JPS6379600A - テオフィリンの測定用乾式分析要素及び測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、臨床化学及びテオフィリンに関する生物学的
流体の分析に関する。詳述すれば、本発明は、ヒト生物
学的流体中のテオフィリンの測定用乾式分析要素及び測
定方法に関する。

〔従来の技術〕

テオフィリンは、喘息及び肺疾患の治療にしばしば投与
される薬剤である。この薬剤を、望ましくない重大な作
用をひき起すことなく、有効に使用するには、この薬剤
は比較的狭い使用治療範囲、すなわち１〜２ｍｇ／ｊを
使用するので、ＶＡ繁に、注意深く、患者を監視しなけ
ればならない。

ヒト血清中のテオフィリンの量を測定するため多数の技
法が使用されている。これらの技法の多くは重大な欠点
を有する。例えば、公知の分光光度測定法は、大きい試
料量、広範な予備処理を必要とし、同様な構造のキサン
チン類、例えばカフェイン及びテオブロミンによって妨
害される。公知のガスクロマトグラフィー法は、更に特
異的であるが、誘逗体化を必要とし、時間がかかるとい
う問題がある。

非アイソトロピック免疫分析法は、結果を迅速に与え、
使用が簡単であるので、最も頻繁に使用されている。免
疫分析技法を用いると、一般に、満足な感度が得られる
が、最近、患者の腎臓の状態及び分析に使用する抗体の
特異性によって著しく高い結果が得られることが判った
。更に、免疫分析は、限られた安定性を有する一般に高
価な試薬の使用を必要とする。

高性能液体クロマトグラフィー技法も公知である。これ
らの技法は、試験試料の予備処理を実施するか否かに応
じて特異性を変動する。有機抽出工程は、分析の精度及
び特異性を改良することを必要とする。多くのクロマト
グラフィー法は、若干の一般的抗生物質を含む多数の物
質から妨害を受けやすい。分析を実施するため、高価な
機器を必要とし、専門の技術スタッフを必要とすること
も欠点である。

アルカリホスファターゼ活性に対する抑；６１１作用を
測定することによってテオフィリンを測定しうろことは
公知である。しかし、この方法でヒトの生物学的流体を
分析する場合には、内因性アルカリホスファターゼが分
析に影古し、高い側に不正確な結果を生じることがある
ことが知られている。

この場合、この問題を回避するには、内因性アルカリホ
スファターゼを分析の前に成る方法で破壊又は除去しな
ければならない。

この技術の重要な進歩は、欧州特許出願公開第１８４．
４３７号公報に記載されている。しかし、この公報に記
載されている要素は、分析に必要なアルカリホスファタ
ーゼイソ酵素を１０〜５（Ｈ，ｔｌ、／Ｍ含む。開示さ
れた好ましい量は、２０〜４０１、Ｕ、／耐である。

〔発明が解決しようとする問題点〕

前記の要素は、テオフィリンの筒車かつ迅速な分析を提
供するが、生物学的試験流体中の内因性アルカリホスフ
ァターゼ及びヘモグロビンの分析に対する影響を減少す
るため更に改良が必要であることが判った。従来の要素
を用いて実施した分析は、これらの妨害因子の存在によ
って不所望に偏倚する。

（問題点を解決するための手段〕 前記の問題点は、第一及び第二帯域を流体接触状態で含
み、第一帯域がｐｔ＋９以下でイソ酵素に対する基質に
作用することができる、少なくとも１００１、ＩＪ、　
／　ｍの量で存在するアルカリホスファターゼイソ酵素
を含み、そして第二帯域がイソ酵素に対する基質を含む
テオフィリンの測定用乾式分析要素を用いて克服される
。　更に、本発明は、Ａ、テオフィリンを含むと思われ
る生物学的流体の試料を、前記の乾式分析要素とｐＨ９
以下で接触させ、そして Ｂ、接触から生じる検出可能な変化を測定する工程を含
むテオフィリンの測定方法を提供するものである。

〔実施態様〕

本発明は、生物学的流体、特にヒト生物学的流体中のテ
オフィリンの測定に関する。本明細書において、測定と
は、試験試料中のテオフィリンの世の定性又は定量的測
定に関する。殊に、本発明は、内因性アルカリホスファ
ターゼ（すなわち、天然産生酵素）をその酵素の形で含
むヒトの生物学的流体（例えば肝臓、腸、胎盤又は骨）
中のテオフィリンを測定するため使用することができる
。

例えば、本発明を血清、全血、血ギ、髄液、痰、胆汁、
唾液及び他の生物学的流体の分析に有利に使用すること
ができる６徂織、例えばヒトの骨格筋、腎臓、胎盤、心
臓、腸、肺臓又：ま他の組織の流体調整物を分析するた
め本発明を使用することもできる。本発明の実施に使用
される好ましい生物学的流体は、ヒト血清及び全血であ
る。

テオフィリンは、本発明を実施する際に、多数の基質に
作用して検出可能な反応生成物を生成しうる酵素である
アルカリホスファターゼの活性を抑制することによって
測定しうる。例えば、下記の代表的式は、典型的基質で
あるｐ−ニトロフェニルホスフェートを使用してアルカ
リホスファターゼの作用によって検出可能な色素を生成
することを説明するものである： ｐ−ニトロフェニルホスフェ−）＋Ｈ，０−ル（色素）
＋ホスフェート 次に、色素を適当な分光光度検出装置を用いて比色法で
検出することができる。基質及び酵素と接触した試験試
料中に存在するテオフィリンの量は、測定される色素の
量に反比例する。

本発明は、ｐ）１９以下、好ましくはｐＨ７〜９で実施
する。前記の欧州特許出願公開第１８４．４３７号公報
に記載されているように、ヒトの流体中の内因性アルカ
リホスファターゼは、ｐ１１９以下で低下した活性を有
する。従って、試験試料中のアルカリホスファターゼの
内因性イソ酵素の存在は、ｐＨ９以下で実施するテオフ
ィリンの分析にあまり影舌しない。しかしながら、ｐ（
１９以下の環境中で不活性化されないアルカリホスファ
ターゼのイソ酵素を本発明に使用してテオフィリンの存
在を示すことができる。その所望の性質、すなわち、ｐ
Ｈ９以下で測定しうる活性を有する適当な供給源からの
任意のイソ酵素は、本発明の実施に有用である。

特に有用なイソ酵素は、ウシの供給源から、例えば牛又
は子牛の組織及び臓器（例えば肝臓）から得られるもの
である。種々の他の供給源（例えば微生物、二マノトリ
及びヒト以外の補乳動吻）からのイソ酵素も有用である
。本発明の実施に有用なイソ酵素を見出すことは臨床化
学における当業者のＰ練の範囲内である。

多数のアルカリホスファターゼ基質の１種以上を本発明
の実施に使用することができる。基質は、イソ酵素との
酵素反応により、直接検出しうる変化が起こるようなも
のでなければならない。例えば、基質を１種以上の検出
可能な反応生成物、例えば色原体、螢光助剤、放射性同
位元素標識種、及び他の適当な検出可能な生成物に変え
る。分析の間に測定される検出可能な変化は、このよう
な検出可能な生成物の出現若しくは消失又は一つの検出
可能な生成物の別の生成物への変化である。

また、基質に対するイソ酵素の作用によって開始される
一連の反応によって検出可能な変化を起こすこともでき
る。例えば、アルカリホスファターゼイソ酵素は、基質
に作用して、検出可能な生成物を生成する１種以上の反
応に使用される別の酵素又は試薬を放出することができ
る。検出可能な生成物は、直接測定しうるか、又は測定
のため物理的分離又は取扱を必要とする。

本発明の好まし７い実施態様においては、分析は酵素反
応の検出可能な生成物として色原体又は螢光助剤を生じ
る。一般に、このような反応に有用な基質は、酵素反応
の間に基質分子から脱雛されるホスフェート基を存する
。このような基質は、燐酸又はその塩の有機モノ−又は
ジ−エステルを包含する。特に有用な基質は、例えば、
ｐ−ニトロフェニルホスフェート、フニノールフタレイ
ンモノホスフェ−［・、フェノールフタレインジホスフ
ェート、チモールフタレインモノホスフェート、インド
キシルホスフェート、フェニルホスフェート、α−ナフ
トールホスフェート、β−ナフトールホスフェート、α
−グリセロールホスフェート、０−メチルフルオレセイ
ンホスフェート、０−カルボキシフェニルホスフェート
、そのアルカリ金属塩及び文献、例えば米国特許第３．
４２５，９１２号明細書及び欧州特許出願公開第６Ｌ７
３１号公報に公知の他のものである。好ましい基質は、
ｐ−ニトロフェニルホスフェート及び４−（４−ニトロ
−２−メチルスルホニルフェニルアゾ）ナフトール−１
−ホスフェートである。

イソ酵素及び基質は、液体試験試料と接触するまで、要
素の異なる帯域中に分離して保持しなければならない。

要素中のイソ酵素の量は、前記の利点を得るためには、
限定的である。要素は、少なくとも１００　Ｉ、［１，
／　ｍのイソ辞書を含まなければなろない。好ましい実
施態様においては、イソ酵素は、少なくとも１２５Ｉ．
Ｕ、７ｍの被覆量で存在する。本明細書において、Ｉ．
Ｕ、は、イソ酵素に関する標準的ｐ）Ｉ及び温度条件下
にｊ分当たりに１マイクロモルの基質の変換を触媒する
のに必要なイソ酵素活性の量を１Ｉ．０．と定義するイ
ソ酵素活性の国際単位を表す。

要素中の基質の量は、広範に変動しうる。一般に、基質
は、１〜５ｇ／耐、好ましくは２〜４ｇ／ｄの量で存在
する。他の添加剤（例えば、界面活性剤、結合剤及び緩
衝剤）を臨床化学における当業者の熟練の範囲内にある
量で要素中に配合する。

本発明に従った分析は、ｐｌ＋９以下、好ましくはｐＨ
７〜９で実施する。分析の間、ｐＨを９以下に維持しう
る限り、本発明の実施に任意の適当な緩衝剤又は緩衝剤
の混合物を使用することができる。

特に有用な緩衝剤は、窒素含有有機緩衝剤であり、その
多くは文献に標準的になっている〔例えば、Ｇｏｏｄら
著、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、５巻（２）、１９６６年、４６
７〜４７７頁参照〕。代表的緩衝剤は、トリス（ヒドロ
キシメチル）アミノエタン・ＨＣＩ。

グリシルグリシン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−
メチル−２−アミノエタンスルホン酸及びＮ−２−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ１−２−エタンスルホン酸
から成る群を包含するが、これらに限定されない。最初
に挙げた緩衝剤が最も好ましい。

緩衝剤を、要素の任意の帯域中に存在させることができ
る。しかし、好ましい実施態様では、実質的にすべての
緩衝剤を本発明の要素の拡散帯域（前記）に存在させる
。このことは、要素の他の帯域には、緩衝剤がほとんど
存在しないことを意味する。詳述すれば、拡散帯域中に
少なくとも８０％の緩衝剤が存在する。緩衝剤は、特定
の緩衝剤に応じて、反応混合物のｐＨを９以下の所望の
ｐｉに維持するため適当な量で存在する。これらの緩衝
剤量は、臨床化学における当業者によって容易に決定さ
れうるが、一般に少なくとも１　ｇ／ｒｒ？である。

要素に、必要に応じて他の任意の試薬を添加することも
できる。例えば、金属イオン活性剤を添加してイソ酵素
を活性化することができる。このような活性化剤は、遊
離又は塩（例えば、アスパラギン酸塩、酢酸塩、塩化物
又は硫酸塩）の形で入手しうる２価の陽イオン、例えば
Ｍｇ−、ＣＯ〜、Ｍｎ″４、Ｃａ−、Ｚｎ〜、Ｓｒ−及
びＦｅ−を包含する。また、試験試料中の内因性アルカ
リホスファターゼの濃度が異常に高い場合には、酵素活
性の抑制剤を使用することができる。有用な抑制剤はフ
ェニルアラニン及びテトラミソールを包含する。このよ
うな抑制剤は、非ヒトアルカリホスファターゼイソ酵素
の活性に影響しないのが有利である。

更に、ホスフェート基質を使用する場合に酵素反応の速
度を増加するため要素中に１種以上のホスフェート受容
体を含めるのが好ましい。有用なホスフェート受容体は
、アミノアルコール若しくはその誘導体又は脂肪族アミ
ンを包含し、アミノアルコールが特に有用である。この
ような化合物の例は、従来周知である。

要素の反りかえりを低減するために、要素の１個以上の
帯域にグリセロール又は別の保温剤を添加することがで
きる。

緩衝剤、イソ酵素及び前記の基質を含む吸収性担持物質
、例えば自立性吸収性又は吸水性物質、例えば口紙又は
ストリップを含む乾式分析要素を用いて本発明方法を実
施する。要素を少なくとも２個の帯域に分割し、イソ酵
素及び基質を個々の帯域中に組み込む。このような要素
は、従来、試験ストリップ、診断要素、浸漬スティック
又は診断剤として公知である。

試薬は、浸漬、含浸、被覆又は他の適当な技法によって
適当な吸収性担持物質中に組み込むことができる。有用
な吸収性物質は、不溶性であり、水又は生物学的流体、
例えば全血又は血清にさらされたときに、その構造の一
体性を維持するものである。有用な要素は、紙、多孔性
粒状構造体、多孔性ポリマーフィルム、セルロース、ガ
ラス繊維、織布及び不織布（合成及び非合成）及び他の
適当な物質から製造することができる。このような要素
を製造するため有用な物質及び操作は、従来周知である
。

２個の帯域は、別個の層又は一つの層内の特定の領域で
あってもよい。これらは、同−又は異なる物質から成っ
てよく、積層又は他の標準的技法によって結合されてい
てもよい。２個の帯域の少なくとも一方は、多孔性拡散
帯域（下記）であるのが好ましい。

要素の２個帯域は、自立性である、すなわち、一体性を
維持するのに充分に強靭な物質から成ることができる。

帯域は、支持体上に担持されているのが好ましい。この
ような支持体は、任意の適当な寸法安定性で、好ましく
は、２００〜９００ｎ１１１の波長の電磁波を透過する
透明な（すなわち、輻射線透過性）物質である。特定の
要素に選択される支持体は、意図する検出方法（反射又
は透過分光分析）と認容性であるべきである。有用な支
持体物質は、紙、金属箔、ポリスチレン、ポリエステル
、ポリカーボネート、セルロースエステル及び他の、従
来公知のものである。

多孔性拡散帯域は、任意の適当な繊維物質又は非繊維物
質又はその一方若しくは両者の混合物から製造すること
ができる。この帯域の空隙率及び平均孔径は、意図する
用途に応じて変動することができる。例えば、全血又は
他の、高分子量物質を含む液体試料を分析すべき場合に
は、空隙率及び平均孔径は、血清又は尿を分析する場合
より一般に大きい。

有用な拡散帯域は、米国特許第４，２９２，２７２号明
細書に記載されているような、適当な結合剤と混合した
か又は布に織った繊維物質を使用して製造することがで
きる。また、米国特許第３，９９２，１５８号、同第４
，２５８，００１号及び同第４，４３０，４３６号明細
書並びに特開昭５７　（１９８２）　−１０１７６０号
公報に記載されているような、ポリマー組成物（例えば
、プランシュポリマー）又は粒状物質から拡散帯域を製
造するのが好ましい。拡散帯域は、等方性に多孔性であ
る〔孔度が粒子、繊維又はポリマーストランドの間の連
続空間又は孔によって生じるように帯域のどの方向でも
同一であることを意味する〕のが望ましい。

多孔性拡散帯域を前記の米国特許第３，９９２．１５８
号明細書に記載されているプラッシュポリマーとして製
造するのが最−も好ましい。

要素は、２個の必須帯域を存し、その少なくとも１個は
多孔性拡散帯域であってよい。他方の必須帯域は、試薬
帯域又は記録帯域であってよく、これらの帯域は従来公
知である。要素は、付加的拡散帯域、輻射線遮断若しく
は輻射線口過帯域、下２４５又はバリヤー帯域を含めて
（これらに限らない）他の帯域を有していてよい、２個
の必須帯域の間に下塗帯域が存在するのが好ましい。下
塗帯域は、帯域間を接着し、イソ酵素及び基質が分析前
に相互反応しないことを確実にするのを助ける。要素中
のすべての帯域は、一般に、相互に流体接触〔流体、試
薬及び反応生成物（例えば着色色素）が隣接帯域の重な
った領域の間を通過又は移動しうろことを意味する〕し
ている。帯域が別個に塗布した層であるのが好ましいが
、２個以上の帯域が単一層であってもよい。適当な要素
成分は、前記の文献の他に、例えば米国特許第４．０４
２，３３５号、同第４，１３２．５２８号及び同第４．
１４４．３０６号明細書に記載されている。

本発明の好ましい実施態様は、前記のイソ酵素を含む層
、輻射線遮断層、下塗層及びイソ酵素に対する基質及び
前記の緩衝剤を含む多孔性拡散層を順次、流体接触して
有する支持体を含む要素である。イソ酵素層は、多孔性
拡散層であってもよいが、１種以上の親水性結合剤（例
えばゼラチン、ビニルピロリドンポリマー又はアクリル
アミドポリマー）、界面活性剤、媒染剤及び他の添加剤
を含む試薬層又は記録層であるのかのが好ましい。

下塗層は、当業者に公知の下塗物質、例えばビニルピロ
リドンポリマー又はアクリルアミドポリマーを１種以上
含むことができる。輻射線遮断層は、一般に、１種以上
の結合剤、界面活性剤及び従来公知の反射性物質を含む
。

この好ましい要素は、場合により、要素の最外層であり
、一般に第一の多孔性拡散層に隣接する第二の多孔性拡
散層を含んでいてもよい。第二の多孔性拡散層は、イソ
酵素基質を含む第一の多孔性拡散層におけるのと同−又
は異なる物質から構成することができる。例えば、緩衝
剤を含む第一拡散層は、前記の米国特許第３，９９２．
１５８号明細書により製造されたプラッシュポリマーを
含んでいてよく、第二拡散層は、前記の粒状物質から成
ることができる。この第二拡散層は、必要に応じて緩衝
剤を含んでいてもよい。

本発明により、分析方法に応じて異なる種々の要素を製
造することができる。任意の所望の幅の長いテープ、シ
ート、スライド又はチップを含めて種々の形で要素を形
成することができる。

本発明の分析は、手操作で又は自動的にすることができ
る。一般に、乾式要素を使用する場合、要素を供給ロー
ル、チップ包装物又は他の供給源から採取し、試験すべ
き液体試料（例えば２００μ１未満）と物理的に接触さ
せることによってテオフィリンを測定する。このような
接触は、任意の適当な方法で、例えば要素を試料中に浸
漬するか、又は好ましくは適当な分配手段を用いて一滴
の試料を手又は機械で要素に落とすことによって達成す
ることができる。

試料を施した後、要素をコンディショニング、例えばイ
ンキュベーション、加熱等、任意の試験結果を得るのを
促進又は容易にするのに望ましい処理に付す。

要素中に存在するアルカリホスファターゼは、基質の反
応を試料中のテオフィリンによって抑制されない、存在
するアルカリホスファターゼの量に基づいた割合で触媒
する。反応生成物の形成による検出可能な変化（例えば
色素形成）の割合は、反射若しくは透過分光光度測定用
の適当な検出装置を用いて定量することができる。適当
な分光光度測定装置及び操作は、従来公知である。他の
適当な検出手段は、螢光分光光度測定、放射能測定又は
酵素標識の使用を含む。テオフィリンの量は、測定され
た反応割合Ｑこ反比例する。

例えば、ｐ−ニトロフェニルホスフェートを基質として
使用する場合には、未抑制酵素反応は、ｐ−ニトロフェ
ノールを生じ、これは標準的分光光度計を使用して４０
０ｎｒｒＩで測定されうる。定量可能な色の変化の割合
は、基質の反応割合に直接関係し、この割合は間接的に
試料中のテオフィリンの４度に関係する。

この明細書に使用する１、　ｔｌ、は、酵素活性に関す
る国際単位を表し、酵素に関する標準ｐＨ及び温度条件
下に１分当たりに１マイクロモルの基質の変換を触媒す
るのに必要な酵素活性の量を１Ｉ．０゜と定義する。

〔実施例〕

以下に本発明の詳細な説明するが、本発明の技術的範囲
をこれらの実施例に限定するものでないことはいうまで
もない。

Ｎ上二１工叉左辺汎ぺ１旦 これらの例は、本発明の分析法及び要素を前記の欧州特
許出願公開第１８４，４３７号明細書に記載されている
のと同様の分析法及び要素と比較するものである。以下
に示すデータから本発明の分析法が対照分析法より内因
性アルカリホスファターゼ及びヘモグロビンからの妨害
が少ないことが判る。

下記の構造及び成分を有する本発明の要素を製造したニ ー−□−席 二酸化チタン　　　　　　　　３９ｇ／ｍ酢酸セルロー
ス　　　　　　　　　１ｇ７ｍポリウレタン樹脂（ＥＳ
ＴＡＮＥ）　　　２．５　ｇ／メトリトン（ＴＲＩＴＯ
Ｎ）　Ｘ　−４０５拡散　　界面活性剤　　　　　　　
　　Ｉ．７　ｇ／　ｒｒＩ層　　　ｐ−ニトロフェニル
ホス フ　ェ　−　ト　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　３ｇ／ｎイＢＲＩＪ　７８界面活性剤　　
　　　０．８ｇ／ｍトリス（ヒドロキシメチル）− アミノメタン・ＨＣＩ暖街剤 （［＋１８　）　　　　　　　　　　　　５ユ土ａ並下
塗　　ポリ　（Ｎ−イソプロピル− 層　　　アクリルアミド）　　　　　　　　０．４ｇ／
ポトリトンＸ−則匹ｊＨ旧霞盟凱−０，２ｇ並ゼラチン
（硬化）　　　　　　　　　８ｇ／ｍトリトンＸ−２０
０Ｅ界面活性剤　０．ｉｇ／ｉ輻射　　二酸化チタン　
　　　　　　　ｓ２ｇ／ｒｒｔｙｙ＝　　　ｏ、ｘｘ、
′Ｉｏ　３０Ｓ界面活性剤　　　　０．２　ｇ／　ｒｉ
＋断層　　トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン
・１ｌｃ１緩衝剤 （ｐＨ８）　　　　　　　　　　　０．５ｇ／ｍグリセ
ロール　　　　　　　Ｉ．１　ｇ／イピペラジンーＮ、
Ｎ’−ビス− （２−ヒドロキシプロパン 一久西ｊ）敢）　　　　　　　　　　０．５／並ゼラチ
ン（硬化）　　　　　　　　ｌ１ｇ／ｍアルカリホスフ
ァターゼ ウシ肝臓イソ酵素 （下記の第１表参照） 記録トリス（ヒドロキシメチル）− 層　　　アミノメタン・ＩＩｃＩ緩衝剤（ｐＨ８）　　
　　　　　　　　　０．６ｇ／ｒｒｆ塩化マグネシウム
　　　　　０．０３ｇ／ｒｒ？トリトンＸ−１００界面
活性剤　Ｉ．１ｇ／ｎ（ポリ　（スチレン−ヨーＮ−ビ
ニル ベンジル−Ｎ−ヘンシル−Ｎ、　　Ｎ −ジメチルアンモニウムクロリド ーコージビニルベンゼン）　　　　Ｉ．１ｇ／ｎ（グリ
セロール　　　　　　　　Ｉ．１ｇ／ｍ−−−一凍藷−
乾〜燥１」６（糺７−−−−−息」ｊ」ム並ポリ　（エ
チレンテレフタレート） −」Ｌ−一 対照の要素は、記録層中のアルカリホスファターゼイソ
酵素の量が１００Ｉ．Ｌｌ、／　ｍ未満である（下記の
第１表参照）ことを除いて同様に製造した。

テオフィリンを測定するため要素を下記の方法で使用し
た。それぞれ１８．５μｇ　／　ｍｌのテオフィリンを
含む２種の試験流体を製造した。これらの流体の一方に
１０００Ｉ．０．　のヒトアルカリホスファターゼを添
加した。各試験流体のテオフィリン湯度を各要素の多孔
性拡散層上に１０μｅの流体試料を滴下することによっ
て測一定した。３７℃でのインキュベーションの間に、
標準臨床化学分析装置を用いて４１０ｎｍで生成した色
素の吸光度を監視することによって酵素活性の割合を測
定じた。

結果を下記の第１表に示す。ヒトアルカリホスファター
ゼ１０００Ｉ．Ｕ、と共にテオフィリンを含むヒト血清
及びヒトアルカリホスファターゼを有しないテオフィリ
ンを含むヒト血清の予測される２層度を比較することに
よって偏倚（μｇ／＋＋＋ｊ）を測定した。許容しうる
偏倚は、３μｇ　／　ｍ１未満である。対照要素は、内
因性アルカリホスファターゼから許容しえない偏倚を示
したが、本発明の要素は著しく少ない偏倚を示したこと
が判る。

第１表 アルカリホスファクーゼ 贋−Ｉ　　　　　　　　イ　ソ」Ｔ（′１度Ａ↓工其ユ
／ｊ値）　　　　　　／７／、、Ｌ−対照Ａ　　　　　
　　６１　　　　　　　−５．１２対照Ｂ　　　　　　
　９３　　　　　　　−３．４８例１　　　　　１２３
　　　　　　−２．６２例２　　　　　１８４　　　　
　　−２．０５偏倚におけるこの改良は、本発明の要素
を２５℃で、相対湿度１５％で１週間貯蔵した後に達成
されることも観察された。本発明の要素は、改良された
保存性を示すと思われる。前記の要素すべてを、種々の
旦のテオフィリン（０，９〜３７．５μｇ　／　ｍｌ　
）を含む試験流体を拡散層に施し、前記のように形成し
た色素を測定することによって保存期間後に評価した。

下記の第■表には、これらの試験結果を示す。偏倚は、
本発明の要素を使用すると、すべてのテオフィリン湯度
で許容しうる程度に低い。対照要素は、すべての濃度で
許容しうる偏倚（３μｇ　／　ｍ１以下）を示さなかっ
た。

第■表 対照ＡＯ，１２，３４６，２７ 対照Ｂ　　　−０，５９２，３２−３，１６例１　　−
’０．６６　　０．５８　　　Ｉ．７９例２　　　０．
０２　　２．５７　　　０．１６更に、本発明の要素は
、対照要素より８０％まで、割合範囲の増加を示した。

前記の例２と同様の本発明の要素をテオフィリン（２０
μｇ　／　ｍｌ　）に関する分析で前記の対照Ａと同様
の要素と比較し、ヘモグロビン（１５０ｎｇ／Ｃ１１）
による偏倚を評価した。要素は、前記の量のテオフィリ
ン及びヘモグロビンを含む試験流体を使用して例１及び
２に記載したようにして試験した。同じテオフィリン濃
度でヘモグロビンを含む流体及びヘモグロビンを含まな
い流体の予測濃度を比較することによって偏倚を測定し
た。

下記の第■表は、これらの試験の結果を示すものである
。本発明の要素は、対照要素に比べてヘモグロビンによ
り著しく少ない偏倚を示した。約２μｇ／−未満の偏倚
は許容しうる。

第■表 コ■Ｌ−。（μ　　ｍｌ） 対照　　　　　　　　−２，０３ 例３　　　　　　　−０．８５ 〔発明の効果〕 本発明は、前記の欧州特許出願公開第１８４，４３７号
公報に記載されている要素及び分析法のすべての利点を
有する、テオフィリンの簡単かつ迅速な分析法を提供す
る。更に、本発明の分析は、生物学的試験流体中の内因
性アルカリホスファターゼ及びヘモグロビンによる妨害
が少ない。

これらの改良は、要素中のアルカリホスファタ知の要素
中に使用される１０〜５０Ｉ．Ｕ、　／　ｒｄに対して
、少なくとも１００Ｉ．ＩＪ、／ｒｄの量で存在する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、第一及び第二帯域を流体接触状態で含み、第一帯域
   がｐＨ９以下でイソ酵素に対する基質に作用することが
   できる、少なくとも１００Ｉ．Ｕ．／ｍ＾２の量で存在
   するアルカリホスファターゼイソ酵素を含み、そして第
   二帯域がイソ酵素に対する基質を含むテオフィリンの測
   定用乾式分析要素。 ２、Ａ、第一及び第二帯域を流体接触状態で含み、第一
   帯域がｐＨ９以下でイソ酵素に対する基質に作用するこ
   とができる、少なくとも１００Ｉ．Ｕ．／ｍ＾２の量で
   存在するアルカリホスファターゼイソ酵素を含み、そし
   て第二帯域がイソ酵素に対する基質を含むテオフィリン
   の測定用乾式分析要素とテオフィリンを含むと思われる
   生物学的流体の試料とをｐＨ９以下で接触させ、 Ｂ、接触によって生じる検出可能な変化を測定する工程
   を含むテオフィリンの測定方法。