KR20090124228A - 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및이를 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용약학적 조성물 - Google Patents

신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및이를 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 이의 제조 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 항암제에 대한 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 유도체는 P-당단백질의 과다발현을 억제하여 항암제에 대한 다약제내성을 극복, 치료 또는 조절할 수 있게 하고, 항암제와의 병용투여시 항암활성의 증가시켜 암환자의 생존률을 높일 수 있으며, 병용 투여하는 항암제의 용량을 줄여 정상세포에 대한 부작용을 감소시킬 수 있는 효과를 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112008038617647-PAT00001
(R1 및 R2는 명세서 내에 정의된 바와 같다)
다약제내성, 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아, P-당단백질, 악성종양, 항암제

Description

신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물 {Novel spiro[chromene-2,4'-piperidine] thiourea derivatives or pharmaceutically acceptable salt thereof, preparation method and pharmaceutical composition for the modulation and treatment of multidrug resistance containing the same as an active ingredient}
본 발명은 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
현재까지 암을 치료하기 위한 외과적 요법, 방사선 요법 및 화학적 요법 등과 같은 다양한 치료방법이 연구되고 있으나, 아직까지 암의 완전 치료에는 이르지 못하고 있다. 이러한 악성 종양 치료에 있어 주된 실패 원인은 암세포의 다약제내성(multidrug resistance, MDR) 발현에 기인한 것으로 알려져 있다.
다약제내성은 구조적으로 혹은 작용 기전 상의 공통점이 없는 약물에 대해서 폭넓게 교차내성을 보이는 것을 말한다(Szakacs G 등, Nat . Rev . Drug Discov ., 5, 219-234, 2006). 지금까지 다약제내성의 발현과 관련된 여러 기작들이 밝혀지고 있는데, 주로 암세포의 세포막에 다약제내성 유전자(MDR1)에 의한 P-당단백질(P-glycoprotein, Pgp)이 과다발현되거나, 다약제내성 관련 단백질(multidrug resistance associated protein, MRP)이 과다발현에 의한 다약제내성이 알려져 있다. 즉, 과도하게 생성된 P-당단백질이 약물과 직접 결합하여 항암 치료약물을 세포 밖으로 배출시킬 뿐만 아니라 세포내 약물축적을 감소시켜 결과적으로 암세포 내부의 약제농도를 감소시키게 되는 것이다(Persidis A. Nat. biotechnol., 17, 94-95, 1999).
한편, P-당단백질은 MDR1 유전자의 발현에 의해 조절되는 세포막의 당단백질로 ATP를 이용하는 ATP-결합카세트 수송체(ATP-binding cassette transporter; ABC transporter)군에 속하며, 에너지 의존성 배출 펌프(energy-dependent efflux pump)로서 다약제내성 기전에 핵심적인 역할을 한다. P-당단백질에 의해 영향을 받는 항암제로는 콜히친(colchicine), 칼세인-AM(calcein-AM), 에피루비신(epirubicin), 토포테칸(topotecan), 빈블라스틴(vinblastine), 독소루비신(doxorubicin), 빈카 알칼로이드(vinca alkaloids), 이마티닙(imatinib), 에토포시드(etoposide), 파클리탁셀(paclitaxel; Taxol) 등이 알려져 있다.
ABC 수송체가 다약제내성과 밀접한 관계가 있기 때문에 내성을 초래하는 각 단백질을 억제하여 항암제 내성을 극복하려는 많은 연구가 이루어지고 있다. 이러한 내성 억제물질은 항암제에 대한 내성을 역전하여 결과적으로 항암제에 대해 감수성을 보이도록 감작한다고 하여 화학감작제(chemosensitizer)라고 불린다. 대장암, 간암, 신장암, 췌장암, 부신피질암 등과 같이 정상적으로도 P-당단백질이 많이 발현되는 암이 있으며 이들은 항암 약물 반응성이 매우 낮은 것으로 알려져 있고, 정상적으로는 발현이 높지 않은 급성 골수성 백혈병(AML), 악성 림프종, 유방암 등에서도 항암제치료에 실패하는 경우가 많은데 이는 P-당단백질이 항암제치료에 의해 유도되거나 발현이 높은 암세포만 선택적으로 살아남기 때문으로 알려져 있다.
다약제내성을 극복하기 위하여, 현재까지 P-당단백질 등의 ABC 수송체들의 작용을 억제하는 약물을 이용한 치료제 및 조절제(modulator)의 개발이 지속적으로 진행되고 있다. 제1세대 MDR 조절제로 칼슘 채널 차단제(calcium channel blocker)인 베라파밀(verapamil), 아미오다론(amiodarone) 및 면역억제제인 시클로스프로인(cyclosproine) 등 이미 사용되고 있는 약물로 임상시험을 수행하였으나, 효능이 나타나는 투여량에서는 이들이 가진 본래의 작용이 부작용으로 나타나 실패하였다(Wattel, E. 등, Adv . Exp . Med . Biol . 457, 35-46, 1999). 이러한 문제점을 해결한 제2세대 조절제로 R-베라파밀(R-verapamil), PSC-833(Valspdar) 등이 개발되었으나, 이들은 병용 투여한 항암제의 대사와 배설에 영향을 미쳐 혈중 농도를 지나치게 높이므로 용량 조절이 필요했고 용량 조절의 개체차가 심하여 이 또한 실패하였다. 제3세대 조절제들로 ABC 수송체에 대한 친화도(affinity)는 높이고 약동학 적 상호작용(pharmacokinetic(PK) interaction)은 최소화한 비리코다(biricodar), 엘라크리다(elacridar), 타리퀴다(tariquidar) 등 많은 약물들이 임상 3상까지 진행되었으나 아직 임상에서 만족할 만한 효과를 나타내거나 시판단계까지 이른 약물은 없는 현실이다.
종래, 이와 관련되어 특허등록된 기술을 살펴보면, 다약제 내성 억제 효과를 갖는 퀴놀린 유도체 및 이의 약제학적 조성물(대한민국 특허등록 제10-0639163호), 세포장애성 약물에 대항하는 암세포의 다약제내성의 역전을 위한 화합물 및 그를 포함하는 제약학적 조성물(대한민국 특허등록 제10-0171893호), 신규한 p-당단백질 저해제(대한민국 특허등록 제10-0516075호) 등이 있었다. 하지만, 이들 역시 아직 만족할 만한 수준의 효과를 나타내지는 못하였고, 따라서 보다 다양한 종류의 다약제내성 조절제 또는 치료제의 개발이 요구된다 할 것이다.
이에 본 발명자들은 다약제내성의 주요 원인인 P-당단백질의 과발현을 억제하여 기존 항암제의 치료 효율을 증가시킬 수 있는 화합물을 탐색하기 위하여 각고의 노력을 거듭한 결과, 다양한 벤조피란 유도체를 이용하여 신규한 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체를 합성하고, 이들 화합물이 P-당단백질 발현 억제활성을 나타내어 다약제내성 유발을 치료하고 조절하는 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규한 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
또한, 본 발명은 이소티오시아네이트 유도체를 이용하는 2단계로 구성된 상기 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체를 제조하는 방법을 제공한다.
나아가, 본 발명은 상기 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 상기 화합물은 다약제내성의 주요 원인인 P-당단백질의 과발현에 대한 억제활성 및 항암제와의 병용투여시 항암활성의 증가를 나타내어 항암제에 대한 다약제내성 극복제제, 치료제 또는 조절제로 이용될 수 있으며, 항암제의 효과를 증진시켜 암환자의 생존률을 높일 수 있고, 병용 투여하는 항암제의 용량을 줄여 정상세포에 대한 부작용을 감소시킬 수 있으며 경제적으로도 이득을 제공하는 바, 의약 및 제약 분야에서 매우 뛰어난 발명이라 할 것이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체를 제공한다.
Figure 112008038617647-PAT00002
상기 화학식 1에서,
R1과 R2는 각각 독립적으로 C1~C10의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C4~C10의 사이클로 알킬; 헤테로아릴; C1~C5의 알킬 카보닐; C1~C5의 알콕시 카보닐; 5 내지 7원의 헤테로사이클; 비치환 또는 C1~C5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C5의 알킬티오, C1~C5의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C5의 알킬 카보닐 및 C1~C5의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐; 비치환 또는 C1~C5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C5의 알킬티오, C1~C5의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C5의 알킬 카보닐 및 C1~C5의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 벤조일이다.
바람직하게는, 상기 R1과 R2는 각각 독립적으로 C1~C10의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C1~C3의 알킬 카보닐; C1~C3의 알콕시 카보닐; 비치환 또는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C3의 알킬티오, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C3의 알킬 카보닐 및 C1~C3의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐; 비치환 또는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C3의 알킬티오, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C3의 알킬 카보닐 및 C1~C3의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 벤조일일 수 있다.
더욱 바람직하게는, 상기 R1과 R2는 각각 독립적으로 n-노닐, 에톡시 카보닐, 비치환된 벤조일, 비치환된 페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 2-플루오로페닐, 2,6-디플루오로페닐, 2,3,4,5,6-펜타플루오로페닐, 3,4-디클로로페닐, 5-클로로-2-메틸페닐, 2-에톡시카보닐페닐, 3-메틸티오페닐, 2-니트로페닐 및 4-메틸-2-니트로페닐로 이루어지는 군부터 선택되는 것일 수 있고,
가장 바람직하게는, 상기 R1은 n-노닐, 에톡시 카보닐, 비치환된 벤조일, 비치환된 페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 2-플루오로페닐, 2,6-디플루오로페닐, 2,3,4,5,6-펜타플루오로페닐, 5-클로로-2-메틸페닐 또는 4-메틸-2-니트로페닐이고; R2는 n-노닐, 에톡시 카보닐, 비치환된 벤조일, 비치환된 페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 2-플루오로페닐, 2,6-디플루오로페닐, 2,3,4,5,6-펜타플루오로페닐, 3,4-디클로로페닐, 5-클로로-2-메틸페닐, 2-에톡시카르보닐페닐, 3-메틸티오페닐, 2-니트로페닐 또는 4-메틸-2-니트로페닐일 수 있다.
본 발명의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체의 바람직한 화합물은 구체적으로 하기와 같다.
(1)N-페닐-6-(3-페닐티오유레이도)스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르 보티오아미드;
(2)N-(4-메톡시)페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(3)N-(3-메톡시)페닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(4)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(5)N-(2,3,4,5,6-펜타플루오로)페닐-6-{3-(2,3,4,5,6-펜타플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(6)N-벤조일-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(7)N-(2,6-디플루오로)페닐-6-{3-(2,6-디플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(8)N-노닐-6-{3-노닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(9)N-(2-플루오로)페닐-6-{3-(2-플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(10)N-(5-클로로-2-메틸)페닐-6-{3-(5-클로로-2-메틸)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(11)N-(4-메틸-2-니트로)페닐-6-{3-(4-메틸-2-니트로)페닐티오유레이도}스파 이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(12)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(13)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2,3,4,5,6-펜타플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(14)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2,6-디플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(15)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(3,4-디클로로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(16)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(17)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(5-클로로-2-메틸)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(18)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(1-에톡시-1-옥소로-2-메틸)티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(19)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2-에톡시카르보닐)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(20)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(4-메틸-니트로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(21)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(3-메틸티오)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘- 2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(22)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(23)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2-니토로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(24)N-페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(25)N-페닐-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(26)N-페닐-6-{3-(3,4-디클로로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(27)N-(2,6-디플루오로)페닐-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(28)N-(2,6-디플루오로)페닐-6-{3-(4-메틸-2-니토로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
(29)N-노닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드; 및
(30)N-(1-에톡시-1-옥소)메틸)-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 및 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 라세미체 또는 입체이성질체를 모두 포함한다.
본 발명의 화학식 1의 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부 티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1의 유도체를 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.
동량의 화학식 1의 유도체 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 제조방법은 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
출발물질인 화학식 2의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민을 화학식 3 의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트 유도체과 반응시켜 화학식 2의 화합물에 화학식 3의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트를 도입시키는 단계(단계 1); 및
R1으로 치환된 이소티오시아네이트가 도입된 상기 단계 1의 반응결과물을 화학식 4의 R2로 치환된 이소티오시아네이트 유도체와 반응시켜 반응결과물에 화학식 4의 R2로 치환된 이소티오시아네이트를 도입시키는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어진다.
Figure 112008038617647-PAT00003
(상기 반응식에서 R1 및 R2는 화학식 1에서 정의한 바와 같다.)
본 발명에 따른 상기 제조방법의 단계 1 및 단계 2는 각 단계의 반응 종료 후 하기 화학식 5의 스캐빈저 레진을 첨가하는 단계를 각각 더 포함할 수 있다.
<화학식 5>
Figure 112008038617647-PAT00004
(상기 식에서, ⓟ는 폴리스티렌-디비닐벤젠, 메타아크릴산-디메틸아크릴아미드 및 히드록실 메타아크릴산으로 이루어진 군에서 선택되는 고분자 중합체 형태의 고체 지지체이다.)
상기 화학식 5의 스캐빈저 레진을 투입하여 여과함으로써 미반응된 화학식 3 또는 4의 이소티오시아네이트 유도체를 용이하게 제거할 수 있으며, 동시에 많은 티오유레아계 스파이로벤조피란 유도체를 단기간에 합성할 수 있다.
이하, 본 발명에 따른 상기 제조방법을 단계별로 구체적으로 설명한다.
단계 1
먼저, 본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 출발물질인 화학식 2의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민을 화학식 3의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트 유도체과 반응시켜 화학식 2의 화합물에 화학식 3의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트를 도입하는 단계이다.
상기 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민(2)을 적절한 용매를 사용하여 정량 또는 과량의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트 유도체(3)과 반응시켜 화학식 2의 화합물에 화학식 3의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트를 도입할 수 있다.
이때, 반응용매는 최종단계에 화학식 5의 고체상 스캐빈저 레진을 사용할 것을 고려하여 고체상 레진의 팽윤효과(swelling effect)가 뛰어난 유기용매를 사용할 수 있으며, 대표적으로 디클로로메탄(CH2Cl2), 클로로포름(CHCl3), 테트라하이드로퓨란(THF) 등을 들 수 있다. 바람직하게는 디클로로메탄을 사용할 수 있다.
또한, 상기 단계에서 사용하는 화학식 3의 이소티오시아네이트 유도체는 출발물질인 화학식 2의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민 1 당량에 대하여 1.2 내지 2.0 당량으로 사용하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 경제성을 고려하여 1.2 내지 1.5 당량으로 사용할 수 있다.
구체적으로, 상기 화학식 2의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민을 디클로로메탄으로 상온에서 5~20분간 교반시켜 용해시키는 것이 바람직하다. 또한, 상기 용해된 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민 화합물에 화학식 3의 이소티오시아네이트 유도체를 가하고 상온에서 6 내지 24시간동안 교반시켜 반응시키는 것이 바람직하다.
상기 반응물은 여과하고, 여과물을 클로로포름(CHCl3)으로 반복세척하고 여과액을 합하여 감압농축시켜 R1으로 치환된 이소티오시아네이트가 도입된 반응결과물을 얻을 수 있다. 이 때, 미반응된 화학식 3의 이소티오시아네이트 유도체를 제거하기 위해 화학식 5의 고체상 스캐빈저 레진을 첨가하여 여과할 수 있다.
단계 2
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 화학식 3의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트가 도입된 반응결과물을 화학식 4의 R2로 치환된 이소티오시아네이트 유도체와 재반응시켜 반응결과물에 화학식 4의 R2로 치환된 이소티오시아네이트를 도입하는 단계이다.
상기 단계에서 사용하는 화학식 4의 이소티오시아네이트 유도체는 출발물질인 화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민 1 당량에 대하여 1.2 내지 2.0 당량으로 사용하는 것이 바람직하며, 경제성을 고려하여 1.2 내지 1.5 당량으로 사용할 수 있다.
상기 단계에서 사용하는 용매, 반응조건(온도 및 시간)과, 추가적으로 고체상 스캐빈저 사용은 단계 1과 동일하게 수행한다.
상기와 같이 본 발명에 따라 제조된 신규 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체들은 제조 후, 고속 액체크로마토그래피로 분리 정제한 후 핵자기 공명 스펙트럼 및 질량 분광법에 의해 분자구조를 확인할 수 있다.
나아가, 본 발명은 화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 화학식 1의 화합물들은 항암제에 대한 다약제내성을 유발하는 단백질의 과발현을 억제함으로써 다약제 내성을 조절 또는 치료할 수 있으며, 바람직하게는 상기 단백질은 암세포에서 발현되는 P-당단백질을 그 대상으로 한다.
본 발명의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 항암제와 병용투여함으로써 다약제 내성의 유발을 억제하여 항암제의 항암효과를 증진시키고, 또한 병용투여되는 항암제의 용량을 감소시켜 항암제 단독 투여시 유발되는 정상세포에 대한 부작용을 감소시킨다(Persidis A. Nat . biotechnol., 17, 94-95, 1999).
다약제내성은 주로 암세포의 세포막에 다약제내성 유전자(MDR1)에 의한 P-당단백질(P-glycoprotein, Pgp)이 과다발현되어 항암 치료약물과 직접 결합하여 상기 약물을 세포 밖으로 배출시킬 뿐만 아니라 세포내 약물축적을 감소시켜 결과적으로 암세포 내부의 약제농도를 감소된다.
따라서, P-당단백질의 과다발현을 억제하는 화합물은 다약제내성을 억제하는 효과를 갖게 된다.
본 발명의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 자궁암 세포인 MES-SA 세포를 독소루비신(doxorubicin)으로 처리해 P-당단백질을 과발현시킨 MES-SA/DX5 세포에서의 P-당단백질의 발현을 억제하며(실험예 1 및 도 2 참조), 기존 항암제인 파클리탁셀(paclitaxel) 또는 독소루비신(doxorubicin)과 병용 투여시 항 암제 단독처리시 측정된 IC50 값과 비교하여볼 때, 1.2 내지 2.5배의 항암활성의 증가를 나타낸다(실험예 2 및 표 1 참조). 따라서, 본 발명의 화합물들은 다약제내성을 유발하는 P-당단백질을 효과적으로 억제하므로, 다약제내성을 치료 또는 조절하는데 유용하게 사용할 수 있다.
한편, 본 발명의 화합물들은 대장암, 간암, 신장암, 췌장암, 부신 피질암 등과 같이 정상적으로도 P-당단백질이 많이 발현되는 암 뿐만 아니라 정상적으로도 P-당단백질의 발현이 높지 않은 급성골수성 백혈병(AML), 악성 림프종, 유방암 등에서의 항암제에 의한 다약제내성을 치료 또는 조절하는데 사용될 수 있다.
특히, 본 발명의 화합물들은 콜히친(colchicine), 칼세인-AM(calcein-AM), 에피루비신(epirubicin), 토포테칸(topotecan), 빈블라스틴(vinblastine), 독소루비신(doxorubicin), 빈카 알칼로이드(vinca alkaloids), 이마티닙(imatinib), 에토포시드(etoposide), 파클리탁셀(paclitaxel; Taxol) 등의 항암제에 대한 다약제내성을 치료 또는 조절하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 상기 화학식 1로 표시되는 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/ 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 유도체를 유효 성분으로 하는 약학 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1의 피페리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 ㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1 ~ 1,000 ㎎/일이며, 바람직하게는 1 ~ 500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
이하, 실시예 및 실험예를 통해 본 발명을 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: N - 페닐 -6-(3- 페닐티오유레이도 )스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
단계 1
화학식 2로 표시되는 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민(100 mg, 0.462 mmol)을 디클로로메탄(CH2Cl2; 5 mL)에 녹인 후 상온에서 10분간 교반시켰다. 상기 교반된 화합물을 화학식 3으로 표시되는 페닐이소티오시아네이트(C6H5NCS; 75 mg, 0.554 mmol, 1.2 eq)를 가하고, 상온에서 12시간동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 종결 후 스캐빈저 레진 화합물인 화학식 5로 표시되는 폴리스타이렌 디아민(3.0 mmol/g, 0.34 g, 1 mmol)을 반응물에 가한 후 30분간 교반하여 반응시켰다. 상기 반응혼합물을 여과하고 여과물을 클로로포름(CHCl3)으로 반복세척한 후 여과액을 합하여 반응결과물을 감압 농축시켰다.
단계 2
상기 반응물을 다시 한번 화학식 4의 구조를 갖는 페닐이소티오시아네이트(C6H5NCS; 75 mg, 0.554 mmol, 1.2 eq)을 가하고, 상온에서 12시간 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 종결 후 스캐빈저 레진 화합물인 화학식 5로 표시되는 폴리스타이렌 디아민(3.0 mmol/g, 0.34 g, 1 mmol)을 반응물에 가한 후 30분간 교반하여 반응시켰다. 상기 반응혼합물을 여과하고 여과물을 클로로포름(CHCl3)으로 반복세척한 후 여과액을 합하여 반응물을 감압 농축시켰다. 잔류물을 헥산/에틸아세테이트(4/1, v/v)의 혼합 용매 하에서 실리카겔상의 컬럼 크로마토그래피(Quad3+; 미국 Biotage사 제품)로 분리 정제하여 목적화합물(135 mg, 61%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 2H), 7.58-7.51 (m, 8H), 7.46-7.01 (m, 6H), 6.54 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.49 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 2.23-2.15 (m, 2H), 1.87-1.72 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 487
실시예 2: N -(4-메톡시)페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00005
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메톡시페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메톡시페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(162 mg, 64%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.83-7.56 (m, 4H), 7.31-6.96 (m, 9H), 6.49 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.53 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.77-3.46 (m, 2H), 2.23-2.13 (m, 2H), 1.99-1.91 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 547
실시예 3: N -(3-메톡시)페닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00006
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 3-메톡시페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 3-메톡시페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(149 mg, 59%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 547
실시예 4: N -(2-메톡시)페닐-6-{3-(2-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00007
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(131 mg, 52%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 547
실시예 5: N -(2,3,4,5,6- 펜타플루오로 ) 페닐 -6-{3-(2,3,4,5,6- 펜타플루오로 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00008
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,3,4,5,6-펜타플루오로-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,3,4,5,6-펜타플루오로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(136 mg, 44%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.33 (s, 1H), 7.77 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.3, 2.7 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.44 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.56 (m, 2H), 3.68 (m, 2H), 2.17 (m, 2H), 1.87 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 667
실시예 6: N - 벤조일 -6-{3- 벤조일티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00009
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 벤조일이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 벤조일이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(140 mg, 56%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 12.43 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.91-7.83 (m, 4H), 7.70-7.39 (m, 8H), 6.88 (m, 1H), 6.45 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.03 (m, 1H), 3.92-3.77 (m, 3H), 2.27-2.00 (m, 4H);
m/z ([M+1]+) 543
실시예 7: N -(2,6- 디플루오로 ) 페닐 -6-{3-(2,6- 디플루오로 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00010
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,6-디플루오로-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,6-디플루오로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(132 mg, 51%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.94 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.34-7.19 (m, 4H), 7.03-6.87 (m, 6H), 6.43 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.63 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.65 (m, 2H), 3.68 (m, 2H), 2.16-2.06 (m, 2H), 1.92-1.79 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 559
실시예 8: N -노닐-6-{3- 노닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00011
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 노닐이소티오시아네 이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 노닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(171 mg, 63%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 7.52 (s, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.97-6.92 (m, 2H), 6.45 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.90 (m, 1H), 5.68 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.58 (m, 1H), 4.48 (m, 2H), 3.79-3.58 (m, 6H), 2.18 (m, 2H), 1.90-1.68 (m, 6H), 1.34 (s, 24H), 0.96 (t, J = 6.4 Hz, 6H);
m/z ([M+1]+) 587
실시예 9: N -(2- 플루오로 ) 페닐 -6-{3-(2- 플루오로 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'-카 르보티오아미드 의 제조
Figure 112008038617647-PAT00012
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-플루오로-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-플루오로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합 물(121 mg, 50%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 7.98 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.57-7.27 (m, 2H), 7.21-6.89 (m, 9H), 6.46 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.47 (m, 2H), 3.60 (m, 2H), 2.16-2.04 (m, 2H), 1.91-1.78 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 523
실시예 10: N -(5- 클로로 -2- 메틸 ) 페닐 -6-{3-(5- 클로로 -2- 메틸 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00013
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 5-클로로-2-메틸-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 5-클로로-2-메틸-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(154 mg, 57%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 7.50-6.86 (m, 12H), 6.49 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.32 (m, 2H), 3.64-3.51 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.11-2.04 (m, 2H), 1.85-1.76 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 584
실시예 11: N -(4-메틸-2-니트로)페닐-6-{3-(4-메틸-2-니트로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00014
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메틸-2-니트로-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메틸-2-니트로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(137 mg, 49%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 9.85 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 8.69 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.92-7.87 (m, 3H), 7.48-7.41 (m, 2H), 7.16-6.96 (m, 3H), 6.46 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.69 (m, 2H), 3.73 (m, 2H), 2.39 (s, 6H), 2.20 (m, 2H), 1.83 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 605
실시예 12: N -(2-메톡시)페닐-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00015
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 벤조일이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(108 mg, 43%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 12.51 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.00-7.48 (m, 9H), 7.17-6.96 (m, 4H), 6.51 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.53 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.72 (m, 2H), 2.24-2.13 (m, 2H), 1.99-1.72 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 545
실시예 13: N -(2-메톡시)페닐-6-{3-(2,3,4,5,6-펜타플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00016
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,3,4,5,6-펜타플루오로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(101 mg, 36%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.20 (s, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.35-6.92 (m, 7H), 6.50 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.52 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.70 (m, 2H), 2.15-2.13 (m, 2H), 2.01-1.85 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 607
실시예 14: N -(2-메톡시)페닐-6-{3-(2,6-디플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00017
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,6-디플루오로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(107 mg, 42%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.00 (s, 1H), 7.82-7.77 (m, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.31-6.97 (m, 10H), 6.49 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.70 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.53 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.71 (m, 2H), 2.22-2.13 (m, 2H), 1.99-1.86 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 553
실시예 15: N -(2-메톡시)페닐-6-{3-(3,4-디클로로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00018
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 3,4-디클로로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(138 mg, 51%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 7.81 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.77-7.38 (m, 5H), 7.20-6.95 (m, 6H), 6.48 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.71 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.52 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.70 (m, 2H), 2.22-2.13 (m, 2H), 1.99-1.85 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 586
실시예 16: N -(2-메톡시)페닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00019
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 3-메톡시-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(144 mg, 57%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 7.74-7.27 (m, 5H), 7.18-6.83 (m, 9H), 6.39 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.46 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.68-3.55 (m, 2H), 2.12-2.04 (m, 2H), 1.88-1.75 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 547
실시예 17: N -(2-메톡시)페닐-6-{3-(5-클로로-2-메틸)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00020
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 5-클로로-2-메틸-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(120 mg, 46%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 7.73-7.68 (m, 2H), 7.47-7.42 (m, 3H), 7.14-6.86 (m, 8H), 6.40 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.60 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.43 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.67-3.55 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.11-2.04 (m, 2H), 1.89-1.74 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 566
실시예 18: N -(2- 메톡시 ) 페닐 -6-{3-(1- 에톡시 -1- 옥소로 -2- 메틸 ) 티오유레이 도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00021
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 1-에톡시-1-옥소메틸이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(121 mg, 51%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 11.27 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.73 (dd, J = 7.9, 1.7 Hz, 1H), 7.47-7.27 (m, 2H), 7.12-6.84 (m, 4H), 6.39 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.56 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.43 (m, 2H), 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.69-3.55 (m, 2H), 2.14-2.04 (m, 2H), 1.88-1.73 (m, 2H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz, 3H);
m/z ([M+1]+) 513
실시예 19: N -(2- 메톡시 ) 페닐 -6-{3-(2- 에톡시카르보닐 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00022
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-에톡시카르보닐-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(125 mg, 46%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 11.05 (s, 1H), 8.64 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 8.01-7.47 (m, 4H), 7.37-6.88 (m, 7H), 6.42 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.73 (m, 2H), 4.42-4.30 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.73-3.65 (m, 2H), 2.28-2.04 (m, 2H), 1.89-1.76 (m, 2H), 1.40 (m, 3H);
m/z ([M+1]+) 589
실시예 20: N -(2- 메톡시 ) 페닐 -6-{3-(4- 메틸 -니트로) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00023
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메틸-2-니트로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(117 mg, 44%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 9.81 (s, 1H), 8.68 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.93-7.70 (m, 3H), 7.48-7.43 (m, 2H), 7.15-6.87 (m, 6H), 6.43 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.45 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.63 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.16-2.04 (m, 2H), 1.92-1.77 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 576
실시예 21: N -(2- 메톡시 ) 페닐 -6-{3-(3- 메틸티오 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'-카 르보티오아미드 의 제조
Figure 112008038617647-PAT00024
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 3-메틸티오-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(104 mg, 40%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 7.73-7.26 (m, 5H), 7.24-6.85 (m, 9H), 6.38 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.43 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.79-3.56 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.13-2.04 (m, 2H), 1.90-1.77 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 563
실시예 22: N -(2- 메톡시 ) 페닐 -6-{3-(4- 메톡시 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00025
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메톡시-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(144 mg, 57%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 7.83-7.55 (m, 4H), 7.35-6.92 (m, 11H), 6.47 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.52 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.75-3.46 (m, 2H), 2.21-2.13 (m, 2H), 1.97-1.84 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 547
실시예 23: N -(2- 메톡시 ) 페닐 -6-{3-(2- 니토로 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00026
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-메톡시-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2-니트로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(122 mg, 47%)을 얻었다.
1H NMR (200 MHz, CDCl3) δ 10.03 (s, 1H), 8.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.09-7.97 (m, 2H), 7.75-7.48 (m, 3H), 7.23-6.87 (m, 7H), 6.43 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.45 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.69-3.56 (m, 2H), 2.16-2.04 (m, 2H), 1.92-1.78 (m, 2H);
m/z ([M+1]+) 562
실시예 24: N - 페닐 -6-{3-(4- 메톡시 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00027
실시예 1의 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메톡시-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(131 mg, 55%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 517
실시예 25: N - 페닐 -6-{3- 벤조일티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00028
실시예 1의 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 벤조일이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(124 mg, 52%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 515
실시예 26: N - 페닐 -6-{3-(3,4- 디클로로 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00029
실시예 1의 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 3,4-디클로로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(118 mg, 46%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 556
실시예 27: N -(2,6- 디플루오로 ) 페닐 -6-{3- 벤조일티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00030
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,6-디플루오로-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 벤조일이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(107 mg, 42%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 551
실시예 28: N -(2,6- 디플루오로 ) 페닐 -6-{3-(4- 메틸 -2- 니토로 ) 페닐티오유레이도 }스파이로[ 크로멘 -2,4'-피페리딘]-1'- 카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00031
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 2,6-디플루오로-페닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메틸-2-니트로-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(105 mg, 39%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 582
실시예 29: N-노닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00032
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 노닐이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 3-메톡시-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(133 mg, 51%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 567
실시예 30: N-(1-에톡시-1-옥소)메틸)-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드의 제조
Figure 112008038617647-PAT00033
실시예 1의 단계 1에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 1-에톡시-1-옥소메틸이소티오시아네이트를, 단계 2에서 페닐이소티오시아네이트 대신에 4-메톡시-페닐이소티오시아네이트를 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 같은 방법으로 목적화합물(111 mg, 47%)을 얻었다.
m/z ([M+1]+) 513
실험예 1: 본 발명 화합물의 과발현된 P-당단백질 억제 활성 측정
다양한 종류의 항암제들에 대해 내성이 있는 것으로 보고된 바 있는 MES-SA/DX5 세포(Harker G. 등, Cancer Res., 45, 4091-4096, 1985)는 P-당단백질이 과다 발현되어 항암제를 세포 밖으로 능동적으로 배출하여 세포 내의 항암제 축적을 감소시킨다. 따라서, P-당단백질의 발현을 억제하는 물질을 다약제내성 치료제 및 조절제로 개발할 수 있을 것이다.
본 발명 화합물의 P-당단백질 억제 활성을 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
자궁암 세포인 MES-SA 세포를 독소루비신(doxorubicin)으로 처리하여 P-당단백질을 과발현시킨 MES-SA/DX5 세포에 Pgp substrate이면서 형광(fluorescence)을 띄는 로다민 123(Rhodamine 123)이나 DiOC2 등의 염료로 처리하면 세포 내로 확산되어 들어간 염료들이 P-당단백질에 의하여 배출되어 세포 안에 거의 존재하지 않게 된다. 하지만, 여기에 베라파밀(verapamil) 등과 같이 종래 알려진 P-당단백질 억 제제를 처리하면 배출이 억제되어 세포 안에 다량의 염료가 남아있게 된다. 본 특허에서는 DiOC2와 1세대 조절제(modulator)로 쉽게 구할 수 있는 베라파밀(verapamil)을 양성 대조구(positive control)로 한 이미지 기초 분석(image based assay)을 수행하여 본 발명 화합물의 활성을 측정하였다. 이하에서 자세히 실험내용을 설명하기로 한다.
MES-SA/DX5 세포를 384 웰 플레이트에 분주한 후 하루 동안 배양하고 여기에 베라파밀을 각각 다양한 농도로 처리하였다. 30분 정도 상온에서 배양한 후 DiOC2 또는 로다민 123(Rhodamine 123)을 여러 농도로 처리하고 30분간 배양하였다. 웰 안에 남아있는 배지와 염료를 마이크로플레이트 왓셔(microplate washer)를 이용하여 세척한 후 형광현미경을 이용하여 세포에 남아있는 DiOC2를 측정하였다. 상기 측정 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에서 알 수 있는 바와 같이, 베라파밀을 처리하지 않았을 때는 세포에 형광이 전혀 거의 보이지 않았으나 베라파밀을 처리했을 때는 선명하게 세포들을 확인할 수 있었고 8 μM을 처리했을 때 가장 선명한 차이를 얻어 이를 양성 대조구(positive control)로 하였다.
한편, 베라파밀 대신 본 발명의 화합물(1-1부터 1-30)들을 동일한 방법으로 처리한 후 공초점 마이크로플레이트 이미지 리더(Confocal microplate image reader)를 이용하여 빠른 속도와 정확한 분석능으로 고효율 약리검색 (High-Throughput/content Screening, HTS/HCS)을 수행할 수 있는 OPERA라는 장비를 이용 하여 384 웰 플레이트를 고속 촬영한 결과 티오유레아계 스파이로벤조피란 유도체를 처리한 웰과 처리하지 않은 웰 사이의 차이가 재현성 있게 나타났고, 이로부터 OPERA를 이용하여 빠르고 손쉽게 1차 검색을 할 수 있음을 알 수 있었다. 상기 1차 검색 결과를 바탕으로 형광현미경을 이용하여 2차 검색을 하였으며, 그 결과 중 일부를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 다양한 티오유레아 유도체 중 실시예 2, 6, 12, 17 및 30 화합물이 베라파밀에 비하여 동일한 농도에서 P-당단백질 억제 활성이 훨씬 뛰어난 것으로 판단되었다. 이로부터, 본 발명의 화합물은 P-당단백질의 과발현을 억제하여 다약제내성 유발을 치료 또는 조절하는 효과가 있음을 알 수 있다.
실험예 2: 본 발명 화합물과 항암제의 병용시의 유효성 시험
실험예 1의 과발현된 P-당단백질 억제활성 시험에서 도출된 P-당단백질의 발현을 억제하는 화합물을 기존의 알려진 항암제인 파클리탁셀(paclitaxel; taxol) 또는 독소루비신(doxorubicin)을 병용 투여하여 상기 화합물의 P-당단백질 발현 억제 활성의 유효성을 분석하였다.
MES-SA/DX5 세포를 384 웰 플레이트 또는 96 웰 플레이트에 옮겨 24동안 배양하였다. 배양된 세포에 P-당단백질 억제 화합물을 넣고 항암제 (택솔 또는 독소루비신)를 다양한 농도로 투여하였다. 3일간 배양한 후 도진도(Dojindo) 사의 세포 증식 분석 및 독성 분석 키트(cell proliferation assay and cytotoxicity assay kit)인 세포 카운팅 키트-8(Cell Counting Kit-8)을 이용하여 항암제의 세포독성에 대한 IC50 값을 측정하였다. P-당단백질 억제 화합물과 병용 투여된 항암제의 IC50 값이 항암제 단독처리시 측정된 IC50 값과 비교하여 얼마나 증가하였는지를 관찰하여 P-당단백질 억제제의 다약제내성을 갖는 암세포에 대한 유효성을 확인하였고 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
다약제내성 세포주에 대한 항암제 병용시의 P-당단백질 억제제의 효능
실시예 (1 μM) 파클리탁셀 독소루비신
IC50 (nM) 증가정도(단위:배) IC50 (nM) 증가정도(단위:배)
항암제 단독 1500 1.0 2400 1.0
실시예 1 >1500 <1.0 >2400 <1.0
실시예 2 1308 1.2 2136 1.1
실시예 5 >1500 <1.0 >2400 <1.0
실시예 6 763 2.0 974 2.5
실시예 12 1178 1.3 1085 2.2
실시예 17 1156 1.3 2471 1.0
실시예 30 852 1.8 1479 1.6
표 1에서 알수 있는 바와 같이, 파클리탁셀 및 독소루비신을 각각 단독 처리한 경우 IC50 값이 1500 nM과 2400 nM로 나타났다. 이에 비하여 상기 항암제와 본 발명의 화합물을 혼합하여 투여한 경우, 실시예 2의 화합물은 각각 1.2배 및 1.1배의 활성증가를 나타내었으며, 실시예 6의 화합물은 각각 2.0배 및 2.5배의 활성증가를, 실시예 12의 화합물은 각각 1.3배 및 2.2배의 활성증가를, 실시예 17의 화합물은 각각 1.3배 및 1.0배의 활성증가를, 실시예 30의 화합물은 각각 1.8배 및 1.6배의 활성증가를 나타내었다.
이로부터, 본 발명의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체는 기존 항암제와 혼합 투여시 기존 항암제의 단독 투여에 비하여 기존 항암제의 효과를 증진 시키는 효과를 가짐을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물을 항암제와 병용 투여하는 경우, 병용 투여하는 항암제의 용량을 줄여 정상세포에 대한 부작용을 감소시킬 수 있고 경제적으로도 이득을 얻을 수 있다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체는 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
제제예 1 : 정제(직접 가압)
화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 5.0mg을 체로 친 후, 락토스 14.1mg, 크로스포비돈 USNF 0.8mg 및 마그네슘 스테아레이트 0.1mg을 혼합하고 가압하여 정제로 제조하였다.
제제예 2 : 정제(습식 조립)
화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 5.0mg을 체로 친 후, 락토스 16.0mg과 녹말 4.0mg을 섞었다. 폴리솔베이트 80 0.3mg을 순수한 물에 녹인 후 이 용액의 적당량을 첨가한 다음 미립화하였다. 건조 후에 미립을 체질한 후 콜로이달 실리콘 디옥사이드 2.7mg 및 마그네슘 스테아레이트 2.0mg과 섞었다. 미립을 가압하여 정제로 제조하였다.
제제예 3: 분말과 캡슐제
활성성분 5.0 mg을 체로 친 후에, 락토스 14.8㎎, 폴리비닐 피롤리돈 10.0mg, 마그네슘 스테아레이트 0.2mg과 함께 섞었다. 혼합물을 적당한 장치를 사용하여 No. 5 젤라틴 캡슐에 채웠다.
제제예 4: 주사제
활성성분으로서 100 mg을 함유시키고, 그 밖에도 만니톨 180 mg, Na2HPO412H2O 26 mg 및 증류수 2974 mg를 함유시켜 주사제를 제조하였다.
도 1은 베라파밀(verapamil)의 P-당단백질 억제 활성을 나타낸 형광 현미경 사진이다.
도 2는 베라파밀 및 본 발명 화합물의 P-당단백질 억제활성을 나타낸 형광 현미경 사진이다.

Claims (9)

  1. 하기 화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure 112008038617647-PAT00034
    상기 화학식 1에서,
    R1과 R2는 각각 독립적으로 C1~C10의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C4~C10의 사이클로 알킬; 헤테로아릴; C1~C5의 알킬 카보닐; C1~C5의 알콕시 카보닐; 5 내지 7원의 헤테로사이클; 비치환 또는 C1~C5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C5의 알킬티오, C1~C5의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C5의 알킬 카보닐 및 C1~C5의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐; 비치환 또는 C1~C5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C5의 알킬티오, C1~C5의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C5의 알킬 카보닐 및 C1~C5의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 벤조일이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 R1과 R2는 각각 독립적으로 C1~C10의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C1~C3의 알킬 카보닐; C1~C3의 알콕시 카보닐; 비치환 또는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C3의 알킬티오, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C3의 알킬 카보닐 및 C1~C3의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 페닐; 비치환 또는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1~C3의 알킬티오, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, C1~C3의 알킬 카보닐 및 C1~C3의 알콕시 카보닐로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 치환된 벤조일인 것을 특징으로 하는 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제1항에 있어서, 상기 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체는
    (1)N-페닐-6-(3-페닐티오유레이도)스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (2)N-(4-메톡시)페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (3)N-(3-메톡시)페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘- 2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (4)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (5)N-(2,3,4,5,6-펜타플루오로)페닐-6-{3-(2,3,4,5,6-펜타플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (6)N-벤조일-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (7)N-(2,6-디플루오로)페닐-6-{3-(2,6-디플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (8)N-노닐-6-{3-노닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (9)N-(2-플루오로)페닐-6-{3-(2-플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (10)N-(5-클로로-2-메틸)페닐-6-{3-(5-클로로-2-메틸)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (11)N-(4-메틸-2-니트로)페닐-6-{3-(4-메틸-2-니트로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (12)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (13)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2,3,4,5,6-펜타플루오로)페닐티오유레이도}스파 이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (14)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2,6-디플루오로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (15)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(3,4-디클로로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (16)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (17)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(5-클로로-2-메틸)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (18)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(1-에톡시-1-옥소로-2-메틸)티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (19)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2-에톡시카르보닐)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (20)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(4-메틸-니트로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (21)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(3-메틸티오)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (22)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (23)N-(2-메톡시)페닐-6-{3-(2-니토로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘- 2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (24)N-페닐-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (25)N-페닐-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (26)N-페닐-6-{3-(3,4-디클로로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (27)N-(2,6-디플루오로)페닐-6-{3-벤조일티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (28)N-(2,6-디플루오로)페닐-6-{3-(4-메틸-2-니토로)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드;
    (29)N-노닐-6-{3-(3-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드; 및
    (30)N-(1-에톡시-1-옥소)메틸)-6-{3-(4-메톡시)페닐티오유레이도}스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-1'-카르보티오아미드
    로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이
    출발물질인 화학식 2의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘]-6-아민을 화학식 3의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트 유도체과 반응시켜 화학식 2의 화합물에 화학식 3의 R1으로 치환된 이소티오시아네이트를 도입시키는 단계(단계 1); 및
    R1으로 치환된 이소티오시아네이트가 도입된 상기 단계 1의 반응결과물을 화학식 4의 R2로 치환된 이소티오시아네이트 유도체와 반응시켜 반응결과물에 화학식 4의 R2로 치환된 이소티오시아네이트를 도입시키는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제1항의 화학식 1의 R1 및 R2가 도입된 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체의 제조방법.
    <반응식 1>
    Figure 112008038617647-PAT00035
    (상기 반응식에서 R1 및 R2는 화학식 1에서 정의한 바와 같다.)
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 단계 1 및 단계 2는 하기 화학식 5의 스캐빈저 레진을 첨가하여 미반응된 화학식 3 또는 화학식 4의 이소티오시아네이트 유도체를 제거하는 단계를 각각 더 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항의 화학식 1의 R1 및 R2가 도입된 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체의 제조방법.
    <화학식 5>
    Figure 112008038617647-PAT00036
    (상기 식에서, ⓟ는 폴리스티렌-디비닐벤젠, 메타아크릴산-디메틸아크릴아미드 및 히드록실 메타아크릴산으로 이루어진 군에서 선택되는 고분자 중합체 형태의 고체 지지체이다.)
  6. 제1항의 화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 화학식 1의 스파이로[크로멘-2,4'-피페리딘] 티오유레 아 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 항암제에 대한 다약제내성을 유발하는 P-당단백질의 과발현을 억제함으로써 다약제내성을 조절 또는 치료하는 것을 특징으로 하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제6항에 있어서, 상기 약학적 조성물을 항암제와 병용투여함으로써 다약제내성의 유발을 억제하여 항암제의 항암 효과를 증진시키는 것을 특징으로 하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 약학적 조성물을 항암제와 병용투여함으로써 병용투여되는 항암제의 용량을 감소시켜 항암제 단독 투여시 유발되는 정상세포에 대한 부작용을 감소시키는 것을 특징으로 하는 다약제내성 조절 또는 치료용 약학적 조성물.
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