JPS6345558A - 逆相充▲てん▼材料 - Google Patents

逆相充▲てん▼材料

Info

Publication number
JPS6345558A
JPS6345558A JP62113700A JP11370087A JPS6345558A JP S6345558 A JPS6345558 A JP S6345558A JP 62113700 A JP62113700 A JP 62113700A JP 11370087 A JP11370087 A JP 11370087A JP S6345558 A JPS6345558 A JP S6345558A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amine
coating
adsorbate
hydrophobic
amine groups
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP62113700A
Other languages
English (en)
Inventor
フレデリツク・イー・レグニアー
ウイリアム・コパシエビツチ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Purdue Research Foundation
Original Assignee
Purdue Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Purdue Research Foundation filed Critical Purdue Research Foundation
Publication of JPS6345558A publication Critical patent/JPS6345558A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/32—Bonded phase chromatography
    • B01D15/325—Reversed phase
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B01J20/287—Non-polar phases; Reversed phases
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/328—Polymers on the carrier being further modified
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/328—Polymers on the carrier being further modified
    • B01J20/3282—Crosslinked polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3285—Coating or impregnation layers comprising different type of functional groups or interactions, e.g. different ligands in various parts of the sorbent, mixed mode, dual zone, bimodal, multimodal, ionic or hydrophobic, cationic or anionic, hydrophilic or hydrophobic
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は逆相材料及びその製造法に間し、更に特に逆相
クロマトグラフィー用の充填剤として特に良く適してい
る疎水性の逆相（ｒｅｖｅｒｓｅｃｌ−ｐｈａｓｓ）材
料に関する。
高速逆相クロマトグラフィーは天然及び合成ポリペプチ
ドの分離に対する強力な手段となった。
広い有効細孔のマクロ粒状媒体と大きい変性されたポリ
ペプチドを溶解しうる移動相との開発によって、ペプチ
ド画分は連続分析に対して十分な純度で分離することが
できる。
シリカに基づく逆相クロマトグラフィーカラムに最も良
く使用される静止相は炭素数４〜１８の直鎖のアルカン
である。これらのアルキル配位体（Ｉ　１ｇ１ｎｄ　）
はアルキルクロルシランとの反応でシリカ表面上のシラ
ノール基に共有結合してシロキサン結合を形成する。し
かしながら立体的な限界のために、シリカ表面における
かさ高なアルキルシラン基の付加は定量的でなく、多く
の遊離のシラノールが残る。これらの残存ヒドロキシル
残基はクロルメチルシランとの第２の末端処理反応にお
いて部分的に隔離することができる。
最近の研究は、いくつかの膜蛋白質の逆相りロマトグラ
フイーにおいて、４０〜６０％のぎ酸の移動相への添加
がこれらの非常に疎水的なポリペプチドを可溶化するた
めに必要であることを示した１強酸性の移動相の使用は
シリカに基づく逆相クロマトグラフィーカラムの現行の
再生に関して問題を呈する。５Ｌ−Ｃ結合はＣ−Ｃ結合
よりも親電子物質の攻撃に対して敏感であるから、強酸
例えばぎ酸は一般にシリカ担体と静止相間のＳＬ−Ｃ結
合を徐々に開裂する。
本明細書において参考文献として引用される米国特許筒
４，２４５，００５号に議論されているように、吸着さ
れたポリエチレンイミン化学を用いるアルバート（＾Ｉ
ｐｅｒｔ）及びリグニア（Ｒｅｇｎｉｅｒ）による過去
の研究は、それがアニオン交換静止相の合成に対して非
常に万能であることを示した。吸着された重合体アニオ
ン交換媒体の合成に対するアルバート及びリグニアの先
駆的現在する吸着技術を用いれば、本発明の逆相材料は
製造される。
本発明は逆相材料及びそのような材料の製造法を提供す
る６本発明の逆相材料は蛋白質、ポリペプチド及び他の
重合体の分離に対するクロマトグラフィー充填材料とし
て十分に適当である。
逆相材料を製造する場合、最初に反応性の第１級及び／
又は第２級アミン基を含んでなる吸着物、例えばポリエ
チレンイミンの薄層を無機担体材料例えばシリカ、アル
ミナ又はチタニアに吸着させる。次いで吸着したコーテ
ィングのアミン基を、該コーティングの架橋を行なうの
に十分な量の疎水性試剤と反応させる。用いる疎水性試
剤が順次表面アミンを酸性ｐＨにおいて中性にしつつ該
コーティングを架橋しつるならば、吸着したコーティン
グのすべての反応性アミンは好ましくは該疎水性試剤と
反応せしめられる。用いる疎水性試剤が該コーティング
を架橋できず、ただ中性の表面官能基を残すだけならば
、疎水性試剤は該吸着したコーティングの高々３０％、
更に好ましくは高々１０％の反応性の第１級及び第２級
アミンを第３級アミンに転化するであろう量で使用され
る。
次いで該架橋した吸着コーティングの少くとも１つの未
反応のアミン基及び好ましくはすべての残りの反応性第
１級及び第２級アミン基を、該アミン基を酸性のｐＨに
おいて中性にする試剤と反応させる。そのような試剤の
１つの例は無水物である。無水物は反応性アミンを中性
のアミドに転化するであろう。
従って本発明の主な目的は酸に安定で再現性のある逆相
材料を提供することである。
本発明の更なる目的は優秀なりロマトグラフイー特性を
有するそのような逆相材料を提供することである。
本発明の他の目的は簡単且つ安価に製造できるそのよう
な逆相材料を提供することである。
第１図は本発明の反応式を示す系統図である。
第２Ａ及び２Ｂ図は卵アルブミン−牛の血清アルブミン
の蛋白質混合物の分離に基づく２つの逆相カラムのクロ
マトグラフィーでの評価を示すグラフである。
第３図はりボヌクレアーゼーインシュリンーチトクロー
ムＣ−牛の血清アルブミン−卵アルブミンの蛋白質混合
物の分離に基づく逆相カラムのクロマトグラフィーでの
評価を示すグラフである。
第４Ａ及び４Ｂ図は、マツコラ鯨のミオグロピンシアノ
ゲンブロマイド消化物の分離に基づく２つの逆相カラム
のクロマトグラフィーでの評価を示すグラフである。
本発明は特に、逆相クロマトグラフィーにおける蛋白質
ペプチド及び他の重合体の分離のための充填材料として
特に十分適している逆相材料（ｒｅｖｅｒｓｅｄ−ｐｈ
ａｓｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ）の製造法に関する。
米国特許第４，２４５，００５号における如く、逆相材
料の製造では、吸着物に対して親和性を有する担体材料
の表面を、反応性第１級及び／又は第２級アミン基を含
んでなる吸着剤と接触させて、該吸着物の薄膜コーティ
ングを静電力によって該表面に吸着させる。吸着物は好
ましくは溶媒中に含まれ、吸着を部分的に該溶媒の極性
の調節によって砲車することができる。溶媒の極性が小
さければ小さい程、吸着は強い、好適な溶媒はメタノー
ルである。他の適当な溶媒はジメチルホルムアミド及び
ジオキサン、アセトニトリルを含む、吸着物は少くとも
２つの官能基を含み、その１つは担体材料の表面と相互
作用してその吸着を誘導し且つ他は架橋のために使用さ
れる１本発明の適当な吸着物はポリエチレンイミン、１
．１−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン、テトラエチ
レンペンタミン、及びエチレンジアミンである０本発明
の好適な吸着物は、存在しても少しの第３級アミンしか
含有しない、その理由は第３級アミン（酸性流出ｐＨに
おいてプロトン化され、結果として正に荷電する）が逆
相材料に親水性を付与するからである。
担体材料は好ましくは無機担体材料例えばシリカ、アル
ミナ及びチタニアであり、好適な担体材料はシリカであ
る。無機担体材料の特別な例は、リクロスファ（ＬｉＣ
ｈｒｏｓｐｈｅｒ）　Ｓ　ｉ　５００　（粒径１０μ）
、リクロソープ（ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ）　Ｓ　１１０
０（粒径１０μ）、リクロスファ５ｉｌＯＯ（粒径１０
μ＞　、クロモソープ（Ｃｈｒｏ＋＊ｏｓｏｒｂ　）Ｌ
Ｃ−ｂ、バーチシル（Ｐａｒｔｉｅｉｌ）　１０　、バ
イダク（Ｖｙｄａｃ）　Ｔ　Ｐ　Ｂ　、調節された多孔
質ガラス（粒径５〜１０μ：細孔径１００人）、スフニ
リソーブ（Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ）アルミナ（粒径１０
μ、細孔径１５０人）、ビオ−ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ
）塩基性アルミナ、活性工（粒径４０μ）、ビオ−ラッ
ド酸性アルミナ、活性工（粒径４０μ）、コーニング（
Ｃｏｒｎｉｎｇ）チタニア（４０／６０メツシュ；細孔
径４００人）、アミコン・マドレックス（３ｍ１ｅｏｎ
　Ｎａｔｒｅｘ＠）シリカゲル、ジルコニル被覆シリカ
（バイダクＴＰＢシリカ上にジルコニウムのコーティン
グ）、及び酸化マグネシウムである。
反応性の第１級及び／又は第２級アミン基を含む吸着物
の薄膜コーティングを担体材料の表面に吸着させた後、
該吸着したコーティングの該反応性アミン基を、該コー
ティングの架橋を８行うのに十分な量の疎水性試剤と反
応させる。用いる疎水性試剤が該アミン基と反応して該
コーティングを架橋させ、一方で順次該アミンを酸性ｐ
Ｈにおいて中性にする場合には、吸着したコーティング
のすべての反応性の第１級及び第２級アミンを好ましく
は該疎水性試剤と反応せしめる。
用いる疎水性試剤が該コーティングを架橋することがで
きず、一方順次アミンを酸性ｐＨにおいて中性にする場
合には、疎水性試剤を、該吸着したコーティングの反応
性の第１級及び／又は第２級アミン基の一部分だけと反
応させるのに十分な量で用い、好ましくは該吸着したコ
ーティングの反応性の第１級及び／又は第２級アミンの
高々３０％を第３級アミンに転化する量で用い、最も好
ましくは該コーティングの反応性の第１級及び／又は第
２級アミンの高々１０％を第３級アミンに転化するであ
ろう量で使用する。コーティングを架橋させるのに適当
なこの種の疎水性試剤はアルキルハライド、例えば、ア
ルキルブロマイド、アルキルクロライド及びアルキルヨ
ーダイト、そしてエポキシ樹脂例えば式 〔式中、Ｒは疎水性有機基例えばアリール又はアルキル
を含む〕 を有し、更に好ましくは式 を有する多官能性エポキシ樹脂を含む。
吸着したコーティングを架橋させた後、この架橋した吸
着コーティング中に反応性の第１級及び／又は第２級ア
ミン基が残存しているならば、該アミン基の少くとも１
つ、更に好ましくは該アミン基の多く、最も好ましくは
該アミン基のすべてを、該アミンを酸性ｐＨにおいて中
性にする試剤、好ましくは疎水性の試剤と反応させる。
該アミンを酸性ｐＨにおいて中性にする試剤の例は、−
ｅｆｔ２−ＣＩ、−Ｎ）１−Ｃ）１２−Ｃ１１２−をｆ
ｆ１Ｒｉ −ＣＥＩｔ−ＣＲ２−Ｎ−ＣＨｔ−ＣＦＩｉ−〔式中、
Ｒ４は有機基であり、そしてＲ２は０又はＲ，を含む芳
香族環の１員である〕へ転化するであろう試剤である。
１つのそのような試剤は無水物である。酸無水物は該ア
ミンと、中性であるアミド結合を生成しよう１例えば架
橋した吸着コーティングの少くとも１つの残存する反応
性アミン基、更に好ましくは多くの残存する反応性アミ
ン基、最も好ましくはすべての残存する反応性の第１級
及び第２級アミン基を、好ましくはプロトン捕捉剤の存
在下に且つ好ましくはジメチルホルムアミドのような乾
燥中性溶媒中において、該反応性アミンとアミド結合を
形成させるのに十分な量の無水物と反応させる。このプ
ロトン捕捉剤は好ましくは第３級アミン、更に好ましく
はジイソプロピルエチルアミンを含む、好ましくは疎水
性である無水物は、式 〔式中、Ｒ１及びＲ２は同一でも異なってもよく、且つ
有機基を含んでなり、更に好ましくは炭素数１〜２０の
アルキル、フェニル、ジフェニル、ナフチルなどからな
る群から選択される有機基を含んでなる〕 を有する。適当な無水物は無水安息香酸、無水ステアリ
ン酸、無水ヘキサン酸及び無水オクタン酸を含む、無水
物の他に、架橋した吸着コーティングの残存する反応性
アミンと反応してアミンを酸性ｐＨ下に中性にする他の
試剤の例はシアヌル酸クロライドである。
次の限定を意味しない実施例は本発明を更に例示する。
Ｋ（１Ｌ バイダク１０１７ＰＢ５．５μｍ（球、３３０人）のシ
リカ１ｇを、メタノール性１％（Ｗ／Ｖ）ポリエチレン
イミン−６（平均分子量＝６００）の溶液１０ｍＮに懸
濁させた。この懸濁液を脱気し、撹拌し、室温で３時間
放置した０次いでシリカをグラスフィルターで分離し、
乾燥した０次いで吸着したシリカを、メタノール中５％
（ｖ　／　ｖ　）エポン＜ＥＰＯＮ）８２８　Ｃポリサ
イエンス社（Ｐｏｌｙｓｅｉｅｎｅｅ、Ｉｎｃ、）製の
構造式を有するビスフエニルジエポキシド〕の１０ｍ１
を含むフラスコ中に移し、脱気し、撹拌し、そして懸濁
液を室温で終夜放置することによって薄膜に架橋させた
。この期間の終りに、フラスコを水蒸気上で３０分間加
熱した。コーティングした架橋シリカをグラスフィルタ
ーで分離し、メタノールで洗浄し、そして１００℃の炉
中に１時１？ＪＩ！いた。このコーティングした架橋シ
リカは湿めらないほど十分疎水性であったけれど、この
材料的５００ｍｇを充填した０、４６Ｘ５ｃｍのカラム
を用いる蛋白質試験混金物のクロマトグラフィーは許容
できなかった。見かけ上、コーティング中のアミンは、
（プロトン化され、結果として酸性流出ｐＨにおいて正
に荷電するから）蛋白質を強く保持しえない親水性特性
を充填材料にもたらす。
コーティングした架橋シリカを更に疎水性にする努力に
おいて、コーティングした架橋シリカを乾燥ジメチルホ
ルムアミド５ｍｌ、無水安息香酸４００ｍｇ及びジイソ
プロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）２５０μｌを含有す
るフラスコに移すことによって残存する第１級及び第２
級アミンをアシル化した。この反応は同時にフェニル基
を付加し、アミド結合の生成によってアミンを排除した
。ＤＩＥＡは、無水物とコーティングした架橋シリカの
反応中に隣るアミンを滴定しうる（それを不活性しうる
）酸が生成するからプロトン捕捉剤として添加しな、脱
気及び撹拌後、この懸濁液を６０℃の油浴中で終夜加熱
した。ベンゾイル化され、ポリアミンでコーティングし
たシリカをグラスフィルターで分離し、メタノールで完
全に洗浄し、真空デシケータ中で乾燥した。架橋したコ
ーティング中の残存する第１級及び第２級アミンのアシ
ル化は同時に正荷電を減じ且つ更なる疎水性を導入する
のに役立つ、無水安息香酸は、付加される基がエポン８
２８の構造と適合するようにアシル化に対して使用した
。不幸なことに、最初にポリエチレンイミン中に存在す
る第３級アミン及び架橋工程中に生成するそれは、これ
らの残基がアシル化できないからコーティング中に残る
であろう１本実施例の吸着されたＰＥＩを含む逆相材料
に対する反応式を例示する系統図を第１図に示す、ここ
にアラビヤ数字は反応段階を示し、ローマ数字は反応生
成物を示す。
爽１匠１ 実施例１の疎水性の吸着したポリエチレンイミン（ＰＥ
Ｉ）のコーティング材料（ＰＥＩ−フェニル〉の元素分
析は１２％の炭素含量を示したく参照、第１表）。
フェニル ’４０％でき酸で６０℃下に２４時間処理した後の媒体
の分析 ２最初の炭素量からぎ酸処理後の炭素含量を引いた値 この炭素含量はシンクロパックＲＰ−８シリカ〔ジンク
ローム社（ＳｙｎＣｈｒｏ＋ｍ、　Ｉｎｃ、、　Ｌｉｎ
ｄｅｎ。
ＩＮ、）から入手しうる市販の有機シランの結合した逆
相媒体〕で得られる２、８％より実質的に高い、これら
の結果はＰＥｌ−フェニルのコーティングがより厚いと
いうことを示唆する。増大した層の厚さはコーティング
に安定性を付加するが、これは細孔容量及び表面積を消
費する。ＰＥｌ−フェニルとシンクロバックＲＰ−８充
填材料の耐酸性を、数滴のジメチルホルムアミドを湿潤
剤として添加した４０％水性（Ｖ／Ｖ）ぎ酸５ｍｌに各
材料５０ｍｇを入れることによって検討しな。
２４時間６０℃に加熱した後、２つの試験試料をグラス
フィルターで分離し、ジメチルホルムアミド及び次いで
アセトンで完全に洗浄し、デシケータ中で乾燥した。各
炭素分析は、このぎ酸処理がシンクロバックＲＰ−８媒
体から６３％の結合相を除去し、一方ＰＥｌ−フェニル
でコーティングした媒体から３．３％にすぎないそれを
除去したことを示す（第１表）、これらの結果は、有機
シラン逆相カラムを強酸性条件下に長期間使用すると、
結合させた相が担体から実質的に失なわれることを示唆
する。これに対し、有機相がＣ−Ｃ又はＣ−Ｎ結合しか
含まない吸着したコーティングは全くそれより耐酸性で
ある。ＰＥｌ−フェニル材料の増大した耐酸性は、結合
相の消失の恐れなくクロマトグラフィーにおいて強酸性
移動相を用いることを可能にする。更にそのような酸を
、カラムの清浄及び除熱（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔ　ｉ
ｏｎ　）のために日常的に使用することができた。
裏夏λ１ 実施例１のＰＥｌ−フェニル材料５０ｍｇをそのピクリ
ン酸を結合する能力に対して評価した（第■表）。
第一」Ｌ二良 ＲＰ　−８１６９１５，４２，９ フエニル　　　　１７０　　　　　８４　　　１１．０
　　　２．８１ピクリン酸をイオン対形成する能力 ２コーテイングしたシリカ１ｇ当りの牛の血清アルブミ
ンの静的負荷能力 ピクリン酸は接近しうるアミンと対を作るが、アミドと
は形成しない、このピクリン酸分析は、ＰＥｌ−フェニ
ルのコーティングが、アミン２．２μモル／　ｍ　”に
相当してシリカ１ｇ当り１７０μモルのイオン対可能な
アミンを含むことを示した（第■表）、ピクリン酸の濃
度の測定にはパリアン（Ｖａｒｉａｎ）　６３４型ＵＶ
−可視分光計（バリアン社、Ｗａｌｎｕｔ　Ｃｒｅｅｋ
、Ｃ＾）を用いた。
え１λ先 実施例１のＰＥｌ−フェニル材料５００ｍｇ及びシンク
ロパックＲＰ−８媒体５０ｍｇを、それぞれ疎水性吸着
機構によって牛の血清アルブミン（ＢＳＡ）を結合する
能力に関して分析した。
ＢＳＡの１０ｍｇ／ｍｆｆ１の溶液を、数滴のアセトニ
トリルを添加して疎水性の粒子が湿るようにすることに
より、０．１％トリフルオル酢酸中で調製した１次いで
この溶液をＰＥｌ−フェニルの材料及びシンクロパック
ＲＰ−８媒体の両試料に添加した。試料を１５分間装い
て完全な吸着を保証した１次いでＢＳＡを０．１％トリ
フルオル酢酸中６０％アセトニトリルを用いて異なる媒
体から脱着させた。ＢＳＡ結合分析の結果を第■表に示
す、ＢＳＡ結合分析における濃度の測定にはパリアン６
３４型ＵＶ−可視分光計を使用した。　ＰＥＴ−フェニ
ルの材料はシンクロパックＲＰ−８材料よりも少量のＢ
ＳＡを結合した。これはＰＥｌ−フェニルのコーティン
グがより厚そうであり、従って細孔容量及び表面積が失
なわれているという事実のためかも知れない。
Ｋ１匠ｉ 実施例１のＰＥｌ−フェニルの材料及びシンクロパック
ＲＰ−８の材料の各約５００ｍｇを、小分子のアイソク
ラチック（１ｓｏｃｒａｔｉｅ）クロマトグラフィー用
の各０．４１Ｘ５ｃｍ内径のカラム中に充填した６次い
でこれらのカラムを、ベンジルアミン、フェニルエタノ
ール及び安息香酸の各の１０μｇの試料をクロマトグラ
フィーにかけるために使用した。１：９メタノール：水
溶液（ｐＨ７＞を流出剤として０．５ｍｌ／分の流速で
用いることによりクロマトグラフィーを行なった〔ラボ
ラトリ−・データー・コントロール（Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ　Ｄａｔａ　Ｃｏｎｔｒｏｌ、　Ｒｉｖｅｒａ　Ｂ
ｅａｃｈ。
Ｆｌｏｒｉｄａ）から入手したグラジェント・マスター
（Ｇｒａｄｉｅｒ＋ｔ　Ｍａｓｔｅｒ）を備えたＬＤＣ
コンスタメトリツク（Ｃｏｎｓｔａ＋＊ｅｔｒｉｅ）　
Ｉ及びＩＩＩＧ型シスデシステム）、１００％エタノー
ル中フェニルエタノールの保持とｔｏとして用いた。そ
してに′を式に’　＝　（ｔＲ−ｔ、）／ｌ。
〔式中、七〇は溶質の保持時間であり、そしてｔ、は排除時間である〕
によって決定した。予想されるように、ベンジルアミン
は多分シラノールの相互作用の結果としてシンクロバッ
クＲＰ−８のカラムに好適に保持された。
１１Ｌ表 ハ　　の　イ゛クー　゛・　ロマ　　−フ　−ＲＰ−８
２，９３０，１２０ ＥＩ− フェニル　　　　０．２７　　　　　０．５２　　　　
５．９７フエニルエタノールは両力ラムに弱く保持され
た（第■表）、安息香酸は多分このカルボン酸と結合相
における残存第３級アミンとの相互作用のために、ＰＥ
ｌ−フェニルのカラムに優先的に保持された。中性ｐＨ
において、カラム中の残存荷電及びその符号は芳香族塩
基又は酸のいずれかの誇張された保持特性によって示さ
れる。
罠１涯ｉ 卵アルブミン（ＯＶＡ）１４０μＳ及び牛の血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）１００μｇからなる分析試験試料を、実
施例５のクロマトグラフィー装置を用い且つ０．１％ト
リフルオル酢酸から０．　１％トリフルオル酢酸中６０
％アセトニトリルまでの２０分間にわたる直線的グラジ
ェントを流出剤として１ｍ１１分の流速で用いることに
より、実施例５のＰＥｌ−フェニル及びシンクロバック
ＲＰ−８のカラムについてクロマトグラフィーに供した
。検知はスペクトロフロー（５ｐｅｃｔｒｏｆ　ｌｏｗ
）７７３型検知器〔クラトス社（Ｋｒａｔｏｓ、　Ｒａ
ｍ５ｅｙ。
Ｎ、　Ｊ、　））によりＡ　２５４で行なった。ＯＶＡ
及びＢＳＡのピークの保持時間（１＊）を第■表に示し
、第２図にこれをグラフ的に示す、ＯＶＡ及びＢＳＡ間
の分離（第■表及び第２図におけるＲ、）は方程式 ％式％） 〔式中、ｔＲｌ及びｔＢは各ピークの保持時間であり、
一方Δｔ□及びΔｔ、１２はピーク巾である〕 に従って計算した。添字１及び２はカラムから流出する
第１及び第２のピークに関するものである。
選択性及び分離に基づくと、シンクロバックＲＰ−８及
びＰＥｔ−フェニルのカラムは卵アルブミン及び牛の血
清アルブミンの分離に対して本質的に同等であった。し
かしながら、ＰＥｌ−フェニルのカラムは、両蛋白質が
ＲＰ−８媒体よりも数分間早く流出するから保持能力が
小さかった。吸着したＰＥｌ−フェニルのコーティング
上のフェニル基の表面密度はシンクロパックＲＰ−８コ
ーティングのアルキルシラン密度よりも大きいようであ
るから、減少した保持力は多分フェニル配位体（ｌｉｇ
ａｎｄ）のより大きい極性に由来する。減少した保持力
は有機溶媒への溶解度が限られた大きいポリペプチドに
関しては有利でありうる。それが欠点である場合には、
より多くの疎水性のイオン対形成剤（例えばヘプタフル
オル酪ａ）を用いることによって減少した保持力を回避
することができる。
曳１鮭Ｌ リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）　７５　μｇ　、イン
シュリン７５μ９、チトクロームｃ（ＣＹＴｃ）４０μ
ｙ　、ＢＡＳ７５μｍ及びＯＶＡ　１２５μ２からなる
分析試験試料を、実施例６のクロマトグラフィー及び検
知装置を用い且つ０．１％トリフルオル酢酸から０．１
％トリフルオル酢酸中５０％アセトニトリルまでの４０
分間にわたる直線的グラジェントを流出剤としてＯ，’
５ｍｅ／分の流速で用いることにより、実施例５のＰＥ
ｌ−フェニルのカラムクロマトグラフィーに供した。こ
のクロマトグラフィーでの分離の結果を第３図にグラフ
的に示す。
及支泗Ｊ− マツコラ鯨のミオグロピンシアノゲンブロマイド消化物
を、マツコラ鯨のミオグロピンシアノゲンブロマイドで
開裂することによって製造した。
２つのメチオニン残基とヘムを含有するミオグロビンは
３つのペプチドフラグメント（ＣＢ、−残基１〜５５、
ＣＢ２−残基５６〜１３１、及びＣＢ、−残基１３２〜
１５３）とポルフィリン環を生成する。マツコラ鯨のミ
オグロピンシアノゲンブロマイド消化物３００μｇから
なる分析試験試料を、実施例５のクロマトグラフィー装
置を用い且つ０．１％ヘアタフルオル酪酸（ＨＦＢＡ）
から０．１％ＨＦＢＡ中６０％又中日０％アセトニトリ
ルまでの２０分間にわたる直接的グラジェントを流出剤
として１ｍ１／分の流速で用いることにより、ＰＥｌ−
フェニル及びシンクロパックＲＰ−８の両力ラムのクロ
マトグラフィーに供した。ヘプタフルオル醋酸をこの場
合はイン対形成剤として使用した。これはＴＦＡがＰＥ
ｌ−フェニルのカラムにおいて不十分にしか保持されな
かったからである。検知はスペクトロフロー７７３型検
知器によりＡ　２３゜で行なった。クロマトグラフィー
での分離結果を第４図にグラフ的に示す。
ＰＦ、Ｉ−フェニルのカラム及びシンクロバックＲＰ−
８のカラムの双方は主たる試料成分の分離において良好
な分離と保持の特性を示した。この場合にもＰＥｌ−フ
ェニルの充填材料は保持力が弱くて最後のピークを流出
させるのに５０％アセトニトリルしか必要でなく、ＲＰ
−８カラムでは８０％アセトニトリルが必要であった。
興味あることに、ＰＥｌ−８フ工ニル支持体はヘム残基
のクロマトグラフィーに対して僅かに異なった選択性を
提供した。これはＲＰ−８カラムの場合第２のピークと
して流出し、ＰＦ、Ｉ−フェニルのカラムからは最後の
ピークとして流出しな、この遅れた流出は多分ＰＥｌ−
フェニル材料の芳香族基及びポルフィリン環の間の重な
り相互作用に起因するのであろう。
以上本発明をその好適な具体例を参照して記述してきた
けれど、他の具体例も同一の結果を達成することができ
る１本発明の変化及び改変は同業者は明白であり、本発
明の精神及び範囲に入る如きすべてのそのような改変及
び同等物は特許請求の範囲に包含されるものとする。
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明の反応式を示す系統図であり、第２Ａ
及び２Ｂ図は卵アルブミン−牛の血清アルブミンの蛋白
質混合物の分離に基づく２つの逆相カラムのクロマトグ
ラフィーでの評価を示すグラフであり、 第３図はりボヌクレアーゼーインシュリンーチトクロー
ムＣ−牛の血清アルブミン−卵アルブミンの蛋白質混合
物の分離に基づく逆相カラムのクロマトグラフィーでの
評価を示すグラフであり、そして 第４Ａ及び４Ｂ図は、精子鯨のミオグロピンシアノゲン
ブロマイ消化物の分離に基づく２つの逆相カラムのクロ
マトグラフィーでの評価を示すグラフである。 晴間　（＃） ＦＩＧ、　２ ＰＥＩ−７，ニル　　　　　） 晴間（分） ＦＩＧ、　３ Ａ、　　ＰＥｌ−フーｒ−＝ル　　　　　　　Ｂ、　シ
ンＺロバツク　ＲＰ−８し叶　間　（分　） ＦＩＧ、　４ 手続補正書（放） 昭和６２年８月２７日 特許庁長官　　小　川　邦　夫　殿 ｌ、事件の表示 昭和６２年特許願第１１３７００号 ２、発明の名称 逆相充填材料 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名　称　パーデユー・リサーチ・ファウンデーション４
、代理人　〒１０７ ５、補正命令の日付　　昭和６２年７月２８日く発送臼
）６、補正の対象 明細書の図面の簡単な説明の欄 １、明細書の図面の簡単な説明の棚の記載を下記の通り
訂正する： （１）明細書第３７頁１１行に「第２Ａ及び２Ｂ図」と
あるを ｒ第２図１ に訂正する。 （２）同３７頁末行に「第４Ａ及び４Ｂ図」とあるを ｒ第４図」 に訂正する。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、ａ）吸着物に対して親和性をもつ表面を有する担体
    材料を用意し； ｂ）該担体材料の表面を、反応性の第１級及び／又は第
    ２級のアミン基を含んでなる吸着物と接触させて、該吸
    着物の薄膜コーティングを静電力によつて該表面に吸着
    させ； ｃ）該吸着されたコーティングを、該コーティングの該
    反応性アミン基の一部分を第１の疎水性試剤と反応させ
    ることによつて架橋せしめ；そして ｄ）該架橋した吸着コーティングの少くとも１つの残り
    の反応性アミン基を、アミンを酸性のｐＨにおいて中性
    にするのに十分な量の第２の疎水性試剤と反応させる、 工程を含んでなる逆相材料の製造法。 ２、該担体材料がシリカ、アルミナ及びチタニアからな
    る群から選択される無機担体材料である特許請求の範囲
    第１項記載の方法。 ３、該吸着物が、存在しているとしても、殆んど第３級
    アミンを含まない特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、該吸着物がポリエチレンイミン、１，３−ジアミノ
    −２−ヒドロキシプロパン、テトラエチレンペンタイミ
    ン、及びエチレンジアミンからなる群から選択される特
    許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、該吸着物が溶媒中に含有され且つ吸着が少くとも部
    分的に、該溶媒の極性を調節することによつて確立され
    る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、工程ｃ）において、第１の疎水性試剤の使用量が該
    吸着したコーティングの該反応性アミンの３０％より多
    くを第３級アミンへ転化しない特許請求の範囲第１項記
    載の方法。 ７、第１の疎水性試剤がエポキシ樹脂、臭化アルキル、
    塩化アルキル及びヨウ化アルキルからなる群から選択さ
    れる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８、該第１の疎水性試剤が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の多官能性エポキシ樹脂を含んでなる特許請求の範囲第
    ７項記載の方法。 ９、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーテイングの
    実質的にすべての残りの反応性アミン基を、該アミンを
    酸性ｐＨにおいて中性にするのに十分な量の第２の疎水
    性試剤と反応させる特許請求の範囲第１項記載の方法。 １０、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーテイング
    の少くとも１つの残りの反応性アミン基を、該アミンと
    アミド結合を形成するのに十分な量の無水物、即ち式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は有機基である〕を有する無
    水物と反応させる特許請求の範囲第１項記載の方法。 １１、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーティング
    の実質的にすべての残りの反応性アミン基を、該アミン
    とアミド結合を形成するのに十分な量の該無水物と反応
    させる特許請求の範囲第１０項記載の方法。 １２、アミンの無水物との反応に、第３級アミンを含ん
    でなるプロトン捕捉剤を添加する特許請求の範囲第１０
    又は１１項記載の方法。 １３、Ｒ＿１及びＲ＿２が同一でも異なつてもよく且つ
    Ｒ＿１及びＲ＿２が炭素数２０までのアルキル、フェニ
    ル、ジフェニル及びナフチルからなる群から選択される
    特許請求の範囲第１０項記載の方法。 １４、該逆相材料を、逆相クロマトグラフィーにおける
    充填材料として使用する特許請求の範囲第１項記載の方
    法。 １５、蛋白質、ポリペプチド及び他の重合体を分離する
    ために該クロマトグラフィー充填材料を使用する特許請
    求の範囲第１４項記載の方法。 １６、ａ）吸着物に対して親和性をもつ表面を有する担
    体材料を用意し； ｂ）該担体材料の表面を、ポリエチレンイミンを含んで
    なる吸着物と接触させて、該吸着物の薄膜コーテイング
    を静電力によつて該表面に吸着させ； ｃ）該吸着したコーテイングの反応性アミン基の一部分
    を、該コーテイングの架橋を行なうのに十分な量のビス
    フェニル２官能性エポキシドと反応させ；そして ｄ）該架橋した吸着コーテイングの残りの反応性アミン
    基を、該アミンとアミド結合を形成する十分な量の無水
    安息香酸と反応させる、 工程を含んでなる逆相材料の製造法。 １７、ａ）吸着物に対して親和性をもつ表面を有する担
    体材料を用意し； ｂ）該担体材料の表面を、反応性の第１級及び／又は第
    ２級アミン基を含んでなる吸着物と接触させて、該吸着
    物の薄膜コーテイングを静電力によつて該表面に吸着さ
    せ；そして ｃ）該吸着したコーテイングの該アミン基を、該アミン
    を酸性ｐＨにおいて中性にしつつ該コーテイングを架橋
    させるのに十分な量の疎水性試剤と反応させる、 工程を含んでなる逆相材料の製造法。 １８、該担体材料がシリカ、アルミナ及びチタニアから
    なる群から選択される無機担体材料である特許請求の範
    囲第１７項記載の方法。 １９、該吸着物が存在しても少ししか第３級アミンを含
    まない特許請求の範囲第１７項記載の方法。 ２０、該吸着物が溶媒中に含有され且つ吸着が少くとも
    部分的に、該溶媒の極性を調節することによつて確立さ
    れる特許請求の範囲第１７項記載の方法。 ２１、ａ）吸着物に対して親和性をもつ表面を有する担
    体材料を用意し； ｂ）該担体材料の表面を、反応性の第１級及び／又は第
    ２級のアミン基を含んでなる吸着物と接触させて、該吸
    着物の薄膜コーテイングを静電力によつて該表面に吸着
    させ； ｃ）該吸着されたコーテイングを、該コーティングの該
    反応性アミン基の一部分を第１の疎水性試剤と反応させ
    ることによつて架橋せしめ；そして ｄ）該架橋した吸着コーテイングの少くとも１つの残り
    の反応性アミン基を、アミンを酸性のｐＨにおいて中性
    にするのに十分な量の第２の疎水性試剤と反応させる、 工程によつて製造される逆相担体材料。 ２２、該担体材料がシリカ、アルミナ及びチタニアから
    なる群から選択される無機担体材料である特許請求の範
    囲第２１項記載の逆相材料。 ２３、該吸着物が存在するとしても殆んど第３級アミン
    を含まない特許請求の範囲第２１項記載の逆相材料。 ２４、該吸着物がポリエチレンイミン、１，３−ジアミ
    ノ−２ーヒドロキシプロパン、テトラエチレンペンタイ
    ミン、及びエチレンジアミンからなる群から選択される
    特許請求の範囲第２１項記載の逆相材料。 ２５、該吸着物が溶媒中に含有され且つ吸着が少くとも
    部分的に、該溶媒の極性を調節することによつて確立さ
    れる特許請求の範囲第２１項記載の逆相材料。 ２６、工程ｃ）において、第１の疎水性試剤の使用量が
    該吸着したコーテイングの該反応性アミンの３０％より
    多くを第３級アミンへ転化しない特許請求の範囲第２１
    項記載の逆相材料。 ２７、該第１の疎水性試剤が式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の多官能性エポキシ樹脂を含んでなる特許請求の範囲第
    ２１項記載の逆相材料。 ２８、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーテイング
    の実質的にすべての残りの反応性アミン基を、該アミン
    を酸性ｐＨにおいて中性にするのに十分な量の第２の疎
    水性試剤と反応させる特許請求の範囲第２１項記載の逆
    相材料。 ２９、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーテイング
    の少くとも１つの残りの反応性アミン基を、該アミンと
    アミド結合を形成するのに十分な量の無水物、即ち式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は有機基である〕を有する無
    水物と反応させる特許請求の範囲第２１項記載の逆相材
    料。 ３０、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーテイング
    の実質的にすべての残りの反応性アミン基を、該アミン
    とアミド結合を形成するのに十分な量の該無水物と反応
    させる特許請求の範囲第２９項記載の逆相材料。 ３１、アミンの無水物との反応に、第３級アミンを含ん
    でなるプロトン捕捉剤を添加する特許請求の範囲第２９
    項記載の逆相材料。 ３２、Ｒ＿１及びＲ＿２が同一でも異なつてもよく且つ
    Ｒ＿１及びＲ＿２が炭素数２０までのアルキル、フェニ
    ル、ジフェニル及びナフチルからなる群から選択される
    特許請求の範囲第２９項記載の逆相材料。 ３３、ａ）吸着物に対して親和性をもつ表面を有する担
    体材料を準備し； ｂ）該担体材料の表面を、反応性の第１級及び／又は第
    ２級アミン基を含んでなる吸着物と接触させて、該吸着
    物の薄膜コーテイングを静電力によつて該表面に吸着さ
    せ；そして ｃ）該吸着したコーテイングの該アミン基を、該アミン
    を酸性ｐＨにおいて中性にしつつ該コーテイングを架橋
    させるのに十分な量の疎水性試剤と反応させる、 工程で製造される逆相材料。 ３４、該吸着物が存在するとしても殆んど第３級アミン
    を含まない特許請求の範囲第３３項記載の逆相材料。 ３５、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーテイング
    の残りの反応性アミン基の多くを、該アミンを酸性ｐＨ
    において中性にするのに十分な量の第２の疎水性試剤と
    反応させる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３６、工程ｄ）において、該架橋した吸着コーテイング
    の残りの反応性アミン基の多くを、該アミンを酸性ｐＨ
    において中性にするのに十分な量の第２の疎水性試剤と
    反応させる特許請求の範囲第２１項記載の方法。
JP62113700A 1986-05-13 1987-05-12 逆相充▲てん▼材料 Pending JPS6345558A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US862750 1986-05-13
US06/862,750 US4920152A (en) 1986-05-13 1986-05-13 Reversed-phase packing material and method

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPS6345558A true JPS6345558A (ja) 1988-02-26

Family

ID=25339242

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62113700A Pending JPS6345558A (ja) 1986-05-13 1987-05-12 逆相充▲てん▼材料

Country Status (6)

Country Link
US (1) US4920152A (ja)
JP (1) JPS6345558A (ja)
DE (1) DE3713892A1 (ja)
FR (1) FR2598634B1 (ja)
GB (1) GB2190369B (ja)
IT (1) IT1206787B (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014521078A (ja) * 2011-07-13 2014-08-25 インストラクション・ゲーエムベーハー クロマトグラフィー用複合材料
JP2016006410A (ja) * 2014-05-27 2016-01-14 Jnc株式会社 クロマトグラフィー担体およびそれを用いたタンパク質精製方法

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1331254C (en) * 1989-02-27 1994-08-02 Victor Berber Barretto Ion-exchange composition employing resin attachment to dispersant and method for forming the same
JP2874297B2 (ja) * 1989-12-18 1999-03-24 東ソー株式会社 逆相クロマトグラフィー用充填剤及びその製造方法
WO1994000214A1 (en) * 1992-06-19 1994-01-06 Sepracor Inc. Passivated and stabilized porous supports and methods for the preparation and use of same
JP2000193648A (ja) * 1998-12-24 2000-07-14 Nomura Kagaku Kk 逆相液体クロマトグラフィー固定相の使用方法およびその固定相を備えた逆相液体クロマトグラフ装置
RU2148679C1 (ru) * 1999-03-25 2000-05-10 Закрытое акционерное общество "Обнинский центр естественных наук и технологий" Фильтрующий элемент и способ его изготовления
US7045059B2 (en) * 2003-07-28 2006-05-16 Sielc Technologies Corp Universal bonded phase material for chromatographic separation
US7250388B2 (en) * 2003-11-07 2007-07-31 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Medium for chromatographic separations
JP4637533B2 (ja) * 2004-08-31 2011-02-23 信和化工株式会社 固相抽出用分離剤
US7169307B2 (en) * 2004-09-02 2007-01-30 Jian Liu Process for the extraction of paclitaxel and 9-dihydro-13-acetylbaccatin III from Taxus
US7449116B2 (en) * 2004-10-01 2008-11-11 Agilent Technologies, Inc. Methods and systems for protein separation
US7943046B2 (en) * 2004-10-01 2011-05-17 Agilent Technologies, Inc Methods and systems for on-column protein delipidation
RU2361965C1 (ru) * 2007-10-22 2009-07-20 Институт химии твердого тела Уральского отделения Российской Академии наук Способ изготовления фильтрующего элемента и поворотное приспособление для его изготовления
EP2337680A1 (en) * 2008-09-22 2011-06-29 Brigham Young University Functionalization of hydrogen deuterium-terminated diamond
EP2570183A1 (en) * 2011-09-15 2013-03-20 InstrAction GmbH Sorbent comprising on its surface an aliphatic unit for the purification of organic molecules
EP2570184A1 (en) * 2011-09-15 2013-03-20 InstrAction GmbH Sorbent comprising on its surface an aromatic ring system having an anionic or deprotonizable group for the purification of organic molecules
EP2545989A1 (en) * 2011-07-13 2013-01-16 InstrAction GmbH Composite material for chromatographic applications
US10421059B2 (en) 2014-10-24 2019-09-24 Samsung Electronics Co., Ltd. Gas-adsorbing material and vacuum insulation material including the same
CN114618459A (zh) * 2020-12-11 2022-06-14 中国科学院大连化学物理研究所 一种含多卤素官能团的混合模式色谱固定相及其制备和应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3538024A (en) * 1969-06-30 1970-11-03 Dow Chemical Co Acrylic-modified polyalkylenimine or polyalkylenepolyamine
US3951815A (en) * 1974-09-05 1976-04-20 Universal Oil Products Company Composite semipermeable membranes made from polyethylenimine
US4245005A (en) * 1979-02-28 1981-01-13 Purdue Research Foundation Pellicular coated support and method
US4560704A (en) * 1982-11-12 1985-12-24 Purdue Research Foundation Polyamine based bonded phase chromatography
FR2543448A1 (fr) * 1983-04-01 1984-10-05 Rhone Poulenc Spec Chim Procede de fractionnement du plasma
US4544485A (en) * 1984-08-31 1985-10-01 Purdue Research Foundation Chromatographic method and means
US4551245A (en) * 1985-04-22 1985-11-05 J. T. Baker Chemical Co. Acylated polyethylenimine bound chromatographic packing

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014521078A (ja) * 2011-07-13 2014-08-25 インストラクション・ゲーエムベーハー クロマトグラフィー用複合材料
JP2016006410A (ja) * 2014-05-27 2016-01-14 Jnc株式会社 クロマトグラフィー担体およびそれを用いたタンパク質精製方法

Also Published As

Publication number Publication date
IT8720482A0 (it) 1987-05-12
GB2190369A (en) 1987-11-18
IT1206787B (it) 1989-05-03
GB8711264D0 (en) 1987-06-17
US4920152A (en) 1990-04-24
FR2598634A1 (fr) 1987-11-20
DE3713892A1 (de) 1987-11-19
GB2190369B (en) 1990-06-13
FR2598634B1 (fr) 1992-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS6345558A (ja) 逆相充▲てん▼材料
CN102574102B (zh) 用于结合蛋白质和肽的特异性吸附剂及使用其的分离方法
US4245005A (en) Pellicular coated support and method
Petro et al. Polymers immobilized on silica gels as stationary phases for liquid chromatography
JP4440474B2 (ja) クロマトグラフィー分離法および選択吸着体
EP2700445B1 (en) Method of preparing a chromatography packing
US9643173B2 (en) Temperature responsive adsorbent having a strong cation exchange group and method for producing the same
JPH04505968A (ja) クロマトグラフィー用被覆媒体
JPH06504482A (ja) 親水性スルホンアミド結合コーティング
EP0948742A1 (en) Preformed polymer coating process and product
Wang et al. Facile synthesis of copper (II)-decorated functional mesoporous material for specific adsorption of histidine-rich proteins
EP3512866B1 (en) The use of a polymeric mesh for the purification of macromolecules
Štulík et al. Stationary phases for peptide analysis by high performance liquid chromatography: a review
Ivanov et al. Polymer-coated adsorbents for the separation of biopolymers and particles
Bereli et al. Antibody purification by concanavalin A affinity chromatography
JPS6344946A (ja) カチオン交換性材料
JP4371900B2 (ja) クロマトグラフィー用充填剤
JP2015520657A (ja) 逆相クロマトグラフィー用ドープ材料
US5186838A (en) Chromatographic packing material having functionalized polymeric coating on a substrate
JP4660472B2 (ja) アフィニティリガンドの製造法
EP1455920B1 (en) Separation method
JP4156675B2 (ja) コートされたポリマー物品およびその使用
JP3349613B2 (ja) 液体クロマトグラフィー用充填剤
Ivanov et al. Structures of grafted polymer phases and features of protein separation on composite anion-exchangers
JP2869704B2 (ja) オボグリコプロテイン及びそれを含むクロマトグラフィー用分離剤並びに分離法