JPS6411278B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS6411278B2 JPS6411278B2 JP59233422A JP23342284A JPS6411278B2 JP S6411278 B2 JPS6411278 B2 JP S6411278B2 JP 59233422 A JP59233422 A JP 59233422A JP 23342284 A JP23342284 A JP 23342284A JP S6411278 B2 JPS6411278 B2 JP S6411278B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- cholesterin
- inducer
- carbon atoms
- atoms
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
産業上の利用分野
本発明は、シユードモナス属からのコレステリ
ンエステラーゼの製造法に関する。 従来技術 コレステリンエステラーゼは、コレステリンの
酵素測定法が解明されて以来臨床的及び生化学的
分析で重要である。生物学的物質のコレステリン
の大部分はエステルの形で存在するので、コレス
テリンエステラーゼ及びコレステリンを酸化する
酵素、例えばコレステリンオキシダーゼ又はコレ
ステリンデヒドロゲナーゼの一般的使用によつ
て、コレステリンエステルの酵素による完全な測
定が可能になる。これは、ドイツ特許第224847号
明細書から公知である。この場合コレステリンの
測定範囲では。微生物からのコレステリンエステ
ラーゼが特に適当であることが判明した（ドイツ
公開特許第2506712.3号明細書）。従来発見された
コレステリンエステラーゼを形成する微生物は、
一般に後処理に引き合うコレステリンエステラー
ゼの含量を形成するために誘導物質を必要とする
のに過ぎない。この場合誘導物質とは、微生物
に、誘導物質を用いないよりも大量の酵素を形成
するように励起する物質である。この場合誘導物
質は、培養に使用した培地に添加する。公知誘導
物質は脂肪及び油、例えばオリーブ油、大豆油、
ヒマワリ油、牛脂、豚の油、落花生油、脂肪酸エ
ステル、コレステリンエステル、パルミチン酸並
びに殊にレシチン（ドイツ公開特許第2933646号
明細書）であり、従来はこれらを用いて目的とす
る酵素の量に関して良好な結果が得られた。しか
しながら、更に酵素の収率の増大が所望されてい
る。それ故、なお良好な誘導物質を使用する要求
が存在する。 ところで、意外なことにもレシチン中の高成分
の不飽和脂肪酸並びにコリン基は、誘導物質の作
用に最適ではないことが判明した。それ故この認
識から出発して、所望の改良は本発明によれば、
コレステリンエステラーゼを形成する能力のある
シユードモナス属を適当な培地中で誘導物質の存
在で培養し、培養液又は／及び細胞から酵素を製
造することによつて、シユードモナス属からコレ
ステリンエステラーゼを製造する方法により達成
される。この方法は、誘導物質として一般式： 〔式中Ｒ及びR1はアルキル基にＣ原子14〜18個
を有するアルキル基又はアルコイル基を表わし、
Ｒ又はR1はＨ原子を表わし、R2はＣ原子２〜８
個を有するアルキルアミン基、Ｃ原子３〜８個を
有するアルキル−トリメチルアンモニウム基、Ｃ
原子１〜４個を有するアルキルピリジン基又は
式：−CH2−（CHOH）ｎ−CH2OH（ｎ＝１〜
４）の基を表わす〕の化合物を使用することを特
徴とする。 本発明によれば、同じ誘導物質の量に対するコ
レステリンエステラーゼの収率を、レシチンと比
較して数100％まで改良することが達成される。
この場合本発明範囲内では、最良の結果はケフア
リン系（R2＝アルキルアミノ）又はホスホポリ
オール系（R2＝CH2−（CHOH）ｎ−CH2OH）
及びホスホアルキルピリジン系の化合物で得られ
る。 更に飽和脂肪酸エステル、つまりアルコイル基
下に、ステアロイル基、殊にグリセリン基の２−
位に存在する場合に（R1）、殊に十分な作用を有
することが判明した。更に、そのほかに分子の同
じ分解の際に、ＲとR1とが異なる場合にＲ＝R1
と比較して若干良好な結果が得られることが判明
した。 実施例に記載した表には、本発明によつて使用
すべき誘導物質系に対して実施例の条件下に得ら
れた酵素の活量が記載されている。比較するため
に、大豆のレシチンを一緒に挙げた。本発明によ
る誘導物質での著しく優れた酵素の収率が得られ
ることが認められる。同じ結果が、本発明によつ
て使用した他の多くの誘導物質で得られた。この
ようにして、例えば次の化合物を用いて著しく十
分な酵素の収率が得られた： １，２−ジパルミトイル−グリセロ−３−ホス
ホエタノールアミン、 １，２−ジパルミトイル−グリセロ−３−ホス
ホヘキサノイルアミン、 １，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホス
ホグリセリン、 １，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホス
ホエタノールアミン及び−ホスホプロパノールア
ミン、 １−パルミトイル−２−テトラデシル−グリセ
ロ−３−ホスホエタノールアミン、 １オクタデシル−２−テトラデシル−グリセロ
−３−ホスホエタノールアミン、 −パルミトイル−２−ステアロイル−グリセロ
−３−ホスホ−トリメチル−アンモニウムプロパ
ノール及び １−ヘキサデシル−グリセロ−３−ホスホエタ
ノールアミン。 本発明によつて使用した誘導物質は、好ましく
は炭素源として、殊にシユードモナス属を培養す
るための単独の炭素源としても使用される。しか
しながら、選択的に特別の炭素源、例えば麦芽
汁、ペプトン、酵母抽出物、砂糖又はポリアルコ
ールを使用することもできる。 本発明方法で使用した誘導物質の量は、公知誘
導物質の量に相応する。これは、一般に培地の容
量に対して約0.1〜５重量％、好ましくは0.5〜２
重量％である。 その他の培養条件も変えないで公知方法、例え
ば前述の方法から引継ぐことができる。その際一
般に使用したシユードモナス属に最も有利な培養
条件が重要であるが、使用した誘導物質の種類は
通常培養条件に影響を及ぼさない。 実施例 例 １〜７ 予め培養するために、標準培地〔メルク
（Merck）社製〕50mlを500mlのエチレンマイヤ
ーフラスコに装入し、シユードモナスspec
（Pseudomonas sPec.）DSM 1280（：微工研菌
寄第5673号）菌株の環の完全な材料を接種し、28
℃で15時間振盪する。得られた溷濁液を、水で
１：20に希釈する。400〜600mmでの溷濁測定によ
つてＥ＝0.170が得られた。それぞれの誘導物を
含有する下記の組成の培地100mlに前記の予培養
物１％を接種し、500mlのエルレンマイヤーフラ
スコ中で28℃で振盪する。誘導物質含有培地は、
溶液１に対して次の物質を含有する： Na2HPO4×7H20 ７ｇ KH2PO4 ３ｇ 尿 素 1.5ｇ MgSO4×7H2O 0.6ｇ CaCl2 0.1ｇ FeCl3×6H2O（１ｇ／100ml） 0.1ml ZnSO4×7H2O（１ｇ／100ml） 0.1ml NaCl 50mg 誘導物質 10ｇ 培地のPHは7.0である。 コレステリンエステラーゼの活量を、培養物で
コレステリン油酸塩を使用して異なる時間に測定
した；温度25℃。表は、使用した誘導物質及び３
日後に得られた活量（Ｕ／）を示す。比較する
ために、公知誘導物質、即ちレシチンを使用し
た。
ンエステラーゼの製造法に関する。 従来技術 コレステリンエステラーゼは、コレステリンの
酵素測定法が解明されて以来臨床的及び生化学的
分析で重要である。生物学的物質のコレステリン
の大部分はエステルの形で存在するので、コレス
テリンエステラーゼ及びコレステリンを酸化する
酵素、例えばコレステリンオキシダーゼ又はコレ
ステリンデヒドロゲナーゼの一般的使用によつ
て、コレステリンエステルの酵素による完全な測
定が可能になる。これは、ドイツ特許第224847号
明細書から公知である。この場合コレステリンの
測定範囲では。微生物からのコレステリンエステ
ラーゼが特に適当であることが判明した（ドイツ
公開特許第2506712.3号明細書）。従来発見された
コレステリンエステラーゼを形成する微生物は、
一般に後処理に引き合うコレステリンエステラー
ゼの含量を形成するために誘導物質を必要とする
のに過ぎない。この場合誘導物質とは、微生物
に、誘導物質を用いないよりも大量の酵素を形成
するように励起する物質である。この場合誘導物
質は、培養に使用した培地に添加する。公知誘導
物質は脂肪及び油、例えばオリーブ油、大豆油、
ヒマワリ油、牛脂、豚の油、落花生油、脂肪酸エ
ステル、コレステリンエステル、パルミチン酸並
びに殊にレシチン（ドイツ公開特許第2933646号
明細書）であり、従来はこれらを用いて目的とす
る酵素の量に関して良好な結果が得られた。しか
しながら、更に酵素の収率の増大が所望されてい
る。それ故、なお良好な誘導物質を使用する要求
が存在する。 ところで、意外なことにもレシチン中の高成分
の不飽和脂肪酸並びにコリン基は、誘導物質の作
用に最適ではないことが判明した。それ故この認
識から出発して、所望の改良は本発明によれば、
コレステリンエステラーゼを形成する能力のある
シユードモナス属を適当な培地中で誘導物質の存
在で培養し、培養液又は／及び細胞から酵素を製
造することによつて、シユードモナス属からコレ
ステリンエステラーゼを製造する方法により達成
される。この方法は、誘導物質として一般式： 〔式中Ｒ及びR1はアルキル基にＣ原子14〜18個
を有するアルキル基又はアルコイル基を表わし、
Ｒ又はR1はＨ原子を表わし、R2はＣ原子２〜８
個を有するアルキルアミン基、Ｃ原子３〜８個を
有するアルキル−トリメチルアンモニウム基、Ｃ
原子１〜４個を有するアルキルピリジン基又は
式：−CH2−（CHOH）ｎ−CH2OH（ｎ＝１〜
４）の基を表わす〕の化合物を使用することを特
徴とする。 本発明によれば、同じ誘導物質の量に対するコ
レステリンエステラーゼの収率を、レシチンと比
較して数100％まで改良することが達成される。
この場合本発明範囲内では、最良の結果はケフア
リン系（R2＝アルキルアミノ）又はホスホポリ
オール系（R2＝CH2−（CHOH）ｎ−CH2OH）
及びホスホアルキルピリジン系の化合物で得られ
る。 更に飽和脂肪酸エステル、つまりアルコイル基
下に、ステアロイル基、殊にグリセリン基の２−
位に存在する場合に（R1）、殊に十分な作用を有
することが判明した。更に、そのほかに分子の同
じ分解の際に、ＲとR1とが異なる場合にＲ＝R1
と比較して若干良好な結果が得られることが判明
した。 実施例に記載した表には、本発明によつて使用
すべき誘導物質系に対して実施例の条件下に得ら
れた酵素の活量が記載されている。比較するため
に、大豆のレシチンを一緒に挙げた。本発明によ
る誘導物質での著しく優れた酵素の収率が得られ
ることが認められる。同じ結果が、本発明によつ
て使用した他の多くの誘導物質で得られた。この
ようにして、例えば次の化合物を用いて著しく十
分な酵素の収率が得られた： １，２−ジパルミトイル−グリセロ−３−ホス
ホエタノールアミン、 １，２−ジパルミトイル−グリセロ−３−ホス
ホヘキサノイルアミン、 １，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホス
ホグリセリン、 １，２−ジミリストイル−グリセロ−３−ホス
ホエタノールアミン及び−ホスホプロパノールア
ミン、 １−パルミトイル−２−テトラデシル−グリセ
ロ−３−ホスホエタノールアミン、 １オクタデシル−２−テトラデシル−グリセロ
−３−ホスホエタノールアミン、 −パルミトイル−２−ステアロイル−グリセロ
−３−ホスホ−トリメチル−アンモニウムプロパ
ノール及び １−ヘキサデシル−グリセロ−３−ホスホエタ
ノールアミン。 本発明によつて使用した誘導物質は、好ましく
は炭素源として、殊にシユードモナス属を培養す
るための単独の炭素源としても使用される。しか
しながら、選択的に特別の炭素源、例えば麦芽
汁、ペプトン、酵母抽出物、砂糖又はポリアルコ
ールを使用することもできる。 本発明方法で使用した誘導物質の量は、公知誘
導物質の量に相応する。これは、一般に培地の容
量に対して約0.1〜５重量％、好ましくは0.5〜２
重量％である。 その他の培養条件も変えないで公知方法、例え
ば前述の方法から引継ぐことができる。その際一
般に使用したシユードモナス属に最も有利な培養
条件が重要であるが、使用した誘導物質の種類は
通常培養条件に影響を及ぼさない。 実施例 例 １〜７ 予め培養するために、標準培地〔メルク
（Merck）社製〕50mlを500mlのエチレンマイヤ
ーフラスコに装入し、シユードモナスspec
（Pseudomonas sPec.）DSM 1280（：微工研菌
寄第5673号）菌株の環の完全な材料を接種し、28
℃で15時間振盪する。得られた溷濁液を、水で
１：20に希釈する。400〜600mmでの溷濁測定によ
つてＥ＝0.170が得られた。それぞれの誘導物を
含有する下記の組成の培地100mlに前記の予培養
物１％を接種し、500mlのエルレンマイヤーフラ
スコ中で28℃で振盪する。誘導物質含有培地は、
溶液１に対して次の物質を含有する： Na2HPO4×7H20 ７ｇ KH2PO4 ３ｇ 尿 素 1.5ｇ MgSO4×7H2O 0.6ｇ CaCl2 0.1ｇ FeCl3×6H2O（１ｇ／100ml） 0.1ml ZnSO4×7H2O（１ｇ／100ml） 0.1ml NaCl 50mg 誘導物質 10ｇ 培地のPHは7.0である。 コレステリンエステラーゼの活量を、培養物で
コレステリン油酸塩を使用して異なる時間に測定
した；温度25℃。表は、使用した誘導物質及び３
日後に得られた活量（Ｕ／）を示す。比較する
ために、公知誘導物質、即ちレシチンを使用し
た。
【表】
前述のすべての値は同一条件下に得られたの
で、値は正確に比較することができる。
で、値は正確に比較することができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ コレステリンエステラーゼを形成する能力の
あるシユードモナス属を適当な培地中で誘導物質
の存在で培養し、培養液又は／及び細胞から酵素
を製造することによつてシユードモナス属からコ
レステリンエステラーゼを製造する方法におい
て、誘導物質として一般式： 〔式中Ｒ及びR1はアルキル基にＣ原子14〜18個
を有するアルキル基又はアルコイル基を表わし、
Ｒ又はR1はＨ原子を表わし、R2はＣ原子２〜８
個を有するアルキルアミン基、Ｃ原子３〜８個を
有するアルキルートリメチルアンモニウム基、Ｃ
原子１〜４個を有するアルキルピリジン基又は
式：−CH2−（CHOH）ｎ−CH2OH（ｎ＝１〜
４）の基を表わす〕の化合物を使用することを特
徴とするコレステリンエステラーゼの製造法。 ２ R2がエチルアミノ基の一般式の化合物を使
用する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ Ｒ及びR1の少くとも１つがステアロイル基
である特許請求の範囲第１項又は第２項記載の方
法。 ４ ＲとR1とは異なる特許請求の範囲第１項か
ら第３項までのいずれか１項記載の方法。 ５ R1がステアロイル基である特許請求の範囲
第４項記載の方法。 ６ R2がグリセリン基である特許請求の範囲第
１項から第５項までのいずれか１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3340950.1 | 1983-11-11 | ||
| DE19833340950 DE3340950A1 (de) | 1983-11-11 | 1983-11-11 | Verfahren zur gewinnung von cholesterinesterase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6112285A JPS6112285A (ja) | 1986-01-20 |
| JPS6411278B2 true JPS6411278B2 (ja) | 1989-02-23 |
Family
ID=6214150
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59233422A Granted JPS6112285A (ja) | 1983-11-11 | 1984-11-07 | コレステリンエステラーゼの製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4615981A (ja) |
| EP (1) | EP0142793B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6112285A (ja) |
| AT (1) | ATE47879T1 (ja) |
| DE (2) | DE3340950A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE59805997D1 (de) | 1997-08-18 | 2002-11-21 | Max Planck Gesellschaft | Phospholipidanaloge verbindungen |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4052263A (en) * | 1975-12-11 | 1977-10-04 | Eastman Kodak Company | Production of cholesterol esterase using Nocardia cholesterolicum |
| CA1067844A (en) * | 1975-12-11 | 1979-12-11 | Eastman Kodak Company | Method and medium for producing cholesterol oxidase |
| DE2933648A1 (de) * | 1979-08-20 | 1981-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 68305 Mannheim | Verfahren zur gewinnung von cholesterinesterase |
| DE2933646A1 (de) * | 1979-08-20 | 1981-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 68305 Mannheim | Verfahren zur gewinnung von cholesterinesterase |
-
1983
- 1983-11-11 DE DE19833340950 patent/DE3340950A1/de not_active Withdrawn
-
1984
- 1984-10-22 US US06/663,149 patent/US4615981A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-11-07 JP JP59233422A patent/JPS6112285A/ja active Granted
- 1984-11-09 DE DE8484113534T patent/DE3480410D1/de not_active Expired
- 1984-11-09 EP EP84113534A patent/EP0142793B1/de not_active Expired
- 1984-11-09 AT AT84113534T patent/ATE47879T1/de active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3480410D1 (en) | 1989-12-14 |
| DE3340950A1 (de) | 1985-05-23 |
| JPS6112285A (ja) | 1986-01-20 |
| EP0142793A3 (en) | 1987-05-06 |
| US4615981A (en) | 1986-10-07 |
| EP0142793B1 (de) | 1989-11-08 |
| ATE47879T1 (de) | 1989-11-15 |
| EP0142793A2 (de) | 1985-05-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69123041T2 (de) | Herstellungsverfahren für optisch aktiven 3-phenyl-1,3-propandiol | |
| DE3424440C2 (ja) | ||
| DE68919184T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven 3-Phenylglycidsäureestern. | |
| US5093249A (en) | Process for production of dihomo-γ-linolenic acid and inhibitor for unsaturation reaction at Δ5-position of fatty acid | |
| JP3354582B2 (ja) | オメガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含有する脂質の製造方法 | |
| US4665029A (en) | Heat-resistant lipase | |
| EP0624202A1 (en) | Method to produce single cell oil containing gamma-linolenic acid | |
| JP2749587B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
| JPS5811999B2 (ja) | モエノマイシンノセイホウ | |
| JP2706778B2 (ja) | 油脂の改質法 | |
| DE2527068A1 (de) | Verfahren zur herstellung von cholesterinesterase | |
| EP0502525B1 (de) | Biotechnologisches Verfahren zur Herstellung von S-(+)-2,2-Dimethylcyclopropancarboxamid und R-(-)-2,2-Dimethylcyclopropancarbonsäure | |
| DE68924738T2 (de) | Hitzestabile Lipoproteinlipase, Verfahren zu deren Herstellung sowie ein Reagenz zur Bestimmung von Triglyceriden, welches diese Lipase enthält. | |
| DE69828338T2 (de) | Esterase und seine Verwendung zur Herstellung von optisch aktiven Chroman-Verbindungen | |
| EP0356912A2 (en) | A method for the preparation of an optically active 2-substituted carboxylic acid | |
| DE69229616T2 (de) | Enzymatische Resolution von Alpha-tertiären-Karbonsäureestern | |
| US5026644A (en) | Process for preparing a lipid composition having a high γ-linolenic acid content | |
| EP0077544B1 (en) | Microbial process for producing 12-alpha-hydroxypregna-1,4-dien-3-one-20-alpha-carboxylic acid | |
| US4615981A (en) | Process for obtaining cholesterol esterase from microorganisms | |
| JPWO2008149542A1 (ja) | 微生物発酵によるｄｈａ含有リン脂質の製造方法 | |
| DE2036875C3 (de) | Verfahren zur biochemischen Iso herung von 1 Menthol | |
| GB1461408A (en) | Fermentation process for the production of lipase | |
| JPS60251890A (ja) | γ−ハロ−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法 | |
| JP3747640B2 (ja) | 光学活性１，２−ジオール環状炭酸エステルの製造法 | |
| JPS582671B2 (ja) | コレステリンエステラ−ゼの製法 |