JPS63275579A - 脂肪酸エステルおよびそれを含有してなるリパ−ゼ活性測定用試薬ならびにこれを用いるリパ−ゼ活性測定方法 - Google Patents
脂肪酸エステルおよびそれを含有してなるリパ−ゼ活性測定用試薬ならびにこれを用いるリパ−ゼ活性測定方法Info
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- JPS63275579A JPS63275579A JP10953987A JP10953987A JPS63275579A JP S63275579 A JPS63275579 A JP S63275579A JP 10953987 A JP10953987 A JP 10953987A JP 10953987 A JP10953987 A JP 10953987A JP S63275579 A JPS63275579 A JP S63275579A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、リパーゼ活性測定用基質として有用な新規脂
肪酸エステルおよびそれを利用したリパーゼ活性の測定
用試薬ならびに測定方法に関する。
肪酸エステルおよびそれを利用したリパーゼ活性の測定
用試薬ならびに測定方法に関する。
（従来の技術）
血中リパーゼ活性の測定は、膵炎等の膵疾患の消退を判
断するための重要な材料となる。
断するための重要な材料となる。
従来のリパーゼ活性の測定法としては、次のようなもの
が知られている。
が知られている。
（１）乳化したオリーブ油または合成トリグリセリドを
基質として用いリパーゼを作用させて加水分解する方法
： （ｉ）加水分解によって生じる脂肪酸を中和滴定する方
法［Ｒ６Ｐ、ＭａｃＤｏｎａｌｄ、Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅ
＋ｓ、 ８− ５０９〜５１９（１９８２） ］ 。
基質として用いリパーゼを作用させて加水分解する方法
： （ｉ）加水分解によって生じる脂肪酸を中和滴定する方
法［Ｒ６Ｐ、ＭａｃＤｏｎａｌｄ、Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅ
＋ｓ、 ８− ５０９〜５１９（１９８２） ］ 。
（ｉｉ）加水分解によって生じる脂肪酸を抽出した後、
ジエチルチオカルバミン酸ナトリウムで発色させ比色定
量する方法［Ｐ、Ｈ，Ｄｉｒｓｔｉｎｅ、ｅｔ ａｌ。
ジエチルチオカルバミン酸ナトリウムで発色させ比色定
量する方法［Ｐ、Ｈ，Ｄｉｒｓｔｉｎｅ、ｅｔ ａｌ。
Ｃｌ１ｎ−Ｃｈｅｍ、１４ １０９７（１９６８月。
（ｉｉｉ）加水分解による濁度の減少を測定する方法［
Ｗ、Ｃ，Ｖｏｇｅｌ ｅｔ ａＬｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、
９１８８〜１８１（１９６３）］。
Ｗ、Ｃ，Ｖｏｇｅｌ ｅｔ ａＬｃｌｉｎ、ｃｈｅｍ、
９１８８〜１８１（１９６３）］。
（２）フェノール、ｐ−ニトロフェノール、α−ナフト
ール等のフェノール類の長鎖脂肪酸エステルを７！質と
し、リパーゼの作用により生じるフェノール類を発色さ
せ比色定量する方法［Ａ、５ａｉｆｅｒ、ｅｔ ａｌ
、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｗ、 Ｌ １７８〜１
８４（１９６１）、Ｊ、Ｆ、 Ｗｈｉｔａｋｅｒ、 Ｃ
１１ｎｉｃａ Ｇｈｉｍｉｃａ ａｃｔａ４４１３３（
１９７３月 （３）１．２−ジメルカプト−３−プロパツールトリカ
ルボン酸エステルなどのＳ−アシル化合物にリパーゼを
作用させて加水分解し、生じるチオールを５，５゛−ジ
チオビス（２−ニトロ安息香酸）と反応させ黄色色素３
−カルボキシ−４−二トロベンゼンチオレートを生じさ
せ、比色定量する方法（例えば、特開昭５８−９４４０
０、同５１−３３８９４、同５〇−１５１５９４および
同１５９７９３号など）。
ール等のフェノール類の長鎖脂肪酸エステルを７！質と
し、リパーゼの作用により生じるフェノール類を発色さ
せ比色定量する方法［Ａ、５ａｉｆｅｒ、ｅｔ ａｌ
、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｗ、 Ｌ １７８〜１
８４（１９６１）、Ｊ、Ｆ、 Ｗｈｉｔａｋｅｒ、 Ｃ
１１ｎｉｃａ Ｇｈｉｍｉｃａ ａｃｔａ４４１３３（
１９７３月 （３）１．２−ジメルカプト−３−プロパツールトリカ
ルボン酸エステルなどのＳ−アシル化合物にリパーゼを
作用させて加水分解し、生じるチオールを５，５゛−ジ
チオビス（２−ニトロ安息香酸）と反応させ黄色色素３
−カルボキシ−４−二トロベンゼンチオレートを生じさ
せ、比色定量する方法（例えば、特開昭５８−９４４０
０、同５１−３３８９４、同５〇−１５１５９４および
同１５９７９３号など）。
（４）ナフトール系橙色アゾ色素の高級脂肪酸エステル
にリパーゼを作用させて加水分解し、生じる橙色々素を
比色定量する方法（特開昭５４−４６７５８、米国特許
４１８８３２０号）。
にリパーゼを作用させて加水分解し、生じる橙色々素を
比色定量する方法（特開昭５４−４６７５８、米国特許
４１８８３２０号）。
（発明が解決すべき問題点）
しかしながら、これら従来技術について、前記方法（１
）においては安定かつ均一な基質乳化液の調製が困難で
、操作性および再現性に問題があり、また方法（２）、
（３）では基質が水に不溶のため酵素反応を乳濁状態あ
るいはアルコール等の有機溶媒の存在下で行なう必要が
あり、また操作も繁雑であることが指摘されている。ま
た（４）の方法では前記の欠点が一応解決されているが
、この方法では比色定量される色素が橙色であって血中
色素等の有色物の影響を受ける。
）においては安定かつ均一な基質乳化液の調製が困難で
、操作性および再現性に問題があり、また方法（２）、
（３）では基質が水に不溶のため酵素反応を乳濁状態あ
るいはアルコール等の有機溶媒の存在下で行なう必要が
あり、また操作も繁雑であることが指摘されている。ま
た（４）の方法では前記の欠点が一応解決されているが
、この方法では比色定量される色素が橙色であって血中
色素等の有色物の影響を受ける。
このため水溶性でありかつ長波長に光吸収帯をもつ色素
を遊離する基質が望まれている。また測定感度に影響す
る遊離色素のモル吸光係数の大きさについても一層の改
良が望まれている。
を遊離する基質が望まれている。また測定感度に影響す
る遊離色素のモル吸光係数の大きさについても一層の改
良が望まれている。
このような問題点を解消するものとして前記米国特許４
１８８３２０号に開示された高級脂肪酸エステルに代え
てナフトール系アゾ色素の高級脂肪酸エステルを用いる
例が報告されているが（特公昭６Ｏ−３５１１７） 、
実際の測定操作に際して反応活性がさらに高く、特に大
量の検体の迅速な処理に適する）＆質の開発が望ましい
。
１８８３２０号に開示された高級脂肪酸エステルに代え
てナフトール系アゾ色素の高級脂肪酸エステルを用いる
例が報告されているが（特公昭６Ｏ−３５１１７） 、
実際の測定操作に際して反応活性がさらに高く、特に大
量の検体の迅速な処理に適する）＆質の開発が望ましい
。
したがって、本発明の目的はリパーゼ活性測定用基質と
して利用したときに操作性および再現性に優れ、かつ血
中色素等の物質による影響を受けにくい脂肪酸エステル
、それを用いたリパーゼ活性測定用試薬ならびに測定方
法を提供することにある。
して利用したときに操作性および再現性に優れ、かつ血
中色素等の物質による影響を受けにくい脂肪酸エステル
、それを用いたリパーゼ活性測定用試薬ならびに測定方
法を提供することにある。
（問題点を解決するための手段）
本発明の前記の目的は、下記一般式１で示される脂肪酸
エステルまたはその水溶性の塩：Ｈ 式中、ＲＩ：炭素数７−１７の直鎖アルキル基、Ｒ２二
水素原子、ハロゲン原子、アルキル基または水酸基、 Ｒ３：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基、水
酸基またはアルキル基、 Ｘ：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基。
エステルまたはその水溶性の塩：Ｈ 式中、ＲＩ：炭素数７−１７の直鎖アルキル基、Ｒ２二
水素原子、ハロゲン原子、アルキル基または水酸基、 Ｒ３：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基、水
酸基またはアルキル基、 Ｘ：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基。
およびそれらを含有してなるリパーゼ活性測定用試薬な
らびに上記一般式で示される脂肪酸エステルまたは七の
水溶性の塩にリパーゼを作用させ、遊離する色素を比色
定量することからなるリパーゼ活性測定力法によって達
成される。
らびに上記一般式で示される脂肪酸エステルまたは七の
水溶性の塩にリパーゼを作用させ、遊離する色素を比色
定量することからなるリパーゼ活性測定力法によって達
成される。
前記一般式Ｉ中、Ｒ２のハロゲン原子としては塩素およ
び臭素等が、アルキル基としては、メチル基、エチル基
、ｎ−プロピル基およびｉ−プロピル基等が挙げられる
。Ｒ３のアルキル基はメチル基、エチル基、ｎ−プロピ
ル基およびｉ−プロピル基が挙げられる。
び臭素等が、アルキル基としては、メチル基、エチル基
、ｎ−プロピル基およびｉ−プロピル基等が挙げられる
。Ｒ３のアルキル基はメチル基、エチル基、ｎ−プロピ
ル基およびｉ−プロピル基が挙げられる。
これらの脂肪酸エステルのうち特に好ましい具体例とし
ては１次のようなものが挙げられる。
ては１次のようなものが挙げられる。
Ｈ
式中、ＲＩ ： ｎ−ＣＩＨｔ５．ｎ−ＣｑＨ＋９、ｎ
−Ｃ＋＋Ｈｚｘ、ｎ−Ｃ１３Ｈ２／ 。
−Ｃ＋＋Ｈｚｘ、ｎ−Ｃ１３Ｈ２／ 。
ｎ−Ｃ＋ｓＨ３＋、ｎ−Ｃ：＋ｚＨ３５またこれら化合
物はナトリウム塩やカリウム塩等の水溶性の塩であって
もよい。
物はナトリウム塩やカリウム塩等の水溶性の塩であって
もよい。
前記一般式ｌで表わされるフェノールスルホフタレイン
の脂肪酸エステルは新規化合物であり、カルボン酸アリ
ールエステルを合成する際の常法にしたがって合成する
ことができる。
の脂肪酸エステルは新規化合物であり、カルボン酸アリ
ールエステルを合成する際の常法にしたがって合成する
ことができる。
すなわち、前記各化合物は対応するフェノールスルホフ
タレイン色素と高級脂肪酸の無水物あるいはハロゲン化
合物とを、ピリジン等の酸捕捉剤の存在下でＮ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド等
のアミド類、アセトニトリル等のニトリル類あるいはピ
リジン等の芳香族環状アミン類を溶媒として反応させる
ことにより合成される。目的物の精製は常法によって行
なわれる。
タレイン色素と高級脂肪酸の無水物あるいはハロゲン化
合物とを、ピリジン等の酸捕捉剤の存在下でＮ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド等
のアミド類、アセトニトリル等のニトリル類あるいはピ
リジン等の芳香族環状アミン類を溶媒として反応させる
ことにより合成される。目的物の精製は常法によって行
なわれる。
反応は常温および常圧下で容易に進行し１〜５時間程度
で完結するが、必要により加熱してもよい。
で完結するが、必要により加熱してもよい。
たとえば目的化合物に対応するフェ／−ルスルホフタレ
イン色素をアセトニトリルに分散させ、対応する高級脂
肪酸のハロゲン化物およびピリジンを加えて混合し、室
温で１〜２時間反応させることによって合成される。
イン色素をアセトニトリルに分散させ、対応する高級脂
肪酸のハロゲン化物およびピリジンを加えて混合し、室
温で１〜２時間反応させることによって合成される。
（効果）
こうして得られた本発明の脂肪酸エステル化合物はリパ
ーゼ酵素活性測定試薬としてすぐれている。
ーゼ酵素活性測定試薬としてすぐれている。
すなわち、本発明の化合物はリパーゼ酵素測定用試薬と
して用いた場合従来の化合物に対して以下のような利点
を有する。
して用いた場合従来の化合物に対して以下のような利点
を有する。
（ｉ）水溶性であるため、水溶液中での測定が可能であ
り輻広い測定条件を選択することが可能である。
り輻広い測定条件を選択することが可能である。
（ｉｉ）赤紫色ないし青紫色に発色するため血中色素の
可視吸収による妨害を受けずにリパーゼ等の酵素活性を
測定することができる。
可視吸収による妨害を受けずにリパーゼ等の酵素活性を
測定することができる。
（ｉｉｉ）加水分解されて放出される色素のモル吸光係
数が大きく、定量感度の高い測定が可能である。
数が大きく、定量感度の高い測定が可能である。
（ｉｉ）加水分解の際の反応性がたとえば特公昭８〇−
３５１１７号開示の脂肪酸エステルに比較して著しく高
く、レートアッセイが可能であって迅速な分析を行ない
得る。
３５１１７号開示の脂肪酸エステルに比較して著しく高
く、レートアッセイが可能であって迅速な分析を行ない
得る。
実施例
次に本発明に用いる化合物の合成例を示す。
合成例１
化合物１ａ（式（１）中：Ｒ１＝ｎ−Ｃ１ｌＨ２３；
Ｒ２、Ｒ３、Ｘ＝）ｌ）の合成 ４．４’−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビスフェノールＳ、Ｓ−ジオキシド１．７
７ｇをＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド４０ｍ１に溶解し
、塩化ラウロイル１．１０ｇおよびピリジン２１を加え
、室温で２時間撹拌反応させて４．４’−（３）１−２
．１−ベンゾオキサチオール−３−イリデン）ビスフェ
ノールＳ、Ｓ−ジオキシドラウリン酸エステルを得た０
反応混合物から減圧で溶媒を除去した次いでシリカゲル
カラムクロマトグラフィ（キイーゼルゲル６０、溶媒：
ベンゼン−メタノール）で精製した。
Ｒ２、Ｒ３、Ｘ＝）ｌ）の合成 ４．４’−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビスフェノールＳ、Ｓ−ジオキシド１．７
７ｇをＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド４０ｍ１に溶解し
、塩化ラウロイル１．１０ｇおよびピリジン２１を加え
、室温で２時間撹拌反応させて４．４’−（３）１−２
．１−ベンゾオキサチオール−３−イリデン）ビスフェ
ノールＳ、Ｓ−ジオキシドラウリン酸エステルを得た０
反応混合物から減圧で溶媒を除去した次いでシリカゲル
カラムクロマトグラフィ（キイーゼルゲル６０、溶媒：
ベンゼン−メタノール）で精製した。
収硬： １９０ ｇ
入ｗａｘ： ３７１ｎｍ、ｅ ＝１．８５ Ｘ １０’
（メタノール中で測定） ＩＲ： ｙＯＨ： ３３３０ ｃｓ＋−１； νｃ＊ｏ
： １７４５ｃｍ−１（クロロホルム中で測定） ＮＭＲ： （ＣＤ＋ＣＩ） δ、 ０．８２〜１．５４ （２２Ｈ，ｍ）δ：
２．５０ （２Ｈ，ｔ） δ： ６．８０〜８．０８ （１２Ｈ，■）合成例２ 化合物１ｂ（式（１）中： Ｒ１＝ｎ−Ｃ１ｌＨ２３；
Ｒｚｓ（：１ ）の合成 ４．４”−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビス（２−クロロフェノール）Ｓ、Ｓ−ジ
オキシド２．１２ｇをアセトニトリル４０鳳ｌに分散さ
せ、塩化ラウロイル１．１０ｇおよびピリジン２ｍｌを
加え、室温で２時間撹拌反応させて４．４°−（３Ｈ−
２，１−ベンゾオキサチオール−３−イリデン）ビス（
２−クロロフェノール）Ｓ、Ｓ−ジオキシドラウリン酸
エステルを得た０反応混合物から減圧で溶媒を除去次い
でシリカゲルカラムクロマトグラフィ（キイーゼルゲル
８０、溶媒：ベンゼン−メタノール）・で精製した。
（メタノール中で測定） ＩＲ： ｙＯＨ： ３３３０ ｃｓ＋−１； νｃ＊ｏ
： １７４５ｃｍ−１（クロロホルム中で測定） ＮＭＲ： （ＣＤ＋ＣＩ） δ、 ０．８２〜１．５４ （２２Ｈ，ｍ）δ：
２．５０ （２Ｈ，ｔ） δ： ６．８０〜８．０８ （１２Ｈ，■）合成例２ 化合物１ｂ（式（１）中： Ｒ１＝ｎ−Ｃ１ｌＨ２３；
Ｒｚｓ（：１ ）の合成 ４．４”−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビス（２−クロロフェノール）Ｓ、Ｓ−ジ
オキシド２．１２ｇをアセトニトリル４０鳳ｌに分散さ
せ、塩化ラウロイル１．１０ｇおよびピリジン２ｍｌを
加え、室温で２時間撹拌反応させて４．４°−（３Ｈ−
２，１−ベンゾオキサチオール−３−イリデン）ビス（
２−クロロフェノール）Ｓ、Ｓ−ジオキシドラウリン酸
エステルを得た０反応混合物から減圧で溶媒を除去次い
でシリカゲルカラムクロマトグラフィ（キイーゼルゲル
８０、溶媒：ベンゼン−メタノール）・で精製した。
収ψ： １．７５ ｇ
入ｍａｎ： ３７３ ｎｍ 、 ｅｘ２．２４ ＸＩＯ
’ （メタノール中で測定） ＩＲニジＯＨ： ３３００ ｃｍｉ；シｃ−ｏ ： １
７５０ｃｍ−１（クロロホルム中で測定） ＮＭＲ： （ＣＤ：＋ＣＩ） δ： ０．８４〜１．８５ （２２Ｈ，ｍ）δ：
２．５Ｂ （２Ｈ，ｔ） δ： ８．８２〜８．００（ＩＯＨ，ｍ）合成例３ 化合物１ｂ（式（Ｉ）中：Ｒ１＊ｎ−（＋３Ｈ２ｌ、ｎ
−Ｃ＋ｓＨ：ｎ。
’ （メタノール中で測定） ＩＲニジＯＨ： ３３００ ｃｍｉ；シｃ−ｏ ： １
７５０ｃｍ−１（クロロホルム中で測定） ＮＭＲ： （ＣＤ：＋ＣＩ） δ： ０．８４〜１．８５ （２２Ｈ，ｍ）δ：
２．５Ｂ （２Ｈ，ｔ） δ： ８．８２〜８．００（ＩＯＨ，ｍ）合成例３ 化合物１ｂ（式（Ｉ）中：Ｒ１＊ｎ−（＋３Ｈ２ｌ、ｎ
−Ｃ＋ｓＨ：ｎ。
ｎ−Ｃ＋ｚＨｘｓ；Ｒ２＝＝ Ｃ１； Ｒ３，Ｘ＝ Ｈ
）（７）合成合成例２において塩化ラウロイルの代りに
塩化ミリストイル、塩化バルミトイルおよび塩化ステア
ロイルを用い、合成例２と同様の操作で反応、分離およ
び精製して前記式１ｂの各高級脂肪酸エステル化合物を
得た。
）（７）合成合成例２において塩化ラウロイルの代りに
塩化ミリストイル、塩化バルミトイルおよび塩化ステア
ロイルを用い、合成例２と同様の操作で反応、分離およ
び精製して前記式１ｂの各高級脂肪酸エステル化合物を
得た。
得られた合成物のＵＶ、 ＩＲおよびＮＭＲの測定結果
を下に示した。
を下に示した。
ミリスチン酸エステル
入ｗａｘ ： ３７３ ｎｍ、 ｅ ＝
２．２４ ＸＩＯ’ＩＲ： ｐＯＨ： ３３００ｃ
ｍ−１； ｙｃ＝ｏ ： １７５０ｃｍ−１（ク
ロロホルム中で測定） ＮにＲ： （ＣＩｈＣ１） δ： ０−ＳＯ〜１．５８ （２８Ｈ，ｍ）δ：
１５０ （２Ｈ，ｔ） δ： ８．８４〜８．０１（ＩＯＨ，■）バルミチン
酸エステル 入ｌ１ａｘ ： ３７４ ｎｍ、ｅ ＝ ２．２８
Ｘ１０４ＩＲ： ｐＯＨ： ３３００ｃｓ＋−１
； ＦＣ＝Ｏ： １７５０ｃｍ−１（クロロホルム
中で測定） ＮＭＲ： （ＣＤ３ＣＩ） δ： ０．８７〜１．５１ （３０）１．■）δ：
２．５１ （２Ｈ，ｔ） δ： ６．８８〜８．００（ＩＯＨ，■）ステアリン
酸エステル 入ｗａｘ ： ３７３ ｎｉｐ、 ｅ ＝ ２．
：ｌＪ ＸＩＯ’ＩＲ： ｙＯＨ： ３３００ｃｍ−’
； ＦＣ＝Ｏ： １７５０ｃｍ−１（クロロホルム中で
測定） ＮＭＲ： （ＣＩ）３ＣＩ） δ ： （Ｃ８８〜 １．５３ （３４Ｂ、瀧）
δ ： ２．５０ （２Ｈ，ｔ） δ ： ８．８８ 〜７．５ａ（ｌｏｎ、ｍ）（測定
試験例） 次に本発明の前記高級脂肪酸エステルを含む測定用試薬
を調製し、それによってリパーゼ酵素活性の測定を行な
った。
２．２４ ＸＩＯ’ＩＲ： ｐＯＨ： ３３００ｃ
ｍ−１； ｙｃ＝ｏ ： １７５０ｃｍ−１（ク
ロロホルム中で測定） ＮにＲ： （ＣＩｈＣ１） δ： ０−ＳＯ〜１．５８ （２８Ｈ，ｍ）δ：
１５０ （２Ｈ，ｔ） δ： ８．８４〜８．０１（ＩＯＨ，■）バルミチン
酸エステル 入ｌ１ａｘ ： ３７４ ｎｍ、ｅ ＝ ２．２８
Ｘ１０４ＩＲ： ｐＯＨ： ３３００ｃｓ＋−１
； ＦＣ＝Ｏ： １７５０ｃｍ−１（クロロホルム
中で測定） ＮＭＲ： （ＣＤ３ＣＩ） δ： ０．８７〜１．５１ （３０）１．■）δ：
２．５１ （２Ｈ，ｔ） δ： ６．８８〜８．００（ＩＯＨ，■）ステアリン
酸エステル 入ｗａｘ ： ３７３ ｎｉｐ、 ｅ ＝ ２．
：ｌＪ ＸＩＯ’ＩＲ： ｙＯＨ： ３３００ｃｍ−’
； ＦＣ＝Ｏ： １７５０ｃｍ−１（クロロホルム中で
測定） ＮＭＲ： （ＣＩ）３ＣＩ） δ ： （Ｃ８８〜 １．５３ （３４Ｂ、瀧）
δ ： ２．５０ （２Ｈ，ｔ） δ ： ８．８８ 〜７．５ａ（ｌｏｎ、ｍ）（測定
試験例） 次に本発明の前記高級脂肪酸エステルを含む測定用試薬
を調製し、それによってリパーゼ酵素活性の測定を行な
った。
測定例１
反応液（Ｉ）の調製
コール酸ナトリウム２１５ｍｇにｐＨ８１７）１／ＩＯ
Ｍリン酸緩物液を加え１００論ｌとした。
Ｍリン酸緩物液を加え１００論ｌとした。
反応液（■）（基質溶液）の調製
４．４’−（３Ｈ−２，１−ベンゾオキサチオール−３
−イリデン）ビスフェノールＳ、Ｓ−ジオキシドカプリ
ン酸エステル（式Ｉａ中： Ｒ＋−ＣｑＨＩｑ＞ （５
，０７ｍｇ）ニｐＨ４，５の１／１００％酢酸緩衝液を
加え５１とした。
−イリデン）ビスフェノールＳ、Ｓ−ジオキシドカプリ
ン酸エステル（式Ｉａ中： Ｒ＋−ＣｑＨＩｑ＞ （５
，０７ｍｇ）ニｐＨ４，５の１／１００％酢酸緩衝液を
加え５１とした。
酵素溶液の調製
粗リパーゼ（シグマケミカル社： Ｔｙｐｅｌｌ ）０
．４ｇに生理食塩水２０１を加え不溶部を濾去した。こ
の溶液を生理食塩水で１ノＳ 、 ２１５ 、３１５
、４１５に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。
．４ｇに生理食塩水２０１を加え不溶部を濾去した。こ
の溶液を生理食塩水で１ノＳ 、 ２１５ 、３１５
、４１５に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。
酵素活性の測定
上記反応液（Ｉ）２．０ｍｌに上記酵素溶液０．０５ｍ
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後、」
−記反応液（ＩＩ） ０．５＋＋＋１を加え、３７℃、
５５７ｍｍにおける吸光度を測定してレートアッセイし
た。
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後、」
−記反応液（ＩＩ） ０．５＋＋＋１を加え、３７℃、
５５７ｍｍにおける吸光度を測定してレートアッセイし
た。
なおブランク検液として、上記酵素溶液の代りに生理食
塩水０．０５ｍ１を加えて同様の処理をしたものを用い
た。検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取り
、結果を第１図中の直線ｌで示した。
塩水０．０５ｍ１を加えて同様の処理をしたものを用い
た。検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取り
、結果を第１図中の直線ｌで示した。
第１図は本発明による測定用試薬化合物を含む検液のブ
ランク検液を対照とした吸光度変化量の差（６ｍ ００
） ／騰ｉｎ）を縦軸に酵素濃度（ｉｉ５〜５１５）を
横軸に夫々とって示すそれらの間の関係を示すグラフで
ある。
ランク検液を対照とした吸光度変化量の差（６ｍ ００
） ／騰ｉｎ）を縦軸に酵素濃度（ｉｉ５〜５１５）を
横軸に夫々とって示すそれらの間の関係を示すグラフで
ある。
測定例２
反応液（Ｉ）の調製
コール酸ナトリウム２１５１ｇにｐＨ８のｌ／１０Ｍリ
ン酸緩衝液を加え１００ｍ ｌとした。
ン酸緩衝液を加え１００ｍ ｌとした。
反応液（■）（基質溶液）の調製
合成例２で得た式１ｂのラウリン酸エステル（８，Ｏｆ
ｌｉｍｇ） ニｐＨ４，５（７）１／１００％酢Ｍ緩衝
液を加え５腸ｌとした。
ｌｉｍｇ） ニｐＨ４，５（７）１／１００％酢Ｍ緩衝
液を加え５腸ｌとした。
酵素溶液の調製
粗リパーゼ（シグマケミカル社 Ｔ７ｐｅ■）０．４ｇ
に生理食塩水２０ｍ１を加え不溶部を濾去した。この溶
液を生理食塩水で１１５．２１５ 、３１５ 、４１５
に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。
に生理食塩水２０ｍ１を加え不溶部を濾去した。この溶
液を生理食塩水で１１５．２１５ 、３１５ 、４１５
に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。
酵素活性の測定
」−記反応液（Ｉ）２．０ｍｌにｔ記酵素溶液０．０５
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後１、
に記反応液（ｎ） ０．５ ｍｌを加え、３７℃、５７
５ｍｍにおける吸光度を測定してレートアッセイした。
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後１、
に記反応液（ｎ） ０．５ ｍｌを加え、３７℃、５７
５ｍｍにおける吸光度を測定してレートアッセイした。
なおブランク検液として、上記酵素溶液のかわりに生理
食塩水０．０５層１を加えて同様の処理をしたものを用
いた。検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取
り、結果を第１図中直線２で示した。
食塩水０．０５層１を加えて同様の処理をしたものを用
いた。検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取
り、結果を第１図中直線２で示した。
測定例３
反応液ＣＩ）の調製
コール酸ナトリウム２１５ｍｇにｐｕｓの１／ＩＯＭリ
ン酸緩衝液を加え１００ ｍｌとした。
ン酸緩衝液を加え１００ ｍｌとした。
反応液（■）（基質溶液）の調製
合成例２と同様な手順で調製した化合物ｉｂで示される
カプリン酸エステル（５，５０ｍｇ）にＰ）１４．５の
１／１００Ｍ酢酸緩衝液を加え５ｍｌとした。
カプリン酸エステル（５，５０ｍｇ）にＰ）１４．５の
１／１００Ｍ酢酸緩衝液を加え５ｍｌとした。
酵素溶液の調製
粗リパーゼ（シグマケミカル社 Ｔｙｐｅｎ ）０．２
ｇに生理食塩水２０１を加え不溶部を濾去した。この溶
液を生理食塩水で１１５ 、２１５．３１５ 、４１５
に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。
ｇに生理食塩水２０１を加え不溶部を濾去した。この溶
液を生理食塩水で１１５ 、２１５．３１５ 、４１５
に夫々希釈し合計５種の酵素溶液とした。
酵素活性の測定
Ｅ記反応液（Ｉ）２．０層ｌに上酵素素溶液０−０５ｍ
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後、上
記反応液（ｎ）０．５ｍｌを加え、３７℃、５７５ｎｍ
における吸光度を測定してレートアッセイした。なおブ
ランク検液として、上記酵素溶液のかわりに生理食塩水
０．０５ｍ１を加えて同様の処理をしたものを用いた。
１を加え３７℃で５分間ブレインキュベートした後、上
記反応液（ｎ）０．５ｍｌを加え、３７℃、５７５ｎｍ
における吸光度を測定してレートアッセイした。なおブ
ランク検液として、上記酵素溶液のかわりに生理食塩水
０．０５ｍ１を加えて同様の処理をしたものを用いた。
検液とブランク検液の吸光度変化量の差をよみ取り、結
果を第２図中の直線３で示した。第２図は吸光度変化量
の中位を変えた以外は第１図と同様な傾向を示すグラフ
である
果を第２図中の直線３で示した。第２図は吸光度変化量
の中位を変えた以外は第１図と同様な傾向を示すグラフ
である
第１図は本発明に係る測定法の実施例の結果を示すグラ
フ、第２図は別の実施例の効果を示すグラフである。
フ、第２図は別の実施例の効果を示すグラフである。
Claims (3)
- （１）下記一般式 I で示される脂肪酸エステルまたは
その水溶性の塩： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ＿１：炭素数７−１７の直鎖アルキル基、Ｒ＿
２：水素原子、ハロゲン原子、アルキル基または水酸基
、 Ｒ＿３：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基、
水酸基またはアルキル基、 Ｘ：水素原子、スルホキシル基、カルボキ シル基。 - （２）下記一般式 I で示される脂肪酸エステルまたは
その水溶性の塩を含んでなることを特徴とするリパーゼ
活性測定用試薬： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 式中、Ｒ＿１：炭素数７−１７の直鎖アルキル基、Ｒ＿
２：水素原子、ハロゲン原子、アルキル基または水酸基
、 Ｒ＿３：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基、
水酸基またはアルキル基、 Ｘ：水素原子、スルホキシル基、カルボキ シル基。 - （３）（ｉ）下記一般式 I で示される脂肪酸エステル
またはその水溶性の塩にリパーゼを作用させ、（ｉｉ）
リパーゼの作用により上記脂肪酸エステルまたはその水
溶性の塩から遊離する色素を比色定量することからなる
ことを特徴とするリパーゼ活性測定方法： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 式中、Ｒ＿１：炭素数７−１７の直鎖アルキル基、Ｒ＿
２：水素原子、ハロゲン原子、アルキル基または水酸基
、 Ｒ＿３：水素原子、スルホキシル基、カルボキシル基、
水酸基またはアルキル基、 Ｘ：水素原子、スルホキシル基、カルボキ シル基。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10953987A JPS63275579A (ja) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | 脂肪酸エステルおよびそれを含有してなるリパ−ゼ活性測定用試薬ならびにこれを用いるリパ−ゼ活性測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10953987A JPS63275579A (ja) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | 脂肪酸エステルおよびそれを含有してなるリパ−ゼ活性測定用試薬ならびにこれを用いるリパ−ゼ活性測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63275579A true JPS63275579A (ja) | 1988-11-14 |
Family
ID=14512812
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10953987A Pending JPS63275579A (ja) | 1987-05-01 | 1987-05-01 | 脂肪酸エステルおよびそれを含有してなるリパ−ゼ活性測定用試薬ならびにこれを用いるリパ−ゼ活性測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63275579A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007506732A (ja) * | 2003-09-25 | 2007-03-22 | テル アヴィヴ ユニヴァーシティ フューチャー テクノロジー ディヴェロップメント エル．ピー． | アミロイド関連疾患を処置するための組成物及びその使用方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5446758A (en) * | 1977-09-22 | 1979-04-12 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Higher fatty acid ester |
| JPS5542703A (en) * | 1978-09-11 | 1980-03-26 | Marton Miksa | Pad assembled body of vacuum rotary sander |
-
1987
- 1987-05-01 JP JP10953987A patent/JPS63275579A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5446758A (en) * | 1977-09-22 | 1979-04-12 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Higher fatty acid ester |
| JPS5542703A (en) * | 1978-09-11 | 1980-03-26 | Marton Miksa | Pad assembled body of vacuum rotary sander |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007506732A (ja) * | 2003-09-25 | 2007-03-22 | テル アヴィヴ ユニヴァーシティ フューチャー テクノロジー ディヴェロップメント エル．ピー． | アミロイド関連疾患を処置するための組成物及びその使用方法 |
| US8372880B2 (en) | 2003-09-25 | 2013-02-12 | Tel Aviv University Future Technology Development L.P. | Compositions and methods using same for treating amyloid-associated diseases |
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