400ml）、33
％アンモニア水でPH5.5に保ちかつエタノールを
１時間に２mlの割合で注加しつつ37℃で、10時間
回分培養する（このときの菌体濃度：乾燥菌体と
して30ｇ／）。その後希釈率0.2で連続培養を開
始しエタノール供給量を最初の３時間は６ml／時
間、次の４時間は11ml／時間、さらに次の４時間
は16ml／時間とし、通気速度：7.8vvm（純酸素ガ
ス）、撹拌速度：1300rpm、PH：33％アンモニア
水を供給することにより5.5に保つ、の条件で連
続培養を行うと連続培養を開始してから11時間後
に定常状態に達し、そのときの培養液中の菌体濃
度を測定したところ、90ｇ／であり、またDO
―Statを用いて培養液中の溶存酸素濃度を測定し
たところ１mg／以下であつた。さらにエタノー
ル供給速度を16ml／時間に保ちつつ希釈率0.2で
連続培養を18時間継続したところ、この間溶存酸
素濃度はほとんど０に近いことが確認され、菌体
濃度は90ｇ／であつた。
実施例 ２
連続培養における培地の希釈率を0.3にした点
を除いて、そのほかは実施例１と全く同様に前培
養、回分培養および連続培養を行つた。連続培養
開始してから９時間で定常状態に達しさらに20時
間にわたつて培養液中の菌体濃度は85ｇ／を保
つた。この間の溶存酸素濃度は０〜0.1mg／で
あることが確認された。
を除いて、そのほかは実施例１と全く同様に前培
養、回分培養および連続培養を行つた。連続培養
開始してから９時間で定常状態に達しさらに20時
間にわたつて培養液中の菌体濃度は85ｇ／を保
つた。この間の溶存酸素濃度は０〜0.1mg／で
あることが確認された。
Claims (1)
- １ エタノール資化性酵母を培養液中の溶存酸素
濃度を１mg／以下に制限しつつ、培地成分の供
給量および酸素供給速度を可能な限り高めて連続
培養することを特徴とする高濃度酵母菌体の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4587680A JPS56140885A (en) | 1980-04-07 | 1980-04-07 | Production of high-concentration yeast cell body |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4587680A JPS56140885A (en) | 1980-04-07 | 1980-04-07 | Production of high-concentration yeast cell body |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56140885A JPS56140885A (en) | 1981-11-04 |
| JPS6322794B2 true JPS6322794B2 (ja) | 1988-05-13 |
Family
ID=12731414
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4587680A Granted JPS56140885A (en) | 1980-04-07 | 1980-04-07 | Production of high-concentration yeast cell body |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS56140885A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03171799A (ja) * | 1989-10-05 | 1991-07-25 | Bull Sa | 電子機械のフレームに関して用いるファンの固定及び消音モジュール |
-
1980
- 1980-04-07 JP JP4587680A patent/JPS56140885A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03171799A (ja) * | 1989-10-05 | 1991-07-25 | Bull Sa | 電子機械のフレームに関して用いるファンの固定及び消音モジュール |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS56140885A (en) | 1981-11-04 |
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