JPS6363553B2

JPS6363553B2 -

Info

Publication number: JPS6363553B2
Application number: JP6522781A
Authority: JP
Priority date: 1981-05-01
Filing date: 1981-05-01
Publication date: 1988-12-07
Also published as: JPS57183798A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は新規なＮ−Ｄ−キシロピラノシド系化
合物に関し、さらに詳しくは、細胞膜表面に存在
する複合糖質（プロテオグリカン）の質及び量を
変える性質を有し、制ガン効果、動脈硬化抑制効
果、血栓抑制効果等が期待されるＮ−Ｄ−キシロ
ピラノシド系化合物に関するものである。

従来、Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物
が、細胞膜表面あるいは細胞間に存在し、生体組
織の重要な構成要素となつていわゆるプロテオグ
リカンの量を変化させ、或る種の細胞膜表面の性
質を大きく変化させることが知られている〔ジヤ
ーナル・オブ・バイオケミストリー（J.
Biochem.）、74、1069−1073（1973）〕。

この性質は、癌細胞を例にとると、Ｏ−β−Ｄ
−キシロピラノシド系化合物が、癌細胞表面のプ
ロテオグリカンの性質を変え、その量を少なくし
て癌細胞をいわば裸の状態とし、もつて生体の癌
細胞に対する免疫性を高めることによつて発癌の
予防、癌細胞の免疫による治療効果を高めること
が充分期待される。ところが、Ｏ−β−Ｄ−キシ
ロピラノシド系化合物は酵素による加水分解を受
けやすく、例えば、制癌効果を目的として、人体
内に投与した場合、その大部分が、効果を表わす
前に分解されてしまい役に立たなくなる。そこ
で、本発明者らは、酵素による加水分解を受け難
く、しかも、細胞表面のプロテオグリカンの質と
量を変化させることができるＮ−Ｄ−キシロピラ
ノシド系化合物を見出し、本発明を完成するに到
つた。

本発明の目的は、新規なるＮ−Ｄ−キシロピラ
ノシド系化合物を提供することである。

本発明は、すなわち、次式（）：で示されるＮ−パラカルバモイルフエニル−Ｄ−
キシロピラノシルアミンを提供するものである。

式（）で示される化合物は、新規化合物であ
る。

式（）で示される本発明化合物は、Ｄ−キシ
ロースを酸の存在下でｐ−アミノベンズアミドと
反応させることにより得ることができる。

かくして得られる本発明のＮ−パラカルバモイ
ルフエニル−Ｄ−キシロピラノシルアミンは、後
記試験例、第２図で示すように、コンドロイチン
硫酸生合成の良き開始剤（initiator）となる。し
かも、本発明のＮ−パラカルバモイルフエニル−
Ｄ−キシロピラノシルアミンを開始剤として合成
されるグリコサミノグリカンは、正常なプロテオ
グリカン（分子量2.5×10⁶以上）に比べて、タン
パク質成分を結合しておらず、しかも分子量が極
めて低い（分子量2.0×10⁴〜3.0×10⁴）ため組織
中にとどまり難く、組織培養系では培地中に、動
物体内では組織を離れて血流中に遊離されること
になる。このことは、本発明のＮ−パラカルバモ
イルフエニル−Ｄ−キシロピラノシルアミンを生
体に投与することによつて、組織を構成する細胞
膜表面のプロテオグリカンの量を減少せしめ、本
発明のＮ−パラカルバモイルフエニル−Ｄ−キシ
ロピラノシルアミンを開始剤としてできた低分子
量のグリコサミノグリカン（コンドロイチン硫
酸）が血流中に放出される結果となる。癌細胞を
例にとつて説明すれば、癌細胞表面のプロテオグ
リカンの量が極めて少量となり、癌細胞はいわば
裸の状態となつて、免疫細胞による免疫力を高め
る結果となる。従つて、本発明化合物は癌の予防
及び治療に有用であることが充分期待される。

また、血流中に放出されるグリコサミノグリカ
ン（コンドロイチン硫酸）は、体外から特別に投
与されたコンドロイチン硫酸と同様の効果を生体
に及ぼし、血管壁への脂質沈着、動脈硬化に由来
する諸疾患の予防及び治療に有用であることが期
待される。さらに、本発明のＮ−パラカルバモイ
ルフエニル−Ｄ−キシロピラノシルアミンは、従
来のＯ−β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物に比
べ、酸や酵素による加水分解を受けにくく、本発
明化合物がいわゆる標的器官に到達するまでに分
解を受けるおそれがなく、生体に投与されたもの
が有効に作用することになり、この点で従来例の
Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物にはない
利点を有している。

以下、実施例及び試験例を示して本発明をさら
に詳細に説明する。

実施例Ｄ−キシロース15ｇ（0.10mol）とｐ−アミノ
ベンズアミド14.05ｇ（0.10mol）を水30ml中に加
え、この液に撹拌下５分間で酢酸６mlを加えた。
滴下終了後、更に撹拌を続けると、結晶が析出
し、液全体が固化した。次いで、１時間室温に放
置、グラスフイルターで吸引過した。少量の冷
水で洗浄後、得られた白色固体を酢酸エチルに溶
解し、次いでこの溶液を無水硫酸マグネシウム上
で乾燥した。溶媒を留去して、Ｎ−パラカルバモ
イルフエニル−Ｄ−キシロピラノシルアミンの白
色の針状結晶20ｇを得た。

m.p.：177〜178℃ IR（KBr：cm^-1）：3500、3400、3340、3280、
1650、1615、1055。

NMR（δ、ppm）：2.8〜4.2（ｍ、5H）、4.8（ｍ、
1H）、6.97（ｄ、2H、Ｊ＝8.6Hz）、7.77（ｄ、
2H、Ｊ＝8.6Hz）。

窒素分析値（C₁₂H₁₆O₅N₂として）：実測値10.44％、理論値10.45％。

試験例 12日目のニワトリ胚（chick embryo）からタ
イロード培地（Tyrode's medium）中で骨端軟
骨を氷冷しながら採取し、余分な組織を取り除い
た。５匹分に相当する軟骨150mgに５mlのBGJb
〔完全合成培地、GIBCO社（Grand Island
Biological Company）の処方に従つて調製〕を
加え、37℃で前培養（pre−incubation）を行な
つた。培地を交換した後、新たに１mlのBGJbを
加え、5μCiのNa₂ ³⁵SO₄を添加して37℃で３時間
保温した。さらに、アイソトープを含まない新鮮
な培地（chase medium、追跡培地）１mlと交換
し、37℃で１時間保温を行なつてから培地と組織
に分離した。キシロシド化合物のグリコサミノグ
リカンの合成に及ぼす影響を調べるためには、前
培養及び培養の培地中にキシロシド化合物を一定
濃度になるように添加した。

培養後、ラベル培地（labeled medium、
Na₂ ³⁵SO₄を含む培地）と追跡培地（chase
medium）を合わせて0.5MTris−HCl緩衝液（PH
8.0）中でプロナーゼ−Ｐを加え、50℃で16時間
消化した。消化反応液を、0.2Mギ酸アンモニウ
ム液を溶出液としてバイオ−ゲルＰ−２（Bio−
Gel、Bio−Rad社製商品名）を充填したカラム
（1.5×14cm）を用いてゲルろ過に付し、Vo画分
を集めた後、凍結乾燥して粗グリコサミノグリカ
ンを得た。

一方、上記に於て、培地と分離された組織に
は、氷冷した4Mグアニジン塩酸を加え、−20℃に
て一夜放置後均一にすり潰し（homogenize）し
た。得られたホモジネートを室温で一夜放置後、
8500rpmで遠心し、上清を得た。この上清に３倍
量の水を加え、さらにその３倍量の95％エタノー
ル（1.3％の酢酸カリウムを含む）を加えて、沈
殿を得た。この操作をさらに２回繰り返した後、
得られた沈殿を合わせて、デシケータ中で乾燥さ
せた。得られた沈殿を0.2MTris−HCl緩衝液
（PH8.0）に溶かし、上記した培地の場合と同様に
プロナーゼによる消化を行なつて粗グリコサミノ
グリカンを得た。

キシロシド化合物として、従来例のＯ−パラニ
トロフエニル β−Ｄ−キシロピラノシド、本発
明のＮ−パラカルバモイルフエニル−Ｄ−キシロ
ピラノシルアミンを用い、〔 ³⁵S〕グリコサミノ
グリカンの総合成量（ ³⁵S取り込み量）に対する
影響を第１図及び第２図に図示した。

第１図を見ると、Ｏ−パラニトロフエニル β
−Ｄ−キシロピラノシドの濃度が0.05ｍＭから
1.0ｍＭへ増加するに従つて ³⁵Sのグリコサミノ
グリカンへの総取り込み量は増加し、濃度１ｍＭ
で40800count per minute（cpm）を示し、この
値は対照（control）の2.35倍であつた。また、
その時、controlの95％が培地へ遊離する一方、
組織の〔 ³⁵S〕グリコサミノグリカンはcontrol
の11％へ減少した。このことは、今までの報告
〔J.Biochem.、74、1069−1073（1973）〕と同様
に、Ｏ−パラニトロフエニル β−Ｄ−キシロピ
ラノシドがコンドロイチン硫酸合成の開始剤
（initiator）として極めて有効であることを示し
ている。

一方、本発明化合物のＮ−パラカルバモイルフ
エニル−Ｄ−キシロピラノシルアミンについて
は、第２図に示すように、上記従来例化合物の場
合と同様に、濃度が高くなるに従つて ³⁵Sのグリ
コサミノグリカンへの総取り込み量が増加し、従
つて培地中へ遊離する量が増加する一方、組織中
にとどまる量は減少した。このことは、本発明の
Ｎ−パラカルバモイルフエニル−Ｄ−キシロピラ
ノシルアミンが、Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシド
化合物に比べて高い濃度を必要とするけれども、
コンドロイチン硫酸合成の良きinitiatorとなるこ
とを示している。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、それぞれ、Ｏ−パラニト
ロフエニル β−Ｄ−キシロピラノシド（従来
例）、Ｎ−パラカルバモイルフエニル−Ｄ−キシ
ロピラノシルアミン（本発明化合物）のコンドロ
イチン硫酸合成に与える影響を示すグラフであ
る。縦軸は〔 ³⁵S〕コンドロイチン硫酸総取り込
み量（ ³⁵Scpm×10^-4／μmol・ウロン酸）を表
わし、横軸は培地中の各キシロピラノシド化合物
の濃度（ｍＭ）を表わす。

Claims

【特許請求の範囲】１次式：で示されるＮ−パラカルバモイルフエニル−Ｄ−
キシロピラノシルアミン。