JPS63501683A - ボルデテラ・ペルトゥシス（□ＤＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対してワクチン作用を有する精製された抗原、この抗原を作成するための手段、特に組換えＤＮＡ及びこの抗原を含有するワクチン組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ボルデテラ−ペルトウシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対し てワクチン作用を有する精製された抗原、この抗原を作成するための手段、特に 組換えＤＮＡ及びこの抗原を含有するワクチン組成物 本発明は、百日咳に対する精製ワクチンの右動成分を形成しうるポリペプチドに 関する。このワクチンは、病原性作用因子（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ａｇｅｎｔ ）の異なる抗原に対して作用する。更に詳しくは、本発明は、これらワクチン成 分の間に形成されうる組合せにも関する。これらは、遺伝子工学技術によって形 成することができる。

したがって１本発明は、前記ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列と、これを含 有するベクターにも関する。

百日咳は、非腐敗性（ｎｏｎ−ｓｅｐｔｉｃ）の気管気管支炎をひき起こすボル デテラ・ペルトウシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ７による細菌性感染症であり、そ れのみではないが、最も危険性のある年令群である６か月未溝の幼児を死に到ら しめることがある。

この感染症は、５世紀もの間知られており、全ての国で流行し、１９４５年以来 先進国において系統的に行なわれるようになった予防ワクチン接種によってのみ 制御できる。この病気が臨床的な所見段階にまで進むと、どんな特定の処置も不 可能であり、その場合の処置は、純粋に対症的なものとなり、酸素欠乏症、及び 、死の原因となる感染性の２次併発症の防止を意図したものとなる。

Ｂ、ペルトウシスに活性の抗生物質は、その病原性媒介物が細菌外にあるために 、百日咳の進行に影響しない。

一方、ワクチン接種は、流行の発生を抑える有効な方法である。この予防方法を 中止した事により致死例を含む急激な流行が発生した、日本及び英国の最近の例 によってワクチン接種の有効性が間接的に証明される。

世界中で現在使用されているワクチンの大部分は、Ｂ、ペルトウシスの懸濁物か ら成るものであって、遠心分離によって単に洗浄した後、５６℃の加熱又は場合 によっては殺菌剤の添加によって殺菌したものである。５６℃の加熱は、単に、 溶菌によって放出された皮膚壊死性トキシンを不活性化することを主な目的とし ている。

現在、Ｂ、ベルト９シスにおいて、２つの免疫保護抗原が実際に知られている。

フィンブリア（分子量＞１５０，０００の蛋白質）に結合される繊維性血球凝集 素（ＦＨＡ）は、５６℃で熱変性され、病原作用を失なうが、呼吸器の上皮細胞 への付着において主要な役割を果たす。

第２の抗原は、白血球増加症プロモーター因子（以下ＬＰＦと称する）、百日咳 トキシン（Ｐｔｘ）、ヒスタミン感作因子（ＨＳＦ）又は膵臓内分泌物のβ高活 性化蛋白質（ＩＡＰ）などの呼称で知られる。これらの異なった呼称は、この玉 量体の蛋白質（分子量、±９５０００）によって得られるＡＤＰリボシル転移酵 素の活性を有するサブユニットαに起因する。多重の生物学的効果を反映してい る。これは、真核生物の細胞の７デニルシクラーゼの調節部位の阻害性サブユニ ットに作用することによって、真核生物の周期的なＡＭＰ合成の阻害的調節を妨 げる。この蛋白質の付着機能は、特定されていない他の分子構造によって担われ ていると思われる。

培養されたＢ、ペルトウシスによって分泌されたこれら２種の抗原の重要性によ って百日咳に対する最初非細胞ワクチンを開発するためにこれらの抗原を精製す ることが試みられることに至り、日本において工業的規模で実際に製造されてい る。

生化学、免疫化学及び生理病理学上の幅広い研究がなされ、その免疫抗原性とし ての品質を評価する実質的な議論がなされたこれら２種の抗原以外にも、本発明 者らの最近の研究によって、Ｂ、ペルトウシスによって合成され分泌される第３ の生成物すなわち、アデニルシクラーゼ（ＣＹ　Ａ）が、抗百日咳免疫保護にお いて重要な役割をする免疫抗原として作用しうるという十分根拠のある推定が導 かれた。

十分に研究されていないが、Ｂ、ペルトウシスの免疫抗原性に同様に関与する可 能性のある他の抗原としては、その生物学的効果が全ての細菌性エンドトキシン のそれと同様であるリポポリサッカライド（ＬＰＳ）、皮膚の壊死に関係する膀 胱血漿蛋白質である皮膚壊死性トキシン、並びに、ハムスターの気管から採取し た試料についての試験管内の試験においてその上皮に対する存在及び特異的な役 割が推測されている気管シトトキシンがある。

前記の３種類の免疫抗原、即ちＦＨＡ、Ｐｔｘ及びＣＹＡは細胞外性であるが、 それらの生化学的な精製には、次のような、種々の問題が残されている。

一細胞膜上で構造的に関係した部位からの塩析機構に関係していると思われる同 時精製； −合成された物質が低収率であって、工業的規模において再現が困難であり；と りわけ −合成媒地において培養の際の、Ｂ、ベルトゥシスの表現塁の変異により、酸素 加圧及びｐＨ条件により又は、特に、同定しうる培地の形成要素にコチンアミド 、グルタチオン、Ｍｇ２＋イオン）によりＬＰＦ及びＣＹＡの合成の変調に多分 起因している。

したがって、本発明の目的は、遺伝子工学技術によって高純度で、かつ高い再現 性で取得しうるポリペプチドを提供することにある。これらのポリペプチドは血 清型１．３（パリのバストウール・インスチチュート（Ｐａｓｔｅｕｒ　Ｉｎ５ ｔｉｔｕｔｅ）による）Ｂ、ペルトウシス８１４４のゲノムＤＮＡからまず取得 されたヌクレオチド配列のデータバンクから得られた接融配列の適当な宿生中に おいての発現の結果書られる。

Ｂ、ベルト　シス　バンク 膵臓デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮＡアーゼエベーリンゲル、マンハイム（Ｂ ｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｈｅｉｍ）　）３３０　ＪＬｇ／ｗｌ（ｉ存在下に 、１０ｍＭ　ＭｎＣ文２及ヒ濃度が２０ｐ−ｇ／−のウシ血清アルブミン（シグ マ酸（ｓ　Ｉ　ＧＭＡ））を含有する最終容量４５０ＩＬｌの５０　ｍ　Ｍ　） リス　ＨＣ文緩衝液（ｐＨ７、５）において、Ｂ、ペルトウシスのＤＮＡ３０Ｊ Ｌｇを、１５℃で５〜１０分間培養した。このようにしてフラグメントが得られ 、その大きさは約１〜約８ｋｂの間でさまざまであった。ＥＤＴＡを添加して反 応を終らせ最終濃度を５ｍＭとした。ＤＮＡをフェノール／クロロホルム／イソ アミンアルコール（２５Ｖ／２４Ｖ／ＩＶ）の等容量の混合物で抽出し１次にエ タノールを用いて沈殿させた。

前記のようにして得られたＤＮＡ　５ｐｇを、Ｔ４ＤＮＡ−ポリメラーゼ（Ｐ　 、　Ｌ　、バイオケミカルズ製（Ｐ、　Ｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｇ）　） 　２５　Ｕ及び大腸菌（Ｅ。

Ｃａｎ　ｉ）Ｄ　Ｎ　Ａリガーゼにュー・イングランド・バイオラブ酸（Ｎｅｗ 　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ））　６０　Ｕ　（７）存在下、１０ｍＭ硫 酸アンモニウム、１０ｍＭ　β−メルカプトエタノール、０．５ｍＭ　ＥＤＴＡ 、２００　ｐＭｄＡＴＰ、ｄｃＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ及び１００ルＭ　β− ＮＡＤを含有する容量６０ル立の４０ｍＭトリス　ＨＣ文緩衝液（ＰＨ７、９） 中で、１５℃で１時間培養した。

前記のように、フェノールで抽出し、エタノールで沈殿させた後、Ｔ４ＤＮＡリ ガーゼにュー拳イングランド・バイオラブ酸）１００ＯＵの存在下に。

適当な緩衝液（５ｍＭ　ＭｇＣｌ２．５ｍＭ　ＤＴＴ及び０．５ｍＭＡＴＰを含 有する６６ｍＭトリスＨＣＩ、ＰＨ７，５）中において、ホスホリル化ＥｃｏＲ Ｉリンカ−にュー・イングランドΦバイオラブ製）０．２５ルｇと共に容量２２ ．５ＩＬ見中において培養した。培養は４℃で４時間行なった。Ｔ４ＤＮＡリガ ーゼにュー・イングランド・バイオラブ酸）１００ＯＵを添加し、４℃で１６時 間培養を続けた。混合物を一８０℃に凍結することと解凍のくり返しを２回連続 して行った。水を加えて容量を５０Ｉｉ、文とした。

次に、ＥｃｏＲＩ　にュー拳イングランド拳バイオラブ製）５０単位の存在下、 製造者によって推奨された緩衝液容量２５０ｐ−１中において、ＤＮＡを３７℃ で３時間培養した。６０℃で１０分間培養した後、前記のようにＤＮＡをフェノ ールで抽出した。酢酸アンモニウムを添加して最終濃度を２．５Ｍとした後、２ 容エタノールを添加してＤＮＡを沈殿せしめ、混合物を一２０℃で１６時間放置 した。

５分間消化したＤＮＡ　５００ｎｇもしくは１ルｇ又は１０分間消化したＤＮＡ 　５００ｎｇもしくは１終ｇを、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼにュー・イングランド ・バイオラブ酸）２００単位の存在下に、容量５終文中において、ベクター入ｇ ｔｔｌ（プロトクローン　ＴＭ　ＧＴシステム、プロメガバイオチク製ＣＰｒｏ ｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ）　）　２５０ｎｇに、（プロメガ、バイオチクによっ て推奨された連結緩衝液中において）別々に連結した０反応を４℃で１６６時間 行せしめた。

得られた生成物は、バクテリオファージλのキャプシド中に包成した。包成抽出 物を、マニアティス等（Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ）により記載されたプロ トコールに従って調製した（分子クローニング、実験マニュアル、コールド・ス プリング・ハーバ−，２６４−２６７頁、１９８２　）　（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ 　ｃｌｏｎｉｎｇ、　Ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｎａｌ、　Ｇｏｌｄ　Ｓ ｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｕｒ、　ｐ、２６４−２６７．１９８２）。

要約すると、このキャブジッド包膜は、次のように行なわれる。連結反応したＤ ＮＡ　ＩＩＬｉ（ベクター５ｏｎｇ）を４℃で緩衝液Ａ（２０ｍＭ）リス　ＨＣ Ｉ（ｐＨ８）、３ｍＭ　ＭｇＣ！Ｌ２．０．０５％　β−メルカプトエタノール 、１ｍＭ　ＥＤＴＡ）７ｐＬｌに添加し、次に緩衝液Ｍ　Ｌ　（６ｍｌ’ｌ）リ ス　Ｈｃｘ（ｐＨ７，４）、１８ｍＭ　ＭｇＣ１ｚ　、３０ｍＭ　スペルミジン 、３０ｍＭ　β−メルカプトエタノール及び１５ｍＭ　プトレシン）ＩＩＬｕを 添加した。４℃に解凍したＳＥキャプシド化抽出物６ｐｔ、ｌを添加し。

次に、４℃に解凍したＦＴＬキャプシド化抽化物出物１０ＪＬｕ加した。この混 合物を、２５℃で１時間培養し、次に、１０ｍＭ）リス　ＨＣ文緩衝液（ｐＨ７ ，４）、１０ｍＭ　ＭｇＣｊＬ２を用いて５００　ｔｔｆＬまで希釈し、指示面 上に展開した。

ＦＴＬ及びＳＥの各抽出物は、それぞれ熱的に誘導された菌株ＢＨＢ　２６８８ 及びＢＨＢ　２６９０の抽出物である。これらの菌株の遺伝子型は、マニアティ スらの前出の文献第５０４頁に記載されている０本発明における場合には、取得 された抽出物から、λＣＩ　８５７のＤＮＡ　１ルｇ当り約１０９個のバタテリ オファージを生成することができた。

包成化後に、組換えファージの比率を測定するために、ファージのスクリーニン グを行った。

（Ｉ　ＰＴＧ＋Ｘ−ガ、ルを含む指示板上の青色プラークに対する白色溶菌の領 域の数によると）組換えファージ約６０％が得られた。

最終的な収率は、使用したベクターＩＪＡｇ当り１組換えファージ３００．００ ０であった。

このようにして構成され、Ｂ、ペルトウシスのゲノム約３００倍を含むバンクは 百日咳に感染した患者から得られたヒトの血清混合物を用いてスクリーンを行っ た。溶菌プラークの約３０％が陽性の応答を示した。

精製された３つの抗原（ＬＰＦ、ＦＨＡ及びＣＹＡ）に対して向けられた特異的 な抗血清によるスクリーニ０．３〜０．５％は、これらの抗原に対応する個々の 配列を含有していた。

このスクリーニングは、ＬＰＦ、ＦＨＡ及びＣＹＡそれぞれに対して（より詳し くは、本発明の発明者が所属する、研究グループによってこのＣＹＡから単離さ れた、約６７０００の分子量の蛋白質に対して）家兎及びマウスに銹発された抗 体の助けを借りて行なった。一方、 一百日咳ワクチンで高度免疫されているヒトの血清及び 百日咳にり患している、ワクチーン注射をしていない小児の血清 に含まれる抗体を用いて、スクリーニングが行われた。

スクリーニングの方法及び用いられたＲＹ１０９０菌株は、Ｒ，ヤング等によっ て記載されている（プロシーディング争ナショナル・アカデミ−・サイエンスや 米国、第８２巻（１９８５）、２５８３〜２５８７頁（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、 　Ａｃａｄ、　５ｃｉ−ＵＳＡ、　Ｖｏｌ。

８２　（１９８５）、２５８３〜２５８７））。

マルトース（０，０２％）を含有するＬＢｆｉ地において飽和まで培養したＲＹ 　１０９０菌株を、遠心分離に付し、１０ｍＭ　Ｍｇ５Ｏａ中に加えた。バンク から得られた約１０４個のファージを約２Ｘ　１０Ｓ個の菌と共に３７℃で１５ 分間培養した後、ＴＲＹＰＴＯＮＥプレート上に展開した。４２℃で３時間培養 した後に。

プレートを３７℃の温度とし、イソプロピル−β−り一チオガラクトシド（ＩＴ ＰＧ）ｌＯｍＭを含浸せしめたニトロセルロースフィルター（シュライシェル・ アンド・シュル製（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　＆　５ｈｕｌ＋）　）をその上に載 置した。３７℃で３時間培養した後、第１のフィルターを取除き、やはりＩ　Ｐ ＴＧを含浸せしめた第２のフィルターを第２の刻印（ｐｒｉｎｔ）を得るために 、プレート上に３時間載置した。

これらのフィルターは、ＴＢＳ＃衝液（５０ｍＭトリス、１５０ｍＭ　Ｎ、ａＣ 文）中に浸漬せしめた。

抗体が用いられてフィルターをスクリーニングする方法の主要な工程は次の通り である。

−５％スキムミルク（商標名ＲＥＧＩＬＡＩＴ）及び０．０１％アジ化ナトリウ ム（ＴＢＳ乳）を含有するＴＢＳ緩衝液中において室温で１時間フィルターを培 養する。

一免疫血清を用いてＴＢＳ乳を３７℃で１時間培養する。

−ＴＢＳ乳で３回洗浄。

ＴＢＳ乳＋０．１％　ＮＦ−４０で１回洗浄。

ＴＢＳ乳で１回洗浄。

＋　１２５Ｉ（フィルター１個当り０．５マイクロキユリー）にて標識された蛋 白質Ａを用いて室温で１時間培養する。

−ＴＢＳ乳で３回洗浄。

ＴＢＳ乳＋０．１％　ＮＰ−４０で１回洗浄ＴＢＳ乳で１回洗浄、 ＴＢＳで２回洗浄。

一フィルターを乾燥する。スクリーンを用いて、８０℃でオートラジオグラフィ を行う。

陽性信号が記録されている、プレート上の個所で、ファージ粒子含有寒天を取出 し、１０ｍＭ　ＭｇＳＯ４を含有する１００ｍＭリン酸塩緩衝液中において３７ ℃で１時間培養した。陽性信号を与えるファージがオートラジオグラフィの陽性 信号の数に相当する、プレー）１枚当りの溶菌のプラークを得るのに必要な回数 のファージの再精製を行なった。

陽性信号を与える溶菌プラークの解明は、成る場合には、ペルオキシダーゼ（バ イオシス類（ＢＩＯＳＹＳ））で標識された家兎、マウス又はヒト抗−Ｉｇ抗体 によって行われた。この研究はマウスの血清を用いる場合には特に必要であった 。

ＣＹＡ　（家兎血清）、ＦＨＡ（マウス血清）及びＬＰＨ（マウス又は家兎の血 清）に対して向けられた、単一特異性の血清と共に陽性信号を与える溶菌プラー クは、通常の技術によって、ＲＹ　１０９０菌株において溶原化された。溶原フ ァージは、３０℃で成長を示しうるが４２℃で成長を示さないものとして定義し た。前原クローンの呼称はそれぞれ次の通りとした。

ＲＹ　１０９０　λｇｔｌｌ　溶菌（ｌ　ｙ　ｓ）　ＣＹＡＲＹ　１０９０　人 ｇｔｌｌ　溶菌（ｌｙｓ）’ＬＰＦＲＹ　１０９０　人ｇｔｌｌ　溶菌（１ｙ　 ｓ）　ＦＨＡこれらのクローンは、ｌ−４７４、ｌ−４７５、■−４７６の番号 で、１９８５年７月２９日に、バストウール・インスチチュートの国立培養微生 物収集部（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｇｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ 　ｏｆ　Ｍｉｃｒ。

−ｏｒｇａｎｉｓｍ（Ｎ、Ｃ，Ｃ，Ｍ、）　）に寄託された。

単一特異血清（前述）によって陽性信号を与える溶菌プラークが、高度免疫され たヒト血清又は患者から由来の血清を用いてスクリーニングされた場合にも、そ れらの大部分は陽性信号を呈した。

ＲＹ　１０９０菌株において得られた溶原ファージは抗原ＬＰＦ％ＦＨＡ及びＣ ＹＡに対応する挿入を行う組換えファージを構築したり増幅することを可能にす る。また、これらの溶原ファージは通常の技術によって対応するＤＮＡを調製す ることも可能にし、適切な標識された該ＤＮＡは特異的なプローブとして用いら れる。

組換えファージに含まれる融合蛋白質を生成するために、変異株Ｈｆ１（ヤング 等（Ｙｏｕｎｇ　ｅｔ　ａｌ）に記載）を担持しているＲＹ　１０８９菌株にお いて溶原化が行なわれる。

所望の融合蛋白質を含有する菌培養物は、この菌株を３０℃で培養　すること　 により行なわれる０次に、２０分間４２℃で培養を誘発し、その後、１０ｍＭ　 Ｉ　Ｐ　Ｔ　Ｇにより誘発し、最後に３７℃で１時間培養することによって調製 される。生成した蛋白質は次に通常の技術によって精製することができる。

これらの融合蛋白質がワクチン及び保護作用を有するかについては、世界保健機 構（ＷＨＯ）によって推奨されている、ケンドリック（Ｋｅｎｄｒｉｃｋｅ）試 験によって測定することができる。この試験は、マウスが実験的に感染した際に 観察されるＢ、ペルトウシスの病原性及び免疫抗原性を研究することにより構成 されている。これは、致死量の推定−免疫されているか又はされていないマウス について１国際参照画株（ＷＨＯ）１８３２３　（血清型１．２．３．４．５． ７）の５０％である−も行う、“ワクチン形成”の可能性を有する全ての免疫原 の測定は、有効性が知られているワクチンとの比較により行われる。

したがって、本発明は、百日咳に対するワクチンを形成する有効成分としてＣＹ Ａ及びこれから取得可能な精製された蛋白質の使用に特に関する。

本発明による好ましいワクチンは、ＦＨＡ、ＬＰＦ及びＣＹＡの特性を有する抗 原の組合せを包含する。このように、これら３つの異なる型の抗原由来の効果を 同時に利用することができる。

Ｂ、ペルトウシスによって繊維芽細胞３Ｔ３の感染の血清中性化に基づいた試験 データにより、抗ＦＨＡ抗体は細胞膜への細菌の付着に対して保護するが、細胞 毒作用を中和しないように思われること、抗ＬＰＨ抗体は、弱い付着阻害のほか に、細胞毒現象に対して細胞を保護すること、並びに、この効果が抗ＣＹＡ抗体 によって顕著に潜勢化されることが示される。

かかるワクチンは、Ｂ、ペルトウシスの病原能力に含まれる主要な決定因子の各 々に対して免疫を与えうるように思われる。ＦＨＡは、菌の接種物の付着及び本 来の場所での繁殖に主として関与する決定因子でありＬＰＨ及びＣＹＡは、Ｆ− ＨＡと独立して作用しうるシトトキシンである。

同様に、本発明は、抗ＦＨＡ抗体、抗ＬＰＦ抗体及び抗ＣＹＡ抗体によって認識 される、前記の３つのファージ（又は同様の免疫原特性を備えた同種の全ての物 質）に含まれる挿入配列の発現生成物を組合せてなるワクチン組成物に関する。

また１本発明は１選ばれた投与形態１例えば経口もしくは非経口的投与又は鼻も しくは直腸を介した投与などの形態に適合した全ての薬学的ビークルを組合せて 、前述のワクチンの有効成分の有効量を含有するワクチン組成物にも関すること は、極めて明白である。

最後に１本発明は、核酸の挿入配列自体又は同様のポリペプチドをコードする全 ての配列にも関する。特に、Ｎ、Ｃ，Ｃ，Ｍ、に寄託されたベクターに含まれる 挿入配列と交雑しうる核酸配列が本発明の特別な部分を形成している。

国際調査報告 ｋ　ＰＣＴ／ＦＲ８６１００３９７

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．Ｉ−４７４の番号でＮ．Ｃ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたファージそれ自身に含ま れる、Ｂ．ベルトゥシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のゲノムに由来する挿入配 列を含む紀換え核酸。 ２．Ｉ−４７５の番号でＮ．Ｃ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたファージそれ自身に含ま れる、Ｂ．ベルトゥシスのゲノムに由来する挿入配列を含む組換え核酸。 ３．Ｉ−４７６の番号でＮ．Ｃ．Ｃ．Ｍ．に寄託されたファ−ジそれ自身に含ま れる、Ｂ．ベルトゥシスのゲノムに由来する挿入配列を含む組換え核酸。 ４．請求の範囲第１項記載の核酸挿入配列に対応する、適切な宿主中で発現せし められた蛋白質生成物。 ５．請求の範囲第２項記載の核酸挿入配列に対応する、適切な宿主中で発現せし められた蛋白質生成物。 ８．請求の範囲第３項記載の核酸挿入配列に対応する、適切な宿主中で発現せし められた蛋白質生成物。 ７．請求の範囲第４、５及び６項のいずれか１項に記載の発現生成物を含有する 免疫原組成物。 ８．請求の範囲第４、５、６項に記載のすべての発現生成物を含有することを特 徴とする請求の範囲第７項記載の免疫原組成物。 ９．請求の範囲第７項又は第８項に記載の免疫原組成物の有効成分を薬学的に許 容しうるビークルと組合せて含有することを特徴とするＢ．ベルトゥシスに対す るワクチン組成物。