JPS63309196A - β−１，４−マンノトリオ−スの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （１！業上の利用分野） 本発明はβ−１，４−マンノトリオースの製造方法、更
に詳細にはｍ鎖の合成原料あるいは医薬として有用なβ
−１，４−マンノトリオース（以下単にマンノトリオー
スということがある）の製造方法に関する。

（従来の技術及びその問題点） マンノトリオースはＤ−マンノースがβ−１，４−グリ
コシド結合で３個結合した３ｍｌ！であり、例えばマン
ナシを酵素または酸で部分的に加水分解し、加水分解液
から精製・単離することによって得られる。

従来、このβ−１，４−グリコシド結合を切断する酵素
としては例えばバチルス属、アスペルギルス属、トリコ
デルマ属、ストレプトミセス属、ペニシリウム属などに
属する微生物が産生ずるβ−マンナナーゼ（以下単にマ
ンナナーゼということがある）が知られている。

しかしながら、従来知られているマンナナーゼは通常の
酵素反応条件下ではマンノトリオースの生成量が少なく
、この酵素をマンナン等に作用させた場合、加水分解ま
たは部分加水分解の結果いずれもマンノトリオース以外
にＤ−マンノースやβ−１，４−マンノビオース（以下
単にマンノビオースということがある）あるいはβ−１
，４−マンノテトラオース（以下単にマンノテトラオー
スということがある）以上のオリゴ塘を大量に生成し、
特にマンノトリオースを生産する目的には有利なものと
は言えなかった。

また、近年、放線菌の一種であるストレプトミセス・エ
スピー阻１７が産生ずるマンナナーゼで比較的多量のマ
ンノトリオースを生成することが報告されたが（Ｊａｐ
ａｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、、　　２９　　（３）、　１
６７−１７２　（１９８５））この酵素をマンナン及び
マンナン含有天然物に作用させた場合、マンノトリオー
スのほかにマンノビオースを主成分として生成し、結晶
化してもマンノトリオースとマンノビオースの共晶を生
じるためマンノトリオースの高い効率での生産には成功
していない。

一方このようにして得られたマンノトリオース含有液か
らマンノトリオースを分離する方法としては活性炭カラ
ムによる分離と結晶化が行われてきたが、回収率が低く
満足な方法とは言いがたい。

従って、マンノトリオース生成量の多い、且つ分離の容
易なマンノトリオースの製造方法の開発が望まれていた
。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは上記の問題点を解決するために鋭意研究を
重ねた結果、マンナンまたはマンナン含有天然物をマン
ナナーゼを用いて加水分解する際に条件を限定すること
によりマンノトリオースの生成率を極めて高くすること
に成功し、更に、マンノトリオースと同時に生成するマ
ンノース及びマンノビオースを高い効率で資化する酵母
菌を見出して、これをマンノトリオース製造工程中に応
用することにより簡便な操作で、且つ高い収率でマンノ
トリオースを製造することに成功し、本発明を完成する
に至った。

以下に本発明の内容を更に詳細に説明する。

本発明に使用可能な原料マンナンは例えばココヤシ、ゾ
ウゲヤシ、ババスヤシ、などのヤシ由来のマンナンまた
はマンナン含有物、あるいはコーヒー豆の抽出残さ、針
葉樹由来のマンナンまたはマンナン含有物など種々のも
のが挙げられるが、なかでも大量に生産され、容易に集
荷・入手できるものとしてココヤシ由来のコプラミール
が特に好適である。

マンナンを加水分解するβ−マンナナーゼまたはその含
有物は色々な菌により生産されるが、それぞれ酵素の性
質が微妙に異なり、マンノースを多く生成する酵素、マ
ンノビオースを多く生成する酵素、種々のオリゴ糖を同
時に生成する酵素などがある。

それらの酵素の中でも、上記の原料を加水分解するため
のβ−マンナナーゼはマンノトリオースとその他の糖と
の生成比率及び加水分解活性からペニシリウム属のβ−
マンナナーゼ生産菌由来の酵素、例えばペニシリウム・
パープロゲナム患６１８由来の酵素又はペニシリウム・
ルブルム由来の酵素が好適である。ペニシリウム・パー
プロゲナム阻６１８は本発明者が見出した新菌株であっ
て、次の菌学的性質を有する。

＋１１　　培地における生育状態 ■　麦芽寒天培地 麦芽寒天培地での生育は５℃では全く起こらず、２５℃
では７日間でコロニーの直径が３〜４ｃｓに達する。性
状はビロード状である。１４日間でコロニーの直径は７
〜８ｃｌｌに達し、中心部より順次分生子形成し、それ
に従ってくすんだ黄緑色、かんらん緑色、灰緑色等を生
ずる。集落裏面に一部赤色部があり、りんご様の芳香が
する。３７℃の生育では７日間ではコロニーの直径が５
〜６ｃｓに達する。１４日間ではコロニーの直径が８〜
９ｃｍに達し、良く分生子形成し、色は黄緑から灰緑色
になる。コロニーの裏面は中心部が赤色である。

■　ツアペック寒天培地 ツアペック寒天培地での生育は５℃では全く起こらない
、２５℃では７日間でコロニーは直径１〜２１に達し、
性状はビロード状である。１４日間ではコロニーの直径
が３〜４ｃｍに達するが分生子は形成しない、３７℃の
生育では７日間でコロニーの直径が１〜２１である。１
４日間でコロニーは４〜５ｃｍに達し中心部が灰緑色と
なる。

■　ワックスマン氏寒天培地 ワックスマン氏寒天培地での生育は５℃では起こらない
、２５℃では７日間でコロニーの直径が４〜５１に達し
、コロニーの性状は白いビロード状である。１４日間で
はコロニーの直径は７〜８１に達し、分生子部分の色は
灰緑色で、コロニーの裏側は赤色である。３７℃の生育
では７日間でコロニーの直径が４〜５（Ｊに達し、性状
はビロード状である。１４日間でコロニーの直径は７〜
８１に達し、コロニーの分生子部分は灰緑色となる。

■　ポテト・デキストロース寒天培地 ポテト・デキストロース寒天培地での生育は５℃では起
こらない、２５℃では７日間でコロニーの直径は５〜６
国に達し、性状は白いうすいビロード状である。１４日
間ではコロニーの直径は８〜９ｃｍに達する。３７℃の
生育では７日間でコロニーの直径が５〜６１に達し、性
状は白いビロード状である。１４日間でコロニーの直径
は８〜９１に達する０分生子の形成は少ない。

（２）　　生理的、生態的性質 ■　最適生育条件 ｐＨ５〜７ 温度３２〜３７℃ ■　生育の範囲 ｐＨ４〜８ 温度１５〜４５℃ ■　その他、顕著な特徴 マンナン含有培地での培養によりβ−マンナナーゼを菌
体外に生産する。

（３）　　顕微鏡的所見 ■　分生子柄 滑面で直径は１００〜１５０Ｘ２．５〜３μである。

■　ベニシリ 対称の複輪生体である。

■　メトレ ４〜６本の束生を持ち、直径は１０〜１５×３μである
。

■　フイアライド ４〜６本の輪生を持ち直径は１０・〜１２×２〜２．５
μである。

■　分生子 形状は亜球形で直径は２．５〜３　Ｘ　２．５〜３μで
ある。

以上の菌学的性質を「ア・マニュアル・イブ・ザ・ベニ
シリア（Ａ　ＭＡＮＵＡＬ　ＯＦ　Ｔｈｅ　ＰＥＮＩＣ
ＩＬＬＩ＾）」（１９４９）　（ケネス　ビー、レーバ
ー及びチャールズトム（Ｋ［！ＮＮＥＴＨＢ、　　ＲＡ
ＰＥＲａｎｄ　ＣＨＡＲＬＥＳ　Ｔｌ（ＯＮ）　　）　
　、「ザ・ジーナス・ペニシリウム・アンド・インク・
テレオモルフインク・ステープ・ニーペニシリウム・ア
ンド・タラロミセス（Ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　ＰＥＮＩＣ
Ｉ−ＬＬＩＩＪＭ　　ａｎｄ　　ｉｔ’ｓ　　ｔｅｌｅ
ｏｍｏｒｆｈｉｃ　　５ｔａｔｅｓ　　ｅｕｐｅｎｉｃ
ｉ−１１ｉｕｓ　ａｎｄ　ｔａｌａｒｏｓｙｃｅｓＮ　
（１９７９）　（ジョン　アイ。

ピット（ＪＨＯＮ　１．ＰＩＴ？）　）及び「菌類図Ｗ
ｉ（下）」（１９７８）　（椿啓介他）に照合し、その
菌種を検索したところ、本菌株は、ペニシリウム・パー
プロゲナムに属する。

更に、本菌株は、近似するペニシリウム・パープロゲナ
ムｅストール（Ｐｅｎｌｃｌｌｌｌｕ＊　ｐｕｒｐｕｒ
ｏｇｅｎｕｍｓｔａｌ＋）と比較すると、ペニシリウム
・パープロゲナム・ストールは、３７℃での培養では２
５℃での培養に比べ生育が悪く、また、麦芽寒天培地で
集落裏面は無色でツアペック培地で裏面が赤くなると上
記文献に記載されているが、本菌株では、逆に３７℃で
生育状態が良く、また麦芽寒天培地で集落裏面に赤い色
素を生産する点で相異する。

従って、本発明者は、本菌株をペニシリウム・パープロ
ゲナム患６１８と命名し、工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研菌寄第９１８９号（ＦＥＲＭＰ−９１８９
）として寄託した。

本発明で使用できるβ−マンナナーゼは以下のように調
製することができる。

栄養源としてコプラミール、ヤシ殻など由来のマンナン
を含む培地にペニシリウム・パープロゲナムＮａ６１８
又はペニシリウム・ルブルムを接種し、培養温度２５〜
５０℃、特に好ましくは３２〜４０℃、ｐ）１３．５〜
８．０、培養時間２日〜１０日の範囲で好気的に培養す
る。

培養後、生成したβ−マンナナーゼはそのまま加水分解
反応に使用することもできるが、常法にしたがい精製酵
素としたのち使用することもできる。

ペニシリウム・パープロゲナムＮａ６１８由来の酵Ｓ　
Ｏ）　至ｊｌ　ｐ　ＨＬ＊　５．　Ｏ１安定すｐＨ４ｌ
域ハ３．８〜８．２であった。

このようにして得られたβ−マンナナーゼであっても従
来のような酵素加水分解条件ではマンノビオースを多く
生成してしまいマンノトリオースの製造が困難である。

マンノトリオースの収率を高めるためにはマンノビオー
スの生成を適度に抑制する必要がある。

反応条件を研究した結果、マンノトリオースの生成量に
最も大きな影響を与えるのは酵素加水分解反応系内の酵
素濃度であって、酵Ｔ：ｉ１１度を５Ｕ／ｍｌ以下０．
ＯＩＵ／諺！以上にした場合にマンノビオースの生成量
が減少し、マンノトリオースの生成量が増加することが
判明した。

酵素加水分解反応の温度は２５〜５５℃で実施可能であ
るが、更に好適な反応温度は３０〜５０℃である。

又、その反応の好適なｐＨ領域はｐＨ３〜８であり、好
適な反応時間は２０分〜１０時間である。

酵素濃度が５Ｕ／ｓｊを超えるばあいにはマンノビオー
スの生成量が多くなり、好ましくないが、極端に酵素濃
度が薄いばあいも反応時間が長くなり工業的な意味がな
い。

反応温度が５５℃を超えると酵素が失活し、２５℃未満
では反応速度が遅くいずれもマンノトリオースの生成量
を減少させるため好ましくない。

また、そのｐＨ５ｌ域も３未満または８を超えた場合に
も酵素が失活するので好ましくない。

一方、その反応時間が２０分未満の場合には反応不十分
であって未反応のマンナンが残る、かまたはマンノトリ
オースの生成量が少なく、ｌＯ＃ｒｊＩ以上反応させた
場合にはマンノトリオースの量が減少しマンノビオース
の生成量が増加するため好ましくない。

以上のように限定された反応条件で得られたマンナンの
酵素加水分解反応液中には液中の糖を１００とした場合
に３０〜５０％のマンノトリオースが含有される。

この液からクロマト法、晶析法などの常法によってマン
ノトリオースを単離することも可能であるが、以下のよ
うに酵母でマンノトリオース以外の糖を資化させること
によって更に高い収率で高い純度のマンノトリオース含
有物を得ることができる。

すなわち上記加水分解液中にマンノトリオース以外の糖
を酵母菌により資化させて液中のマンノトリオースの純
度を高めるには液中に存在するマンノース及びマンノビ
オースを主に資化する菌を選定することが必要である。

これらの一部を資化する菌は従来から知られており、例
えばカンディダ・ケストニー（ＣａｎｄｉｄａＫｅｓｔ
ｏｎｉｉ）、カンディダ・バラブシロシス（Ｃａｎｄｌ
−ｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏａｉｓ）などがあった、こ
れらの菌は白色あるいはクリーム色のコロニーを形成し
、多辺から出芽し、１〜４個の帽子型子嚢胞子を含む一
過性らせん状胞をもつといった特徴を持っている。

しかしこれらの菌はいずれもマンノースは資化するがマ
ンノビオースは殆ど資化しないという致命的な欠点があ
った。

詳細な各種菌の性賞研究の結果、カンディダ・グィリエ
ルモンディーはマンノースを資化するとともにマンノビ
オースをも効率的に資化することを見出し、上記反応液
中のマンノトリオースの純度を高めることに成功した。

本発明に使用する種酵母またはその含有液は以下のよう
にして調製することができる。

種菌を入手し、ペプトン、酵母エキスなどの通常の栄養
の存在下、通常のジャーファーメンタ−にて好気的に温
度２５〜３５℃、１０〜８０時間の条件で培養する。培
養の際に消泡剤としてシリコーン等を添加することも好
ましい、この培養液はそのままで資化反応に供すること
も出来るが遠心分離などにより菌体を濃縮して使用する
事も出来る。

以下に酵母資化の方法を詳細に述べる。

マンナンを本発明の条件でβ−マンナナーゼにより加水
分解して得られた糖液を加熱殺菌したのち、カンディダ
・グイリエルモンデイーＩＰ００５６６を植菌し、空気
を供給しながら培養することにより液中の糖を１００％
とした場合に７０％以上のマンノトリオースを含存した
液を得ることができる。

この酵母資化に好適な条件は溶液２リツトルあたり空気
供給量０．３〜３．５リットル／分、培養温度２５〜３
５℃、好適な培養時間は１０〜８０時間であり、この条
件を外れた場合にはいずれもマンノトリオースの収率が
低下するために好ましくない。

更に、この培養にあたり、菌の栄養源として少量のペプ
トン、酵母エキス、リン酸塩、マグネシウム塩を加える
ことも資化反応を促進させるうえで有効である。

このようにして得られた酵母資化反応後の液からマンノ
トリオースを単離する方法は通常の精製法と結晶化また
は濃縮固化または凍結乾燥法などが採用可能であり、例
えばイオン交換樹脂による脱塩の後、濃度７５％程度ま
で？１ｌＩ１１シて冷却・晶析することにより純度９５
％以上のマンノトリオース結晶を得ることができる。

以下に参考例及び実施例をあげて更に詳細に本発明の詳
細な説明する。

なお、本発明に係るβ−マンナナーゼ含有組成物の活性
は次に示す方法で測定した。

ＰＨ５，８のマンクルベインバッファー水溶液４ｍｌ、
蒸溜水５■ｌと粉砕した脱脂コブラミル１５（１＋ｇを
１５分間５０℃でインキエベートし、被検液１＠ｌを加
え５０℃で３０分間反応させた０反応液に生じた還元糖
をソモギー法により定量する。被検液ｌ■ｌが１分間に
還元ｔｌｌ＋ｓｇを遊離する時の値を１単位（ｕ）と定
義する。

参考例−１ β−マンナナーゼ生産菌、ペニシリウム・パープロゲナ
ム１ｌｋ１６１８は、次の方法により分離した。

フィリピンの土壌０．５ｇを滅菌水１０−ｌで懸濁し、
その０．５　ｍ　ｌを滅菌水１０ｍＡに懸濁し、更にそ
の０．５ｍＡを滅菌水１０ｍｊ！に懸濁し、その−滴を
シャーレ中のマンナン寒天培地に滴下し、表面に広げる
。生えてきたコロニー中周囲に透明帯（マンナン溶解部
分）のあるものを分離、採取し、約５００検体をスラン
ト化した。この各スラントを１００ｍｌ！坂ロフシロフ
ラスコ培養を行ないβ−マンナナーゼ活性を測定し、活
性のあるものを５Ｏ検体選択した。更に１００ｍｌｍｌ
フロフラスコ盪培養を行ないβ−マンナナーゼ活性を測
定し、最も活性のある本国を得た。

参考例−２ コプラミール４％、ＫＨ，ＰＯ第１％、Ｍｇ５Ｏ，・７
Ｈ１００，０５％、ペプトン０．９％、からなる液体培
地（ｐＨ５，４）　　１００／！を５００ｍ１ｌ坂ロフ
ラスコに採取し、常法により加熱殺菌した。

これにペニシリウム・パープロゲナムｍ６１８を１白金
耳接種し、３５℃で５日間振盪培養した。

次に、５リツトルのジャーファーメンタ−にコプラミー
ル４％、ＫＨｔＰＯｅ　１％、Ｍｇ５Ｏ，・７）１１０
０．０５％、ペプトン０．９％、酵母エキス０．２％、
コーンステイープリカー０．５％からなる液体培地（ｐ
Ｈ５，４）３リツトルを入れ、常法により加熱殺菌した
。これに前記培養液３００ｍｌを種菌として接種したの
ち、３５℃で４日間培養した。この培養液の酵素活性を
測定したところ８．ＯＵ／培養液Ｉｌｌであった。

この培養液をろ過したもの、２．８リツトルを酵素液−
１とした。

参考例−３ コプラミール４％、にＨｌＰＯｔ　１％、Ｍｇ５Ｏｎ・
７Ｈ０００，０５％、ペプトン０．９％、からなる液体
培地（ｐＨ５，４）１００ｍｌを５００ｍｊ坂ロフロフ
ラスコ取し、常法により加熱殺菌した。

これにペニシリウム・ルブルムを１白金耳接種し、３５
℃で５日間振盪培養した。

次に、５リツトルのジャーファーメンタ−にコブラミー
ル４％、ＫＨｔＰＯｅ　１％、Ｍｇ５Ｏ，・７　Ｈ，Ｏ
Ｏ，０５％、ペプトン０．９％、酵母エキス０．２％、
コーンステイープリカー０．５％からなる液体培地（ｐ
Ｈ５，４）３リツトルを入れ、常法により加熱段歯した
。これに前記培養液３００ｍｊ！を種菌として接種した
のち、３５℃で４日間培養した。この培養液の酵素活性
を測定したところ６．ＩＵ／培養液ｍｌであった。

この培養液をろ過したもの２．８リツトルを酵素液−２
とした。

参考例−４ ペプトン０．２％、酵母エキス０．２％、Ｋ）ｌ！ＰＯ
オ０．１％、ＭｇＳＯ４・７ｏｔｏｏ、０５％、を含有
する培養液３．５リツトルに種田カンディダ・グィリエ
ルモンディー〔（財＞ｔＳ酵研究所より購入）Ｉｇを加
え、５リツトルのジャーファーメンタ−中で３０℃、４
８時間、攪拌速度４５０ｒｐｍ、、空気吹き込み量１．
２リットル／分の条件で培養し、培養液をそのまま種酵
母として以下の実施例に使用した。

実施例−１ 参考例−２で得た酵素液０．０９４リツトルに水４．９
７リツトルを加え酵素濃度を０．１５Ｕ／ｍＡとしコプ
ラミール４５０ｇを加え、ｐＨ５，０、温度４０℃で、
３時間撹拌したのちろ過した。

このろ液を常法に従い３００ｍｊ！のＨ型陽イオン交換
樹脂（三菱化成工業型５Ｋ−ＩＢ）と５００ａｌｌの陰
イオン交換樹脂（三菱化成工業型ＷＡ−３０）にて脱イ
オンした。

その一部を固形分濃度６０重量％迄濃縮して糖組成を高
速液体クロマトグラフィーにて分析した結果 マンノトリオース　　　　４６．３％ マンノビオース　　　　　　３８．２ ガラクトース　　　　　　　４．２ グルコース　　　　　　　　５．６ その他　　　　５．７ であった。

次にこの液を８リツトルのジャーファーメンタ−に入れ
、１２０℃で１５分間加熱殺菌した。冷却後、参考例−
４で得たカンディダ・グィリエルモンディーの種酵母２
００ｗ１を植菌し、空気を毎分１．２リツトル供給しな
がら３０℃で４８時間培養した。この培養液を遠心分離
して、３．８リツトルの上清を得た。

この上清を常法に従い５００■ｌのＨ型陽イオン交換樹
脂（三菱化成工業型５Ｋ−ＩＢ）と１リツトルの陰イオ
ン交換樹脂（三菱化成工業型ＷＡ−３０）にて脱イオン
したのち固形分濃度６０％迄濃縮し、７２ｇの無色透明
な糖液を得た。

このものを高速液体クロマトグラフィーにより分析した
結果 マンノトリオース　　　　９６．６％ マンノビオース　　　　　　０．３ その他　　　　　　　　　　３．１ であった。

更にその液２０ｇを濃度７５％まで濃縮し冷却晶析し、
マンノトリオースの結晶６ｇを得た。その結晶を同様に
高速液体クロマトグラフィーにより分析した結果、マン
ノトリオースの純度は９８．７％であり、融点は２１４
℃比旋光度は〔α〕、−−２１°であった。

実施例−２ 参考例−２で得た酵素液１．０リツトルに水３．０リッ
トルを加えて酵素濃度２．ＯＵ／ｍｌ！としたものにコ
プラミール３４０ｇを加え、ＰＨ５，８、温度５０℃で
、３０分撹拌したのちろ過し、３．８リツトルのろ液を
得た。

このろ液のｓ＆ｌ成を高速液体クロマトグラフィーにて
分析した結果 マンノトリオース　　　　３６．７％ マンノビオース　　　　　　４４．８ ガラクトース　　　　　　　３：１ グルコース　　　　　　　　５．３ その他　　　１０．１ であった。

次にこの液を５リツトルのジャーファーメンタ−に入れ
、１２０℃で１５分間加熱殺菌した。冷却後、参考例−
４で得たカンディダ・グィリエルモンディーの種酵母２
００ｓｊを植菌し、空気を毎分０．９リツトル供給しな
がら３５℃で４０時間培養した。この培養液を遠心分離
し、３．０リツトルの上清を得た。

この上清を常法に従い５００ａ＋１のＨ型陽イオン交換
樹脂（三菱化成工業型５Ｋ−ＩＢ）と１リツトルの陰イ
オン交換樹脂（三菱化成工業型ＷＡ＝３０）にて脱イオ
ンしたのち固形分濃度６０％迄濃縮し、３１ｇの無色透
明な糖液を得た。

このものを高速液体クロマトグラフィーにより分析した
結果 マンノトリオース　　　　　９３．４％マンノビオース
　　　　　　　０．３ その他　　　　６．３ であった。

実施例−３ 参考例−３で得た酵素液１．５リツトルに水１．５リッ
トルを加えて酵素濃度３．ＩＵ／ｓｊ！としたものにコ
ブラミール３００ｇを加え、ｐＨ６，５、温度３５℃で
、６時間撹拌したのちろ過し、２．８リツトルのる液を
得た。

このろ液の糖組成を高速液体クロマトグラフィーにて分
析した結果 マンノトリオース　　　　３３．６％ マンノビオース　　　　　４８．２ ガラクトース　　　　　　　３．４ グルコース　　　　　　　　６．０ そ　　の　　他　　　　　　　　　　　　　８．８であ
った。

次にこの液を５リツトルのジャーファーメンタ−に入れ
、１２０℃で１５分間加熱殺菌した。冷却後、参考例−
４で得たカンディダ・グイリニルモルディーの種酵母２
０　（１＋１を植菌し、空気を毎分１．４リットル供給
しながら３４℃で５３時間培養した。この培養液を遠心
分離し、２．１リツトルの上清を得た。

このろ液を常法に従い５００＋４のＨ型陽イオン交換樹
脂（三菱化成工業型５Ｋ−ＩＢ）とｌ　ＩＪソトルの陰
イオン交換樹脂（三菱化成工業型ＷＡ−３０）にて脱イ
オンしたのち固形分濃度６０％迄濃縮し、３１ｇの無色
透明な糖液を得た。

このものを高速液体クロマトグラフィーにより分析した
結果 マンノトリオース　　　　　９０．１％マンノビオース
　　　　　　　０．５ その他　　　　９．４ であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　マンナンまたはマンナン含有天然物をβ−１，４−
   マンナナーゼにて酵素濃度０．０１Ｕ／ｍｌ以上、５Ｕ
   ／ｍｌ以下の条件で酵素加水分解したのち、酵母カンデ
   ィダ・グィリエルモンディー（Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｕｉ
   ｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）を用いてβ−１，４−マンノ
   トリオース以外の酵素加水分解液中に残存する糖を資化
   させることを特徴とするβ−１，４−マンノトリオース
   の製造方法。 ２　β−１，４−マンナナーゼがペニシリウム・パープ
   ロゲナムＮｏ．６１８〔Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｐｕ
   ｒｐｕｒｏ−ｇｅｎｕｍ　Ｎｏ．６１８（微工研菌寄第
   ９１８９号）〕もしくはペニシリウム・ルブルム（Ｐｅ
   ｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｒｕｂｒｕｍ）由来の酵素含有液
   またはそれらを精製して得られたものである特許請求の
   範囲第１項記載のβ−１，４−マンノトリオースの製造
   方法。