JPS63297331A - タンパク質吸収増大薬品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はｔ　−Ｐ　Ａを筋肉内に投与し血液中のｔ−Ｐ
Ａの吸収を増大させる方法及びこれに使用するパッケー
ジに関する。

従来の技術、発明が　　しよ　　　る訂題米国特許第４
，６５８，８３０号（５ａｒｎｏｆｆ　）は凝血選択的
冠状動脈トロンボ分解薬、特にｔ−ＰＡ（組織型プラス
ミノゲン活性化因子）の血流中への吸収を増大させるた
め、特に筋肉内吸収におけるヒドロキシルアミン及びそ
の塩の使用を開示している。この開示は米国特許第４，
６６１．４６９号（５ａｒｎｏｆｆ　）及び１９８６年
２月２７日に発行された国際出願ＷＯ８６１０１１０９
号において拡大されている。１９８６年９月１２日に発
行された国際出願Ｗ　Ｏ’　８６１０５０９６号は更に
ｔ　−Ｐ　Ａの吸収増大薬品として低級アルキルアミン
、ジ低級アルキルアミン及びその非毒性塩を開示してい
る。

米国特許第４，６５６，０３４号（５ａｒｎｏｆｆ　）
は凝血選択的冠状動脈トロンボ分解薬品、特１／（ｔ−
ＰＡ。

吸収増大薬品、特にヒドロキシルアミン又はその非毒性
塩、及び再潅流（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　）損傷防止
薬品、特に超酸化物不均化酵素を含んでいる薬剤（及び
その筒内注射）を開示している。

貧血の開始初期に繊維素溶解系の活性化因子を静脈内投
与することによりトロンボ分解が引き起され、これＫよ
って心筋梗塞が阻止され、心室の性能が改善され、寿命
を長くなる。その効能は貧血（ｉｓｃｈｅｍｉａ　）の
開始の後いかに早めに実行するかに依存する。自己注射
器等を使用して人命救助薬物治療を即座に筋肉内投与す
ることにより、猛烈なアレルギー反応及び潜在的に死を
もたらすような不整脈を緊急に治療できることがわかっ
た。

冠状動脈トロンボ分解に対する組織型プラスミノゲン活
性化因子（ｔ−ＰＡ）の筋肉内投与もまた可能であるこ
とが先に見出されている。上記５ａｒｎｏｆｆの特許及
び特許出願のはか、８ｏｂｅ１等の１筋内注射された組
織型プラスミノゲン活性化因子の促進された吸収による
冠状動脈トロンボ分解（Ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｔｈｒｏｍ
ｂｏｌｙｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ｆａｃ目１ｔａｔｅｄ　ａ
ｂ−ｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌ
ａｒｌｙ　１ｎｊｅｃｔｅｄ　ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ
　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　）　
’、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　８２巻、４２５８頁（
１９８５）、を−ＰＡｋ対する吸収増大薬品としてメチ
ルアミン塩酸塩を開示するＦａｘ等ａ）　Ｊ、　Ａｍｅ
ｒ、　ＣｏＣｏ１１ｅ　ｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇ７．７
巻、Ａ２，１９８６年２月、５２Ａ頁及びヒドロキシル
アミンによるタンパク質の吸収の増大を示すＦｉｅｌｄ
ｓ等のＣ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｏｃｔ、　１９８５璽
６９を参照されたい。

課題を解決するための手段 ウサギのｔ−ＰＡの吸収はヒドロキシルアミン及びその
非毒性塩、特にヒドロキシルアミン塩酸塩を使用し好ま
しくは注射位置での局部的電気刺激と併用することによ
って増大されることが見出された。これらの条件のもと
で、初期ピーク血液段階は５分以内に達成された。しか
しながら、要求の高濃度においては、ヒドロキシルアミ
ン及びその塩はメトヘモグロビン血症、低血圧、頻脈又
は局部傷害を誘発させる可能性がある。

国際出願Ｗ　０８６１０５０９６号はｔ−ＰＡの吸収増
大剤として、アルキル及びジアルキルアミン及びその非
毒性塩、好ましくはメチルアミン塩酸塩を開示している
。しかしながら、これらの吸収増大剤はヒドロキシルア
ミン及びその塩はど効果的でないことがわかった。

ヒドロキシルアミン又はその非毒性塩とメチルアミン又
はその非毒性塩とを組合せて使用することによって、電
気的刺激の使用がなくてさえも、非血管内、たとえば筋
肉内に投与されたｔ　−Ｆ　Ａの吸収を迅速かつ長期建
増大し得ることがわかった。

さらにメチルアミン又はその非毒性塩をヒドロキシルア
ミン又はその非毒性塩と一緒に使用することＫよって、
ｔ−ＰＡの吸収を増大させるためのヒドロキシルアミン
又はその非毒性の塩の量を減少でき、かくしてヒドロキ
シルアミンの副作用が減少又は消失されることが見出さ
れた。同時にｔ　−Ｐ　Ａの吸収はメチルアミン又はそ
の塩を使用することから単純に予測できるよりも大きく
増大され、すなわちこれは単なる付加的効果ではない。

ヒドロキシルアミン及びメチルアミンの非沿性の塩とし
ては、例えば塩酸、臭化水素α、ヨウ化水素酸、リン酸
、硫酸、硝酸、酢酸、プロピオン酸及びコハク酸の塩で
ある。好ましくはヒドロキシルアミン塩酸塩及びメチル
アミン塩酸塩が使用される。

ヒドロキシルアミン又はその非毒性塩及びメチルアミン
又はその非毒性塩は通常筋肉内に注射される水溶液とし
て投与される。それらは混合調剤として単独の小瓶から
又は夫々別個の小瓶から投与することができ、後者の場
合はそれらは実質的に同時に投与されることが好ましい
。同様番でそれらはｔ　−Ｆ　Ａと同じ小瓶から単一の
調剤として投与することかでき又はｔ　−Ｐ　Ａと別個
に、好ましくは実質的に同時に投与することもできる。

好ましくは吸収増大県品の組合せ（すなわち、ヒドロキ
シルアミン又はその塩とメチルアミン又はその塩）は単
一の混合調剤を形成するためにｔ−ＰＡと混合され、そ
れからたとえば５ａｒｎｏｆｆの米国特許第４，６５８
，８３０号に記述されているよう忙して筋肉内（ｉ、ｍ
、　）注射される。

ヒドロキシルアミン又はその塩は好背しくは０．０７９
モルの濃度で投与され、またメチルアミン又はその１は
好ましくは０．６３モルの濃度で投与される。ヒドロキ
シルアミン又はその塩は０．０２モル〜０．７９モルの
投与量（ｄｏｓａｇｅ　）で投与することができるが、
望ましくはヒドロキシルアミンの副作用が最小に維持さ
れる投与量、たとえば０．５モル以下の投与量で投与さ
れる。メチルアミン又はその塩はたとえば０．０２モル
〜６．３モルの濃度で、通常少なくとも０．１５モルの
濃度で投与することができる。

別の方法で述べるならば、ヒドロキシルアミン又はその
非毒性の塩は非血管内に（たとえば筋肉内Ｋ）導入され
たｔ　−Ｆ　Ａの吸収を増大させるに十分な量投与され
、またメチルアミン又はその非毒性の塩はｔ　−Ｆ　Ａ
の吸収のそのような増大を付与するために必要とされる
ヒドロキシルアミン又はその非毒性の塩を減少するのに
十分な量投与される。

加うるに上記に指摘したように１ヒドロキシルアミン又
はその非毒性の塩とメチルアミン又はその非毒性の塩と
の組合せは血液中のｔ　−Ｐ　Ａの高揚を延長させる。

本発明を導く研究において、ヒドロキシルアミン、メチ
ルアミン、他のアミンの他、血管拡張剤や他の薬剤を単
独で及び低濃度のヒドロキシルアミンと組合せて、筋肉
内に与えられたヒ）ｔ−ＰＡの吸収の増大効果、血液力
学及び検出できるヒトｔ　−Ｐ　Ａ抗原に対するエンハ
ンサ−の起りうる混同効果を測定するために２５０羽の
ウサギと１３匹の犬について評価した。薬品とメチルア
ミン塩酸塩と低くかつ生理的によい耐性のある濃度のヒ
ドロキシルアミン＃Ｘ酸塩との組合せは、ｔ−ＰＡの迅
速な吸収を促進するとともに繊維素溶解的なそして永続
的な冠状動脈トロンボ分解的活性を筋肉内注射後５分以
内に達成し且つこれを犬では注射位置での広大なマイオ
ネクロシス（ｍｙｏｎｅｃｒｏｓｉｓ　）、ヘモグロビ
ン血症、頻脈又は低血圧症を誘発することなく少なくと
も６時間保持した。追加の３１羽のウサギと６匹の犬に
ついてｔ　−Ｐ　Ａを使用せずエンハンサ−有り又は無
しの媒質の注射について研究した。最も好都合な条件を
注射位置の骨格の筋肉の露出を伴う実験において明らか
Ｋした後、局部的電気刺激を与えられた露出筋肉に直接
的に行なう場合と対比させて、筋肉注射を局部的電気刺
激なしに仕皮的に行なった。

その結果によれば、局部的な電気的な刺激を与えず有害
な局部的又は全身の副作用が全くない条件のもとでも治
療きれたｔ　−Ｆ　Ａの血液レベルを筋肉注射後即座に
持続的ｌＣ得ることができ、及び多数の実験動物におけ
る注射では冠状動脈トロンボ分解的効果が誘発され、こ
れが６時間もの長い間持続する。

その結果はまたヒドロキシルアミン又はその非毒性の塩
とメチルアミン又はその非毒性の塩との組合せもまたそ
れが人間に投与されるとき吸収の増大及びｔ　−Ｐ　Ａ
の効果の延長に有効であることを示している。

〔材料と方法〕

材料： 組換えＤＮＡ技ＷＩ（ｒｔ　−Ｆ　Ａ　）によって製造
された濃度０．５〜５０１ｄのｔ　−Ｐ　Ａは南サン７
ランシｘ＝ｔのジエネンテック社（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｂ
、　Ｉｎｃ、。

５ｏｕｔｈ　Ｓａｎ　Ｆｒａｐｃｉａｃｏ　）より供給
された（ＬｏｔｓＢＨ００４ＤＡＸＳＨ９０１７及び４
８６９−４２）。賦形剤だけの筋肉内又は静脈内投与は
ウサギ又は犬（３１羽のウサギ及び６匹の犬）の機能的
に又は免疫放射分析的に検出できる血しょうｔ　−Ｐ　
Ａ　Ｋ何ら影響を与えなかった。賦形剤だけの中の１−
ＰＡの筋肉内投与によってはどちらの種においても最初
の３０分以内に血しょうｔ　７　Ｐ　Ａの高揚を実質的
には全く生じさせなかった。グロテアーゼ凪害剤との既
知の相互作用又はその既知の迅速な吸収ゆえに選ばれた
ジェタノールアミン、ジエチルアミン、ジメチルアミン
、エタノールアミン、エチルアミン、ヒスタミン、ヒド
ロキシルアミン、メトキシアミン及びメチルアミン等の
い（つかの可能性ある吸収エンハンサ−を、単独ｋ又は
組合せて濃度０．０１５Ｍ〜１．２０　Ｍにおいて評価
した。アデノシン及びヒドララジンもまた局部的血流を
増加させｔ　−Ｆ　Ａの吸収を増加させる血管拡張剤と
しての潜在的な価値ゆえｋも評価した。浸透圧の高い生
理的食塩水（０，６３Ｍ）及びメチルアミンを有する高
浸透圧の生理的食塩水もまた評価した。

ヒアルロニダーゼ（シグマ社、タイプＩ　Ｖ　８　、１
０００ＵＡ）は拡散及び吸収を容易にするための潜在的
有用性ゆえにいくつかの実験の注射媒質に加えられた（
　１　ｍｙ／ｒｓｌ　）。薬品はどれも注射前に血しよ
う中のｔ　−Ｆ　Ａ又は３７℃で１時間ｐＨ７，４のリ
ン酸塩緩衝生理的食塩水との生物体外での培養にもかか
わらず、免疫学的に検知できるｔ　−Ｐ　Ａ及び機能的
な活性のｔ　−Ｐ　Ａのどちらにも影響を与えなかった
。

実験動物： 評価を必要とされる種々の条件のもとで小動物槌のｔ−
ＰＡの吸収に対するエンハンサ−の効果の特性を明らか
にするために、ｌ初２５０羽の非敏速な、雄の、体重ｔ
９〜１５ＫＦのニューシーラント白ウサギについて実験
を行なった。人手できたｔ　−Ｐ　Ａの全量が一定量し
かなかったので大きな動物よりもむしろウサギの方を選
択した。いくつかの実験では、上述の５Ｏｂｅｌの論文
に記述されているよ５にして局部的な電気的刺激有り又
は無１−の露出された筋肉に直接的に注射を行なった。

ほかの２１羽化ついては経皮的な注射を行なりたこれら
の実験は大きな濃度と量のｔ　−Ｐ　Ａ及び経皮的注射
を使用し、電気的刺激は与えなかった。ウサギの短期間
の研究のために、動物Ｋ　１０　ｒノψ（のペントター
ルナトリウムと５０　ｍ１ｌｋｌのα−クロラローゼで
麻酔をかけ、そして頚動脈から動脈の血圧を監視しまた
頚部の動脈から連続的な血液試料を獲得するように器械
を取り付けた。はとんどの実験において縫工筋の両側に
横たわる皮ふ及び皮下組織を切開し、筋肉を露出させ、
ｔ−ＰＡ又は賦形剤だけを露出された筋肉中に直接的に
注射し、そして連続的な血液試料を内在する頚部の静脈
のカテーテルから３０分の間連続して獲得した。いくつ
かの動物において、骨格の筋肉の血流は前述のように３
０分間に５７秒の割合で９〜１４ｖ／パルス、’；ｌ、
Ｑｍｓｅｃでの筋肉の電気刺激によって注射位置で増大
した。

後で研究された２１羽のウサギ及び１３匹の犬の各々に
おいて、定銭された吸収を促進する因子が臨床的に適用
できる条件を模倣した条件のもとで試験できるように１
筋肉の露出なしＫまた電気的刺激なしに経皮的に注射を
行なった。これらの実験に対して、注射媒質中のｔ　−
Ｐ　Ａの濃度は、それぞれ１又は２−の二つの注射につ
いて５　ｒｎ９７ｍｌ（ウサギ）及び１０　Ｗ／ｋｌ　
（犬）の範囲内にｎ節された。

犬の研究に対しては、体重的２０ｋｐの動物を、皮下Ｋ
ｌ■／ｋｇの硫酸モルヒネで感覚脱失後１２．５ｍｐ／
ｋｇのチオペントタールと６０　ｍｙ／ｋｔのα−クロ
ラローゼとで麻酔をかけ、気管内の管を経て７−−ヴア
ード呼吸マスクで部屋の空気で通気し、そして血液学的
に監視した。ｔ　−Ｐ　Ａ又は賦形剤だけの２艷の注射
を２１番ステンレス・スチールの針を通して注射器を経
て手動でかつ経皮的に耕工筋の筋肉内へ投与した。冠状
動脈のトロンボ分解の研究のために、冠状動脈血栓症を
先づトロンボゲン銅巻き輪で引き起し、そして、冠状動
脈トロンボ分解がｔ　−Ｆ　Ａで誘発されたとき、血管
造影法的に関連情報を得た。

ｔ　−Ｐ　Ａを有する賦形剤の部内注射の短期間の組織
学的効果を評価するために、ウサギ及び大の注射位置を
最終の血液サンプルを収集後ただちに切り取り、そして
ｔ　−Ｆ　Ａのない同容積の賦形剤が同時に注射された
反対側の類似の部分と連動する縫工筋のそれらと比較し
た。組織をただちにリン酸ナトリウム緩衝１０％ホルマ
リン中に固定しそして光学顕ｌ！！鏡による検査のため
に従来どおり処理した。

ウサギにおける注射の長期間の局部的効果の形態学的研
究のために１注射位置をリサミングリーンで筋外膜表面
上に印し、皮ふの切り口を閉じ、そして麻酔及びエンハ
ンサ−１ｔ−ＰＡ、又は両方を有する又は無い賦形剤の
投与後動物を回復させた。比較対照及び試鹸組織標本（
すなわち、賦形剤だけを注射された約４　ａｎ”の横断
面積、及び賦形剤だけを注射された反対側の類似の部分
と連動する面積部分、及びｔ　−Ｐ　Ａの有る又はない
賦形剤に加うるにエンハンサ−で注射された反対側の類
似の部分と連動する筋肉を有する１ｃＩｒＬの厚さの塊
）を部内注射から４８〜９６時間後に死体解剖で得て固
定し、そして顕微鏡による検査のため連続的な５μｍの
勇断面として調製した。

放射標識トレーサーの浸透に対するエンハンサ−の効果
の研究のために、体重２００〜４５０ｇの堆のＳｐｒａ
ｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ　ラットを使用した。

血しよう試料の評価分析： 免疫放射分析的に検知できると）ｔ−ＰＡ抗原を１０　
ｍＭの最終濃度のクエンｒＷ！塩を有するＯ°〜４℃（
ｒ）　ｐ　ｘ　ン酸塩ハキュテイナ−（Ｖａｃｕｔ３ｉ
ｎｅｒ　）管内に頚部静脈に内在するカテーテルを経て
収集された連続的な血液試料について測定した。血しよ
うを１６００９で１０分間遠心分離によって４℃で分離
し、評価分析まで一２０℃で貯蔵した。ウサギのｔ　−
Ｐ　Ａ抗原をミクロタイター板の井戸に吸収されたアン
チｔ　−Ｆ　Ａ免疫グロブリンＧＩＣｔ−ＰＡを結合さ
せ結合されたｔ−ＰＡＫＩ−アンチ−ｔ　−Ｐ　Ａを結
合させた後に前述のように２位置免疫放射分析的評価分
析（ＩＲＭＡ　）手順を使って評価分析した。過剰のＩ
−アンチ−ｔ　−Ｆ　Ａの除去後、結合したＩ　−ｔ　
−Ｐ　Ａの量をｒシンテレ−９３フ分光測定法によって
測定した。アンチ−１−ＰＡ抗血渭及び対照イ準として
使用した精製ヒ）　１　ラ／　−−ｒ　ｔ　−Ｐ　Ａは
Ｄｅｓｉｒｅ　Ｃｏ１１ｅｎ教授によって提供された。

便宜のため、犬のヒ）ｔ−ＰＡ抗原をＩ　ＲＭＡ手順を
使って標準化された商業的に入手できる酵素結合免疫吸
着評価分析（ＥＬＩＳＡ）手順（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｄ
ｉａｇｎｏｓｔｉｃａ　）を使って評価分析した。ウサ
ギ又は犬の内生的なｔ　−Ｆ　Ａは使用されたｌｌ５Ａ
評価分析においてヒ）ｔ−ＰＡと交叉反応しないがゆえ
に、結果に影響しなかった。

ｔ　−Ｐ　Ａの機能的活性をフィブリン台板を使ってミ
クロタイターアミド分解（ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ　）色
素を作る修正子ＭＫよって評価分析した。合板上の繊維
素溶解の帯域は面積測定によって測定した。

ヒトヒフリノーゲｙ　（Ｋａｂｉ　Ｖｉｔｒｕｍ　）、
トロンビｙ　（Ｓｉｇｍａ　）及びＣａＣ１，（０，０
５Ｍ　）で調製された合板を、クエン酸塩化された血し
ようを蒸留水で稀釈しく１：２０）、酢酸を使ってｐＨ
を大忙対しては５．８及びウサギに対しては６．２へ調
整し、遠心分離し及び０．８％ＢＳＡ含有イミダゾール
緩衝生唾的食塩水（ｐＨ７，４）中の沈澱の可溶化して
調製された真正グロブリン画分の連続的な稀釈溶液に曝
した。それらを３７℃で１８時間＠養した。血しょうｔ
　−Ｆ　Ａの機能的活性の定量分析は修正ミクロタイタ
ーアミド分解（ａｍｉｄｏｌｙｔｉｃ　）手順を使って
行なった。両手順はｔ　−Ｆ　Ａに対する国Ｗ４標準調
製（Ｉ　Ｒ，Ｐ−ｔ−ＰＡ　）に関して標準化された。

生体内のｒａ維素溶解活性に関する筋肉的投与されたｔ
　−Ｆ　Ａの効果を血しよう中のフイピリノーゲン、プ
ラスミノゲン及びα−アンチプラスミンの逐次分析によ
って犬忙ついて６時間にわたって監視した。

血管の浸透性の変化評価： 全（ｔ−ＰＡと関係がない微小脈管構造の浸透性の指標
に関する吸収エンハンサ−の効果の研究に対して、血管
の浸透性を血管内の放射標識トレーサーを使って観測し
た。２種類の小動物種（ウサギとラット）を用いて放射
ＰＪ織動物質れ持させた。ｔ　−Ｐ　Ａの吸収エンハン
サ−がそのエンハンサ−の筋肉注射の位置の血管の浸透
性に影響な与える程度は血管内のトレーサーのｗ１胞外
の空間への排出によって示された。Ｃｒ　Ｉｓ識赤血球
（Ｃｒ−ＲＢＣ）及びＣｏ−標識ＥＤＴＡをそれぞれ血
管内及び細胞外空間のマーカーとして使用した。血管内
Ｉ−標識ＢＳＡ（ｉ−ＢＳＡ）Ｋ対するエンハンサ−の
筋肉注射位置の浸透性をＩ／Ｃｒ　（ＴＢＩＲＩｌｏｒ
　）の組織対血液同位体比（ＴＢＩ）Ｌ　）を測定する
ことによって決定した。類似したやり方で、Ｃｏ／Ｃｒ
　（７）　ＴＢＩＲ（ＴＢＩＲ−Ｃｏ／Ｃｒ　）を使用
して組織内のＩ−ＢＳＡに対し潜在的に利用できる血管
外空間の大きさを評価した。遊離の１は５ｅｐｈａｄｅ
ｘゲルＭ　ｍ　Ｋよって注入物質から除外され、そして
血しよう及び組織画分及びホモジネートの放射能は、５
％トリクロ四酢酸による沈澱によって示されたように、
結合されたタンパク質９９％以上であることが示された
。

この型の最初の案験において、体ｇ　２５０〜４００ノ
の雄のＳｐｒａｇｕｃ−Ｄａｗｌｅｙラットにベントパ
ルピトールナトリウム（４０１ｎ９／？　）を使って麻
酔をかけた。左大ルｑ部の静脈と右頚動脈を露出し、そ
してカニユーレを挿入した。Ｃｒ　−ＲＢＣｓ　（４０
％のへマトクリトを有する０、６〜０．８　ｍの緩衝懸
濁液中の１５０μＣｉ　）をエンハンサ−有り又は無し
の賦形剤の筋肉注射の５分前に大腿部の静脈に注射した
。幾匹かのラットにおいて、コロイド状カーボン（１−
の２％懸濁液）を大腿部の静脈からエンハンサ−有り又
は無しの賦形剤を筋肉注射し、潜在的に生じた内皮の連
結の変化が特定の場所に集中することを顕微鏡によって
検査した。Ｉ　−ＢＳＡ（１３μＣｉ　）及びＣｏ　−
ＥＤＴＡ　（１０μＣｉ　）　（おのおの３０〜５０μ
ｌ）を静脈内に注射し、そしてその後ただちに吸収エン
ハンサ−の有り又は無しの０．１−の賦形剤を露出され
た縫工筋の両側に筋肉内注射した。筋肉注射のおよそ６
分後、３種の放射標識トレーサーの血中レベルの定量の
ために頚動脈のカニユーレからヘパリンで凝血防止され
た注射器中へ２ｄの血液を取り戻した。１分径循環を止
めるため心臓を取り除き、そして両方の注射位置を切除
した。血液及び骨格の筋肉の放射能をバックグラウンド
及びスピルオーバーに対する自動化補正を有する３チヤ
ンネルｒシンチレ一シヨン分光計で定量した。コロイド
状カーボンを与えられた動物については、切り取られた
注射位置を１０％緩衝ホルマリン中で固定した。ｒシン
テレ−９１フ分光計による放射能の定を後、光学顕ｇ鏡
で容器の壁のカーボン粒子の付着によって詳細に描写さ
れた内皮の連結の確認できるように組織を処理した。

追加の実験を１５０ψｔのα−クロラローゼで麻酔し、
同様に器械を取り付けた誰のニューシーラント白ウサギ
について行った。Ｃｒ　−ＲＢＣｓ　（４０％のへマド
クリットを有する４−の緩衝懸濁液中の６００μＣ３）
及びＩ−ＢＳＡ（３９μＣｉ）をｔ−ＰＡ賦形剤の筋向
注射の１５及び１０分前に頚部静脈のカテーテルを経て
注射した。後で、０．１ｄのｔ　−Ｐ−Ａ賦形剤を、露
出された縫工筋中へ筋肉内注射し、また吸収エンハンサ
−を有する０、１−の賦形剤を反対側の類似の部分と連
動する筋肉中へ注射した。注射位置の後の確認を容易に
するためフルオレセイン０．０１％を注射媒質中に含ま
せた。

筋内注射後選ばれた時間を置いて、血液試料を頚動脈か
ら抜き取り、心臓を飽和塩化カリウムの大粒の丸薬の注
射によって止め、両方の注射位置を紫外光線の使用によ
ってただちに輪郭を描かせそして切り取り、そして血液
と組織の放射能をｒシンチレーション分光測定法によっ
て定量した。

筋肉内に注射されたｔ　−Ｐ　Ａの吸収エンハンサ−の
生理的効果： 心臓の速度、動脈の圧力及び呼吸の速度についての吸収
の増大に関して試験した薬品の効果をウサギに関して評
価した。ヘモグロビン及びメトヘモグロビンと同様に動
脈の血液のガス及びｐＨを連続的に測定した。ヒドロキ
シルアミンは多量のｔ　−Ｐ　Ａを可溶性にするために
必要な注射量中で吸収を最大にするために必要とされた
高い濃度において組織の広範囲に及ぶメトヘモグロビン
血症、低酸素血症、一時的な頻脈、及び低血圧症を引き
起した。しかしながら、局部的電気刺激を受けたウサギ
に関する観察に基づいて、０．６３Ｍのメチルアミン塩
ｒＪ！Ｒ塩単独及び０．６３Ｍのメチルアミン塩酸塩と
０．０７９　Ｍのヒドロキシルアミン塩酸塩との併用は
ｔ　−Ｐ　Ａの吸収エンハンサ−として見込みのあるこ
とが見出された。

後で行なわれた長期の実験に用いられた条件は、注射媒
質それ自体の容ｌｌｉ！（０，０６〜４．０ｍｊ、ｎ　
−１３）の；ｐＨ１全ｔ　−Ｆ　Ａ用量、並びに一定に
保たれた注射１（ウサギ当り１−の注射４つ）を有する
所定の吸収エンハンサ−の濃度及び使用された（ｎ−２
７）電気的刺激の；及び注射位置の電場刺激（ｎ−２２
）のｔ　−Ｆ　Ａの吸収についての効果を定量するため
に最初に着手されたウサギの数群に関する研究から入手
した情報に基づいて選ばれた。

これらの短期実験の結果及び組織学的発見から判断して
、メチルアミン塩酸塩（０，６３Ｍ）だけ又はこれと低
濃度のヒドロキシルアミン塩酸ｆｉ　（０，０７９Ｍ）
との組合せを、経皮的に注射されたｔ　−Ｐ　Ａの筋肉
内吸収を増大させるための無傷のウサギ及び犬について
の以後の評価のために選択した。

統計的分析ニ ゲループデータは平均上ＳＥ（標準誤差）として表現す
る。グループ間の違いはばらつきの解析によって評価し
た。

結果 ｔ　−Ｐ　Ａ　、賦形剤だけ、又は外因的なヒ）１−Ｐ
Ａなしの吸収エンハンサ−のいずれかで補われた賦形剤
の筋向注射によっては３１羽のウサギ又は６匹の犬のい
ずれについても３０〜６０分の間隔の観察の範囲内では
血しよう中に免疫放射分析的に検出できるｔ−ＰＡは引
き出されなかった。

血しよう中の機能的なｔ　−Ｐ　Ａ活性の高揚は、見せ
かけの操作（ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　）　、注
射位置での電場刺激、又は外因的なｔ　−Ｐ　Ａの投与
のない吸収エンハンサ−の投与にもかかわらず検出でき
なかった。

可能性ある吸収エンハンサ−で補われた媒質を有するｔ
　−Ｐ　Ａの筋肉内注射後の吸収：局部的な電気刺激及
び露出された筋肉への注射を伴った短期実銭。

ヒドロキシルアミン及び注射媒質に０．６３ｒｉ（の濃
度で有機アミン傾から選ばれた数５１の可り上注ある吸
収エンハンサ−及び血液力学的動揺を避けるために選ば
れた濃度のヒドララジン（０，８８ｍＭ　）、アデノシ
ン（７ｍＭ　）又はヒアルロニダーゼ（１０００Ｕ／−
）のウサギに関する短期の効果を１２０羽のウサギにつ
いて評価した。吸収増大薬品の不存在下において、最高
の血しょうｔ　−Ｐ　Ａ濃度は注射後５分で生じそして
かろうじて検出できた（８±２（Ｓ　Ｄ　）　ｎ９鷹、
ｎ−３）。また、エチルアミン（最大１６ｎレー、ｎ−
３）及びヒアルロニダーゼ（３８ｎ９／ａｔ、ｎ−２）
について低いピークが見られた。ヒドララジン又はアデ
ノシンは独立Ｋｔ　−Ｆ　Ａピークレベルをほんｋささ
いであるが高揚させた（ｎ−３）。ヒスタミン（０，６
５号鳴）は非効果的で、僅かに１８ｎり１ｍ　（ｎ　−
５）　Ｌかｔ　−Ｆ　Ａを高揚させなかった。残りの試
験した薬品の中で、僅かにジエチルアミンＣＢ８ｎ９／
ｌｄ、ｎ−３）、メチルアミン（２２４±３２　ｎ９鷹
、ｎ−１６）及びヒドロキシルアミン（３７１±４４　
ｎｇ／ｍ、ｎ−９）だけがｔ　−Ｐ　Ａの吸収の著しい
増大を引き出した。メチルアミン０．６３Ｍと０．３１
５Ｍのヒドロキシルアミンとの併用は注射後５分、最大
５６２±１３０ｎ鉤（ｎ−９）という平均ピークまで血
しょうｔ　−ｐ　Ａを増大させた。これらの実験のおの
おのにおいては、ウサギの筋肉が小塊であったことに鑑
み、四つの離れた注射位置を使用した。注射された全体
４−容積中のｔ　−Ｆ　Ａの全量を分析によって一致す
る（　Ｚ　５−２．２６１ＫＩ／ｋ１体重）ことを証明
した。ヒドロキシルアミン又はメチルアミン（０，６３
Ｍ）を同濃度含む生理的食塩水はいずれかのアミン（ｎ
−６）によって引き起された吸収増大の３０％以下だけ
ｔ　−Ｆ　Ａの吸収を増大した。注射媒質中の０．６３
Ｍのメチルアミンに０．６３ＭのＮａＣ１を添加しても
ｔ　−Ｆ　Ａの吸収はメチルアミン赴けによってひき起
される吸収を検出可能なまでに超えるほどは増大しなか
った。ヒドロキシルアミンを吸収の唯一のエンハンサ−
としｔ−ＰＡの注射量を一定Ｋ　（２，４ｒｒｂｙＡｔ
ｔ　）保ったところ、注射後５分以内に血しょうｔ　−
Ｆ　Ａのピークが生じ、そして注射の全容積の一敗とし
て０．０６−〜１−及び４ｄ（４つの位置で１ｍづつ）
注射されたときそれぞれ４１±１２〜１１９±３３及び
３５６±４８　ｎｇ／ＲｔＫ増加した。０．６３Ｍのメ
チルアミンを含有する注射媒質の容積を一定ｋ（各ウサ
ギについて１ｆｌｔの注射４回）Ｋ保ったところ、血し
ょうｔ−ＰＡのピークは２〜ｌ　３　ｒａｇ／ｋｇの用
量と共に各用量（各用量の二重の実験の結果の平均、ｆ
ｌ−２６）で５分以内に生じ平均１８０〜９３６　ｎｇ
／−に一本調子に増加した。付加的な実験（ｎ−２２）
ＩＣよって、ヒドララジンは電気刺激に匹敵する効果を
引き起し、二重は付加的でなく、おのおのの増大したｔ
　−Ｐ　Ａのピークは平均９６％だけ０．６３Ｍのメチ
ルアミンを唯一のエンハンサ−として使用した場合のピ
ークに匹敵することを証明された。

動脈の圧力をわずかに減少させ心臓の速度をわずかに増
大させた（両方とも１０％以下）ヒドララジン及びアデ
ノシンを除いて、注射後３０分の間隔にわたって監視し
た動脈の圧力又は心臓の速度に最も一貫した効果を及ぼ
した薬品はヒドロキシルアミンであった（表１）。

基準線の値は心臓の速度（ＨＲ）の平均と平均の動脈血
圧（ＭＡＰ）である。注射後の結果は基準線をもとＦｃ
ｓ物間変動を標準化するために比較対照値の％で表現す
る。４つの露出された位置のおのおのの１−の注射は局
部的電場刺激のｍ／Ｃ行なわれた。血液力学的変化は、
注射容積の割合即ち体重に対するメチルアミン、ヒドロ
キシルアミン、又は両者の量が犬についてよりウサギに
ついての方が高いがゆえにウサギにおいていっそう顕著
であった。注射後１時間のメトヘモグロビンは０．６３
Ｍのヒドロキシルアミンを与えた犬では１１％を超えた
が、０．６３Ｍメチルアミンだけ又は０．６３Ｍメチル
アミンＩＣ０，０７９Ｍのヒドロキシルアミンを併用し
て与えた犬では検出できないか又は０．６％より少なか
った。ヒドロキシルアミンを与えられた（しかしメチル
アミンがない）ウサギは体重当りのアミンの割合が高い
がゆえに４８％という高さであった。

メトキシアミンもまたヘモグロビン血症、低酸素血症及
び低血圧症をひき起した。ヒドロキシルアミンは注射後
ただちに平均動脈圧力を初期に１０〜１５　ｗＨｇの低
下させ心臓の速度を３０％へ増大させた。これらの血液
力学効果は２分以内にビークに達しそしておよそ５分以
内にひいた。後で、平均動脈圧力は深い低酸素血症（い
ちじるしいチアノーゼ）とともにいちじるしく低下しそ
してメトヘモグロビン血症は平均４８％であった。生理
的食塩水、賦形剤、ｔ−ＰＡ及び賦形剤、又はｔ−ＰＡ
及びメチルアミン（０，６３Ｍ）又は０．６３Ｍのメチ
ルアミンと０．０７９Ｍのヒドロキシルアミンとを併用
して補われた賦形剤、吸収の増大のため最も期待できる
が有害な・血液力学的効果が全くないよ５に選定された
組合せを注射された動物は、有為な血液力学的変化や低
血圧症を全く示さなかった＠ヒドロキシルアミン、メチ
ルアミン及びその他の薬品のすべてはと）ｔ−ＰＡで補
われ３７℃で１時間培養された血しよう中の免疫放射分
析的に検出されるｔ　−Ｆ　Ａを、それがただちに評価
分析されようとも０＠〜４℃で１ケ月貯蔵後評価分析さ
れた場合であっても、変化させなかった。

電気刺激を伴う注射の！Ｍｌ病理学的効果：ウサギだつ
いて。賦形剤だけの中のｔ　−Ｐ　Ａの注射（ｎ−４）
によってほんの小さな骨格の筋肉の組織病理学的に検出
できる外瑯が作られ、そしてその外傷はそれ自体が機械
的な外ｆｆ１（すなわち、針の挿入と筋肉内への不活性
な賦形剤の注射）と一致する模優の中の局部的間質吐出
、血及び微小点状の筋壊死を発現させた。これらの変化
は賦形剤だけの又は等張の生理的食塩水を有する賦形剤
（ｎ−６）の注射について見られる変化と見分けがつか
なかった。

ヒドロキシルアミン（一つの位置に注射されたｉ、　ｏ
　ｔｙ中０．６３Ｍ）は注射後４８時間に容品に明白な
実質的な筋肉の壊死（ｎ−２７！！Ｉ７物）をひき起こ
した。この薬品の注射は間質細胞の間にある出血の細い
外套によって囲まれた骨格の筋肉のばらばらの帯域の壊
死をひき起した。壊死の程度は注射の量に比例したがｔ
　−Ｐ　Ａの存否によって影響されなかった。見られた
最も大規模な傷害でさえ注射の位置のすぐ隣り近辺に限
定された。対照的に、０．６３Ｍのメチルアミンは０．
０６〜ｌＯ−／位置（ｎ−２３）の注射ｇｋにおいてい
ちじるしく小さな局部的傷害をひき起こした。たいてい
の場合に注射後４８時間に現れた傷害はｔ　−Ｐ　Ａ賦
形剤だけの注射の後に見られるものより大きくはなかっ
た。０．６３Ｍのメチルアミンを１−注射したいくつか
の位置・において、針の通った跡に平列にされたわずか
な筋壊死及び細胞組織の間にある出血がみられた。

犬について。犬について０．６３Ｍのメチルアミン（ｎ
−３）又はメチルアミンと低濃度のヒドロキシルアミン
（０，６３Ｍのメチルアミンに加うるｋＯ，０７９Ｍの
ヒドロキシルアミン）（ｎ−３）との併用物を注射した
ところ、細胞組織の間にある浮腫、出血及び激しい炎症
を含むわずかな形態学的変化をひき起すだけであった。

点状の筋壊死は最小であるか又は存在しなかった。細胞
組織の間にある浮腫、出血及び炎症の程度は注射の量に
関係があった。すべての場合そのような異常は注射位置
のすぐ隣りの近辺に限定された。形態学的異常及び筋壊
死の程度はメチルアミン又はメチルアミンと低濃度のヒ
ドロキシルアミンとの組合せを注射した位置においては
賦形剤だけを注射した骨格筋肉におけるよりも大きくは
なかった。電気刺激なしで経皮的な注射後の組織学的効
果は各吸収エンハンサ−を注射して後に電気刺激を与え
た場合について見られたものと一致した。

経皮的な層内注射の結果： 全体として、最？９７に研究された２２９羽のウサギか
ら得た結果は、０．６３Ｍのメチルアミン又は０．６３
Ｍのメチルアミンと０．０７９Ｍのヒドロキシルアミン
とを併用したものは、露出された筋肉への直接的注射を
行ない注射位置に局部的な電気的刺激を続いて行なった
後有害な局部的影響又は生理学上の撹乱を誘発すること
な（ｔ−ＰＡの吸収を容易にすることを示した。従って
、追加の研究は筋肉の露出なしにかつ電場刺激なしに経
皮的忙注射された２１羽のウサギについて行なわれた。

注射媒質中のｔ　−Ｆ　Ａの量を全量４号勺まで増大さ
せた。

１１１ｄの２回の注射を各動物に投与した。０．６３Ｍ
のメチルアミンと０．０７９Ｍのヒドロキシルアミンを
併用したものについて血しょうｔ　−Ｐ　Ａレベルのピ
ークが５分以内に生じ、そして平均１３４±２１であり
、吸収エンハンサ−のこの組合せが最も効果的であるこ
とがわかった。生理的食塩水（０，６３Ｍ）又は賦形剤
だけでは注射後３０分以内の間隔の観察では実質的な高
揚をひき起さなかった。これらの結果によって電気刺激
又は皮ふの切開を通じて筋肉の露出に対する必要なしに
筋肉注射後即座にｔ　−Ｆ　Ａの治療的血液レベルを達
成することの可能性が確認された。それらは血管の浸透
性を増大する本発明の特定の吸収エンハンサ−を使用す
れば注射後５分以内忙血液レベルのピークが得られるこ
とを示すものであった。

筋肉内に注射されたｔ　−Ｐ　Ａの吸収及び犬に関する
その結果： ｔ　−Ｐ　Ａ　Ｋよる効率的な冠状動脈のトロンボ分解
は血しよう中のｔ　−Ｆ　Ａの迅速かつ維持された高揚
を必要とする。両者が達成されたかどうかを決定するた
めに、また繊維素溶解系及び冠状動脈の血栓に対する筋
肉内ｔ　−Ｐ　Ａの機能的ｉ撃を評価するために１追加
の実験が犬たついて行なわれた。

最初の結果は、吸収エンハンサ−の不存在下で各２４の
注射を２回同時に行なって多量のｔ−ＰＡ（１０ｉ１！
Ｐ／ｋＰ）を筋肉内投与しても注射後迅速には血しょう
ｔ　−Ｆ　Ａ値を高揚させないことを示した。

かくして大量、のｔ　−Ｐ　Ａが投与されたＫもかかわ
らず注射後１５分の値は平均僅か４４　ｎｇ／ｒｄ　（
ｎ−２）であった。しかしながら、２匹の犬のおのおの
忙おいて（犬出りｎ−１０の観察）、注射後９０分又は
それ以上では高揚が平均３３９±４２及び６２２±８６
　（Ｓ　Ｄ　）　ｎｇ／ｍＷ保持さレルコトカ観測され
た。これらは全体で６時間の観察の間隔維持された。研
究された２５０羽やウサギ及びこれらの２匹の犬の結果
を考慮するならば、筋肉内に与えられたｔ　−Ｐ　Ａの
反応は２相的であると思われる。早期の吸収は吸収エン
ハンサ−の存在に依′存すると思われる。遅い血しよう
の高揚は二ンハのｔ　−Ｐ　Ａの遅い進入を反映するよ
うに見えた。

このことは賦形剤だけ、０．６３Ｍのメチルアミン又ハ
０．６３　Ｍのメチルアミンと０．０７９Ｍのヒドロキ
シルアミンとを併用したものを有する１　０９／に９の
ｔ　−Ｆ　Ａを筋肉内に与えられた犬１（ついて行なわ
れた実験；でよってｍｓされた。２０分以内の１−ＰＡ
の高揚はエンハンサ−なしではささいで、平均僅かに３
２　ｎｇ／ｍｌ　（ｎ−３）で、０．６３Ｍのメチルア
ミンではわずかで、平均１２６　ｎ　ｇ／ｍ／　（ｎ　
−３）であり、そして０．６３Ｍのメチルアミンと０．
０７９Ｍのヒドロキシルアミンとの併用でいちじるしく
、平均２９７　ｎｇ／ｖｇ　（ｎ　−３）であった。０
．６３Ｍメチルアミンと０．０７９Ｍのヒドロキシルア
ミンとともに行なったｔ　−Ｐ　Ａの層内注射は、早期
のエンハンサ−依存ピークと全体で６時間の観察の間持
続する高揚の両方を生じたが、賦形剤だけでは単に遅い
高揚が現われただけであった。血しよ５ｔ−ＰＡ抗原の
高揚は注射されたｔ　−Ｐ　Ａの機能的活性に対する抗
原活性の測定比と通常一致する機能アミンとヒドロキシ
ルアミンとを有するｔ　−Ｆ　Ａの筋向注射後の血しよ
う中のｔ　−Ｆ　Ａ抗原に対する機能的活性の割合は平
均０．３１±０．０２　（Ｓ　Ｄ　）ＩＵ／ｎｇ　（３
匹の犬の注射後６時間にわたって得られたｎ−４４の試
料）であった。血しょうｔ　−Ｆ　Ａの高揚の大きさ及
び持続性は注射された約５０％のｔ−ＰＡＫついて研究
された６時間の生物学的利用能と一致する。α２−アン
チプラスミンは機能的ｔ　−Ｆ　Ａ活性の持続した高揚
を反映して６時間にわたって７０％まで減少したが、循
環するフイプリノゲンは検出できるほどは低下しなかっ
た。

エンハンサ−が全くないと犬の血液中のｔ　−ＰＡは１
５分後僅か４４ｎｇ／ｄｋ：すぎなく、そして２４０　
ｎｇに到達するためＶＣ２時間４０分以上を必要とした
が、０．６３Ｍのメチルアミン塩酸塩と一緒Ｋ　（０，
０７９Ｍ　）ヒドロキシルアミン塩酸塩エンハンサ−の
使用によって、試験した犬のｔ−ｐ人しベルは５分以内
に約２００　ｎｇ／ｄ　Ｋ　１そして１５分以内に約３
００１ｇ／−に達した。

冠状動脈のト四ンボ分解に関する効果：材料と方法の項
において示したように、冠状動脈血栓は経皮的に挿入さ
れた内在する冠状動脈の銅コイルを使って犬に誘起され
た。コイルは極めてトロンボゲン性であり、２±１（Ｓ
Ｄ）分以内！１ｃ（ｔ−ＰＡを全く与えられなかったｎ
−１７の比較対照の犬）持続する冠状動脈血栓症を一貫
して引き起す。十分なヘパリン投与によって閉塞された
冠状動脈の再疎通が引き起されるのを防止する。

０．６３Ｍのメチルアミンと０．０７９Ｍのヒドロキシ
ルアミンとを併用して筋肉内に投与された１０〜／々の
ｔ　−Ｆ　Ａが長い間隔にわたって持続する生物学的活
性をもって迅速に冠動脈のトロンボ分解効果を引き起す
かどうかを測定するために１銅のコイルで冠状動脈血栓
症を引き起こされた２匹の犬について研究を行なった。

閉塞作用の凝固を血管造影法的に確認し、そして２つの
同時の経皮的な０．６３Ｍのメチルアミン塩酸塩と０．
０７９　Ｍのヒドロキシルアミン塩酸塩との中のｔ−Ｐ
Ａ（全用量１ｏ　ｒｎｐＡｔｔ　）の各２−の注射によ
って血栓症が確認された後７〜１０分後にト四ンボ分解
を開始させた。両方の犬において、冠状動脈内のト日ン
ボゲン性銅コイルの持続した存在にもかかわらず６０分
以内に凝固分解が生じた。その上、内在するトロンボゲ
ン的銅コイルによってひき起されると予想された再度の
再閉塞作用後の繰り返しの再疎通によって明らかにされ
たようＫたとえヘパリンが全く与えられなくても、冠状
動脈のトロンボ分解効果はｔ　−Ｆ　Ａの単一の筋肉投
与後６時間の観察の間隔を通して明白であった。これら
の結果は、（１）血しよ５ｔ−ＰＡの実質的な高揚は吸
収エンハンサ−が使用されたとき筒内注射後数分以内に
得られる可能性があること、及び（２）血栓分解効果は
注射径小なくとも６時間持続さ屁ることを示す。

要約すると、 （１）筋肉内に投与されたｔ　−Ｆ　Ａは吸収エンハン
サ−の不存在下ではゆっくり吸収され、そして血しよう
のレベルは実質的にほんのゆっくりと上昇するが少なく
とも６時間持続する。

（２）注射媒質中にヒドロキシルアミン又はその塩を包
含させるとｔ　−Ｆ　Ａの敏速な吸収を生じると共に注
射後５分以内に血しょうｔ　−Ｆ　Ａのいちじるしい高
揚を生じる。

（３）早い吸収を増大するために必要とされるヒドロキ
シルアミンの濃度は、体重を当りに与えられた薬品の量
が大きいがゆえ如犬に比べてウサギにおいて特に著しく
局部的偏置、メトヘモグロビン血症及び血液力学的撹乱
を生じる。

（４）ｔ　−Ｆ　Ａの敏速な吸収はメチルアミン又はそ
の塩即ち、高濃度のヒドロキシアミンに見られるような
有害な局部的努力又は組織的な撹乱を示さない薬品によ
って促進される。

（６）メチルアミン又はその塩と“低濃度のヒドロキシ
ルアミン又はその塩との組合せは、メチルアミン又はそ
の塩だけで見られるもの以上に初期吸収を増大し、有害
な局部的又は組織的な影響もなかった。

（ａ）　ｔ　−Ｆ　Ａの実質的な初期吸収は局部的な電
気刺激なしに無傷のウサギ及び犬に経皮的な筋肉注射に
よって引き起される。

（７）トロンボゲン的冠状動脈内飼コイルがきまった場
所に残って寸６りそしてヘパリンが全く与えられないと
きでさえ、血しよう内のｔ　−Ｐ　Ａ活性の機能的評価
分析、生物体中でのα２−アンチプラスミンの消費、及
び繰り返しの凝血分解を証明する連続的な冠状動脈の血
管造影図から判断するならば、上記エンハンサ−を有す
る筋向注射後吸収されたｔ　−Ｆ　Ａは犬において６時
間の！！！２察を通じて機能的に活性であることが見出
された。

このｍ書に記述されたすべての実験において、ヒドロキ
シルアミンとメチルアミンの両方が塩酸塩として使用さ
れた。

組成物は列挙された材料を含み、本質的にそれから成り
立ち又はそれそのもの成り立つことができる。

実施例１ 下記の表２において使用した手順は、各小瓶が１−の溶
液を含有している２個の小瓶から溶液を筋肉内に実質的
に同時にウサギに注射することで行なわれた。各小瓶は
２≠を体重のｔ−ＰＡ（すを含有しており、そしてウサ
ギ１，２及び３に与えられたおのおのの小瓶は０．６３
モルのメチルアミン塩酸塩と０．０７９Ｍのヒドロキシ
ルアミン塩酸塩を含んでいた。溶液はリン酸アルギニン
でｐＨ７，２に０衝してあった。

表中でＭＡはメチルアミン塩酸塩の略語であり、寸たＨ
Ａはヒドロキシルアミン塩酸塩の略語である。

略ＢｉＦｌｉＬＩＳＡは酵素結合免疫吸着剤評価分析を
表わし、そして分の表示時間で血液中に残留するｔ　−
Ｆ　Ａの分析のために使用された方法であり、ｔ　−Ｐ
　Ａの量はｎｇ／ｌｎｔで表わされる。

表　　２ 溶液の内容　　　　　　ウサギ１　　　ウサギ２　　ウ
サギ３注射されたａ１ｇ２Ｘｌｔｊ　　　　　２Ｘ１ｒ
ｄ　　　　２Ｘ１１ｎｔｔ−ＰＡ （４１！９／ｋＰ＞　　　　　　　９．６　Ｗ　　　　
　９．２　即８．８　ｎｖ）ＥＬ　Ｉ　８Ａ結果ｎｇ／
ｍＡ　ｔ−ＰＡ発明は第一に筋肉内に注射されたｔ　−
Ｆ　Ａの吸収を増大するととに向けられているが、また
上述の５ａｒｎｏｆｆの特許及び出願に述べられている
ように別の凝血選択的タンパク質トロンボ分解薬品の吸
収を増大するととに有効であると考えられる。

実施例２ 表３において使用された手順は、ｔ−ＰＡとエンハンサ
−とを含有している溶液を筋肉内に実質的に同時に６犬
に注射することであった。６犬は１０号勺体重のｔ　−
Ｆ　Ａを含有している全部で容積４ｄの注射を受けた。

溶液は２つの離れた位置（すなわち、位置当り２ｍ）に
投与された。使用されたエンハンサ−の組合せは０．６
３Ｍのメチルアミン塩酸塩又は０．６３Ｍのメチルアミ
ン塩酸塩と０．０７９Ｍのヒドロキシルアミン塩酸塩と
の併用系であった。溶液はリン酸アルギニンでｐＨ７，
２ＶＣ緩衝されていた。

表中で、ＭＡはメチルアミン塩酸塩の略語であり、また
ＨＡはヒドロキシルアミン塩酸塩の略語である。

略語ＥＬＩＳＡは酵素結合免疫吸収剤評価分析を表わし
、そして分の表示時間での血液中ＫＱ留するｔ　−Ｐ　
Ａの分析のために使用された方法であり、ｔ　−Ｐ　Ａ
の量はｎｇ／−で表わされている。

表　　３ 溶液の内容　　　　　　　犬１　　　　犬２Ｑ、５３Ｍ
ＭＡ　　　　　　　　　Ｘ ｏ、６３　Ｍ　ＭＡ＋　０．７９　Ｍ出、　　　　　　
　　　Ｘ注射された−　　　　　　２Ｘ２１Ｒｔ２Ｘ２
　ｍ評価分析されたｔ−ＰＡ〜／ゴ　　　５０〜／−４
８ゲーＥＬＩＳＡの結果（ｎｇ／ｍ／　ｔ−ＰＡ）時間
（分） ３０　　　　　　　　　１１４　　　　　２、特許請求
の範囲にて用いられた術語ｔ　−Ｐ　Ａ即ち組織型プラ
スミノゲン活性化因子はその機能的観念において用いら
れ、そして天然のｔ　−Ｐ　Ａのみでなく組織的な循環
においてよりもむしろおもに凝血におけるプラスミノー
ゲンをプラスミンに転換させるｔ　−Ｐ　Ａの変態及び
誘辱体も含む。この含まれる変態及び籾導体はまたいっ
そう延長された活性を持っていてもよく及び／又はより
少ない吸収エンハンサ−を必要とし及び／又はいっそう
凝血選択的であり及び／又は天然のｔ　−Ｆ　Ａよりい
っそう迅速に効率的であってもよい。

このよ５に本発明の目的は十分Ｋかつ効果的に成し遂げ
られたことがわかるであろう。しかしながら、前述の好
ましい特殊の実施態様は本発明の機能的及び構造的原理
を説明するという目的のために示されかつ記述され、そ
してそのような原理から逸脱することなく変化を与えら
れることがはっきり理解されるであろう。それゆえ、本
発明は前記の特許請求の範囲の精神及び範囲の中に取り
囲まれたあらゆる変形を含む。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ｔ−ＰＡを必要とする哺乳類に対しｔ−ＰＡを筋肉
   内に投与し血液中のｔ−ＰＡの吸収を増大させる方法に
   おいて、実質的に同時に（１）メチルアミン又はその非
   毒性塩及び（２）ヒドロキシルアミン又はその非毒性塩
   を筋肉内に投与することを包含し、そしてヒドロキシル
   アミン又はその非毒性塩がｔ−ＰＡの吸収を増大するの
   に十分な量投与され、またメチルアミン又はその非毒性
   塩はｔ−ＰＡの吸収を増大させるために必要とされるヒ
   ドロキシルアミン又はその非毒性塩の量を減少させるた
   めに十分な量投与されることを特徴とする方法。 ２、メチルアミンの非毒性塩及びヒドロキシルアミンの
   非毒性塩が使用される請求項１記載の方法。 ３、メチルアミン塩酸塩及びヒドロキシルアミン塩酸塩
   が使用される請求項２記載の方法。 ４（１）ｔ−ＰＡ、（２）メチルアミン又はその非毒性
   塩及び（３）ヒドロキシルアミン又はその非毒性塩を含
   有しているパッケージであつて、ヒドロキシルアミン又
   はその非毒性塩の量は哺乳類に対し非脈内的に投与され
   るときｔ−ＰＡの血液中の吸収を増大させるために十分
   であつて、またメチルアミン又はその非毒性塩の量はｔ
   −ＰＡの吸収を増大させるために必要とされるヒドロキ
   シルアミン又はその非毒性塩の量を減少させるために十
   分であるパッケージ。 ５、メチルアミンの非毒性塩とヒドロキシルアミンの非
   毒性塩とが使用される請求項４記載のパッケージ。 ６、メチルアミン塩酸塩及びヒドロキシルアミン塩酸塩
   が使用される請求項５記載のパッケージ。 ７、ヒドロキシルアミン又はその非毒性塩の濃度が０．
   ０２〜０．７９モル／ｌである水溶液及びメチルアミン
   又はその非毒性塩の濃度が０．０２〜６．３モル／ｌで
   ある水溶液を含有しているパッケージ。 ８、ヒドロキシルアミン又はその塩とメチルアミン又は
   その塩とが単一溶液中に共存する請求項７記載のパッケ
   ージ。 ９、ヒドロキシルアミン又はその塩の溶液がパッケージ
   中の第１の容器中にあり、またメチルアミン又はその塩
   の溶液がパッケージ中の第２の容器中にある請求項７記
   載のパッケージ。 １０、ヒドロキシルアミンの塩の水溶液及びメチルアミ
   ンの塩の水溶液が使用される請求項７記載のパッケージ
   。 １１、ヒドロキシルアミン塩酸塩とメチルアミン塩酸塩
   とが存在する請求項１０記載のパッケージ。 １２、ｔ−ＰＡを含有している請求項１１記載のパッケ
   ージ。 １３、ｔ−ＰＡを含有している請求項７記載のパッケー
   ジ。 １４、凝血選択的タンパク質のトロンボ分解薬品をこれ
   を必要とする哺乳類に対し筋肉内投与し血液中の凝血選
   択的タンパク質のトロンボ分解薬品の吸収を増大させる
   方法において、実質的に同時に（１）メチルアミン又は
   その非毒性塩及び（２）ヒドロキシルアミン又はその非
   毒性塩を筋肉内に投与することを包含し、そしてヒドロ
   キシルアミン又はその非毒性塩が凝血選択的タンパク質
   のトロンボ分解薬品の吸収を増大するのに十分な量投与
   され、またメチルアミン又はその非毒性塩はタンパク質
   のトロンボ分解薬品の吸収を増大するために必要とされ
   るヒドロキシルアミン又はその非毒性塩の量を減少させ
   るために十分な量投与されることを特徴とする方法。 １５、メチルアミンの非毒性塩及びヒドロキシルアミン
   の非毒性塩が使用される請求項１４記載の方法。 １６、メチルアミン塩酸塩とヒドロキシルアミン塩酸塩
   が使用される請求項１５記載の方法。