KR102012012B1

KR102012012B1 - 신규 유사 세라마이드 화합물, 및 그의 용도

Info

Publication number: KR102012012B1
Application number: KR1020170131556A
Authority: KR
Inventors: 박진오; 이지원; 전성현; 이재영; 이혜자; 권보경
Original assignee: 대봉엘에스 주식회사
Priority date: 2017-10-11
Filing date: 2017-10-11
Publication date: 2019-08-19
Anticipated expiration: 2037-10-11
Also published as: CN111201216B; US11471390B2; EP3696163A4; EP3696163A1; EP3696163C0; EP3696163B1; CN111201216A; WO2019074158A1; ES2955135T3; KR20190040795A; US20200330350A1

Abstract

본 발명은 신규 유사 세라마이드 화합물, 및 그의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세히는, 하기 화학식 1로 표현되는 유사세라마이드 화합물, 및 이의 화장료로서의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 유사세라마이드는 항산화, 항염, 미백, 보습효과과 있을 뿐 아니라, 합성공정이 간단하여 경제적이면서도, 낮은 친수성으로 인한 화장품 제형적 문제가 발생하지 않아, 화장료 용도에 사용하기에 적합하다.
[화학식 1]

상기 식에서, R₁은 탄소수 13 내지 21개이고, 카르복실기가 제외된 불포화 지방산의 잔기이다.

Description

신규 유사 세라마이드 화합물, 및 그의 용도{NOVEL PSEUDOCERAMIDE COMPOUNDS, AND THE USE OF THE SAME}

본 발명은 신규 유사 세라마이드 화합물, 및 그의 용도에 관한 것이다.

우리 몸에서 피부는 수분유출방지, 체온 조절, 감각 및 면역기능을 수행하며 자세하게는 피부의 각질층이 외부 자극 및 외래 물질 침입에 대한 보호 장벽 기능을 수행하고 있다. 건강한 피부는 표면이 매끄럽고 윤기가 있으며 탄력과 부드럽고 촉촉한 느낌이 있는 것을 의미하며 피부 자체가 함유하는 수분량은 피부결을 좌우하는 가장 중요한 요소이다. 피부의 탄력성이나 부드럽고 촉촉한 느낌은 피부의 가장 외층인 표피의 각질층에 존재하는 수분에 의해 유지되며 각질층의 수분 함량은 표피에서 생성 분비되는 지질 혼합체인 피지막과 각질층내에 존재하는 수용성 성분인 자연 보습인자(NMF: Natural Moisturing Factor)에 의해 결정된다. 그리고 표피의 수분 증발은 세포간 지질 (intercellular lipids)에 존재하는 세라마이드의 수분 유지 작용을 통해 이루어지며, 피부 내 세라마이드의 농도가 감소하면 각질층의 보호 장벽 기능이 감소되어 여러 피부학적 증상, 예컨대, 아토피 피부염 및 건선 증상 등이 나타난다고 보고되어 있다((a)Fulmer amp; Kramer, J. Invest . Derm. 1986, 86, 598-602. (b) Tupker R. A. et al., Acta Derm . Venereol . Stockh, 1990, 70, 1-5.). 나아가 세라마이드 양의 저하로 피부의 건조증이 발생하고 피부 표면의 방어 기능이 손실되어 외래 물질의 침입이 용이하게 되고 피부에 2차 감염을 유발함으로써 피부 거부 반응을 일으키게 된다. 자세하게는 침입물이 표층 세포의 케라티노사이트, 랑게르한스 및 멜라노사이트 등의 세포로부터 사이토카인을 방출하게 하여 염증 현상 등을 발생시키는 것이다. 따라서 피부장벽의 유지 및 개선을 위해서는 피부의 보습작용이 중요하며 일반 보습제에 비하여 세라마이드 계열 화합물 포함하는 생리학적 지질 복합물(physiologic lipid mixture)은 손상된 피부 장벽 기능의 회복을 촉진하는 것으로 보고된 바 있어, 그에 대한 요구가 이어지고 있는 실정이다. 특히 아토피 피부염 환자의 증상 개선에 중간 이상의 외용 스테로이드제제와 유사한 효과를 나타낸다는 임상 시험 결과가 발표된 바도 있다.

이러한 세라마이드의 중요성이 널리 알려지고, 이를 이용한 제품을 개발하기 위해 많은 화장품 및 제약회사가 연구를 진행하고 있다. 그러나, 천연 세라마이드는 추출 및 정제가 어렵고 경제적인 문제가 있어, 유수의 회사들은 피부 내에 존재하는 세라마이드와 구조적으로 유사하고, 기능적으로 같은 효과를 줄 수 있는 유사세라마이드의 개발에 많은 노력을 기울이고 있는 실정이다.

현재 대한민국 내에서 개발된 유사 세라미이드는 아모레퍼시픽사의 대한민국 공개특허 2017-0076561(특허문헌 1), 코리아나 화장품사의 대한민국 등록특허 10-0539965(특허문헌 2) 등을 들 수 있으나 어려운 제조방법으로 인한 단가 문제로 범용적인 사용에 제한을 받는다(이로써, 특허문헌 1, 2의 내용 전부는 본 명세서의 배경기술로서 인용·합체된다). 또한, 시판되고 있는 천연 또는 유사 세라마이드 화합물들은 낮은 친수성, 용해도 등으로 인해 고함량 제품을 만들기 어려운 한계가 있는 것으로 알려져 있다.

따라서, 유사 세라마이드의 물성을 보다 개선하고, 이와 동시에 생산공정이 간단하여 경제적으로도 유리한 유사 세라마이드에 대한 연구 개발이 필요한 지속적으로 요구되고 있다.

KR

10-2017-0076561

A (2017.07.04.)

KR

10-0539965

B1 (2006.01.10.)

상기에서 설명한 천연 세라마이드 화합물의 경제적인 문제와 낮은 친수성에 의한 제형적 어려움을 해결하기 위하여, 본 발명은 신규한 유사 세라마이드를 제공하고자 한다. 나아가 합성된 유사 세라마이드는 생체 활성을 촉진하여 피부의 신축성을 증진시킬 뿐 아니라, 항염 효과 및 미백효과도 나타낸다.

본 발명은 상술한 종래기술의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서,

하기 화학식 1로 표현되는 유사세라마이드 화합물을 제공한다.

[화학식 1]

또한 본 발명에 있어서, 상기 불포화 지방산은 미리스톨레산, 팔미톨레산, 사피엔산, 올레산, 엘라이드산, 박센산, 리놀레산, 리노엘라이드산, 리놀렌산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산, 에루스산, 또는 도코사헥사엔산인 것을 특징으로 하는 유사세라마이드 화합물을 제공한다.

또한, 하기 화학식 2로 표현되는 유사세라마이드 화합물을 제공한다.

[화학식 2]

또한, 하기 화학식 3으로 표현되는 설린올과 불포화 지방산 할로젠화물을 반응시키는 것을 특징으로 하는 청구항 1, 또는 청구항 2의 유사세라마이드의 제조방법을 제공한다.

[화학식 3]

또한, 본 발명의 유사세라마이드 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 유사세라마이드 화합물을 유효성분으로 함유하는 항염용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 유사세라마이드 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 유사세라마이드 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부보습용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 유사세라마이드는 항산화, 항염, 미백, 보습효과과 있을 뿐 아니라, 합성공정이 간단하여 경제적이면서도, 낮은 친수성으로 인한 화장품 제형적 문제가 발생하지 않아, 화장료 용도에 사용하기에 적합하다.

도 1은, 본 발명의 유사 세라미이드 화합물의 NO(Nitric Oxide)생성 억제 활성 측정결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는, 본 발명의 유사 세라미이드 화합물의 IL-6 생성 억제 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은, 본 발명의 유사 세라미이드 화합물의 PGE₂ 생성 억제 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는, 본 발명의 유사 세라미이드 화합물의 멜라닌 생성 저해 효과 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는, 본 발명의 유사 세라미이드 화합물의 멜라닌 생성 저해 효과 측정실험에 사용된 실험군과 대조군의 결과를 나타낸 사진이다.

이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명의 일측면은, 하기 화학식 1로 표현되는 유사세라마이드 화합물에 대한 것이다.

[화학식 1]

상기 불포화 지방산은 미리스톨레산(Myristoleic acid), 팔미톨레산(Palmitoleic acid), 사피엔산(Sapienic acid), 올레산(Oleic acid), 엘라이드산(Elaidic acid), 박센산(Vaccenic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 리노엘라이드산(Linoelaidic acid), 리놀렌산(Linolenic acid), 아라키돈산(Arachidonic acid), 에이코사펜타엔산(Eicosapentaenoic acid), 에루스산(Erucic acid), 또는 도코사헥사엔산(Docosahexaenoic acid)인 것일 수 있다.

특히, 상기 불포화 지방산이 특별히 α-리놀렌산인 경우, 하기 화학식 2로 표현되는 유사세라마이드 화합물일 수 있다.

[화학식 2]

상기 화학식 2의 화합물은, 여타의 다른 불포화 지방산 잔기가 포함된 화합물들에 비해, 보다 우수한 항산화, 항염, 피부 보습효과를 나타내는 효과가 있어, 보다 바람직하게 선택된다. 이에 대한 보다 상세한 이해는, 후술할 실시예 및 실험예를 통하여 행하여 질 수 있을 것이다.

본 발명의 다른 측면은, 하기 화학식 3으로 표현되는 설린올(serinol; 2-amino-1,3-propanediol; CAS No. 534-03-2)과 불포화 지방산 할로젠화물을 반응시키는 것을 특징으로 하는 유사세라마이드의 제조방법에 대한 것이다.

[화학식 3]

본 발명의 유사 세라마이드의 기본적인 설계는 천연 세라마이드의 생합성 경로 상에서, sphingosine(phytosphingosine)을 대신하여 설린올(serinol)을 사용한 생체모방기술(biomimetics)을 적용한 것이다.

따라서, 발명은 설린올(Serinol)을 반응 출발물질로 하고, 이에 불포화 지방산, 예를 들어, 올레산(oleic acid), 리놀레산(Linoleic acid) 또는 리놀렌산(Linolenic acid)과의 반응을 통해, N-(1,3-디하이드록시프로판-2-닐)올레아미드(9Z, 12Z)-N-(1,3-디하이드록시프로판-2-닐)옥타데카-9,12-디엔아마이드(9Z, 12Z, 15Z)-N-(1,3-디하이드록시프로판-2-닐)옥타데카-9,12,15-트리엔아마이드로 명명되는 화합물을 얻을 수 있다. 이에 대한 상세한 이해는 하기 반응식 1에 도식화된 스킴을 참고할 수 있을 것이다.

[반응식 1]

본 발명 제조방법에서 사용될 수 있는 불포화 지방산은, 미리스톨레산(Myristoleic acid), 팔미톨레산(Palmitoleic acid), 사피엔산(Sapienic acid), 올레산(Oleic acid), 엘라이드산(Elaidic acid), 박센산(Vaccenic acid), 리놀레산(Linoleic acid), 리노엘라이드산(Linoelaidic acid), 리놀렌산(Linolenic acid), 아라키돈산(Arachidonic acid), 에이코사펜타엔산(Eicosapentaenoic acid), 에루스산(Erucic acid), 또는 도코사헥사엔산(Docosahexaenoic acid)을 예시할 수 있다.

또한, 상기 불포화 지방산들 간에는 탄소수, 이중결합의 갯수 등에 차이가 있을 뿐이므로, 반응식 1에 예시한 불포화 지방산 이외의 것들에 대해서도 기본적으로 반응식 1과 동일한 반응 스킴을 통해 제조될 수 있다.

상기 불포화 지방산 할로젠화물은, 카르복실기의 -OH 부분이 할로겐 원소로 치환된 것을 말하며, 치환될 수 있는 할로겐의 예시로, 불소, 염소, 브롬, 요오드, 아스타틴을 들 수 있다. 이러한 불포화 지방산 할로젠화물은, 불포화 지방산의 할로젠화(halogenation)을 통해 준비될 수 있으며, 합성방법은 당해 기술분야의 통상의 기술을 가진 자에 자명한 것이므로, 이에 대한 자세한 설명은 생략한다.

본 발명의 또 다른 측면은, 상기 본 발명의 유사세라마이드 화합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

특히, 본 발명은, 상기한 유사세라마이드 화합물을 합성하였다는 것과 그의 제조방법을 제공하는 것에 그치는 것이 아니라, 화장품 용도로서의 항산화, 항염, 피부미백, 및 피부보습 효능·효과를 확인하고 이를 완성한 것에도 있다. 따라서, 청구항에 개시된 물질 그 자체가 신규한 물질인지와는 별론으로, 이것들의 항산화, 항염, 피부미백, 및 피부보습 등과 같은 화장품으로서의 용도를 발견한 것에도 큰 기술적 의의가 부여되어야 할 것이다. 이에 대한 보다 상세한 이해는, 후술할 실시예 및 실험예를 통하여 행하여 질 수 있을 것이다.

상기 항산화는, ‘산화적 스트레스 억제 또는 경감시키는 것’을 말하고, 상기 항염은, ‘염증성 물질의 발생 억제 또는 완화시키는 것’을 말하고, 상기 피부미백은, ‘피부 멜라닌 색소의 생성을 억제 또는 경감시키는 것’말하며, 상기 피부보습은, ‘피부의 수분유지를 돕거나 기여하는 것’을 말한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당해 기술분야의 통상의 기술자들 사이에서 자명한 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다. 이러한 배합 성분의 예시로는, 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수, 비타민(특히, 비타민 C, 토코페롤 등) 등을 들 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있고, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어. 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

이하, 본 발명에 대하여 실시예 및 실험예를 들어 보다 더 상세히 설명한다. 다만, 이하의 실시예 및 실험예는 발명의 상세한 설명을 위한 것일 뿐, 이에 의해 권리범위를 제한하려는 의도가 아님을 분명히 해둔다.

실시예

실시예 1: N -(1,3- 디하이드록시프로판 -2-닐)올레아미드의 제조

반응 플라스크에 설린올(Serinol) 25.51g과 트리에틸아민(triethylamine) 47ml를 넣고 에탄올 100ml와 디클로로메탄 250ml를 넣은 다음 저온(약 5℃)으로 온도를 내렸다. 여기에 올레일 클로라이드(oleyl chloride) 104ml와 디클로로메탄 100ml를 섞은 용액을 반응 플라스크에 적가하였다. 반응 용액을 실온에서 6시간 교반 한 다음 용액을 감압·농축하였다. 농축된 액을 디클로로메탄 500ml에 녹이고 0.5N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 물로 씻어 주었다. 유기 용액층을 무수황산마그네슘으로 건조하고 여과한 다음 유기용매를 감압·농축 후, 재결정하여 미황색 고체 83g(83%)을 얻었다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 7.41 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.34-5.31 (m, 2H), 4.57-4.54 (m, 2H), 3.71-3.67 (m, 1H), 3.39-3.36 (m, 4H), 2.06 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.99-1.98(m, 4H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.29-1.24 (m, 20H), 0.86 (t, J = 6.2 Hz, 3H).; ¹³C NMR (100MHz, CDCl₃) δ 172.03, 129.60, 60.19, 52.70, 40.13, 35.39, 31.25, 29.10, 29.06, 28.80, 28.68, 28.65, 28.55, 26.59, 26.54, 25.30, 22.06, 13.92.; FT-IR (Neat) 3301 cm^-1, 2925 cm^-1, 2852 cm^-1, 1641 cm^-1, 1549 cm^-1, 1468 cm^-1, 1386 cm^-1, 1248 cm^-1, 1073 cm^-1, 1059 cm^-1.; MS(ESI): m/z = 378.30 [M+Na]⁺.

실시예 2: (9Z, 12Z)-N-(1,3- 디하이드록시프로판 -2-닐)옥타데카-9,12-디엔아마이드의 제조

반응 플라스크에 설린올 0.9g과 트릴에틸아민 2ml을 넣고 메탄올 3ml와 디클로로메탄 20ml를 넣은 다음 저온(약 5℃)으로 온도를 내렸다. 여기에 리놀레산 클로라이드 3.0g와 디클로로메탄 20ml를 섞은 용액을 반응 플라스크에 적가하였다. 반응 용액을 실온에서 6시간 교반한 다음 용액을 감압·농축하였다. 농축된 액을 디클로로메탄 30ml에 녹이고, 0.5N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 물로 씻어 주었다. 유기 용액층을 무수황산마그네슘으로 건조하고 여과한 다음 액을 감압·농축 후 재결정하여 연노랑색 고체 2.8g(80%)을 얻었다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 7.41 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.36-5.30 (m, 4H), 4.57-4.54 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 1H), 3.39-3.37 (m, 4H), 2.74 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.08-1.99 (m, 6H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.32-1.25 (m, 16H), 0.88-0.86 (m,, 3H).; ¹³C NMR (100MHz, CDCl₃) δ 172.03, 129.70, 127.71, 60.19, 52.70, 40.13, 35.39, 30.87, 29.02, 28.70, 28.64, 28.58, 26.62, 26.58, 25.31, 25.18, 21.94, 13.89.; FT-IR (Neat) 3301 cm^-1, 2927 cm^-1, 2853 cm^-1, 1641 cm^-1, 1548 cm^-1, 1467 cm^-1, 1073 cm^-1, 1058 cm^-1.; MS(ESI): m/z = 376.28 [M+Na]⁺.

실시예 3: (9Z, 12Z, 15Z)-N-(1,3- 디하이드록시프로판 -2-닐)옥타데카-9,12,15-트리엔아마이드의 제조

반응 플라스크에 설린올 0.9g과 트릴에틸아민 2ml을 넣고 메탄올 3ml와 디클로로메탄 20ml를 넣은 다음 저온(약 5℃)으로 온도를 내렸다. 여기에 α-리놀렌산 클로라이드(3.0g)와 디클로로메탄(20ml)를 섞은 용액을 반응 플라스크에 적가하였다. 반응 용액을 실온에서 6시간 교반한 다음 용액을 감압·농축하였다. 농축된 액을 디클로로메탄(30ml)에 녹이고, 0.5N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액, 물로 씻어 주었다. 유기 용액층을 무수황산마그네슘으로 건조하고 여과한 다음 액을 감압·농축 후 재결정하여 연노랑색 고체 노랑색 고체 2.9g(82%)을 얻었다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 7.41 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.36-5.30 (m, 6H), 4.57-4.54 (m, 2H), 3.70-3.69 (m, 1H), 3.38-3.32 (m, 4H), 2.79-2.37 (m, 4H), 2.08-2.02 (m, 6H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.30-1.26 (m, 6H), 0.93 (t, J = 7.6 Hz, 3H).; ¹³C NMR (100MHz, CDCl₃) δ 172.53, 131.95, 130.37, 130.19, 128.39, 128.38, 128.20, 128.00, 127.44, 60.67, 53.18, 35.88, 31.36, 29.51, 29.18, 29.14, 29.06, 27.11, 27.06, 25.79, 25.66, 25.57, 22.44, 20.50, 14.58, 14.39.; FT-IR (Neat) 3300 cm^-1, 2928 cm^-1, 2853 cm^-1, 1641 cm^-1, 1548 cm^-1, 1467 cm^-1, 1424 cm^-1, 1387 cm^-1, 1248 cm^-1, 1073 cm^-1, 1058 cm^-1.; MS(ESI): m/z = 374.27 [M+Na]⁺.

실시예 4 내지 6 - 화장료 조성물의 제조

하기 표 1의 조성으로 비교예 1, 및 실시예 4~6의 화장료 조성물의 제조하였다. 제조시 실시예 1 내지 3의 유사세라마이드는 조성물 전체에 잘 용해되었으며, 제형상 문제를 일으키지 아니하였다.

성분	비교예	실시예
성분	1	4	5	6
실시예 1	-	0.25	-	-
실시예 2	-	-	0.25	-
실시예 3	-	-	-	0.25
Butylene Glycol	20.00	20.00	20.00	20.00
Glyceryl Stearate	4.44	4.44	4.44	4.44
Dicaprylyl Carbonate	4.44	4.44	4.44	4.44
Cocoglycerides	4.44	4.44	4.44	4.44
Glycerin	2.67	2.67	2.67	2.67
1,2-Hexanediol	1.07	1.07	1.07	1.07
Cetearyl Alcohol	0.89	0.89	0.89	0.89
Phenoxyethanol	0.27	0.27	0.27	0.27
Tocopheryl Acetate	0.09	0.09	0.09	0.09
Sodium Polyacrylate	0.09	0.09	0.09	0.09
Water	To 100

실험예

실험예 1: 유사 세라미이드 화합물의 NO(Nitric Oxide)생성 억제 활성 측정

상시 실시예에서 설명한 유사 세라마이드 화합물이 대식세포(macrophage cell)에서 LPS (lipopolysaccharide)에 의해 유도되는 NO (nitric oxide)의 생성을 억제하는 활성이 있는 지를 측정하였으며 양성 대조군으로는 2-Amino-4-methylpyridine (10 μM)을 사용하였다. RAW 264.7 대식세포(macrophage cell)에서 LPS를 처리하여 NO 합성 효소(NO synthase enzyme)을 발현시키고, 생성된 NO의 양을 Griess의 방법으로 측정하였다. Griess 시약 (1％ 설파닐아민, 0.1％ N-(1-나프틸)-에틸렌 디아민 디하이드로클로라이드, 2.5％ H₃PO₄)은 NO를 산화시켜 NO₂로 변화시키며 생성된 NO₂는 540 nm에서 흡광도를 측정하여 그 농도를 NaNO₂의 검량선을 이용하여 구하였다. 즉, RAW 264.7 대식세포를 DMEM 배지 1㎖ 당 1 X 10⁵세포가 되도록 배양한 다음, 48 웰에 넣고 18 시간 동안 배양하여, 세포가 부착되도록 한 다음, LPS (1㎍/㎖) 20 ㎕, 양성대조군(positive control)로서 2-Amino-4-methylpyridine를 포함한 각각의 시료를 100㎕씩 넣고 20시간 배양시킨 후, 배양액에 생성되어 있는 NO의 양을 Griess reagent를 이용하여 정량하였다.

결과는 하기 표 2 및 도 1에 도시한 바와 같았다.

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 세포독성을 측정하기 위해 Raw264.7 macrophase의 세포 생존율을 MTT assay로 분석하였다. 세포 MTT 반응에서 80% 이상의 생존율을 보인 경우 세포독성이 없는 것으로 판단되며, 상기 화합물 1~50μg/mL 농도에서 세포 생존율 95% 이상을 나타내어Raw264.7 macrophase에 대해 독성을 나타내지 않는 것이 확인되었고(표 1), 추가적인 항염증 실험은 1~50μg/mL 농도에서 진행하였다.

표 1 및 도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예 화합물의 NO생성 억제 활성은 양성 대조군 2-Amino-4-methylpyridine에 비해 적은 활성을 보였으나 농도의존적으로 시료 처리시 NO 생성 억제 활성을 보였다.

실험예 2: 유사 세라마이드 화합물의 염증성 cytokine 생성억제 평가

상시 실시예에서 설명한 유사 세라마이드 화합물이 대식세포(macrophage cell)에서 LPS (lipopolysaccharide)에 의해 유도되는 IL-6, PGE₂의 생성을 억제하는 활성이 있는 지를 측정하였으며 양성 대조군으로는 Dexanmethason (10μM)을 사용하였다.

IL-6와 PGE2는 대식세포에서 lipopolysaccharide (LPS) 등과 같은 자극물질로 활성화 된 세포 내 여러 신호 전달 체계에 인해 생성된다. 과량으로 생성될 경우 염증반응을 일으키며 LPS에 의해 과량 생성된 IL-6와 PGE2를 억제하는 것으로 항염증 활성을 확인할 수 있다. Raw264.7 macrophage를 24-well plate 에 3×105 cells/well이 되도록 분주하고 24시간 배양하였다. 이후 시료를 농도별로 처리하여 1시간동안 배양 후 각 well에 LPS를 1 μg/Ml 농도로 처리하여 24시간 배양한 상층액을 취하여 IL-6, PGE2의 생성량을 측정하였다.

결과는 도 2, 및 도 3에 나타낸 바와 같았다.

도 2, 및 도 3에 나타낸 결과에서 볼 수 있듯이, 실시예 화합물들에 대해서는 양성 대조군 Dexanmethason과 유사한 활성을 보였으며 농도의존적으로 시료 처리시 IL-6, PGE₂ 생성 억제 활성을 보였다.

실험예 3: 유사 세라마이드 화합물의 멜라닌 생성 저해 효과

상기 실시예에서 합성한 화합물에 대해 세포내에서의 멜라닌 생성억제 효과를 측정하였다(Chang and Chen, 2012).

세포실험에 사용된 Fetal bovine serum (FBS), Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)은 Gibco (USA)에서 구입하여 사용하였고, 세포주는 한국 세포주 은행에서 구입한 마우스 유래 B16F10(흑색종 세포)를 사용하였다. 10%의 FBS (Gibco)와 1% antibiotic-antimycotic (Gibco)이 첨가된 DMEM (Gibco)를 사용하여 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였으며, 3∼4일 간격으로 계대 배양을 시행하였다. 배양된 B16F10 세포를 0.05% 트립신(Trypsin)-EDTA로 떼어내고, 24 배양용기(well plate)에 동일한 수 (2.0X10⁴ cells/well)로 접종한 다음, 24시간 후 α-MSH(100 nM) 과 시험약물을 처리하고 3일간 배양하였다. 3일 배양이 끝난 후 1N NaOH를 처리하여 80℃에서 1시간 동안 반응시켜 세포에 포함된 멜라닌을 녹여내어 405 nm에서의 흡광도 측정을 통해 멜라닌의 양을 측정하였다. 양성 대조군으로 알부틴(Arbutin)(500 ppm)을 사용하였으며, 결과는 도 4, 및 도 5에 나타낸 바와 같았다.

도 4, 및 도 5에 나타낸 결과에서 볼 수 있듯이, 실시예 화합물들에 대해서는 낮은 농도에서 양성 대조군 Arbutin과 유사하거나 높은 활성을 보였으며 농도의존적으로 시료 처리시 멜라닌 생성 저해 활성을 보였다.

실험예 4: 인체에서의 피부 보습력 증가

상기 실시예 4 내지 6, 및 비교예 1에서 제조된 로션류 화장품에 대한 보습력을 비교하였다. 일반 20-50대의 성인 남녀 23명을 대상으로 수분량을 측정하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 30분, 1시간 및 3시간 경과한 시점을 항온, 항습 조건(24℃, 상대습도 40~50%)에서 수분 측정은 Corneometer (Cutometer ®, dual MPA580, Germany)를 이용하였다. 수분 측정 시 재현성을 위해 probe를 측정 피부표면에 부착하여 한 부위 주변을 3번 측정 평균값을 사용하였으며, 수치가 높을수록 수분이 많은 것을 의미한다.

결과는 하기 표 3에 나타낸 바와 같았다.

구분	도포 전 피부 수분량 (평균값)	도포 후 피부 수분량(평균값)
구분	도포 전 피부 수분량 (평균값)	1시간 후	3시간 후
비교예 1	28.9	43.9	41.8
실시예 4	28.9	61.2	54.5
실시예 5	28.9	60.1	57.4
실시예 6	28.9	59.3	57.3

상기 결과로부터, 수화된 피부각질층은 전기적 성질이 변화하게 되는데 건조된 각질층은 약한 전기 전도도를 나타내며, 수화된 각질층은 유전상수(dielectric constant)의 증가로 인해 강한 전기 전도도를 가지게 된다. 따라서 피부의 수분은 그 피부의 전기용량과 비례하게 되는 결과를 근거하여, 상기 표 3으로부터 본 발명의 실시예의 경우, 도포 전과 비교예 1에 비하여 피부의 전기 전도도가 높게 나타난다. 이에 따라 보습효과가 우수한 소재임을 알 수 있다.

실험예 5: 인체에서의 피부 유분량 증가

상기 실시예 4~6, 및 비교예 1에서 제조된 로션류 화장품에 대한 유분량 증가를 비교하는 실험을 하였다.

피부 유분도 측정을 위하여 Sebumeter®SM815(Cutometer ®, dual MPA580, Germany)를 이용하여 유분측정기(sebumeter)를 이용하여 측정부위에 반투명 지질흡수테이프가 부착되어 있는 probe를 피부표면에 30초 간 가볍게 눌러 피지를 흡착시킨 후, 측정구에 눌러주어 빛이 투과하는 정도(광학적 반사원리-photometric reflection)를 측정하였고, 피부표면에 1회씩 측정 하였다. 측정단위는 유분량을 ㎍/㎠로 표시하였다.

결과는 하기 표 4와 같았다.

구분	도포 후 피부 유분량(평균값)
구분	1시간 후	3시간후
비교예 1	68.6	44.3
실시예 4	151.7	95.7
실시예 5	165.5	91.1
실시예 6	149.3	73.2

상기 표 4으로부터 본 발명의 실시예의 경우, 비교예 1에 비하여 전반적으로 피부의 유분량이 높게 나타난다. 이에 따라 보습에 도움을 주는 소재임을 알 수 있고, 실시예 6의 경우, 보습력은 다른 실시예들과 비슷한 수준임에도 불구하고 유분량은 다른 실시예들에 비해 비교적 적게 나왔다.

Claims

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하기 화학식 2로 표현되는 유사세라마이드 화합물.
[화학식 2]
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청구항 3의 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물.
청구항 3의 화합물을 유효성분으로 함유하는 항염용 화장료 조성물.
청구항 3의 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물.
청구항 3의 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부보습용 화장료 조성물.