KR20170051079A

KR20170051079A - 아미노산 및 해양 심층수 추출 미네랄을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20170051079A
Application number: KR1020150153437A
Authority: KR
Inventors: 이지언; 이정민; 권순상; 김영은
Original assignee: (주)모아캠
Priority date: 2015-11-02
Filing date: 2015-11-02
Publication date: 2017-05-11
Anticipated expiration: 2035-11-02
Also published as: KR102324674B1

Abstract

본 발명은 라이신, 히스티딘, 아르기닌, 아스파르트산, 트레오닌, 세린, 글루탐산, 프롤린, 글라이신, 알라닌, 발린, 메티오닌, 아이소류신, 류신, 타이로신, 페닐알라닌, 시스테인, 아스파라긴, 글루타민, 시트룰린, 트립토판, 오르니틴, 및 타우린을 포함하는 아미노산; 및 해양 심층수 추출 미네랄을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

아미노산 및 해양 심층수 추출 미네랄을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{COMPOSITION COMPRISING AMINO ACID AND MINERAL EXTRACTED FROM DEEP OCEAN WATER}

본 발명은 아미노산 및 해양 심층수 추출 미네랄을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

해양 심층수는 햇빛이 도달하지 않는 수심 200m 이하에서 채수한 해수를 의미하는데, 청정할 뿐 아니라 부영양성이 풍부하고, 저온에서 매우 오랫동안 숙성된 물로서, 이러한 심층수는 그린란드, 남극, 블라디보스톡의 해수가 빙하를 만나 급격하게 차가워지고, 해수가 얼면서 빠져나오는 염분과 섞이면서 차갑고 무거워진 해수가 더 깊은 심해로 가라앉게 되며, 무거운 해수는 수심 200m에서 최고 4000m 까지 깊은 바다 속으로 내려가 두꺼운 띠를 형성하는데, 이를 해양 심층수이라 하며, 심해를 흐르는 심층수는 표층수와 20℃ 이상의 온도 차이가 나기 때문에 물과 기름처럼 서로 섞이지 않고, 해양 심층수에는 햇빛이 닿지 않으므로 광합성이 일어나지 않아 무기 영양염을 많이 포함하며 오랜 세월을 거쳐 숙성된 해수로서 필수 미량 원소와 다양한 미네랄이 균형 있게 포함되어 있다.

해양 심층수는 인공 물질로 오염되지 않은 뿐만 아니라 분해해야 할 유기물이 적기 때문에 세균 번식이 아주 적어 청청한 미네랄수로 알려져 있다.

이러한, 해양심층수의 응용에 대한 연구는 많은 분야 별로 진행되고 있으나, 해양 심층수에서 추출한 미네랄을 이용하는 경우, 통상적인 수준의 효능을 나타내는 화장료 조성물만이 알려져 있을 뿐, 뛰어난 효능을 나타내는 화장료 조성물은 알려진 바가 없었다.

본 발명은 종래의 해양 심층수 추출 미네랄보다도 피부 보습 효과가 우수하고, 항산화 효과가 우수하며, 항노화용과 우수하고, 피부 주름 개선 또는 예방 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 라이신, 히스티딘, 아르기닌, 아스파르트산, 트레오닌, 세린, 글루탐산, 프롤린, 글라이신, 알라닌, 발린, 메티오닌, 아이소류신, 류신, 타이로신, 페닐알라닌, 시스테인, 아스파라긴, 글루타민, 시트룰린, 트립토판, 오르니틴, 및 타우린으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 아미노산; 및 해양 심층수 추출 미네랄을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 종래에 알려지지 않은 특유한 구성의 아미노산과 함께 해양 심층수 추출 미네랄을 함유함으로써, 피부 보습 효과가 우수하고, 항산화 효과가 우수하며, 항노화용과 우수하고, 피부 주름 개선 또는 예방 효과가 우수하다.

이하, 본 발명에 따른 화장료 조성물에 대하여 자세하게 설명한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 일 유효성분은 아미노산이며, 상기 아미노산은 라이신 (Lysine), 히스티딘 (Histidine), 아르기닌 (Arginine), 아스파르트산 (aspartic acid), 트레오닌 (Threonine), 세린 (Serine), 글루탐산 (glutamic acid), 프롤린 (Proline), 글라이신 (Glycine), 알라닌 (Alanine), 발린 (Valine), 메티오닌 (Methionine), 아이소류신 (Isoleucine), 류신 (Leucine), 타이로신 (Tyrosine), 페닐알라닌 (Phenylalanine), 시스테인, 아스파라긴 (Asparagine), 글루타민 (Glutamine), 시트룰린 (Citrulline), 트립토판 (Tryptophan), 오르니틴 (Ornithine), 및 타우린 (Taurine)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함한다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 아미노산의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.004 중량% 내지 0.1 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 라이신은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 1.07 중량% 내지 3.07 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 히스티딘은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 3.51 중량% 내지 5.51 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 아르기닌은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.37 중량% 내지 2.37 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 아스파르트산은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 2.64 중량% 내지 4.64 중량%이다. 본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 트레오닌은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 4.13 중량% 내지 6.13 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 세린은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 23.80 중량% 내지 25.80 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 글루탐산은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.37 중량% 내지 2.37 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 프롤린은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 1.49 중량% 내지 3.49 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 글라이신은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 16.20 중량% 내지 18.20 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 알라닌은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 9.50 중량% 내지 11.50 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 발린은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 2.37 중량% 내지 4.37 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 메티오닌은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.21 중량% 내지 1.31 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 아이소류신은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.61 중량% 내지 2.61 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 류신은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.86 중량% 내지 2.86 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 타이로신은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.73 중량% 내지 2.73 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 페닐알라닌은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.38 중량% 내지 2.38 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 시스테인은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.14 중량% 내지 0.24 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 아스파라긴은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.10 중량% 내지 2.10 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 글루타민은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.15 중량% 내지 0.35 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 시트룰린은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 1.09 중량% 내지 1.19 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 트립토판은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.01 중량% 내지 1.01 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 오르니틴은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 11.50 중량% 내지 13.50 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 타우린은 상기 아미노산 전체 중량에 대하여, 0.12 중량% 내지 1.12 중량%이다.

본 발명에 따른 화장료 조성물의 일 유효성분은 해양 심층수 추출 미네랄이다.

본 명세서에 있어서, 해양 심층수 추출 미네랄은 해양 심층, 바람직하게는 대한국민의 동해 수면으로부터 약 300 내지 1300 m 지점, 바람직하게는 약 500 내지 1100 m 지점에서 취수한 해양 심층수로부터 추출한 미네랄이다.

상기 해양 심층수는 강원 심층수 (605m, Deep seawater) 또는 워터비스(1032m, Deep seawater)일 수 있으며, 상기 해양 심층수 추출 미네랄은 당업계에 잘 알려진 건조방법, 예를 들어, 해양 심층수를 자연건조법, 증발건조법 등의 건조방법을 통하여 수득된 기능성 소금 또는 고온 용융 해양심층수 염화나트륨, 구체적으로는 상기 해양심층수 염화나트륨을 600 내지 1000℃, 바람직하게는 700 내지 900℃에서 4시간 내지 12시간, 바람직하게는 6시간 내지 10시간 동안 용융시킨 염화 나트륨으로서, 바람직하게는 고온 용융 해양심층수 추출 염화나트륨을 포함하며, 상기 해양심층수 추출 염화나트륨에는 나트륨, 칼슘, 마그네슘, 칼륨뿐만 아니라 셀레늄(Se), 아연 등의 항암작용을 갖는 무기성분과 철, 망간, 스트로늄 등의 금속이온을 더 함유할 수 있다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 해양 심층수 추출 미네랄의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.001 중량% 내지 0.02 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 피롤리돈 카르복실산, 락트산, 요소, 글루코사민, 크레아티닌, 시트르산, 포름산, 당, 무기산 및 펩타이드로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 함유한다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 피롤리돈 카르복실산의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.0012 중량% 내지 0.022 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 락트산의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.0012 중량% 내지 0.022 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 요소의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.0007 중량% 내지 0.017 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 글루코사민 및 크레아티닌의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.0004 중량% 내지 0.014 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 시트르산의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.00015 중량% 내지 0.0025 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 포름산의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.00015 중량% 내지 0.0025 중량%이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 당, 무기산 및 펩타이드 혼합물의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.00085 중량% 내지 0.00185 중량%이다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 수분 유지 효과가 우수하며, 피부수분 손실 억제 효과가 우수한 피부 보습용이다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 활성 산소 억제 효과가 우수한 항산화용인 화장료 조성물이다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 엘라스테이즈 억제 효과가 우수하고, 콜라겐 합성 활성 효과가 우수하며, MMP-1 억제 효과가 우수한 피부 주름 개선 또는 예방용인 화장료 조성물이다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 NO 억제가 우수한 항염증용인 화장료 조성물이다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 보습 효과, 항산화 효과, 피부 주름 개선 또는 예방 효과 및 항염증 효과가 우수한 항노화용인 화장료 조성물이다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 자세하게 설명한다. 그러나 이러한 실시예들은 본 발명을 구체적으로 설명하려는 것일 뿐, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 권리범위가 제한되는 것은 아니다.

<제조예> 화장료 조성물의 제조

하기 표 1의 조성 (단위: 조성물 전체 중량에 대한 중량%)으로 실시예 1 및 비교예 1 내지 3의 조성물을 제조하였다.

성분명	실시예 1	비교예 1	비교예 2	비교예 3
아미노산¹ ⁾	0.0400	-	0.0400	-
피롤리돈 카르복실산	0.0120	0.0120	0.0120	-
락트산	0.0120	0.0120	0.0120	-
요소	0.0070	0.0070	0.0070	-
해양심층수 추출 염화나트륨²⁾	0.0060	0.0060	-	-
KH₂PO₄	0.0050	0.0050	0.0050	-
글루코사민 및 크레아티닌	0.0040	0.0040	0.0040	-
시트르산	0.0015	0.0015	0.0015	-
포름산	0.0015	0.0015	0.0015	-
수산화칼륨	적량	적량	적량	-
당, 무기산, 펩타이드 등 잔류성분	0.0085	0.0085	0.0085	-
방부제	적량	적량	적량	적량
물	To 100	To 100	To 100	To 100
총량	100	100	100	100

1) 상기 아미노산의 각 성분의 조성은 하기 표 2와 같다 (단위: 아미노산 전체 중량에 대한 중량%).

2) 상기 해양심층수 추출 염화나트륨은 강원 심층수에서 제조된 염화나트륨을 사용하였다.

아미노산 성분	함량 (중량%)
라이신	2.07
히스티딘	4.51
아르기닌	1.37
아스파르트산	3.64
트레오닌	5.13
세린	24.80
글루탐산	1.37
프롤린	2.49
글라이신	17.20
알라닌	10.50
발린	3.37
메티오닌	0.71
아이소류신	1.61
류신	1.86
타이로신	1.73
페닐알라닌	1.38
시스테인	0.19
아스파라긴	1.10
글루타민	0.20
시트룰린	1.14
트립토판	0.51
오르니틴	12.50
타우린	0.62
총계	100

< 실험예 1> 보습효과 측정

본 발명에 따른 화장료 조성물의 보습효과를 평가하기 위하여 피부 수분손실량과 피부 수분함유량을 측정하였다. 각각의 시료와 대조군인 히아루론산 수용액을 직접 피부에 도포하여 일정 조건 및 시간 경과에 따른 경표피 수분 손실량 및 수분 함유량의 변화를 평가하였으며 실험 방법과 결과는 아래와 같이 평가되었다.

경표피 수분 손실량 평가는 Tewameter (TM300, MPA 6)를 사용하여 피부 면적당(g/m²h) 수분 증발량측정 하였으며 피부 증발량이 적을수록 보습력이 우수한 것으로 평가하였다. 또한, 수분 함유량 평가는 Coreneometer (CM825, MPA6)를 사용하였으며, 피부표면의 전기적 정전용량 (electronic capacity)에 기초하여 수분함량을 측정하여 capacitance value를 0~120사이의 arbitrary capacitance units (A.U) 값으로 전환하여 나타내었다.

피험자는 20~40대 남녀 10명을 대상으로 하여 시험 시작 1시간전에 항온 항습 조건(상대습도 45 ± 2%, 온도 25 ± 2℃)에서 대기하게 하여 피부의 수분 상태를 일정하게 유지시켰다. 그 다음, 각 시료 도포부위의 초기 수분 보유량을 측정한 후 시료를 도포하였다. 시료 도포는 20 μL/cm²를 좌측 팔뚝부위 안쪽에 도포하였으며, 부위에 따른 오차를 최소화 하기 위해 각 피험자마다 시료의 도포부위를 달리하여 도포하였다. 도포 후 일정시간 (도포 전, 도포 후 10분, 20분, 30분, 60분, 120분, 180분)에 맞추어 피부 손실량 및 피부 수분 함량을 측정하였다. 각 측정 부위를 3번 반복 측정하고 그 평균값으로 경표피 수분 손실량 및 피부 수분 함량을 계산하였다.

시험에 사용된 시료는 비교예 1 내지 3 및 실시예 1이며 대조군으로 여러 연구결과에서 피부 보습효과가 뛰어나다고 알려진 히아루론산 (중국 spechem사 제조 상품명 sodium hyaluonate) 1% 수용액을 사용하였으며, 피부 수분 함량 측정 평가의 결과는 하기 표 3 (단위: g/m²h)에 나타내었다.

시간경과(min)	무도포	대조군	비교예 1	비교예 2	비교예 3	실시예 1
0(도포전)	42	43	43	42	42	43
10(도포후)	51	83	84	82	66	85
20	51	76	76	74	56	85
30	45	72	71	70	52	77
60	43	58	57	54	48	64
120	40	47	48	46	43	56
180	40	44	45	44	42	52

* 대조군 : 히아루론산 1% 수용액

상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 도포 후 10~30min에 무도포군 대비 최대40% 증가된 수분함유량을 나타내며, 3시간 후에는 무도포군 대비 약 23%높은 수분함유량으로 피부 보습력이 유지됨을 확인할 수 있었다. 또한, 실시예 1은 비교군으로 보습효과가 뛰어나다고 알려진 히아루론산에 비하여 약 15% 우수한 피부 보습 효과를 가짐을 확인할 수 있었으며, 비교예 1 내지 3 에 비하여도 우수한 피부 보습 효과를 확인할 수 있었다.

또한, 다음으로는 같은 실험조건에서 Tewameter를 사용하여 피부 수분 손실량을 측정하였다. 경표피 수분 손실량의 평가 결과는 하기 표 4 (단위 : g/m²h)에 나타내었다.

시간경과(min)	무도포	대조군	비교예 1	비교예 2	비교예 3	실시예 1
0(도포전)	12.3	13.5	12.4	13.1	12.4	12.5
10(도포후)	11.5	10.5	9.4	10.6	11.6	7.8
20	10.3	8.0	8.5	9.6	9.2	6.8
30	10.2	8.3	8.6	9.3	9.3	6.4
60	10.1	8.5	8.6	8.8	9.7	6.5
120	10.2	8.7	9.0	9.0	10.2	7.6
180	11.0	8.9	9.0	9.0	10.5	8.0

* 대조군 : 히아루론산 1% 수용액

상기 표 4와 같이, 실시예 1은 시료 도포 3시간 경과 후 무도포군의 경표피수분증발량은 11 g/m²h, 대조군은 8.9 g/m²h, 실시예 1는 8.0 g/m²h로 실시예 1은 대조군보다 경표피수분손실량을 더 크게 감소시키는 것을 확인할 수 있었으며, 무도포군 대비 최대 약 37% (30 min), 히아루론산에 대비 최대 약 25% (10 min) 낮은 경표피수분증발량을 나타냄을 확인할 수 있었다. 또한, 실시예 1은 3시간 후에도 무도포군 대비 약 27% 낮은 경표피수분증발량을 나타내며 보습력이 유지됨을 알 수 있었다. 또한, 실시예 1은 비교예 1 내지 3 에 비하여도 경표피 수분 손실량을 더 크게 감소시키는 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예 2> 함량 비율에 따른 보습효과 측정

본 발명에 따른 화장료 조성물의 성분 함량 비율에 따른 보습 효과를 평가하기 위하여, 전술한 비교예 1 내지 3 및 실시예 1에서 얻은 시료를 각각 귤껍질에 도포한 직후 무게를 측정하였고, 이를 24시간 동안 상온에서 방치한 후 무게를 측정하였다. 또한, 상기 실시예 1의 시료에 대한 각각의 대조군으로 동일한 무게의 귤껍질을 아무런 처리도 하지 않는 채 24 시간 동안 상온에서 방치한 후 무게를 측정하였다.

상기 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 시료에 대한 귤껍질 무게 변화 측정 결과를 하기 수학식 1에 의하여 수분손실률로 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

[수학식 1]

수분손실률 (%) = {((시료 도포전 귤껍질 질량) - (시료 도포후 귤껍질 질량)) / (시료 도포전 귤껍질 질량)} × 100

	비교예 1	비교예 2	비교예 3	실시예 1
수분손실률 (%)	-13	-17	-19	-10

< 실험예 3> 항산화 효과 측정

본 발명에 따른 화장료 조성물의 항산화 능력을 평가하기 위해 DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)를 이용하여 free radical 소거활성을 측정하였다. Free radical은 노화, 특히 피부노화의 원인 물질로 간주되고 있다.

본 실험의 free radical 소거 활성을 위해 사용하는 시약인 DPPH는 그 자체가 매우 안정한 free radical로서 520nm에서 특징적인 광흡수를 나타내는 보라색 화합물이다. 이 물질은 여러 가지 항산화 기작 중 proton-radical scavenger에 의하여 탈색되기 때문에 항산화 활성을 육안으로도 쉽게 관찰할 수 있는 장점이 있다. 이에 따라 DPPH 용액과 용매에 용해시킨 시료를 혼합하여 30min 동안 반응시키고 30min 후, 520nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH의 농도가 50% 감소되는데 필요한 시료의 농도인 FSC50 값을 측정하고, 하기 수학식 2에 따라 free radical 소거율을 계산하였다.

[수학식 2]

free radical 소거율 (%)= {1-실험군의 흡광도-공시험액의 흡광도/대조군의 흡광도} × 100

활성산소 소거활성을 잔틴 산화 효소 (Xanthine oxidase)를 이용하여도 평가하였다. 잔틴 산화 효소 (xanthine : oxygen oxidoreductase)는 잔틴을 기질로 하여 요산(uric acid)을 생성하는 과정에서 superoxide radical을 생성하거나 hydrogeneperoxide와 같은 산화제로서 작용하는 효소이다.

잔틴 산화 효소 저해제는 퓨린대사에 큰 영향을 주지 않으면서 혈중 요산 양을 줄일 수 있어 요산혈증 치료제로 사용되어 왔고 시판 항통풍 제제로는 allopuriol(hypoxanthine 유도체) alloxanthine등과, probenecid, colchicine등이 알려져 있다. 통풍은 일반적으로 퓨린대사계에서 xanthine oxidase에 의해 xanthine에서 생성되는 요산 (uric acid)의 관절낭 축적에 기인되는 것으로 알려져 있다.

본 실험의 평가 방법은 각 시료용액 0.1mL 와 0.1M potassium phosphate (pH 7.5) 0.6mL에 잔틴 (2mM)을 용해시킨 용액 0.2mL를 첨가하고 잔틴 산화 효소 (0.2U/mL) 0.1mL를 가하여 37℃에서 15분간 반응시킨 후 1N HCl 1mL를 가하여 반응을 종료시킨 다음, 반응액 중에 생성된 요산의 양을 292nm에서 흡광도를 측정하여 하기 수학식 3에 따라 활성산소 소거율을 계산하였다.

[수학식 3]

활성산소 소거율(%) = (1-시료첨가군의 요산 생성량 / 무첨가군의 요산 생성량) × 100

상기 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 시료에 대한 free radical 소거율 및 활성산소 소거율을 측정한 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

시료	Free radical 소거율 IC₅₀ (%)	활성산소 소거율IC₅₀ (%)
비교예 1	3.15	3.84
비교예 2	4.37	4.60
비교예 3	-	-
실시예 1	1.85	2.09

상기 표 6 에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 비교예 1 내지 3 보다 월등한 항산화 효과를 나타냄을 확인할 수 있다.

< 실험예 4> 엘라스테이즈 활성저해시험

본 발명에 따른 화장료 조성물의 주름생성 억제 능력을 평가하기 위해 엘라스테이즈 (ellastase) 활성저해 실험을 실시하였다.

피부노화, 특히 주름생성에는 활성산소에 의한 작용과 matrix metalloproteinases (MMPs : collagenase, elastase등)에 의한 세포외 매트릭스의 파괴가 주원인으로 간주되고 있다. 따라서 MMPs의 저해활성 측정은 피부 노화 억제에 대단히 중요하다. Tris-Cl (pH 8.0) 0.12 M에 엘라스테이즈 기질인 N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide 1.0mM이 용해된 buffer 1,300 μL에 측정시료 용액 7.5 μL와 buffer 92.5μL를 첨가하여 25℃에서 10 min 동안 pre incubation한 뒤 여기에 엘라스테이즈 용액을 100μL 첨가하여 25℃ 수욕상에서 10 분동안 항온배양한 후 410nm에서 흡광도를 측정하여 하기 수학식 4에 따라 엘라스테이즈 저해율을 계산하였다.

[수학식 4]

엘라스테이즈 저해율(%) = 100-((시료의흡광도)/대조군의 흡광도) ×100)

대조군으로는 엘라스테이즈의 특이 저해제인 PMSF(phenylmethylsulfonyl fluoride, Sigma)을 0.12 mg/mL 사용하였다.

상기 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 시료에 대한 엘라스테이즈 저해율을 측정한 결과를 하기 표 7에 나타내었다.

시료	엘라스테이즈 저해율 IC₅₀ (%)
비교예 1	4.60
비교예 2	5.98
비교예 3	-
실시예 1	4.64
PMSF	0.13 mg/mL

상기 표 7에 나타낸 바와 같이 실시예 1은 비교예 1 내지 3 보다 월등히 우수한 엘라스테이즈 저해 활성을 나타냄을 확인하였다.

< 실험예 5> 콜라겐 합성 효과 실험

본 발명에 따른 화장료 조성물의 피부 주름개선 효과를 검정하기 위하여 콜라겐 합성능을 측정하였다. 콜라겐은 상기 엘라스틴과 함께 피부 진피 매트릭스층을 이루는 구성성분으로서 피부가 서서히 노화 되어가며 진피 내 매트릭스층을 이루고 있는 구성성분들이 분해되어 가면서 주름이 생성되는데, 진피 매트릭스층의 구성성분인 콜라겐의 합성효과를 확인함으로써 피부 주름을 개선시키는 효과를 확인할 수 있다. 시험 방법은 하기와 같이 진행한다.

검액의 procollagen 합성능을 평가하기 위해 HDF-N cell (ATCC)을 48 well plate에 1.4 × 10⁴ cells/well로 분주하고 세포배양 조건에서 24시간 배양하였다. 그 후, 배지를 제거하고, 24시간 세포의 기아상태를 유지하며 이 후 시험 물질을 세포 배양 배지인 FBM (media supplement 제외)에 희석하여 농도별로 세포에 처리한 후 24시간 배양하였다. 양성대조군은 TGF-β를 사용하였으며, 농도는 10 ng/㎖로 처리하였다 24시간후에 배양된 세포의 배지를 수거하여 procollagen typeI c-peptide(PIP) EIA kit (TAKARA, MK101)를 사용하여 procollagen양을 측정하였다. 한편, 바닥에 부착되어 있는 세포는 PB로 세척한 후, 1N NaOH로 lysis 시켜 총 단백질 양을 측정하여 일정 단백질 당 procollagen 합성 양을 구하였다. 각각의 Procollagen 양과 단백질 양은 검량선에 따라 계산하였다.

상기 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 시료에 대한 콜라겐 합성 효과를 측정한 결과를 하기 표 8에 나타내었다.

콜라겐 합성 효과 (%)	시료	농도 (%)
	시료	0	1	2	5
	비교예 1	100.00	103.6	118.3	127.2
	비교예 2	100.00	101.6	105.3	117.2
	비교예 3	100.00	94.6	96.8	99.6
	실시예 1	100.00	103.8	112.8	125.6
	아스코르빈산 (vitamic-c)	100.00	105.6	120.6	132.6

상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 비교예 1 내지 3 보다 월등히 높은 콜라겐 합성 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

< 실험예 6> MMP -1 발현 억제 평가

본 발명에 따른 화장료 조성물의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP(Matrix metalloproteinase)-1 농도를 측정하기 위해서 효소면역분석법(ELISA)을 실시하였다. 실험 방법은 하기와 같다.

본 시험을 통해 시험물질이 섬유아세포 내 콜라게나제 생성 억제 정도를 공시료액과 비교하고자 하였다. HDF-N cell (ATCC)을 24 well plate에 1 × 104 cells/well 농도로 분주한 다음 세포 배양 조건에서 24시간 배양하였다. 24시간 이후 배지를 버리고 DPBS로 세척한 다음, DPBS 200㎕를 첨가하여 UV-A 5 J/㎠를 조사하였다. 시료를 적당한 농도로 배지에 희석한 후 세포에 처리하여 세포 배양 조건에서 48시간 배양하였다. 양성대조군은 retinoic acid를 사용하였으며, 농도는 10 μM로 처리하였다. 배양액을 취하여 Human total MMP-1 ELISA kit (R&D system, DY901, USA)을 사용하여 콜라게나제 양을 측정하였다. 측정된 콜라게나제 양은 총 단백질 양으로 보정하였다.

상기 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 시료에 대한 MMP-1 저해 활성을 측정한 결과를 하기 표 9에 나타내었다.

시료	처리농도 (%)	MMP-1 저해 활성 (%)
비교예 1	1	19
비교예 1	2	36
비교예 2	1	14
비교예 2	2	29
비교예 3	1	1
비교예 3	2	0
실시예 1	1	25
실시예 1	2	42
Retinol	0.1	20

상기 표 9에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 비교예 1 내지 3 보다 우수한 MMP-1 저해 활성을 나타냄을 확인할 수 있었다.

< 실험예 7> NO 저해 활성

본 발명에 따른 화장료 조성물의 항염 효과를 검정하기 위해 NO 저해 능 평가를 실시하였다. 염증반응은 상처부위나 조직에서 물리적 자극, 세균감염, 화학적 물질에 의한 침투가 일어났을 때의 보호기작으로 저항하고 손상 부위를 재생하려는 기전이다. 하지만 과도한 염증반응은 주변 조직을 손상 시켜 질병의 상태를 악화시키거나 새로운 질병을 유도한다. 이에 LPS(lipopolysaccharide)로 유발된 cytokine 생성 증가에 따른 영향을 통해 시료의 NO 저해 활성을 측정하였다. 실험 방법은 하기와 같다.

RAW 264.7 세포 (ATCC)를 18시간 배양 후 LPS 처리하여 염증을 유발시키고 동시에 시료를 처리하여 24시간 후, NO 생성량을 측정하였다. LPS 단독 처리구에 비하여 실시예 1는 농도 의존적으로 NO 생성량을 저해 효과가 나타났다. 한편, 모든 시료군의 처리농도에서는 세포독성은 나타나지 않았다.

상기 비교예 1 내지 3 및 실시예 1의 시료에 대한 NO 저해 활성을 측정한 결과를 하기 표 10에 나타내었다.

시료	처리농도 (%)	NO 저해 활성 (%)
비교예 1	0.5	31
비교예 1	1.0	40
비교예 2	0.5	32
비교예 2	1.0	42
비교예 3	0.5	-
비교예 3	1.0	-
실시예 1	0.5	56
실시예 1	1.0	60

상기 표 10에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 비교예 1 내지 3 보다 우수한 NO 저해 활성을 나타냄을 확인할 수 있었다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

라이신, 히스티딘, 아르기닌, 아스파르트산, 트레오닌, 세린, 글루탐산, 프롤린, 글라이신, 알라닌, 발린, 메티오닌, 아이소류신, 류신, 타이로신, 페닐알라닌, 시스테인, 아스파라긴, 글루타민, 시트룰린, 트립토판, 오르니틴, 및 타우린으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 아미노산; 및
해양 심층수 추출 미네랄을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 해양 심층수 추출 미네랄은 염화 나트륨인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 아미노산의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.004 중량% 내지 0.1 중량%인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 해양 심층수 추출 미네랄의 함량은 조성물 전체 중량에 대하여, 0.001 중량% 내지 0.02 중량%인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 피부 보습용인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 항산화용인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 또는 예방용인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 항염증용인 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 항노화용인 화장료 조성물.