JPS63237794A - 糖ペプチド回収方法 - Google Patents
糖ペプチド回収方法Info
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- JPS63237794A JPS63237794A JP63047342A JP4734288A JPS63237794A JP S63237794 A JPS63237794 A JP S63237794A JP 63047342 A JP63047342 A JP 63047342A JP 4734288 A JP4734288 A JP 4734288A JP S63237794 A JPS63237794 A JP S63237794A
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- fermentation
- vancomycin
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
- C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
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- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は糖ペプチドの回収方法に関する。本発明は有用
な種類の抗生物質であるバンコマイシン型糖ペプチド抗
生物質の回収方法を提供する。
な種類の抗生物質であるバンコマイシン型糖ペプチド抗
生物質の回収方法を提供する。
従来技術と解決すべき問題点
バンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ）は、１９５
０年代末以降に利用されるようになった商業的に成功し
た抗生物質である。バンコマイシン型糖ペプチド抗生物
質に包含されるものを例示すれば次のとおりである：バ
ンコマイシン（米国特許第３，０６７．０９９号）−Ｍ
４３Ａ（米国特許第４，５４８，９２５号）、Ｍ４３Ｄ
（米国特許第４，５４７，４８８号）；Ｍ４３Ｂおよび
Ｍ４３Ｃ（米国特許第４，５４８．９２４号）；Ａ８２
８４６Ａ、Ａ８２８４６ＢおよびＡ８２８４６Ｃ（米国
特許出願第９０９゜７９１号）；リストセチン（ｒｉｓ
ｔｏｃｅｔｉｎ ） （米国特許第２，９９０，３２９
号）、リストセチンＡプソイドアグリコン（ウィリアム
ス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ）ら、Ｊ。
０年代末以降に利用されるようになった商業的に成功し
た抗生物質である。バンコマイシン型糖ペプチド抗生物
質に包含されるものを例示すれば次のとおりである：バ
ンコマイシン（米国特許第３，０６７．０９９号）−Ｍ
４３Ａ（米国特許第４，５４８，９２５号）、Ｍ４３Ｄ
（米国特許第４，５４７，４８８号）；Ｍ４３Ｂおよび
Ｍ４３Ｃ（米国特許第４，５４８．９２４号）；Ａ８２
８４６Ａ、Ａ８２８４６ＢおよびＡ８２８４６Ｃ（米国
特許出願第９０９゜７９１号）；リストセチン（ｒｉｓ
ｔｏｃｅｔｉｎ ） （米国特許第２，９９０，３２９
号）、リストセチンＡプソイドアグリコン（ウィリアム
ス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ）ら、Ｊ。
Ｃ，Ｓ、 Ｃｈｅｍ、 Ｃｏｍｍ、第１９７９巻９０６
〜９０８頁）；Ａ４１０３０因子Ａ−Ｇ（米国特許第４
，５３７．７７０号）、Ａ４７９３４（米国特許第４，
４６２．９４２号）；Ａ３５５１２因子Ａ−ＤおよびＨ
（米国特許第４，１２２，１６８号）；Ａ３５５１２Ｂ
プソイドアグリコン（米国特許第４，０２９，７６９号
、この特許１こおいてＡ３５５１２Ｂアグリコンと呼称
されているが、これはアミン糖ヲ保持しているので本明
細書ではＡ３５５１２Ｂプソイドアグリコンと呼称する
）；アクタプラニン（Ａｃｔａｐｌａｎｉｎ ） （Ａ
−４６９６）因子ＡおよびＢ（米国特許第４，１１５
，５５２号）：アクタプラニン因子Ｂ、、Ｂ２、Ｂ３、
Ｃ１ａ、Ｃ３およびＥ、（米国特許第４．３２２，４０
６号）；アクタプラニン因千Ｇ（米国特許第４，４６１
，７２３号）４アクタプラニン因子Ｈ（米国特許第４，
５５８，０３６号）；アクタプラニン因子に〜０（米国
特許第４，４７９，８９７号）；アクタブラニンプソイ
ドアグリコン（米国特許第４，３２２，３４３号）；タ
イコマイシン（ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｉｎ ） （タイコ
プラニン（ｔｅｉｃｈｏｐｌａｎｉｎ ） ）Ａｏ、Ａ
２ およびＡ３（米国特許第４，２３９，７５１号）
；タイコマイシンＡ２因子１〜５（米国特許第４゜５４
２．０１８号）ｉＬ１７０５４（米国特許第４゜５９４
．１８７号）およびＬ１７０４６（欧州特許第１１９，
５７４−Ａ号）。
〜９０８頁）；Ａ４１０３０因子Ａ−Ｇ（米国特許第４
，５３７．７７０号）、Ａ４７９３４（米国特許第４，
４６２．９４２号）；Ａ３５５１２因子Ａ−ＤおよびＨ
（米国特許第４，１２２，１６８号）；Ａ３５５１２Ｂ
プソイドアグリコン（米国特許第４，０２９，７６９号
、この特許１こおいてＡ３５５１２Ｂアグリコンと呼称
されているが、これはアミン糖ヲ保持しているので本明
細書ではＡ３５５１２Ｂプソイドアグリコンと呼称する
）；アクタプラニン（Ａｃｔａｐｌａｎｉｎ ） （Ａ
−４６９６）因子ＡおよびＢ（米国特許第４，１１５
，５５２号）：アクタプラニン因子Ｂ、、Ｂ２、Ｂ３、
Ｃ１ａ、Ｃ３およびＥ、（米国特許第４．３２２，４０
６号）；アクタプラニン因千Ｇ（米国特許第４，４６１
，７２３号）４アクタプラニン因子Ｈ（米国特許第４，
５５８，０３６号）；アクタプラニン因子に〜０（米国
特許第４，４７９，８９７号）；アクタブラニンプソイ
ドアグリコン（米国特許第４，３２２，３４３号）；タ
イコマイシン（ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｉｎ ） （タイコ
プラニン（ｔｅｉｃｈｏｐｌａｎｉｎ ） ）Ａｏ、Ａ
２ およびＡ３（米国特許第４，２３９，７５１号）
；タイコマイシンＡ２因子１〜５（米国特許第４゜５４
２．０１８号）ｉＬ１７０５４（米国特許第４゜５９４
．１８７号）およびＬ１７０４６（欧州特許第１１９，
５７４−Ａ号）。
本明細書中の記載で便宜上、上記群の化合物をバンコマ
イシン型抗生物質と呼称する。
イシン型抗生物質と呼称する。
バンコマイシン型抗生物質は、特（こグラム陽性菌に対
する治療剤として、また動物発育促進剤と“して有用で
ある。
する治療剤として、また動物発育促進剤と“して有用で
ある。
一般に、この抗生物質を産生じて含有する発酵液から抗
生物質を回収するとき、最小回数の段階を適用すること
により最大量の抗生物質を回収することができる。これ
らの抗生物質を大規模で生産するとき、最大量で抗生物
質を回収するのは、より困難である。大規模発酵は、少
なくとも約１゜ＯＲガロン（４，０ＯＯｉの容量を有す
る容器中の発酵に関連する。このような場合１こ、大量
の複雑な水性発酵混合物から抗生物質を単離しなければ
ｆＳらない。抗生物質を産生じて含有する全発酵液は、
抗生物質だけでなく未反応培地栄養分の希釈溶液中（こ
懸澗した不溶性菌糸体および種々雑多な代謝中間と代謝
生成物をも含んでいる。それ故抗生物質の単離は、通常
困難であって多くの分離、濃縮および精製の段階を必要
とする。
生物質を回収するとき、最小回数の段階を適用すること
により最大量の抗生物質を回収することができる。これ
らの抗生物質を大規模で生産するとき、最大量で抗生物
質を回収するのは、より困難である。大規模発酵は、少
なくとも約１゜ＯＲガロン（４，０ＯＯｉの容量を有す
る容器中の発酵に関連する。このような場合１こ、大量
の複雑な水性発酵混合物から抗生物質を単離しなければ
ｆＳらない。抗生物質を産生じて含有する全発酵液は、
抗生物質だけでなく未反応培地栄養分の希釈溶液中（こ
懸澗した不溶性菌糸体および種々雑多な代謝中間と代謝
生成物をも含んでいる。それ故抗生物質の単離は、通常
困難であって多くの分離、濃縮および精製の段階を必要
とする。
大概の場合、発酵）こより産生された抗生物質を回収す
る最初の段階は、ハイフロ・スーパーセル（Ｈｙｆｌｏ
５ｕｐｅｒｃｅｌ ）のような濾過助剤を加えること
である。濾過助剤の利点は、より有効に菌糸体を分離す
ること昏ζある。しかし大規模発酵を行なうとき、多量
の濾過助剤を必要とする。濾過助剤は容易に生物学約１
こ分解されないので、大規模工程１こおける使用は、廃
棄物処分における実質的問題が存在する。
る最初の段階は、ハイフロ・スーパーセル（Ｈｙｆｌｏ
５ｕｐｅｒｃｅｌ ）のような濾過助剤を加えること
である。濾過助剤の利点は、より有効に菌糸体を分離す
ること昏ζある。しかし大規模発酵を行なうとき、多量
の濾過助剤を必要とする。濾過助剤は容易に生物学約１
こ分解されないので、大規模工程１こおける使用は、廃
棄物処分における実質的問題が存在する。
発酵により産生された抗生物質の回収において、菌糸体
を除いた後に使用する第二段階は、濾過した発酵液のｐ
Ｈを適当な水準に調節することである。しかしこの段階
で必要とする多量の酸または塩基は、安全性と取扱いに
関する問題を提起し、処理すべき溶液の容量を増大させ
る。
を除いた後に使用する第二段階は、濾過した発酵液のｐ
Ｈを適当な水準に調節することである。しかしこの段階
で必要とする多量の酸または塩基は、安全性と取扱いに
関する問題を提起し、処理すべき溶液の容量を増大させ
る。
従来、バンコマイシンの商業生産において、全発酵液を
約８〜１０のアルカ１ＪｐＨで濾過し、Ｐ液をｐＨ約６
〜７に調節し、次いでＰ液をイオン交換樹脂、典型的に
は低架橋処理したポリスチレン−ジビニルベンゼンナト
リウムカチオン交換樹脂に通す。バンコマイシンを樹脂
上に吸着させる。発酵液を除いたら樹脂を水で洗い、バ
ンコマイシンをｐＨ９〜１１の水性アルカリ溶液で溶離
する。溶離のための典型的溶媒はｐＨ１０〜１１の水酸
化ナトリウム水゛溶液である。バンコマイシンを含むア
ルカリ性溶出液を中和し、このバンコマイシンを非官能
性樹脂上に再吸着させることにより活性物質を精製する
（米国特許第４，４４０，７５３号参照）。
約８〜１０のアルカ１ＪｐＨで濾過し、Ｐ液をｐＨ約６
〜７に調節し、次いでＰ液をイオン交換樹脂、典型的に
は低架橋処理したポリスチレン−ジビニルベンゼンナト
リウムカチオン交換樹脂に通す。バンコマイシンを樹脂
上に吸着させる。発酵液を除いたら樹脂を水で洗い、バ
ンコマイシンをｐＨ９〜１１の水性アルカリ溶液で溶離
する。溶離のための典型的溶媒はｐＨ１０〜１１の水酸
化ナトリウム水゛溶液である。バンコマイシンを含むア
ルカリ性溶出液を中和し、このバンコマイシンを非官能
性樹脂上に再吸着させることにより活性物質を精製する
（米国特許第４，４４０，７５３号参照）。
発明の構成と効果
本発明の改良された方法は、（１）抗生物質を産生して
含有する発酵培地をダウ（Ｄｏｗ）ＸＦＳ −４３２７
８，００のようなポリスチレンジビニルベンゼン樹脂と
混合し、（２）この培地から樹脂を分離し、（３）樹脂
から抗生物質を溶離することから成る。この方法の一つ
の利点はｐＨ調節および／または濾過処理をすることな
く発酵液の直接使用を可能にすることにある。このよう
に菌糸体への吸着による抗生物質の損失および関連する
機械的損失は除かれる。更に濾過助剤およびｐＨ調節に
関連する問題のようなある種の廃棄物処分の問題は避け
られる。
含有する発酵培地をダウ（Ｄｏｗ）ＸＦＳ −４３２７
８，００のようなポリスチレンジビニルベンゼン樹脂と
混合し、（２）この培地から樹脂を分離し、（３）樹脂
から抗生物質を溶離することから成る。この方法の一つ
の利点はｐＨ調節および／または濾過処理をすることな
く発酵液の直接使用を可能にすることにある。このよう
に菌糸体への吸着による抗生物質の損失および関連する
機械的損失は除かれる。更に濾過助剤およびｐＨ調節に
関連する問題のようなある種の廃棄物処分の問題は避け
られる。
本発明の重要な見地は、特定タイプのイオン交換樹脂で
ある。この樹脂はスルホン化されたスチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体であって本発明において便宜上ポリス
チレン・ジビニルベンゼン樹脂と呼称する。この樹脂は
、低架橋度（名目上２幅）を有する微小孔の強酸カチオ
ン樹脂（ｓｔｒｏｎｇ−ａｃｉｄ−ｃａｔｉｏｎ ｒｅ
ｓｉｎ ） であって、これは通常ナトリウム塩のよ
うな塩型である。この方法のための適当な樹脂の例は、
ダウ（Ｄｏｗ）ＸＦＳ −４３２７８，００（米国ミシ
ガン州、ミビランド在。
ある。この樹脂はスルホン化されたスチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体であって本発明において便宜上ポリス
チレン・ジビニルベンゼン樹脂と呼称する。この樹脂は
、低架橋度（名目上２幅）を有する微小孔の強酸カチオ
ン樹脂（ｓｔｒｏｎｇ−ａｃｉｄ−ｃａｔｉｏｎ ｒｅ
ｓｉｎ ） であって、これは通常ナトリウム塩のよ
うな塩型である。この方法のための適当な樹脂の例は、
ダウ（Ｄｏｗ）ＸＦＳ −４３２７８，００（米国ミシ
ガン州、ミビランド在。
ダウ・ケミカル・カンパニー（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｃｏ。
ｌ Ｃｏ。
））およびダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ） Ｓ Ｋ −
１０２（日本国東京圧、三菱化成工業（Ｍｉｔｓｕｂｉ
ｓｈｉＣｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、 Ｌ
ｔｄ、 ） ）である。我々は、この種の樹脂を用い、
以前ｌこ必要であった最初の全発酵液のＥ過工程を省い
てバンコマイシン型糖ペプチド抗生物質を吸着させるこ
とができることを見いだした。
１０２（日本国東京圧、三菱化成工業（Ｍｉｔｓｕｂｉ
ｓｈｉＣｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、 Ｌ
ｔｄ、 ） ）である。我々は、この種の樹脂を用い、
以前ｌこ必要であった最初の全発酵液のＥ過工程を省い
てバンコマイシン型糖ペプチド抗生物質を吸着させるこ
とができることを見いだした。
この方法における樹脂の使用看は発酵培地の容量および
発酵１こより生産された抗生物質の活性成分の量により
異なる。一般に全発酵液を樹脂１こ加えるか、もしくは
樹脂を全発酵液に加えることにより樹脂を全発酵液と混
合し、抗生物質が樹脂上蚤ζ吸着されることができるの
に充分の時間保持する。
発酵１こより生産された抗生物質の活性成分の量により
異なる。一般に全発酵液を樹脂１こ加えるか、もしくは
樹脂を全発酵液に加えることにより樹脂を全発酵液と混
合し、抗生物質が樹脂上蚤ζ吸着されることができるの
に充分の時間保持する。
抗生物質が樹脂に吸着されるのに必要な接触時間は多様
である。たとえば発酵液の温度は必要な接触時間に影響
を与える。好ましい操作において発酵液を約３０〜６０
″Ｃに加温すること番こより、必要な接触を減少させ、
それ故取扱いがより容易になる。一般に必要な接触時間
は約６時間を越えない。
である。たとえば発酵液の温度は必要な接触時間に影響
を与える。好ましい操作において発酵液を約３０〜６０
″Ｃに加温すること番こより、必要な接触を減少させ、
それ故取扱いがより容易になる。一般に必要な接触時間
は約６時間を越えない。
抗生物質を樹脂に吸着させた後、公知方法たとえば濾過
（樹脂をバッチ接触により加えたとき）または機械的分
離（樹脂を加えて発酵液を逆流吸着させたとき）Ｉこよ
り、発酵培地から樹脂を分離することができる。
（樹脂をバッチ接触により加えたとき）または機械的分
離（樹脂を加えて発酵液を逆流吸着させたとき）Ｉこよ
り、発酵培地から樹脂を分離することができる。
次いでこの分離した樹脂から、この分野の技術的方法に
従って抗生物質を溶離することができる。特に有利な方
法は、（１）樹脂を水洗し、（２）抗生物質が樹脂から
放出されるまで、ｐＨ約９〜１２に調節した水に樹脂を
バッチ方式で混合することにより抗生物質を溶離し、（
３）樹脂から抗生物質含有溶出液を分離することから成
る。かかる操作における第（２）段階のため、ｐＨ約１
０〜１１が特に好ましい。
従って抗生物質を溶離することができる。特に有利な方
法は、（１）樹脂を水洗し、（２）抗生物質が樹脂から
放出されるまで、ｐＨ約９〜１２に調節した水に樹脂を
バッチ方式で混合することにより抗生物質を溶離し、（
３）樹脂から抗生物質含有溶出液を分離することから成
る。かかる操作における第（２）段階のため、ｐＨ約１
０〜１１が特に好ましい。
溶出液から抗生物質を回収し、種々の公知操作により任
意に更に精製することができる。たとえば抗生物質を前
記のような非官能性樹脂に吸着させることにより、可溶
性抗生物質を更に精製することができる。他の方法は抗
生物質を不溶性銅複合物として単離する方法である。次
いでこの銅複合物を、酸性条件下に硫化水素で処理して
抗生物質を可溶化し、これを適当なｐＨ調節により遊離
塩基として単離することができる。
意に更に精製することができる。たとえば抗生物質を前
記のような非官能性樹脂に吸着させることにより、可溶
性抗生物質を更に精製することができる。他の方法は抗
生物質を不溶性銅複合物として単離する方法である。次
いでこの銅複合物を、酸性条件下に硫化水素で処理して
抗生物質を可溶化し、これを適当なｐＨ調節により遊離
塩基として単離することができる。
この遊離塩基を、経口投与のための薬剤として使用する
か、または経口投与もしくは非経口投与のために使用す
る薬剤としての適当な酸付加塩（たと′えば塩酸塩また
はリン酸塩）に変換することができる。
か、または経口投与もしくは非経口投与のために使用す
る薬剤としての適当な酸付加塩（たと′えば塩酸塩また
はリン酸塩）に変換することができる。
本発明の方法は前記群のバンコマイシン型抗生物質のた
め蚤こ有利であるが、この方法が最も適当である抗生物
質は、発酵法により製造される抗生物質、すなわちバン
コマイシン、Ｍ４３Ａ、Ｂ、Ｃおよびり、Ａ８２８４６
Ａ、ＢおよびＣ、リストセチン、Ａ４１０３０因子ＡＮ
Ｇ、Ａ４７９３４、Ａ３５５１２因子Ａ〜ＤおよびＨ，
アクタプラニン因子Ａ、Ｂｌ、Ｂ２、Ｂ３、Ｃｌａ％Ｃ
３、Ｅｌ、ＧおよびＨならび番こタイコマイシンＡ１、
Ａ２ 因子１〜５およびＡ３である。この方法は、商業
的成功の故に大規模で頻繁に製造するバンコマイシンの
ために特に適当である。
め蚤こ有利であるが、この方法が最も適当である抗生物
質は、発酵法により製造される抗生物質、すなわちバン
コマイシン、Ｍ４３Ａ、Ｂ、Ｃおよびり、Ａ８２８４６
Ａ、ＢおよびＣ、リストセチン、Ａ４１０３０因子ＡＮ
Ｇ、Ａ４７９３４、Ａ３５５１２因子Ａ〜ＤおよびＨ，
アクタプラニン因子Ａ、Ｂｌ、Ｂ２、Ｂ３、Ｃｌａ％Ｃ
３、Ｅｌ、ＧおよびＨならび番こタイコマイシンＡ１、
Ａ２ 因子１〜５およびＡ３である。この方法は、商業
的成功の故に大規模で頻繁に製造するバンコマイシンの
ために特に適当である。
次に製造例および実施例により本発明の方法を具体的に
説明する。
説明する。
製造例１
抗生物質Ａ８２８４６の製造
（ａｉＡ８２８４６−産生培養物の発酵ｔｌｌＮＲＲＬ
１８０９８培養物を用いる場合Ａ、ＮＲＲＬ１８０９８
の振盪フラスコ発酵凍結乾燥したペレットまたは液体窒
素中をこ保持した懸濁液のいずれかのノカルジア・オリ
エンタリス（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
） Ｎ ＲＲＬ １８０９８培養物を用い、下記組成
を有する種培地に接種する。
１８０９８培養物を用いる場合Ａ、ＮＲＲＬ１８０９８
の振盪フラスコ発酵凍結乾燥したペレットまたは液体窒
素中をこ保持した懸濁液のいずれかのノカルジア・オリ
エンタリス（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
） Ｎ ＲＲＬ １８０９８培養物を用い、下記組成
を有する種培地に接種する。
成分 量（％）
グルコース １．０可溶性殿
粉 ２．０酵母工牛ス
０．５カゼインの酵素加水分解物“
０，５炭酸カルシウム ０．１脱イオ
ン水 全ｆｆ１１６になる量滅菌前、培地の
ｐＨを水酸化ナトリウムで約７．５に調節するう 朱印：ＮＺアミンＡにューヨーク、ノルウイク在、シェ
フイールド・ケミカル・カンパニー（Ｓｈｅｆｆｉｅｌ
ｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、 ）。
粉 ２．０酵母工牛ス
０．５カゼインの酵素加水分解物“
０，５炭酸カルシウム ０．１脱イオ
ン水 全ｆｆ１１６になる量滅菌前、培地の
ｐＨを水酸化ナトリウムで約７．５に調節するう 朱印：ＮＺアミンＡにューヨーク、ノルウイク在、シェ
フイールド・ケミカル・カンパニー（Ｓｈｅｆｆｉｅｌ
ｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、 ）。
種培地に２．５％寒天を加えること１こより斜面培地ま
たは平面培地を調製する。接種した斜面培地を３０℃で
約１０〜１４日間熟成する。成熟した斜面培地表面を滅
菌器具でこすり取り、胞子を取り出し、菌糸体環を分離
して解きほぐす（ｍａｓ−ｃｅｒａｔｅ ）。取り出し
た胞子と発育培養物の約１／４を用いて第１段階の種培
地５０ｍＱに接種する。
たは平面培地を調製する。接種した斜面培地を３０℃で
約１０〜１４日間熟成する。成熟した斜面培地表面を滅
菌器具でこすり取り、胞子を取り出し、菌糸体環を分離
して解きほぐす（ｍａｓ−ｃｅｒａｔｅ ）。取り出し
た胞子と発育培養物の約１／４を用いて第１段階の種培
地５０ｍＱに接種する。
接種した第１段階の培地を、２５０ｍＱエルレンマイレ
ンツイヤーフラスコ中チ（５，０８ｃＩＩＩ）円形軌道
を２５ Ｏｒｐｍで回転する振盪機上、３０℃で約２４
〜４８時間熟成する。
ンツイヤーフラスコ中チ（５，０８ｃＩＩＩ）円形軌道
を２５ Ｏｒｐｍで回転する振盪機上、３０℃で約２４
〜４８時間熟成する。
熟成した第１段階の培地０．５ ｍＱを用い、下記組成
の生産培地５０℃妃に接種する。
の生産培地５０℃妃に接種する。
成分 量（％）
グルコース ２．５大豆粉
１．５ポテトデ牛ストリン
３．０炭酸カルシウム
０．２５廃糖蜜 ０．３酸加
水分解カゼイン７０．５ 脱イオン水 全量１１となる量（滅菌前、
水酸化ナトリウムでｐＨ７，５に調節）朱印：ハイーカ
ーゼ（Ｈｙ−Ｃａｓｅ ） （シェフイールド・ケミ
カル・カンパニー）。
１．５ポテトデ牛ストリン
３．０炭酸カルシウム
０．２５廃糖蜜 ０．３酸加
水分解カゼイン７０．５ 脱イオン水 全量１１となる量（滅菌前、
水酸化ナトリウムでｐＨ７，５に調節）朱印：ハイーカ
ーゼ（Ｈｙ−Ｃａｓｅ ） （シェフイールド・ケミ
カル・カンパニー）。
接種した生産培地を、２５０ ｍＥ！広ロエルレンマイ
ヤーフラスコ中、２インチ円形軌道を２５Ｏｒｐｍで回
転する振盪機上、３０℃で４〜５日間熟成する。
ヤーフラスコ中、２インチ円形軌道を２５Ｏｒｐｍで回
転する振盪機上、３０℃で４〜５日間熟成する。
Ｂ、Ｎ ＲＲＬ １８０９８のタンク発酵大容量の接種
材料を製造するため、前記Ａ項の熟成した第１段階の培
地１０ｍＮを用い、第１段階の培地と同じ組成を有する
第２段階の発育培地４００ｍＱに接種する。この第２段
階の発育培地を、２ｅ広ロエルレンマイヤーフラスコ中
、２インチの円形軌道を２５ Ｏｒｐｍで回転する振盪
機上、３０℃で約４８時間熟成する。
材料を製造するため、前記Ａ項の熟成した第１段階の培
地１０ｍＮを用い、第１段階の培地と同じ組成を有する
第２段階の発育培地４００ｍＱに接種する。この第２段
階の発育培地を、２ｅ広ロエルレンマイヤーフラスコ中
、２インチの円形軌道を２５ Ｏｒｐｍで回転する振盪
機上、３０℃で約４８時間熟成する。
このようＥこ製造し、熟成した第２段階の発育培地１０
００ｄを用い、Ａ項（ただしＰ−２０００消泡剤０．３
ｇ／ｌを加える）のように製せられた滅菌生産培地１０
０召に接種する。接種した生産培地を、１６５召発酵タ
ンク中、撹拌しながら３０℃で９０〜１００時間発酵さ
せる。撹拌（８０ｒｐｍ）している容器中の通気を、溶
解酸素が空気飽和の約５０％以上の濃度を維持するよう
に調節する。
００ｄを用い、Ａ項（ただしＰ−２０００消泡剤０．３
ｇ／ｌを加える）のように製せられた滅菌生産培地１０
０召に接種する。接種した生産培地を、１６５召発酵タ
ンク中、撹拌しながら３０℃で９０〜１００時間発酵さ
せる。撹拌（８０ｒｐｍ）している容器中の通気を、溶
解酸素が空気飽和の約５０％以上の濃度を維持するよう
に調節する。
Ｃ０別法のＮＲＲＬ１８０９８のタンク発酵前記８項と
同様（ただし適当量の発育培地を使用し、１６００ガロ
ン（４５３６１発酵タンク中、生産培地約１２００ガロ
ンに接種する）の処理を行なう。
同様（ただし適当量の発育培地を使用し、１６００ガロ
ン（４５３６１発酵タンク中、生産培地約１２００ガロ
ンに接種する）の処理を行なう。
（２１ＮＲＲＬ１８０９９培養物を用いる場合凍結乾燥
したペレットまたは液体窒素中に保持した懸濁液のいず
れかのノカルジア・オリエンタリスＮＲＲＬ１８０９９
培養物を用い、前記（１）項と同様（ただし生産培地は
下記組成を有する）の操作により培養する。
したペレットまたは液体窒素中に保持した懸濁液のいず
れかのノカルジア・オリエンタリスＮＲＲＬ１８０９９
培養物を用い、前記（１）項と同様（ただし生産培地は
下記組成を有する）の操作により培養する。
グルコース １，０ポテトデキス
トリン ２．０ペプトン７１．０ 炭酸カルシウム ０．２廃糖蜜
２．０脱イオン水 全ｆ
ｆ１１６になる量（ｐＨ調節なし） 朱印：バクトーペプトン（Ｂａｃｔｏ−ｐｅｐｔｏｎｅ
、ディフコ・ラボラトリーズ（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ ） ）。
トリン ２．０ペプトン７１．０ 炭酸カルシウム ０．２廃糖蜜
２．０脱イオン水 全ｆ
ｆ１１６になる量（ｐＨ調節なし） 朱印：バクトーペプトン（Ｂａｃｔｏ−ｐｅｐｔｏｎｅ
、ディフコ・ラボラトリーズ（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ ） ）。
［３１Ｎ ＲＲＬ １８０９９培養物を用いる場合凍
結乾燥したペレットまたは液体窒素中薔こ保持した懸濁
液のいずれかのノカルジア・オリエンタリスＮＲＲＬ
１８１００培養物を用い、前記（１）項と同様（ただ
し使用する酸加水分解カゼインはアミカーゼ（Ａｍ１ｃ
ａｓｅ ） （シェフイールド・ケミカル・カンパニー
（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、 ）
） ）の操作により培養する。
結乾燥したペレットまたは液体窒素中薔こ保持した懸濁
液のいずれかのノカルジア・オリエンタリスＮＲＲＬ
１８１００培養物を用い、前記（１）項と同様（ただ
し使用する酸加水分解カゼインはアミカーゼ（Ａｍ１ｃ
ａｓｅ ） （シェフイールド・ケミカル・カンパニー
（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、 ）
） ）の操作により培養する。
ｆｂ）粗Ａ８２８４６の製造
（ａｔ（１１Ａ項のように１６００ガロン発酵容器から
製せられた発酵液４２００ｇを５Ｎ水酸化すｌ−ＩＪワ
ムでｐＨ１０，５１こ調節し、３％セライト（Ｃｅｌ
ｉｔｅ ）５４５（濾過助剤）を加える。混合物をフィ
ルタープレスに通して濾過し、フィルタープレスヲ水洗
すル、、ｐ液と洗液を合しく４００Ｍ）、５Ｎ塩酸（ま
たは硫酸）でｐＨ７に調節し、ダウ（Ｄｏｗ）ＸＦＳ−
４３２７８（ＮＨ４）樹脂（２００１Ｆ液／１０１樹脂
）カラムに適用する。カラムを７５０ｍ（／分の流速で
溶離する。各分画をバチルス・ズブティリス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ ）による生物試験法また
はＨＰＬＣのいずれかで試験する。
製せられた発酵液４２００ｇを５Ｎ水酸化すｌ−ＩＪワ
ムでｐＨ１０，５１こ調節し、３％セライト（Ｃｅｌ
ｉｔｅ ）５４５（濾過助剤）を加える。混合物をフィ
ルタープレスに通して濾過し、フィルタープレスヲ水洗
すル、、ｐ液と洗液を合しく４００Ｍ）、５Ｎ塩酸（ま
たは硫酸）でｐＨ７に調節し、ダウ（Ｄｏｗ）ＸＦＳ−
４３２７８（ＮＨ４）樹脂（２００１Ｆ液／１０１樹脂
）カラムに適用する。カラムを７５０ｍ（／分の流速で
溶離する。各分画をバチルス・ズブティリス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ ）による生物試験法また
はＨＰＬＣのいずれかで試験する。
カラムを水５カラム容量で洗い、１ｏｏ６部分を集める
。
。
活性物質を０．０５Ｎ水酸化アンモニウム５カラム容量
で樹脂から溶離し、各２５β分画を集める。Ａ８２８４
６を含む分画を合して減圧下、約３０１容に濃縮する。
で樹脂から溶離し、各２５β分画を集める。Ａ８２８４
６を含む分画を合して減圧下、約３０１容に濃縮する。
この溶液を、水中ダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ ） Ｈ
Ｐ −２０樹脂１０４カラムに適用する。カラムを流速
３００ｍＱ／分の下に水３カラム容量で洗う。水を捨て
る。流速１００ｍＱ／分の下、１，０％酢酸を含む水：
イソプロパノール（９５：５）の溶液でカラムから活性
物質を溶離し、各４ｅ分画を集め、生物試験法およびＨ
ＰＬＣで試験する。Ａ８２８４６（＃６−１４）を含む
分画を合して減圧下に濃縮し、凍結乾燥して粗Ａ８２８
４６ （３５６ｇ）を得る。
Ｐ −２０樹脂１０４カラムに適用する。カラムを流速
３００ｍＱ／分の下に水３カラム容量で洗う。水を捨て
る。流速１００ｍＱ／分の下、１，０％酢酸を含む水：
イソプロパノール（９５：５）の溶液でカラムから活性
物質を溶離し、各４ｅ分画を集め、生物試験法およびＨ
ＰＬＣで試験する。Ａ８２８４６（＃６−１４）を含む
分画を合して減圧下に濃縮し、凍結乾燥して粗Ａ８２８
４６ （３５６ｇ）を得る。
［Ｃ）Ａ８２８４６のＨＰＬＣ試験法
次の分析的ＨＰＬＣ系はＡ８２８４６成分のために有用
である。
である。
（１）カチオン交換樹脂カラム
カラム支持物：ゾルパックス ５ＣＸ（４，６×１５０
ｍｍ） 系：傾斜溶離Ａ：Ｂ（４：１）〜Ａ：Ｂ（１：９）５分
、保持１５分 Ａ−メタノール：０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム（１
：９） Ｂ−メタノール：０．９Ｍリン酸二水素ナトリウム（１
＋９） 流速＋１．０ｍ１２／分 検出： ２２５ ｎｍ紫外線 保持時間：濃度に依存するが次のとおりＡ８２８４６Ｃ
−約６．６分 Ａ８２８４６Ｂ＝約８．９分 Ａ８２８４６Ａ−約９．５分 （２）逆相カラム カラム支持物：ゾルパックス ０ＤＳ（４，６Ｘ系：傾
斜溶離１％リン酸二水素アンモニワム：アセトニトリル
（９５：５）〜（１：１）、２０分 流速：１．０ｄ／分 検出： ２２５ ｎｍ紫外線 保持時間：Ａ８２８４６Ａ＝７．３分 Ａ８２８４６Ｃ＝７．６分 Ａ８２８４６ Ｂ＝８．０分 米印：ゾルバックス（Ｚｏｒｂａｘ ）カラムはプラウ
エア州、ウイルミントン在、デュポン社（Ｅ、Ｉ。
ｍｍ） 系：傾斜溶離Ａ：Ｂ（４：１）〜Ａ：Ｂ（１：９）５分
、保持１５分 Ａ−メタノール：０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム（１
：９） Ｂ−メタノール：０．９Ｍリン酸二水素ナトリウム（１
＋９） 流速＋１．０ｍ１２／分 検出： ２２５ ｎｍ紫外線 保持時間：濃度に依存するが次のとおりＡ８２８４６Ｃ
−約６．６分 Ａ８２８４６Ｂ＝約８．９分 Ａ８２８４６Ａ−約９．５分 （２）逆相カラム カラム支持物：ゾルパックス ０ＤＳ（４，６Ｘ系：傾
斜溶離１％リン酸二水素アンモニワム：アセトニトリル
（９５：５）〜（１：１）、２０分 流速：１．０ｄ／分 検出： ２２５ ｎｍ紫外線 保持時間：Ａ８２８４６Ａ＝７．３分 Ａ８２８４６Ｃ＝７．６分 Ａ８２８４６ Ｂ＝８．０分 米印：ゾルバックス（Ｚｏｒｂａｘ ）カラムはプラウ
エア州、ウイルミントン在、デュポン社（Ｅ、Ｉ。
ｄｕｐｏｎｔ ｄｅ Ｎｅｍｏｕｒｓ ＆ Ｃｏ、、
Ｉｎｃ、 ）の製品）ｆｄ）Ａ８２８４６成分の単離 （１）Ａ８２８４６ＡおよびＡ８２８４６Ｂの単離Ａ、
含奇豊富なＡ８２８４６ＡおよびＡ８２８４６Ｂの分離 前記（ｂ）項で製せられたＡ８２８４６（３０，９）を
水５００ ｍＱに溶解し、１％リン酸二水素アンモニウ
ム中に平衡させたシリカゲルＬＰ−１／Ｃ１８の３０ｇ
ステンレススチールカラムに加圧適用する。１％リン酸
二水素アンモニウム（６０１りから１％リン酸二水素ア
ンモニウムを含有する水ニアセトニトリル（８８：１２
）（６０１に至る傾斜展開液を用い、流速２５０〜３０
０ｍＱ／分（最大圧力６００ ｐｓｉ ）で上記カラム
を展開し、各４ｇ分画を集めて２５４ ｎｍ紫外線検出
器で溶離を監視する、各分画を分析的ＨＰＬＣにより試
験する。Ａ８２８４６Ａに富む分画（！！６〜９）およ
びＡ８２８４６Ｂに富む分画（ゴ１０〜１７）それぞれ
を合して減圧下に濃縮する。
Ｉｎｃ、 ）の製品）ｆｄ）Ａ８２８４６成分の単離 （１）Ａ８２８４６ＡおよびＡ８２８４６Ｂの単離Ａ、
含奇豊富なＡ８２８４６ＡおよびＡ８２８４６Ｂの分離 前記（ｂ）項で製せられたＡ８２８４６（３０，９）を
水５００ ｍＱに溶解し、１％リン酸二水素アンモニウ
ム中に平衡させたシリカゲルＬＰ−１／Ｃ１８の３０ｇ
ステンレススチールカラムに加圧適用する。１％リン酸
二水素アンモニウム（６０１りから１％リン酸二水素ア
ンモニウムを含有する水ニアセトニトリル（８８：１２
）（６０１に至る傾斜展開液を用い、流速２５０〜３０
０ｍＱ／分（最大圧力６００ ｐｓｉ ）で上記カラム
を展開し、各４ｇ分画を集めて２５４ ｎｍ紫外線検出
器で溶離を監視する、各分画を分析的ＨＰＬＣにより試
験する。Ａ８２８４６Ａに富む分画（！！６〜９）およ
びＡ８２８４６Ｂに富む分画（ゴ１０〜１７）それぞれ
を合して減圧下に濃縮する。
Ｂ、Ａ８２８４６Ａの精製
前記Ａ項記載のように行なった３１７行程から得られた
Ａ８２８４６Ａに富む濃縮物を、ダイアイオンＨＰ−２
０ＳＳの１７５０ｍｆｆ１カラム上で脱塩して水洗し、
０．５％酢酸を含有する水：イソプロパノール（９５：
５ ）で溶離し、分析的ＨＰＬＣで試験する。Ａ８２
８４６Ａを含む分画を合して濃縮し、凍結乾燥してＡ８
２８４６Ａに富む生成物７．４ｇを得る。
Ａ８２８４６Ａに富む濃縮物を、ダイアイオンＨＰ−２
０ＳＳの１７５０ｍｆｆ１カラム上で脱塩して水洗し、
０．５％酢酸を含有する水：イソプロパノール（９５：
５ ）で溶離し、分析的ＨＰＬＣで試験する。Ａ８２
８４６Ａを含む分画を合して濃縮し、凍結乾燥してＡ８
２８４６Ａに富む生成物７．４ｇを得る。
Ａ８２８４６Ａに富む生成物７．２ｇを水に溶解し、１
％リン酸二水素アンモニウム中シリカゲルＬＰ−１７Ｃ
１８のカラム上、プレパラテイブＨＰＬＣに適用する。
％リン酸二水素アンモニウム中シリカゲルＬＰ−１７Ｃ
１８のカラム上、プレパラテイブＨＰＬＣに適用する。
カラムを、１％リン酸二水素アンモニウムから１％リン
酸二水素アンモニウム：アセトニトリル（９：１）に至
る傾斜展開剤で展開し、２５４ ｎｍ ｌζおける分析
的ＨＰＬＣで溶出を監視し、流速４８ｍＱ／分で溶離す
る。最初の１０ｇを溶離した後、５００ｍＱ分画を集め
る。
酸二水素アンモニウム：アセトニトリル（９：１）に至
る傾斜展開剤で展開し、２５４ ｎｍ ｌζおける分析
的ＨＰＬＣで溶出を監視し、流速４８ｍＱ／分で溶離す
る。最初の１０ｇを溶離した後、５００ｍＱ分画を集め
る。
Ａ８２８４６Ａを含む分画（＝４〜１０）およびＡ８２
８４６Ｂを含む分画（＝１２〜２０）それぞれを合して
減圧下に濃縮する。３行程から得られたＡ８２８４６Ａ
の濃縮物を合し、ダイアイオンＨＰ−２０ＳＳの１７５
０ｍ（カラムに適用して溶液を脱塩する。このカラムを
水洗し、０．５％酢酸を含む水：イソプロパノール（９
５：５）でＡ８２８４６Ａを溶離する。ＨＰＬＣにより
溶離を監視する。Ａ８２８４６Ａを含む分画を合して濃
縮し、凍結乾燥してＡ８２８４６Ａ純品７．９ｇを得る
。
８４６Ｂを含む分画（＝１２〜２０）それぞれを合して
減圧下に濃縮する。３行程から得られたＡ８２８４６Ａ
の濃縮物を合し、ダイアイオンＨＰ−２０ＳＳの１７５
０ｍ（カラムに適用して溶液を脱塩する。このカラムを
水洗し、０．５％酢酸を含む水：イソプロパノール（９
５：５）でＡ８２８４６Ａを溶離する。ＨＰＬＣにより
溶離を監視する。Ａ８２８４６Ａを含む分画を合して濃
縮し、凍結乾燥してＡ８２８４６Ａ純品７．９ｇを得る
。
Ｃ，Ａ８２８４６Ｂの精製
前記Ｂ項記載のようにＡ８２８４６ＡとＡ８２８４６Ｂ
を分離するプレパラテイブＨＰＬＣの３行程から得られ
たＡ８２８４６Ｂに富む分画を合し、ダイアイオンＨＰ
−２０ＳＳの１７５０ｍＱカラム上で脱塩して水洗し、
０．５％酢酸を含む水：イソプロパノール（９５：５）
で溶離スる。ＨＰＬＣにより溶離を監視し、Ａ８２８４
６Ｂの分画を合して減圧下に濃縮し、凍結乾燥してＡ８
２８４６Ｂ純品ｓ、Ｂを得る。
を分離するプレパラテイブＨＰＬＣの３行程から得られ
たＡ８２８４６Ｂに富む分画を合し、ダイアイオンＨＰ
−２０ＳＳの１７５０ｍＱカラム上で脱塩して水洗し、
０．５％酢酸を含む水：イソプロパノール（９５：５）
で溶離スる。ＨＰＬＣにより溶離を監視し、Ａ８２８４
６Ｂの分画を合して減圧下に濃縮し、凍結乾燥してＡ８
２８４６Ｂ純品ｓ、Ｂを得る。
Ｄ、脱塩
同様にダイアイオンＨＰ−２０樹脂を用い、０１１％酢
酸を含むメタノール：水（４：１）で溶離することによ
り脱塩を行なうことができる。
酸を含むメタノール：水（４：１）で溶離することによ
り脱塩を行なうことができる。
＋２１Ａ８２８４６Ｃの単離
Ａ、Ａ８２８４６の分離
前記ｆａ）ｆｉｌ Ｂ項のように処理して１６５ｅ発酵
液４回から得られた発酵液４６１１を５Ｎ水酸化ナトリ
ウムでｐＨ１０，５に調節し、３％／１イフロ・スーパ
ーセル（Ｈｙｆｌｏ ５ｕｐｅｒｃｅｌ ） 濾過助剤
で濾過する。戸液４３０ｅを５Ｎ塩酸でｐＨ７ｆこ調節
し、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）−ＸＦＳ−４３２７８
（汁 ＮＨ４）樹脂１Ｍを含むカラムに適用する。カラムを水
５０召で洗い、０．０５Ｎ水酸化アンモニウムで活性物
質を溶離し、各４４分画を集める。生物試験法で溶離を
監視する。活性分画（ゴ１〜７）を合して減圧下、約１
７００ｍＦ！容に濃縮し、凍結乾燥して粗Ａ８２８４６
（２８３，９ｇ）を得る。
液４回から得られた発酵液４６１１を５Ｎ水酸化ナトリ
ウムでｐＨ１０，５に調節し、３％／１イフロ・スーパ
ーセル（Ｈｙｆｌｏ ５ｕｐｅｒｃｅｌ ） 濾過助剤
で濾過する。戸液４３０ｅを５Ｎ塩酸でｐＨ７ｆこ調節
し、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）−ＸＦＳ−４３２７８
（汁 ＮＨ４）樹脂１Ｍを含むカラムに適用する。カラムを水
５０召で洗い、０．０５Ｎ水酸化アンモニウムで活性物
質を溶離し、各４４分画を集める。生物試験法で溶離を
監視する。活性分画（ゴ１〜７）を合して減圧下、約１
７００ｍＦ！容に濃縮し、凍結乾燥して粗Ａ８２８４６
（２８３，９ｇ）を得る。
Ｂ、Ａ８２８４６Ａ、ＢおよびＣの分離前記Ａ項のよう
に得られた粗Ａ８２８４６（２ｙ）を水に溶解し、１％
リン酸二水素アンモニワム中シリカゲルＬ Ｐ −１／
ＣＩＢ 樹１指２１１０ｍｇ、を含む２″Ｘ ４５”
ステンレススチール製プレパラテイブＨＰＬＣカラムに
適用する。１％リン酸二水素アンモニウムから１％リン
酸二水素アンモニウム：アセトニトリル（９２：８）に
至る傾斜展開液を用い、流速７０ｍＱ／分でカラムを展
開し、各４００ｍＱ分画を集め、２５４ ｎｍ紫外線に
より監視する。
に得られた粗Ａ８２８４６（２ｙ）を水に溶解し、１％
リン酸二水素アンモニワム中シリカゲルＬ Ｐ −１／
ＣＩＢ 樹１指２１１０ｍｇ、を含む２″Ｘ ４５”
ステンレススチール製プレパラテイブＨＰＬＣカラムに
適用する。１％リン酸二水素アンモニウムから１％リン
酸二水素アンモニウム：アセトニトリル（９２：８）に
至る傾斜展開液を用い、流速７０ｍＱ／分でカラムを展
開し、各４００ｍＱ分画を集め、２５４ ｎｍ紫外線に
より監視する。
Ａ８２８４６Ａを含む分画（＝１１〜１４）を合してプ
ール１とし、Ａ８２８４６Ｃを含む分画（＃１６〜２０
）を合してプール２とし、Ａ８２８４６Ｂを含む分画（
＝２１〜２５）を合してプール３とする。
ール１とし、Ａ８２８４６Ｃを含む分画（＃１６〜２０
）を合してプール２とし、Ａ８２８４６Ｂを含む分画（
＝２１〜２５）を合してプール３とする。
Ｃ，Ａ８２８４６Ｃの精製
プール２を約２００ ｍＱ容に濃縮し、脱塩のためダイ
アイオンＨＰ−２０樹脂１８００ｏｄ！を含む７×４５
ＣｒＲガラスカラム齋こ適用する、０．１％酢酸を含む
メタノール：水（４：１）で溶離し、流速２５ｍＱ／分
で各ｌ１分画を集める。Ｃを含む分画（ゴ９〜１２）を
合して減圧下に濃縮し、凍結乾燥して半精！！Ａ８２８
４６Ｃ（６６２，２ｆｆｌＱ）を得るウシリカゲルＬＰ
−１／Ｃ１Ｂ（４５０ｍ悲）を含む１″×４８″スチー
ルカラム、１％リン酸二水素アンモニウムから１％リン
酸二水素アンモニワム：アセトニｌ−１ル（９２：８）
に至る傾斜溶離剤を用い、流速１１ｍＱ／分で逆相ＨＰ
ＬＣ段階を反復することにより、半端製Ａ ８２８４．
６ Ｃ（５００ＩＩＩ）を更【こ精製し、各２５ｍ（！
分画を集め、２５４ｎｍで監視する。Ａ８２８４６Ｃを
含む分画（＝１６９〜２１０）を合し、ＨＰ−２０樹脂
を含む５×４５ＣＩＮガラスカラムで脱塩する。０．１
％酢酸を含むメタノール：水（４：１）でカラムを溶離
し、各１００ｍＭ分画を集め、２２５ ｎｍ紫外線で監
視しながら分析的ＨＰＬＣｉこより溶離を続ける。八８
２８４６Ｃを含む分画（＝５〜１１）を合して減圧下１
こ濃縮し、凍結乾燥してＡ８２８４６Ｃ（１２７，３〜
）を得る。
アイオンＨＰ−２０樹脂１８００ｏｄ！を含む７×４５
ＣｒＲガラスカラム齋こ適用する、０．１％酢酸を含む
メタノール：水（４：１）で溶離し、流速２５ｍＱ／分
で各ｌ１分画を集める。Ｃを含む分画（ゴ９〜１２）を
合して減圧下に濃縮し、凍結乾燥して半精！！Ａ８２８
４６Ｃ（６６２，２ｆｆｌＱ）を得るウシリカゲルＬＰ
−１／Ｃ１Ｂ（４５０ｍ悲）を含む１″×４８″スチー
ルカラム、１％リン酸二水素アンモニウムから１％リン
酸二水素アンモニワム：アセトニｌ−１ル（９２：８）
に至る傾斜溶離剤を用い、流速１１ｍＱ／分で逆相ＨＰ
ＬＣ段階を反復することにより、半端製Ａ ８２８４．
６ Ｃ（５００ＩＩＩ）を更【こ精製し、各２５ｍ（！
分画を集め、２５４ｎｍで監視する。Ａ８２８４６Ｃを
含む分画（＝１６９〜２１０）を合し、ＨＰ−２０樹脂
を含む５×４５ＣＩＮガラスカラムで脱塩する。０．１
％酢酸を含むメタノール：水（４：１）でカラムを溶離
し、各１００ｍＭ分画を集め、２２５ ｎｍ紫外線で監
視しながら分析的ＨＰＬＣｉこより溶離を続ける。八８
２８４６Ｃを含む分画（＝５〜１１）を合して減圧下１
こ濃縮し、凍結乾燥してＡ８２８４６Ｃ（１２７，３〜
）を得る。
Ａ８２８４６Ａを含むプール１およびＡ８２８４６Ｂを
含むプール３を上記Ａ８２８４６Ｃと同様の方法で精製
し、更にＡ８２８４６ＡおよびＡ８２８４６Ｂ純品を得
る。
含むプール３を上記Ａ８２８４６Ｃと同様の方法で精製
し、更にＡ８２８４６ＡおよびＡ８２８４６Ｂ純品を得
る。
Ｄ、Ａ８２８４６Ｃの追加的精製
次に示すプレパラテイブクロマトグラフイーを用いて更
にＡ８２８４６Ｃ（７０１１ｇ）を精製する。
にＡ８２８４６Ｃ（７０１１ｇ）を精製する。
カラム：ゾルバ′ンクス５ＣＸ（９，２Ｘ２５０ＪＩ肩
）カチオン交換 移動相：１０％メタ／−ルを含む０．１５ Ｍ ｌン酸
二水素ナトリウム緩衝液から出発して１０％メタノール
を含む０．９ Ｍ リン酸二水素ナトリウム緩衝液に至
る線型傾斜溶離剤、６分間展開、５分間保持（緩衝液に
対して無調節） 流速：６．ＯｍＱ／分 検出： ２８０ ｎｍ紫外線 負荷：６．ＯＩＱ／水中注入 ピーク検出機構を備えたオートマチックフラクションコ
レクター（ギルソン（Ｇｉｌｓｏｎ ） ２０１ Ｃ）
を用いてＡ８２８４６Ｃを集める。ミリボア・ウォータ
ーズ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｗａｔｅｒｓ ） Ｍ
６００ Ｋ斜溶１ｉｉｌＩＨＰＬｃ系により移動相を分
配し、日立（Ｈ４ｔａｃｈｉ ） オートサンプラー
により試料溶液を注入する。
）カチオン交換 移動相：１０％メタ／−ルを含む０．１５ Ｍ ｌン酸
二水素ナトリウム緩衝液から出発して１０％メタノール
を含む０．９ Ｍ リン酸二水素ナトリウム緩衝液に至
る線型傾斜溶離剤、６分間展開、５分間保持（緩衝液に
対して無調節） 流速：６．ＯｍＱ／分 検出： ２８０ ｎｍ紫外線 負荷：６．ＯＩＱ／水中注入 ピーク検出機構を備えたオートマチックフラクションコ
レクター（ギルソン（Ｇｉｌｓｏｎ ） ２０１ Ｃ）
を用いてＡ８２８４６Ｃを集める。ミリボア・ウォータ
ーズ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｗａｔｅｒｓ ） Ｍ
６００ Ｋ斜溶１ｉｉｌＩＨＰＬｃ系により移動相を分
配し、日立（Ｈ４ｔａｃｈｉ ） オートサンプラー
により試料溶液を注入する。
Ａ８２８４６Ｃを含む分画を合して３０ｍ１！容に濃縮
し、ＨＰ−２０カラム（５０ｍ１２）に適用する。カラ
ムを水洗し、０．５％酢酸を含む水：イソプロパノール
（９５：５）で溶離し、各２５ｍＱ分画を集める。Ａ８
２８４６Ｃを含む分画（′！９〜１４）を合して濃縮し
、凍結乾燥してＡ８２８４６Ｃ純品３７！１１ｇを得る
。
し、ＨＰ−２０カラム（５０ｍ１２）に適用する。カラ
ムを水洗し、０．５％酢酸を含む水：イソプロパノール
（９５：５）で溶離し、各２５ｍＱ分画を集める。Ａ８
２８４６Ｃを含む分画（′！９〜１４）を合して濃縮し
、凍結乾燥してＡ８２８４６Ｃ純品３７！１１ｇを得る
。
ｆｅ）Ａ８２８４６成分（７）４Ｇ性
ｆｌｌＡ８２８４６Ａ
分子量：１５５６
実験式’ Ｃ７３Ｈ８９Ｎ１００２６Ｃ”ＦＡＢ−ＭＳ
（チオグリセロール）：（Ｍ＋１）実測値、１５５７．
５８０３； 計算値、ＣＣ７３Ｈ□Ｎ１００２６Ｃｊｌｌ’ ＝ １
５５７．５７１６ＵＶ（水）λ ：２８１ｎｍ （Ｃ
５，０５２）ａｘ 、塩基で３００ ｎｍにシフト ＩＲ（ＫＢｒ）：１７１６．１６５５．１６１１．１５
８６．１５５２．１５０４．１４１０．１３４０．１３
１０，１２３０．１２１２．１１３２．１０６°６．１
０２８および１０１５Ｃｎｌ−１ｐＫａ （水）：４．
７．９．５ ｐＫａ（６６％ＤＭＦ ） ： ５．５．６．８．７．
９．９゜４．１２．３（見掛けの分子量１５４２）。
（チオグリセロール）：（Ｍ＋１）実測値、１５５７．
５８０３； 計算値、ＣＣ７３Ｈ□Ｎ１００２６Ｃｊｌｌ’ ＝ １
５５７．５７１６ＵＶ（水）λ ：２８１ｎｍ （Ｃ
５，０５２）ａｘ 、塩基で３００ ｎｍにシフト ＩＲ（ＫＢｒ）：１７１６．１６５５．１６１１．１５
８６．１５５２．１５０４．１４１０．１３４０．１３
１０，１２３０．１２１２．１１３２．１０６°６．１
０２８および１０１５Ｃｎｌ−１ｐＫａ （水）：４．
７．９．５ ｐＫａ（６６％ＤＭＦ ） ： ５．５．６．８．７．
９．９゜４．１２．３（見掛けの分子量１５４２）。
＋２１Ａ８２８４６Ｂ
分子量：１５９０
実験式ば７３ Ｈ８８Ｎ１００２６ ”’２ＦＡＢ−Ｍ
Ｓ（チオグリセロール）：（Ｍ＋１）実測値、１５９１
．５３１５；計算値、ｃ７３Ｈ８９Ｎ１０ｏ２６”’２
＝ １５９１．５３２７Ｕｖ（水）λｍａｘ＝２８
００ｍ（６５，１９２）、塩基で３００ ｎｍにシフト ＩＲ（ＫＢｒ）：１６５６．１５８６．１５６２．１５
０４．１４ｏ３．１２６４．１２３０，１１３５．１１
０５．１０６５．１ｏ２３および１０１８ ｔ７！ｌ−
１ ｐＫａ（水）：４．６５．９．５ ＋３１Ａ８２８４６ｃ 分子量＋１５２２ 実験式’ Ｃ７３Ｃ７３Ｈ９ＯＮＩＯ ０２６ＦＡＢ−チオグリセＯ−／Ｌ／ ） ： （Ｍ＋
Ｎａ）実測値、１５４５．５９９８ｉ計算値、Ｃ７３Ｈ
９ｏＮ１ｏＯ２６Ｎａ＝１５４５゜５９２５Ｕｖ（水）
λ ：２８０ｎｍ （ｇ５，１９８）ａｘ 、塩基で３００ ｎｍにシフト ＩＲ（ＫＢｒ）：３６００−３００４（広い）、２９９
９．２９９１．２９５０．１６８７→１６５０（広い）
、１５８５．１５７０．１５０９．１５０３．１４５３
．１４４９．１４０２．１２１２．１１３０．１１０２
．１０６０．１０３２および１０１４α−１ ｐＫａ（水）：４．６．９．４ （４）他の性質 Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６ＢおよびＡ８２８４６Ｃ
を６Ｎ塩酸で加水分解後のアミノ酸分析は、アスパラギ
ン酸の存在と微量のグリシンｌこ伴う２個の広いピーク
を示した。この２つのピークはアクチノイジン性（ａｃ
ｔｉｎｏｉｄｉｎｉｃ ）およびパンコマイシ゛ン性（
ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｉｃ ）アミノ酸（この双方はバ
ンコマイシン類の糖ペプチド類に存在する）に対応する
と考えられる。
Ｓ（チオグリセロール）：（Ｍ＋１）実測値、１５９１
．５３１５；計算値、ｃ７３Ｈ８９Ｎ１０ｏ２６”’２
＝ １５９１．５３２７Ｕｖ（水）λｍａｘ＝２８
００ｍ（６５，１９２）、塩基で３００ ｎｍにシフト ＩＲ（ＫＢｒ）：１６５６．１５８６．１５６２．１５
０４．１４ｏ３．１２６４．１２３０，１１３５．１１
０５．１０６５．１ｏ２３および１０１８ ｔ７！ｌ−
１ ｐＫａ（水）：４．６５．９．５ ＋３１Ａ８２８４６ｃ 分子量＋１５２２ 実験式’ Ｃ７３Ｃ７３Ｈ９ＯＮＩＯ ０２６ＦＡＢ−チオグリセＯ−／Ｌ／ ） ： （Ｍ＋
Ｎａ）実測値、１５４５．５９９８ｉ計算値、Ｃ７３Ｈ
９ｏＮ１ｏＯ２６Ｎａ＝１５４５゜５９２５Ｕｖ（水）
λ ：２８０ｎｍ （ｇ５，１９８）ａｘ 、塩基で３００ ｎｍにシフト ＩＲ（ＫＢｒ）：３６００−３００４（広い）、２９９
９．２９９１．２９５０．１６８７→１６５０（広い）
、１５８５．１５７０．１５０９．１５０３．１４５３
．１４４９．１４０２．１２１２．１１３０．１１０２
．１０６０．１０３２および１０１４α−１ ｐＫａ（水）：４．６．９．４ （４）他の性質 Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６ＢおよびＡ８２８４６Ｃ
を６Ｎ塩酸で加水分解後のアミノ酸分析は、アスパラギ
ン酸の存在と微量のグリシンｌこ伴う２個の広いピーク
を示した。この２つのピークはアクチノイジン性（ａｃ
ｔｉｎｏｉｄｉｎｉｃ ）およびパンコマイシ゛ン性（
ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｉｃ ）アミノ酸（この双方はバ
ンコマイシン類の糖ペプチド類に存在する）に対応する
と考えられる。
比較ＮＭＲによる研究は、Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４
６ＢおよびＡ８２８４６Ｃがそれぞれ特異なアミノ糖で
ある４−エピーバンコサミン（３−メチル−アコサミン
（ａｃｏｓａｍｉｎｅ ） ）を含有することを示して
いる。
６ＢおよびＡ８２８４６Ｃがそれぞれ特異なアミノ糖で
ある４−エピーバンコサミン（３−メチル−アコサミン
（ａｃｏｓａｍｉｎｅ ） ）を含有することを示して
いる。
Ａ８２８４６Ａの分子式は、バンコマイシン（Ｃ６６Ｈ
７５Ｈ９０２４Ｃ１２）より塩素１原子少なく、追加的
パンコサミン型アミノ糖（Ｃ７Ｈ１４ＮＯ２）成分の多
い分子式に対応する。Ａ８２８４６Ｂの分子式は、Ａ８
２８４６Ａの水素原子１個が塩素原子１個により置換さ
れた分子式に対応する。Ａ８２８４６Ｃの分子式は、Ａ
８２８４６Ａの塩素原子１個が水素により置き換えられ
ている分子式に対応する。それ故、Ａ８２８４６成分は
、一般的組成のバンコマイシン分子と明らかに類似して
いるが、主として塩素含量およびパンコサミン構成部分
を有する追加的副次単位の存在において異なる新規部類
の糖ペプチドを構成するものと考えられる。
７５Ｈ９０２４Ｃ１２）より塩素１原子少なく、追加的
パンコサミン型アミノ糖（Ｃ７Ｈ１４ＮＯ２）成分の多
い分子式に対応する。Ａ８２８４６Ｂの分子式は、Ａ８
２８４６Ａの水素原子１個が塩素原子１個により置換さ
れた分子式に対応する。Ａ８２８４６Ｃの分子式は、Ａ
８２８４６Ａの塩素原子１個が水素により置き換えられ
ている分子式に対応する。それ故、Ａ８２８４６成分は
、一般的組成のバンコマイシン分子と明らかに類似して
いるが、主として塩素含量およびパンコサミン構成部分
を有する追加的副次単位の存在において異なる新規部類
の糖ペプチドを構成するものと考えられる。
げ１Ａ８２８４６抗生物質の抗菌活性
Ａ８２８４６抗生物質は、実験動物における実験的昏こ
誘導される感染に対し、生体内抗菌活性を示す。供試微
生物に実験的ｆζ感染させたマウスに試験化合物を２回
投与したとき、観察された活性をＥＤ５ｏ値〔供試動物
が５０％保護される有効投与量（＃／＆ｑ）（ウオーレ
ンー’フイク（ＷａｒｒｅｎＷｉｃｋ）ら： Ｊ、 Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ、第８１巻２３３〜２３５頁（１９６
１年）参照）〕として測定した。例証的化合物１ζつい
て観察されたＥＤ５ｏ値を表旧こ示す。
誘導される感染に対し、生体内抗菌活性を示す。供試微
生物に実験的ｆζ感染させたマウスに試験化合物を２回
投与したとき、観察された活性をＥＤ５ｏ値〔供試動物
が５０％保護される有効投与量（＃／＆ｑ）（ウオーレ
ンー’フイク（ＷａｒｒｅｎＷｉｃｋ）ら： Ｊ、 Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ、第８１巻２３３〜２３５頁（１９６
１年）参照）〕として測定した。例証的化合物１ζつい
て観察されたＥＤ５ｏ値を表旧こ示す。
表ＩＩ：Ａ８２８４６抗生物質の生体内活性Ａ８２８４
６Ａ Ｏ，１９０，１９０，１７Ａ８２８４６Ｂ
Ｏ，１９０，２００，１８Ａ８２８４６Ｃ２，１８２，
７１５，８７パンコマイシン １．３ ０．７２
１．５２ａ ： Ｑ／ｋＱ×２ （感染１時間後およ
び４時間後の２回マウスに対して皮下投与した投与ｆｆ
１）表中、供試微生物Ｓ、ａｕｒ、はスタフイ口コック
ス・アウレウス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕ
ｒｅｕｓ ） 、Ｓ、 ｐｙｏ。
６Ａ Ｏ，１９０，１９０，１７Ａ８２８４６Ｂ
Ｏ，１９０，２００，１８Ａ８２８４６Ｃ２，１８２，
７１５，８７パンコマイシン １．３ ０．７２
１．５２ａ ： Ｑ／ｋＱ×２ （感染１時間後およ
び４時間後の２回マウスに対して皮下投与した投与ｆｆ
１）表中、供試微生物Ｓ、ａｕｒ、はスタフイ口コック
ス・アウレウス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕ
ｒｅｕｓ ） 、Ｓ、 ｐｙｏ。
はストレプトコックス・ピオゲネス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ ） 、Ｓ、ｐｎｅｕ、
はストレプトコックス・プノイモニアエ（５ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）の略記であ
る。
ｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ ） 、Ｓ、ｐｎｅｕ、
はストレプトコックス・プノイモニアエ（５ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）の略記であ
る。
実施例１
バンコマイシン全発酵液吸着
活性物質４５．４．７を含有するバンコマイシン全発酵
液に、再生したダｒ７（Ｄｏｗ）ＸＦＳ−４３２７８，
００樹脂１ｇを加える。室温で６時間撹拌後、混合物を
１００メツシユ篩に通して樹脂から発酵液を分離する。
液に、再生したダｒ７（Ｄｏｗ）ＸＦＳ−４３２７８，
００樹脂１ｇを加える。室温で６時間撹拌後、混合物を
１００メツシユ篩に通して樹脂から発酵液を分離する。
分離した発酵液を損失量試験し、捨てる。
負荷されている樹脂を純水で洗い、バッチ方式で樹脂ス
ラリーを水酸化すｌ−１ウム溶液でｐＨ１０゜５に調節
し、樹脂スラリーをｐＨ１０，５に保持しながら２時間
撹拌することにより、溶離する。次いで減圧濾過薔こよ
り溶離した樹脂を溶出液から分離し、樹脂を純水で洗う
。溶出液と洗液を集めてこれらを合し、溶液の安定性の
ために塩酸でｐＨ３，１に調節し、試験する。この試験
は、活性物質３７゜１ｇの回収を達成したことを示した
。
ラリーを水酸化すｌ−１ウム溶液でｐＨ１０゜５に調節
し、樹脂スラリーをｐＨ１０，５に保持しながら２時間
撹拌することにより、溶離する。次いで減圧濾過薔こよ
り溶離した樹脂を溶出液から分離し、樹脂を純水で洗う
。溶出液と洗液を集めてこれらを合し、溶液の安定性の
ために塩酸でｐＨ３，１に調節し、試験する。この試験
は、活性物質３７゜１ｇの回収を達成したことを示した
。
溶離後の樹脂を、塩酸でｐＨ２，０に調節した水溶液中
で２０分間混合し、純水で洗って過剰の酸を除き、塩化
ナトリウム溶液と共に更に２０分間撹拌して樹脂をその
Ｎａ＋型に戻し、次いで純水ですすいで過剰の塩溶液を
除くことにより、樹脂を再生する。
で２０分間混合し、純水で洗って過剰の酸を除き、塩化
ナトリウム溶液と共に更に２０分間撹拌して樹脂をその
Ｎａ＋型に戻し、次いで純水ですすいで過剰の塩溶液を
除くことにより、樹脂を再生する。
比較のため、同量の全発酵液を用い、従来技術のｐＨ調
節および濾過１こ関する最も良い計画を実施し、樹脂溶
出液中に期待されるバンコマイシン活性物質は２３．２
ｇｉこ過ぎなかった。
節および濾過１こ関する最も良い計画を実施し、樹脂溶
出液中に期待されるバンコマイシン活性物質は２３．２
ｇｉこ過ぎなかった。
実施例２
Ｍ４’３Ａ全発酵液吸着
米国特許第４，５４８．９２５号のイグザンプル２セク
ションＢのように処理してＭ４３Ａを製造する。ただし
く１）の全発酵液の濾過および（２）のカチオン交換樹
脂によるｐ液のステップを排除し、その代わりに再生し
たダウＸ５Ｆ−４３２フ８．００樹脂を全発酵に加え、
混合物を室温で６時間撹拌し、篩に通して樹脂から発酵
液を分離する。負荷されている樹脂を実施例１と同様に
処理してＭ４３Ａを回収する。
ションＢのように処理してＭ４３Ａを製造する。ただし
く１）の全発酵液の濾過および（２）のカチオン交換樹
脂によるｐ液のステップを排除し、その代わりに再生し
たダウＸ５Ｆ−４３２フ８．００樹脂を全発酵に加え、
混合物を室温で６時間撹拌し、篩に通して樹脂から発酵
液を分離する。負荷されている樹脂を実施例１と同様に
処理してＭ４３Ａを回収する。
米国特許第４，５４８，９２５号イグザンプル２、セク
ションＣの記載と同様に処理しＭ４３Ａを精製する。
ションＣの記載と同様に処理しＭ４３Ａを精製する。
実施例３
アクタプラニン全発酵液吸着
米国特許第４，３２２，４０６号イグザンプル１のよう
に処理してアクタプラニンを製造する。ただしセクショ
ンＣ単離のステップにおいて、（１）濾過助剤の添加、
（２）全発酵液の一過、＋３＋ｖ５過ケーキの水中再懸
濁、（４）水性懸濁液のｐＨ１０，５に調節、および（
５）濾過のステップを排除し、その代わりに全発酵液に
ダイアイオン５Ｋ−１０２を加え、実施例１の操作法を
使用してアクタプラニン複合物を回収する。上記特許の
イグザンプル１のセクションＤおよびＦの記載のように
処理してアクタプラニン因子Ｂ工、Ｂ２、Ｂ３、Ｃｌａ
％Ｃ３およびＥ工を単離する。
に処理してアクタプラニンを製造する。ただしセクショ
ンＣ単離のステップにおいて、（１）濾過助剤の添加、
（２）全発酵液の一過、＋３＋ｖ５過ケーキの水中再懸
濁、（４）水性懸濁液のｐＨ１０，５に調節、および（
５）濾過のステップを排除し、その代わりに全発酵液に
ダイアイオン５Ｋ−１０２を加え、実施例１の操作法を
使用してアクタプラニン複合物を回収する。上記特許の
イグザンプル１のセクションＤおよびＦの記載のように
処理してアクタプラニン因子Ｂ工、Ｂ２、Ｂ３、Ｃｌａ
％Ｃ３およびＥ工を単離する。
実施例４
タイコプラニン全発酵液吸着
米国特許第４，２３９，７５１号（カラム４〜６）記載
のように処理してタイコプラニンを製造する。ただし次
のステップを排除する：発酵液の濾過、濾過した培地の
ｐＨ調節、培地のブタノールによる抽出、菌糸体環のｐ
Ｈ３，５の水による洗浄、減圧乾燥、その水性アセトン
による抽出、アセトン抽出物の濃縮、そのｐＨ調節およ
びそのブタノール（こよる抽出。その代わり番こ実施例
１の操作法を使用してタイコプラニン複合物を回収する
。
のように処理してタイコプラニンを製造する。ただし次
のステップを排除する：発酵液の濾過、濾過した培地の
ｐＨ調節、培地のブタノールによる抽出、菌糸体環のｐ
Ｈ３，５の水による洗浄、減圧乾燥、その水性アセトン
による抽出、アセトン抽出物の濃縮、そのｐＨ調節およ
びそのブタノール（こよる抽出。その代わり番こ実施例
１の操作法を使用してタイコプラニン複合物を回収する
。
実施例５
Ａ８２８４６全発酵液吸着
前記製造例１の（ａ１３１およびｆｂ１項と同様に処理
して抗生物質Ａ８２８４６を製造する。ただしｆｂ１項
において実施例１の操作法を使用し、次の段階を排除す
る：ｐＨの調節、濾過助剤の添加、フィルタープレスに
よる混合物の濾過、フィルタープレスの水洗および混合
した戸液／洗液のｐＨ調節。
して抗生物質Ａ８２８４６を製造する。ただしｆｂ１項
において実施例１の操作法を使用し、次の段階を排除す
る：ｐＨの調節、濾過助剤の添加、フィルタープレスに
よる混合物の濾過、フィルタープレスの水洗および混合
した戸液／洗液のｐＨ調節。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、（１）バンコマイシン型糖ペプチド抗生物質を産生
した発酵培地をポリスチレン・ジビニルベンゼン樹脂と
混合し、（２）この培地から樹脂を分離し、（３）樹脂
から抗生物質を溶離することを特徴とするバンコマイシ
ン型糖ペプチド抗生物質の回収方法。 ２、逆流吸着により発酵培地を樹脂に加えることにより
、樹脂を発酵培地と混合する請求項１記載の方法。 ３、バッチ処理により樹脂を発酵培地に加えることによ
り、樹脂を発酵培地と混合する請求項１記載の方法。 ４、溶離液がｐＨ９〜１２の水溶液である請求項１〜３
のいずれかに記載の方法。 ５、抗生物質がバンコマイシンである前記請求項のいず
れかに記載の方法。 ６、抗生物質が抗生物質Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６
ＢおよびＡ８２８４６Ｃから選ばれるものである請求項
１〜４のいずれかに記載の方法。 ７、抗生物質がタイコマイシンＡ＿１、Ａ＿２およびＡ
＿３ならびにタイコマイシンＡ＿２因子１、２、３、４
および５から選ばれるものである請求項１〜４のいずれ
かに記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US19914 | 1987-02-27 | ||
| US07/019,914 US4845194A (en) | 1987-02-27 | 1987-02-27 | Glycopeptide recovery process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63237794A true JPS63237794A (ja) | 1988-10-04 |
| JP2659388B2 JP2659388B2 (ja) | 1997-09-30 |
Family
ID=21795726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63047342A Expired - Lifetime JP2659388B2 (ja) | 1987-02-27 | 1988-02-27 | 糖ペプチド回収方法 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4845194A (ja) |
| EP (1) | EP0280570B1 (ja) |
| JP (1) | JP2659388B2 (ja) |
| KR (1) | KR970003517B1 (ja) |
| CN (1) | CN1032426C (ja) |
| AT (1) | ATE136037T1 (ja) |
| BG (1) | BG47198A3 (ja) |
| CA (1) | CA1338002C (ja) |
| DE (1) | DE3855145T2 (ja) |
| ES (1) | ES2085260T3 (ja) |
| FI (1) | FI93228C (ja) |
| GR (1) | GR3019978T3 (ja) |
| HU (1) | HU199873B (ja) |
| IE (1) | IE71520B1 (ja) |
| IL (1) | IL85557A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014524916A (ja) * | 2011-07-13 | 2014-09-25 | インストラクション・ゲーエムベーハー | 高耐塩性のイオン交換材料 |
Families Citing this family (16)
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|---|---|---|---|---|
| JP2577133B2 (ja) * | 1989-11-27 | 1997-01-29 | スティフティング フォール ド テフニスヘ ウェッテンスハッペン | 船舶のプロペラ |
| US5149784A (en) * | 1990-07-10 | 1992-09-22 | Abbott Laboratories | Process for making vancomycin |
| US5574135A (en) * | 1990-07-10 | 1996-11-12 | Abbott Laboratories | Process for making vancomycin |
| US5258495A (en) * | 1990-07-10 | 1993-11-02 | Abbott Laboratories | Process for making vancomycin HC1 |
| DK0640095T3 (da) * | 1992-04-20 | 1999-04-12 | Abbott Lab | Fremgangsmåde til fremstilling af vancomycin |
| US5919756A (en) * | 1996-06-28 | 1999-07-06 | Eli Lilly And Company | Amides |
| TWI233932B (en) * | 2001-08-24 | 2005-06-11 | Theravance Inc | Process for purifying glycopeptide phosphonate derivatives |
| KR100476818B1 (ko) * | 2002-07-19 | 2005-03-17 | 종근당바이오 주식회사 | 테이코플라닌 에이 투 정제 방법 |
| KR100554481B1 (ko) * | 2004-06-30 | 2006-03-03 | 씨제이 주식회사 | 반코마이신 염산염의 정제방법 |
| US20080161536A1 (en) * | 2006-12-29 | 2008-07-03 | Abbott Laboratories | Vancomycin b hydrochloride crystalline form 1 |
| CN102010462A (zh) * | 2009-09-04 | 2011-04-13 | 四川金稞生物科技有限公司 | 应用纳滤浓缩纯化技术从发酵液中制取雷莫拉宁 |
| DE102011107197A1 (de) * | 2011-07-13 | 2013-01-17 | Instraction Gmbh | Ionenaustauschermaterial mit hoher Salztoleranz |
| EP2592089A1 (en) | 2011-11-11 | 2013-05-15 | LEK Pharmaceuticals d.d. | Process of purification of teicoplanin |
| EP2592090A1 (en) | 2011-11-11 | 2013-05-15 | LEK Pharmaceuticals d.d. | Process of purification of teicoplanin |
| EP3169345B1 (en) | 2014-07-17 | 2025-01-29 | Melinta Therapeutics, LLC | High purity oritavancin and method of producing same |
| CN106928323B (zh) * | 2017-03-02 | 2021-08-20 | 重庆乾泰生物医药有限公司 | 一种高纯度奥利万星关键中间体a82846b的制备方法 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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