KR20170053544A - 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물 - Google Patents

겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 피부 보습 및 항산화, 항염, 자극완화, 피부 진정 등의 효과가 우수한 항노화용 화장료 조성물을 제조하는 기술에 관한 것이다. 본 발명에 따른 혼합추출물은 피부 수렴효과와 외부 스트레스에서 오는 세포 독성 완화, 염증 매개 인자 발현 억제에 효과적이어서 이를 유효성분으로 함유하는 화장료는 피부 진정 및 피부 보호에 우수한 효과를 나타낸다.

Description

겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물{Cosmetic composition for moisturizing and anti-aging containing extracts of Viscum album, Chamaecyparis Obtusa, Quercus Robur and Camellia japonica Linne}
본 발명은 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 피부 보습, 항산화, 항염, 자극완화, 피부 진정 등의 효과가 우수한 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물을 제조하는 기술에 관한 것이다.
피부 스트레스를 쌓이게 하는 요인으로는 자외선, 유해환경, 과도한 화장품의 사용, 심리적 스트레스 등이 있다. 피부에 스트레스를 주는 요인 중 가장 큰 영향을 미치는 것으로 자외선을 들 수 있는데 환경오염으로 오존 농도가 낮아지면서 피부는 사계절 내내 자외선에 노출되어 있다. 이러한 자외선은 피부 건조, 피부암, 색소침착 등을 일으켜 피부 손상을 가져온다. 또한 매연, 산성비 등의 유해환경도 피부에 스트레스를 주는데 산성비는 눈, 피부, 두피 등에 자극을 주고 황사는 피부의 탄력과 수분을 빼앗아 피부에 자극이 없도록 관리를 철저히 해야 한다. 피부에 스트레스를 주는 다른 원인으로 과도한 화장품의 사용을 들 수 있는데 피부가 흡수할 수 있는 것 이상의 양을 바르거나 피부에 맞지 않는 제품을 계속 사용하거나, 혹은 클렌징을 제대로 하지 않는 것도 피부에 스트레스를 주는 원인이 된다. 이렇게 다양한 요인으로 인해 피부가 스트레스를 받게 되면 피부는 민감한 상태가 되어 피부 재생 능력이 저하되고 이로 인해 피부 탄력이 저하되어 피부색이 칙칙해진다. 또한 유해환경이나 심리적인 스트레스로 인해 피부 노화가 촉진되고 피부 트러블이 생겨 피부에 염증을 유발하게 된다.
이러한 피부 스트레스를 완화하기 위해 각종 천연물을 이용한 화장료의 개발이 이루어지고 있다. 대한민국 등록특허 제100949390호 "항산화 또는 항염 또는 자극완화 또는 보습 효과가 있는 비비추 추출물을 함유하는 화장료 조성물"에는 '항산화, 피부자극 완화, 항염, 외부스트레스 방어 및 보습 효과가 우수한 비비추의 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 노화방지 및 피부개선 효과를 발휘'하는 화장료조성물이 개시되어 있다. 대한민국 공개특허 제2010??0000900호 "식물 복합 추출물을 함유하는 피부 보호용 화장료 조성물"에는 '국화, 천상초, 작약, 진피, 천궁, 당귀 및 지황으로부터 추출한 식물 복합 추출물을 함유하여 세포 자극 완화, 스트레스에 의한 MMP-1의 합성을 억제하고 피부 보습 효과를 가지는 화장료 조성물'이 개시되어 있다.
이에 본 발명자들은 피부 세포 보호 및 자극완화 효과가 있는 생약들을 선별하였고, 그 결과 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물이 상승효과를 발휘하여 피부 보습을 강화하며, 항산화, 항염, 자극완화, 피부 진정 등의 효과를 촉진함으로써 피부 노화를 예방한다는 사실을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명은 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 특히, 피부 보습인자의 활성을 촉진하고 항산화, 항염, 자극완화, 피부 진정 등의 효과를 촉진함으로써 피부 노화를 예방하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물이 제공된다. 상기 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물은 저온증발 응축공정을 통해 얻은 증류 추출물로서, 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물을 각각 1~20:1~20:1~20:1~20의 중량비로 혼합하여 제조되는 것이 바람직하다. 이때 유효성분으로서의 상기 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 50중량%, 바람직하게는 0.01 ~ 20중량% 함유된다.
상기 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물은 서브마이크론캡슐화, 마이크로캡슐화 또는 리포좀화로 용액 또는 파우더형태의 원료로 적용될 수 있다.
또한, 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 함유하는 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.
본 발명에 따른 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물은 피부 보습인자의 활성을 촉진하고, 항산화, 항염, 자극완화, 피부 진정 등의 효과를 촉진하는데 우수하여, 이를 유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물의 제조에 유용하다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명은 겨우살이, 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 함유하여 피부 보습인자의 활성을 촉진하고, 항산화, 항염, 자극완화, 피부 진정 등의 효과를 촉진함으로써 피부 노화를 예방하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
겨우살이(Viscum album)는 다른 나무에 기생하며 스스로 광합성하여 엽록소를 만드는 반기생식물로 사계절 푸른 잎을 지닌다. 겨우살이의 꽃은 3월 황색으로 가지 끝에 피고, 열매는 둥글고 10월에 연노란색으로 익는다. 백두대간을 따라 고지대에 주로 서식하는 겨우살이는 겨울을 이기고 사는 식물인 만큼 겨울에 채취를 시작하고 웬만큼 높은 지대가 아닌 이상 채취할 수 없어 귀하다. 겨우살이는 엽록소를 갖고 있어 자체에서 탄소 동화작용을 하여 영양분을 만들 수 있고 일생 흙과 접촉하지 않아도 꽃을 피우고 아름다운 열매를 맺는다.
편백나무(Chamaecyparis obtusa)는 대부분 아시아지역에 분포하여 있으며 노송나무, 회목이라고도 한다. 측백나무과(Cuperssaceae)에 속하는 상록비늘잎교목으로 일본을 원산지로 한다. 예부터 수피는 지붕을 덮는 데 사용했었고, 목선의 이음새에도 쓰이며 목재에서는 정유를 채취하여 향유, 약재 등에 쓰여 왔다. 유효성분으로는 alpha-pinene, caryophyllene, fenchone, quercetin, hinoki-flavone, joniperic acid, 16-hydroxyl palmitic acid, sabinic acid, tannin, taxifolin, aromanderin, amentoflavone, myricetin, flavonoid, thujaplicin, beta-biotol, beta-isobiotol 등이 함유 되어 있고, 자양강장, 지사, 지혈, 류마티즘, 신경통, 각혈, 장출혈, 강장에 효과가 있다고 보고되어 있다. 편백나무(Chamaecyparis obtusa) 잎에는 심리적 안정, 심폐 기능 강화, 심장강화에 도움이 되는 피톤치드의 함유량이 상당히 많은 것으로 알려져 있다. 피톤치드의 주성분은 휘발성 유기화합물인 terpene류이다. 이것은 삼림향을 내어 삼림욕 효과를 주며 항균, 방충, 소취 등의 다양한 기능을 가지고 있다. 정유(essential oil)는 식물의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 수지로부터 얻어지는 휘발성 오일로 오래 전부터 의약, 농약, 향료 등 생활의 여러 방면에서 사용되어 왔다. 주로 terpene계 화합물과 혼합물을 이루며, 그 작용기에 따라 알코올, 알데히드, 케톤, 에테르, 에스테르, 유기산 등으로 나눌 수 있다. 이러한 작용기들은 악취 중 암모니아, 아민류등과 반응하여 무취의 염기성 물질로 변하는 것으로 보고되어 있다.
참나무는 어느 한 종(種)을 지칭하는 것이 아니라, 참나무과 참나무속에 속하는 여러 수종(樹種)을 가리키는 명칭이다. 쓰임새가 많아 유용한 나무라는 뜻이며, 이 속(屬)에 속하는 나무는 모두 도토리라고 불리는 견과(堅果)를 생산하므로 '도토리나무'라고도 불린다. 겨울에 잎이 떨어지는 낙엽활엽수와 일년 내내 잎이 지지 않는 상록활엽수가 있으며, 대부분 높이가 8m를 넘는 교목이나, 때로는 높이가 2m 이내인 관목도 있다. 북반구의 온대에서 열대에 걸쳐 200~250종이 자라며, 잎이 어긋나고 대부분 가장자리에 톱니가 있다. 꽃은 양성화이며 4~5월에 핀다. 수꽃 이삭은 새 가지의 잎겨드랑이에서 밑으로 처지고, 암꽃 이삭은 잎겨드랑이 윗부분에 곧게 선다. 도토리라고 불리는 견과(堅果)는 접시 같은 각두(殼斗) 안에 들어 있으며 타원형 또는 공 모양이다. 각두는 총포이며 겉에 포린(苞鱗)이 덮고 있다. 포린은 종에 따라 크기가 다르고 배열도 다르다. 나무껍질에 타닌 함량이 많으므로 바닷가에서는 어망을 물들이는 데 사용한다. 재목은 매우 단단하여 쓰이는 곳이 많으며, 특히 술통을 만드는 재료로 유명하다. 견과는 채취하여 도토리묵을 만들어 먹는다. 떡갈나무의 잎은 크고 두꺼우며 향기가 있어 농촌에서는 떡을 찔 때 사용하여 왔으나, 일본에서는 떡을 싸는 데 사용하고 있다. 굴참나무에서 코르크를 채취하는데, 특히 난대지역에서는 코르크를 생산하는 경제자원으로써 지중해산 코르크 참나무(Q. suber)를 재배한다.
동백나무(Camellia japonica Linne)는 차나무과 동백나무속에 속하는 늘푸른 큰키나무이다. 동백나무는 우리나라 남부 지방에 자생하는 나무로 겨울에서 이른 봄에 붉은 꽃이 핀다. 잎이 넓은 활엽수이지만 겨울에도 잎이 떨어지지 않아 상록활엽수라고 한다. 동백 잎의 모양은 타원형이며 촉은 1.5cm~2.5cm, 길이는 4~7cm 정도 이고 잎이 빳빳하고 두툼하다. 동백나무의 다른 이름은 산다(山茶), 홍다화(紅茶花), 해홍화(海紅花), 여심화(女心花), 해석류, 동백기름나무 등으로 부른다. 동백나무의 꽃은 통째로 떨어지는데 떨어진 꽃을 주워 술을 담가 마시거나 찻잔에다 띄울 수도 있다. 꽃을 쪄서 말린 것을 빻아 가루로 만들면 지혈제로 효과가 좋다. 외상에 뿌리거나 코 피날 때도 쓴다. 목욕 후에는 동백기름을 발라 피부를 매끄럽게 했다. 비누가 없었던 시절에는 잎을 태운 재를 물에 녹여 비누 대신 썼다고 한다. 동백기름은 기계의 윤활유로 쓰였고, 등불을 밝혔으며, 불에 데었을 때 상처 난 곳에 발랐다.
본 발명의 일 구체 예에 따르면 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물은 다음과 같이 제조된다.
먼저, 생물의 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무를 각각 세절하여 열풍기에 넣고 50℃ 이하의 저온의 안정적인 온도에서 열풍으로 건조시킨다. 이때 증발된 수분을 냉각콘덴서가 장착된 관으로 이동시켜 응축하여 각각의 추출물을 제조하고, 이를 혼합하여 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 제조한다. 이때, 생물의 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무를 먼저 혼합한 후 증류 추출하여 혼합추출물을 제조할 수도 있다.
본 발명에 있어서, 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무의 혼합추출물은 1~20:1~20:1~20:1~20의 중량비, 바람직하게는 1.5:1.5：1:1의 중량비로 혼합하여 이루어지는 것이다. 상기 혼합비율로 제조되는 혼합추출물에서 가장 우수한 보습 활성, 항산화 및 항염활성을 나타내었다.
유효성분으로서의 상기 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무의 혼합추출물은 조성물 전 중량에 대하여 0.001 ~ 50중량% 함유되며, 이 중 0.01~20 중량% 함유되는 것이 더욱 바람직하다. 0.001중량% 미만으로 함유되는 경우에는 활성이 약하며, 50중량%를 초과하는 경우 제형에 있어 불안정하다.
만약 상기 식물추출물을 함유하는 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 용액 또는 파우더 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액 또는 파우더의 양을 조절할 수 있을 것이다.
이와 같이 제조된 본 발명의 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물은 그 상승작용에 의하여 각각의 성분과 비교하여 보습과 관련된 인자의 발현 증가 효과(시험예 1), 항산화 효과(시험예 2), 염증 매개 인자의 발현 억제효과 (시험예 3)가 우수하였으며, 자외선 조사로부터의 세포 독성 완화효과(시험예 4), 피부 진정 효과(시험예 5)도 우수하다는 것을 확인하였다.
본 발명의 조성물은 피부외용제로서 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 유연화장수, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 또는 보디 오일 등의 기초 화장료 및 파운데이션, 립스틱, 마스카라 또는 메이크업 베이스 등의 색조 화장료 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 조성물을 세정제로 사용할 경우, 세안제 및 목욕제를 제조할 수 있다.
[실시예]
이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 겨우살이추출물의 제조
생물 중량 200g의 세절한 겨우살이를 48℃의 열풍기에 넣고 24시간 동안 열풍처리 한 후, 증발된 수증기를 냉각관으로 이동시켜 응축된 수액을 받아 8㎛ 투과사이즈를 갖는 여과지로 여과하였다. 이 여과액으로부터 겨우살이추출물 52g을 수득하였다.
실시예 2: 편백나무추출물의 제조
생물 중량 200g의 세절한 편백나무를 48℃의 열풍기에 넣고 24시간 동안 열풍처리 한 후, 증발된 수증기를 냉각관으로 이동시켜 응축된 수액을 받아 8㎛ 투과사이즈를 갖는 여과지로 여과하였다. 이 여과액으로부터 편백나무추출물 48g을 수득하였다.
실시예 3: 참나무추출물의 제조
생물 중량 200g의 세절한 참나무를 48℃의 열풍기에 넣고 24시간 동안 열풍처리 한 후, 증발된 수증기를 냉각관으로 이동시켜 응축된 수액을 받아 8㎛ 투과사이즈를 갖는 여과지로 여과하였다. 이 여과액으로부터 참나무추출물 45g을 수득하였다.
실시예 4: 동백나무추출물의 제조
생물 중량 200g의 세절한 동백나무를 48℃의 열풍기에 넣고 24시간 동안 열풍처리 한 후, 증발된 수증기를 냉각관으로 이동시켜 응축된 수액을 받아 8㎛ 투과사이즈를 갖는 여과지로 여과하였다. 이 여과액으로부터 동백나무추출물 40g을 수득하였다.
실시예 5 ~ 11: 혼합추출물의 제조
상기 실시예 1 내지 4에서 제조된 추출물을 표 1의 혼합비에 따라 실시예 5 ~ 11의 혼합추출물을 제조하였다.
성분(중량비) 실시예 5 실시예 6 실시예 7 실시예 8 실시예 9 실시예 10 실시예 11
겨우살이 추출물 50% 30% 30% 25% 10% 40% 30%
편백나무 추출물 50% 30% 30% 25% 10% 40% 30%
참나무 추출물 - 40% - 25% 40% 10% 20%
동백나무 추출물 - - 40% 25% 40% 10% 20%
비교예 1
실시예 1 내지 11의 활성시험에 있어서 비교예 1은 보습제로 이용되고 있는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.
비교예 2
실시예 1 내지 11의 활성시험에 있어서 비교예 2는 항산화제로 이용되고 있는 BHT(Butylated hydroxyanisole)를 사용하였다.
비교예 3
실시예 1 내지 11의 활성시험에 있어서 비교예 3은 항염제로 이용되고 있는 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.
비교예 4 ~ 7: 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물 각각을 이용한 제형 제조
겨우살이추출물, 편백나무추출물, 참나무추출물, 동백나무추출물 각각을 함유한 로션을 하기의 표 2의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
실시예 12 ~ 18: 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 이용한 제형 제조
겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 함유한 로션을 하기의 표 2의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
(중량%) 대조예 비교예 실시예
4 5 6 7 12 13 14 15 16 17 18
겨우살이추출물(실시예 1) - 0.5 - - - - - - - - - -
편백나무추출물(실시예 2) - - 0.5 - - - - - - - - -
참나무추출물(실시예 3) - - - 0.5 - - - - - - - -
동백나무추출물(실시예 4) - - - - 0.5 - - - - - - -
혼합추출물(실시예 5) - - - - - 0.5 - - - - - -
혼합추출물(실시예 6) - - - - - - 0.5 - - - - -
혼합추출물(실시예 7) - - - - - - - 0.5 - - - -
혼합추출물(실시예 8) - - - - - - - - 0.5 - - -
혼합추출물(실시예 9) - - - - - - - - - 0.5 - -
혼합추출물(실시예 10) - - - - - - - - - - 0.5 -
혼합추출물(실시예 11) - - - - - - - - - - - 0.5
밀납 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
폴리솔베이트 60 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
솔비탄 세스퀴올레이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
유동 파라핀 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
소르비탄 스테아레이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
친유형 모노스테아린산 글리세린 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
스테아린산 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
글리세릴스테아레이트/
피이지-400 스테아레이트		 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
프로필렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
카르복시폴리머 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
트리에탄올아민 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100
시험예 1: 보습관련인자 발현 증가효과 확인
CCD-986Sk 세포를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 각각의 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)을 통해 Hyaluronan Synthase-3(HAS-3)의 발현 증가율을 확인하였다. HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다. 대조군으로는 비교예 1(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.
HAS-3 발현 증가율(%)=(시료 HAS-3 발현양/대조군 HAS-3 발현양)×100
시료명 처리농도(w/v%) HAS-3 증가율(%)
실시예 1 0.1 91.0
실시예 2 0.1 82.0
실시예 3 0.1 83.3
실시예 4 0.1 83.4
실시예 5 0.1 85.5
실시예 6 0.1 91.0
실시예 7 0.1 92.1
실시예 8 0.1 94.2
실시예 9 0.1 94.7
실시예 10 0.1 95.5
실시예 11 0.1 96.3
비교예 1 0.1 83.7
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 실시예 1 내지 11, 모두에서 보습관련 인자인 HAS-3의 증가 효과를 확인할 수 있었다. 그중에서도 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물의 혼합비율이 1.5:1.5:1:1로 혼합된 형태인 실시예 11이 가장 우수한 보습 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, 비교예 1(Hyaluronic acid) 보다 우수한 보습 효과를 나타내었다.
시험예 2: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험
실시예 1 내지 11에서 수득한 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물 및 혼합추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 다른 항산화제 즉, 비교예 2(Butylated hydroxyanisole)를 비교샘플로 하여, NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. 항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가하였다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성된 활성산소를 니트로 블루 테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응시켜 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정하였으며, 구체적인 활성산소 소거율 측정방법은 다음과 같다. 바이알 (5ml vial)에 0.05M Na2CO3 2.4ml, 3mM 크산틴 용액 0.1ml, 3mM EDTA 용액 0.1ml, BSA 용액 0.1ml 및 0.72mM NBT 용액 0.1ml를 가하고, 여기에 DMSO (dimethyl sulfoxide)에 0.1(wt/v)%농도로 제조한 각각의 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다. 그 후 크산틴옥시다제 용액 0.1ml을 가하여 빨리 교반하고 25℃ 에서 20분간의 배양을 개시한다. 그 후 6Mm CuCl2 용액 0.1ml을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 또한, 시료용액의 블랭크(Blank)는 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. 효과의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
활성산소 소거율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕× 100
St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도
시료명 처리농도(w/v%) 항산화 효과 (%)
실시예 1 0.1 86.7
실시예 2 0.1 87.3
실시예 3 0.1 88.4
실시예 4 0.1 84.3
실시예 5 0.1 93.7
실시예 6 0.1 93.5
실시예 7 0.1 92.1
실시예 8 0.1 93.2
실시예 9 0.1 94.3
실시예 10 0.1 93.7
실시예 11 0.1 96.5
비교예 2 0.1 90
상기 표 4에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 실시예 1 내지 11, 시료 모두에서 항산화 효과를 확인할 수 있었다. 그중에서도 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물의 혼합비율이 1.5:1.5:1:1로 혼합된 형태인 실시예 11이 가장 우수한 항산화 효과를 나타내었다.
시험예 3: 염증매개인자 발현 억제효과 확인
RAW264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 12시간 동안 기아상태를 유지시킨 후, LPS 10ng/mL와 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)을 통해 TNF-α의 발현 억제율을 확인하였다. TNF-α 발현 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다. 대조군으로는 비교예 3인 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.
TNF-α 발현증가율(%)=(시료 TNF-α 발현양/대조군 TNF-α 발현양)×100
시료명 처리농도(w/v%) TNF-α 억제율(%)
실시예 1 0.1 62.0
실시예 2 0.1 61.8
실시예 3 0.1 63.4
실시예 4 0.1 64.7
실시예 5 0.1 73.5
실시예 6 0.1 71.0
실시예 7 0.1 72.1
실시예 8 0.1 74.2
실시예 9 0.1 74.7
실시예 10 0.1 75.5
실시예 11 0.1 76.3
비교예 3 0.05 61.2
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 실시예 1 내지 11, 시료 모두에서 TNF-α 억제 효과를 확인할 수 있었다. 그 중에서도 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물의 혼합비율이 1.5:1.5:1:1로 혼합된 형태인 실시예 11이 가장 우수한 TNF-α 억제 효과를 갖을 뿐 만 아니라, 비교예 3(Dexamethason) 보다 우수한 항산화 효과를 나타내었다.
시험예 4: 자외선 조사에 의한 세포 독성 완화 효과 확인
사람 유래 섬유아세포 (CCD-986sk) 2×105 cells/well 의 농도로 96 well plate에 배양하고 10% FBS를 함유하는 IMDM 배지 0.2㎖를 공급한 후 24시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 여기에 DMSO에 녹인 시료용액을 처리 한 다음 2 MED의 자외선 양을 10분간 조사한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후, 세포의 생존력을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하였다. MTT assay는 배양한 세포에 MTT 용액 0.1㎖을 가한 후 4시간 동안 배양한 다음 배지는 제거하고 DMSO 0.5㎖를 넣어 형성된 발광결합체를 ELISA를 사용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하여 다음 표 6에 결과를 정리하였다. 대조군으로는 비교예 2(BHT)를 사용하였다.
시료명 처리농도(w/v%) 세포 생존율(%)
실시예 1 0.1 65.9
실시예 2 0.1 62.1
실시예 3 0.1 68.9
실시예 4 0.1 69.2
실시예 5 0.1 77.2
실시예 6 0.1 76.9
실시예 7 0.1 74.2
실시예 8 0.1 72.4
실시예 9 0.1 79.2
실시예 10 0.1 77.2
실시예 11 0.1 82.8
비교예 2 0.1 81.0
상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 실시예 1 내지 11, 시료 모두에서 세포 독성 완화 효과를 확인할 수 있었다. 그중에서도 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물의 혼합비율이 1.5:1.5:1:1로 혼합된 형태인 실시예 11이 가장 우수한 세포 독성 완화 효과를 나타내었다.
시험예 5: 피부 진정 효과 확인
현재 피부 알레르기 증상이 없는 20 내지 30대 남녀 20명을 대상으로 하완의 안쪽 부위에 테입 스트리핑 법(Tape Stripping Method)을 통한 피부자극을 유발한 후 본 발명에 따른 혼합추출물을 함유한 화장료와 함유되지 않는 화장료를 도포하여 유발된 자극이 진정되는 정도를 상대평가 하였다. 먼저 하완의 안쪽 부위 두 곳에 일반 스카치 테잎으로 30회 테이핑을 하여 피부 홍반을 유발하였다. 홍반 유발된 후, 본 발명에 따른 혼합추출물을 함유한 화장료를 도포하였으며, 본 발명에 따른 혼합추출물을 함유하지 않은 화장료를 도포하였다. 도포 후 3시간 후 피부진정 정도를 평가하였다.
<피부자극정도 (홍반) 평가>
0 (무반응) 1 (매우 경미한 홍반흔적) 2 (희미한 또는 가벼운 홍반)
3 (경계가 뚜렷하나 약한 홍반) 4 (뚜렷한 홍반) 5 (심한 홍반)
시료명 피부 자극 정도
좌 우
혼합추출물 함유 로션(실시예 12) 1 1
혼합추출물 함유 로션(실시예 13) 1 1
혼합추출물 함유 로션(실시예 14) 1 2
혼합추출물 함유 로션(실시예 15) 2 1
혼합추출물 함유 로션(실시예 16) 1 0
혼합추출물 함유 로션(실시예 17) 0 1
혼합추출물 함유 로션(실시예 18) 0 0
겨우살이추출물 함유 로션(비교예 4) 2 1
편백나무추출물 함유 로션(비교예 5) 2 2
참나무추출물 함유 로션(비교예 6) 1 1
동백나무추출물 함유 로션(비교예 6) 1 2
Placebo(대조예) 3 3
상기 표 7에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 함유하는 실시예 12 내지 18의 로션 조성물은, 본 발명 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 함유하지 않은 대조예에 비해 피부 자극 완화 효과가 우수하였다. 또한, 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 추출물을 단독으로 함유할 때보다 혼합 되었을 때 피부 자극 완화 효과가 더 우수함을 확인할 수 있었다.

Claims (6)

  1. 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물을 함유하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 겨우살이, 편백나무, 참나무 및 동백나무 혼합추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~20중량% 함유되는 것임을 특징으로 하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 세포의 보습인자 발현을 촉진하는 것임을 특징으로 하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부의 염증 매개 인자 발현 억제를 통해 피부의 염증을 억제하는 것임을 특징으로 하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 자외선 조사에 의한 세포 독성을 완화하는 것임을 특징으로 하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 진정 효과를 보유한 것임을 특징으로 하는 피부 보습 및 항노화용 화장료 조성물.


















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ES2823599A1 (es) * 2019-11-06 2021-05-07 Univ Vigo Extractos acuosos antioxidantes de materias primas vegetales, procedimiento de obtención y su uso en la composición de un producto cosmético y/o dermatológico

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