JPWO2000077014A1 - リン酸エステルを有するアリール化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 一般式（Ｉ）〔Ｒ^１は−Ｒ^２−Ｘ^１−Ｒ^３−［Ｒ^２及びＲ^３はそれぞれ独立に二価、三価、又は四価の基を示し；Ｘ^１は−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−Ｎ（Ｒ^４）−（Ｒ^４は一価又は二価の基を示す）で表わされる基を示す］を示すが、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４からなる群から選ばれる２又は３個の基は互いに結合して環状構造を形成してもよく；Ａｒ^１は１から３個の水酸基をその環上に有するアリール基などを示すが、Ａｒ^１が示すこれらの基はその環上に１又は２個以上の置換基を有していてもよい〕で表される化合物又はその塩。水溶性の低分子リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、リン酸エステルを有するアリール化合物及び該化合物を有効成分と
して含む医薬に関するものである。

背景技術 細胞の増殖過程においては、一群の核酸合成関連酵素によってＤＮＡの複製過
程が調節されているが、これらのなかで、リボヌクレオチドレダクターゼ（以下
、本明細書において「ＲＮＲ」と記載する場合がある。）はＤＮＡの前駆体であ
るｄＮＴＰの生合成に関与しており、特に重要な酵素であることが報告されてい
る（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，５７，ｐｐ．３４９−３７４）。

癌細胞では一部の酵素群の過剰発現等により際限のない細胞増殖が繰り返され
ており、その結果として宿主は死に至るが、癌細胞内では癌細胞の高い細胞増殖
能を維持するためにＲＮＲが過剰発現していることが報告されている（Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４３，ｐｐ．３４６６−３４９２）。また、ＲＮＲの
発現に伴って癌の悪性化が引き起こされる可能性についても報告がある（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３，ｐｐ．１４０３６−１４０４
０）。従って、ＲＮＲを選択的に阻害する薬物は、癌細胞に対して高い選択毒性
を発揮することができ、癌細砲の増殖を選択的に抑制する癌治療剤として有用で
あることが期待される。

ＲＮＲを阻害することにより抗腫瘍活性を示す化合物としてヒドロキシウレア
が知られており、抗白血病薬として臨床で用いられている。しかしながら、その
阻害効果は弱く、十分にＲＮＲを阻害するためには長時間にわたって高い血中濃
度を維持する必要がある。また、この薬剤は骨髄毒性等の副作用が強いことから
、満足すべき治療剤とはいえない。このような理由から、高いＲＮＲ阻害活性を
有するとともに、骨髄毒性などの副作用が軽減され、有効域の広いＲＮＲ阻害剤
の開発が望まれている。

従来、低分子のＲＮＲ阻害剤としては、ポリヒドロキシ安息香酸誘導体（特表
昭６０−５０１４０９号公報）、アルコキシフェノール類化合物（Ｍｏｌ．Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ．，４５，ｐｐ．７９２−７９６）、チオセミカルバゾン誘導体
（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８，ｐｐ．３３５−３４４）、ビ
ピリジル誘導体（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５３，ｐｐ．１９−２６）
等が報告されている。また、ＷＯ９８／５２５５１にはビスアリール誘導体を含
む癌治療剤が開示されている。これらの化合物はいずれも非水溶性であり、癌治
療を目的とし注射剤として使用する場合には製剤用添加物としてポリエチレング
リコールやＨＣＯ（界面活性剤：日光ケミカル社製）等の補助剤を用いる必要が
あるが、これらの補助剤を多量にもちいると副作用を生じる懸念があり、望まし
くない毒性を生じる場合もあることから、生理食塩水やブドウ糖注射液等の水溶
性希釈液に補助剤なしで溶解可能な水溶性ＲＮＲ阻害剤が必要とされていた。

水溶性希釈液に溶解可能な癌治療剤として、例えば、特表平１０−５０７４６
２号公報にはリン酸モノエステル基を有するエピポドフィロトキシン誘導体が開
示されているが、リン酸エステルを有する水溶性アリール誘導体、及びそのＲＮ
Ｒ阻害活性や制癌活性に関する報告はない。

発明の開示 本発明の課題は、水溶性の低分子ＲＮＲ阻害剤として有用な新規化合物を提供
することにある。また、本発明の別の課題は、ＲＮＲ阻害活性を有するリン酸エ
ステルを有するアリール化合物を有効成分として含む医薬を提供することにある
。

本発明者らは、下記の式（Ｉ）で表される化合物がＲＮＲ阻害活性及び制癌活
性を有しており、しかも生理食塩水やブドウ糖注射液等の水溶性希釈液に溶解可
能な高い水溶性を有していることを見出した。また、上記の化合物が医薬の有効
成分として有用であり、特に癌治療剤の有効成分として有用であることを見出し
た。本発明はこれらの知見を基にして完成されたものである。

すなわち、本発明は、下記の一般式（Ｉ）： 〔式中、Ｒ^１は−Ｒ^２−Ｘ^１−Ｒ^３−［式中、Ｒ^２及びＲ^３はそれぞれ独立に二
価、三価、又は四価の基を示し；Ｘ^１は−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−Ｎ（Ｒ^４）
−（Ｒ^４は一価又は二価の基を示す）で表わされる基を示す］を示すが、Ｒ^２、
Ｒ^３、及びＲ^４からなる群から選ばれる２又は３個の基は互いに結合して環状構
造を形成してもよく；Ａｒ^１は１から３個の水酸基をその環上に有するアリール
基、下記の式（Ａ）： で表される基、又は酸素原子、窒素原子、及び硫黄原子からなる群から選ばれる
１から３個のヘテロ原子を環構成原子として有する単環性ヘテロアリール基を示
すが、Ａｒ^１が示すこれらの基はその環上に１又は２個以上の置換基を有してい
てもよい〕で表される化合物又はその塩を提供するものである。

上記発明の好ましい態様として、−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）（ＯＨ）で表されるリン
酸エステルがＡｒ^１−Ｓ−Ｒ^１−Ｓ−で表される基に対してパラ位に置換した上
記化合物又はその塩；Ａｒ^１が４−ヒドロキシフェニル基である上記化合物又は
その塩；Ｒ^２及びＲ^３が互いに結合してＸ^１とともに飽和の５員の単環性環状構
造を形成する上記化合物又はその塩；Ｘ^１が−Ｎ（Ｒ^４）−（Ｒ^４は一価又は二
価の基を示す）で表される基である上記化合物又はその塩；及びＲ^４が置換基を
有していてもよいＣ_１−Ｃ_４のアルキル基である上記化合物又はその塩が提供さ
れる。上記式（Ｉ）で表される化合物の塩としては、好ましくはリン酸エステル
部分におけるアルカリ金属塩又はアンモニウム塩、特に好ましくはリン酸エステ
ル部分におけるナトリウム塩が提供される。

別の観点からは、本発明により、上記の一般式（Ｉ）で表される化合物又は生
理学的に許容されるその塩を有効成分として含む医薬が提供される。この医薬は
、例えば、リボヌクレオチドレダクターゼの過剰発現に起因する疾患の予防及び
／又は治療のための医薬、又は癌治療のための医薬として有用である。また、上
記の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩を含むリボヌクレオチドレダクタ
ーゼ阻害剤；及び上記の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩を含む癌細胞
に対する選択的増殖抑制剤が提供される。

さらに別の観点からは、上記の医薬の製造のための上記一般式（Ｉ）で表される
化合物又は生理学的に許容されるその塩の使用；癌治療剤の製造のための請求の
上記一般式（Ｉ）で表される化合物又は生理学的に許容されるその塩の使用；リ
ボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤の製造のための上記一般式（Ｉ）で表される
化合物又は生理学的に許容されるその塩の使用；癌細胞に対する選択的増殖抑制
剤の製造のための上記一般式（Ｉ）で表される化合物又は生理学的に許容される
その塩の使用；リボヌクレオチドレダクターゼの過剰発現に起因する疾患の予防
及び／又は治療方法であって、上記の一般式（Ｉ）で表される化合物又は生理学
的に許容されるその塩の予防及び／又は治療有効量をヒトを含む哺乳類動物に投
与する工程を含む方法；及び癌の治療方法であって、上記の一般式（Ｉ）で表さ
れる化合物又は生理学的に許容されるその塩の治療有効量をヒトを含む哺乳類動
物に投与する工程を含む方法が提供される。

発明を実施するための最良の形態 本明細書において用いられる「アリール基」という用語は、例えば、炭素数６
〜１２個のアリール基を包含するものとして用いる。Ａｒ^１が示すアリール基と
しては、例えば、フェニル基又はナフチル基などが好適であり、特に言及しない
場合には、他のアリール基についても同様である。Ａｒ^１が示すアリール基は、
その環上に１〜３個、好ましくは１〜２個、特に好ましくは１個の水酸基を有し
ているが、水酸基の置換位置は特に限定されない。例えば、Ａｒ^１が示すアリー
ル基がフェニル基である場合には、一個の水酸基がパラ位（４−位）に置換して
いる場合が好ましい。式（Ａ）で表される基において−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）（ＯＨ
）で表されるリン酸エステルはパラ位（４−位）に置換していることが好ましい
。

Ａｒ^１が示す単環性ヘテロアリール基としては、例えば、酸素原子、窒素原子
、及び硫黄原子からなる群から選ばれる１から３個のヘテロ原子を環構成原子と
して有するヘテロアリール基を用いることができる。ヘテロ原子を２個以上有す
る場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。ヘテロアリール基としては
、例えば、５〜６員環のヘテロアリール基を挙げることができ、より具体的には
、例えば、ピロリル基、フリル基、チエニル基、ピラゾリル基、イミダゾリル基
、チアゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、チアジアゾリル基、オキサ
ジアゾリル基、テトラゾリル基、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジニル基、ピ
リダジニル基、ピリドニル基などを用いることができる。より好ましくは、窒素
原子及び硫黄原子からなる群から選ばれる１又は２個のヘテロ原子を環構成原子
として有する単環性ヘテロアリール基を用いることができ、さらに好ましくは、
ピロリル基又はイミダゾリル基を用いることができる。

Ａｒ^１が示すアリール基、式（Ａ）で表される基、または単環性ヘテロアリー
ル基の環上には、任意の置換基が１又は２個以上、好ましくは１から４個存在し
ていてもよい。このような置換基としては、例えば、水酸基；ハロゲン原子（本
明細書において「ハロゲン原子」又は「ハロゲン」という場合には、フッ素原子
、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれでもよい）；メチル基、エチル
基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅ
ｒｔ−ブチル基などのＣ_１−Ｃ_６アルキル基；トリフルオロメチル基などのハロ
ゲン化Ｃ_１−Ｃ_６アルキル基；メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イ
ソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基
などのＣ_１−Ｃ_６アルコキシ基；メチレンジオキシ基やエチレンジオキシ基など
のＣ_１−Ｃ_６アルキレンジオキシ基；カルボキシル基；Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカ
ルボニル基；無置換アミノ基；メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、若しくはエ
チルアミノ基などのＣ_１−Ｃ_６アルキル置換アミノ基；又はシアノ基などを用い
ることができるが、これらに限定されることはない。なお、本明細書において、
アルキル基又はアルキル部分を含む置換基は、直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそ
れらの組み合わせのいずれであってもよい。

Ｒ^２及びＲ^３の好ましい例として、例えば、直鎖状又は分岐鎖状のＣ_１−Ｃ_１
０アルキレン鎖を挙げることができ、該アルキレン鎖は１個又は２個以上の不飽
和結合を有していてもよい。不飽和結合は二重結合又は三重結合のいずれでもよ
く、両者を含んでいてもよい。好ましいアルキレン鎖の例として、例えば、メチ
レン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン、ペンチレン基などの直鎖又は分
岐鎖のＣ_１−Ｃ_１０アルキレン基；エテニレン基、プロペニレン基、１−ブテニ
レン基、シス又はトランス−２−ブテニレン基などのＣ_１−Ｃ_１０アルケニレン
基；エチニレン基、プロピニレン基などのＣ_１−Ｃ_１０アルキニレン基などを挙
げることができる。これらのアルキレン鎖は１個又は２個以上の置換基を有して
いてもよい。置換基を有する好ましいアルキレン鎖の例としては、例えば、１−
オキソエチレン基、１−オキソ−２−メチルエチレン基、１−オキソプロピレン
基などのオキソＣ_１−Ｃ_１０アルキレン基；１−オキシプロピレン基、２−オキ
シプロピレン基などのオキシＣ_１−Ｃ_１０アルキレン基などを挙げることができ
るが、これらに限定されることはない。Ｒ^２及びＲ^３が示す二価の基としては、
特に好ましくはエチレン基又はプロピレン基を用いることができる。

本明細書において、「二価の基」という用語は、２個の独立な共有結合を形成
できる基のうち少なくとも１個の炭素原子を含む基のことを意味している。「三
価の基」という用語は、３個の独立な共有結合を形成できる基のうち少なくとも
１個の炭素原子を含む基のことを意味しており、「四価の基」という用語は、４
個の独立な共有結合を形成できる基のうち少なくとも１個の炭素原子を含む基を
意味している。本明細書において、二価の基は鎖状又は環状のいずれでもよく、
鎖状の部分構造と環状の部分構造とが組み合わされた基であってもよい。

環状の二価の基は、環状構造と１又は２個以上の他の連結基（本明細書におい
て「連結基」とは２個の独立な共有結合を形成できる基又は原子を意味する：例
えばアルキレン基、アルキレンオキシ基などの二価の基の他、酸素原子や硫黄原
子など）との組み合わせからなるものであってもよい。また、環状の二価の基は
、好ましくは炭素原子、水素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及びリン原
子からなる群から選ばれる原子により構成されていてもよい。さらに、環状の二
価の基は、炭素−炭素結合、炭素−酸素結合、硫黄−酸素結合、炭素−窒素結合
を含んでいてもよい。カルバモイル結合、スルファモイル結合、エーテル結合、
ジスルフィド結合など、任意のヘテロ原子を含む１〜３個の共有結合を部分構造
として含んでいてもよく、鎖状の部分構造又は分岐鎖を有していてもよい。

環状の二価の基を構成する上記の環の環上には、任意の置換基が１個又は２個
以上存在していてもよい。２個以上の置換基が存在する場合には、それらは同一
でも異っていてもよい。置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素
原子などのハロゲン原子；メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル
基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基などのＣ_１−Ｃ_６ア
ルキル基；メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ
−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基などのＣ_１−Ｃ_６ア
ルコキシ基；メチレンジオキシ基やエチレンジオキシ基などのＣ_１−６アルキレ
ンジオキシ基；カルボキシル基；Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニル基；無置換ア
ミノ基；メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、若しくはエチルアミノ基などのＣ
_１−Ｃ_６アルキル置換アミノ基；水酸基；フェニル基などのアリール基；Ｃ_１−
Ｃ_６アルキル置換スルホニル基；アセチル基、プロピオニル基などのＣ_１−Ｃ_６
アルカノイル基；トリフルオロアセチル基、モノクロロアセチル基などのハロゲ
ン化Ｃ_１−Ｃ_６アルカノイル基；メトキシメチルカルボニル基などのアルコキシ
置換Ｃ_１−Ｃ_６アルカノイル基；シアノ基；Ｃ_１−Ｃ_６アルキル置換若しくは無
置換カルバモイル基；スルファモイル基；スルホ基；４〜８個の構成原子からな
るラクトン環；及び４〜８個の構成原子からなるラクタム環からなる群から選ば
れる１又は２個以上の置換基を有していてもよい。

−Ｒ^２−Ｘ^１−Ｒ^３−で表される基において、Ｒ^２とＲ^３とが互いに結合して
Ｘ^１と共に環状構造を含む二価の基を形成することが好ましく、この場合にＸ^１
で表される基が−Ｎ（Ｒ^４）−であることが好ましい。Ｒ^２とＲ^３とが結合して
Ｘ^１と共に形成される環としては、例えば、ピロリジン環、イミダゾリジン環、
オキサゾリジン環、チアゾリジン環などが挙げられる。

Ｒ^４は一価又は二価の基を示す。Ｒ^４として、例えば、水素原子；アミジノ基
；アミノ基；塩素原子などのハロゲン原子；メチル基、エチル基、ｎ−プロピル
基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基な
どのＣ_１−Ｃ_６アルキル基；置換若しくは無置換のアミノ基が置換したアルキル
基；置換若しくは無置換のアミノカルボニル基が置換したアルキル基；フェニル
基、ナフチル基などのアリール基；アセチル基、プロピオニル基などのＣ_１−Ｃ
_６アルカノイル基；メトキシメチルカルボニル基などのアルコキシ置換Ｃ_１−Ｃ
_６アルカノイル基；置換若しくは無置換のアミノカルボニル基；置換若しくは無
置換のアミノスルホニル基；ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基などのヒ
ドロキシＣ_１−６アルキル基；ベンジル基、フェネチル基などのＣ_７−Ｃ_１５ア
ラルキル基；水酸基；Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ基；アリールオキシ基；Ｃ_１−Ｃ_６
アルキルスルホニル基；アリールスルホニル基；Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニ
ル基；アリールオキシカルボニル基；ヒドロキシフェニルチオＣ_１−Ｃ_６アルキ
ル基；ヒドロキシフェニルチオＣ_１−Ｃ_６アルカノイル基；α−ヒドロキシチオ
Ｃ_１−Ｃ_６アルカノイル基；置換若しくは無置換のヘテロアリール基；置換若し
くは無置換のヘテロアリールで置換されたアルキル基；置換若しくは無置換のヘ
テロアリールで置換されたアルカノイル基；又は置換若しくは無置換のヘテロア
リールで置換されたスルホニル基などを用いることができる。

Ｒ^４が置換又は無置換のアルキル基の場合、該アルキル基は直鎖又は分岐鎖の
いずれでもよく、環状構造や不飽和結合を含んでいてもよい。炭素数は置換基を
含めて２０個以下が好ましい。特に好ましいのは炭素数１〜４個である。Ｒ^４と
して特に好ましいのは、置換若しくは無置換のアミノカルボニルで置換されたア
ルキル基である。最も好ましくは、無置換のアミノカルボニルメチル基である。

本発明の化合物は、置換基の種類により、１個又は２個以上の不斉炭素を有す
る場合がある。また、硫黄原子が不斉中心として作用する場合もある。１個又は
２個以上の不斉中心に基づく光学的に純粋な任意の光学異性体、上記の光学異性
体の任意の混合物、ラセミ体、２個以上の不斉炭素に基づくジアステレオ異性体
、上記のジアステレオ異性体の任意の混合物などは、いずれも本発明の範囲に包
含される。また、二重結合を含む化合物については、幾何異性体が存在するが、
いずれかの幾何異性体又はそれらの任意の混合物も本発明の範囲に包含される。

本発明の化合物が塩を形成する場合には、式（Ｉ）で表わされる基に存在する
−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）（ＯＨ）で表わされるリン酸エステル部分においてアルカリ
金属塩またはアンモニウム塩を形成することが好ましい。また、式（Ａ）で表わ
される基に存在する−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）（ＯＨ）で表わされるリン酸エステル部
分においてアルカリ金属塩またはアンモニウム塩を形成することも好ましい。ア
ルカリ金属としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、ルビジウム、
セシウムが挙げられる。アンモニウム塩としては、アンモニウム；モノ、ジ、若
しくはトリアルカノールアンモニウム；又はモノ、ジ、トリ、若しくはテトラア
ルキルアンモニウムなどが挙げられる。リン酸エステル部分で形成される塩とし
てはナトリウム塩又はカリウム塩が好ましく、ナトリウム塩が特に好ましい。

また、リン酸エステル以外の酸性基又は塩基性基が塩を形成する場合もある。
このような塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩などの鉱酸塩；パラト
ルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クロロ酢酸塩、シュウ酸塩
、トリフルオロメタンスルホン酸塩、キノリンスルホン酸塩などの有機酸塩；ナ
トリウム塩、カリウム塩などの金属塩；アンモニウム塩、トリエチルアンモニウ
ム塩などのアンモニウム塩などを挙げることができる。

さらに、上記の式（Ｉ）で表される遊離形態の化合物若しくはその塩の水和物
、又は上記の式（Ｉ）で表される遊離形態の化合物若しくはその塩の溶媒和物は
いずれも本発明の範囲に包含される。溶媒和物を形成可能な溶媒は特に限定され
ないが、例えば、メタノール、エタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、ジ
クロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミドなどの溶媒により溶媒和物
が形成される場合がある。

本発明の化合物のうち、特に好適な化合物をナトリウム塩の形態で以下に示す
が、本発明の化合物又はその塩は下記のものに限定されることはない。

上記一般式（Ｉ）で示される化合物の製造方法は特に限定されず、各種の合成
ルートに従って合成することができる。本明細書の実施例には本発明の化合物の
代表例についての具体的製造方法が開示されているので、当業者は、実施例に記
載された方法を参照することにより、また、必要に応じてそれらの方法に適宜の
改変や修飾を加え、さらに、出発原料や試薬を適宜選択することによって、上記
一般式（Ｉ）に包含される化合物を容易に製造することが可能である。合成にあ
たっては、各種の縮合反応、付加反応、酸化反応、又は還元反応などを１工程な
いし複数工程組み合わせることができる。これらについては成書に詳しい。例え
ば、「実験化学講座」（丸善株式会社発行、初版から第４版までの各版に含まれ
るそれぞれの分冊を利用できる）に単位操作として記載されている各種の方法や
原料化合物を好適に利用できる。

例えば、チオ化合物やアミン化合物などを出発原料に用いると反応操作や収率
の点で好ましい場合がある。また、例えば、チオエーテル（スルフィド）の合成
、エステルの合成などの単位操作；ビニル基、ハロゲン原子（ハロアルキル基を
含む）、エポキシ基、アジリジン環、アシルハライド基、イソシアネート基など
の反応性官能基とチオ基との反応；及び、アミノ化反応、アミド化あるいはアル
キル化などの反応は当業者に周知であり、従来法のなかから収率や反応の難易度
などに応じて適宜の方法を選択することが可能である。

例えば、これらの製造法において、定義した基が反応工程の条件下で変化する
か、または反応工程を実施するのに不適切な場合には、有機合成化学で常用され
る方法、例えば官能基の保護や脱保護等の手段、あるいは、酸化、還元、加水分
解等の処理に付すことにより、所望の工程を効率よく行うことができる場合があ
る［例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ）、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著、ジョン・ワイリー・アンド・サ
ンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）（
１９８１年）参照］。上記工程における製造中間体および目的化合物は、有機合
成化学で常用される精製法、例えば濾過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各
種クロマトグラフィー等の処理に付することにより単離精製することができる。
また、製造中間体は特に単離することなく次の反応に供することも可能である。

上記一般式（Ｉ）で表される本発明の化合物はリボヌクレオチドレダクターゼ
阻害作用を有しており、癌細胞の増殖を選択的に抑制することができるので、ヒ
トを含む哺乳類動物に投与可能な癌治療剤の有効成分として用いることができる
。本発明の医薬の適用対象となる癌の種類は特に限定されず、胃癌、肺癌、大腸
癌、肝臓癌、腎臓癌、乳癌、子宮癌、皮膚癌、脳腫瘍などの固形癌や、白血病、
リンパ種などの非固形癌のいずれに対しても適用可能である。また、ヒトを含む
哺乳類動物において、その動物自身、ウイルス、細菌などのリボヌクレオチドレ
ダクターゼの異常発現を伴う各種疾患、例えば、ヘルペス単純ウイルスの異常増
殖によって引き起こされるヘルペス症候群やエイズウイルスの異常増殖によって
引き起こされる後天性免疫不全症候群などの疾患の予防及び／又は治療のための
医薬の有効成分としても有用である。もっとも、本発明の化合物の用途は医薬用
途に限定されることはなく、例えば、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤とし
て生化学、薬理学、遺伝子工学などの分野の試薬として用いることもできる。

本発明の医薬の有効成分としては、上記の一般式（Ｉ）に包含される化合物及
びその塩、並びにそれらの水和物及び溶媒和物からなる群から選ばれる物質の１
種を用いることができるが、これらの群から選ばれる２種以上の物質を組み合わ
せて用いてもよい。本発明の医薬の有効成分として塩の形態の物質を用いること
が好ましく、特に好ましいのはナトリウム塩である。上記の物質はそれ自体を医
薬として投与することも可能であるが、通常は、製剤学上許容される製剤用添加
物の１種又は２種以上を用いて医薬組成物の形態の医薬を製造して投与するのが
好適である。本発明の医薬の投与経路は特に限定されず、経口投与又は非経口投
与のいずれかの投与経路を選択することが可能である。非経口投与に適する医薬
組成物としては、例えば、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は胸腔内投
与に適する注射剤、点滴剤、直腸内投与剤（座剤）、軟膏剤、クリーム剤、吸入
剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、点耳剤、点眼剤などを挙げることがで
き、経口投与に適する医薬組成物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、粒剤、
粉剤、シロップ剤などを挙げることができるが、本発明の医薬組成物の形態はこ
れらに限定されることはなく、当業者が利用可能な医薬組成物から適宜の形態の
組成物を選択して用いることが可能である。

例えば、注射剤の製造は、当業者が利用可能な希釈剤（例えば生理食塩水、ブ
ドウ糖注射液、乳糖注射液、マンニット注射液等）に有効成分である上記物質を
溶解し、濾過滅菌などの適宜の滅菌処理を施してアンプル等の密封容器に充填す
ればよい。また、日本薬局方に基いて凍結乾燥した形態の注射剤や塩化ナトリウ
ムと混合した粉末注射剤を製造してもよい。また、製剤用添加物として、例えば
、ポリエチレングリコール、ＨＣＯ−６０（界面活性剤；日光ケミカル社製）等
の補助剤、エタノール及び／又はリポソーム、サイクロデキストリン等の担体を
含んでいてもよい。経口投与に適する医薬組成物又は直腸投与に適する医薬組成
物の製造は、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、懸濁化剤、等張化剤、乳化剤な
どの適宜の製剤用添加物と上記物質とを常法により混合成形することにより行う
ことができる。

本発明の医薬の投与量及び投与回数は特に限定されないが、本発明の医薬を癌
の治療に用いる場合には、例えば０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ（有効成分重量と
して）を週１回〜３週間に１回程度の間隔で静脈内投与することが可能である。
もっとも、投与量及び投与回数は、投与方法、有効成分である上記式（Ｉ）の化
合物の種類、患者の年齢、体重、症状、骨髄抑制などの副作用の発現程度などの
種々の条件に応じて適宜調節することが望ましい。

実施例 以下、本発明を実施例によってさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこ
れらの実施例に限定されることはない。なお、実施例中の化合物番号は前記の好
ましい化合物の番号に対応させてある。

例１：化合物１及び２の合成 化合物３を以下のようにして製造した。ヘミシェ・ベリヒテ（Ｃｈｅｍｉｓｃ
ｈｅ Ｂｅｒｉｃｈｉｔｅ），第５６Ｂ巻、１８４０頁（１９２３年）に記載さ
れた方法により合成した、ｃｉｓ−Ｎ−ベンジル−２，５−ビス（エトキシカル
ボニル）ピロリジン（６．１０ｇ）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）溶液に、
氷冷下でテトラヒドロホウ酸リチウム（３．１２ｇ）を加えて撹拌し、徐々に室
温まで昇温した。終夜放置後、再び反応液を氷冷し、水（５０ｍＬ）及び６規定
塩酸（２０ｍＬ）を注意深く加えた後、４０℃の水浴上で１５分間加温した。再
び、反応液を氷冷し、２規定水酸化ナトリウム水溶液を加えて、ｐＨ９〜１０に
した。この反応液を酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、濃縮するとｃｉｓ−Ｎ−ベンジル−２，５−ビス（ヒ
ドロキシメチル）ピロリジンが得られた。収量：２．７９ｇ（６３％） 室温にて、ｃｉｓ−Ｎ−ベンジル−２，５−ビス（ヒドロキシメチル）ピロリ
ジン（１．２２ｇ）とギ酸（０．５ｍＬ）をメタノール（８ｍＬ）に溶解し、パ
ラジウム黒（０．１２ｇ）を加えて、２時間激しく撹拌した。終夜放置後、反応
液を濾過し、残渣をメタノール及び水で洗浄し、濾液を濃縮してｃｉｓ−２，５
−ビス（ヒドロキシメチル）ピロリジン・ギ酸塩を得た。収量：０．８６ｇ（８
８％） 室温にて、ｃｉｓ−２，５−ビス（ヒドロキシメチル）ピロリジン・ギ酸塩（
０．８５ｇ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、この溶液に二炭酸ジ−ｔ
−ブチル（１．８０ｇ）を加えて、３時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣
に酢酸エチルを加えて、１０％クエン酸水溶液及び飽和食塩水で洗浄した。有機
層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮してｃｉｓ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニ
ル−２，５−ビス（ヒドロキシメチル）ピロリジンを得た。収量：０．９７ｇ（
８７％） 氷冷下においてｃｉｓ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２，５−ビス（ヒドロ
キシメチル）ピロリジン（０．９７ｇ）及びｐ−トルエンスルホニルクロリド（
２．００ｇ）をピリジン（１５ｍＬ）に溶解し、徐々に室温まで昇温した。終夜
放置後、反応液を減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルを加えて、１０％クエン酸水溶
液及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮
し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精
製してｃｉｓ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２，５−ビス（ｐ−トルエンスル
ホニルオキシメチル）ピロリジンを得た。収量：１．５４ｇ（６８％） 窒素雰囲気下で、ｃｉｓ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２，５−ビス（ｐ−
トルエンスルホニルオキシメチル）ピロリジン（１．４８ｇ）、ｐ−ヒドロキシ
ベンゼンチオール（０．９０ｇ）及び無水炭酸カリウム（２．３０ｇ）にジメチ
ルホルムアミド（５．０ｍＬ）を加えて、７０℃の油浴上で、３時間撹拌した。
反応液を水（５０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（塩化メチレン−メタノール）で精製して化合物Ａを得た。収
量：１．０２ｇ（８３％） ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）１．３６（ｓ，９Ｈ），１．９０−２．１０
（ｍ，４Ｈ），２．６５−２．９０（ｍ，２Ｈ），３．１０−３．４２（ｍ，２
Ｈ），３．８０−４．０５（ｍ，２Ｈ），６．７６（ｄ，４Ｈ），７．３２（ｄ
，４Ｈ），８．０４（ｓ，２Ｈ） 化合物Ａ（０．９２ｇ）をジオキサン（９．０ｍＬ）に溶解し、氷冷下で４規
定塩酸−ジオキサン（９．０ｍＬ）を加えて、終夜放置した。反応液を半量に減
圧濃縮し、酢酸エチルを加えてデカンテーションした。残渣を減圧濃縮し、減圧
乾燥して化合物Ｂを得た。収量：０．６２ｇ（８１％） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ（ｐｐｍ）１．６０−１．８３（ｍ，２Ｈ），２．
０５−２．２４（ｍ，２Ｈ），３．００−３．６０（ｍ，６Ｈ），６．７８（ｄ
，４Ｈ），７．３５（ｄ，４Ｈ），９．６０（ｂｒｏａｄ，１Ｈ），９．８０（
ｂｒｏａｄ，１Ｈ） 化合物Ｂ（０．４５ｇ）及びクロロアセトアミド（０．１２ｇ）をジメチルホ
ルムアミド（１．３ｍＬ）に溶解し、炭酸水素ナトリウム（０．４７ｇ）及びヨ
ウ化カリウム（０．１９ｇ）を加えて、７０℃の油浴上で２時間撹拌した。反応
液に酢酸エチルを加えて、水で洗浄後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、
減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン−メ
タノール）で精製すると化合物３が得られた。収量：０．１２ｇ（２５％） ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ（ｐｐｍ）１．４６−１．５７（ｍ，２Ｈ），１．
７７−１．８８（ｍ，２Ｈ），２．６７（ｄｄ，２Ｈ），２．９３（ｄｄ，４Ｈ
），３．１２（ｓ，２Ｈ），６．６６（ｄ，４Ｈ），７．１７（ｄ，４Ｈ），９
．４７（ｓ，２Ｈ） 化合物３６．６ｇ（１６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン４．４ｇ（
３３ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン０．２ｇ（２ｍｍｏｌ）をテトラヒド
ロフラン６０ｍＬに加え氷冷した。これにジメチルクロロフォスフェート２．５
ｇ（１７ｍｍｏｌ）を徐々に加えた後、室温で３時間反応させた。これを０．５
Ｍリン酸水素１カリウム水溶液２００ｍＬにあけ、酢酸エチル２００ｍＬで３回
抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶
媒を減圧留去した。この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチ
ル→酢酸エチル：メタノール＝９５：５）で精製し３．７ｇの化合物４を無色の
油状物として、１．６ｇの化合物５を褐色の油状物として各々得た（収率；化合
物４ ４６％、化合物５ １６％）。

ＦＡＢＭＳ（Ｐｏｓｉ、ニトロベンジルアルコール）化合物４；５１３、化合物
５；６２１^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）化合物４；δ（ｐｐｍ）１．６８−１．７８（ｍ，
２Ｈ），１．９４−２．０２（ｍ，２Ｈ），２．８１−３．０７（ｍ，６Ｈ），
３．２５（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），６．７
５（ｄ，２Ｈ），７．１１（ｄ，２Ｈ），７．２１（ｄ，２Ｈ），７．２８（ｄ
，２Ｈ），化合物５；１．７２−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．９４−２．０８（
ｍ，２Ｈ），２．８２（ｂｒｓ，２Ｈ），２．９２−３．１０（ｍ，６Ｈ），３
．８５（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），７．１３（ｄ，２Ｈ），７．３２
（ｄ，２Ｈ）． 化合物４ ３．８ｇ（７ｍｍｏｌ）に氷冷した１Ｍトリメチルシリルブロミド
／チオアニソール トリフルオロ酢酸溶液１４６ｍＬ（１４６ｍｍｏｌ）を加え
た後、室温で１晩反応させた。溶媒を減圧留去した後、飽和炭酸水素ナトリウム
でｐＨを約９に調整した。これにジエチルエーテル１０ｍＬを加え撹拌した後静
置し、ジエチルエーテル層を分離した。残った水層を逆相シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（ＣＯＳＭＯＳＩＬ ７５Ｃ１８−ＯＰＮ、水→水：メタノール
＝１：１）で精製した後、凍結乾燥により粗生成物を得た。この粗生成物をゲル
カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１０、水）により２回精製
した後、凍結乾燥により２．５ｇの化合物１を白色固体として得た（収率６４％
）。

ＦＡＢＭＳ（Ｎｅｇａ、グリセリン）５２７，５０５，４８３^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）１．５９−１．６３（ｍ，２Ｈ），１．９
４−２．０９（ｍ，２Ｈ），２．８６−３．１４（ｍ，６Ｈ），６．８３（ｄ，
２Ｈ），７．１５（ｄ，２Ｈ），７．３０−７．４５（ｍ，４Ｈ）． 化合物５から化合物１と同様の方法で化合物２を白色固体として得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）δ（ｐｐｍ）１．６０−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．９
５−２．１０（ｍ，２Ｈ），２．９１−３．１４（ｍ，６Ｈ），７．１３（ｄ，
４Ｈ），７．３９（ｄ，４Ｈ）． 例２：水溶性の測定 例１で合成した化合物１について、水、生理食塩水、５％グルコースに対する
溶解度を測定した。その結果、化合物１は水、生理食塩水、及び５％グルコース
のいずれに対しても１００ｍｇ／ｍｌ以上の溶解度を有していた。

試験例１：ＲＮＲ阻害活性測定試験 （ａ）ヒト由来ＲＮＲ Ｒ１及びＲ２サブユニットの調製 ヒトＲＮＲ蛋白質のＲ１サブユニットをコードするｃＤＮＡを含むプラスミド
ｐ３Ｉ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｓｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９，ｐ．３７４１
，１９９１に記載）を基にして、それぞれ、Ｒ１サブユニット翻訳開始部位の直
前にＮｄｅＩ制限部位、翻訳終了部位の直後にＢａｍＨＩ制限部位をＲ１サブユ
ニットのアミノ酸配列の変化を全く伴わない形で導入したＤＮＡを取得した。Ｄ
ＮＡの調製は、モレキュラー・クローニング第２版に記載されている方法に準じ
て、合成ＤＮＡ断片を用いたＰＣＲによる変異導入法及びＤＮＡ増幅法により行
った。このＤＮＡ中のＲ１サブユニットをコードする領域を含むＮｄｅＩ及びＢ
ａｍＨＩ制限酵素断片を、プラスミドｐＥＴ３ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ社）のＮｄｅ
Ｉ及びＢａｍＨＩ間に挿入し、プラスミドｐＥＴＲ１を造成した。このプラスミ
ドを、同じくモレキュラー・クローニング第２版に記載の方法に準じて、Ｅｓｃ
ｈｅｌｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＢＬ２１（λＤＥ３）ｐｌｙｓＳ株（Ｎｏｖａｇ
ｅｎ社）に形質転換して、ＢＬ２１（λＤＥ３）ｐｌｙｓＳｐＥＴＲ１株を造成
した。

同様に合成ＤＮＡ断片を用いたＰＣＲによる変異導入法及びＤＮＡ増幅法を用
いて、ヒト細胞株ＨＬ６０ ｃＤＮＡライブラリーから、それぞれＲ２サブユニ
ット翻訳開始部位の直前にＮｄｅＩ制限部位、翻訳終了部位の直後にＢａｍＨＩ
制限部位をＲ２サブユニットのアミノ酸配列の変化を全く伴わない形で導入した
ＤＮＡ断片を取得した。このＤＮＡ中のＲ２サブユニット断片をコードする領域
を含むＮｄｅＩ及びＢａｍＨＩ制限酵素断片を、プラスミドｐＥＴ３ａ（Ｎｏｖ
ａｇｅｎ社）のＮｄｅＩ及びＢａｍＨＩ間に挿入し、プラスミドｐＥＴＲ２を造
成した。このプラスミドを、同じくモレキュラー・クローニング第２版記載の方
法に準じて、Ｅｓｃｈｅｌｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＢＬ２１（λＤＥ３）ｐｌｙ
ｓＳ株（Ｎｏｖａｇｅｎ社）に形質転換して、ＢＬ２１（λＤＥ３）ｐｌｙｓＳ
ｐＥＴＲ２株を造成した。

３００ｍｌ容三角フラスコ中で、ＢＬ２１（λＤＥ３）ｐｌｙｓＳｐＥＴＲ１
株をＴｅｒｒｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ ４０ｍｌ（アンピシリン１００μｇ／ｍｌ
及びクロラムフェニコール２０μｇ／ｍｌを含み、グリセロールを全く含まない
もの：モレキュラー・クローニング第２版に記載）に一白金耳接種し、２８℃で
一晩振盪培養した。この培養液３０ｍｌを４００ｍｌの同培地を含む２Ｌ容三角
フラスコに移植し、１６℃で振盪培養した。培養開始２時間後に、終濃度が０．
１ｍＭになるようにＩＰＴＧを添加し、さらに２０時間培養を継続した。この培
養液より７，０００×ｇ、１０分間、４℃の遠心分離によって菌体を集め、得ら
れた菌体を氷冷したバッファーＡ［５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ（ｐＨ７．
６），１ｍＭ ＭｇＣｌ_２，１ｍＭ ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ，１ｍＭ
ＰＭＳＦ］２０ｍｌに懸濁した。この懸濁液を超音波処理して菌体を破砕した後
、１２，０００×ｇ、２０分間、４℃で遠心分離を行った。上清を回収し、硫酸
ストレプトマイシンを終濃度２％（Ｗ／Ｖ）となるように添加し、氷上で２０分
間保持した後、１２，０００×ｇ、２０分間、４℃で遠心分離を行った。上清を
回収し、等量の飽和硫酸アンモニウム水溶液を撹拌しながら添加した後、氷上で
一晩保持した。１５，０００×ｇ、２０分間、４℃で遠心分離を行って沈殿を回
収した後、２ｍｌのバッファーＡに溶解し、ＰＤ−１０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いて常法に従って脱塩及びバッファーＡへのバッファー
置換を行った。

以後の分離精製には、全てＦＰＬＣシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ社）を用いた。脱塩画分をＱ−ｓｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）にアプライし、流速５．０ｍｌ／分、分離時間５０分
、溶離液１０ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）、０Ｍから０．５Ｍ
ＫＣｌまでの直線的濃度勾配条件下で分離を行った。１０分から２０分の間に
溶出してきた画分を集め、終濃度０．５Ｍになるよう硫酸アンモニウムを添加し
たのち、ｐｈｅｎｙｌ ｓｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ社）にアプライして、流速３．０ｍｌ／分で１０ｍＭリン酸カリウムバ
ッファー（ｐＨ７．０）／０．５Ｍ硫酸アンモニウムを１５分間、１０ｍＭリン
酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）を１５分間、１０ｍＭリン酸カリウムバッ
ファー（ｐＨ７．０）、０．３％ Ｔｗｅｅｎ２０を１５分間流した。最後の１
５分間で溶出されてきた画分を集めてｒｅｓｏｕｒｃｅＱ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ社）１ｍｌにアプライし、１０ｍＭリン酸カリウムバッファー
（ｐＨ７．０）で洗浄した後、流速１ｍｌ／分で１０ｍＭリン酸カリウムバッフ
ァー（ｐＨ７．０）、０．３Ｍ ＫＣｌを１０分間流して溶出した。最初の３分
間の溶出画分を集め、ＰＤ−１０にて脱塩及びバッファーＡへの置換を行い、精
製Ｒ１標品を得た。

３００ｍｌ容三角フラスコ内で、ＢＬ２１（λＤＥ３）ｐｌｙｓＳｐＥＴＲ２
株をＴｅｒｒｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ ４０ｍｌ（アンピシリン１００μｇ／ｍｌ
及びクロラムフェニコール２０μｇ／ｍｌを含み、グリセロールを全く含まない
もの：モレキュラー・クローニング第２版に記載）に一白金耳接種し、２８℃で
一晩振盪培養した。この培養液３０ｍｌを４００ｍｌの同培地を含む２Ｌ容三角
フラスコに移植し、２８℃で振盪培養した。Ｏ．Ｄ．（６００ｎｍ）が０．８付
近に達した時に、終濃度が１ｍＭになるようにＩＰＴＧを添加し、さらに６時間
培養を継続した。この培養液より７，０００×ｇ、１０分間、４℃の遠心分離に
よって菌体を集め、得られた菌体を氷冷したバッファーＡ ２０ｍｌに懸濁した
。この懸濁液を超音波処理して菌体を破砕した後、１２，０００×ｇ、２０分間
、４℃で遠心分離を行った。上清を回収し、硫酸ストレプトマイシンを終濃度２
％（Ｗ／Ｖ）になるよう添加し、氷上で２０分間保持した後、１２，０００×ｇ
、２０分間、４℃で遠心分離を行った。上清を回収し、等量の１００％飽和硫酸
アンモニウム水溶液を撹拌しながら添加した後、氷上で一晩保持した。１５，０
００×ｇ、２０分間、４℃で遠心分離を行って沈殿を回収した後、２ｍｌのバッ
ファーＡに溶解し、ＰＤ−１０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用
いて常法に従って脱塩及びバッファーＡへのバッファー置換を行った。

以後の分離精製には、全てＦＰＬＣシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ社）を用いた。脱塩画分をＱ−ｓｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）にアプライし、流速５．０ｍｌ／分、分離時間５０分
、溶離液１０ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）、０Ｍから０．５Ｍ
ＫＣｌまでの直線的濃度勾配条件下で分離を行った。１０分から２５分の間に
溶出してきた画分を集め、終濃度０．５Ｍになるよう硫酸アンモニウムを添加し
た後、ＲｅｓｏｕｒｃｅＥＴＨにアプライして、流速０．５ｍｌ／分で１０ｍＭ
リン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）／０．５Ｍ硫酸アンモニウムを１５分
間、１０ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）を１５分間、１０ｍＭリ
ン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）、０．３％Ｔｗｅｅｎ２０を１５分間流
した。最後の１５分間で溶出されてきた画分を集め、ｒｅｓｏｕｒｃｅＱ（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）１ｍｌに通し、流速１ｍｌ／分で、１０ｍ
Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）で１０分間洗浄した後、１０ｍＭリ
ン酸カリウムバッファー、０．５Ｍ塩化カリウムを１０分間流して溶出した。最
初の３分間の溶出画分を集め、ＰＤ−１０にて脱塩及びバッファーＡへの置換を
行い、精製Ｒ２標品を得た。

（ｂ）試験管内ヒトＲＮＲ活性阻害の測定 取得したヒトＲＮＲサブユニットを用い、試験管内ヒトＲＮＲ活性阻害試験を
行った。反応液の組成を以下に示す。

５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ（ｐＨ７．６） ５ｍＭ ＭｇＣｌ_２ １０ｍＭ ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ １００μＭ ＣＤＰ １ｍＭ ＡＴＰ ４０ｎｇ／ｍｌ 精製ヒトＲＮＲ Ｒ１サブユニット ４０ｎｇ／ｍｌ 精製ヒトＲＮＲ Ｒ２サブユニット 適当な終濃度の試験化合物を含む上記反応液２５μｌを調製し、３７℃で３０
分間、ＲＮＲによるＣＤＰからｄＣＤＰへの変換反応を行った。引き続き９５℃
で５分間熱処理した後、１０，０００×ｇ、５分間、４℃で遠心した。上清２０
μｌを回収後、２５ｍｇ／ｍｌのｓｎａｋｅ ｖｅｎｏｍ（Ｓｉｇｍａ社）を５
μｌ添加し、３７℃で６０分間脱リン酸化反応を行い、反応液中に存在するＣＤ
Ｐ、ＡＴＰ及び反応生成物のｄＣＤＰをそれぞれＣＲ、ＡＲ、ＣｄＲに完全に変
換した。反応液を９５℃で５分間熱処理し、１０，０００×ｇ、５分間、４℃で
遠心した。上清２０μｌに１８０μｌのアセトニトリルを加え、再度１０，００
０×ｇ、５分間、４℃で遠心し、その上清を分析サンプルとした。分析は高速液
体クロマトグラフィーで行った。分析条件を以下に示す。

カラム：Ｉｉｃｒｏｓｐｈｅｒ ＮＨ_２（Ｍｅｒｃｋ社） 流速：１．５ｍｌ／分 検出：２７０ｎｍ 溶出液：アセトニトリル−水（９０：１０、Ｖ／Ｖ） 既知濃度のＣｄＲの溶出時間及びピーク面積値と比較することで、分析サンプ
ル中のＣｄＲを同定し、その濃度を算出した。薬剤無処理時の反応から得られた
サンプル中のＣｄＲ濃度を、既知濃度の試験化合物を添加した反応から得られた
サンプル中のＣｄＲ濃度と比較することにより、上記条件下でのＲＮＲ活性を５
０％阻害する試験化合物の濃度を算出し、その値をＩＣ_５０とした。この結果、
化合物１のＲＮＲ阻害活性（ＩＣ_５０）は６．２８μＭであった。

試験例２：ＨｅＬａ Ｓ３細胞生育阻害試験： ９６穴マイクロタイタープレートの各ウエルに、１０％ 牛胎児血清及び２ｍ
Ｍグルタミンを含むＭＥＭ培地で１×１０^４個／ｍｌに調製したＨｅＬａ Ｓ３
細胞を０．１ｍｌずつ分注した。炭酸ガスインキュベーター内で２４時間、３７
℃で培養後、上記培地により適宜希釈した試験化合物を各ウエルに０．０５ｍｌ
ずつ加え、炭酸ガスインキュベーター内で３７℃、７２時間培養した。培養上清
を除去後、各ウエルを０．１ｍｌのＰＢＳバッファーで２度洗浄し、改めて各ウ
エルに０．１ｍｌの上記培地を添加した。

各ウエルの細胞数の測定には、ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｋｉ
ｔ ＩＩ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ社）を用いた。発色反応試
薬を添加後炭酸ガスインキュベーター内で３時間、３７℃で保温した後、マイク
ロプレートリーダーにより４９０ｎｍ及び６５５ｎｍの吸光度を測定し、各ウエ
ルごとの４９０ｎｍの吸光度から６５５ｎｍの吸光度を減じた値（差吸光度）を
算出した。無処理細胞と既知濃度の試験化合物で処理した細胞から得られた差吸
光度を比較することにより、細胞の増殖を５０％阻害する試験化合物の濃度を算
出し、それをＩＣ_５０とした。この結果、化合物１の細胞増殖阻害作用（ＩＣ_５
０）は９．３７μＭであった。

産業上の利用可能性 上記式（Ｉ）で表される本発明の化合物又はその塩は強いリボヌクレオチドリ
ダクターゼ阻害作用を有しており、水溶性が高く、生理食塩水やブドウ糖注射液
等の水溶性希釈液に補助剤なしに溶解することができる。本発明の化合物は、癌
治療剤などの医薬の有効成分として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ， ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，Ｋ Ｇ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，Ｓ Ｅ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ， ＺＷ (72)発明者 水上 民夫 東京都千代田区大手町一丁目６番１号 協 和醗酵工業株式会社本社内 (72)発明者 高橋 健 静岡県駿東郡長泉町下土狩1188 協和醗酵 工業株式会社医薬総合研究所内 (72)発明者 山下 順範 静岡県駿東郡長泉町下土狩1188 協和醗酵 工業株式会社医薬総合研究所内 (72)発明者 神田 優子 東京都町田市旭町３丁目６番６号 協和醗 酵工業株式会社東京研究所内 （注）この公表は、国際事務局（ＷＩＰＯ）により国際公開された公報を基に作 成したものである。 なおこの公表に係る日本語特許出願（日本語実用新案登録出願）の国際公開の 効果は、特許法第１８４条の１０第１項（実用新案法第４８条の１３第２項）に より生ずるものであり、本掲載とは関係ありません。

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の一般式（Ｉ）： 〔式中、Ｒ^１は−Ｒ^２−Ｘ^１−Ｒ^３−［式中、Ｒ^２及びＲ^３はそれぞれ独立に二
   価、三価、又は四価の基を示し；Ｘ^１は−ＣＨ_２−、−Ｏ−、又は−Ｎ（Ｒ^４）
   −（Ｒ^４は一価又は二価の基を示す）で表わされる基を示す］を示すが、Ｒ^２、
   Ｒ^３、及びＲ^４からなる群から選ばれる２又は３個の基は互いに結合して環状構
   造を形成してもよく；Ａｒ^１は１から３個の水酸基をその環上に有するアリール
   基、下記の式（Ａ）： で表される基、又は酸素原子、窒素原子、及び硫黄原子からなる群から選ばれる
   １から３個のヘテロ原子を環構成原子として有する単環性ヘテロアリール基を示
   すが、Ａｒ^１が示すこれらの基はその環上に１又は２個以上の置換基を有してい
   てもよい〕で表される化合物又はその塩。
2. 【請求項２】−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）（ＯＨ）で表されるリン酸エステルがＡｒ^１−
   Ｓ−Ｒ^１−Ｓ−で表される基に対してパラ位に置換した請求の範囲第１項に記載
   の化合物又はその塩。
3. 【請求項３】Ａｒ^１が４−ヒドロキシフェニル基である請求の範囲第１項に記載
   の化合物又はその塩。
4. 【請求項４】Ｒ^２及びＲ^３が互いに結合してＸ^１とともに飽和の５員の単環性環
   状構造を形成する請求の範囲第１項から第３項のいずれか１項に記載の化合物又
   はその塩。
5. 【請求項５】Ｘ^１が−Ｎ（Ｒ^４）−（Ｒ^４は一価又は二価の基を示す）で表され
   る基である請求の範囲第１項から第４項のいずれか１項に記載の化合物又はその
   塩。
6. 【請求項６】Ｒ^４が置換基を有していてもよいＣ_１−Ｃ_４のアルキル基である請
   求の範囲第５項に記載の化合物又はその塩。
7. 【請求項７】請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項に記載の化合物又は生
   理学的に許容されるその塩を有効成分として含む医薬。
8. 【請求項８】リボヌクレオチドレダクターゼの過剰発現に起因する疾患の予防及
   び／又は治療に用いる請求の範囲第７項に記載の医薬。
9. 【請求項９】癌治療剤である請求の範囲第７項に記載の医薬。
10. 【請求項１０】請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項に記載の化合物又は
    その塩を含むリボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤。
11. 【請求項１１】請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項に記載の化合物又は
    その塩を含む癌細胞に対する選択的増殖抑制剤。
12. 【請求項１２】請求の範囲第７項又は第８項に記載の医薬の製造のための請求の
    範囲第１項から第６項に記載の化合物又は生理学的に許容されるその塩の使用。
13. 【請求項１３】リボヌクレオチドレダクターゼの過剰発現に起因する疾患の予防
    及び／又は治療方法であって、請求の範囲第１項から第６項のいずれか１項に記
    載の化合物又は生理学的に許容されるその塩の予防及び／又は治療有効量をヒト
    を含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法。
14. 【請求項１４】癌の治療方法であって、請求の範囲第１項から第６項のいずれか
    １項に記載の化合物又は生理学的に許容されるその塩の治療有効量をヒトを含む
    哺乳類動物に投与する工程を含む方法。
15. 【請求項１５】癌治療剤の製造のための請求の範囲第１項から第６項のいずれか
    １項に記載の化合物又は生理学的に許容されるその塩の使用。
16. 【請求項１６】リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤の製造のための請求の範囲
    第１項から第６項のいずれか１項に記載の化合物又は生理学的に許容されるその
    塩の使用。
17. 【請求項１７】癌細胞に対する選択的増殖抑制剤の製造のための請求の範囲第１
    項から第６項のいずれか１項に記載の化合物又は生理学的に許容されるその塩の
    使用。