KR20020006786A - 미생물의 당발효여부의 단시간 검사를 위한 배지와 그검사법 - Google Patents
미생물의 당발효여부의 단시간 검사를 위한 배지와 그검사법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 당을 발효할 수 있는 미생물과 발효할 수 없는 미생물을 4시간만에 감별하는 검사법에 관한 것이다. 즉, 장내세균과 비장내그람음성균의 생화학적 동정에서 이를 시작하는 첫 단계가 포도당을 발효하는지의 여부를 결정하는 것이다. 상기 과정을 단시간내에 처리하기 위하여 기존에는 보통 포도당이 포함되어 있는 당발효 배지에 감별하고자 하는 미생물을 접종하여 18∼24시간 배양한 뒤에 미생물의 당 발효여부 결과를 알 수 있고 그 결과에 따라 추가적인 검사를 하여 동정을 하던 것을 기존의 포도당이 포함되어 있는 당발효 배지에 미생물이 필요로 하는 이스트 추출물과 소고기 추출물의 영양물질을 첨가하고, 지시약의 성분을 감소시키고, 배지의 pH를 조정함으로써 당발효대사가 빨리 진행되도록 하여 3∼4시간내에 미생물의 포도당 발효 여부를 확인함으로써 전체적인 미생물 동정시간을 단축할 수 있다.
따라서 병원에서 환자에 대한 정확하고 신속한 치료가 가능하고, 식품 유통업체에서는 결과를 대기하는 시간의 단축을 통해 빠른 유통제품에 따른 신선도 유지가 가능하고 유통제품의 폐기율을 낮출 수 있다.
Description
장내세균과 비장내그람음성균 등의 미생물의 생화학적 동정에서, 첫단계는 포도당을 발효하는지의 여부를 결정하는 것이다. 즉, 당 발효 대사 기능이 있는 미생물과 상기 기능이 없는 미생물간에 추가 검사의 방법을 달리함에 따라, 상기 당 발효 여부를 확인하는 단계를 최우선으로 실시한다. 그러나 상기 과정은 보통 포도당이 포함되어 있는 당발효 배지에 감별하고자 하는 미생물을 접종하여 18∼24시간 배양한 뒤에 미생물의 당 발효여부 결과를 알 수 있고 그 결과에 따라 추가적인 검사를 진행하여 검사미생물의 동정을 실시하므로 상기 기존의 당발효검사를 통할 경우 최종 미생물 동정의 완료는 최소 48시간후에 결과를 알 수 있어서 미생물의 신속한 동정을 진행할 수 없다.
이에 대한 예로서, 현재 가장 널리 쓰이고 있는 프랑스 바이오메리으 (BioMeriuex)의 오에프 배지(OF medium)는 균 접종을 한 뒤 24시간 배양을 한 후 색깔 변화를 판독하여 당발효여부를 결정하고, 상기 결과에 따라 미생물 동정 키트를 선택하여 균을 접종한 뒤에 미생물의 동정을 실시한다. 따라서 상기 당발효여부 확인부터 최종 미생물동정 확인까지의 과정은 최소 48시간이 소요되므로 신속히 치료해야 될 환자이거나 식품유통업체 등에서는 균동정 업무의 소요시간에 따라 치료 시간 또는 처리시간의 지연으로 많은 피해가 발생할 수 있다.
본 발명의 목적은 상기 문제점을 해결하기 위하여 단시간내에 미생물의 당발효여부를 확인할 수 있는 검사시약을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 검사시약을 이용한 단시간내에 미생물의 당발효여부를 확인하는 검사방법을 제공하는 것이다.
도1은 본 발명의 검사법에 대한 전체 순서를 나타낸 개략도이다.
본 발명은 미생물 동정을 위한 검사 방법의 선택에서, 가장 큰 기준이 되는 검사대상인 미생물(검체균)의 당 발효대사과정의 존재여부를 단시간에 확인하는 지시약을 포함한 배지 및 상기 배지를 이용한 검사법에 관한 것이다. 즉, 검체균에 대한 상기 당 발효대사과정의 존재여부 확인결과를 4시간만에 알아, 상기 당발효여부의 확인결과에 따라 선택된 동정 키트를 이용한 검체균 동정이 24시간내에 이루어질 수 있도록 한 것이다.
본 발명은 기존의 당발효 배지에 미생물이 필요로 하는 영양물질(이스트 추출물 : Yeast Extract, 소고기 추출물 : Beef Extract)을 첨가하여 당분해속도를 증가시키는 것으로서 일반적인 당발효배지는 증류수 1000㎖에 포도당(Glucose) 10g, 펩톤(Peptone) 2g, 제2인산칼륨(Dipotassium Phosphate) 0.3g, BTB(Bromthymol Blue) 0.08g을 첨가한 후에 pH를 6.6∼7.0으로 조정하여 제조되는 것에 비하여, 본 발명은 상기 일반적인 당 발효배지중에 BTB첨가량을 감소하여 0.03∼0.05g을 첨가하고 pH=7.1 또는 중성으로 하였으며 미생물 생장에 유용한 영양물질인 이스트 추출물(Yeast Extract) 1∼2g, 소고기 추출물(Beef Extract) 3∼4g을 상기 용액에 첨가하여 당발효대사가 최대 4시간내에 신속히 일어나도록 하였다.
상기 배지를 이용한 검사법은 도1에 나타내었다. 즉, 상기 방법으로 제조한 배지를 뚜껑이 있는 튜브에 약 4∼5㎖정도로 분주한 후 맥파랜드 네페로미터 기준(McFarland Nephelometer Standard) 탁도 1 (Mcf.=1)에 맞추어 균을 접종하고 발효대사는 공기를 이용하지 않는 과정이므로 균접종한 배지위에 미네랄 오일을 1cm두께로 덮은 다음 37℃에서 4시간동안 배양한다. BTB는 산성에서는 노란색, 염기성에서는 푸른색을 띄는 지시제이므로 결과 판독시 접종한 균이 포도당(Glucose)을 발효하면 강산을 생성해 pH를 낮추므로 배지내 지시약인 BTB의 색깔이 노란색으로 변해 양성으로 판단하고 음성은 이와 반대로 포도당(Glucose)을 분해하지 못하므로 푸른색으로 배지의 색깔 변화가 없다.
상기 검사법을 통하여 검체균의 당발효대사 가능 여부를 판단하고 상기 결과에 따라 양성의 결과를 나타낸 경우는 포도당 발효 미생물 동정 키트를 이용하여 검체균의 동정을 실시하고, 상기 결과가 음성으로 나타난 경우에는 포도당 비발효 미생물 동정 키트를 이용하여 검체균의 동정을 실시한다.
상기 신속한 당발효를 위한 배지를 활용하여 비발효균주 3종 및 발효균주 3종에 대한 4시간 배양후의 결과를 아래 표에 나타내었다.
| 신속 당발효 배지(Rapid Fermentation Medium) | ||
| 대상균주 | 4시간 배양후의 판독결과 | |
| 비발효균주 | 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa) | 음성(초록) |
| 프라보박테리움 메니고셉티컴(Flavobacterium meningosepticum) | 음성(초록) | |
| 아시네토박터 바우마니(Acinetobacter baumanii) | 음성(초록) | |
| 발효균주 | 크레브실라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae) | 양성(노랑) |
| 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabillis) | 양성(노랑) | |
| 시트로박터 프론디이(Citrobactor freundii) | 양성(노랑) |
상기 결과에서 본 발명의 신속한 당발효배지를 이용할 경우에 4시간의 배양시간이 당발효여부를 평가하는데 있어서 충분한 시간임을 확인할 수 있다.
검체균의 당발효여부를 4시간에 검사할 수 있음에 따라 세균의 동정에 걸리는 전체 시간을 20시간정도 단축할 수 있고, 이에 따라 세균의 동정에 의한 병원에서 환자에 대한 정확하고 신속한 치료가 가능하고, 식품 유통업체에서는 결과를 대기하는 시간의 단축을 통해 빠른 유통제품에 따른 신선도 유지가 가능하고 유통제품의 폐기율을 낮출 수 있다.
Claims (4)
- 미생물의 당발효 여부를 확인하는 당발효배지에 영양물질을 첨가함을 특징으로 하는 미생물의 당발효여부의 단시간 검사를 위한 배지
- 제1항에서, 상기 영양물질이 이스트 추출물과 소고기 추출물임을 특징으로 하는 미생물의 당발효여부의 단시간 검사를 위한 배지
- 제2항에서, 상기 배지가증류수 1000㎖에 포도당(Glucose) 10g, 펩톤(Peptone) 2g, 제2인산칼륨 (Dipotassium Phosphate) 0.3g, BTB(Bromthymol Blue) 0.03∼0.05g을 첨가하고;pH를 7.1로 조정하고; 그리고,이스트 추출물(Yeast Extract) 1∼2g, 소고기 추출물(Beef Extract) 3∼4g을 첨가하여 제조되는 것을 특징으로 하는 미생물의 당발효여부의 단시간 검사를 위한 배지
- 제1항 내지 제3항중의 어느 한 항의 배지를 뚜껑이 있는 튜브에 약 4∼5㎖정도로 분주하는 단계;맥파랜드 네페로미터 기준(McFarland Nephelometer Standard) 탁도 1 (Mcf.=1)에 맞추어 균을 접종하는 단계;균접종한 배지위에 미네랄 오일을 1cm두께로 덮은 다음 37℃에서 4시간동안 배양하는 단계; 및,배지의 색깔이 노란색으로 변하면 양성으로 접종한 균이 포도당(Glucose)을 발효하는 것으로, 배지의 색깔이 푸른색 또는 초록색이면 음성으로 접종한 균이 포도당(Glucose)을 발효하지 못하는 것으로 판단하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물의 당발효여부의 단시간 검사법
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| PG1501 | Laying open of application | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20021230 Patent event code: PE09021S01D |
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| E601 | Decision to refuse application | ||
| PE0601 | Decision on rejection of patent |
Patent event date: 20030313 Comment text: Decision to Refuse Application Patent event code: PE06012S01D Patent event date: 20021230 Comment text: Notification of reason for refusal Patent event code: PE06011S01I |