KR20090051803A - 돼지 주조직적합성 복합체 제 3 영역에 위치하는염기변이의 동정 - Google Patents

돼지 주조직적합성 복합체 제 3 영역에 위치하는염기변이의 동정 Download PDF

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Abstract

본 발명은 조직이식의 장기대체 동물모델인 돼지의 주조직적합성복합체인 SLA (swine leukocyte antigen) class III 영역 내에 존재하는 유전자들로부터 나타나는 미스센스 돌연변이에 관한 것이다.
보다 구체적으로, SLA class III 영역 내에 존재하는 55 개의 유전자들의 mRNA 서열을 분석하고, 이를 이용하여 게놈 상에서의 정확한 코딩영역을 결정하여, 이 결과를 바탕으로 코딩 영역을 증폭할 수 있는 프라이머를 제작 및 증폭함으로써 다이렉트 시퀀싱 (direct sequencing)을 실시하여 아미노산 치환의 원인이 되는 미스센스돌연변이 (missense mutation)의 동정에 관한 것이다.
본 발명에 의하여 돼지의 유전형질 동질화를 위한 SLA class III 영역 내 유전자들의 단상형 (haplotype) 분석 및 사람의 질병과 관련하여 사람과 돼지의 연관성을 분석함에 있어서 중요한 자료로서의 활용을 기대할 수 있다.
돼지, 조직이식, SLA, missense mutation, direct sequencing, 단상형 (haplotype)

Description

돼지 주조직적합성 복합체 제 3 영역에 위치하는 염기변이의 동정{Identification of missense mutation assigned to the SLA class III region}
본 발명은 조직이식의 장기대체 동물모델인 돼지의 주조직적합성복합체인 SLA (swine leukocyte antigen) class III 영역 내에 존재하는 유전자들로부터 나타나는 미스센스 돌연변이의 동정에 관한 것이다.
주조직적합성복합체(major histocompatibility complex; MHC)는 세포 상호작용 및 자신과 비자신의 구별에 중요한 역할을 하는 연관된 유전자들의 집합으로서, 항원을 이식하는 T-세포의 면역반응에 있어서 매우 중요하게 작용한다(Rothbard와 Gefter, 1991; Ierino 등, 1999). 즉, MHC 내에는 조직이식을 받아주는 성질을 결정하는 여러 개의 주조직적합 유전자들이 복합적으로 위치하고 있고, 항원제시세포 (antigen presenting cell; APC)는 항원의 일부를 주조직적합체와 결합시킨 후 MHC-항원 peptide 복합체를 T-세포에 제시함으로서 T-세포가 항원을 인식하게 하여 면역반응을 유도한다. 따라서 MHC는 T-세포의 면역반응에서 매우 중요하며 결과적 으로 생체의 전체 면역반응에서도 매우 중요하다.
최근 세계적으로 의학 분야에서 인공장기의 필요성이 제기되어 인간의 장기를 대체하기 위한 적당한 동물로서 돼지의 중요성이 높아지고 있다. 특히, 미니돼지를 대상으로 무균돼지의 생산과 더불어 돼지의 면역시스템에 대한 연구가 초미의 관심사가 되고 있다(Sachs, 1994; Chen 등, 2004). 돼지를 이용한 종간장기이식 기술의 상용화를 위해서는 장기이식에 사용할 동물의 체계적인 육종이 필요하다. 장기이식용 동물의 기준은 이식을 했을 경우 균일한 결과를 예상할 수 있어야 하는데 이를 위해서는 이식용 동물의 유전형질 동질화가 필요하다. 유전적 동질화 시스템이 잘 발달된 inbred 마우스의 연구는 MHC 연구를 통하여 출발하였으며, 돼지에서도 장기이식용 동물을 생산하기 위해서는 MHC에 해당하는 SLA (swine leukocyte antigen) 시스템에 대한 체계적 분석 및 분석기술의 개발이 필요하다. 또한 장기이식용 동물의 국제적 인정 및 실제적 사용을 위해서는 SLA를 바탕으로 한 장기이식용 동물의 육종 계획 및 계통 조성이 이루어져야 한다.
상기한 바와 같이 돼지 백혈구 항원(SLA;swine leukocyte antigen)은 포유류를 포함하는 여러 척추동물 종의 면역반응을 조절하는 주된 요소 군인 돼지의 MHC 분자이다. MHC 분자는 질병 조절 또는 세포 또는 조직 이식에서 주요한 역할을 하므로 MHC 유전자들의 뉴클레오타이드 변이 및 다른 분자들과의 분자적 상호작용을 이해하기 위한 많은 노력들이 있었다(Fleckenstein et al.,(1999) Quantitative analysis of peptide-MHC class II interaction. Semin Immunol. 11: 405-16 ).
특히, 돼지의 SLA에 의한 면역반응의 이해와 철저한 육종체계에 의한 동일한 유전형질을 갖는 순종 혈통을 구축하기 위해서는 SLA 영역에 대한 세부적인 연구가 필요하며, 이와 관련하여 많은 연구들이 진행되어 왔다(Sachs 등, 1976; Wu 등, 2004; Lee 등, 2005; O’Connell 등, 2005). 이 영역 내부에 존재하는 유전자들 각각에 대한 다형성 및 haplotype 분석은 이종장기의 이식을 위한 순종혈통을 구축하는데 있어서 가장 필수적인 과정이다(Cascalho와 Platt, 2001; Martens 등, 2003).
또한 돼지 SLA 유전자는 돼지 7번 염색체 내에 class I, II, III가 존재하며, 특히 class III은 p arm의 centromere 부위에 위치하고 있다(Geffrotin 등, 1984; Smith 등, 2005). 이 영역은 약 700 kb 정도로 확장되어 있으며 다양한 기능을 갖는 단백질을 암호화하는 약 50여 개의 유전자가 존재하고 있다(Renard 등, 2006). 또한 사람과 마우스의 class III 영역의 비교 결과 매우 유사한 구조를 갖는 것으로 확인되어 진화과정에서 매우 잘 보존되어 있는 영역으로 알려져 있다(Chardon 등, 1999). 비록 현재까지 사람의 질병에 대해서 class I 및 II 영역 내에 존재하는 유전자들에 대한 연구가 많이 진행되었지만, 최근 들어 class III 영역 역시 질병과의 연관성에 대한 연구가 보고되면서 이 영역에 대한 관심이 점점 높아지고 있다(Schroeder 등, 1998; Okamoto 등, 2003; Shichi 등, 2005).
하지만 사람과 마우스를 제외하면 돼지를 포함한 다른 포유류에서는 MHC 영역에 대한 연구가 폭넓게 이루어지지 않았으며, 특히 class III 영역에 관한 연구는 더더욱 미비한 실정이다.
따라서 본 발명의 목적은 이종장기 대체모델로서 돼지의 유전형질의 동질화 및 면역 거부반응의 제어를 위해 필수적으로 분석되어야 할 SLA class III 영역 내에 존재하는 유전자들로부터 아미노산의 치환에 영향을 주는 미스센스 돌연변이를 동정함으로서, SLA의 단상형 분석 및 사람의 질병연관 유전자들의 분석에 있어서 중요한 기초 자료의 작성에 있다.
<참고문헌>
1.Cascalho, M. and Platt, J. L. 2001. The immu- nological barrier to xenotransplantation. Immunity 14:437-446.
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3.Chen, F., Xie, J., Xhou, Y., Li, N. and Chou, K. Y. 2004. Novel SLA-DR alleles of three Chinese pig strains and the related function in human T cell response, Cell. Mol. Immunol. 1:212-21.
4.Geffrotin, C., Popescu, C. P., Cribiu, E. P., Boscher, J., Renard, C., Chardon, P. and Vaiman, M. 1984. Assignment of MHC in swine to chromosome 7 by in situ hybridization and serological typing. Ann. Genet. 27-213-219.
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10.Renard, C., Hart, E., Sehra, H., Beasley, H., Coggill, P., Howe, K., Harrow, J., Gilbert, J., Sims, S., Rogers, J., Ando, A., Shigenari, A., Shiina, T., Inoko, H., Chardon, P. and Beck, S. 2006. The genomic sequence and analysis of the swine major histocompatibility complex. Genomics 88:96-110.
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17.Wu, Q., Xiong, P., Liu, J. Y., Feng, S. T., Gong, F. L. and Chen, S. 2004. The study of new SLA classical molecules in inbreeding Chinese Wuzhishan pig. Transplant. P. 36:2483-2484.
본 발명은 장기이식용 모델동물인 돼지 SLA의 단상형 분석 및 사람의 질병관련 유전자의 분석에 있어 중요한 기초 자료의 분석을 위하여, 돼지 SLA class III 영역에 위치하고 있는 유전자들을 대상으로 단백질의 기능에 영향을 미치는 아미노산 치환의 원인이 되는 미스센스 돌연변이를 동정함을 목적으로 한다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 위하여, 본 발명은 돼지 SLA class III (swine leukocyte antigen class III) 영역 내 유전자 코딩 서열의 SNP 위치 염기가 치환된 미스센스돌연변이 유전자를 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
먼저, Database로부터 기존에 보도되어 있는 돼지 SLA class III 영역 내 존재하는 유전자들을 대상으로 mRNA, EST, 부분적인 genome 서열 등 염기서열 정보를 수집하고 분석한다.
다음으로, 돼지 조직으로부터 전체 RNA 추출 및 cDNA 합성한 뒤, RT-PCR 및 RACE-PCR 기법을 사용하여 유전자들의 mRNA 서열을 분석한다.
본 발명에서는 돼지의 10개 조직 (표1 참고)으로부터 전체 RNA를 추출하였다.
본 발명에 있어, 상기 RT-PCR은 사람과 마우스에서 보고된 각 유전자들의 mRNA 서열을 정렬하여 코딩 서열 중 상동성이 높은 서열을 바탕으로 제작된 프라이머들과 상기 준비된 조직별 cDNA를 이용하여 RT-PCR을 수행하였다.
본 발명에서, 상기 RT-PCR 및 RACE-PCR의 결과 증폭된 산물은 gel 정제 후 이를 주형으로 다이렉트 시퀀싱 혹은 클로닝 과정을 거쳐 시퀀싱을 실시하여 염기서열을 분석하였고, 최종 분석된 각 유전자의 mRNA 서열은 표1과 같다.
다음으로 돼지 6 품종 (Landrace, Large White, Duroc, Berkshire, Korean native pig (KNP), 미니돼지)으로부터 genomic DNA를 추출하고, 돼지 SLA class III 영역 내 유전자들의 코딩 지역의 서열분석을 위한 프라이머 제작 및 증폭한다.
본 발명에서는, 상기 과정에서 분석된 각 유전자의 mRNA 서열과 현재 보고되어 있는 SLA class III 영역을 포함하는 genome 서열을 비교하여 정확한 엑손 영역을 구분하고, 구분된 각각의 엑손을 증폭할 수 있는 프라이머를 제작한 후 돼지 6품종의 genomic DNA를 사용하여 증폭하였다.
마지막으로, PCR 산물의 정제 및 전기영동한 후, 전기영동 결과를 분석하여 돌연변이를 동정한다.
본 발명에서 결정된 염기서열은 SequencherTM version 4.0 (Gene Codes, USA)로 다중비교하여 품종간에 나타나는 돌연변이를 확인하였고, 확인결과 총 199개의 돌연변이가 확인되었으며, 이들 중 아미노산 치환의 원인이 되는 미스센스 돌연변이 (missense muation)는 27개의 유전자 (표1 참고)로부터 69개가 동정되었다. (표2)
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명은 인간의 장기를 대체하기 위한 가장 적합한 동물인 돼지를 대상으로 SLA class III 영역 내에 존재하는 55개의 유전자들로부터 돌연변이를 확인하고 총 27개의 유전자로부터 아미노산 치환의 원인이 되는 69개의 미스센스 돌연변이를 동정하였으며, 이는 이종장기 개발을 위해 필수적 인 과정인 단상형 분석 및 사람의 질병연관 유전자의 분석에 매우 유용하게 활용 가능할 것으로 기대된다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예들은 본 발명을 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1>
Database 로부터 돼지 SLA class III 영역 내 유전자들의 염기서열 정보 수집 및 분석
GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) database, EMBL database (http://ebi.ac.uk) 내에서 기존에 보고되어 있는 돼지 SLA class III 영역 내 존재하는 유전자들을 대상으로 mRNA, EST, 부분적인 genome 서열 등 염기서열 정보를 수집하고 분석하였다.
< 실시예 2>
돼지 조직으로부터 total RNA 추출 및 cDNA 합성
돼지의 10개 조직 (표1 참고)으로부터 Trizol (Gibco BRL, USA)를 사용하여 total RNA를 추출하였으며, SmartTM RACE cDNA 증폭 키트 (SmartTM RACE cDNAAmplification Kit, Clontech, USA)를 사용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA는 -20℃에 보관하였다.
< 실시예 3>
RT - PCR 및 RACE - PCR 기법을 사용하여 유전자들의 mRNA 서열을 분석
사람과 마우스에서 보고된 각 유전자들의 mRNA 서열을 정렬하여 coding 서열 중 상동성이 높은 서열을 바탕으로 제작된 프라이머들과 상기 실시예2에서 준비한 조직별 cDNA를 이용하여 RT-PCR을 수행하였다.
cDNA를 사용한 PCR 반응에서 Taq polymerase 1.5 unit (Genet Bio, Korea), 10×buffer 2.5 ㎕, 0.2 mM dNTP, 1.5 mM MgCl2, 10 pmol primer 각각 1.5 ㎕, genomic DNA 2 ㎕ 그리고 증류수 13.7 ㎕를 첨가하여 최종 25 ㎕로 반응하였다. PCR 반응조건은 94℃에서 2분간 변성시킨 후 94℃에서 30초, 55-65℃에서 45초, 72℃에서 60초를 1 cycle로 하여 35회 반복수행하였으며, 72℃에서 5분간 신장시킨 후 4℃에서 종료하였다.
모든 반응은 PTC-200 Thermal Cycler (MJ Research, USA)에서 수행하였으며, 증폭된 PCR 산물은 GELase Agarose Gel-Digesting Preparation (Epicentre, USA)을 이용하여 겔 정제 (gel purification)를 실시하였으며, 이를 주형으로 direct sequencing 혹은 TOPO TA Cloning Kit (Invitrogen, USA)을 이용하여 cloning 과정을 거쳐 sequencing하여 염기서열 분석을 분석하였다. DNA 시퀀싱은 Applied Biosystems 3130 DNA sequencer (PE Applied Biosystems, USA)를 이용하였다. 분석된 염기서열을 토대로 primer를 제작하였으며, 5′ 및 3′ untranslated region (UTR)의 서열을 분석하기 위하여 RACE-PCR을 수행하였다. SmartTM RACE cDNA 증폭 키트 (SmartTM RACE cDNA Amplification Kit,Clontech, USA)를 사용하여 1차 및 nested-PCR 등 2회의 PCR 반응을 실시하였으며, 이 결과로 증폭된 산물은 겔 정제 후 이를 주형으로 direct sequencing 혹은 TOPO TA Cloning Kit (Invitrogen, USA)을 이용하여 cloning 과정을 거쳐 sequencing을 실시하여 염기서열을 분석하였다. 최종 분석된 각 유전자의 mRNA 서열은 GenBank database에 등록하였다. (표1)
mRNA 서열이 분석된 유전자명과 GenBank database 의 등록번호
유전자 GenBank 등록번호 발현조직 CDS 길이 (bp) 사람과의 상동성 (%) (염기/아미노산)
BAT1 EU282340 ovary, muscle 1287 96/99
ATP6V1G2 EU282339 heart, ovary 357 93/97
NFKBIL1 AK235366 1143 92/95
LTA EU282349 ovary 615 83/72
TNF NM_214022 699 86/86
LTB EU282350 liver, ovary 741 86/84
LST1 EU282348 heart, liver ovary 120 32/7
NCR3 EU282355 heart, liver 414 55/40
AIF1 EU282338 brain 444 90/93
BAT2 EU076593 testis, skin, muscle 6501 88/90
BAT3 EU282341 brain, skin, muscle 3387 91/91
APOM NM_001040640 567 91/90
C6orf47 AK237470 894 85/79
BAT4 EU282342 heart, liver 1050 84/81
CSNK2B EU282347 skin, small intestine 648 94/100
LY6G5B EU282351 brain, liver 501 83/76
LY6G5C EU282352 heart, testis 102 43/32
BAT5 EU282343 liver, skin, kidney 1677 93/96
C6orf21 EU282344 testis, lung 900 83/75
LY6G6D EU282353 brain, liver, muscle 426 75/50
LY6G6E AK240326 402 78/53
LY6G6C AY609600 378 88/84
C6orf25 EU282345 liver, testis 531 81/75
DDAH2 AK235171 858 91/98
CLIC1 AY609786 726 91/98
MSH5 EU282354 heart, liver, kidney 2508 91/84
C6orf27 EU282346 brain 2595 81/68
VARS EU282356 liver, testis, skin 3798 89/93
LSM2 AK233908 288 95/100
HSPA1L EU282366 brain, liver, lung 1926 90/96
HSPA1A AY466608 1926 92/97
HSPA1B M69100 1926 92/97
NEU1 EU282367 brain, skin, kidney 1251 86/86
EHMT2 EU282363 heart, lung, muscle 1500 84/83
SLC44A4 AK237999 2124 86/86
C2 AK233128 2259 85/83
ZBTB12 EU282372 testis 1329 92/98
CFB EU282359 ovary, skin 2298 87/79
RDBP AK233579 1137 91/95
SKIV2L EU282370 heart, testis, skin 3741 90/94
DOM3Z EU282361 brain, testis 1194 89/90
STK19 EU282371 liver. Ovary 477 35/19
C4B EU076594 liver, skin, muscle 5226 84/80
CYP21A2 NM_214433 1479 84/78
TNXB EU275239 ovary, testis 1407 88/88
CREBL1 EU282360 liver, muscle 2106 90/87
FKBPL EU282364 brain, muscle 1050 89/85
PPT2 AK235067 930 92/93
EGFL8 EU282362 heart, testis, lung 888 86/87
AGPAT1 EU282358 heart, testis 864 94/98
RNF5 AY610466 543 94/99
AGER EU282357 liver 1185 87/83
PBX2 EU282369 ovary, spleen, lung 1113 93/99
GPSM3 EU282365 liver, ovary 483 90/87
NOTCH4 EU282368 liver, ovary, muscle 4050 88/88
< 실시예 4>
돼지 6 품종으로부터 genomic DNA 추출
돼지 6 품종 (Landrace, Large White, Duroc, Berkshire, Korean native pig (KNP), 미니돼지)으로부터 혈액을 채취하여 EDTA가 처리된 튜브에 넣어서 응고되지 않도록 잘 섞어준 후 약 300 ㎕를 이용하여 Genomic DNA 추출 키트 (Promega, USA)로 DNA를 추출하였으며, 4℃에 보관하였다.
< 실시예 5>
돼지 SLA class III 영역 내 유전자들의 코딩 지역의 서열분석을 위한 프라이머 제작 및 증폭
상기 과정에서 분석된 각 유전자의 mRNA 서열과 현재 보고되어 있는 SLA class III 영역을 포함하는 게놈 서열을 비교하여 정확한 엑손 영역을 구분하였다. 이렇게 구분된 각각의 엑손을 증폭할 수 있는 프라이머를 제작한 후 돼지 6품종의 genomic DNA를 사용하여 증폭하였다.
PCR 반응은 Taq polymerase 1.5 unit (Genet Bio, Korea), 10×buffer 2.5 ㎕, 0.2 mM dNTP, 1.5 mM MgCl2, 10 pmol primer 각각 1.5 ㎕, genomic DNA 2 ㎕ 그리고 증류수 13.7 ㎕를 첨가하여 최종 25 ㎕로 반응하였다. PCR 반응조건은 94℃에서 2분간 변성시킨 후 94℃에서 30초, 55-65℃에서 45초, 72℃에서 60초를 1 cycle로 하여 35회 반복수행하였으며, 72℃에서 5분간 신장시킨 후 4℃에서 종료하였다.
모든 반응은 PTC-100 Thermal Cycler (MJ Research, USA)에서 수행하였으며, 증폭된 PCR 산물은 1.2% 아가로스 겔 상에서 전기영동을 실시한 후 ethidium bromide로 염색하여 반응유무를 확인하였다.
< 실시예 6>
PCR 산물의 정제 및 ABI3130 sequencer 를 이용한 전기영동
PCR 산물은 GELase Agarose Gel-Digesting Preparation (Epicentre, USA)을 이용하여 겔 정제를 실시하였으며, 다이렉트 시퀀싱을 위한 주형으로 사용하였다. DNA 시퀀싱은 Applied Biosystems 3130 DNA sequencer (PE Applied Biosystems, USA)를 이용하였다.
< 실시예 7>
전기영동 결과를 분석하여 돌연변이를 동정
결정된 염기서열은 SequencherTM 버전 4.0 (Gene Codes, USA)으로 다중비교하여 품종간에 나타나는 돌연변이를 확인하였다. 확인결과 총 199개의 돌연변이가 확인되었으며, 이들 중 아미노산 치환의 원인이 되는 미스센스 돌연변이는 27개의 유전자로부터 69개가 동정되었다.
동정된 nsSNP의 유전자별 위치 및 염기/아미노산의 변화 양상
유전자 번호 위치 및 서열변화 유전자 번호 위치 및 서열변화
염기 아미노산 염기 아미노산
NFKBIL1 1 A779G Q260R EHMT2 36 A484G T162A
2 C817T P273S CFB 37 C13T R5C
BAT2 3 C1094G A365G 38 A119G E40G
4 C1832T P611L 39 A1696G T566A
5 A2059G M687V 40 A2015C K672T
6 C3762G H1254Q RDBP 41 A76G N39S
7 G3804T E1268D 42 A530G H177R
8 G3825T E1275D SKIV2L 43 A277G T93A
9 C3905T P1302L 44 C2108G P703R
10 A5131G K1711E 45 C2669T P890L
11 C5206T P1736S STK19 46 A104T Q35L
12 A5581G T1861A C4B 47 G17T G6V
BAT3 13 G1260T E420D 48 C316T P106S
BAT4 14 C169T P57S 49 C791T T264M
LY6G5C 15 G79T V27L 50 A1556G Q516R
C6orf21 16 A590G Q197R 51 C1814T T605M
LY6G6D 17 C353T S118L 52 C1928T T643I
C6orf25 18 C574T H192Y 53 A3601G R1201G
MSH5 19 A2212G 738D 54 A4239C E1413D
C6orf27 20 A376G A126D 55 C4327G R1443G
21 A947G Q316R TNXB 56 C152T S51F
22 A1220G Q407R 57 C185G T62S
23 A1558G I520V 58 A1385G Q462R
24 A1694G H565R CREBL1 59 C232T P78S
25 A1768C T590P 60 A892G T298A
26 A1949C H650R 61 A1684G T561A
27 A1958G Q653R EGFL8 62 A169G I57Y
VARS 28 A1496G H499R AGPAT1 63 A788G Q263R
29 G2339T S780I AGER 64 G1179T E393D
30 C3667T R1223C 65 C1208G A403G
HSPA1A 31 G1747T A583S NOTCH4 66 C479T A160Y
HSPA1B 32 G1747T A583S 67 C542T P181L
NEU1 33 A1199G Q400R 68 A1453G S484G
C2 34 G91T A31S 69 C2749T P917S
35 A1963G N655D
* L: Landrace,
* Y: Yorshire
* D: Duroc
* B: Berkshire
* K: Korean native pig
* M: Miniature pig.
도 1은 본 발명에서 동정한 mutation의 예로서, TNXB (tenascin XB) 유전자의 coding sequence 내에서 발견된 3개의 미스센스 돌연변이 (position 152, 185, 1385)을 확인할 수 있다.

Claims (1)

  1. <표3>으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 돼지 SLA class III (swine leukocyte antigen class III) 영역 내 유전자 코딩 서열의 SNP 위치 염기가 치환된 미스센스돌연변이 유전자
    <표3>
    번호 유전자 (GenBank 등록번호) 미스센스 돌연변이의 위치 및 염기 번호 유전자 (GenBank 등록번호) 미스센스 돌연변이의 위치 및 염기 1 NFKBIL1 (AK235366) A779G 36 EHMT2 (EU282363) A484G 2 NFKBIL1 (AK235366) C817T 37 CFB (EU282359) C13T 3 BAT2 (EU076593) C1094G 38 CFB (EU282359) A119G 4 BAT2 (EU076593) C1832T 39 CFB (EU282359) A1696G 5 BAT2 (EU076593) A2059G 40 CFB (EU282359) A2015C 6 BAT2 (EU076593) C3762G 41 RDBP (AK233579) A76G 7 BAT2 (EU076593) G3804T 42 RDBP (AK233579) A530G 8 BAT2 (EU076593) G3825T 43 SKIV2L (EU282370) A277G 9 BAT2 (EU076593) C3905T 44 SKIV2L (EU282370) C2108G 10 BAT2 (EU076593) A5131G 45 SKIV2L (EU282370) C2669T 11 BAT2 (EU076593) C5206T 46 STK19 (EU282371) A104T 12 BAT2 (EU076593) A5581G 47 C4B (EU076594) G17T 13 BAT3 (EU282341) G1260T 48 C4B (EU076594) C316T 14 BAT4 (EU282342) C169T 49 C4B (EU076594) C791T 15 LY6G5C (EU282352) G79T 50 C4B (EU076594) A1556G 16 C6orf21 (EU282344) A590G 51 C4B (EU076594) C1814T 17 LY6G6D (EU282353) C353T 52 C4B (EU076594) C1928T 18 C6orf25 (EU282345) C574T 53 C4B (EU076594) A3601G 19 MSH5 (EU282354) A2212G 54 C4B (EU076594) A4239C 20 C6orf27 (EU282346) A376G 55 C4B (EU076594) C4327G 21 C6orf27 (EU282346) A947G 56 TNXB (EU275239) C152T 22 C6orf27 (EU282346) A1220G 57 TNXB (EU275239) C185G 23 C6orf27 (EU282346) A1558G 58 TNXB (EU275239) A1385G 24 C6orf27 (EU282346) A1694G 59 CREBL1 (EU282360) C232T 25 C6orf27 (EU282346) A1768C 60 CREBL1 (EU282360) A892G 26 C6orf27 (EU282346) A1949C 61 CREBL1 (EU282360) A1684G 27 C6orf27 (EU282346) A1958G 62 EGFL8 (EU282362) A169G 28 VARS (EU282356) A1496G 63 AGPAT1 (EU282358) A788G 29 VARS (EU282356) G2339T 64 AGER (EU282357) G1179T 30 VARS (EU282356) C3667T 65 AGER (EU282357) C1208G 31 HSPA1A (AY466608) G1747T 66 NOTCH4 (EU282368) C479T 32 HSPA1B (M69100) G1747T 67 NOTCH4 (EU282368) C542T 33 NEU1 (EU282367) A1199G 68 NOTCH4 (EU282368) A1453G 34 C2 (AK233128) G91T 69 NOTCH4 (EU282368) C2749T 35 C2 (AK233128) A1963G
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