JPS6371655A

JPS6371655A - 再形成した凍結乾燥製品の光学的透明度の改善方法

Info

Publication number: JPS6371655A
Application number: JP62131993A
Authority: JP
Inventors: ステイーヴン、ノーバト、ブール
Original assignee: Technicon Instruments Corp
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1986-09-12
Filing date: 1987-05-29
Publication date: 1988-04-01
Also published as: IL82749A0; DK473187D0; AU7460587A; EP0259949A2; DK473187A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は臨床化学の分野に関する。さらに詳しくは、本
発明は再形成された凍結乾燥品の透明度の改善方法に関
する。

臨床試験の分野は過去４０年間大幅な成長を続けており
、米国で行われる臨床試験の数のみでも５年毎にはソ倍
増している。現在米国の試験室において行われる臨床試
験Ｏ数は恐らく年間１０億のオーダーである。この原因
は主として医師が、より伝統的な診断法の補足または代
替として体液の生化学的試験を多用するようになったこ
とによる。例えば、人の血清中の心臓酵素、肝臓酵素お
よびビリルビン、膵臓酵素、グルコース、アルブミンお
よびカルシウムの生化学的分析は屡々、それぞれ心筋梗
塞、肝臓機能障害、膵臓機能障害、腎臓衰弱、および甲
状腺機能障害の指標として利用される。生化学的分析に
より屡々ある種の疾史のより正確な診断が可能となるこ
とが認識されると共に、信頼性がさらに高く迅速な臨床
試験法区て対する絶えざる要求も加わって、生物医学的
分析における新しい、改良された方法の探究が盛んにな
っている。

基本的には、自動化従って機器化の改良がこの分野にお
ける成長の１要な側面であるが、試験シ゛）助けとなる
べき医学的診断試薬についてもその改善が常に要求され
ている。化学的試薬系は、使バに便利でありまた厳格な
管理漂準下に生産され乙、ため製品の均一性が得易いこ
とから極めて一般的に使用される。しかし、ある試薬系
が実用となるためには、常に一定の規単を満足すること
が必要である。ある試験系が信頓を得るためには、特異
性、正確性、精度が極めて重要であることは明かである
。

分析試験法の中ζては、比色法または分光測光法を用い
て試料中の被分析物を検出するものが多数ある。この種
の分析に使用される機器分析法は屡々試料中の妨害物質
の存在によって強い影響を受け、このことがまた当然、
得られる結果の精度および特異性に影響を与える。血清
の分析において生ずる問題の−として、試料中の脂質に
よる濁りの問題がある。この問題は特に、脂質含有試料
を一旦凍結乾燥しｔのち臨床分析に使用する前に再形成
する場合に顕著である。血清試料の凍結乾燥は生物医学
試験用キットに使用する標準品または対照品の調製用に
よく行われ、このキットは当然のことながら製造から使
用までの間相当長期間貯鈷七＋ＩＬ皇をバも六−１市鈷
を僅は望暫の酊伸田廿月間を長くするために不可欠であ
るが、再水和した製品は容認し難い程濁っていることが
多い。か３る試料を比色または分光測光分析に使用する
と、明かに不正確なまたはひずんだ結果を与える可能性
があったり、バックグラウンドの濁り度を補償するため
さらに別の試験を行う必要が生ずる。

従って、再水和した場合にもとの材料と同じ光学的透明
度を保持するような凍結乾燥された脂質含有製品の製造
法が必要とされている。本発明者は、凍結乾燥前の流体
試料に比較的少量のメタノール全添加すると、再水和し
た場合に従来のメタノールを添加しないで乾燥した製品
にみられるような濁りを生じない凍結乾燥製品が得られ
ることを発見した。

本発明つメタノール約１％ないし約１５％を含有する脂
・買含有流体試料を凍結て線条件下に凍結乾燥して凍結
乾燥製品金得ること全特徴とする、脂質含有流体試料か
らの凍結乾燥製品の製造方法に関する。

本発明はまた、前記の方法（でよって製造される・再形
成した場合に出発流体試料と実質的に同じ光学的透明度
を有する凍結乾燥製品に関する。

ある種の凍結乾燥すべき試料にメタノールを添加するこ
とは一応知られてはいるが、再形成された脂質含有試料
の光学的透明度を改善するためにメタノールを使用する
ことは従来知られていない。

例えばＳｅａｇｅｒら（Ｍａｎｕ　ｆ　、Ｃｈｅｍ　−
＆　Ａ’３　ｒ　ＯＳ　０１　ｋＪｅＷＳ　ｐ１９７８
年１１月４３ページ、１９７８年１２月５９ページ、１
９７９年１月４６ページ、１９７９年２月４１ページ）
は種々の有機溶媒の添加によって凍結乾燥の速度を改善
し得るか否かを知るため一連の試験を行った。乾燥用試
料は医薬含有溶液であり、試験の結果試料にメタノール
を添加すると非常に乾燥の遅い裂品全生ずることが判明
し、従ってメタノールの使用は特に推奨されなかった。

しかし本発明の方法においては、驚りべきことに、脂質
含有試料にメタノールを特定量添加すると、最終的に光
学的透明度の優れた再形成品が得られるのみでなく試料
の乾燥も助長されることが発見された。前記の後者の結
果は、脂質含有流体はその乾燥困難性のために凍結乾燥
に付されないことが多いのが普通であるので、特て予想
外である。

所望の効果を得るために必要なメタノールの量は比較的
小さい。通常約１ないし約１５容量％の範囲で十分で、
好ましい範囲はメタノール約６％ないし約１０％である
。１０％より高濃度も使用し得るが、メタノールの量を
増しても結果はあ−まり改善されず、より高濃度では乾
燥過程の妨げになることがある。メタノールは適当な濃
度の最終液を得るに十分な量を単に加えて混合すればよ
い。

本発明の技術の使用は動物または人の血清または調合血
清試料において特に好結果を与える。本明細書において
「血清」とけ血液全完全に凝固した後に残る澄明な流体
を意味する。しかし本技術の使用は血清のみに限られず
、凍結乾燥が望ましいほとんどすべての脂質含有流体し
′こも適用し得る。。

本明細書において「脂質」とは水に比較的不溶性であり
非極性溶媒例えばクロロホルムまたはベンゼンによって
抽出可能であるという特徴を持つ多数の有機物質のいず
れをも意味し、また濁りを生ずるような疎水性基および
その池の脂質様物買をも包含するものであり、他の物質
と共に脂質を含有する流体、例えば脂質−タンパク質流
体混合物も含まれる。人体内に見いだされる比較的普通
の脂質または脂質研物質としては、ホスファチジルコリ
ン、トリグリセリド、スフィンゴミエリン、脂肪酸、ビ
リルビン、コレステロール等がアル。

その他の可能は適用対象としては、化学分析の対象とな
り得、かつ脂質をも含有してよい種々の生物体液、例え
ば脳を髄液、胆汁、血漿、腹膜液等がある。その池の商
業的利用としては、脂質または脂質様の疎水性基例えば
ビリルビン、トリグリセリドコレステロール等を含有す
る、凍結乾燥された試薬への使用がある。

血清、またはその他対象となる材料にメタノールを混合
したのち、この液を凍結’５　Ｓ用の皿または小瓶に分
注する。凍結乾燥の技法および機器は当業者によく知ら
れており、それ自体は本発明の一植をヴす本ので、叶に
い。凍結乾燥の条件は乾燥すべき流体材料によって異る
。例えば血清に対する凍結乾燥条件としては約−３０°
Ｃ以下に凍、拮、室を排気、試料を水分１０％以下とな
るまで一つ一５°Ｃまで加熱、次に水分約２％以下とな
るまで２５℃に加熱することを含む。この技術に熟達し
た者にとっては対象物質の性質に応じて条件全如何に変
えるかを知ることは容易である。ａ結乾い後、製品は貯
蔵し、必要の場合使用目的に応じて再形成することがで
きる。濁り度は通常、フＯＯｎｍ範囲における吸収によ
って測定する。再形成した製品をこの方法によって出発
材料と比較すると、再水和生成物の吸収特性および光学
的透明度は原流体試料と実質的に等しいことが認めら訛
る。

以下の実施例は種々の脂質含有流体試料へつ凍結芝燥前
のメタノール添加の効果を示すものである。

例　　１人血清〔バイオセル　ラプス（玉ｏｃｓｌ　Ｌａｂｓ　
）、カールソン（Ｃａｒｓｏｎ　）　、米１国力すホル
ニア州〕１ｔに、アラニンアミノトランスフェラーゼ１
００μ／ｌ、　クレアチニン５η／　ｄｌ、　、コレス
テロール２００■／ｄｔＣ牛血清より、マイルズ　ラプ
ス（Ｍｉｌｅｓ　Ｌａｂｓ　）、エルクハルト（Ｅｌｋ
ｈａｒｄｔ　）、米国インディアナ州〕、クレアチンキ
ナーゼ１００μ／１．グルコース２００ｍ９／ｄｔ、塩
化カリウム５ｍｅｇ／Ｊ、　　リン酸ナトリウム８　■
／　ｄｔ、塩化ナトリウム１１５　ｍｅｇ／　Ｌ、　　
）リグリセリド２００ｍｙ／ｄｔ（卵黄よｌ、尿素５０
１Ｗ／ｄｔ、尿酸１００η／ｄｉ、およびメタノール〔
フィッシャーサイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ　５
ｃｉｅｎｔｉｆに　）、ピッツバーグ（Ｐｉｔｔｓｂｕ
ｒｇｅ　）、米国ペンシルバニア州：＋ｓｏｍｚを加え
る。成分濃度はＲＡ　−１００口分析システム〔テクニ
ツク　インスッルメント社（Ｔｅｃｈｎにｏｎ　Ｉｎｓ
ｔｒｕｍｅｎｔｓ　Ｃｏｒｐ、　）、タリタウン（Ｔａ
ｒｒｙｔｏｗｎ　）、米国ニューヨーク州〕によって測
定することができる。血清ｋ　１−２　ｕ、　　０．４
５　ｕ。

および０．２ｕの濾材〔ボール　フィルター社（Ｆａｌ
ｌＦｉｉｔｅｒ　Ｃｏｒｐ、　）、グレンコープ（ｃｌ
ｅｎ　Ｃｏｖｅ　）、米国ニューヨーク州〕を通して濾
過し、５．５ｍｌずつ瓶〔ホイートン　サイエンティフ
ィック（ＷｈｅａｔｏｎＳｃｉｅｎｔｉｆに　）、ミル
ビー／ｌ／　（Ｍｉｌｌｖｉｌｌｅ　）　、米国ニュー
シャーシー州〕に分注する。血清の゛入った瓶を冷凍乾
燥機〔ハル　フリーズ　ドライヤーズ（Ｈｕｌｌ　Ｆｒ
ｅｅｚｅ　Ｄｒｙｅｒｓ　）、ハ／ｌ／　（Ｈｕｌｌ　
）、米国ペンシルバニア州〕中で−４０°ｃｖｃａ結し
、水分が２％以下となる迄乾燥する。乾燥後播を密封し
必要時まで２°Ｃ〜２５℃で貯稜する。各瓶は脱塩水５
．０ｍｌで再形成する。凍結乾燥前の７１０　ｎｍにお
ける吸光度は０．１２　Ａであり１再形成後の７１０　
ｎｍにおける吸光度は０．０８　Ａであった。

例　　２牛血清アルブミン〔アーマ−ファーマセチカル（Ａｒｍ
ｏｕｒ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔにａｌ　）　、タリタウ
ン（Ｔａ−ｒｒｙｔＯ＊ｎ　）　、米国ニューヨーク州
〕６０ｙの溶液１ｔに、クレアチンキナーゼ５００μｔ
１コレステロール４００■／　ｄｔ　ｌ：牛血清より、
（マイルズラプズ、エルクハルト、米国インディアナ州
）〕、クエンａ第一鉄アンモニウム６００ｕ、９／ｄｔ
、）ＩＪグリセリド４００ｍ９／ｄｔ（卵黄より）、グ
ルコース２５０■／　ｄｔ　、およびメタノール（フィ
ッシャーサイエンティフィック、ピッツバーグ、米国ペ
ンシルバニア州）５０　ｒｎｌを加える。成分濃度ＵＲ
Ａ−１０００分析システム（テクニツク　インスツルメ
ント社、タリタウン、米国ニューヨーク州）によって測
定することができる。血清を１．２μおよび０．４５μ
濾材〔ポール　トリンコール社（Ｐａ１ｌ　Ｔｒｉｎｃ
Ｏｒ　Ｃｏｒｐ、）、サウス　プレインフィールド（５
ｏｕｔｈ　Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ　）、米国ニューシャ
ーシー州〕を通して濾過する。これを１０．６ｄずつ瓶
（ホイートン　サイエンティフィック、ミルビール、米
国ニューシャーシー州）に分注し、−４０℃に凍結し凍
結乾燥（）・ル　フリーズ　にライヤー、ハル、米国ペ
ンシルバニア州）する。

乾燥後瓶二で密封し必要時まで２〜２５°Ｃで貯ばする
。各瓶は希釈液（リットル当りトリスカーボネ）　１５
　ｍｍｏ−ｉ　）　１０．０ｍｌで再形成する。ｉ結乾
燥前の７１０　ｎｍにおける吸光度は０．１５Ａ、再形
成後の７１０　ｎｍにおける吸光度は０．１４Ａであっ
た。

例　　ろ牛佃清〔アーヒ°ン　サイエンティフィック社（Ｉｒｖ
ｉｎｅ　５ｃｉｅｎｔｉｆに　Ｃｏ、）、アービン（Ｉ
ｒｖｉａｓ）、米国力リホルニア州、１１ｔに下記成分
を添加する：アラニンアミノトランスフエラーゼ１８０
μ／ｌアスパルテートアミノトランスフェラーゼ　　　　　　　　　　　　１８０μ／ｌクレアチ
ニン　　　　　　　　　　　５ηｌｄｌクレアチンキナ
ーゼ　　　　　　６００μ／ｌコレステロール（牛血清
）　　　　　１８０ｍｑ／ａｔグルコース　　　　　　
　　　　２５０　ｍｑ／ｄｔビリルビン　　　　　　　
　　　　　５　Ｔｎ９／ｄｔがンマグルタミルトランス
フエラーゼ２００μ／を塩化カルシウム　　　　　　　
　　１０　ｍ９／ｄｔリン酸ナトリウム　　　　　　　
　　　５　ｍ９／ｄｔ塩化ナトリウム　　　　　　　　
　１００　ｍｅｇｌｔトリグリセリド（卵黄）　　　　
　　１８０ｍｑｙｄｔ尿　　素　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　５０　ｍ９／ｄｔ尿　　酸　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７ｒｎＩｙ／
ｄｔ各成分は’ＨＡ−ｉロ００システム（テクニコンイ
ンスツルメント社、タリタウン、米国二二〜ヨーク州）
で分析する。

次にこの血清を１．２μおよび０．４５μ濾材を通して
濾過し６部に分け、次の量のメタノールを加える：Ａ　　部　　　　　　ＯＢ　　部　　　　　’５０ｎｌ／ｌＣ部　　　１００ｍ１／を次に各血清を１０．５ｉＪずつ瓶（ホイートンサイエン
ティフィック、ミルビール、米国ニューシャーシー州）
に分け、凍結乾燥する（ハルフリーズドライヤーズ、ハ
ル、米国ペンシルバニア州）。

乾燥後各瓶を密封し必要時まで２〜２５℃で貯藏する。

各瓶の内容物を脱イオン水１０．ＯｍＪで再形成する。

各試料の７１０　ｎｍにおける吸光度は次の通りであっ
た。

試料　　　凍結乾燥前　　凍結乾燥後ＡＯ，０８０，８２

Claims

【特許請求の範囲】

（１）メタノール１％ないし約１５％を含有する脂質含
有流体試料を凍結乾燥条件下に凍結乾燥して凍結乾燥製
品を得ることを特徴とする、脂質含有流体試料からの凍
結乾燥製品の製造方法。
（２）メタノールの濃度が約３ないし約１０％である前
項（１）に記載の方法。
（３）前記濃度が約５％である前項（１）に記載の方法
。
（４）前記流体が生物体液またはその混合物である前項
（１）に記載の方法。
（５）前記流体がタンパク質および脂質含有材料の混合
物である前項（１）に記載の方法。
（６）前記流体が血清である前項（４）に記載の方法。
（７）前記流体が人の血清である前項（６）に記載の方
法。
（８）脂質含有流体試料をメタノール濃度約１ないし約
１５％に調整した後凍結乾燥条件下に凍結乾燥すること
を特徴とする、脂質含有流体試料から調製される凍結乾
燥製品の、再形成後の、光学的透明度の改善方法。
（９）メタノールの濃度が約３％ないし約１０％である
前項（８）に記載の方法。
（１０）前記濃度が約５％である前項（９）に記載の方
法。
（１１）前記流体が生物体液またはその混合物である前
項（８）に記載の方法。
（１２）前記流体がタンパク質および脂質含有材料の混
合物である前項（８）に記載の方法。
（１３）前記流体が血清である前項（１２）に記載の方
法。
（１４）前記流体が人の血清である前項（１３）に記載
の方法。
（１５）脂質含有流体試料に、凍結乾燥に先立つてメタ
ノール濃度的１％ないし約１５％とするに十分な量のメ
タノールを加えこのメタノール含有試料を凍結乾燥条件
下に凍結乾燥することによつて製造され、得られた製品
は再形成後、原料の流体試料と実質的に等しい光学的透
明度を有することを特徴とする、脂質含有流体試料から
得られる凍結乾燥製品。
（１６）試料中のメタノール濃度が約３％ないし約１０
％である前項（１５）に記載の製品。
（１７）前記濃度が約５％である前項（１６）に記載の
製品。
（１８）前記流体が生物体液またはその混合物である前
項（１６）に記載の製品。
（１９）前記流体がタンパク質および脂質含有材料の混
合物である前項（１５）に記載の製品。
（２０）前記流体が血清である前項（１８）に記載の製
品。
（２１）前記流体が人の血清である前項（２０）に記載
の製品。