JPS6324517B2 - - Google Patents
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- JPS6324517B2 JPS6324517B2 JP55143017A JP14301780A JPS6324517B2 JP S6324517 B2 JPS6324517 B2 JP S6324517B2 JP 55143017 A JP55143017 A JP 55143017A JP 14301780 A JP14301780 A JP 14301780A JP S6324517 B2 JPS6324517 B2 JP S6324517B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reaction
- antibiotic
- methanol
- culture
- crystals
- Prior art date
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Animal Behavior & Ethology (AREA)
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- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
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- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、新規抗生物質KG―2245およびその
製法に関する。 本発明者らは、土壌中より新たに分離したスト
レプトマイセス属に属する―菌株No.KG―2245が
新規抗生物質KG―2245を産生することを見出し
た。 本菌株No.KG―2245の菌学的性状は次の通りで
ある。 (a) 形態的性状 KG―2245株は真直ぐに延びた気菌系を有し、
胞子は0.47〜0.67×1.2〜1.6μの大きさであり、円
筒状で少数のとげを認める。 (b) 各培地における生育状態 各培地における生育状態はいずれも27℃、10〜
14目培養後の観察した。結果は第１表に示した通
りである。
製法に関する。 本発明者らは、土壌中より新たに分離したスト
レプトマイセス属に属する―菌株No.KG―2245が
新規抗生物質KG―2245を産生することを見出し
た。 本菌株No.KG―2245の菌学的性状は次の通りで
ある。 (a) 形態的性状 KG―2245株は真直ぐに延びた気菌系を有し、
胞子は0.47〜0.67×1.2〜1.6μの大きさであり、円
筒状で少数のとげを認める。 (b) 各培地における生育状態 各培地における生育状態はいずれも27℃、10〜
14目培養後の観察した。結果は第１表に示した通
りである。
【表】
(c) 各生理的性質
生育温度範囲；37℃でも増殖するが、27〜30
℃位が最も増殖する。 ゼラチンの液化；陰性 スターチの加水分解； 脱脂牛乳の凝固；陰性 メラニン様色素の生成（チロシン寒天上）；
陰性 亜硝酸生成反応；陽性 セルロースの分解；疑陽性 (d) 各炭素源の同化性 Ｌ―アラビノース；利用しない Ｄ―キシロース；疑陽性 Ｄ―グルコース；利用する Ｄ―フラクトース；利用しない シユクロース；利用しない イノシトール；利用する Ｌ―ラムノース；疑陽性 ラフイノース；利用しない Ｄ―マンニツト；利用しない (e) 細胞壁組成 Beckerらの方法〔Appl.Microb.13、236〜243
（1965）〕によつて分析した結果、ジアミノピメリ
ン酸はLL―型である。従つて、細胞壁はＩ型で
ある。 以上の菌学的諸性状から本菌KG―2245株はス
トレプトマイセス属に属するものと同定し、スト
レプトマイセススビーシーズNo.KG―2245
（Streptomyces SP.2245）と称することとした
（工業技術院微生物工業技術研究所、微生物受託
番号通知書「微工研菌寄託第5675号、FERM―
ＰNo.5675」） 本抗生物質KG―2245は、制癌活性を有し、次
に示すような理化学的性質を有する抗生物質であ
る。 分子式 C29 H35 NO5 元素分析値：Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値： 72.33 7.35 2.83 計算値： 72.58 7.47 2.80 （C29H35NO5として） 分子量：477（質量分析による） 融 点：243〜245℃（分解） 比旋光度：〔α〕20 D＝＋246（Ｃ＝0.5、ジメチ
ルスルホキシド） 紫外部吸収スペクトル：メタノール中での紫
外部吸収スペクトルは第１図の通りであつ
て、λMeOH Max300nm（ε＝44500）の極大吸収
を示す。酸、アルカリによりシフトしな
い。 赤外部吸収スペクトル：第２図の通りであつ
て、3470，3260，3040，2925，2870，
1640，1605，1540，1455，1440，1385，
1350，1330，1260，1220，1195，1160，
1120，1090，1005，975，930，890，835，
750，700cm-1の波長を示す。 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシ
ド、ジメチルホルムアミド、ピリジンに可
溶、メタノールに僅かに可溶、エタノー
ル、ベンゼン、アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、水に不溶 呈色反応：ライドン・スミス反応、ドラーゲ
ンドルフ反応、塩化第二鉄反応、２，４―
ジニトロフエニルヒドラゾン反応に陽性、
ニンヒドリン反応、エールリツヒ反応、ア
ニスアルデヒド―硫酸反応に陰性 塩基性、酸性、中性の区別：脂溶性酸性物質 結晶形：無色板状結晶（メタノールより） (11)塩基性、酸性、中性に対する安定性：酸性お
よび中性で安定、塩基性でやや不安定 薄層クロマトグラフイー（TLC）；Rf＝0.5
〔シリカゲル60F―254、メルク社製、展開
溶媒：クロロホルム：メタノール：酢酸
（91.5：７：1.5）〕 上記の理化学的性質を有する本抗生物質KG―
2245と既知抗生物質とを比較検討すると、紫外部
300nm付近に極大吸収を有する既知抗生物質とし
て、Variotin〔J.Antibiotics，12A，109（1959）〕、
Ikarugamycin〔J.Antibiotics，25，271（1972）〕、
Viridenomycin〔J.Antibiotics，28(3)，167
（1975）〕、Askamycin〔J.Antibiotics，29(9)，876
（1976）〕が挙げられる。しかしながら、Variotin
は分子式C17H25NO3であり、融点、分子量の点
で非常に異なる。Ikarugamycinは融点253℃、分
子量478、Viridenomycinは融点169℃、分子量
566、Asukamycinは融点188℃、分子量542であ
つて、各々融点および分子量において異なる。従
つて、本抗生物質KG―2245は新規抗生物質と認
められる。 本抗生物質KG―2245は、ストレプトマイセス
属に属する抗生物質KG―2245生産菌を培地に培
養し、その培養物より抗生物質KG―2245を採取
することにより得られる。 本発明における使用菌としては、前記のストレ
プトマイセス・スピーシーズNo.KG―2245はその
一例であつて、本菌だけでなく、紫外線、Ｘ線、
放射線、化学薬剤等を用いる人工的変異手段で得
られる変異体は勿論、自然変異株も含め、ストレ
プトミセス属に属し、抗生物質KG―2245を生産
する菌は、すべて本発明において使用できる。 本発明を実施するに当つては、先ずストレプト
マイセス属に属する抗生物質KG―2245生産菌
を、抗生物質を生産する通常の方法で培養する。
培養の形態は、通常液体培養で行うが、工業的に
は深部通気撹拌培養を行うのが有利である。 培地としては、放線菌の培養に通常用いられる
ものが広く使用され得る。炭素源としては、同化
可能な炭素化合物であればよく、例えばブドウ
糖、シヨ糖、乳糖、麦芽類、スターチ、糖密等が
使用される。窒素源としては、利用可能な窒素化
合物であればよく、例えばコーン・スチープリカ
ー、大豆粉、綿実粉、小麦グルテン、ペプトン、
肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分解物、ア
ンモニウム塩、硝酸塩等が使用され、さらに必要
に応じてリン酸塩、マグネシユウム塩、カルシユ
ウム塩、カリウム塩、銅、亜鉛、鉄、マンガン、
等の塩類が使用される。培地のPHは通常6.8〜7.0
である。 培養温度は、菌が発育し、抗生物質KG―2245
を生産する範囲内で適宜変更し得るが、特に好ま
しいのは27〜30℃である。培養時間は条件により
異なるが、抗生物質KG―2245が最高収量に達す
る時間を見計つて適当な時間に培養を終了すれば
よい。通常は２〜７日程度である。 このようにして得られた抗生物質KG―2245生
産菌の培養物から抗生物質KG―2245を採取する
に際し、抗生物質KG―2245は、培養液又は遠
心上澄液に溶解していたり、また菌体と一諸に不
溶物となつていたりするので、抗生物質KG―
2245が脂溶性酸性物質であること、溶剤に対する
溶解性の特性、セフアデツクスLH―20、ダイヤ
イオンHP―20、並びにシリカゲルなどの担体に
対する特性などを利用して分離精製をおこなうの
が有利である。 抗生物質KG―2245を検知するには、バチル
ス・ズブチリスPCI―219を被験菌とする通常の
微生物検定法、300nmの特異な紫外部吸収を利用
する方法並びに２，４―ジニトロフエニルヒドラ
ゾンによる呈色反応などにより実施できる。 抗生物質KG―2245の分離精製手段の一例を示
せば、 先づ抗生物質KG―2245生産菌の培養物を、ド
ラムフイルターまたはプレスフイルターによる
過分離手段やバスケツト型遠心分離手段によつて
培養液又は遠心上澄液と菌体に分離する。 培養液又は遠心上澄液には酢酸エチル、クロ
ロホルム、塩化メチレンなどの脂溶性で水とは任
意の割合で混じり合わず且つ抗生物質KG―2245
を抽出しうる溶剤を加え、酸性条件下で抽出し、
一方、菌体にはメタノール、アセトンなどの親水
性でで水と任意の割合で混じり合い且つKG―
2245を抽出しうる溶剤を加え、酸性条件下で抽出
し、これらの抽出液を減圧下で溶剤を留去し、更
に濃縮し、得られる残査をメタノールに溶解し、
セフアデツクスLH―20を用いてゲル過し、活
性画分を硫酸処理シリカゲルに吸着させ、塩化メ
チレンで溶出する湿式クロマトグラフイーを行う
こにより抗生物質KG―2245を分離精製すること
ができる。 抗生物質KG―2245ナトリウム塩を単離する方
法は、KG―2245を含有する溶液、例えばメタノ
ール溶液にナトリウムメトキシド、酢酸ナトリウ
ムなどを過剰量加えることにより、結晶状のKG
―2245ナトリウム塩を採取することができる。 このKG―2245ナトリウム塩は塩酸、硫酸など
の希薄水溶液と混合処理して抗生物質KG―2245
に容易に変換できるので、KG―2245を含む粗製
品を一旦前記の処理方法によりKG―2245ナトリ
ウムとして単離したあと、酸処理によりKG―
2245の精製品を得ることができる。 薬学的に許容しうる非毒性塩として、その他に
カリウム塩、カルシウム塩並びにアルミニウム塩
などが同様にして採取できる。 次に本抗生物質KG―2245の生物学的性状につ
いて述べる。 (1) 抗菌スペクトル 寒天希釈法による各被検菌に対する最少阻止濃
度（MIC）μｇ／mlは第２表に示す通りである。 第 ２ 表 被験菌 MICμｇ／ml Staphylococcus aureus FDA―209P 3.1 Sarcina lutea ATTC 100I ＜0.4 Bacillus subtilis PCI―219 0.4 Escherichia coli NIHJ 200 Mycobacterium smegmatis 3.1 Pseudomonas aeruginosa 200 Xanthomonas oryzae 100 Candida albicans 100 Saccharomyces sake 200 Aspergillus niger 100 Trichopyton interdigitale 6.2 Piricularia oryzae 3.1 Alternaria lcikuchiana 6.2 Microsporum gypseum 12.5 (2) 急性毒性 LD50約400mg／Kg（マウス、腹腔内投与） LD50約1000mg／Kg以上（マウス、経口投与） (3) 制癌活性 ａ 実験方法 マウス白血病Ｐ―388細胞１×105個を
CDF1マウスの腹腔に移殖し、24時間後か
ら各３群に１回注射（Ａ群）、１日，５日
および９日後に注射（Ｂ群）および１日１
回連日９日間注射（Ｃ群）の腹腔内投与し
た。 エールリツヒ腹水癌細胞2.5×106個をdd系
マウスの腹腔に移殖し、24時間後から各３
群に前記と同じ期間投与した。 ｂ 効果判定 上記実験方法によるＰ―388およびエール
リツヒ腫瘍は、宿主の延命日数を観察し、次
式によつて治療効果を求めた。 治療群の中間延命日数（Ｔ）／無治療群の中間延
命日数(C)×100＝（Ｔ／Ｃ％） ｃ 治療効果 前記の式により求めた白血病Ｐ―388に対
する効果は第３表、エーリリツヒ腹水癌に対
する効果は第４表に示す。
℃位が最も増殖する。 ゼラチンの液化；陰性 スターチの加水分解； 脱脂牛乳の凝固；陰性 メラニン様色素の生成（チロシン寒天上）；
陰性 亜硝酸生成反応；陽性 セルロースの分解；疑陽性 (d) 各炭素源の同化性 Ｌ―アラビノース；利用しない Ｄ―キシロース；疑陽性 Ｄ―グルコース；利用する Ｄ―フラクトース；利用しない シユクロース；利用しない イノシトール；利用する Ｌ―ラムノース；疑陽性 ラフイノース；利用しない Ｄ―マンニツト；利用しない (e) 細胞壁組成 Beckerらの方法〔Appl.Microb.13、236〜243
（1965）〕によつて分析した結果、ジアミノピメリ
ン酸はLL―型である。従つて、細胞壁はＩ型で
ある。 以上の菌学的諸性状から本菌KG―2245株はス
トレプトマイセス属に属するものと同定し、スト
レプトマイセススビーシーズNo.KG―2245
（Streptomyces SP.2245）と称することとした
（工業技術院微生物工業技術研究所、微生物受託
番号通知書「微工研菌寄託第5675号、FERM―
ＰNo.5675」） 本抗生物質KG―2245は、制癌活性を有し、次
に示すような理化学的性質を有する抗生物質であ
る。 分子式 C29 H35 NO5 元素分析値：Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値： 72.33 7.35 2.83 計算値： 72.58 7.47 2.80 （C29H35NO5として） 分子量：477（質量分析による） 融 点：243〜245℃（分解） 比旋光度：〔α〕20 D＝＋246（Ｃ＝0.5、ジメチ
ルスルホキシド） 紫外部吸収スペクトル：メタノール中での紫
外部吸収スペクトルは第１図の通りであつ
て、λMeOH Max300nm（ε＝44500）の極大吸収
を示す。酸、アルカリによりシフトしな
い。 赤外部吸収スペクトル：第２図の通りであつ
て、3470，3260，3040，2925，2870，
1640，1605，1540，1455，1440，1385，
1350，1330，1260，1220，1195，1160，
1120，1090，1005，975，930，890，835，
750，700cm-1の波長を示す。 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシ
ド、ジメチルホルムアミド、ピリジンに可
溶、メタノールに僅かに可溶、エタノー
ル、ベンゼン、アセトン、クロロホルム、
酢酸エチル、水に不溶 呈色反応：ライドン・スミス反応、ドラーゲ
ンドルフ反応、塩化第二鉄反応、２，４―
ジニトロフエニルヒドラゾン反応に陽性、
ニンヒドリン反応、エールリツヒ反応、ア
ニスアルデヒド―硫酸反応に陰性 塩基性、酸性、中性の区別：脂溶性酸性物質 結晶形：無色板状結晶（メタノールより） (11)塩基性、酸性、中性に対する安定性：酸性お
よび中性で安定、塩基性でやや不安定 薄層クロマトグラフイー（TLC）；Rf＝0.5
〔シリカゲル60F―254、メルク社製、展開
溶媒：クロロホルム：メタノール：酢酸
（91.5：７：1.5）〕 上記の理化学的性質を有する本抗生物質KG―
2245と既知抗生物質とを比較検討すると、紫外部
300nm付近に極大吸収を有する既知抗生物質とし
て、Variotin〔J.Antibiotics，12A，109（1959）〕、
Ikarugamycin〔J.Antibiotics，25，271（1972）〕、
Viridenomycin〔J.Antibiotics，28(3)，167
（1975）〕、Askamycin〔J.Antibiotics，29(9)，876
（1976）〕が挙げられる。しかしながら、Variotin
は分子式C17H25NO3であり、融点、分子量の点
で非常に異なる。Ikarugamycinは融点253℃、分
子量478、Viridenomycinは融点169℃、分子量
566、Asukamycinは融点188℃、分子量542であ
つて、各々融点および分子量において異なる。従
つて、本抗生物質KG―2245は新規抗生物質と認
められる。 本抗生物質KG―2245は、ストレプトマイセス
属に属する抗生物質KG―2245生産菌を培地に培
養し、その培養物より抗生物質KG―2245を採取
することにより得られる。 本発明における使用菌としては、前記のストレ
プトマイセス・スピーシーズNo.KG―2245はその
一例であつて、本菌だけでなく、紫外線、Ｘ線、
放射線、化学薬剤等を用いる人工的変異手段で得
られる変異体は勿論、自然変異株も含め、ストレ
プトミセス属に属し、抗生物質KG―2245を生産
する菌は、すべて本発明において使用できる。 本発明を実施するに当つては、先ずストレプト
マイセス属に属する抗生物質KG―2245生産菌
を、抗生物質を生産する通常の方法で培養する。
培養の形態は、通常液体培養で行うが、工業的に
は深部通気撹拌培養を行うのが有利である。 培地としては、放線菌の培養に通常用いられる
ものが広く使用され得る。炭素源としては、同化
可能な炭素化合物であればよく、例えばブドウ
糖、シヨ糖、乳糖、麦芽類、スターチ、糖密等が
使用される。窒素源としては、利用可能な窒素化
合物であればよく、例えばコーン・スチープリカ
ー、大豆粉、綿実粉、小麦グルテン、ペプトン、
肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分解物、ア
ンモニウム塩、硝酸塩等が使用され、さらに必要
に応じてリン酸塩、マグネシユウム塩、カルシユ
ウム塩、カリウム塩、銅、亜鉛、鉄、マンガン、
等の塩類が使用される。培地のPHは通常6.8〜7.0
である。 培養温度は、菌が発育し、抗生物質KG―2245
を生産する範囲内で適宜変更し得るが、特に好ま
しいのは27〜30℃である。培養時間は条件により
異なるが、抗生物質KG―2245が最高収量に達す
る時間を見計つて適当な時間に培養を終了すれば
よい。通常は２〜７日程度である。 このようにして得られた抗生物質KG―2245生
産菌の培養物から抗生物質KG―2245を採取する
に際し、抗生物質KG―2245は、培養液又は遠
心上澄液に溶解していたり、また菌体と一諸に不
溶物となつていたりするので、抗生物質KG―
2245が脂溶性酸性物質であること、溶剤に対する
溶解性の特性、セフアデツクスLH―20、ダイヤ
イオンHP―20、並びにシリカゲルなどの担体に
対する特性などを利用して分離精製をおこなうの
が有利である。 抗生物質KG―2245を検知するには、バチル
ス・ズブチリスPCI―219を被験菌とする通常の
微生物検定法、300nmの特異な紫外部吸収を利用
する方法並びに２，４―ジニトロフエニルヒドラ
ゾンによる呈色反応などにより実施できる。 抗生物質KG―2245の分離精製手段の一例を示
せば、 先づ抗生物質KG―2245生産菌の培養物を、ド
ラムフイルターまたはプレスフイルターによる
過分離手段やバスケツト型遠心分離手段によつて
培養液又は遠心上澄液と菌体に分離する。 培養液又は遠心上澄液には酢酸エチル、クロ
ロホルム、塩化メチレンなどの脂溶性で水とは任
意の割合で混じり合わず且つ抗生物質KG―2245
を抽出しうる溶剤を加え、酸性条件下で抽出し、
一方、菌体にはメタノール、アセトンなどの親水
性でで水と任意の割合で混じり合い且つKG―
2245を抽出しうる溶剤を加え、酸性条件下で抽出
し、これらの抽出液を減圧下で溶剤を留去し、更
に濃縮し、得られる残査をメタノールに溶解し、
セフアデツクスLH―20を用いてゲル過し、活
性画分を硫酸処理シリカゲルに吸着させ、塩化メ
チレンで溶出する湿式クロマトグラフイーを行う
こにより抗生物質KG―2245を分離精製すること
ができる。 抗生物質KG―2245ナトリウム塩を単離する方
法は、KG―2245を含有する溶液、例えばメタノ
ール溶液にナトリウムメトキシド、酢酸ナトリウ
ムなどを過剰量加えることにより、結晶状のKG
―2245ナトリウム塩を採取することができる。 このKG―2245ナトリウム塩は塩酸、硫酸など
の希薄水溶液と混合処理して抗生物質KG―2245
に容易に変換できるので、KG―2245を含む粗製
品を一旦前記の処理方法によりKG―2245ナトリ
ウムとして単離したあと、酸処理によりKG―
2245の精製品を得ることができる。 薬学的に許容しうる非毒性塩として、その他に
カリウム塩、カルシウム塩並びにアルミニウム塩
などが同様にして採取できる。 次に本抗生物質KG―2245の生物学的性状につ
いて述べる。 (1) 抗菌スペクトル 寒天希釈法による各被検菌に対する最少阻止濃
度（MIC）μｇ／mlは第２表に示す通りである。 第 ２ 表 被験菌 MICμｇ／ml Staphylococcus aureus FDA―209P 3.1 Sarcina lutea ATTC 100I ＜0.4 Bacillus subtilis PCI―219 0.4 Escherichia coli NIHJ 200 Mycobacterium smegmatis 3.1 Pseudomonas aeruginosa 200 Xanthomonas oryzae 100 Candida albicans 100 Saccharomyces sake 200 Aspergillus niger 100 Trichopyton interdigitale 6.2 Piricularia oryzae 3.1 Alternaria lcikuchiana 6.2 Microsporum gypseum 12.5 (2) 急性毒性 LD50約400mg／Kg（マウス、腹腔内投与） LD50約1000mg／Kg以上（マウス、経口投与） (3) 制癌活性 ａ 実験方法 マウス白血病Ｐ―388細胞１×105個を
CDF1マウスの腹腔に移殖し、24時間後か
ら各３群に１回注射（Ａ群）、１日，５日
および９日後に注射（Ｂ群）および１日１
回連日９日間注射（Ｃ群）の腹腔内投与し
た。 エールリツヒ腹水癌細胞2.5×106個をdd系
マウスの腹腔に移殖し、24時間後から各３
群に前記と同じ期間投与した。 ｂ 効果判定 上記実験方法によるＰ―388およびエール
リツヒ腫瘍は、宿主の延命日数を観察し、次
式によつて治療効果を求めた。 治療群の中間延命日数（Ｔ）／無治療群の中間延
命日数(C)×100＝（Ｔ／Ｃ％） ｃ 治療効果 前記の式により求めた白血病Ｐ―388に対
する効果は第３表、エーリリツヒ腹水癌に対
する効果は第４表に示す。
【表】
【表】
次に、実施例を挙げて本抗生物質KG―2245の
製造を具体的に説明する。 実施例 １ ブドウ糖２％、大豆粕１％、ペプトン0.3％、
食塩0.3％、炭酸カルシウム0.3％、硝酸ナトリウ
ム0.2％、リン酸第二カリウム0.1％、塩化カリウ
ム0.05％、硫酸マグネシウム0.05％、0.01％硫酸
鉄を含む液体培養基（PH６、９）100mlを500ml容
三角フラスコに分注し、120℃、30分間蒸気滅菌
し、これにクレンスキー寒天培地上に28℃で10日
間培養しておいたストレプトマイセス・スピーシ
ーズNo.KG―2245株の一白金耳を接種し、28℃で
４日間振盪培養する。 上記と同じ組成の液体培養基150を200容醗
酵タンクに仕込み、蒸気滅菌した後、上記の種母
１を移殖し、毎分200回転の撹拌速度、毎分150
の通気速度で、28℃、54時間タンク培養してタ
ンク種母を得る。 一方、２Kl容ステンレス製醗酵タンクにブドウ
糖２％、大豆粕１％、食塩0.3％、炭酸カルシウ
ム0.3％、乾燥酵母0.3％を含む培養基（PH６、
５）を仕込み、蒸気滅菌した後、上記のタンク種
母130を移殖し、毎分200回転の撹拌速度、毎分
1500の通気速度の条件下28℃で148時間培養す
る。 得られた培養物1360を加圧過機により過
し、湿潤菌体212Kgと培養液1300を得る。菌
体部をメタノール1500と混合し、希塩酸でPH２
に調節した後、１時間撹拌する。菌体を別し、
メタノール溶液1700をダイヤイオンPH―20（三
菱化成社製）の塔（100）に通す。脱色した通
過液を減圧濃縮し、残渣をジイソプロピルエーテ
ルで処理して粗粉末171ｇを得る。培養物1360
の過処理によつて分離された培養液1300は
希塩酸によりPH２としたあと、酢酸ブチル650
を加え、30分間混合撹拌したあと分離機により水
層と酢酸ブチル層に分離する。酢酸ブチル層
（650L）を脱水処理したあと減圧濃縮し、濃縮液
をｎ―ヘキサンで処理して粗粉末6.3ｇを得る。
菌体から得られる粗粉末と培養液から得られる
粗粉末を混合し、この混合粉末150ｇに
0.05MEDTA溶液１を加え、１時間撹拌した
後、不溶物を過により集める。これを水１に
懸濁し、希塩酸でPH２に保ちながら30分間撹拌す
る。不溶物を取し、水洗後、乾燥して薄茶色粉
末69ｇを得る。 この粉末1.5ｇをメタノール200mlに溶かし、こ
れをセフアデツクスLH―20のカラム（1.7）に
負荷し、メタノールで溶出する。溶出した活性区
分を集め、減圧濃縮して結晶760mgを得る。この
結晶をメタノールから再結晶して板状晶の抗生物
質KG―2245を得る。収量450mgであつた。 実施例 ２ 実施例１で得た薄茶色粉末17ｇを熱メタノール
５に溶かし、これに44.3W／Ｖ％の２―エチル
ヘキサン酸ナトリウムのメチルイソブチルケトン
溶液20mlを加え、室温で１時間撹拌する。析出し
た結晶を取し、メタノールで洗浄後、乾燥して
白色結晶一次結晶1.2ｇを得る。母液をさらに、
約半量迄濃縮し、室温で３時間撹拌する。析出し
た結晶を取し、メタノールで洗浄後、乾燥して
白色結晶二次結晶10.4ｇを得る。両結晶を合し、
1N塩酸200mlに懸濁し、55℃で30分間撹拌する。
不溶物を取し、水洗後、乾燥して白色粉末を得
る。この粉末を熱メタノール５に溶かし、これ
にナトリウムメトキシド５ml（23mM）を加え、
約半量に減圧濃縮する。析出した結晶を取し、
メタノールで洗浄後、乾燥して針状晶の抗生物質
KG―2245のナトリウム塩７ｇを得る。 元素分析 計算値 〔C29H34NO5・Na・H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 66.98 7.33 2.53 計算値 67.27 7.01 2.71 UV；λMeOH nax300nm（Ｅ１％ 1cm900） IR；1620、1480、1450cm-1 実施例 ３ 実施例２で得たナトリウム塩5.5ｇを1N塩酸
100mlに懸濁し、50〜60℃、１時間撹拌する。不
溶物を取し、水洗後、乾燥して白色粉末4.68ｇ
を得る。この粉末を熱メタノールから再結晶して
板状晶の抗生物質KG―2245を得る。収量3.33ｇ
であつた。
製造を具体的に説明する。 実施例 １ ブドウ糖２％、大豆粕１％、ペプトン0.3％、
食塩0.3％、炭酸カルシウム0.3％、硝酸ナトリウ
ム0.2％、リン酸第二カリウム0.1％、塩化カリウ
ム0.05％、硫酸マグネシウム0.05％、0.01％硫酸
鉄を含む液体培養基（PH６、９）100mlを500ml容
三角フラスコに分注し、120℃、30分間蒸気滅菌
し、これにクレンスキー寒天培地上に28℃で10日
間培養しておいたストレプトマイセス・スピーシ
ーズNo.KG―2245株の一白金耳を接種し、28℃で
４日間振盪培養する。 上記と同じ組成の液体培養基150を200容醗
酵タンクに仕込み、蒸気滅菌した後、上記の種母
１を移殖し、毎分200回転の撹拌速度、毎分150
の通気速度で、28℃、54時間タンク培養してタ
ンク種母を得る。 一方、２Kl容ステンレス製醗酵タンクにブドウ
糖２％、大豆粕１％、食塩0.3％、炭酸カルシウ
ム0.3％、乾燥酵母0.3％を含む培養基（PH６、
５）を仕込み、蒸気滅菌した後、上記のタンク種
母130を移殖し、毎分200回転の撹拌速度、毎分
1500の通気速度の条件下28℃で148時間培養す
る。 得られた培養物1360を加圧過機により過
し、湿潤菌体212Kgと培養液1300を得る。菌
体部をメタノール1500と混合し、希塩酸でPH２
に調節した後、１時間撹拌する。菌体を別し、
メタノール溶液1700をダイヤイオンPH―20（三
菱化成社製）の塔（100）に通す。脱色した通
過液を減圧濃縮し、残渣をジイソプロピルエーテ
ルで処理して粗粉末171ｇを得る。培養物1360
の過処理によつて分離された培養液1300は
希塩酸によりPH２としたあと、酢酸ブチル650
を加え、30分間混合撹拌したあと分離機により水
層と酢酸ブチル層に分離する。酢酸ブチル層
（650L）を脱水処理したあと減圧濃縮し、濃縮液
をｎ―ヘキサンで処理して粗粉末6.3ｇを得る。
菌体から得られる粗粉末と培養液から得られる
粗粉末を混合し、この混合粉末150ｇに
0.05MEDTA溶液１を加え、１時間撹拌した
後、不溶物を過により集める。これを水１に
懸濁し、希塩酸でPH２に保ちながら30分間撹拌す
る。不溶物を取し、水洗後、乾燥して薄茶色粉
末69ｇを得る。 この粉末1.5ｇをメタノール200mlに溶かし、こ
れをセフアデツクスLH―20のカラム（1.7）に
負荷し、メタノールで溶出する。溶出した活性区
分を集め、減圧濃縮して結晶760mgを得る。この
結晶をメタノールから再結晶して板状晶の抗生物
質KG―2245を得る。収量450mgであつた。 実施例 ２ 実施例１で得た薄茶色粉末17ｇを熱メタノール
５に溶かし、これに44.3W／Ｖ％の２―エチル
ヘキサン酸ナトリウムのメチルイソブチルケトン
溶液20mlを加え、室温で１時間撹拌する。析出し
た結晶を取し、メタノールで洗浄後、乾燥して
白色結晶一次結晶1.2ｇを得る。母液をさらに、
約半量迄濃縮し、室温で３時間撹拌する。析出し
た結晶を取し、メタノールで洗浄後、乾燥して
白色結晶二次結晶10.4ｇを得る。両結晶を合し、
1N塩酸200mlに懸濁し、55℃で30分間撹拌する。
不溶物を取し、水洗後、乾燥して白色粉末を得
る。この粉末を熱メタノール５に溶かし、これ
にナトリウムメトキシド５ml（23mM）を加え、
約半量に減圧濃縮する。析出した結晶を取し、
メタノールで洗浄後、乾燥して針状晶の抗生物質
KG―2245のナトリウム塩７ｇを得る。 元素分析 計算値 〔C29H34NO5・Na・H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 66.98 7.33 2.53 計算値 67.27 7.01 2.71 UV；λMeOH nax300nm（Ｅ１％ 1cm900） IR；1620、1480、1450cm-1 実施例 ３ 実施例２で得たナトリウム塩5.5ｇを1N塩酸
100mlに懸濁し、50〜60℃、１時間撹拌する。不
溶物を取し、水洗後、乾燥して白色粉末4.68ｇ
を得る。この粉末を熱メタノールから再結晶して
板状晶の抗生物質KG―2245を得る。収量3.33ｇ
であつた。
第１図は抗生物質KG―2245物質の紫外部吸収
スペクトルを示し、第２図は抗生物質KG―2245
物質の赤外部吸収スペクトルを示すものである。
スペクトルを示し、第２図は抗生物質KG―2245
物質の赤外部吸収スペクトルを示すものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の理化学的性質を有する新規抗生物質KG
―2245又はその薬学的に許容しうる非毒性塩。 (a)分子式C29 H35 NO5 元素分析値：Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 72.33 7.35 2.83 計算値 72.58 7.47 2.80 （C29H35NO5として） (b)分子量：477（質量分析による） (c)結晶形：無色板状結晶（メタノールより） (d)融 点：243〜245℃（分解） (e)比旋光度〔α〕20 D：＋246゜（Ｃ＝0.5、ジメチルス
ルホキシド） (f)紫外部吸収スペクトル（メタノール中）：第１
図の通り。 (g)赤外部吸収スペクトル（KBr錠）：第２図の通
り。 (h)溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、
ジメチルホルムアミド、ピリジンに可溶、
メタノールに僅かに可溶、エタノール、ベ
ンゼン、アセトン、クロロホルム、酢酸エ
チル、水に不溶 (i)呈色反応：ライドン、スミス反応、ドラ―ゲン
ドルフ反応、塩化第二鉄反応、２，４―ジ
ニトロフエニルヒドラゾン反応に陽性、ニ
ンヒドリン反応、エールリツヒ反応、アニ
スアルデヒド―硫酸反応に陰性 (j)塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質 物質の色：無色板状結晶 ２ ストレプトマイセス属に属する抗生物質KG
―2245を生産する菌又はそのKG―2245生産性変
異菌を栄養源培地に培養し、その培養物より抗生
物質KG―2245を採取することを特徴とする新規
抗生物質KG―2245の製法。 ３ 抗生物質KG―2245生産菌がストレプトマイ
セス・スピーシーズNo.KG―2245である特許請求
の範囲第２項記載の製法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55143017A JPS5767593A (en) | 1980-10-15 | 1980-10-15 | Novel antibiotic kg-2245 and its preparation |
| US06/305,895 US4512976A (en) | 1980-10-15 | 1981-09-25 | Antibiotic stubomycin and process for the production thereof |
| DE3139131A DE3139131C2 (de) | 1980-10-15 | 1981-10-01 | Stubomycin-Antibiotikum und Verfahren zu seiner Herstellung |
| FR8119243A FR2491762A1 (fr) | 1980-10-15 | 1981-10-13 | Nouvel antibiotique appele stubomycine et sa production |
| GB8130939A GB2098592B (en) | 1980-10-15 | 1981-10-14 | Antibiotic stuboycin and production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55143017A JPS5767593A (en) | 1980-10-15 | 1980-10-15 | Novel antibiotic kg-2245 and its preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5767593A JPS5767593A (en) | 1982-04-24 |
| JPS6324517B2 true JPS6324517B2 (ja) | 1988-05-20 |
Family
ID=15328990
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55143017A Granted JPS5767593A (en) | 1980-10-15 | 1980-10-15 | Novel antibiotic kg-2245 and its preparation |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4512976A (ja) |
| JP (1) | JPS5767593A (ja) |
| DE (1) | DE3139131C2 (ja) |
| FR (1) | FR2491762A1 (ja) |
| GB (1) | GB2098592B (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2646707B2 (ja) * | 1987-10-26 | 1997-08-27 | 藤沢薬品工業株式会社 | 新規化合物ｗｆ２０１５ａおよびｂ、それらの製造法ならびにそれらを含有する組成物 |
| DE102007005735A1 (de) * | 2007-01-31 | 2008-08-14 | Dr. August Oetker Nahrungsmittel Kg | Verfahren und Vorrichtung zum Dekorieren oder Belegen eines Horizontalabschnitts einer flachen Backware |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4181715A (en) * | 1975-12-29 | 1980-01-01 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | Novel antibiotic substance SF-1540 and its derivative, and process for the production thereof |
| US4230692A (en) * | 1978-11-03 | 1980-10-28 | Ayerst Mckenna & Harrison, Inc. | Ravidomycin and process of preparation |
-
1980
- 1980-10-15 JP JP55143017A patent/JPS5767593A/ja active Granted
-
1981
- 1981-09-25 US US06/305,895 patent/US4512976A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-10-01 DE DE3139131A patent/DE3139131C2/de not_active Expired
- 1981-10-13 FR FR8119243A patent/FR2491762A1/fr active Granted
- 1981-10-14 GB GB8130939A patent/GB2098592B/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4512976A (en) | 1985-04-23 |
| DE3139131C2 (de) | 1984-11-08 |
| DE3139131A1 (de) | 1982-04-29 |
| GB2098592B (en) | 1984-08-01 |
| FR2491762B1 (ja) | 1985-05-03 |
| FR2491762A1 (fr) | 1982-04-16 |
| GB2098592A (en) | 1982-11-24 |
| JPS5767593A (en) | 1982-04-24 |
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