JPS643875B2 - - Google Patents
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- JPS643875B2 JPS643875B2 JP60030143A JP3014385A JPS643875B2 JP S643875 B2 JPS643875 B2 JP S643875B2 JP 60030143 A JP60030143 A JP 60030143A JP 3014385 A JP3014385 A JP 3014385A JP S643875 B2 JPS643875 B2 JP S643875B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は日本の岡山県で採取された土壌サンプ
ルから単離され、コード番号N497―34を指定さ
れた、ストレプトマイセス属（Streptomy―ces）
の新しい菌株の発酵から単離され、CP―63517と
命名された新規な抗生物質に関する。本発明の新
規な抗生物質は構造的に酸性多環式エーテル（イ
オノフオア）抗生物質の新しい種類である。この
科の抗生物質には、ジアネマイシン
（dianemycin）〔J.Antibiotics，22巻、161頁
（1969年）、及び同誌、33巻、137頁（1980年）〕；
モネンシン（monen―sin）〔J. Amer．Chem．
Soc．，89巻、5737頁（1967年）〕；サリノマイシ
ン（salinomycin）〔Ｊ，Antibiotics，27、814頁
（1974年）〕；米国特許第4391649号に開示された抗
生物質TM―531及び米国特許第4361649号に開示
された抗生物質No.53.607がある。 本発明は、次の構造式： を有する、CP―63517と命名された新規な酸性多
環状エーテル抗生物質、及びその薬剤学的に受容
できる陽イオン塩を提供するものである、これら
の物質は種々な微生物に対して活性であり、コク
シジウム症、腸炎、ブタ赤痢及びタイレリア症の
治療に効果的であるばかりでなく、ブタ及び反芻
動物の成長促進ならびにブタ及び反芻動物の飼料
利用効率の増強に有効である。 CP―63517は日本の岡山県で採取された土壌サ
ンプルから単離されている。前記菌株はＮ―497
―34と命名されており、ストレプトマイセス・エ
ンデユス（Streptomyces endus）、アウレウス
亜種（subsp.aureus）の新しい菌株として確認さ
れている。この菌株はブタペスト条約下に寄託番
号No.39574としてATCC（American Type
Culture Col―lection）に現在寄託中である。 本発明では、式(1)の抗生物質及びその薬剤学的
に受容できる塩によつてブタ及びウシの飼料利用
効率を高める方法；前記抗生物質またはその塩を
混合した、ウシまたはブタ用の改良された栄養あ
る飼料組成物；ストレプトマイセス・エンデユ
ス、アウレウス亜種（Streptomyces endus
subsp.aureus）の前記の新しい菌株を水性培地で
培養することによる抗生物質CP―63517またはそ
の薬剤学的に受容できる塩の製造方法も提供す
る。 本発明の抗生物質は、日本の岡山県で採取した
土壌サンプルから単離され、N497―34と命名さ
れた菌株の発酵によつて製造される。培養N497
―34は米国、コネチカツト州、グロトンのフアイ
ザ―インコーポレーテツド中央研究所のLiang
H.Huang博士によつて、下記に述べるように、
特性を決定され、同定されている。 培養N497―34は、細い形状の菌糸、気生菌糸
体の産生及びこの気生菌糸体上に鎖状に形成され
る胞子のために、ストレプトマイイセス属と認め
られている。 培養N497―34を斜面培養からATCCNo.192ブイ
ヨンに接種し、振盪器上で28℃において４日間増
殖させた。次に、これを遠心分離し、無菌蒸留水
で３回洗浄し、アクチノマイセタール属
（Actinomycetales）の菌の同定に一般に用いら
れている培地上に接種した。 この培養地を28℃においてインキユユベート
し、結果を種々な時間に読取つたが、最も一般的
には14日間後に結果を読取つた。着色は一般の学
術用語によつて説明したが、Color Harmony
Manual第４版からの色チツプとの比較によつ
て、正確な色を決定した。全細胞のアミノ酸及び
糖分析方法は、Becker等のAppl．Microbiol．
12巻、421〜423頁（1964年）及びLecheualierの
Ｊ．Lab．Clin．Med．，71巻、934〜944頁
（1968年）に述べられている方法である。比較の
ために、ストレプトマイセス・エンデユス、アウ
レウス亜種、NRRL12174をイリノイス州、ペオ
リアのNorthern Regional Research Center
（NRRC）、U.S.D.Aから入手した。 培養物の性質を決定するために用いた同定培地
及びその組成に関する参照は次の通りである： １ トリプトン―酵母エキス肉汁―（ISP＃１培
地、Difco）。 ２ 酵母エキス―麦芽エキス寒天―（ISP＃２培
地、Difco）。 ３ オートミール寒天―（ISP＃３培地、
Difco）。 ４ 無機塩―殿粉寒天―（ISP＃４培地、
Difco）。 ５ グリセロール―アスパラギン寒天―（ISP
＃５培地、Difco）。 ６ ペプトン―酵母エキス鉄寒天―（ISP
＃6Difco）。 ７ ツアペツク―スクロース寒天―S.A.
Waksman，（ACtinomycetes）放線菌類、２
巻、培地No.１、328頁、1961年。 ８ グルコース―アスパラギン寒天―同誌、培地
No.２、328頁。 ９ ベネツト寒天―同誌、培地No.30、331頁。 10 エマーソン寒天―同誌、培地No.28、331頁。 11 栄養寒天―同誌、培地No.14、330頁。 12 ゴードンとスミスのチロシン寒天―R.E.
GordonとM.M.Smith，J. Bact．，69巻147〜
150頁（1955年） 13 カゼイン寒天―同誌。 14 マレイン酸カルシウム寒天―S.A.Waksman
Bact・Rev．，21巻、１〜29頁（1957年） 15 ゼラチン―R.E.GordonとJ.M.Mihm，J.
Bact．，73巻、15〜27頁（1957年） 16 殿粉―同誌。 17 有機デキストロース肉汁―S.A.Waksman、
放線菌類、２巻、培地No.１、328頁（1961年）、
但しスクロース30ｇと寒天の代りにデキストロ
ース30ｇを用いた。 19 ジヤガイモ・ニンジン寒天―M.P.
Lechevalier，J. Lab．and Clinical Med．，71
巻、934〜944頁（1968年）、但しジヤガイモ30
ｇ、ニンジン2.5ｇ及び寒天20ｇのみを用いる。 20 ２％水道水寒天。 21 脱脂乳―Difco。 22 セルロース利用― ａ H.L.Jensen、Proc．Linn．Soc．N.S.W.，
55巻、231〜248頁（1930年） ｂ M.LevineとH.W.Schoenlein、培養基集、
培地No.2511、1930年 23 炭水化物―ISP＃９培地、Difco。 24 温度範囲―ISP＃２培地プラス培地１につ
きやしの実の果汁50ml。 培養N467―34は上述の方法によつて測定した
ところ、色ならびに全細胞アミノ酸及び糖分析に
関する次のような特徴を示した。 酵母エキス―麦芽エキス寒天 生育良好、白色、淡黄色〜淡紅色がかつた灰色
（Iea，１1/2ca，近灰色シリーズ3dc，5dc，5fe）、
隆起、しわ多し、表面と同じ気生菌糸体；褐色
（2pg，3ne）に変化；可溶性色素黄褐色（21c，
3nc）。 オートミール寒天 生育中等度〜良好、灰白色、灰色〜淡紅色がか
つた灰色（近灰色シリーズ3fe，5fe，7fe，7ih）、
やや隆起、平滑でビロードよう、表面と同じ気生
菌糸体；淡黄色（2ca）〜灰色（近灰色シリーズ
3dc，3fe）に変化；可溶性色素淡黄色〜黄色（１
１／２ea，１1/2ga）。 無機塩―殿粉寒天 生育中等度〜良好、黄白色〜淡紅色がかつた灰
色（１1/2ca、近灰色シリーズIba，5fe，7fe，
7ih）、隆起、しわ多し、表面と同じ気生菌糸体；
黄色〜淡紅色がかつた灰色（１1/2ga、近灰色シ
リーズ5fe）に変化；可溶性色素黄色（１1/2ga，
１1/2ea）。 グリセロール―アスパラギン寒天 生育低度〜中等度、灰白色（近灰色系列2ba）、
薄く、平滑、または単離したコロニーとしての外
観、気生菌糸体灰白色；無色〜淡黄色（１1/2
ca）に変化；可溶性色素なし。 ツアペツク―スクロース寒天 生育中等度、淡灰白色（近Ｉ1/2ca、近灰色系
列2cb）、薄く、平滑、円または曲線を有し、気
生菌糸体なし；乳白色（１1/2ca）に変化；可溶
性色素乳白色。 グルコース―アスパラギン寒天 生育良好、灰色、淡紅色がかつた灰色（近灰色
系列3fe，5fe）〜黄色（Iea，Iga）、中等度に隆
起、しわが寄つたまたは粒状、表面と同じ気生菌
体；黄灰色〜灰色（2gc，2ge，近灰色系列3fe，
3ih）；可溶性色素黄色（１1/2ia，１1/2la）。 ゴルドンとスミスのチロシン寒天 生育中等度、灰白色（近灰色系列2ba）、中等
度に隆起、しわ多しまたは単離したコロニーとし
ての外観、気生菌糸体灰白色；淡黄色に変化（１
１／２ca，１1/2ea）；可溶性色素淡黄（2ea）。 マレイン酸カルシウム寒天 生育中等度、白色〜灰白色（近灰色系列Iba）、
薄く、平滑または単離したコロニーとして外観；
気生菌糸体希薄、白色〜灰白色；乳白色（１1/2
ca）に変化；可溶性色素乳白色（１1/2ca）。 カゼイン寒天 生育良好、白色〜淡灰色がかつた乳白色（近
2ec，3ec）、中等度に隆起、細かいしわ多し、気
生菌糸体なし；淡紫色（3ec）に変化；可溶性色
素淡紫色（4ec）。 ベネツトの寒天 生育良好、白色、淡黄色〜淡紅色がかつた灰色
（Iea，近灰色系列5fe，7fe，7ih）、隆起、しわ多
し、表面と同じ気生菌糸体；淡柴色がかつた灰色
（4ig，4li，5ig，5li）に変化；可溶性色素黄色
（１1/2na）。 エマーソン寒天 生育良好、白色〜灰白色、隆起、しわ多し、ま
たは単離したコロニーとしての外観、白色〜灰白
色の気生菌糸体存在；黄褐色（2ea，2lc）に変
化；可溶性色素褐色（3lc）。 栄養寒天 生育中等度、白色、しわ多し、隆起、たは単離
したコロニーとしての外観、気生菌糸体白色（１
１／２ca）に変化。可溶性色素なし。 ゼラチン寒天 生育良好、白色〜乳白色（１1/2ca）、中等度
に隆起、しわ多し、気生菌糸体白色；乳白色
（2ca）に変化；可溶性色素なし。 殿粉寒天 生育良好、白色、隆起、しわ多し、気生菌糸体
白色；淡黄色〜黄褐色に変化（2ea，2ic）；可溶
性色素乳白色（2ac）。 ジヤガイモ・ニンジン寒天 生育中等度、灰色〜淡紅色がかつた灰色（近灰
色系列3fe，5fe，7fe，7ih）；ビロードよう、中
央は隆起しているが縁部にかけ薄くなつている、
平滑、表面と同じ気生菌糸体；淡紅色がかつた灰
色（近灰色系列5fe，5h）に変化；可溶性色素白
色（１1/2ca）。 水道水寒天 生育中等度〜良好、色〜淡紅色がかつた灰色
（近灰色系列3e，5fe，5ih）；隆起し、単離したビ
ロドようコロニーとしての外観；気生菌糸体灰色
〜淡紅色がかつた灰色；灰色〜暗灰色（近灰色系
列5ih，3ih，3ml）に変化；可溶性色素なし。 形態学的性質 形態学的性質を14日間インキユベートした後の
オートミル寒天上で観察した：灰色系列の胞子
塊；単軸分枝した担胞子体；胞子鎖は１胞子鎖に
つき３〜７巻きを有し、やや開いた、小直径（３
〜4μm）のらせん状、１胞子鎖につき10〜50個の
胞子を有する；胞子は短いロツド状であるが、時
には球状、卵形または長円形、直線またはややわ
ん曲した形状であり、ややわん曲した胞子の幾ら
かは平行しない端部を有し、五角形の外観を呈
し、1.0〜1.8×0.9〜1.2μmの大きさまたは直径0.9
〜1.2μである；また、走査電子顕微鏡によつて明
らかにされたように、イボを有している。 生化学的性質 メラニン産生せず；硫化水素産生；ゼラチンを
液化し、殿粉を加水分解する；硝酸塩を亜硝酸塩
に還元する；レヴインとシヨーエンレインのセル
ロース肉汁上での生育は良好であるが、ジエンセ
ンのセルロス肉汁上での生育は悪い、これらの両
肉汁上では分解せず；乳上では凝集し、透明化す
る；カゼイン消化陽性；マレイン酸消化陽性；チ
ロシン消化陰性。炭水化物利用：グルコース、ア
ラビノース、フラクトース、イノシトール、マニ
トール、ラフイノース、ラムノース、スクロール
及びキシロースの全てを利用する。 温度との関係 21℃，28℃，37℃，45℃ 増殖良好 増殖非常に良好 増殖良好 増殖中
等度 培養N497―34の細胞壁分析では、全細胞分解
物がLL―ジアミノピメリン酸を含むが特異的な
酸を含まないことがわかつた。培養物N497―34
は全体的に灰色の胞子、陰性のメラニン反応、ラ
セン状の胞子鎖及び表面にイボのある胞子を特徴
とする。これらの特徴と全細胞分析の結果から、
この培養はストレプトマイセス属に入れられる。
分献に報告されている、公知のストレプトマイセ
ス属と比較した場合に、この培養物は1982年１月
11日に発行された日本公開報第57―4975号に述べ
られているストレプトマイセス・エンデユス
Anderson ＆ Gottliebアウレウス亜種
Tomita，Nakano，Sato，Shirahata，Yoshida
＆ Morimoto NRRL 12174に密接に類似し
ている。後者の培養はNRRLから入手して、
N497―34と並べて比較した。N497―34は
NRRL12174とは異なつて、45℃で増殖し、牛乳
を凝固させるという事実を別として、両培養物は
同じ生化学的及び生理学的性質を有している。
ISP＃２培地、ISP＃４培地及びベネツトの寒天
上では、培養N497―34は強く淡紅色がかつた灰
色の気性菌糸体を生じ、黄色浸出液は生じない；
ISP＃５培地及び栄養寒天上でこの培養のコロニ
ーは小さく、ツアペツク―スクロース寒天上のコ
ロニーは黄白色ラインまたは円を示す、グルコー
ス―アスパラギン上のコロニーは白色〜乳白色と
いうよりむしろ淡紅色がかつた灰色であり、可溶
性色素を有さないのではなく黄色色素を生ずる。
これらの培養物の変動は小さく、ストレプトマイ
セス属の種々の菌株で生ずると考えられるもので
ある。従つて、培養物N497―34はストレプトマ
イセス・エンデユスAndersonとGottliebアウレ
ウス亜種Tomita，Nakano，Sato，Shirahata，
YoshidaとMorimoto。この培養物はブタペスト
条約の規定に従つて、アメリカン・タイプ・カル
チヤー・コレクシヨン（American Type
Culture Collection）（米国メリーランド州
20852、ロツクヴイル、パークローン・ドライブ
12301）に受入を番号ATCC―39574で寄託されて
いる。アメリカン・タイプ・カルチヤー・コレク
シヨンに寄託された培養物N497―34の永続性は
この出願に付与された特許の有効期間を通して保
証されている；培養物N497―37はこの出願の訴
訟係属中、特許庁長官によつて3537CFR1.14に従
つて資格があると認められた人に対して入手可能
である；この出願に特許が付与された場合には、
寄託された培養の利用可能性に関するあらゆる制
限が絶対的に排除される。 本発明の新規な抗生物質は、ストレプトマイセ
ス・エンデユス、アウレウス亜属の新しい菌株
ATCC―39574を発酵させ、中性PHの全肉汁をメ
チルイソブチルケトンで抽出し、溶媒を粘稠な抽
出物にまで濃縮することによつて得られる。この
油状物をヘプタンに懸濁させ、バツチをシリカゲ
ルで処理し、このシリカゲル・ケーキをクロロホ
ルム、クロロホルム／酢酸エチル、酢酸エチル及
び酢酸エチル／アセトンで溶出した。濃縮後に、
酢酸エチル分画から少量の粗生成物が得られ、こ
れから抗生物質CP―63517がナトリウム／カリウ
ム混合塩として晶出した。 ストレプトマイセス・エンデユス、アウレウス
亜種ATCC―39574は、例えば糖、殿粉、グリセ
ロールのような炭水化物源：例えばあらびき大豆
粉、カザアミノ酸、酵母キスのような有機窒素物
質質；例えば穀類溶解物、魚粉、綿実粕のような
増殖物質；鉄、コバルト、銅、亜鉛のような痕跡
元素及び炭酸カルシウムまたは緩衝剤としてのリ
ン酸塩を含有する無機塩から成る培地上の液内条
件下で攪拌及び通気しながら、24〜36℃の温度に
おいて増殖することができる。抗生物質は全肉汁
を4.0から8.0までのPHにおいて例えばｎ―ブタノ
ール、メチルイソブチルケトンまたはクロロホル
ムによつて抽出し、あるいは増殖が完了した後に
分離した菌糸体を抽出し、液を棄てることによ
つて回収することができる。抽出液を濃縮して希
いシロツプを得、これを例えばヘプタンに溶解
し、シリカゲル上でクロマトグラフイを行い、純
粋物質を得る。 ATCC―39574培養物を接種した斜面培養たは
ルーびんから増殖中の細胞をかき取ることによつ
て、接種物を調製する。斜面培養またはルーびん
での初期増殖に適した固形培地はATCC培地No.
172である。 ATCC培地No.172 成 分 ｇ／ グルコース 10 可溶性殿粉 20 酵母エキス ５ NZアミンA* １ 炭酸カリシウム １ 1000mlまで蒸留水を加え、KOHでPH7.0にす
る。寒天を加える 20 ＊ カゼインの酵素消化物の登録商標、Humko
Sheffield Chemical Co.，Inc. 斜面培養からの増殖中細胞を用いて、振盪フラ
スコまたは接種タンクのいずれかに接種する；あ
るいはこの代りに、接種タンクに振盪フラスコか
ら接種する。振盪フラスコでの増殖は１般に96〜
120時間後にその最大に達するが、接種タンクで
の増殖は通常、72〜96時間に最も好ましい状態に
なる。この接種フラスコまたはタンクから完全な
無菌条件下で、増殖肉汁を発酵器に接種し、48〜
120時間発酵させる。振盪器上またはタンク内に
１分間につき肉汁１容量あたり空気1/2〜２容量
の速度で分配器を通して無菌空気を送風して攪拌
することによつて、振盪フラスコ中の換気を維持
する。攪拌速度は使用する攪拌機の種類に依存す
る；振盪フラスコは通常、150〜200サイクル／分
（CPM）で運転し、発酵器は通常、300〜1700回
転／分（RPM）で運転する。常に無菌を維持し
なければならない。温度は28〜36℃の間に維持す
る。発酵中の発泡は例えば、精製された大豆油ま
たは他の適当な発泡防止剤のような無菌の消泡剤
を組成に加える、または接種後必要に応じて無菌
条件で発酵器に加えることによつて制御すること
ができる。 振盪フラスコは次の培地のひとつを用いて用意
する： CL13MZ 成 分 ｇ／ グルコース 20 大豆粉 10 NHアミンYTT* ５ 硫酸ナトリウム 0.5 塩化コバルト 0.002 炭酸カルシウム ２ １になるまで水補充、PH6.9〜7.0 JDY TT 成 分 ｇ／ セルロース 10 コーンスターチ ５ コーン浸せき液 ５ NTアミンYTT* ５ 塩化コバルト 0.002 炭酸カルシウム ３ １になるまで水補充、PH6.9〜7.0 ＊ ハンコ・シエフイールド社（Humko Sheffi
―eld Co.，Inc.）のカゼイン酵素消化物の
登録商標 培地100mlを300ml―振盪フラスコに分配し、
120℃、15p.s.i（1.07Kg／cm2）において30分間殺菌
した。冷却後、この培地に寒天中ATCC172培地
で増殖させたストレプトマイセス・エンデユス、
アウレウス亜種の斜面培養物ATCC―39574から
の増殖細胞懸濁液を接種する。このフラスコは
1.5〜2.5インチ（3.8〜5.1cm）の変位幅を有し、
150〜200CPMで振盪する回転振盪器上で28℃に
おいて、３〜４日間振盪させる。フラスコのひと
つを用いて、次の培地：CN―２（下記）、または
CL13MZもしくはJDY TT（上記）のいずれか１
種類を３を含む５―発酵器に接種した。 CN―２ 成 分 ｇ／ セレロース 10 コーンスターチ 10 大豆粉 10 NZアミンYTT* 10 塩化コバルト 0.002 炭酸カルシウム １ ＊ ハンコ・シエフイールド社のカゼインの酵素
消化物の登録商標 消胞剤１mlを加え、次に容器を密封して、120
℃、15p.s.i（1.07Kg／cm2）において45分間殺菌し
た。これらの容器に接種物フラスコ（約３％接種
物）を接種し、30℃において96〜144時間発酵さ
せ、１分間に液体１量に対して空気１量の速度で
空気を供給しながら、1700RPMにおいて攪拌し
た。 発酵が終了したときに（枯草菌（Baeillus
subtilis）ATCC6633に対する抗生物質デイス
ク・アツセイに基づく）、発酵器を停止させ、中
性PHにおいてフイルター補助装置、例えばセライ
トを用いて過した。フイルタケーキをメタノー
ル中でスラリー状にし、真空濃縮し、２〜３倍量
の水で希釈し、次に例えばメチルイソブチルケト
ンまたはｎ―ブタノールのような、水と混合しな
い媒溶1/3〜1/2倍量によつて２回抽出する。アス
ピレーシヨンまたは遠心分離によつて溶媒層を水
層から分離し、過し、液を真空濃縮して粘稠
な油状物を得た。 肉汁及び回収流の生物活性は枯草菌ATCC6633
または黄色ブドウ球菌（Staphylococcus・
aureus）ATCC6538の感受性菌株を用いて次の
ように調べることができる。肉汁及び回収流の成
分は純粋な酢酸エチル中のシリカゲル・プレート
≠を用いた薄層クロマトグラフイ（tlc）によつ
て肉眼で見えるようになる。展開したプレートに
バニリン試薬（エタノール75mlと85％リン酸25ml
の中にバニリン３ｇを溶解したもの）をスプレー
し、80℃に加熱すると、抗生物質CP―63517がグ
リーンのスポツトとして現われる。この展開した
プレートtlcプレートに、黄色ブドウ球菌または
枯草菌のいずれかをしたした寒天を積層させ、こ
の寒天にテトラゾリウム染料*を加え、37℃で16
時間インキユベートして、抗生物質を目でみえる
ようにすることもできる（淡紅色の下地に対して
白色）。 ≠ シリカゲルＧ（70―230M）E.Merck ＊ 塩化２，３，５トリフエニル―2Hテトラゾ
リウム・１水和物98％、アルドリツチ・ケミ
カル社（Aldrich Chqmical Co.，Inc.）の
Ｔ―8485―９ 大型発酵器で大規模に行う場合には、CL13MZ
またはJDY―TT培地７を含有する振盪フラス
コを用意する。振盪フラスコ接種物を28℃におい
て３〜５日間発酵させ、JDY TT培地25または
1200ガロン（96または4600）を含有する50また
は1700ガロン（190または6540）発酵器に接種
するのに用いる。約１の接種物をタンクへ接種
に用いた。この発酵器を５〜７日間発酵させた後
に回収して、それぞれ約25または1100ガロン（96
または4230）を得た。全肉汁を中性PHにおいて
１／５倍量のメチルイソブチルケトンによつて抽出
し、アルフア・ド・ラバル（Alpha DeLaval）
分離器またはポツドビールニアク
（Podbielniak）抽出器で分離し、溶媒を真空濃
縮して、油状物を得た。この油状物をさらに濃縮
してシロツプを得、このシロツプをヘプタン中に
懸濁させ、シリカゲルと共に攪拌し、シリカゲル
床を通して過し、シリカゲルを洗浄し、ヘプタ
ンで再度洗浄した。抗生物質をクロロホルム、ク
ロロホルム／酢酸エチル、酢酸エチルで段階的に
溶出し、最後に50％アセトン―酢酸エチル溶液で
溶出した。この溶出に続いて、分画の薄層クロマ
トグラフイ及びバイオアツセイを行つた。活性分
画を合わせ、濃縮し、再度クロマトグラフイを行
つて抗生物質CP―63517を単離した。活性溶出液
を粒状炭素カラムに通して妨害物質を除き、結晶
性CP―63517が回収されるように回収率を改良し
た。 式(1)の本発明の抗生物質は酸性であり、塩基性
剤の反応によつて陽イオン塩を形成する。このよ
うな塩は全て本発明の範囲に含まれる。これらの
塩はポリエーテル（イオノフオア）抗生物質を得
るための通常の方法によつて製造することができ
る。ひとつの方法では、水と混合しない揮発性の
有機溶媒に溶かした式(1)の化合物の溶液を、少な
くとも化学量論量、望ましくは過剰量の適当な塩
基性剤を含む水溶液によつて洗浄する。この有機
溶媒液を乾燥させた後に、真空蒸発させて、目的
の陽イオン塩を得る。このために使用可能な典型
的塩基性剤には、例えば水酸化ナトリウム及び水
酸化カリウムのような水酸化アルカリ金属、水酸
化カルシウム及び水酸化バリウムのような水酸化
アルカリ土金属、及び水酸化アンモニウムがあ
る。 抗生物質CP―63517は多くのグラム陽性微生物
の増殖に対して抑制作用を示す。下記の表１に
は、インドトロのMICテストの結果を要約する。
このテストのために、CP―63517の試験管系剤に
各微生物を接種し、微生物の増殖を24時間にわた
つて阻止する抗生物質の最小濃度（mcｇ／ml）
（MIC）を決定する。 ブタ赤痢は合衆国で診断される最も一般的なブ
タの疾患である。さらに、この疾患は他の多くの
国で流行しており、世界中のブタ養殖者に対して
ブタの仕入れにおいて年間数千ドルの損失を与え
ている。大形スピヘータがこの疾患の病原菌であ
ることが最近発見されている。この病原菌トレポ
ネーマ・ヒヨジセンテリエ（Treponema・
hyodysenteriae）は現在単離され、この疾患を誘
発し得ることが示されている〔Harris，D.L.
等：「ブタ赤痢―Ｉ、トレポネーマ・ヒヨジセン
テリエ（新しい属）のブタへの接種及び赤痢の再
現」Vet・Med／SAC、67巻：61〜64頁：1972
年〕。以下に挙げるテスト・データは、この細菌
を用いて行つたテストに関するものである。トレ
ポネーマ・ヒヨジセンテリがブタ赤痢の唯一の病
原菌であるかどうかが知られていないことは注目
しなければならない。しかし、入手可能なデータ
から、この細菌がこの病染症の主要な病原菌であ
ると結論することができる。 【表】 【表】 テリエ
94A002 6.25
周知の原主動物疾患であるコクシジウムは症は
依然として重大な疾患であり、これら治療は獣医
学、特に食用飼鳥類産業にとつて経済的に重要で
ある。コクシジウム症は一種またはそれ以上のア
イメリア属（Eimeria）または球虫属
（Isospora）による感染症から生ずる（この概要
に関しては、LundとFarr「食用飼鳥類の疾患」第
５版、BiesterとSchwarts編集、アイオワ州立大
学出版局、アイオワ州Ames.（1965年）1056〜
1096頁参照）。かかりやすいニワトリに容易に識
別できる病的状態をもたらす球虫目が６種類あ
る。エイメリア・テネラ（Eimeria tene―lla）、
エイメリア・ネカトリツクス（Eimeria
necatrix）、エイメリア・ブルネツテイ（E.
brunetti）、エイメリア・アセルブリナ（E.
acervulina）、エイメリア・マキシマ（E.
maxima）及びエイメリア・ミヴアテイ（E.
mivati）は消化管の表皮細胞の破壊を通して直
接的に、または毒素の産生を通して間接的に損傷
を生ずる。同じ属に属する他の３種類の原生動物
はかなり無害であると考えられるが、エイメリ
ア・ミテイス（E.mitis）、エイメリア・ハガニ
（E.hagani）及びエイメリア・プレコツクス（E.
praecox）は体重増加を低下させ、飼料利用効率
を減じ、産卵に不利な影響を与え得る。 抗生物質CP―63517とその陽イオン塩は食用飼
鳥類のコクシジア感染症に対してすぐれた活性を
示す。これらの化合物を５〜40ppmのレベルでニ
ワトリの飼料に混入すると、エイメリア・テネラ
及びエイメリア・アセブリナによる感染症の治療
に効果的である。 鶏におけるコクシジウム感染症に対する抗性物
質CP―63517とその塩に関する効力データは次の
ようにして得たものである。生後30〜50日のSPF
白色レグホンの雄鶏のグループに、抗生物質CP
―63517、そのナトリウム及び／またはカリウム
塩、あるいは公知の薬剤のモネンシンまたはステ
ノロールを均一に分散したりすり混餌を24時間与
えた後に、被検エイメリア属の特定の種類の接合
子のうを各鶏に経口接種した。他のグループの生
後30〜50日の鶏に被検化合物を含まない同じすり
餌を与えた。これらの鶏にも24時間後に感染さ
せ、感染対照として用いた。さらにもう１つのグ
ループの主後30〜50日の鶏には被検化合物を含ま
ないすり餌を与え、コクシジウム症に感染させ
ず、正常対照として用いた。この処理の結果をエ
イメリア・アセルブリナの場合には５日後に、そ
の他の菌の場合には６日後に評価した。得られた
結果を表に要約する。 【表】 表１のデータによつて示したように、本発明の
新規な抗性物質は例えば黄色ブドウ球菌、表皮ブ
ドウ球菌及び化膿連鎖球菌のような、種々なグラ
ム陽性菌に対して抗菌活性を有する。このことは
式(1)の化合物とその塩を、例えば手の洗浄ならび
に病院の表面及び装備の消毒のような、衛生目的
に対して有効なものにしている。 さらに、式(1)の抗生化合物はブタ赤痢の病原菌
であるトレポネーマ・ヒヨジセンテリエ（Trep
―onema hyodysenteriae）に対する活性を有し
ている。従つて、式(1)の本発明の抗生物質はブタ
赤痢の治療に有効である。このために、式(1)の化
合物はブタに対して単独でまたは好ましくは、式
(1)の化合物を薬剤的に受容できる担体または希釈
剤と混合した薬剤組成物として投与することがで
きる。 前記薬剤組成物は動物用抗生物質に対する標準
方法に従つて製造される。例えば、グルコース、
ラクトース、スクロース、殿粉またはセルロース
のような、不活性な希釈剤で適当に希釈した式(1)
の化合物をゼラチン・カプセルに充填することに
よつて、カプセル剤を製造することができる。錠
剤は通常の方法によつて、例えば式(1)の化合物、
ラクトースまたは殿粉のような希釈剤、ゼラチン
またはグアーゴム、及びステアリン酸マグネシウ
ムまたはパラフインろうのような滑剤の混合物を
圧縮することによつて製造することができる。式
(1)の化合物はエリキシル剤、シロツプ、液剤及び
懸濁剤として経口投与することもできる。薬剤及
び懸濁剤は水性、非水性または一部水性であり得
る。非経口投与用には、無菌の水剤が望ましい。
非経口投与には筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内
投与がある。静脈内投与用には、溶質の全濃度を
制御して、製剤を等張性にしなければならない。
薬剤学的に受容できるキヤリヤに対する式(1)の化
合物の割合は、特定の用量及び投与径路に依存す
る；しかし、この割合は通常１：10から２：１ま
で、特に1.5から１：１までの範囲である。 ブタ赤痢の治療に式(1)の化合物を用いる場合に
は、動物の混餌としてこの化合物を投与するのが
便利である。この場合には、式(1)の化合物の適当
な一日量を与えるようなレベルで動物の飼料に式
(1)の化合物を添加する。 ブタ赤痢を治療するために投与する式(1)の化合
物の用量は究極的に、処方する獣医によつて決定
されるが、この用量は投与経路及び動物の症状の
重症度によつて異なる。しかし、化合物(1)は１日
に体重１Kgにつき20〜50mgの範囲の用量、特に１
日に体重１Kgにつき10〜30mgの範囲の用量で通常
は分割量として経口投与される。或る場合には、
これらの範囲外の用量を用いることも必要にな
る。 またさらに、本発明の式(1)の抗性物質及びその
薬剤学的に受容できる塩基性塩はブタ及び反芻動
物の飼料利用効率を高める、すなわち、これらは
成長促進剤として作用する。反芻動物飼料の主要
な栄養部分（炭水化物）の利用機構は良く知られ
ている。反芻動物のこぶ胃内の微生物は炭水化物
を分解して、単糖類を生成し、次にこれらの単糖
類をピルビン酸塩化合物に転化する。ピルビン酸
塩は微生物学的に代謝されて、酢酸塩、酪酸塩ま
たはプロピオン酸塩を生成する。これらは集合的
に揮発性脂肪酸（VFA）として知られている。
さらに詳細に考察するためには、Leng著「反芻
動物の消化と代謝の生理学」Phillipson等編集、
Oriel Press、イギリス、ニユーキヤツスル、
1970年、408〜410頁を参照のこと。VFAの相対
利用効率は、McCuLLoughの「飼料」1971年６
月19日写、19頁；Eskeland等のJ.An，Sci.，33
巻、282頁（1971年）；及びChurch等の「反芻動
物の消化生理学と栄養」２巻、1971年、622と625
頁において考察されている。酢酸塩とピルビン酸
塩も利用されるが、プロピオン酸塩はより大きな
効率で利用される。そのため、炭水化物からプロ
ピオン酸塩を高い割合で生成させるように動物を
刺激して、炭水化物の利用効率を高めるような化
合物が有利である。 動物飼料の価値は一般に、動物に与えることに
よつて直接評価されている。英国特許第1197826
号は、微生物によつて飼料に起る変化を動物飼料
の評価によつて容易に、非常に正確に測定する、
in vitroこぶ胃方法を詳細に述べている。この方
法は、動物の消化過程をin vitroで行わせて研究
する装置を使用している。動物飼料、こぶ胃接種
物及び種々な成長促進剤を、細心に調節した条件
下で実験ユニツトに入れて、取り出し、微生物に
よる飼料の消費中に生ずる変化を精密にかつ漸進
的に研究した。こぶ胃液中のプロピオン酸含量の
増加は、飼料組成中の成長促進剤によつて反芻動
物の総合性能に望ましい反応がもたらされたこと
を示している。プロピオン酸含量の変化を対照こ
ぶ胃液に検出されたプロピオン酸含量の％として
表現する。長期間のインビボでの飼育研究を用い
て、ここぶ胃液中のプロピオン酸増加と動物性能
の改善との間に信頼できる相関関係があることを
示す。 こぶ胃液を、市販の肥育飼料プラス枯草で飼育
したフイステル形成子牛から採取した。このこぶ
胃液を直ちに、チーズし布を通して過し、こ
の中の10mlを50ml―円すいフラスコに加えた。こ
のフラスコは予め、標準基質（コーンスターチ68
％＋セルロース17％＋あらびき大豆粉15％）、PH
6.8緩衝液10ml及び被検化物を含むものであつた。
このフラスコに酸素を含まない窒素を約２分間通
し、振盪水浴中で39℃において約16時間インキユ
ベートした。全てのテストは３通り行つた。 インキユベーシヨン後に、サンプル５mlに25％
メタリン酸１mlを混合する。10分後に、ギ酸0.25
mlを加え、混合物を1500RPMで10分間遠心分離
した。次に、D.W.Kellog，J.Dairy Science 52
巻、1690頁（1969年）の方法による気液クロマト
グラフイーによつて、サンプルを分析する。酢
酸、プロピオン酸及び酪酸のピーク高さを未処理
及び処理インキユベエーシヨン・フラスコからの
サンプルについて測定する。 このインビトロでの方法でテストした場合に、
１mlにつき20及び10の微生物レベルにおける抗性
物質CP―63517は、抗生物質CP―63517を添加し
ない対照溶液中のプロピオン酸に比べて、それぞ
れ96％及び95％のプロピオン酸生成増加をもたら
した。これに比べて、市販のモネンシン（他の多
環状エーテル抗生物質）は10μｇ／mlにおいて、
対照よりもプロピオン酸の約20％増加をもたらし
た〔J.Amer・Chem・Soc．，89巻、5737頁
（1967）〕 サリノリマイシンと比べた場合には〔J.
Antibiotics.27巻、814頁（1974年）〕、抗生物質
CP―63517は20μｇ／mlレベルにおいて約86％の
プロピオン酸増加をもたらし、5μｇ／mlレベル
の約66％増加が10μｇ／mlレベルのサリノマイシ
ンによる約65％増加に匹敵するものであつた。 このデータに基づくと、抗生物質CP―63517か
牛及び羊のような皮芻動物によるならびにブタ及
び家兎のような単胃動物による飼料利用率を改善
すると推量することができる。抗生物質CP―
63517は遊離酸、ナトリウム塩、カリウム塩また
はそれらの混合物として飼料組成物に混入するこ
とができる。抗生物質CP―63517の非精製形また
はこの抗生物質を含む乾燥した発酵肉汁を、望ま
しい効力濃度で、飼料組成物中に混合することが
できる。 さらに説明するためにのみ、次の実施例を記載
する。 実施例 発酵肉汁から抗生物質CP―63517の単離 培養ATCC―39574の10ポツト発酵の全肉汁
（全量約25）を1/2量のメチルイソプチルケトン
によつて抽出した。抽出液を真空濃縮した褐色油
状物（20ｇ）を得た。この物質をクロマトグラフ
イ級シリカゲルを充填した５×100cmカラムで、
酢酸エチル溶液としてクロマトグラフイ分析し
た。このカラムを10ml／分の流量の酢酸エチルに
よつて展開させた。各10ml分画を回収した。これ
らの分画をシリカゲルプレート上での薄層クロマ
トグラフイによつて検定し、酢酸エチルによつて
展開させた。このプレートにエタノール―85％リ
ン酸（３：１）中の３％バニリン溶液をスプレー
し、80℃に加熱した。目的物の抗生物質CP―
63517がこれらの条件下で緑色スポツトとして現
われた。CP―63517を含む分画を合わせ（総量約
300ml）、DarcoG60の炭素２ｇを加えて15分間攪
拌した。混合物を過し、液に５％リン酸ナト
リウム２塩基性緩衝液300mlを加えて攪拌し、PH
を1N NaOHによつて10.0に調節した。相を分離
し、酢酸エチルを無水硫酸ナトリウム上で乾燥さ
せ、過し、真空蒸発させた。蒸発後に残留する
黄色の粘稠な油状物を少量のアセトンに溶解し、
次に晶出させた。結晶を過によつて集め、真空
乾燥させて、ナトリウム塩としてのCP―63517
800mgを得た；融点215〜220℃、UVλ（最大）
232nm、Ｅ１％ １cm＝155。 赤外線スペクトル（KBr）cm-1：3436，2964，
2928，2871，2728，1666，1563，1462，
1404，1372，1319，1293，1271，1234，
1205，1167，1100，1050，1033，995，
980，967，940，926，902，858，538。 旋光度：〔α〕D＋25゜（ｃ＝0.5、メタノール）。 元素分析： C47H77O14Naとしての計算値： C63.49；H8.89；N0.0 実験値：C62.45；H8.61；N0.0 ＊ ICI America Inc.，ウイルミントン、デラ
ウエア19899。 CP―63517の遊離酸形はCP―63.517のクロロホ
ルム溶液に等量の水を加えて攪拌し、リン酸を加
えてPHを3.0に低下させることによつて製造した。
次に、相を分離し、クロロホルムを真空蒸発させ
て、CP―63517の遊離酸を無定形固体（融点、95
〜105℃）として得た。 UV λ（最大）232nm、Ｅ１％ １cm＝161。 赤外線スペクトル（KBr）cm-1；3747，2968，
2932，2877，1715，1670，1460，1380，
1315，1265，1233，1202，1165，1113，
1099，1066，1046，1021，987，950，923，
900。 旋光度：〔α〕D＝＋47.4゜（ｃ＝0.5、メタノー
ル）。 元素分析 C47H78O14としての計算値： C65.10；H9.07；O25.83 実験値：C64.05；H8.93；O27.03 （差によつて） CP―63517の構造(1)をPfizer Inc.，中央研究所
（米国コネチカツト州、グロトン）のEarl B.
Whipple博士とR.S.Wareによつて実施された1H
―NMRと高分解能質量スペクトルによる研究に
よつて決定した。
ルから単離され、コード番号N497―34を指定さ
れた、ストレプトマイセス属（Streptomy―ces）
の新しい菌株の発酵から単離され、CP―63517と
命名された新規な抗生物質に関する。本発明の新
規な抗生物質は構造的に酸性多環式エーテル（イ
オノフオア）抗生物質の新しい種類である。この
科の抗生物質には、ジアネマイシン
（dianemycin）〔J.Antibiotics，22巻、161頁
（1969年）、及び同誌、33巻、137頁（1980年）〕；
モネンシン（monen―sin）〔J. Amer．Chem．
Soc．，89巻、5737頁（1967年）〕；サリノマイシ
ン（salinomycin）〔Ｊ，Antibiotics，27、814頁
（1974年）〕；米国特許第4391649号に開示された抗
生物質TM―531及び米国特許第4361649号に開示
された抗生物質No.53.607がある。 本発明は、次の構造式： を有する、CP―63517と命名された新規な酸性多
環状エーテル抗生物質、及びその薬剤学的に受容
できる陽イオン塩を提供するものである、これら
の物質は種々な微生物に対して活性であり、コク
シジウム症、腸炎、ブタ赤痢及びタイレリア症の
治療に効果的であるばかりでなく、ブタ及び反芻
動物の成長促進ならびにブタ及び反芻動物の飼料
利用効率の増強に有効である。 CP―63517は日本の岡山県で採取された土壌サ
ンプルから単離されている。前記菌株はＮ―497
―34と命名されており、ストレプトマイセス・エ
ンデユス（Streptomyces endus）、アウレウス
亜種（subsp.aureus）の新しい菌株として確認さ
れている。この菌株はブタペスト条約下に寄託番
号No.39574としてATCC（American Type
Culture Col―lection）に現在寄託中である。 本発明では、式(1)の抗生物質及びその薬剤学的
に受容できる塩によつてブタ及びウシの飼料利用
効率を高める方法；前記抗生物質またはその塩を
混合した、ウシまたはブタ用の改良された栄養あ
る飼料組成物；ストレプトマイセス・エンデユ
ス、アウレウス亜種（Streptomyces endus
subsp.aureus）の前記の新しい菌株を水性培地で
培養することによる抗生物質CP―63517またはそ
の薬剤学的に受容できる塩の製造方法も提供す
る。 本発明の抗生物質は、日本の岡山県で採取した
土壌サンプルから単離され、N497―34と命名さ
れた菌株の発酵によつて製造される。培養N497
―34は米国、コネチカツト州、グロトンのフアイ
ザ―インコーポレーテツド中央研究所のLiang
H.Huang博士によつて、下記に述べるように、
特性を決定され、同定されている。 培養N497―34は、細い形状の菌糸、気生菌糸
体の産生及びこの気生菌糸体上に鎖状に形成され
る胞子のために、ストレプトマイイセス属と認め
られている。 培養N497―34を斜面培養からATCCNo.192ブイ
ヨンに接種し、振盪器上で28℃において４日間増
殖させた。次に、これを遠心分離し、無菌蒸留水
で３回洗浄し、アクチノマイセタール属
（Actinomycetales）の菌の同定に一般に用いら
れている培地上に接種した。 この培養地を28℃においてインキユユベート
し、結果を種々な時間に読取つたが、最も一般的
には14日間後に結果を読取つた。着色は一般の学
術用語によつて説明したが、Color Harmony
Manual第４版からの色チツプとの比較によつ
て、正確な色を決定した。全細胞のアミノ酸及び
糖分析方法は、Becker等のAppl．Microbiol．
12巻、421〜423頁（1964年）及びLecheualierの
Ｊ．Lab．Clin．Med．，71巻、934〜944頁
（1968年）に述べられている方法である。比較の
ために、ストレプトマイセス・エンデユス、アウ
レウス亜種、NRRL12174をイリノイス州、ペオ
リアのNorthern Regional Research Center
（NRRC）、U.S.D.Aから入手した。 培養物の性質を決定するために用いた同定培地
及びその組成に関する参照は次の通りである： １ トリプトン―酵母エキス肉汁―（ISP＃１培
地、Difco）。 ２ 酵母エキス―麦芽エキス寒天―（ISP＃２培
地、Difco）。 ３ オートミール寒天―（ISP＃３培地、
Difco）。 ４ 無機塩―殿粉寒天―（ISP＃４培地、
Difco）。 ５ グリセロール―アスパラギン寒天―（ISP
＃５培地、Difco）。 ６ ペプトン―酵母エキス鉄寒天―（ISP
＃6Difco）。 ７ ツアペツク―スクロース寒天―S.A.
Waksman，（ACtinomycetes）放線菌類、２
巻、培地No.１、328頁、1961年。 ８ グルコース―アスパラギン寒天―同誌、培地
No.２、328頁。 ９ ベネツト寒天―同誌、培地No.30、331頁。 10 エマーソン寒天―同誌、培地No.28、331頁。 11 栄養寒天―同誌、培地No.14、330頁。 12 ゴードンとスミスのチロシン寒天―R.E.
GordonとM.M.Smith，J. Bact．，69巻147〜
150頁（1955年） 13 カゼイン寒天―同誌。 14 マレイン酸カルシウム寒天―S.A.Waksman
Bact・Rev．，21巻、１〜29頁（1957年） 15 ゼラチン―R.E.GordonとJ.M.Mihm，J.
Bact．，73巻、15〜27頁（1957年） 16 殿粉―同誌。 17 有機デキストロース肉汁―S.A.Waksman、
放線菌類、２巻、培地No.１、328頁（1961年）、
但しスクロース30ｇと寒天の代りにデキストロ
ース30ｇを用いた。 19 ジヤガイモ・ニンジン寒天―M.P.
Lechevalier，J. Lab．and Clinical Med．，71
巻、934〜944頁（1968年）、但しジヤガイモ30
ｇ、ニンジン2.5ｇ及び寒天20ｇのみを用いる。 20 ２％水道水寒天。 21 脱脂乳―Difco。 22 セルロース利用― ａ H.L.Jensen、Proc．Linn．Soc．N.S.W.，
55巻、231〜248頁（1930年） ｂ M.LevineとH.W.Schoenlein、培養基集、
培地No.2511、1930年 23 炭水化物―ISP＃９培地、Difco。 24 温度範囲―ISP＃２培地プラス培地１につ
きやしの実の果汁50ml。 培養N467―34は上述の方法によつて測定した
ところ、色ならびに全細胞アミノ酸及び糖分析に
関する次のような特徴を示した。 酵母エキス―麦芽エキス寒天 生育良好、白色、淡黄色〜淡紅色がかつた灰色
（Iea，１1/2ca，近灰色シリーズ3dc，5dc，5fe）、
隆起、しわ多し、表面と同じ気生菌糸体；褐色
（2pg，3ne）に変化；可溶性色素黄褐色（21c，
3nc）。 オートミール寒天 生育中等度〜良好、灰白色、灰色〜淡紅色がか
つた灰色（近灰色シリーズ3fe，5fe，7fe，7ih）、
やや隆起、平滑でビロードよう、表面と同じ気生
菌糸体；淡黄色（2ca）〜灰色（近灰色シリーズ
3dc，3fe）に変化；可溶性色素淡黄色〜黄色（１
１／２ea，１1/2ga）。 無機塩―殿粉寒天 生育中等度〜良好、黄白色〜淡紅色がかつた灰
色（１1/2ca、近灰色シリーズIba，5fe，7fe，
7ih）、隆起、しわ多し、表面と同じ気生菌糸体；
黄色〜淡紅色がかつた灰色（１1/2ga、近灰色シ
リーズ5fe）に変化；可溶性色素黄色（１1/2ga，
１1/2ea）。 グリセロール―アスパラギン寒天 生育低度〜中等度、灰白色（近灰色系列2ba）、
薄く、平滑、または単離したコロニーとしての外
観、気生菌糸体灰白色；無色〜淡黄色（１1/2
ca）に変化；可溶性色素なし。 ツアペツク―スクロース寒天 生育中等度、淡灰白色（近Ｉ1/2ca、近灰色系
列2cb）、薄く、平滑、円または曲線を有し、気
生菌糸体なし；乳白色（１1/2ca）に変化；可溶
性色素乳白色。 グルコース―アスパラギン寒天 生育良好、灰色、淡紅色がかつた灰色（近灰色
系列3fe，5fe）〜黄色（Iea，Iga）、中等度に隆
起、しわが寄つたまたは粒状、表面と同じ気生菌
体；黄灰色〜灰色（2gc，2ge，近灰色系列3fe，
3ih）；可溶性色素黄色（１1/2ia，１1/2la）。 ゴルドンとスミスのチロシン寒天 生育中等度、灰白色（近灰色系列2ba）、中等
度に隆起、しわ多しまたは単離したコロニーとし
ての外観、気生菌糸体灰白色；淡黄色に変化（１
１／２ca，１1/2ea）；可溶性色素淡黄（2ea）。 マレイン酸カルシウム寒天 生育中等度、白色〜灰白色（近灰色系列Iba）、
薄く、平滑または単離したコロニーとして外観；
気生菌糸体希薄、白色〜灰白色；乳白色（１1/2
ca）に変化；可溶性色素乳白色（１1/2ca）。 カゼイン寒天 生育良好、白色〜淡灰色がかつた乳白色（近
2ec，3ec）、中等度に隆起、細かいしわ多し、気
生菌糸体なし；淡紫色（3ec）に変化；可溶性色
素淡紫色（4ec）。 ベネツトの寒天 生育良好、白色、淡黄色〜淡紅色がかつた灰色
（Iea，近灰色系列5fe，7fe，7ih）、隆起、しわ多
し、表面と同じ気生菌糸体；淡柴色がかつた灰色
（4ig，4li，5ig，5li）に変化；可溶性色素黄色
（１1/2na）。 エマーソン寒天 生育良好、白色〜灰白色、隆起、しわ多し、ま
たは単離したコロニーとしての外観、白色〜灰白
色の気生菌糸体存在；黄褐色（2ea，2lc）に変
化；可溶性色素褐色（3lc）。 栄養寒天 生育中等度、白色、しわ多し、隆起、たは単離
したコロニーとしての外観、気生菌糸体白色（１
１／２ca）に変化。可溶性色素なし。 ゼラチン寒天 生育良好、白色〜乳白色（１1/2ca）、中等度
に隆起、しわ多し、気生菌糸体白色；乳白色
（2ca）に変化；可溶性色素なし。 殿粉寒天 生育良好、白色、隆起、しわ多し、気生菌糸体
白色；淡黄色〜黄褐色に変化（2ea，2ic）；可溶
性色素乳白色（2ac）。 ジヤガイモ・ニンジン寒天 生育中等度、灰色〜淡紅色がかつた灰色（近灰
色系列3fe，5fe，7fe，7ih）；ビロードよう、中
央は隆起しているが縁部にかけ薄くなつている、
平滑、表面と同じ気生菌糸体；淡紅色がかつた灰
色（近灰色系列5fe，5h）に変化；可溶性色素白
色（１1/2ca）。 水道水寒天 生育中等度〜良好、色〜淡紅色がかつた灰色
（近灰色系列3e，5fe，5ih）；隆起し、単離したビ
ロドようコロニーとしての外観；気生菌糸体灰色
〜淡紅色がかつた灰色；灰色〜暗灰色（近灰色系
列5ih，3ih，3ml）に変化；可溶性色素なし。 形態学的性質 形態学的性質を14日間インキユベートした後の
オートミル寒天上で観察した：灰色系列の胞子
塊；単軸分枝した担胞子体；胞子鎖は１胞子鎖に
つき３〜７巻きを有し、やや開いた、小直径（３
〜4μm）のらせん状、１胞子鎖につき10〜50個の
胞子を有する；胞子は短いロツド状であるが、時
には球状、卵形または長円形、直線またはややわ
ん曲した形状であり、ややわん曲した胞子の幾ら
かは平行しない端部を有し、五角形の外観を呈
し、1.0〜1.8×0.9〜1.2μmの大きさまたは直径0.9
〜1.2μである；また、走査電子顕微鏡によつて明
らかにされたように、イボを有している。 生化学的性質 メラニン産生せず；硫化水素産生；ゼラチンを
液化し、殿粉を加水分解する；硝酸塩を亜硝酸塩
に還元する；レヴインとシヨーエンレインのセル
ロース肉汁上での生育は良好であるが、ジエンセ
ンのセルロス肉汁上での生育は悪い、これらの両
肉汁上では分解せず；乳上では凝集し、透明化す
る；カゼイン消化陽性；マレイン酸消化陽性；チ
ロシン消化陰性。炭水化物利用：グルコース、ア
ラビノース、フラクトース、イノシトール、マニ
トール、ラフイノース、ラムノース、スクロール
及びキシロースの全てを利用する。 温度との関係 21℃，28℃，37℃，45℃ 増殖良好 増殖非常に良好 増殖良好 増殖中
等度 培養N497―34の細胞壁分析では、全細胞分解
物がLL―ジアミノピメリン酸を含むが特異的な
酸を含まないことがわかつた。培養物N497―34
は全体的に灰色の胞子、陰性のメラニン反応、ラ
セン状の胞子鎖及び表面にイボのある胞子を特徴
とする。これらの特徴と全細胞分析の結果から、
この培養はストレプトマイセス属に入れられる。
分献に報告されている、公知のストレプトマイセ
ス属と比較した場合に、この培養物は1982年１月
11日に発行された日本公開報第57―4975号に述べ
られているストレプトマイセス・エンデユス
Anderson ＆ Gottliebアウレウス亜種
Tomita，Nakano，Sato，Shirahata，Yoshida
＆ Morimoto NRRL 12174に密接に類似し
ている。後者の培養はNRRLから入手して、
N497―34と並べて比較した。N497―34は
NRRL12174とは異なつて、45℃で増殖し、牛乳
を凝固させるという事実を別として、両培養物は
同じ生化学的及び生理学的性質を有している。
ISP＃２培地、ISP＃４培地及びベネツトの寒天
上では、培養N497―34は強く淡紅色がかつた灰
色の気性菌糸体を生じ、黄色浸出液は生じない；
ISP＃５培地及び栄養寒天上でこの培養のコロニ
ーは小さく、ツアペツク―スクロース寒天上のコ
ロニーは黄白色ラインまたは円を示す、グルコー
ス―アスパラギン上のコロニーは白色〜乳白色と
いうよりむしろ淡紅色がかつた灰色であり、可溶
性色素を有さないのではなく黄色色素を生ずる。
これらの培養物の変動は小さく、ストレプトマイ
セス属の種々の菌株で生ずると考えられるもので
ある。従つて、培養物N497―34はストレプトマ
イセス・エンデユスAndersonとGottliebアウレ
ウス亜種Tomita，Nakano，Sato，Shirahata，
YoshidaとMorimoto。この培養物はブタペスト
条約の規定に従つて、アメリカン・タイプ・カル
チヤー・コレクシヨン（American Type
Culture Collection）（米国メリーランド州
20852、ロツクヴイル、パークローン・ドライブ
12301）に受入を番号ATCC―39574で寄託されて
いる。アメリカン・タイプ・カルチヤー・コレク
シヨンに寄託された培養物N497―34の永続性は
この出願に付与された特許の有効期間を通して保
証されている；培養物N497―37はこの出願の訴
訟係属中、特許庁長官によつて3537CFR1.14に従
つて資格があると認められた人に対して入手可能
である；この出願に特許が付与された場合には、
寄託された培養の利用可能性に関するあらゆる制
限が絶対的に排除される。 本発明の新規な抗生物質は、ストレプトマイセ
ス・エンデユス、アウレウス亜属の新しい菌株
ATCC―39574を発酵させ、中性PHの全肉汁をメ
チルイソブチルケトンで抽出し、溶媒を粘稠な抽
出物にまで濃縮することによつて得られる。この
油状物をヘプタンに懸濁させ、バツチをシリカゲ
ルで処理し、このシリカゲル・ケーキをクロロホ
ルム、クロロホルム／酢酸エチル、酢酸エチル及
び酢酸エチル／アセトンで溶出した。濃縮後に、
酢酸エチル分画から少量の粗生成物が得られ、こ
れから抗生物質CP―63517がナトリウム／カリウ
ム混合塩として晶出した。 ストレプトマイセス・エンデユス、アウレウス
亜種ATCC―39574は、例えば糖、殿粉、グリセ
ロールのような炭水化物源：例えばあらびき大豆
粉、カザアミノ酸、酵母キスのような有機窒素物
質質；例えば穀類溶解物、魚粉、綿実粕のような
増殖物質；鉄、コバルト、銅、亜鉛のような痕跡
元素及び炭酸カルシウムまたは緩衝剤としてのリ
ン酸塩を含有する無機塩から成る培地上の液内条
件下で攪拌及び通気しながら、24〜36℃の温度に
おいて増殖することができる。抗生物質は全肉汁
を4.0から8.0までのPHにおいて例えばｎ―ブタノ
ール、メチルイソブチルケトンまたはクロロホル
ムによつて抽出し、あるいは増殖が完了した後に
分離した菌糸体を抽出し、液を棄てることによ
つて回収することができる。抽出液を濃縮して希
いシロツプを得、これを例えばヘプタンに溶解
し、シリカゲル上でクロマトグラフイを行い、純
粋物質を得る。 ATCC―39574培養物を接種した斜面培養たは
ルーびんから増殖中の細胞をかき取ることによつ
て、接種物を調製する。斜面培養またはルーびん
での初期増殖に適した固形培地はATCC培地No.
172である。 ATCC培地No.172 成 分 ｇ／ グルコース 10 可溶性殿粉 20 酵母エキス ５ NZアミンA* １ 炭酸カリシウム １ 1000mlまで蒸留水を加え、KOHでPH7.0にす
る。寒天を加える 20 ＊ カゼインの酵素消化物の登録商標、Humko
Sheffield Chemical Co.，Inc. 斜面培養からの増殖中細胞を用いて、振盪フラ
スコまたは接種タンクのいずれかに接種する；あ
るいはこの代りに、接種タンクに振盪フラスコか
ら接種する。振盪フラスコでの増殖は１般に96〜
120時間後にその最大に達するが、接種タンクで
の増殖は通常、72〜96時間に最も好ましい状態に
なる。この接種フラスコまたはタンクから完全な
無菌条件下で、増殖肉汁を発酵器に接種し、48〜
120時間発酵させる。振盪器上またはタンク内に
１分間につき肉汁１容量あたり空気1/2〜２容量
の速度で分配器を通して無菌空気を送風して攪拌
することによつて、振盪フラスコ中の換気を維持
する。攪拌速度は使用する攪拌機の種類に依存す
る；振盪フラスコは通常、150〜200サイクル／分
（CPM）で運転し、発酵器は通常、300〜1700回
転／分（RPM）で運転する。常に無菌を維持し
なければならない。温度は28〜36℃の間に維持す
る。発酵中の発泡は例えば、精製された大豆油ま
たは他の適当な発泡防止剤のような無菌の消泡剤
を組成に加える、または接種後必要に応じて無菌
条件で発酵器に加えることによつて制御すること
ができる。 振盪フラスコは次の培地のひとつを用いて用意
する： CL13MZ 成 分 ｇ／ グルコース 20 大豆粉 10 NHアミンYTT* ５ 硫酸ナトリウム 0.5 塩化コバルト 0.002 炭酸カルシウム ２ １になるまで水補充、PH6.9〜7.0 JDY TT 成 分 ｇ／ セルロース 10 コーンスターチ ５ コーン浸せき液 ５ NTアミンYTT* ５ 塩化コバルト 0.002 炭酸カルシウム ３ １になるまで水補充、PH6.9〜7.0 ＊ ハンコ・シエフイールド社（Humko Sheffi
―eld Co.，Inc.）のカゼイン酵素消化物の
登録商標 培地100mlを300ml―振盪フラスコに分配し、
120℃、15p.s.i（1.07Kg／cm2）において30分間殺菌
した。冷却後、この培地に寒天中ATCC172培地
で増殖させたストレプトマイセス・エンデユス、
アウレウス亜種の斜面培養物ATCC―39574から
の増殖細胞懸濁液を接種する。このフラスコは
1.5〜2.5インチ（3.8〜5.1cm）の変位幅を有し、
150〜200CPMで振盪する回転振盪器上で28℃に
おいて、３〜４日間振盪させる。フラスコのひと
つを用いて、次の培地：CN―２（下記）、または
CL13MZもしくはJDY TT（上記）のいずれか１
種類を３を含む５―発酵器に接種した。 CN―２ 成 分 ｇ／ セレロース 10 コーンスターチ 10 大豆粉 10 NZアミンYTT* 10 塩化コバルト 0.002 炭酸カルシウム １ ＊ ハンコ・シエフイールド社のカゼインの酵素
消化物の登録商標 消胞剤１mlを加え、次に容器を密封して、120
℃、15p.s.i（1.07Kg／cm2）において45分間殺菌し
た。これらの容器に接種物フラスコ（約３％接種
物）を接種し、30℃において96〜144時間発酵さ
せ、１分間に液体１量に対して空気１量の速度で
空気を供給しながら、1700RPMにおいて攪拌し
た。 発酵が終了したときに（枯草菌（Baeillus
subtilis）ATCC6633に対する抗生物質デイス
ク・アツセイに基づく）、発酵器を停止させ、中
性PHにおいてフイルター補助装置、例えばセライ
トを用いて過した。フイルタケーキをメタノー
ル中でスラリー状にし、真空濃縮し、２〜３倍量
の水で希釈し、次に例えばメチルイソブチルケト
ンまたはｎ―ブタノールのような、水と混合しな
い媒溶1/3〜1/2倍量によつて２回抽出する。アス
ピレーシヨンまたは遠心分離によつて溶媒層を水
層から分離し、過し、液を真空濃縮して粘稠
な油状物を得た。 肉汁及び回収流の生物活性は枯草菌ATCC6633
または黄色ブドウ球菌（Staphylococcus・
aureus）ATCC6538の感受性菌株を用いて次の
ように調べることができる。肉汁及び回収流の成
分は純粋な酢酸エチル中のシリカゲル・プレート
≠を用いた薄層クロマトグラフイ（tlc）によつ
て肉眼で見えるようになる。展開したプレートに
バニリン試薬（エタノール75mlと85％リン酸25ml
の中にバニリン３ｇを溶解したもの）をスプレー
し、80℃に加熱すると、抗生物質CP―63517がグ
リーンのスポツトとして現われる。この展開した
プレートtlcプレートに、黄色ブドウ球菌または
枯草菌のいずれかをしたした寒天を積層させ、こ
の寒天にテトラゾリウム染料*を加え、37℃で16
時間インキユベートして、抗生物質を目でみえる
ようにすることもできる（淡紅色の下地に対して
白色）。 ≠ シリカゲルＧ（70―230M）E.Merck ＊ 塩化２，３，５トリフエニル―2Hテトラゾ
リウム・１水和物98％、アルドリツチ・ケミ
カル社（Aldrich Chqmical Co.，Inc.）の
Ｔ―8485―９ 大型発酵器で大規模に行う場合には、CL13MZ
またはJDY―TT培地７を含有する振盪フラス
コを用意する。振盪フラスコ接種物を28℃におい
て３〜５日間発酵させ、JDY TT培地25または
1200ガロン（96または4600）を含有する50また
は1700ガロン（190または6540）発酵器に接種
するのに用いる。約１の接種物をタンクへ接種
に用いた。この発酵器を５〜７日間発酵させた後
に回収して、それぞれ約25または1100ガロン（96
または4230）を得た。全肉汁を中性PHにおいて
１／５倍量のメチルイソブチルケトンによつて抽出
し、アルフア・ド・ラバル（Alpha DeLaval）
分離器またはポツドビールニアク
（Podbielniak）抽出器で分離し、溶媒を真空濃
縮して、油状物を得た。この油状物をさらに濃縮
してシロツプを得、このシロツプをヘプタン中に
懸濁させ、シリカゲルと共に攪拌し、シリカゲル
床を通して過し、シリカゲルを洗浄し、ヘプタ
ンで再度洗浄した。抗生物質をクロロホルム、ク
ロロホルム／酢酸エチル、酢酸エチルで段階的に
溶出し、最後に50％アセトン―酢酸エチル溶液で
溶出した。この溶出に続いて、分画の薄層クロマ
トグラフイ及びバイオアツセイを行つた。活性分
画を合わせ、濃縮し、再度クロマトグラフイを行
つて抗生物質CP―63517を単離した。活性溶出液
を粒状炭素カラムに通して妨害物質を除き、結晶
性CP―63517が回収されるように回収率を改良し
た。 式(1)の本発明の抗生物質は酸性であり、塩基性
剤の反応によつて陽イオン塩を形成する。このよ
うな塩は全て本発明の範囲に含まれる。これらの
塩はポリエーテル（イオノフオア）抗生物質を得
るための通常の方法によつて製造することができ
る。ひとつの方法では、水と混合しない揮発性の
有機溶媒に溶かした式(1)の化合物の溶液を、少な
くとも化学量論量、望ましくは過剰量の適当な塩
基性剤を含む水溶液によつて洗浄する。この有機
溶媒液を乾燥させた後に、真空蒸発させて、目的
の陽イオン塩を得る。このために使用可能な典型
的塩基性剤には、例えば水酸化ナトリウム及び水
酸化カリウムのような水酸化アルカリ金属、水酸
化カルシウム及び水酸化バリウムのような水酸化
アルカリ土金属、及び水酸化アンモニウムがあ
る。 抗生物質CP―63517は多くのグラム陽性微生物
の増殖に対して抑制作用を示す。下記の表１に
は、インドトロのMICテストの結果を要約する。
このテストのために、CP―63517の試験管系剤に
各微生物を接種し、微生物の増殖を24時間にわた
つて阻止する抗生物質の最小濃度（mcｇ／ml）
（MIC）を決定する。 ブタ赤痢は合衆国で診断される最も一般的なブ
タの疾患である。さらに、この疾患は他の多くの
国で流行しており、世界中のブタ養殖者に対して
ブタの仕入れにおいて年間数千ドルの損失を与え
ている。大形スピヘータがこの疾患の病原菌であ
ることが最近発見されている。この病原菌トレポ
ネーマ・ヒヨジセンテリエ（Treponema・
hyodysenteriae）は現在単離され、この疾患を誘
発し得ることが示されている〔Harris，D.L.
等：「ブタ赤痢―Ｉ、トレポネーマ・ヒヨジセン
テリエ（新しい属）のブタへの接種及び赤痢の再
現」Vet・Med／SAC、67巻：61〜64頁：1972
年〕。以下に挙げるテスト・データは、この細菌
を用いて行つたテストに関するものである。トレ
ポネーマ・ヒヨジセンテリがブタ赤痢の唯一の病
原菌であるかどうかが知られていないことは注目
しなければならない。しかし、入手可能なデータ
から、この細菌がこの病染症の主要な病原菌であ
ると結論することができる。 【表】 【表】 テリエ
94A002 6.25
周知の原主動物疾患であるコクシジウムは症は
依然として重大な疾患であり、これら治療は獣医
学、特に食用飼鳥類産業にとつて経済的に重要で
ある。コクシジウム症は一種またはそれ以上のア
イメリア属（Eimeria）または球虫属
（Isospora）による感染症から生ずる（この概要
に関しては、LundとFarr「食用飼鳥類の疾患」第
５版、BiesterとSchwarts編集、アイオワ州立大
学出版局、アイオワ州Ames.（1965年）1056〜
1096頁参照）。かかりやすいニワトリに容易に識
別できる病的状態をもたらす球虫目が６種類あ
る。エイメリア・テネラ（Eimeria tene―lla）、
エイメリア・ネカトリツクス（Eimeria
necatrix）、エイメリア・ブルネツテイ（E.
brunetti）、エイメリア・アセルブリナ（E.
acervulina）、エイメリア・マキシマ（E.
maxima）及びエイメリア・ミヴアテイ（E.
mivati）は消化管の表皮細胞の破壊を通して直
接的に、または毒素の産生を通して間接的に損傷
を生ずる。同じ属に属する他の３種類の原生動物
はかなり無害であると考えられるが、エイメリ
ア・ミテイス（E.mitis）、エイメリア・ハガニ
（E.hagani）及びエイメリア・プレコツクス（E.
praecox）は体重増加を低下させ、飼料利用効率
を減じ、産卵に不利な影響を与え得る。 抗生物質CP―63517とその陽イオン塩は食用飼
鳥類のコクシジア感染症に対してすぐれた活性を
示す。これらの化合物を５〜40ppmのレベルでニ
ワトリの飼料に混入すると、エイメリア・テネラ
及びエイメリア・アセブリナによる感染症の治療
に効果的である。 鶏におけるコクシジウム感染症に対する抗性物
質CP―63517とその塩に関する効力データは次の
ようにして得たものである。生後30〜50日のSPF
白色レグホンの雄鶏のグループに、抗生物質CP
―63517、そのナトリウム及び／またはカリウム
塩、あるいは公知の薬剤のモネンシンまたはステ
ノロールを均一に分散したりすり混餌を24時間与
えた後に、被検エイメリア属の特定の種類の接合
子のうを各鶏に経口接種した。他のグループの生
後30〜50日の鶏に被検化合物を含まない同じすり
餌を与えた。これらの鶏にも24時間後に感染さ
せ、感染対照として用いた。さらにもう１つのグ
ループの主後30〜50日の鶏には被検化合物を含ま
ないすり餌を与え、コクシジウム症に感染させ
ず、正常対照として用いた。この処理の結果をエ
イメリア・アセルブリナの場合には５日後に、そ
の他の菌の場合には６日後に評価した。得られた
結果を表に要約する。 【表】 表１のデータによつて示したように、本発明の
新規な抗性物質は例えば黄色ブドウ球菌、表皮ブ
ドウ球菌及び化膿連鎖球菌のような、種々なグラ
ム陽性菌に対して抗菌活性を有する。このことは
式(1)の化合物とその塩を、例えば手の洗浄ならび
に病院の表面及び装備の消毒のような、衛生目的
に対して有効なものにしている。 さらに、式(1)の抗生化合物はブタ赤痢の病原菌
であるトレポネーマ・ヒヨジセンテリエ（Trep
―onema hyodysenteriae）に対する活性を有し
ている。従つて、式(1)の本発明の抗生物質はブタ
赤痢の治療に有効である。このために、式(1)の化
合物はブタに対して単独でまたは好ましくは、式
(1)の化合物を薬剤的に受容できる担体または希釈
剤と混合した薬剤組成物として投与することがで
きる。 前記薬剤組成物は動物用抗生物質に対する標準
方法に従つて製造される。例えば、グルコース、
ラクトース、スクロース、殿粉またはセルロース
のような、不活性な希釈剤で適当に希釈した式(1)
の化合物をゼラチン・カプセルに充填することに
よつて、カプセル剤を製造することができる。錠
剤は通常の方法によつて、例えば式(1)の化合物、
ラクトースまたは殿粉のような希釈剤、ゼラチン
またはグアーゴム、及びステアリン酸マグネシウ
ムまたはパラフインろうのような滑剤の混合物を
圧縮することによつて製造することができる。式
(1)の化合物はエリキシル剤、シロツプ、液剤及び
懸濁剤として経口投与することもできる。薬剤及
び懸濁剤は水性、非水性または一部水性であり得
る。非経口投与用には、無菌の水剤が望ましい。
非経口投与には筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内
投与がある。静脈内投与用には、溶質の全濃度を
制御して、製剤を等張性にしなければならない。
薬剤学的に受容できるキヤリヤに対する式(1)の化
合物の割合は、特定の用量及び投与径路に依存す
る；しかし、この割合は通常１：10から２：１ま
で、特に1.5から１：１までの範囲である。 ブタ赤痢の治療に式(1)の化合物を用いる場合に
は、動物の混餌としてこの化合物を投与するのが
便利である。この場合には、式(1)の化合物の適当
な一日量を与えるようなレベルで動物の飼料に式
(1)の化合物を添加する。 ブタ赤痢を治療するために投与する式(1)の化合
物の用量は究極的に、処方する獣医によつて決定
されるが、この用量は投与経路及び動物の症状の
重症度によつて異なる。しかし、化合物(1)は１日
に体重１Kgにつき20〜50mgの範囲の用量、特に１
日に体重１Kgにつき10〜30mgの範囲の用量で通常
は分割量として経口投与される。或る場合には、
これらの範囲外の用量を用いることも必要にな
る。 またさらに、本発明の式(1)の抗性物質及びその
薬剤学的に受容できる塩基性塩はブタ及び反芻動
物の飼料利用効率を高める、すなわち、これらは
成長促進剤として作用する。反芻動物飼料の主要
な栄養部分（炭水化物）の利用機構は良く知られ
ている。反芻動物のこぶ胃内の微生物は炭水化物
を分解して、単糖類を生成し、次にこれらの単糖
類をピルビン酸塩化合物に転化する。ピルビン酸
塩は微生物学的に代謝されて、酢酸塩、酪酸塩ま
たはプロピオン酸塩を生成する。これらは集合的
に揮発性脂肪酸（VFA）として知られている。
さらに詳細に考察するためには、Leng著「反芻
動物の消化と代謝の生理学」Phillipson等編集、
Oriel Press、イギリス、ニユーキヤツスル、
1970年、408〜410頁を参照のこと。VFAの相対
利用効率は、McCuLLoughの「飼料」1971年６
月19日写、19頁；Eskeland等のJ.An，Sci.，33
巻、282頁（1971年）；及びChurch等の「反芻動
物の消化生理学と栄養」２巻、1971年、622と625
頁において考察されている。酢酸塩とピルビン酸
塩も利用されるが、プロピオン酸塩はより大きな
効率で利用される。そのため、炭水化物からプロ
ピオン酸塩を高い割合で生成させるように動物を
刺激して、炭水化物の利用効率を高めるような化
合物が有利である。 動物飼料の価値は一般に、動物に与えることに
よつて直接評価されている。英国特許第1197826
号は、微生物によつて飼料に起る変化を動物飼料
の評価によつて容易に、非常に正確に測定する、
in vitroこぶ胃方法を詳細に述べている。この方
法は、動物の消化過程をin vitroで行わせて研究
する装置を使用している。動物飼料、こぶ胃接種
物及び種々な成長促進剤を、細心に調節した条件
下で実験ユニツトに入れて、取り出し、微生物に
よる飼料の消費中に生ずる変化を精密にかつ漸進
的に研究した。こぶ胃液中のプロピオン酸含量の
増加は、飼料組成中の成長促進剤によつて反芻動
物の総合性能に望ましい反応がもたらされたこと
を示している。プロピオン酸含量の変化を対照こ
ぶ胃液に検出されたプロピオン酸含量の％として
表現する。長期間のインビボでの飼育研究を用い
て、ここぶ胃液中のプロピオン酸増加と動物性能
の改善との間に信頼できる相関関係があることを
示す。 こぶ胃液を、市販の肥育飼料プラス枯草で飼育
したフイステル形成子牛から採取した。このこぶ
胃液を直ちに、チーズし布を通して過し、こ
の中の10mlを50ml―円すいフラスコに加えた。こ
のフラスコは予め、標準基質（コーンスターチ68
％＋セルロース17％＋あらびき大豆粉15％）、PH
6.8緩衝液10ml及び被検化物を含むものであつた。
このフラスコに酸素を含まない窒素を約２分間通
し、振盪水浴中で39℃において約16時間インキユ
ベートした。全てのテストは３通り行つた。 インキユベーシヨン後に、サンプル５mlに25％
メタリン酸１mlを混合する。10分後に、ギ酸0.25
mlを加え、混合物を1500RPMで10分間遠心分離
した。次に、D.W.Kellog，J.Dairy Science 52
巻、1690頁（1969年）の方法による気液クロマト
グラフイーによつて、サンプルを分析する。酢
酸、プロピオン酸及び酪酸のピーク高さを未処理
及び処理インキユベエーシヨン・フラスコからの
サンプルについて測定する。 このインビトロでの方法でテストした場合に、
１mlにつき20及び10の微生物レベルにおける抗性
物質CP―63517は、抗生物質CP―63517を添加し
ない対照溶液中のプロピオン酸に比べて、それぞ
れ96％及び95％のプロピオン酸生成増加をもたら
した。これに比べて、市販のモネンシン（他の多
環状エーテル抗生物質）は10μｇ／mlにおいて、
対照よりもプロピオン酸の約20％増加をもたらし
た〔J.Amer・Chem・Soc．，89巻、5737頁
（1967）〕 サリノリマイシンと比べた場合には〔J.
Antibiotics.27巻、814頁（1974年）〕、抗生物質
CP―63517は20μｇ／mlレベルにおいて約86％の
プロピオン酸増加をもたらし、5μｇ／mlレベル
の約66％増加が10μｇ／mlレベルのサリノマイシ
ンによる約65％増加に匹敵するものであつた。 このデータに基づくと、抗生物質CP―63517か
牛及び羊のような皮芻動物によるならびにブタ及
び家兎のような単胃動物による飼料利用率を改善
すると推量することができる。抗生物質CP―
63517は遊離酸、ナトリウム塩、カリウム塩また
はそれらの混合物として飼料組成物に混入するこ
とができる。抗生物質CP―63517の非精製形また
はこの抗生物質を含む乾燥した発酵肉汁を、望ま
しい効力濃度で、飼料組成物中に混合することが
できる。 さらに説明するためにのみ、次の実施例を記載
する。 実施例 発酵肉汁から抗生物質CP―63517の単離 培養ATCC―39574の10ポツト発酵の全肉汁
（全量約25）を1/2量のメチルイソプチルケトン
によつて抽出した。抽出液を真空濃縮した褐色油
状物（20ｇ）を得た。この物質をクロマトグラフ
イ級シリカゲルを充填した５×100cmカラムで、
酢酸エチル溶液としてクロマトグラフイ分析し
た。このカラムを10ml／分の流量の酢酸エチルに
よつて展開させた。各10ml分画を回収した。これ
らの分画をシリカゲルプレート上での薄層クロマ
トグラフイによつて検定し、酢酸エチルによつて
展開させた。このプレートにエタノール―85％リ
ン酸（３：１）中の３％バニリン溶液をスプレー
し、80℃に加熱した。目的物の抗生物質CP―
63517がこれらの条件下で緑色スポツトとして現
われた。CP―63517を含む分画を合わせ（総量約
300ml）、DarcoG60の炭素２ｇを加えて15分間攪
拌した。混合物を過し、液に５％リン酸ナト
リウム２塩基性緩衝液300mlを加えて攪拌し、PH
を1N NaOHによつて10.0に調節した。相を分離
し、酢酸エチルを無水硫酸ナトリウム上で乾燥さ
せ、過し、真空蒸発させた。蒸発後に残留する
黄色の粘稠な油状物を少量のアセトンに溶解し、
次に晶出させた。結晶を過によつて集め、真空
乾燥させて、ナトリウム塩としてのCP―63517
800mgを得た；融点215〜220℃、UVλ（最大）
232nm、Ｅ１％ １cm＝155。 赤外線スペクトル（KBr）cm-1：3436，2964，
2928，2871，2728，1666，1563，1462，
1404，1372，1319，1293，1271，1234，
1205，1167，1100，1050，1033，995，
980，967，940，926，902，858，538。 旋光度：〔α〕D＋25゜（ｃ＝0.5、メタノール）。 元素分析： C47H77O14Naとしての計算値： C63.49；H8.89；N0.0 実験値：C62.45；H8.61；N0.0 ＊ ICI America Inc.，ウイルミントン、デラ
ウエア19899。 CP―63517の遊離酸形はCP―63.517のクロロホ
ルム溶液に等量の水を加えて攪拌し、リン酸を加
えてPHを3.0に低下させることによつて製造した。
次に、相を分離し、クロロホルムを真空蒸発させ
て、CP―63517の遊離酸を無定形固体（融点、95
〜105℃）として得た。 UV λ（最大）232nm、Ｅ１％ １cm＝161。 赤外線スペクトル（KBr）cm-1；3747，2968，
2932，2877，1715，1670，1460，1380，
1315，1265，1233，1202，1165，1113，
1099，1066，1046，1021，987，950，923，
900。 旋光度：〔α〕D＝＋47.4゜（ｃ＝0.5、メタノー
ル）。 元素分析 C47H78O14としての計算値： C65.10；H9.07；O25.83 実験値：C64.05；H8.93；O27.03 （差によつて） CP―63517の構造(1)をPfizer Inc.，中央研究所
（米国コネチカツト州、グロトン）のEarl B.
Whipple博士とR.S.Wareによつて実施された1H
―NMRと高分解能質量スペクトルによる研究に
よつて決定した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次式： （式中、Meはメチルを意味する） で表される抗性物質、または薬剤学的に受容でき
るその陽イオン塩。 ２ ナトリウム塩またはカリウム塩である特許請
求の範囲第１項記載の抗生物質。 ３ 下記式の抗生物質またはその薬剤学的に受容
できる陽イオン塩の、飼料利用効率を高める量を
ブタまたはウシに投与することから成る、ブタま
たはウシの飼料利用効率増強方法。 （式中、Meはメチルを意味する） ４ 下記式の抗生物質または薬剤学的に受容でき
るその陽イオン塩を、飼料利用の改善ならびにウ
シ及びブタの成長促進に有効な量で含有する飼料
から成る、ウシまたはブタ用栄養飼料組成物。 （式中、Meはメチルを意味する） ５ 次式の抗生物質または薬剤学的に受容できる
その陽イオン塩の製造方法において、前記抗生物
質または薬剤学的に受容できるその陽イオン塩を
産生し得る、ストレプトマイセス・エンデユス
（Streptomyces endus）、アウレウス亜種
（subsp.aureus）、ATCC―39574を同化可能な炭
素、窒素及び無機塩源を含む水性培地中の深部好
気性発酵条件下で、前記抗生物質または薬剤学的
に受容できるその陽イオン塩の回収可能な量が得
られるまで培養することから成る方法。 （式中、Meはメチルを意味する） ６ ストレプトマイセス・エンデユス、アウレウ
ス亜種（Streptomyces endus subsp.aureus）が
ATCC―39574菌株またはその突然変異種である、
特許請求の範囲第５項記載の方法。
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