JPS6324893A - イソソルビト−ル・ジニトレ−トの選択的生物学的変換方法 - Google Patents
イソソルビト−ル・ジニトレ−トの選択的生物学的変換方法Info
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- JPS6324893A JPS6324893A JP62171375A JP17137587A JPS6324893A JP S6324893 A JPS6324893 A JP S6324893A JP 62171375 A JP62171375 A JP 62171375A JP 17137587 A JP17137587 A JP 17137587A JP S6324893 A JPS6324893 A JP S6324893A
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- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、イソソルビトール・ジニトレート（以下ＤＩ
ＮＩＳと称する）の硝酸エステル基を水酸基にする選択
的生物学的変換に関する。
ＮＩＳと称する）の硝酸エステル基を水酸基にする選択
的生物学的変換に関する。
イソソルビトールの２つのモノニトレート（以下ＭＯＮ
Ｉ Ｓと称する）の間には区別がある。水酸基がエキ
ソ配位（ｅｘｏ ｐｏｓｉｔｉｏｎ ）であれば、その
化合物はＭＯＮ Ｉ Ｓ−５と称され、エンド配位（ｅ
ｎｄｏ ｐｏｓｉｔｉｏｎ）であればＭＯ’Ｎ’１Ｓ−
２と称される。
Ｉ Ｓと称する）の間には区別がある。水酸基がエキ
ソ配位（ｅｘｏ ｐｏｓｉｔｉｏｎ ）であれば、その
化合物はＭＯＮ Ｉ Ｓ−５と称され、エンド配位（ｅ
ｎｄｏ ｐｏｓｉｔｉｏｎ）であればＭＯ’Ｎ’１Ｓ−
２と称される。
ＭＯＮ Ｉ Ｓは、ＤＩＮＩＳおよびニトログリセリン
風の冠動脈抗張剤として知られている。
風の冠動脈抗張剤として知られている。
ＭＯＮ Ｉ Ｓは現在のところ欠点のある方法で製造さ
れている。
れている。
イソソルビトールのニトロ化による合成は、ＨＮＯ，−
無水酢酸−酢酸のニトロ化混合物の使用を必要とするが
、それはニトログリセリンよりもより敏感な爆発性があ
ると考えられるアセチル・ニトレートの生成の可能性が
ある。
無水酢酸−酢酸のニトロ化混合物の使用を必要とするが
、それはニトログリセリンよりもより敏感な爆発性があ
ると考えられるアセチル・ニトレートの生成の可能性が
ある。
他の合成方法としては、イソソルビトールのアセテート
を調製し、それをニトロ化する方法があるが、これも、
また爆発の危険性があり、工程は長く、収率は低い。
を調製し、それをニトロ化する方法があるが、これも、
また爆発の危険性があり、工程は長く、収率は低い。
新しい方蓮は、この型の化合物の製造に危険性を限定す
るこを可能にしたが、しかし、安全性および／または収
率の点から完全に満足されるものではなかった（フラン
ス特許２５００８３５号参照）。
るこを可能にしたが、しかし、安全性および／または収
率の点から完全に満足されるものではなかった（フラン
ス特許２５００８３５号参照）。
それ故、生物学的変換を用いるこれら化合物の温和な技
術での製造に興味がもたれるのである。
術での製造に興味がもたれるのである。
本発明の方法は、さらに詳しくはＤＩＮＩＳのＭＯＮＩ
Ｓ−５への選択的生物学的変換を意図するものであり、
グルタチオン・トランスフェラーゼを有する少なくとも
一つの微生物を含む培地、またはそのような微生物の細
胞抽出物、好ましくは該微生物の培地中にＤＩＮＩＳを
添加することを特徴とするものである。
Ｓ−５への選択的生物学的変換を意図するものであり、
グルタチオン・トランスフェラーゼを有する少なくとも
一つの微生物を含む培地、またはそのような微生物の細
胞抽出物、好ましくは該微生物の培地中にＤＩＮＩＳを
添加することを特徴とするものである。
本発明において使用される微生物としては、特に原生動
物（ｐｒｏｔｏｚｏａ ） 、真菌（ｆｕｎｇｉ ）お
よび細菌（ｂａｃｔｅｒｉａ ）があげられる。更に詳
しくは、原生動物としては、テトラヒメ （Ｔｅｔｒａ
ｈｙｍｅｎａ ）があげられ、真菌としてはボウベリア
（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、アスペルギルス、ストレプト
ミセスおよびカニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｎ＋ｅ
ｌｌａ ）があげられる。
物（ｐｒｏｔｏｚｏａ ） 、真菌（ｆｕｎｇｉ ）お
よび細菌（ｂａｃｔｅｒｉａ ）があげられる。更に詳
しくは、原生動物としては、テトラヒメ （Ｔｅｔｒａ
ｈｙｍｅｎａ ）があげられ、真菌としてはボウベリア
（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、アスペルギルス、ストレプト
ミセスおよびカニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｎ＋ｅ
ｌｌａ ）があげられる。
Ｄ Ｉ Ｎ Ｉ Ｓ’を含む培地中で、これらの微生′
ＰＡ醗酵をおこさせると、ＭＯＮＩＳが生成され、ＭＯ
ＮＩＳ−２に比べＭＯＮＩＳ−５が多（生成する。
ＰＡ醗酵をおこさせると、ＭＯＮＩＳが生成され、ＭＯ
ＮＩＳ−２に比べＭＯＮＩＳ−５が多（生成する。
Ｄ Ｉ Ｎ Ｉ Ｓの生物学的変換は、微生物細胞を含
む培地でのみ行われるが、この変換は培養培地中で行う
のが好ましい。この培地は、好ましくは、グルコース５
〜２０ｇ／ｌ、酵母エキスを含む最小培地中であり、生
物学的変換は２０ないし３０°Ｃの温度、中性付近のｐ
Ｈで行われる。
む培地でのみ行われるが、この変換は培養培地中で行う
のが好ましい。この培地は、好ましくは、グルコース５
〜２０ｇ／ｌ、酵母エキスを含む最小培地中であり、生
物学的変換は２０ないし３０°Ｃの温度、中性付近のｐ
Ｈで行われる。
実験によると、アミノ酸を培地に添加するとＭ’０ＮＩ
Ｓ−５の収量が明確に上昇することが示された。
Ｓ−５の収量が明確に上昇することが示された。
上記の条件ではＤＩＮＩＳの濃度は、１ないし５ｇ／ｌ
が利用可能である。
が利用可能である。
更に加わうるに、真菌を用いる場合には、既に培養経過
した菌体を使用することにより、高い生物学的変換率が
得られる。勿論、生育中の培地を使用するときには培地
に空気を供給することが必要である。
した菌体を使用することにより、高い生物学的変換率が
得られる。勿論、生育中の培地を使用するときには培地
に空気を供給することが必要である。
既に示したように、生育培地でない培地中での菌体の使
用も可能であり、ある場合には部分的に細胞の形態から
はなれた抽出物を使用することも可能であり、それによ
り次の分離操作が容易になる。
用も可能であり、ある場合には部分的に細胞の形態から
はなれた抽出物を使用することも可能であり、それによ
り次の分離操作が容易になる。
ある場合には、微生物は固定化形態、例えば担体に吸着
させたり、ポリマー、例えば寒天にカプセル化して使用
することもできる。
させたり、ポリマー、例えば寒天にカプセル化して使用
することもできる。
この生物学的変換を実施する条件で、この種の産物の取
り扱いに付随する、ある種の危険を避けることが可能と
なり、得られるＭＯＮＩＳ−５の収量は相当なものであ
り、それは以下の実施例から明らかにされるであろう。
り扱いに付随する、ある種の危険を避けることが可能と
なり、得られるＭＯＮＩＳ−５の収量は相当なものであ
り、それは以下の実施例から明らかにされるであろう。
本発明において、出発物質として使用されるＤＩＮＩＳ
は爆発性の物質であるが、しかし、この物質は、しめら
せるか、溶媒をしみ込ませるか、あるいは溶液にするこ
とで、安全に取り扱うことが可能である。
は爆発性の物質であるが、しかし、この物質は、しめら
せるか、溶媒をしみ込ませるか、あるいは溶液にするこ
とで、安全に取り扱うことが可能である。
以下の実施例は、本発明のその他の利点と特徴を示すた
めのものである。
めのものである。
泣聚換
寒天斜面培地中、２４℃にてポテト寒天（１゜Ｐ、 Ｐ
、 ）上で前培養を行゛った。次いで、２５０ｍ１容三
角フラスコ中、大豆粉（５ｏｙａ ｆｌｏｕｒ ）液体
培地５０ｎｌで振とう培養（１８０ｒｐｍ）を２４℃で
行った。接種は平均密度３Ｘ１０’胞子／ｍｌの胞子懸
濁液０．５〜１ｍｌを添加して行った。培養４４時間の
後、検査してからＤＩＮＩｓを培地中または０．０５Ｍ
リン酸緩衝液ｐＨ７の菌体懸濁液中に加え、２４℃にて
必要な時間インキュベートした。
、 ）上で前培養を行゛った。次いで、２５０ｍ１容三
角フラスコ中、大豆粉（５ｏｙａ ｆｌｏｕｒ ）液体
培地５０ｎｌで振とう培養（１８０ｒｐｍ）を２４℃で
行った。接種は平均密度３Ｘ１０’胞子／ｍｌの胞子懸
濁液０．５〜１ｍｌを添加して行った。培養４４時間の
後、検査してからＤＩＮＩｓを培地中または０．０５Ｍ
リン酸緩衝液ｐＨ７の菌体懸濁液中に加え、２４℃にて
必要な時間インキュベートした。
種々の生物学的変換条件を検討した。即ち（ａｌ 培
地中でのインキュベーション、ＤＩＮＩＳをメタノール
溶液（５０＊／ｍｌ）で１ ｇ ／ １の割合に加える
。
地中でのインキュベーション、ＤＩＮＩＳをメタノール
溶液（５０＊／ｍｌ）で１ ｇ ／ １の割合に加える
。
（ｂ）０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７中でのインキュ
ベーション、ＤＩＮＩＳをメタノール溶液（５０■／ｍ
ｌ）でＩｇ／ｊｔの割合に加える。
ベーション、ＤＩＮＩＳをメタノール溶液（５０■／ｍ
ｌ）でＩｇ／ｊｔの割合に加える。
（Ｃ）０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７中でのインキュ
ベーション、ＤＩＮＩＳを粉末で１ｇ／ｌの割合に加え
る。
ベーション、ＤＩＮＩＳを粉末で１ｇ／ｌの割合に加え
る。
生物学的変換中に時間を追ってＭＯＮｒＳ−５とＭＯＮ
ＩＳ−２の生成量を、ｃｒＢｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ−１
８のカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
Ｌ Ｃ”）で分析した。
ＩＳ−２の生成量を、ｃｒＢｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ−１
８のカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
Ｌ Ｃ”）で分析した。
結果は第１表にＣ，ｅｃｈ、を用いた場合、第２表にＣ
，ｅｌを用いた場合を示す。
，ｅｌを用いた場合を示す。
（ａ） 培地中でのインキュベーション；ＤＩＮＩＳ
１ｇ／ｌ、メタノール溶液（５０ｍｇ／ｍｅ）にて添加
；４４時間培養、菌体量；７３ｇ／ｊ２：時間 ＤＩ
ＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩＳ−５（ｍｇ
ムｅ＞ （ｍｇ／Ｊ） （ｍｇ／ ｆ）３３
４４５ ７：３ １８６（ｂ）０．０
５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７中でのインキュベーションＨ
ＤＩＮＩ３１ｇ／ｌメタノール溶液（５０ｍｇ／β）に
て添加；４４時間培養；菌体量；８０ｇ／ｊ！： 時間 ＤＩＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩ
Ｓ−５（ｍｇムｉり （ｍｇ／ｊ’）
（ｍｇ／ ｆ）（Ｃ）０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ
７中でのインキュベーション；ＤＩＮＩＳ１ｇ／１１粉
末にて添加；４４時間培養；菌体量：１０１ｇ／ｌ ： 時間 ＤＩＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩ
Ｓ−５（ｍｇ／ｊ２） （ｌｌ１ｇ＃り （
ｍｇ／ Ｊ）３３ ５１０ ４．８ １
０１４６ ４８０ ．５６ １３
６ＤＩＮＩＳ初ｊ’Ａ ？Ｍｒ度：ＤｒＮｉＳ、ＭＯＮ
ＩＳ−２およびＭＯＮＩＳ−５の濃度は、補正していな
い（１０〜１５％程度の蒸散は考慮せねばならない）。
１ｇ／ｌ、メタノール溶液（５０ｍｇ／ｍｅ）にて添加
；４４時間培養、菌体量；７３ｇ／ｊ２：時間 ＤＩ
ＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩＳ−５（ｍｇ
ムｅ＞ （ｍｇ／Ｊ） （ｍｇ／ ｆ）３３
４４５ ７：３ １８６（ｂ）０．０
５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７中でのインキュベーションＨ
ＤＩＮＩ３１ｇ／ｌメタノール溶液（５０ｍｇ／β）に
て添加；４４時間培養；菌体量；８０ｇ／ｊ！： 時間 ＤＩＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩ
Ｓ−５（ｍｇムｉり （ｍｇ／ｊ’）
（ｍｇ／ ｆ）（Ｃ）０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ
７中でのインキュベーション；ＤＩＮＩＳ１ｇ／１１粉
末にて添加；４４時間培養；菌体量：１０１ｇ／ｌ ： 時間 ＤＩＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩ
Ｓ−５（ｍｇ／ｊ２） （ｌｌ１ｇ＃り （
ｍｇ／ Ｊ）３３ ５１０ ４．８ １
０１４６ ４８０ ．５６ １３
６ＤＩＮＩＳ初ｊ’Ａ ？Ｍｒ度：ＤｒＮｉＳ、ＭＯＮ
ＩＳ−２およびＭＯＮＩＳ−５の濃度は、補正していな
い（１０〜１５％程度の蒸散は考慮せねばならない）。
ｆａ） 培地中でのインキュベーション；ＤＩＮＩＳ
１ｇ／ｌ、メタノール溶液（５０ｍ ｇ ／ ｍ Ｉ！
）にて添加；４４時間培養；菌体量：１３ｇ／ＩＩ；
時間 Ｄ［ＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯ［Ｓ
−５−５（／ＩＩ＞ Ｃｍｇ八ｇへ （ｍｇ
／ｊ）１２０ １４．５ １７０
１８８山）０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７中でのイン
キュベーション、ＤＩＮＩ３１ｇ／ｊ２、メタノール溶
液（５０ｍｇ／ｍＡりにて添加；４４時間培養；菌体量
：８０ｇ／（１： 時間 ＤＩＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩ
Ｓ−５（ｍｇムｅ＞ （ｍｇ／Ｊ） 、 （ｍ
ｇ／ Ｊ）４ ６３１ １３ 、
２３ＤＩＮＩＳ初期濃度： Ｄ Ｉ Ｎ Ｉ Ｓ 、、
Ｍ ＯＮ Ｉ Ｓ−２およびＭＯＮ？Ｓ−５の濃度は、
補正していない（１０〜１５％程度の蒸散は考慮せねば
ならない）。
１ｇ／ｌ、メタノール溶液（５０ｍ ｇ ／ ｍ Ｉ！
）にて添加；４４時間培養；菌体量：１３ｇ／ＩＩ；
時間 Ｄ［ＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯ［Ｓ
−５−５（／ＩＩ＞ Ｃｍｇ八ｇへ （ｍｇ
／ｊ）１２０ １４．５ １７０
１８８山）０．０５Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７中でのイン
キュベーション、ＤＩＮＩ３１ｇ／ｊ２、メタノール溶
液（５０ｍｇ／ｍＡりにて添加；４４時間培養；菌体量
：８０ｇ／（１： 時間 ＤＩＮＩＳ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩ
Ｓ−５（ｍｇムｅ＞ （ｍｇ／Ｊ） 、 （ｍ
ｇ／ Ｊ）４ ６３１ １３ 、
２３ＤＩＮＩＳ初期濃度： Ｄ Ｉ Ｎ Ｉ Ｓ 、、
Ｍ ＯＮ Ｉ Ｓ−２およびＭＯＮ？Ｓ−５の濃度は、
補正していない（１０〜１５％程度の蒸散は考慮せねば
ならない）。
■、二つの菌株Ｃ，ｅｃｈ、およびＣ０ｅｌはＤＩＮＩ
ＳをＭＯＮＩＳ−５およびＭＯＮＩ Ｓ−２に変換する
。
ＳをＭＯＮＩＳ−５およびＭＯＮＩ Ｓ−２に変換する
。
２、菌株Ｃ，ｅｃｈ、を培地中７３時間インキュベート
したときに最大転換率が得られた。培養時間を延長する
と、総収量（ＤＩＮＩＳ＋ＭＯＮＩ Ｓ−５＋ＭＯＮ
Ｉ ５−２）の低下が見られ、モノニドラード誘導体の
イソソルバイトへ引き続いての変換が明らかであった。
したときに最大転換率が得られた。培養時間を延長する
と、総収量（ＤＩＮＩＳ＋ＭＯＮＩ Ｓ−５＋ＭＯＮ
Ｉ ５−２）の低下が見られ、モノニドラード誘導体の
イソソルバイトへ引き続いての変換が明らかであった。
前記のような条件下で、ＤＩＮＩＳＳＭＯＮＩＳ−５、
ＭＯＮＩＳ−２（７）混合物が総収量５８％で得られた
。モノニドラード誘導体がＭＯＮ Ｉ Ｓ−５，３３％
、ＭＯＮＩＳ−２約１３％の割合で生成したく収率はＤ
ＩＮＩＳの消費量から計算した）即ち、比率は： ＭＯＮＩＳ−５ ＝２． ６ ＭｏＮＩＳ−２ 変換率を改善するために、ＤＩＮＩＳを５００■／βに
減らして試験した。結果は、第３表に示す。
ＭＯＮＩＳ−２（７）混合物が総収量５８％で得られた
。モノニドラード誘導体がＭＯＮ Ｉ Ｓ−５，３３％
、ＭＯＮＩＳ−２約１３％の割合で生成したく収率はＤ
ＩＮＩＳの消費量から計算した）即ち、比率は： ＭＯＮＩＳ−５ ＝２． ６ ＭｏＮＩＳ−２ 変換率を改善するために、ＤＩＮＩＳを５００■／βに
減らして試験した。結果は、第３表に示す。
時間 ＤＩＮＩＳ 門０ＮＩＳ−５１’ｌ
０ＮＩＳ−２（ｍｇ／Ａ） ＊ （ｍｇムｅ） ＊
（ｍｇ／ｊ２） ＊試験 １１０？ ２１６ ９５ Ｄ ＩＮ Ｉ Ｓ ５００ｍｇ／ＩＩ、メタノール（５
０ｍｇ／ｍｚ）にて培地中に添加；４４時間培養；平均
菌体量；７８ｇ／Ｊ： ＊ＤＩＮＩＳ、ＭＯＮＩＳ−５およびＭＯＮＩＳ−２の
濃度は補正していない。（１０〜１５％程度の蒸散は考
慮しなければならない）。
０ＮＩＳ−２（ｍｇ／Ａ） ＊ （ｍｇムｅ） ＊
（ｍｇ／ｊ２） ＊試験 １１０？ ２１６ ９５ Ｄ ＩＮ Ｉ Ｓ ５００ｍｇ／ＩＩ、メタノール（５
０ｍｇ／ｍｚ）にて培地中に添加；４４時間培養；平均
菌体量；７８ｇ／Ｊ： ＊ＤＩＮＩＳ、ＭＯＮＩＳ−５およびＭＯＮＩＳ−２の
濃度は補正していない。（１０〜１５％程度の蒸散は考
慮しなければならない）。
上記の条件下で、インキュベーション時間を６３から９
３時間変化させると、混合物（Ｄ Ｉ Ｎ ＩＳ ＋Ｍ
ＯＮ Ｉ Ｓ −５＋ＭＯＮ Ｉ Ｓ −２）が総収量
８０〜９０％で得ることが可能である。モノニドラード
誘導体ＭＯＮＩＳ−５、ＭＯＮＩＳ−２はそれぞれ５０
および２２％の収率で得られた。
３時間変化させると、混合物（Ｄ Ｉ Ｎ ＩＳ ＋Ｍ
ＯＮ Ｉ Ｓ −５＋ＭＯＮ Ｉ Ｓ −２）が総収量
８０〜９０％で得ることが可能である。モノニドラード
誘導体ＭＯＮＩＳ−５、ＭＯＮＩＳ−２はそれぞれ５０
および２２％の収率で得られた。
（消費されたＤＩ？ｌＳの量から計算）。
菌株Ｃ９ｅｃｈ、は、ＭＯＮＩＳ−５を優先的に生成す
るが、これに対して菌株Ｃ０ｅｌは、ＤＩＮＩＳを異性
体２に変換する。
るが、これに対して菌株Ｃ０ｅｌは、ＤＩＮＩＳを異性
体２に変換する。
以上の結果から、同じフィコミセーテス（Ｐｈｙｃｏｍ
ｙｓｅｔｅｓ ）の科でも菌株が異なると、種々の割合
でＤＩＮＩｓをソノ異性体ＭＯＮＩＳ−５およびＭＯＮ
ＩＳ−２に変換する酵素を含み得ることが示された。
ｙｓｅｔｅｓ ）の科でも菌株が異なると、種々の割合
でＤＩＮＩｓをソノ異性体ＭＯＮＩＳ−５およびＭＯＮ
ＩＳ−２に変換する酵素を含み得ることが示された。
実崖斑−主 力ニンガメラ・エキヌラタの変処ユニ
Ｃ０ｅｃｈ、の胞子を５％アジリジン致死溶液で４分間
処理して、寒天培地上で７２時間インキュベーションの
後に検出できる突然変異体の生成がみられた。
処理して、寒天培地上で７２時間インキュベーションの
後に検出できる突然変異体の生成がみられた。
ヌあｊＪｌ記１色佳：
前培養斜面培地２本からとったＣ、ｅｃｈ、の胞子を水
８ｍｌ（４ｍｌｌ／試験管）で洗浄し、水４．７５ｍ１
中に再懸濁し、アジリジン０．２５ｍ１を加えた（Ｈ終
濃度５％）。
８ｍｌ（４ｍｌｌ／試験管）で洗浄し、水４．７５ｍ１
中に再懸濁し、アジリジン０．２５ｍ１を加えた（Ｈ終
濃度５％）。
４分後、試料（０，５ｍβ）を取り、希釈した（１０”
、１０’、１０’倍）。そしてポテト寒天のシャーレに
０．２ｍβ／皿の割合で接種した。
、１０’、１０’倍）。そしてポテト寒天のシャーレに
０．２ｍβ／皿の割合で接種した。
得られた結果は、以下で表す。
１、処理前の胞子溶液の濃度は、２Ｘ１０’胞子／ｍβ
であり、処理後は３Ｘ１０’胞子／ ｍ １（１，５％
）であった。
であり、処理後は３Ｘ１０’胞子／ ｍ １（１，５％
）であった。
２．７２時間培養後の変異株の分離の可能性。
ＤＩＮＩＳの生物学的変換に有効な分離変異株の効果は
、通常の条件下で液体培地中で評価した。
、通常の条件下で液体培地中で評価した。
猜果
１５変異株が分離された斜面培地で培養した。
変異株は、Ｃ，ｅｃｈ、のために選んだ条件（４４時間
培養菌体）でＤＩＮＩＳを生物学的変換する能力で評価
した。生物学的変換は４８時間インキュベーションの後
に評価した。
培養菌体）でＤＩＮＩＳを生物学的変換する能力で評価
した。生物学的変換は４８時間インキュベーションの後
に評価した。
結果は以下の通りであった。
１、変換処理によって、ＭＯＮＩＳ−２とＭＯＮＩＳ−
５の生物学的変換の割合は、菌株によって変化する可能
性があり、その比ＭＯＮ ｒ Ｓ−５／ Ｍ ＯＮ Ｉ
Ｓ −２は、２．０７から２．９１の間で生物学的変
換に対する酵素の比により変化した。
５の生物学的変換の割合は、菌株によって変化する可能
性があり、その比ＭＯＮ ｒ Ｓ−５／ Ｍ ＯＮ Ｉ
Ｓ −２は、２．０７から２．９１の間で生物学的変
換に対する酵素の比により変化した。
２、変異株２株が親株より効率的であり、ＤＩＮＩＳか
らＭＯＮＩＳ−５への変換が優勢で得られた、１変異株
は異性体２が優勢であった。
らＭＯＮＩＳ−５への変換が優勢で得られた、１変異株
は異性体２が優勢であった。
３、変異株２株は、定量的な総収量（Ｄ Ｉ Ｎ ＩＳ
＋ＭＯＮＩＳ−５＋ＭＯＮＩＳ−２）”ｉｌ？生物学的
変換を行うことができた。
＋ＭＯＮＩＳ−５＋ＭＯＮＩＳ−２）”ｉｌ？生物学的
変換を行うことができた。
下記に示す種々の真菌で以下の実験を行った。
ボウベリア・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓ
ｉａｎａ）ＡＴＣＣ７１５９ アスペルギルス・オクラセウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓｏｃｈｒａｃｅｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１８５００アス
ペルギルス・フエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌ １ｕｓ
ｆｏｅｔｉｄｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１０２５４アスペル
ギルス・アリケウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓａｌｌｉ
ｃａｅｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１００６０アスペルギルス
・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）ＡＴ
ＣＣ９１４２ ストレプトミセス・ツー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
Ｔｕ ）ストレプトミセス・イン力ルナタス（Ｓ Ｌｒ
ｅｐ ｔｏｍｙｃｅｓ １ｎｃａｒｎａｔｕｓ） 実施例１のＣ０ｅｃｈ、の条件で予備実験を行った。
ｉａｎａ）ＡＴＣＣ７１５９ アスペルギルス・オクラセウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓｏｃｈｒａｃｅｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１８５００アス
ペルギルス・フエティダス（Ａｓｐｅｒｇｉｌ １ｕｓ
ｆｏｅｔｉｄｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１０２５４アスペル
ギルス・アリケウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓａｌｌｉ
ｃａｅｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１００６０アスペルギルス
・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）ＡＴ
ＣＣ９１４２ ストレプトミセス・ツー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
Ｔｕ ）ストレプトミセス・イン力ルナタス（Ｓ Ｌｒ
ｅｐ ｔｏｍｙｃｅｓ １ｎｃａｒｎａｔｕｓ） 実施例１のＣ０ｅｃｈ、の条件で予備実験を行った。
前培養をポテト寒天斜面培地で行った。培養菌は、大豆
粉液体培地で４８時間生育させた。ＤＩＮ Ｉ Ｓを培
地に添加（５００ｍｌ／ｊり シ、４４および６８時間
インキュベートした。生物学的変換率はＨＰＬＣで測定
して求めた。
粉液体培地で４８時間生育させた。ＤＩＮ Ｉ Ｓを培
地に添加（５００ｍｌ／ｊり シ、４４および６８時間
インキュベートした。生物学的変換率はＨＰＬＣで測定
して求めた。
結果は、第４表に示すが：
１６試験した全ての菌株は、ＤＩＮＩＳのＭＯＮＩＳ５
およびＭＯＮＩＳ−２への変換を種々の比、種々の速度
で、実現した。
およびＭＯＮＩＳ−２への変換を種々の比、種々の速度
で、実現した。
２、ポウベリア・バシアナＡＴＣＣ７１５９株が顕著で
あった。同菌株は、４８時間のインキュベーシヨンで、
完全に定量的にＤＩＮＩＳからＭＯＮＩＳ−５およびＭ
ＯＮＩ Ｓ−２へ（７）変換を行った。収率はそれぞれ
８５％および１５％であった。
あった。同菌株は、４８時間のインキュベーシヨンで、
完全に定量的にＤＩＮＩＳからＭＯＮＩＳ−５およびＭ
ＯＮＩ Ｓ−２へ（７）変換を行った。収率はそれぞれ
８５％および１５％であった。
第４表 種々の 菌によるＤＩＮＴＳの生物学的物質の
量 菌 インキュベ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩＳ−５Ｄ
ＩＮＩＳ株 −ジョンの 時間 ボウベリア ・バシアナ ４４ ４６ ２５２ １１０ＡＴＣ
Ｃ７１５９６８６６３６１０ アスペルギル ス・フエティ ４４ １８ ３１ ４３０ダスＡ
ＴＣＣ１０２５４６８２３３８４２５アスペルギル ス・アリケウス４４ ６０ ７１ ２８６ＡＴＣ
Ｃ１００６０６８６１９７２１２アスペルギル ス・ニガー ４４ ０ ４３ ３８３ＡＴＣ
Ｃ９１４２６８１０５８３７７ アスペルギルス ・オクラセウ ４４ ０ ２７ ３９６スＡＴ
ＣＣ１８５００６８０３８３７３ストレプトミ ４４
０ ２１ ４９７セス・ツー９６６８
２８ ４７ ４１３ストレプトミ セス・イス力 ４４ ２０ ７０ ４００ルナタ
ス ６８ ５３ １００ ３６０ＤＩＮＩＳ（
５００■／ｍｌ）は、４８時間菌体生育後に添加した。
量 菌 インキュベ ＭＯＮＩＳ−２ＭＯＮＩＳ−５Ｄ
ＩＮＩＳ株 −ジョンの 時間 ボウベリア ・バシアナ ４４ ４６ ２５２ １１０ＡＴＣ
Ｃ７１５９６８６６３６１０ アスペルギル ス・フエティ ４４ １８ ３１ ４３０ダスＡ
ＴＣＣ１０２５４６８２３３８４２５アスペルギル ス・アリケウス４４ ６０ ７１ ２８６ＡＴＣ
Ｃ１００６０６８６１９７２１２アスペルギル ス・ニガー ４４ ０ ４３ ３８３ＡＴＣ
Ｃ９１４２６８１０５８３７７ アスペルギルス ・オクラセウ ４４ ０ ２７ ３９６スＡＴ
ＣＣ１８５００６８０３８３７３ストレプトミ ４４
０ ２１ ４９７セス・ツー９６６８
２８ ４７ ４１３ストレプトミ セス・イス力 ４４ ２０ ７０ ４００ルナタ
ス ６８ ５３ １００ ３６０ＤＩＮＩＳ（
５００■／ｍｌ）は、４８時間菌体生育後に添加した。
収量はＤＩＮＩＳ （分子量２３６）からＭＯＮ Ｉ
Ｓ （分子量１９１）への変換中のＮＯ□基の減少で以
って測定した。
Ｓ （分子量１９１）への変換中のＮＯ□基の減少で以
って測定した。
培養条件
１．１）且境ｌ
前培養は、必要に応じて二種類培地で寒天斜面で６日間
２４℃で行った。
２４℃で行った。
（ａ） ポテト寒天（１，Ｐ、Ｐ、）；（ｂ）Ｍ、培
地ＨＢａｃｔｏ酵母エキス４ｇ、Ｂａｃｔｏモルトエキ
ス１０ｇ。
地ＨＢａｃｔｏ酵母エキス４ｇ、Ｂａｃｔｏモルトエキ
ス１０ｇ。
Ｂａｃｔｏデキストロース４ｇ。
水１１当たり寒天２０ｇ、
ｐＨ７、
（Ｅ、Ｂ、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ ａｎｄ Ｄ、 Ｇｏｔｔ
ｌｉｅｂ （Ｉｎｔｅｒｎ。
ｌｉｅｂ （Ｉｎｔｅｒｎ。
Ｊ、 ５ｙｓｔ、 Ｂａｃｔ、 １６ ．３１３−３４
０．１９６６による〕Ｍ２培地の方が胞子形成は良好で
あった。
０．１９６６による〕Ｍ２培地の方が胞子形成は良好で
あった。
１．２）筆墨
Ｂ、ｂａｓｓｉａｎａ （以下Ｂ、ｂ、と称す）の培養
は、大豆粉液体培地で行った（ Ｒ，Ｅ、 Ｂｅｔｔｓ
、 Ｄ、Ｅ、 Ｗａｌｔｅｒｓ＋ Ｊ、 Ｐ、 Ｒｏｓ
ｓａｚａ ％ Ｊ、 Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ、 １７
、５９７−６０２ （１９７４’）による〕培地組成：
大豆粉５ｇ、グルコース２０ｇ、酵母エキス５ｇ、、Ｎ
ａＣｌ！５ｇＸＫ２ＨＰ０４５ｇ１金属塩； Ｆｅ＋２
０．１ｍｇ／ｌ、Ｚｎ＋” ０゜１ｍｇ／ｌ、Ｍｏ ＋
２ ｏ、０１ ｍｇ／１２、ＣＬＩ＋２０゜０２ｍｇ
／ｊ２、Ｍｎ＋” ０．０１ｍｇ／ｌ、水、ｐＨ７゜
・ 培地５Ｑｍｊ！に寒天斜面培地から採取し、６ｍｌの蒸
溜水で取り上げた胞子懸濁液（５０００００〜３０ｏｏ
ｏｏ胞子ｉｍｌ＞０．５ないし１ｍｌを接種した。
は、大豆粉液体培地で行った（ Ｒ，Ｅ、 Ｂｅｔｔｓ
、 Ｄ、Ｅ、 Ｗａｌｔｅｒｓ＋ Ｊ、 Ｐ、 Ｒｏｓ
ｓａｚａ ％ Ｊ、 Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ、 １７
、５９７−６０２ （１９７４’）による〕培地組成：
大豆粉５ｇ、グルコース２０ｇ、酵母エキス５ｇ、、Ｎ
ａＣｌ！５ｇＸＫ２ＨＰ０４５ｇ１金属塩； Ｆｅ＋２
０．１ｍｇ／ｌ、Ｚｎ＋” ０゜１ｍｇ／ｌ、Ｍｏ ＋
２ ｏ、０１ ｍｇ／１２、ＣＬＩ＋２０゜０２ｍｇ
／ｊ２、Ｍｎ＋” ０．０１ｍｇ／ｌ、水、ｐＨ７゜
・ 培地５Ｑｍｊ！に寒天斜面培地から採取し、６ｍｌの蒸
溜水で取り上げた胞子懸濁液（５０００００〜３０ｏｏ
ｏｏ胞子ｉｍｌ＞０．５ないし１ｍｌを接種した。
２５０ｍｊ！容三角フラスコ中で２４℃、１８０ｒｐｍ
回転振とう器で培養した。
回転振とう器で培養した。
２）生 ′・ ・換 のノ） ：
ＤＩＮＩＳ、ＭＯＮＩＳ−５、ＭＯＮＩＳ−２の相対濃
度は、ＨＰＬＣで測定した。分析は、Ｗａ ｔｅｒｓの
装置（Ｐｙｅ ｌＪｎｉｃａｍのＵ、Ｖ、検出器付）で
Ｗａ ｔｅｒｓのインチグレーターを用いて行った。
度は、ＨＰＬＣで測定した。分析は、Ｗａ ｔｅｒｓの
装置（Ｐｙｅ ｌＪｎｉｃａｍのＵ、Ｖ、検出器付）で
Ｗａ ｔｅｒｓのインチグレーターを用いて行った。
・、ｃｒＢｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ１８（１０μｍ−４Ｘ
２５０璽Ｎ）カラム 一？容媒 Ｍ ｅ ＯＨ／ Ｈｚ ○ ： ２
５／７ ５・流速 ０．５ｍ／／分 −Ｕ、Ｖ、検出器、λ＝２２０ｎｍ、感度０゜三化合物
の分離は、良好であった。即ち、・Ｍ ＯＮ Ｉ Ｓ
−５二Ｒｔ＝１０分２０秒・ＭＯＮＩＳ−２：Ｒｔ＝９
分 ・ＤＩＮＩＳ ：Ｒｔ＝２５分２０秒測定感度の向
上により、２０μ！注入で６０ｎｇ（３ｍｇ／Ａ）から
６ｐｇ （３００ａｒ／ｊり程度の物質量が測定し得る
ので、濃度は生物学的変換試験に使用される条件に矛盾
しない。
２５０璽Ｎ）カラム 一？容媒 Ｍ ｅ ＯＨ／ Ｈｚ ○ ： ２
５／７ ５・流速 ０．５ｍ／／分 −Ｕ、Ｖ、検出器、λ＝２２０ｎｍ、感度０゜三化合物
の分離は、良好であった。即ち、・Ｍ ＯＮ Ｉ Ｓ
−５二Ｒｔ＝１０分２０秒・ＭＯＮＩＳ−２：Ｒｔ＝９
分 ・ＤＩＮＩＳ ：Ｒｔ＝２５分２０秒測定感度の向
上により、２０μ！注入で６０ｎｇ（３ｍｇ／Ａ）から
６ｐｇ （３００ａｒ／ｊり程度の物質量が測定し得る
ので、濃度は生物学的変換試験に使用される条件に矛盾
しない。
三化合物で、ピーク面積と注入した物質量との間に直線
的関係があるので、インキュベーション培地中に存在す
る異なった内容の濃度の評価が可能である。
的関係があるので、インキュベーション培地中に存在す
る異なった内容の濃度の評価が可能である。
３）培地から内容物の抽出：
濾過（または遠心分離）した培養物０．０５ｍ１をＫｉ
ｅｓｅｌｇｅｌ ６０ シリカゲル１ｇをつめたガラ
スカラム（径０．５■）に入れた。エチルエーテル１０
ｍ１を通過させた。エーテルを減圧濃縮しし・濃縮試料
をメタノール／水（２５／４５）混合液２ｍ １２で希
釈した。この溶液を直接ＨＰＬＣに注入した。抽出は定
量的であった。
ｅｓｅｌｇｅｌ ６０ シリカゲル１ｇをつめたガラ
スカラム（径０．５■）に入れた。エチルエーテル１０
ｍ１を通過させた。エーテルを減圧濃縮しし・濃縮試料
をメタノール／水（２５／４５）混合液２ｍ １２で希
釈した。この溶液を直接ＨＰＬＣに注入した。抽出は定
量的であった。
培養物５０ｍｌ、４８時間培養にＤＩＮＩＳメタノール
溶液５０■／ ｍ Ｉｔを加えて試験を行った。
溶液５０■／ ｍ Ｉｔを加えて試験を行った。
里叉箪：
生物学的変換を１７ないし４５時間インキュベーション
でしらべた。ＤＩＮＩＳｏ、５ｇ／ｌで得られた結果（
第５表）によると２５時間から殆ど完全な変換が行われ
（Ｄ Ｉ Ｎ Ｉ Ｓ残量３％）でおり、３８時間目で
は全て、ＭＯＮＩＳ−５（８５％）とＭＯＮＩＳ−２（
１５％）の混合物となっており、比率ＭＯＮＩＳ−５／
ＭＯＮＩＳ−２＝５．１６／１で収率は９３％であった
。
でしらべた。ＤＩＮＩＳｏ、５ｇ／ｌで得られた結果（
第５表）によると２５時間から殆ど完全な変換が行われ
（Ｄ Ｉ Ｎ Ｉ Ｓ残量３％）でおり、３８時間目で
は全て、ＭＯＮＩＳ−５（８５％）とＭＯＮＩＳ−２（
１５％）の混合物となっており、比率ＭＯＮＩＳ−５／
ＭＯＮＩＳ−２＝５．１６／１で収率は９３％であった
。
物質量
時間 ＭＯＮＩＳ−５ＭＯＮＩＳ−２ＤＩＮＩＳ培
地中Ｂ、 ｂａｓｓｉａｎａのインキュベーション。
地中Ｂ、 ｂａｓｓｉａｎａのインキュベーション。
ＤＩＮＩＳ濃度： ５００ｍｇ／ｍ／。
上記と同じ菌体量でＤＩＮＩＳ？ｊＷ度を１ｇ／ｌにし
たとき、第６表に示すようにＤＩＮＩＳの完全消費とＭ
ＯＮ Ｉ Ｓ−２の生成に６８時間インキュベーション
が必要であった。ＭＯＮ Ｔ Ｓの聡収率は９１％であ
る。しかし、このような、ゆるやかな生物学的変化では
ＭＯＮ Ｉ Ｓ−５／ＭＯＮ ｌＳ−２＝３．９／１と
なり、異性体５の製造に不都合である。
たとき、第６表に示すようにＤＩＮＩＳの完全消費とＭ
ＯＮ Ｉ Ｓ−２の生成に６８時間インキュベーション
が必要であった。ＭＯＮ Ｔ Ｓの聡収率は９１％であ
る。しかし、このような、ゆるやかな生物学的変化では
ＭＯＮ Ｉ Ｓ−５／ＭＯＮ ｌＳ−２＝３．９／１と
なり、異性体５の製造に不都合である。
第６表 ボウベリア・バシアナＡＴＣＣ７１５９物質量
時間 ＭＯＮＩＳ−５ＭＯＮＩＳ−２ＤＩＮＩＳ
１７ ９１ ４１ Ｂ５１培地中
Ｂ、 ｂａｓｓｉａｎａのインキュベーション。
１７ ９１ ４１ Ｂ５１培地中
Ｂ、 ｂａｓｓｉａｎａのインキュベーション。
ＤＩＮＩＳ濃度：１ｇ／Ｉｔ
生物学的変換の選択性に及ぼすＤＩＮＩＳ量／菌体量の
比の重要性がこれらの実験により示された。
比の重要性がこれらの実験により示された。
４．２） ２ でのインキュベーション第２の系列
の実験として水中で行った。このような条件では培地内
容物が除かれて、インキュベーション媒体から生物学的
変換生成物の抽出が単純化される。
の実験として水中で行った。このような条件では培地内
容物が除かれて、インキュベーション媒体から生物学的
変換生成物の抽出が単純化される。
４８時間培養の菌体を、最終濃度１ｇ／ｌになるような
りｌＮｌ５メタノール溶液の存在下、水に懸濁した。
りｌＮｌ５メタノール溶液の存在下、水に懸濁した。
生物学的変換体培地の分析の結果（第７表）、このよう
な条件ではＢ、 ｂａｓｓｉａｎａはＤＩＮＩＳを非常
にゆっくりと加水分解することが示された。
な条件ではＢ、 ｂａｓｓｉａｎａはＤＩＮＩＳを非常
にゆっくりと加水分解することが示された。
３０時間のインキュベーションで、培地中になお４０％
のＤＩＮＩＳが残存することが判った。
のＤＩＮＩＳが残存することが判った。
物質量
時間 ＭＯＮＩＳ−５ＭＯＮＩＳ−２ＤＩＮＩＳＢ
、 ｂａｓｓｉａｎａの水中でのインキュベーション。
、 ｂａｓｓｉａｎａの水中でのインキュベーション。
ＤＩＮＩＳ：Ｉｇ＃ｔ。
Claims (9)
- （１）イソソルビトール・ジニトレートをグルタチオン
・トランスフェラーゼを有する少なくとも一種の微生物
を含む培地または該微生物の細胞抽出物に加えることを
特徴とするイソソルビトール・ジニトレートのイソソル
ビトール・モノニトレートへの選択的生物学的変換方法
。 - （２）イソソルビトール・ジニトレートをグルタチオン
・トランスフェラーゼを有する微生物を含む培地に入れ
ることよりなる特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （３）微生物が原生動物、真菌および細菌から選ばれた
ものである特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （４）微生物がテトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ
）、カニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）、
アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ボウベリ
ア（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ）およびストレプトミセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）から選ばれたものである特許
請求の範囲第３項記載の方法。 - （５）微生物がボウベリア属から選択されたものである
特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （６）生物学的変換が２０ないし３０℃で行われる特許
請求の範囲第１項記載の方法。 - （７）培地がグルコース５〜２０ｇ／ｌを含む最小培地
およびアミノ酸を含む有機チッソ源である特許請求の範
囲第１項記載の方法。 - （８）イソソルビトール・ジニトレートを１〜５ｇ／ｌ
の濃度で加える特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （９）培地のｐＨが中性付近である特許請求の範囲第１
項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8610177 | 1986-07-11 | ||
| FR8610177A FR2601386B1 (fr) | 1986-07-11 | 1986-07-11 | Procede de bioconversion selective du dinitrate d'isosorbitol |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6324893A true JPS6324893A (ja) | 1988-02-02 |
Family
ID=9337373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62171375A Pending JPS6324893A (ja) | 1986-07-11 | 1987-07-08 | イソソルビト−ル・ジニトレ−トの選択的生物学的変換方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4897351A (ja) |
| EP (1) | EP0252855B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6324893A (ja) |
| AT (1) | ATE87658T1 (ja) |
| DE (1) | DE3785099D1 (ja) |
| DK (1) | DK361487A (ja) |
| FR (1) | FR2601386B1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2626006B1 (fr) * | 1988-01-20 | 1990-06-01 | Poudres & Explosifs Ste Nale | Procede de synthese de mononitrates de glyceryle par bioconversion de la nitroglycerine |
| CN104892623B (zh) * | 2015-06-11 | 2017-08-11 | 山东新时代药业有限公司 | 一种5‑单硝酸异山梨酯的制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2500835A1 (fr) * | 1981-02-27 | 1982-09-03 | Poudres & Explosifs Ste Nale | Procede de synthese des mononitrates d'isosorbide |
-
1986
- 1986-07-11 FR FR8610177A patent/FR2601386B1/fr not_active Expired
-
1987
- 1987-07-08 JP JP62171375A patent/JPS6324893A/ja active Pending
- 1987-07-10 DK DK361487A patent/DK361487A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-07-10 EP EP87401650A patent/EP0252855B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-10 AT AT87401650T patent/ATE87658T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-07-10 DE DE8787401650T patent/DE3785099D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-13 US US07/072,494 patent/US4897351A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2601386B1 (fr) | 1988-11-18 |
| FR2601386A1 (fr) | 1988-01-15 |
| EP0252855A1 (fr) | 1988-01-13 |
| DK361487D0 (da) | 1987-07-10 |
| DE3785099D1 (de) | 1993-05-06 |
| US4897351A (en) | 1990-01-30 |
| ATE87658T1 (de) | 1993-04-15 |
| EP0252855B1 (fr) | 1993-03-31 |
| DK361487A (da) | 1988-01-12 |
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