JPS642090B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は鶏用抗ロイコチトゾーン症不活化ワク
チンに関するものである。 鶏のロイコチトゾーン症は、ロイコチトゾイダ
エ（Leucocytozoidae）科に属する原虫が引き起
す住血原虫感染症で、ニワトリヌカカにより媒介
される。この感染症に罹ると強度の貧血症を起
し、ヒナでは吐血、斃死するものが多く、成鶏で
は発育の遅延や産卵率の低下が生じ、養鶏産業に
大きな損害をもたらす。 ロイコチトゾーン症の予防、治療剤とて、従来
ピリメタミンとサルフア剤の合剤が用いられてい
たが、その残留性と人に対する安全性が問題にさ
れ、これらの欠点を有さない新しい抗ロイコチト
ゾーン剤の開発が求めらている。本発明者らは、
今般、ロイコチトゾーン症の病原虫であるロイコ
チトゾーン・カウレリイ（Leucocytozoon
caulleryi）のスポロゾイト（sporozoite種原虫）
を鶏の受精卵に接種して感染させ、スポロゾイト
が生長して形成したシゾント（schizont包体）を
分離採取し、次いで不活化することにより抗ロイ
コチトゾーン症予防ワクチンを得ることに成功
し、本発明を完成した。 本発明者が提供するワクチンを鶏に接種する
と、鶏はロイコチトゾーン・カウレリイに対し免
疫性を獲得し、ロイコチトゾーン症に対する抵抗
力を有するようになる。換言すると、本発明にか
かるワクチンを予め鶏に接種することにより、何
ら副作用なくロイコチトゾーン症の蔓延を強力に
阻止しうる。 次に本発明にかかる抗ロイコチトゾーン症ワク
チンの製造法を以下に示す。 (1) シゾントの形成 SPE（specific pathogen free）鶏受精卵の漿
尿膜上にロイコチトゾーン・カウレリイのスポロ
ゾイトを接種する。受精卵は、10日〜13日令のも
のがよく、接種株としては越谷株などが用いられ
る。スポロゾイトの接種方法としては、感染ヌカ
カの卵穀膜を通じての吸血法および無菌的スポロ
ゾイト浮遊液を用いた接種法が挙げられるが、後
者の方法がより適格に接種がなされ、操作も簡単
である。 スポロゾイトに感染した受精卵は約36〜38℃に
保持される。すなわち、受精卵をふ化させるに必
要な温度条件下で保持する。受精卵中のスポロゾ
イトは成長してシゾントを形成する。スポロゾイ
トを漿尿膜上に接種すると、このシゾントは特異
的に卵黄嚢の基部に集塊となつて形成される。以
上の処理方法は第84回日本獣医学会講演要旨集
104頁（1977年）、第85回同誌135頁（1978年）、第
86回同試71頁（1978年）に記載されている。 (2) 不活化ワクチンの製造 卵黄嚢基部に形成されたシゾント集塊を採集
し、リン酸緩衝液などの適当な緩衝液で洗浄、希
釈した後、ホモゲナイザー、フレンチプレス、超
音波などで細胞を破壊する。得られた破砕細胞を
不活化処理すると、目的の不活化ワクチンが得ら
れる。 不活化法としては、ホルマリンやベータープロ
ピオラクトンなどの不活化剤を用いる方法や加熱
による不活化法などの通常用いられる方法が使用
できる。例えば、ホルマリンを使用する場合0.05
〜0.1％ホルマリン溶液で数日から数週間処理す
ると不活化ワクチンが得られる。 得られた不活化ワクチンは必要に応じて透析な
どの処理を経たのち、そのまま又は蒸留水、生理
食塩水またはリン酸緩衝食塩水などで希釈して鶏
に接種する。必要によりアジユバントおよび防腐
剤などのワクチン製剤に通常用いられる物質を加
えてもよい。例えば、アジユバントとして、水酸
化アルミニウム、リン酸アルミニウム、リン酸カ
ルシウム、明ばん、フロインド（Freund）のコ
ンプリートアジユバント、レバミゾール
（Levamisole）などを使用したり、防腐剤とし
て、チメロサール、フエノール、石炭酸、ホルマ
リンなどを利用してもよい。なお、アジユバント
としてレバミゾールを、上記ワクチン投与後数日
から数週間後に約0.01〜0.4ｇ／Kg投与すると、
ワクチン効果が一段と増強されることが確認され
ている。 かくして製造された抗ロイコチトゾーン症ワク
チンを鶏に予防接種するとき、多くの場合は１回
投与で効力が認められるが、ワクチンの力価が弱
い場合には数回繰返して接種してもよい。投与量
は力価により変動するが、蛋白量約300〜500mg／
dlのワクチンで１回約0.01〜１mlを投与するとよ
い。 次に、本発明のワクチンを用いて行なつたロイ
コチトゾーン症予防試験の試験結果を示す。 (1) 試験方法 24日令の鶏（日生研ラインＳ）を３群にわけ各
群を４〜５羽ずつとする。１群に実施例で得たワ
クチン0.1mlを大腿部の筋肉内へ接種する。 38日令時にロイコチトゾーン・カウレリイ越谷
株のスポロゾイト200個を静脈内接種する。 52日令時に抗原価、60日令時に抗体価の測定を
行い、52日令時から60日令時の間パラシテミア
（血中での原虫存否）観察する。 なお、抗原価および抗体価の算出方法は次のと
おりである。沈降ラインの出現は４日間観察す
る。抗原価＝SPF鶏にスポロゾイトを接種後３〜
４週目に全採血して得た血清を抗血清として用い
る。試験鶏の52日令時に採血し、抗血清との寒天
ゲル内沈降反応により沈降ラインの認められる希
釈倍数を決定し、１群の幾何平均値を求めて抗原
価とする。 抗体価＝SPF鶏の静脈にスポロゾイトを投与し
て抗原価が最高となる13〜14日目に全採血して血
清を溶性抗原として用いる。試験鶏の60日令時に
採血し、溶性抗原との寒天ゲル内沈降反応より沈
降ラインの認められる希釈倍数を決定し、１群の
幾何平均値を求めて抗体価とする。 (2) 試験結果 試験成績は表１に示す。 上記の実験結果に認められるように、本発明の
ワクチンはロイコチトゾーン症を予防する有用な
ワクチンである。 以下に本発明にかかるワクチンの製造例を示す
が、本実施例は何ら本発明を制限するものではな
い。

【表】 非定型的＝血中に原虫が遅くれてで
てきたり、数が少なかつたりする。
b. −＝検出せず
実施例 13日令のSPF鶏受精卵の漿尿膜上にロイコチト
ゾーン・カウレリイ（Leucocytozoon
caulleryi）越谷株のスポロゾイト（sporozoite）
約50個（0.05ml）を接種し、接種後37℃に保ち13
〜16日目の卵黄嚢基部（臍）に形成されたシゾン
ト（schizont）集塊を採取する。リン酸緩衝液
（PH7.4）で洗浄後、同緩衝液に分散し氷温下５分
間ガラスホモゲナイザーで破砕する。0.025％の
ホルマリンを加え４℃で１週間放置し不活化ワク
チンを得る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ SPF鶏受精卵の漿尿膜上にロイコチトゾー
   ン・カウレリイのスポロゾイトを接種し、形成さ
   れたシゾントを採取して破砕し、ついで不活性化
   した抗原性成分を含有する鶏の抗ロイコチトゾー
   ン症不活化ワクチン。 ２ SPF鶏受精卵の漿尿膜上にロイコチトゾー
   ン・カウレリイのスポロゾイトを接種し、形成さ
   れたシゾントを採取して破砕し、ついで不活性化
   した抗原性成分を含有する抗ロイコチトゾーン症
   不活化ワクチンを用いて鶏を免疫する方法。 ３ 特許請求の範囲２において、レバミゾールを
   併用する方法。