JPS6366128A

JPS6366128A - 動物およびヒト癌の治療に用いられるｃ反応性タンパク質

Info

Publication number: JPS6366128A
Application number: JP62177375A
Authority: JP
Inventors: Ii O Koonaa Chimoshii; チモシー・イー・オ・コーナー; Eru Deyupuree Shierii; シエリー・エル・デュプレー
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1986-07-18
Filing date: 1987-07-17
Publication date: 1988-03-24
Also published as: US4857314A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は動物およびヒトにおける癌性腫瘍治療に有用な
新規医薬組成物に関するものである。更に詳しくは、本
発明は、天然のあるいは組換え腫瘍壊死因子のようなＩ
１１瘍壊死活性を有するタンパク質とＣ反応性タンパク
質を併用してなる動物あるいはヒトの癌の治療に有用な
新規医薬組成物に関するものである。

〔従来の技術の説明〕

腫瘍壊死因子（以下、ｒＴＮＦＪと略称して説明する場
合もある。）はヒト、マウスおよびウサギを含む数種の
動物において、内毒素あるいは他の適当な刺激剤に反応
してマクロファージ細胞より分泌されるタンパク質含有
分子である。

ＴＮＦは動物およびヒト癌細胞の数種の異なった樹立細
胞系の細胞を殺し、担癌動物の腫瘍を出血性壊死の生成
によって除去する能力を有することが証明されている。

近年、Ｈｒ−ＴＮＦと略称されるヒト組換えＴＮＦが製
造され、現在、ヒト癌の有効かつ安全な治療のための臨
床実験に付されている。本発明は動物またはヒトの癌性
１１ｆｆｉ瘍の治療においてＴＮＦ　（Ｈｒ−ＴＮＦを
含む）の効果をＣ反応性タンパク質（以下、ｒｃＲＰＪ
と略称する）の付加的な投与によって更に改善する方法
に関する。

ヒトＣＲＰ　（参考としてアドバンシズ　インインター
ナル　メデイ　シン　（八ｄｖａｎｃｅｓ　　ＩｎＩｎ
ｔｅｒｎａｌ　Ｍｅｄ、）、２７．３４５−３７２、（
１９Ｂ２）参照〕は最初に炎症性疾患の患者の血清中の
細菌多糖体の沈降素として発見された。ヒトＣＲＰは染
色体■に局在する遺伝子により特定され（ホワイトヘッ
ド、エイ、ニス、　　（Ｗｈｊｔｅｈｅａｄ、八、Ｓ、
）ら、サイエンス（５ｃｉｅｎｃｅ）　２２１．８９−
７１、（１９８３）　）、１８７個のアミノ酸を含有す
る単一のポリペプチド鎖からなっており〔オリベリア、
イー、ビー、　　（Ｏｌｉｖｅｒｉａ、Ｅ、Ｂ。

）ら、ジエイ、パイオル、ケム、　　（Ｊ、Ｂｊｏｌ。

Ｃｈｅｍ、）　、　２５４．４８９−５０２．　（１９
７！ｌ）　）　、ツノガレイ、ウサギ及びニワトリを含
む様々な生物種より単離されたＣＲＰ　’　ｓと、相同
性が高く〔ベビス、エム。

ビー、　　（Ｐｅｐｙｓ、Ｍ、Ｂ、）ら、ネーチｖ　−
（Ｎａｔｕｒｅ）　２７３　。

１６８−１７０．（１９７８））　、化学的には、様々
なＣＲＰはベントラキシン（ｐｅｎｔｒａｘｉｎ）であ
り、電子顕微鏡によって観察すると、５量体による５角
形の構造を形成することにより容易に特徴づけられる。

（オズモンド、ニー、ビー、　　（Ｏｓｍｏｎｄ、Ａ、
Ｐ、）　　ら、ブロシーデインダス　オブ　ナショナル
　アカデミーオブ　サイエンス、ニーニスニー（Ｐｒｏ
ｃ、　Ｎａｔｌ。

八ｃａｄ、　５ｃｉｅｎｃｅ、ＵＳＡ）、７４．７３９
−７４３．）１９７７））　、ヒトＣＲＩ’は、カルシ
ウムイオン存在下では、細菌の複合多糖体中及び真核細
胞の異常細胞膜中に存在するホスホリルコリン基と選択
的に結合し、カルシウムイオン不在下では、クロマチン
のような多価陽イオンと選択的に結合する。ヒトＣＲＰ
は正常ヒト血清中では１０μｇｅｍ　１以下であるが、
外傷及び炎症に反応して急性期肝タンパク貿として産生
され１０００倍に増量する（参考として、アリラン　ニ
ー（Ａｌｌｌｓｏｎ＾、）綱の゛ストラフチャー　アン
ドファンクション　オブ　プラズマ　プロテインズ（Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅ　　ａｎｄ　　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　　ＰｌａｓｍａＰｒｏｔｅｉｎｓ）　”中のコイ　
ニー（ＫｏＪ　Ａ）　　”アキュート　フェイズ　リア
クタンッ（八ｃｕｔｅ　ＰｈａｓｅＲｅａｃｔａｎｔｓ
）　”　ｐｐ、７３−１３１　、プレナム　プレス（Ｐ
ｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ１社刊、ニューヨーク（Ｎｅｗ
　Ｙｏｒｋ）、１９７４年参照〕。ヒトＣＲＰは生理的
機能に関しては不明な点があるが、外傷部位に選択的に
結合することが明らかにされている。ヒトＣｎＰ−Ｃ多
糖体複合体は補体と結合し、補体の古典的経路を活性化
することが明らかにされている（カブラン、エム、エイ
チ、　　□ｔａｐｌａｎ、Ｍ、Ｈ，）およびボラナキス
、ジェイ、イー、　　（Ｖｏｌａｎａｋｌｓ、Ｊ、Ｈ，
）、ジエイ、イムツル、　（Ｊ、Ｔｍｍｕｎｏｌ、）ｊ
１２．２１３５−２１４７　、　（１９７４１）。

ＣＲＰはまた血小板、マクロファージ及びＮＫ細胞の生
理活性を調節することが明らかにされている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ヒトＣＲＰのこれらの種々の生理的活性にもかかわらず
、臨床医学における利用は現在、外傷及び炎症の診断剤
、特に心損傷の早期診断指示薬として注目されているに
止められている。治療手段としてのヒトあるいはその他
の生物種のＣＲＰの利用に関しては、ヒトＣＲＰを用い
て連鎖球菌ストレプトコッカス　ニューモニー（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｌａｅ）にさらさ
れたマウスを防御したという報告〔モールド、シー、　
　（Ｍｏｌｄ、　Ｃ，）ら、ジェイ、エキスプ、メト、
　　（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）、世、１７０３−１
７０１１、（１９８４）　）及び繊維肉腫を担い、ヒト
ＣＲＰ含有リポソームを投与されたマウスにおいて肺転
移を阻止したという報告（デオドハー、ニス。

ディー、　　（Ｄｅｏｄｈａｒ、Ｓ、Ｄ、）ら、キャン
サー　リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　１ｉｅｓ、）　、　４
２．５０８４−５０８８、（１９８２）　）以外は知ら
れていない。

（問題点を解決するための手段及び作用〕本発明は、ヒ
トＣＲＰを）Ｉｒ−ＴＮＦとの併用によりＨｒ−ＴＮＦ
のみを用いた治療に比べて、著しい抗腫瘍活性の増強が
認められるという知見によるものである。尚、ヒトＣＲ
Ｐ　＄独没与によってもごくわずかの抗１１ｆｆｉ瘍活
性が示されるにすぎない。

本発明によれば、動物あるいはヒトの腫瘍に対する有用
な新規医薬組成物が提供される。そして、該医薬組成物
の使用により、獣医学及び人類医学の両方において現行
の癌の治療法に著しい改善がもたらされる。

即ち、本発明によれば、抗腫瘍に有効な皿の腫瘍壊死因
子のような腫瘍壊死活性を有するタンパク質および該タ
ンパク質の抗腫瘍活性を増強するための免疫系賦活化に
有効な量のＣ反応性タンパク質からなる医薬組成物が提
供される。本発明の医薬組成物は通常医薬として適用可
能な担体あるいは賦形剤を含有していてもよい。本発明
の医薬組成物は静脈内注射（１，ｖ、）、筋肉的注射（
１，ｍ、）、皮肉注射（ｉ、ｄ、）あるいはその他の非
経口的（１，ｐ、）注射に適する液剤に処方することが
できる。医薬として適用可能な担体としては、適当な緩
衝液を用いて調製された無菌生理食塩水のような無菌的
な不活性物質が好ましい。本発明の医薬組成物は通常、
腫瘍壊死因子及びＣＲＰを合わせて全重量の０．０１乃
至９０＊、好ましくは、丁ＮＦ及びＣＲＰを合わせてｌ
＊乃至５０＊の量を含有するものである。ＣＲＰが丁Ｎ
Ｆの殺腫瘍活性を増強するのに適した重量比でＴＮＦ及
びＣＲＰを存在せしめることができる。そのＣＲＰに対
するＴＮＦの比は好ましくはＣＲＰｏ、００１〜１００
μｇ対してＴＮＦＩＪＩ１位、さらに好ましくはＣＲＰ
Ｏ１０１〜ｌＯμｇ対してＴＮＦＩ単位である。

腫瘍壊死因子はマクロファージ（そしておそらく他のヒ
トの細胞）により分泌されるサイトカイン（ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅ）であり、カースウェルら〔カースウェル、イー
、ニー、　　（Ｃａｒｓｗｅｌｌ、　Ｅ、Ａ、）ら、プ
ロシーディング　オプ　ナショナル　アカデミーオブ　
サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　５
ｃｉｅｎｃｅ）７２．３ａｅｅ−３ａ７９（ｔｕ５））
によって定義されているようにある部類の癌細胞に出血
性壊死を引き起こす能力及びインビトロ（ｉｎ　ｖｉｔ
ｒｏ）においである種の腫瘍細胞を殺す能力を有する。

マクロファージにより分泌された時点で、ＴＮＦは約１
５５個のアミノ酸のポリペプチドからなり、その組成が
明らかにされている（ウォング、アリス　エム、（Ｗａ
ｇ。

Ａ１１ｃａ　Ｍ、ｌら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）
　、２２Ｂ、１４９−１５９（１９８５）　）、（ペニ
カ、ディアナ（Ｐｅｎｎ１ｃａ、　Ｄｊａｎａ）ら、ネ
イチ？　−（Ｎａｔｕｒｅ）、３１２　、７２４−７２
９（１９８４）　）及び（シライ、ティー。

（Ｓｈｉｒａｉ、　Ｔ、）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒ
ｅ）、川、１１０３−８０８　（１９８５）　）。前記
ＴＮＦより長い前駆体分子はマクロファージ内部で産生
される。故に、本発明において使用する腫瘍壊死因子と
して、ヨーロッパ特許出願公開第０１５８２８８　、０
１６８２１４及び０１５５５４９号において報告された
約１５５個のアミノ酸を有するタンパク質が含まれるが
、これに限定されるものではない。また腫瘍壊死因子と
は、上記タンパク質と同一あるいは類似の構造および／
あるいは活性を有する該タンパク質の活性フラグメント
あるいは銹導体をも包含するものである。

動物あるいはヒトのＣ反応性タンパク質はベントラキシ
ン（ｐｅｎｔｒａｘｌｎ）分子よりなり、細菌の多糖体
あるいはホスホリルコリン受容体を含む細胞膜を沈殿さ
せる能力を有し、また電子顕微鏡によって検出可能な５
量体による５角形の構造を形成する能力を有する。ヒト
ＣＲＰはティレットら〔ティレット、ダブり二一、ニス
、　　（Ｔｌｌｌｅｔｔ。

Ｗ、Ｓ、）　　ら、ジェイ、エキスブ、メト、　　（Ｊ
、Ｅｘｐ。

Ｍａｄ、）　、５２．５６１（１９３１）　）によって
初めて報告された。故に、Ｃ反応性タンパク質とは、Ｃ
反応性タンパク質として周知の上記タンパク質及びその
フラグメントあるいは該タンパク質と同一あるいは類似
の構造および／あるいは活性をもつ該タンパク質銹導体
のいずれかをも包含するものである。

ＴＮＦおよびＣＲＰは同時に投与することができるが、
どちらか一方を他方の投与に先駆けて投与することもで
きる。ＴＮＦの１日当りの用量は通常体重１ｋｇ当り、
８Ｘ１０’乃至３Ｘ１０６単位、好ましくは１．５Ｘ１
０’乃至３Ｘ１０’単位である。

（Ｊｌ’の１日当りの用量は通常体重１ｋｇ当り０．０
０２４ないし１８ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇ当り１．
３３ないし１８ｍｇである。

ＴＮＦとＣＲＰは同一投与経路あるいは異なる投与経路
により投与でとる。本発明の組成物は動物あるいはヒト
の肉腫、乳癌、肺癌、結腸癌及び卵巣癌の治療を含む種
々のタイプの癌の治療において潜在的な有用性を有する
。本発明の組成物は、腫瘍の治療法において単独で用い
て潜在的な有用性を有するが、残存する腫瘍塊あるいは
原発腫瘍の遠隔部位への転移（例えば、結腸癌の肝臓あ
るいは肺への転移、あるいは乳癌の骨への転移）を除去
するために腫瘍の外科的あるいは放射線による除去を含
む他の治療法の補助剤として用いることも可能である。

ＴＮＦとＣＲＩ’との併用は１ｌｆｆｌ　１１３１９ｔ
ｉの初期の治療に最も有効であるので、このようなＴＮ
Ｆ及びＣＲＰの併用を補助的に利用することが、現在で
は癌による死亡の主要な原因になっている腫瘍の二次的
あるいは転移による増殖を予防するのに特に有効である
ことが期待される。

腫瘍の治療におけるＨｒ−ＴＮＦ及びヒトＣＲＰの併用
の効果を以下の実施例に示す。これら実施例中に含まれ
る実験の中のいくつかでは、非特異的ブ０テイナーゼ阻
害剤である６−アミノカプロン酸（以下ＥＡＣＡと略称
する）を、補体のＣ３ａ成分の不活化剤エキソペプチダ
ーゼの無毒性阻害剤としての可能性を考慮して添加した
。データに記載されているように、ＥＡＣＡが存在する
ことによって１１ｒ−ＴＮＦまたはＣＲＰの（あるいは
併用による）毒性が著しく増加することはない。ＥＡＣ
Ａの存在により、抗腫瘍活性はいくぶん改善されるが、
この程度の改善では、スチューデント（ｓｔｕｄｅｎｔ
）の１検定によって判定すると９５９６の信頼限界では
統計学的に有意であるとは認められなかった。

以下の実施例において、６〜８週令で、体重が１６〜１
８ｇの純系の雌Ｂａｂｌ／ＣＲｏｓマウスはロスウェル
　パーク　メモリアル　インスティチュート（Ｉｌｏｓ
ｗｅｌｌ　Ｐａｒｋ　Ｍｅｍｏｒｉａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔ
ｕｔｅ）のウエストセネカ（Ｗｅｓｔ　５ｅｎｅｃａ）
マウス繁殖施設から購入した。メスー八　ザルコーマ（
Ｍｅｔｈ　Ａ　Ｓａｒｃｏｍａ　）は旭化成工業株式会
社（日本国富士市）より提供され、増殖のため、ｌｌｌ
１１り！中の腹水癌として１週間毎に継代するか、ある
いは実験的充実性腫瘍の誕発のため以内に継代した。腫
瘍組織懸濁液（ｂｒｅｌ）を腹腔内に注入することによ
り腹水継代な定期的に初期状態にして、メス式ザルコー
マのｌｌｆｆ１瘍原性を維持した。

１ｍｇのタンパク質当り　２Ｘ１０’単位の１ｌｒ−Ｔ
ＮＦは、安定化剤として０，１＊のゼラチンを含むＰＢ
Ｓ（ｐＨ７，４）中に溶解して凍結した小分はサンプル
（ａｌｌｑｕｏｔｓ）として、旭化成工業株式会社（日
本国富士市）より提供された。本発明において、１単位
のＴＮＦは、標準メチレンブルー染料取り込み測定法に
おいて、Ｌ−Ｍ標的細胞の５０零の細胞溶解させるＴＮ
Ｆの量をいう。

本発明において用いるのに適する１ｌｒ−ＴＮＦは、ヨ
ーロッパ特許出願公開第０１５８２８６号に開示されて
いる方法あるいは当業者において公知の他の方法により
調製および精製することができる。３×１０３〜ｌＸ１
０６単位１０．１ｍｌ／マウスの用量でマウスの静脈内
に投与した。ＥＡＣＡはシグマケミカルカンパ＝　−（
Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）　（
米国ミズーリ州セントルイス）より購入し、１ｍｇ／ｍ
ｌの濃度で飲料水中に加え、他の薬剤の投与の２４時間
前に任意の量の投与を開始した。ヒトＣ反応性タンパク
買はカルビオケムーベーリング（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
−１］６ｈｒｉｎｇ）社（米国カルフォルニア州すンデ
ィエゴ）より購入し、ＣＲＰ単独投与の場合も、またそ
の直後にＨｒ−ＴＮＦを投与する場合もマウス１匹当り
２５０μｇを静脈内に投与した。

メス八腹水細胞は、トリバンブルー色素拝除試験による
と常に９８９６以上の生存率を示した。このメスＡ腹水
細胞を２〜３Ｘ１０’個１０．ｌ＋ｎｌの量でマウスの
背の以内に８植した。移植後−周間以内に触診でわかる
ほどの腫瘍が生育してぎた。腫瘍の最大及び最小直径が
ノギスを用いて測定され、平均腫瘍面積を計算した。い
くつかの実施例では、１ｌｆｆｉ瘍は治ｆｆ１（薬物投
与）後２４時間以内の様々な時間において、麻酔を施し
て外科的に切除し、その腫瘍を薄片にした後直ちに固定
せずに光学顕微鏡で観察した。実験の最後には（１６〜
２１日後）、マウスを層殺し、その腫瘍、肝臓、肝臓を
摘出し坪量した。体重は治療期間中、モニターされた。

スチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ）の１検定を利用する
に際し、比較による有意差ありの条件として信頼度９５
〜（ｐ＜０．０５）とした。

移殖後８〜１４日日の触診可能なｌ１ｆｆ！瘍を１■う
マウスは、無処置で試験に供するか、　Ｉ（ｒ−ＴＮＦ
を１×１０’車位１０．１＋ｎｌ／マウスの量投与した
後、４〜１０時間目に間口に供した。無処置のマウスで
もＴＮＦで処置したマウスでも、腫瘍領域以外には全身
的な病的変化はみられなかったが、１ｌｒ−ＴＮＦ処置
マウスの腫瘍薄片を調べたところ、１ｌｒ−ＴＮＦ処置
後約４時間目間口って初めて腫瘍血管系において大ぎな
変化がみられた。その変化とは、血管系の局在領域で見
られる収縮あるいは拡張、及びある場合には血管系内の
血液成分の浸出である。これらの観察結果からｆｉｒ−
ＴＮＦの腫瘍に対する局在的出血作用は、イン　ビトロ
（ｉｌ　ｖｌｔｒｏ）においてＩｔ　ｒ　−Ｔ　Ｎ　Ｆ
によって細胞を殺すのに必要と考えられている２０〜２
４時間と比べて早期に生しることが示唆された。

実験動物にざらにＥＡＣＡも加えて処置することにより
、インビボ（ｉｎ　ｖｌｖｏ）におけるＩｆ　ｒ　−Ｔ
　Ｎ　Ｆ処置による血管系に対する作用がより顕著にな
ると考えられる。

〔実施例〕

以下に実施例を挙げて本発明の内容をさらに詳しく説明
するか、本発明はこれらの実施例により何ら限定される
ものてはない。

実施例１経口投与ＥＡＣＡとの併用による静脈内投与ＴＮＦの抗
腫瘍活性を試験した。触診できる程度のメスーＡザルコ
ーマ（Ｍｅｔｈ　Ａ　ｓａｒｃｏｍａ）を担うマウスに
３×１０３単位のＴＮＦあるいはｌＸｌ０’単位のＴＮ
Ｆを投与し、Ｆ、Ａ　ＣＡとの併用による同じ量のＴＮ
Ｆ投与の場合と比較した。、第１図に示すようにＴＮＦ
は　１×ｔｏ４単位の投与量で１２日目まで腫瘍増殖阻
止作用を示した。この時点てはＴＮＦ、！Ｉｉ独の効果
もＥＡＣＡとの併用効果も、あったとしてもほんのわず
かしか変化が見られなかった。１６日目までに１０４単
位のＴＮＦの抗＋１！］Ｉ瘍活性のＥＡＣＡによる増強
作用が明らかになった。しかしながら、この観察結果の
統計的有意性はすべてのＥＡＣＡ投与の場合についてみ
ると標準偏差の幅が大きいので境界線上（ｐ＜０．１）
にあると考えられる。これは各マウスのＥＡＣへの消費
におけるバラツキによるものかもしれない。同様にｍ準
偏差が境界線上にあるような抗腫瘍効果のわずかな向上
が３ｘｌＯ’単位のＴＮＦ単独投与の場合とＥＡＣＡと
の併用によるＴＮＦ没与の場合とを比べたときにも観察
された（第１図）。

夫五■ユメス−＾（Ｍｅｔｈ＾）腹水細胞を３ＸＩＯ’個／ｍ１
／マウスの量、以内容植することにより腫瘍を話起した
。７日後（第２図参照）に、ＴＮＦｌｘ　１０’単位／
マウス静注、　ＣＲＰ　２５０マイクログラム／マウス
静注；またはＴＮＦＩＯ’単位およびＣｌ１ｆ’２５０
マイクログラム／マウス静江のＩＡ置を施した。また、
別の群にはメス−Ａ　ザルコーマ（Ｍｅｔｈ　Ａ　ｓａ
ｒｃｏｍａ）の移植時にＣＲＰ　２５０マイクログラム
／マウスを投与した。

本実施例では、　ＴＮＦを単独投与したマウスでは実施
例１のときのＴＮＦの活性に比べて抗１１ｆｆｉ瘍活性
は低かった。これは実施例２におりるＩＩ！ＩＩ瘍負荷
の程度がより高かったこと、及び制癌負荷に対するＴＮ
Ｆの効果の感度を反映してるのかもしれない。

しかしながら、ＴＮＦとＣＲＰの併用効果（第２図）で
はＴＮＦ単独の効果と比較して増強した抗腫瘍活性が見
られた（１８日目でｐ＜０．００１）。ＴＮＦ及びｃｎ
Ｐそれぞれ単独で投与した場合、数時間及び数日でそれ
ぞれ生物学的な減衰（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｅｃａ
ｙ）が生じることが予想されるが、併用効果による増殖
阻止活性はその後も長く、少なくとも投与後１５日間は
はっきりとみられた。この知見はＣＲＰが長期間続く、
おそらくは細胞性の宿主防御機構を活性化することを示
唆している。また、第２図から、０日目または７日目に
ＣＲＩ’をｘｉ虫投与した場合、わずかな抗腫瘍効果を
示すが、これはＴＮＦの単独投与による効果と有意な差
がなかった（ｐ＜ｏ、ｔｏ）ことがわかる。

実施例３３．４　ｘ　１０５Ｉｌｌ水細胞の皮下注射によるＩＩ
！ＩＩ瘍誕起後１日目のメ日日八（Ｍａｔｈ　Ａ）腫瘍
担癌マウスに　１×１０４単位のＴＮＦを単独て、また
は同し量のＴＮＦを２５０マイクログラムのＣＲＰある
いは熱不活化（６３℃、１時間）ＣＲＰ（△ＣＲＰ）と
ともに投与し、無処置の対照群のものと比較した。第３
図に示すように、ＴＮＦ−ＣＲＰ併用投与の方法が最高
の抗腫瘍効果を示した。ＴＮＦと熱不活化ｃｎｐの併用
投与ではＴＮＦ単独投与の場合と比べて有意な差は見ら
れなかった（１５５日目び２１１日目ｐ＜０．５）。し
かしながら、ＴＮＦ−ＣＲＰ　（不活化されていない）
の併用投与はＴＮＦ単独投与と比較して統計学的に有為
な差を示した。（Ｐ　＜　０．０１１夏夾■ユ実施例３と同様の実験条件を用いて、　ｌＸｌ０’単位
のＴＮＦ　＠独、　ｌＸｌ０’単位のＴＮＦ及び２５０
マイクログラムのｃＲｐ　、あるいは　ｌＸｌ０’単位
のＴＮＦプラス２５０マイクログラムのＣＲＰプラスＥ
ＡＣ＾をＩＩ！１１瘍移植後７日目に投与した。第４図
に示すように、無処置マウスとどの投与方法を受けたマ
ウスとの間にも統計学的有意な差がみられた。しかしな
がら、ＴＮＦプラスＣＲＰ投与の方法とＴＮＦプラスＣ
ＲＰプラスＥＡＣＡ投与の方法との間には有意差はみら
れなかった（ｐ＜０．１）。反対にＴＮＦ単独投与とＴ
ＮＦプラスｃｕｐ投与との間、及びＴＮＦ単独投与とＴ
ＮＦプラスＣＲＰプラスＥＡＣＡ投与との間には有意な
差がみられた（ｐ＜０．０１）。

第５図は腫瘍銹起後２２日日に無処置マウス及び種々の
投与法で処置を行なったマウス（７口径投与）から摘出
した腫瘍、肝臓及び肝臓のデータを棒グラフで表わした
ものである。このデータからは、肝臓および肝臓の重量
から判断してＴＮＦ、ＣＲＰ及びＥＡＣＡは単独または
組合わせて用いても毒性の原因とはならないことが示唆
される。

第１表は前記実施例のデータを要約したものであり、抗
腫瘍剤としてＴＮＦあるいはＴＮＦとＥＡＣＡの混合物
を組合わせて用いた場合、ＣＲＰがその作用を有意に増
強することを証明している。

第　　１　　表比較した処置　　　　　　　　統計学的な投与後（Ｐｏ
ｓｔ−Ｒｘ）　　　　　　　１１互−一旦ヱ旦旦１−一
一無処置　対　ＴＮＦ　　　　　　　　有（ｐ＜、００１
）無処置　対　ＣＲＰ　（０日目）　　　　±（ｐ・、
０７）無処置　対　ＣＲＰ（７日目）　　　　±（ｐ−
，０８）ＴＮＦ　　対　ＣＲＰ　（０日目）　　　　　
無（ｐ＜、１０）ＴＮＦ　　対　ＣＲＰ（７日目）　　
　　　無（ｐ＜、１０）ＴＮＦ　　　対　　ＴＮＦ＋Ｅ
ＡＣＡ　　　　　　　　　　無（ｐ＜、１０）ＴＮＦ　
　　　対　　ＴＮＦ＋ＣＡＰ　　　　　　　　　　　　
　イＴ　（ｐ＜、００１）ＴＮＦ＋ＣＲＰ　　　対　　
ＴＮＦ＋ＣＲＰ＋ＥＡＣＡ　　　　無（ｐ＜、１０）Ｔ
ＮＦ　　　対　　ＴＮＦ＋ＣＲＰ＋ＥＡＣ八　　　　　
　有（ｐ＜、０１）第１表に示す実験において、０日目
に２〜３×１０５個／マウスのメス−Ａ　（ＭｅｔｈＡ
）をマウスの以内に８植し、その腫瘍誘起後７日目にＴ
ＮＦｆｔＩＸ　１０’車位／マウス静注した。また、１
皿瘍誘起後６日目に　１ｍｇ／ｍｌ　ＥＡＣＡを飲料水
に混合して任意の工投与し、また７日目にＣＲＰを２５
０マイクログラム／マウス静注した。

比較による有意差ありの条件として信頼度９５＊（ｐ＜
、０５）としてスチューデント（５ｔｕｄｅｎｔ　）の
１検定を行なった。

〔発明の効果〕

ＣＲＰがＴＮＦの抗腫瘍活性を増強する機構は現在のと
ころ未知である。本発明の知見は、ＣＲＰの上述の生物
学的能力を併せて考慮すると、ＣＲＰは、宿主抗体介在
性免疫応答における可溶性介在物質（ｍｅｄｉａｔｏｒ
）としてのイムノグロブリンの役割と類似の非抗原依存
性免疫応答（ＮＡＤＩＲ）における可溶性介在物質とし
ての役割を果すのではないかということを示唆するもの
である。抗体（イムノグロブリン）は分子の多様性と抗
原特異性の両方を有するが、ベントラキシン（ｐｅｎｔ
ｒａｘｉｎ　）　ＣＲＰ分子は強い発展した不変性を示
し、明らかにその効果は、補体系やマクロファージなど
の細胞の活性化に随伴して起る乱れた細胞膜上に露出し
たホスボリルコリン受容体との局在的な結合を介して達
成されるものである。本発明でみられた増強した抗１］
［効果はマイクロファージ由来の可溶性介在物質（ｍｅ
ｄｉａｔｏｒ）であるＴＮＦと肝ｉｎ　ｌ１ｆｌ由来の
可溶性介在物質ＣＲＰの両方に係りあっており、そして
これらの抗腫瘍作用が血漿中の各モジュレータ−（ｍｏ
ｄｕｌａｔｏｒ　）の予想される滞留時間よりも長く持
続するのは興味のあることである。

現在の腫瘍掌上の実際問題としては、外科手術や放射線
などの他の治療法の補助としてではなく、単独で用いて
動物やヒトの慢性充実性腫瘍を除去することのできる化
学治療法がないことである。Ｈｒ−ＴＮＦは多くの充実
性の動物の腫瘍の出血性壊死を起すことのできる有望な
新規物質である。

この物質の抗腫瘍活性が天然のヒｈｃＲＩ’との組合せ
による治療によって著しく増強することがで診るという
この証明によって、動物およびヒトの癌の治療への有望
な新しいアプローチが提供されるものである。興味深い
特徴は、ＴＮＦとＣＲＰの混合物によりもたらされる抗
腫瘍活性の増強は、１ｌｉ−の接種治療後の各接種成分
の減衰の後も長く、即ち１３日以上も持続することであ
る。また、本発明の有効性を確認する実験で異種の宿主
マウス系を用いたことに注目すべきである。前臨床医学
的研究には、ヒト癌の治療におけるＨｒ−ＴＮＦとＣＲ
Ｐの有効性と安全性についてヒトにおいての臨床試験を
最終的に正当化するためには前臨床医学的データを展開
させるという不可欠な第１段階をか含まれている。ｃｎ
ｐは単独で投与したときには比較的無毒であると思われ
、ヒトの体内に天然に少量存在するものである。ＣＲＰ
とＴＮＦの両方を投与することによって、ＣＲＰはＴＮ
Ｆの毒性を低下させるか、あるいは抗ＩＩｉ瘍活性を表
わすのに必要なＴＮＦの量を減少させるのかもしれない
と考えられる。　Ｈｒ−ＴＮＦ及びヒトＣＲＰと宿主で
あるヒトとの適合性の点からヒト臨床試験では、同等あ
るいは優れた結果が得られるであろうことが予想される
。そのような組合せで用いる治療法はまた、天然のヒト
の産生物のみを用いる最初の癌の化学療法となるであろ
う。免疫学的な適合性を考慮する必要のない宿主がヒト
の場合は、Ｈｒ−ＴＮＦとＴＮＦとＣＲＰの組合せで繰
り返し治療することにより完全なｌｌｆｆ１瘍除去及び
患者の治癒をもたらすことができるであろう。

【図面の簡単な説明】

第１図はＢＡＬＢ／ｃマウスの担うメス−＾　ザルコー
マ（Ｍａｔｈ　Ａ　ｓａｒｃｏｍａ）に対するＴＮＦま
たはＴＮＦと６−アミノカプロン酸（ＥＡＣＡ）を含有
する種々の組成物の抗腫瘍活性を示すグラフである。Ｅ
ＡＣＡは補体のＣ３ａ成分を不活化するエキソペプチダ
ーゼを含む種々のプロテアーゼの阻害物質として知られ
ている〔ヒユーグリ、ティー、イー。（ｌｌｕｇｌｉ、Ｔ、Ｅ−）、バロータ、イー、　　（
Ｖａｌｌｏｔａ、Ｅ、）およびミューラーーエバーハー
ド、エイヂ、ジェイ、　（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａ
ｒｄ、Ｈ，Ｊ、）、ジェイ、パイオル、ケム（Ｊ、Ｂｉ
ｏｌ、Ｇｈｅｍ）　、２５０．１４７２−１４９８（１
９７５）　）。第２図及び第３図はＴＮＦおよび／またはｃｎｐを含有
する種々の組成物の抗ｌｌ１ｉ瘍活性を示すグラフであ
る。第４図はＴＮＦ　、　ＴＮＦおよびｃｎｐ　、またはＴ
ＮＦとＥＡＣＡおよびＣＲＰを含有する種々の組成物の
抗ｎ！Ｉｉ瘍活性を示すグラフである。第５図は腫瘍銹起後７日日に種々の方法で処置を施した
場合の、腫瘍話起後２２日日の腫瘍、肝臓及び肝臓の重
量を示す棒グラフである。特許出願人　　旭化成工業株式会社膣迫読起後Ｓ数腫瘍説超後日数第４図盾瘍誘起後日数第烈装置　　　　　ＴＮＦ５図ビ」メスＡ（ＭｅＬｌ＋　Ａ） ■肝臓嘗肝臓

Claims

【特許請求の範囲】

（１）抗腫瘍に有効な量の腫瘍壊死活性を有するタンパ
ク質および該タンパク質の抗腫瘍活性を増強するための
免疫系賦活化に有効な量のＣ反応性タンパク質からなる
医薬組成物。
（２）ε−アミノカプロン酸をさらに含有する特許請求
の範囲第（１）項記載の医薬組成物。
（３）該タンパク質がヒト腫瘍壊死因子である特許請求
の範囲第（１）項記載の医薬組成物。
（４）該タンパク質が組換えヒト腫瘍壊死因子であり、
該Ｃ反応性タンパク質がヒトＣ反応性タンパク質である
特許請求の範囲第（１）項記載の医薬組成物。
（５）腫瘍壊死因子のＣ反応性タンパク質に対する割合
が腫瘍壊死因子１単位に対してＣ反応性タンパク質０．
００１〜１００μｇである特許請求の範囲第（３）項記
載の医薬組成物。
（６）Ｃ反応性タンパク質を有効成分として含有し、抗
腫瘍に有効な量の腫瘍壊死活性を有するタンパク質の抗
腫瘍壊死活性を増強させることを特徴とする抗腫瘍壊死
活性増強剤。