KR20170115090A

KR20170115090A - 약학 제제

Info

Publication number: KR20170115090A
Application number: KR1020177025107A
Authority: KR
Inventors: 마이클 조세프 에두아르 부넌; 끌로드 피어붐
Original assignee: 유씨비 바이오파마 에스피알엘
Priority date: 2015-02-09
Filing date: 2016-02-05
Publication date: 2017-10-16
Anticipated expiration: 2036-02-05
Also published as: HUE047860T2; CN107249571A; MX2017009827A; KR102684038B1; EP3256154A1; PT3256154T; BR112017014414B1; US20180028652A1; SG11201705484WA; CA2973423A1; BR112017014414A2; DK3256154T3; EA201791716A1; AU2016218074B2; LT3256154T; US10039826B2; EP3256154B1; HRP20192222T1; MX375627B; CA2973423C

Abstract

본 발명은 신규한 약학 제제에 관한 것이고, 구체적으로, 단백질, 더 구체적으로 항체를 활성 성분으로서 포함하는 약학 제제에 관한 것이다.

Description

약학 제제

본 발명은 약학 제제 분야에 속한다. 더 구체적으로, 본 발명은 항체와 같은 단백질을 포함하는 약학 제제에 관한 것이다.

항체는, 다른 단백질 치료제와 마찬가지로, 크고 복잡한 분자이며, 일정 기간 동안 저장할 때 본질적으로 불안정하여, 화학적으로도 물리적으로도 활성이 감소 또는 손실될 가능성이 있다. 전형적인 화학적 불안정성은 탈아미노화, 가수분해, 산화, 베타-제거반응 또는 디설파이드 교환을 초래할 수 있다. 물리적 불안정성은 변성, 응집 또는 침전을 초래할 수 있다.

따라서, 저장, 수송, 취급 및 투여를 위해서는, 항체 및 다른 단백질의 약학 제제는 상기 현상 중 어느 것을 최소화해야 한다. 항체는 투여 직전에 용매 중에서 재구성하기 위한 냉동건조, 즉 동결건조된 형태로 제제화될 수 있거나, 또는 항체는 수용액과 같이 액체 형태로 제제화될 수 있다. 항체의 냉동건조된 제제는 보다 안정한 경향이 있는데, 그 이유는 물이 반응물이거나 용매로서 반응물의 전달을 촉진하여, 단백질 불안정성을 초래하는 많은 화학적 분해 경로에 중요하기 때문이다(Andya, J. D., Hsu, C. C., & Shire, S. J. (2003). Mechanisms of aggregate formation and carbohydrate excipient stabilization of lyophilized humanized monoclonal antibody formulations. AAPS. PharmSci. 5, E10). 그러나, 안정성이 덜해지는 경향에도 불구하고, 최근 항체 및 다른 단백질의 액체 제제에 관심이 집중되었는데, 그 이유는 액체 제제가 동결건조 제제에 비해 환자 및 건강관리 전문가가 취급 및 투여하기가 보다 쉽고 보다 편리하기 때문이다. 액체 제제는 재구성할 필요가 없고 최소한의 준비로 투여할 수 있다. 그러나, 응집, 침전 또는 분해와 같은 원치않는 반응을 방지하거나 최소화하기 위한 액체 제제 중의 단백질의 안정화는 특별한 도전과제로 남아있다. 응집이 특히 문제이다. 개개의 단백질 분자는 물리적으로 서로 들러붙어, 예를 들어, 불용물 또는 침전물 형성을 초래하며, 이는 더 이상 활성을 나타내지 않을 수 있고 심지어 투여 시 원치않는 면역학적 반응을 유발할 수 있다. 또한, 응집물 형성에 의해 유발되는 주된 문제점은 투여하는 동안 약학 제제가 시린지 또는 펌프를 막을 수 있다는 것이다.

응집물 및 입자 형성에 대한 제안된 물리적 분해 경로는 종종 입체형태적(conformational) 효과와 콜로이드 안정성 효과의 조합으로부터 기인한다고 설명되고 있다. 입체형태적 안정성은 생리학적 조건 하에서의 천연의 폴딩된 상태와 폴딩되지 않은(언폴딩) 상태 간의 자유 에너지 차이이며, 따라서 항체가 언폴딩(unfolding)되는 경향의 척도가 된다. 언폴딩은 종종 전체적인 응집 속도를 책임진다. 콜로이드 안정성은 천연 상태의 분자의 자체 반발 경향을 의미하며, 주로 그 분자의 표면 부위에 위치한 비특이적 전하에 기인한다.

장기간 저장 시의 응집 및 단백질 분해는, 일반적으로 소정의 저장 기간 후 제제 중에 존재하는 고분자량 종(high molecular weight species; HMWS)의 수준을, 일반적으로 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 이용하여 측정함으로써 평가한다. 때로는, 이러한 사건들이 관찰자가 볼 수 있는 침전을 유도할 수 있다.

항체 및 다른 단백질 치료제의 유용한 액체 약학 제제가 되기 위해서는, 장기 안정성이 있어야 하고 정확한 양의 활성 형태의 약학 성분을 함유하도록 상기 반응들을 최소화할 필요가 있다.

그 결과, 바람직한 배제 메카니즘을 통해 항체의 분해 속도를 감소시켜, 과잉 수층이 항체를 둘러싸게 하고 단백질이 더 콤팩트한 상태가 되게 하여 그 표면적을 최소화할 수 있는 데 도움이 되는 다양한 안정제를 찾는 연구가 당해 기술분야에서 이루어졌다. 안정제는 특정한 당, 폴리올, 아미노산, 염 및 폴리머, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일반적으로, 특정 제제에 대해 바람직한 안정제가 선택되지만, 때로는 안정제의 조합이 사용될 수 있다.

통상적으로, 아미노산 안정제가, 당의 대용물로서, 주사용 액체 항체 제제에 이용되었고, 일반적으로 항체 안정성을 최적화하기 위해 더 낮은 pH에서 제제화되었다. 또한, 적절한 텍스쳐를 제공하도록 작용함으로써, 1차 건조 공정 중의 붕괴와 같은 제제와 관련된 겉보기 부피 및 점조도 문제를 피하기 위해, 결정화 가능한 화합물이 필요한 경우, 글리신이 냉동건조 제품의 증량제로 흔히 선택된다. 결정질 증량제는 고체 제품의 밀도를 증가시키고 임의의 구조 상실의 위험을 피하는 충전제로서 작용한다. 결정질 증량제는 또한 균질하고 조밀한 조성물을 제공하여, 재구성이 용이하고, 동결건조 공정의 1차 건조 시에 높은 승화 온도를 허용하는 높은 공융점을 갖는다. 이러한 점에서, 글리신이 그 결정화 특성, 즉 저온보호 특성으로 인해 사용되지만, 결정화되면, 글리신은 더 이상 안정화 능력을 갖지 못하여, 일반적으로 그러한 제제에 추가적인 안정제를 첨가한다.

안정제의 선택은 혈중 글루코스에 미치는 가능한 효과 및 신장 기능에 미치는 그 효과 등의 그들 각각의 위험 프로파일에 의해서도 영향을 받는다. 이러한 측면에서, 정맥내 주사를 통해 투여될 때의 수크로스는 가수분해가 될 수 없기 때문에, 혈중 글루코스 수치에 영향을 주지 않는다. 그러나, 정맥용 항체 제품은 신장 기능장애, 급성 신부전 및 삼투압성 신증과 연관되어 있고, 당 안정화 제제, 특히 수크로스 안정화 제제는 삼투압성 신증으로 인한 급성 신부전의 최고 위험을 부과한다. 수크로스는 단당류인 글루코스와 프럭토스로 이루어진 이당류이며, 다른 유기 삼투물질과 비교할 때, 수크로스는 중간 강도의 단백질 안정제이다(Street T.O. et al., A molecular mechanism for osmolyte-induced protein stability. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006; 103(38):13997-14002).

또한, 제제는 일반적으로 완충제, 계면활성제, 또는 증량제(통상적으로 냉동건조 제제 중에 존재함)와 같은 추가적인 부형제를 함유한다.

US　8,632,778은, 글리신을 함유하고 당을 함유하지 않는 히스티딘 완충제 중에 인간화 PM-1 항체를 함유하는 액체 제제를 개시한다.

US　2004/0033228은, 시트레이트 또는 포스페이트 완충제 중에 항체, 만니톨 및 폴리솔베이트를 포함하는 액체 제제를 개시한다.

US　6,372,716은, 글리신 및 수크로스를 함유하는 히스티딘 완충제 중에 인자 IX를 함유하는 냉동건조된 제제를 개시한다.

항체들이 유사한 전체 구조를 갖는다고 해도, 이들은 아미노산 조성과 그 글리코실화 패턴뿐만 아니라 전하 및 글리코실화 변이와 같이 가능한 번역후 변형에 있어서 서로 다르다. 이러한 차이들이 다른 성분들과의 상호작용을 변경시키고, 이것이 최종적인 제제의 장기 안정성에 영향을 미치며, 이것은 결과적으로 또한 최적화를 필요로 하게 한다.

투여량을 줄이기 위해서는 제제 내의 단백질 농도를 증가시켜야 하는 경향이 있으므로, 단백질 응집 및 침전에 관한 문제는 더 분명해졌다. 상기한 점을 고려할 때, 당해 기술분야에는, 장기간 저장 후 단백질 응집 및 침전이 감소된, 항체의 추가로 개선된 액체 약학 제제를 제공할 필요가 여전히 존재한다.

본 발명은 활성 성분으로서 치료용 단백질, 특히 항체를 포함하는 신규한 액체 제제를 제공함으로써 위에서 확인한 요구사항을 해결한다. 놀랍게도, 액체 약학 제제 중의 큰 불용성 응집물(침전물)에 비해 가용성 응집물의 외관과 관련하여 안정제들 간에 차등적인 안정화 효과가 관찰되었다. 이러한 놀라운 발견은 장기간 저장 후 단백질 응집 및 침전의 감소를 나타내는 신규한 약학 제제로 이어졌다. 보다 구체적으로, 본 발명은 활성 성분으로서 CSF1R에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 액체 제제를 추가로 제공한다.

제1 실시형태에서, 본 발명은 활성 성분으로서의 항체, 글리신 및 수크로스를 포함하는 액체 약학 제제를 제공한다.

제2 실시형태에서, 본 발명의 제1 실시형태에 따른 액체 약학 제제는 20 mM 내지 200 mM의 농도로 글리신을 포함한다. 본 발명의 액체 약학 제제의 다른 실시형태에서, 글리신 농도는 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 175 mM, 바람직하게는 100 mM 내지 150 mM, 또는 125 mM이다.

제3 실시형태에서, 본 발명의 제1 또는 제2 실시형태에 따른 액체 약학 제제는 20 mM 내지 200 mM의 농도로 수크로스를 포함한다. 본 발명의 액체 약학 제제의 또 다른 실시형태에서, 수크로스 농도는 50 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 175 mM, 바람직하게는 100 mM 내지 150 mM, 또는 125 mM이다.

제4 실시형태에서, 본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제는 적어도 50 mg/ml 항체, 바람직하게는 50 mg/ml 내지 300 mg/ml, 또는 50 mg/ml 내지 250 mg/ml, 또는 50 mg/ml 내지 200 mg/ml, 또는 50 mg/ml 내지 150 mg/ml, 또는 50 mg/ml 내지 100 mg/ml의 항체를 포함한다.

또 다른 특정 실시형태에서, 본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제는 40　mg/ml 내지 80 mg/ml의 항체, 대안적으로 40 mg/ml 내지 60 mg/ml의 항체를 포함한다.

제5 실시형태에서, 본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제는 계면활성제를 추가로 포함한다. 당업자는 본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 제제에 사용하는 데 유용한 계면활성제의 선택을 알 것이며, 그 예로는 폴리솔베이트 80, 폴리솔베이트 20, 레시틴, 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188), 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 옥틸 글리코사이드, 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인, 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사코신, 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인, 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아라미도프로필-베타인, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아라미도프로필-디메틸아민, 나트륨 메틸 코코일-, 또는 디나트륨 메틸 올레일-타우레이트, 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 코폴리머를 들 수 있으나 이들에 한정되지 않는다. 본 발명의 다른 특정한 실시형태에서, 액체 약학 제제는 폴리솔베이트 80을 포함한다.

제6 실시형태에서, 본 발명의 액체 제제는 0.01% 내지 10%의 폴리솔베이트 80을 포함한다. 계면활성제의 양은 특정 단백질 및 제제 함량에 따라 조절할 수 있다. 따라서, 추가 실시형태에서, 본 발명의 제제는 0.01% 내지 5%의 폴리솔베이트 80, 0.01 내지 1%의 폴리솔베이트 80, 0.01 내지 0.1%의 폴리솔베이트 80, 바람직하게는 0.02 내지 0.1%, 또는 0.05% 폴리솔베이트 80을 포함한다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제는 저장 및 투여 시 일정한 pH를 유지하기 위해 완충제를 포함할 수 있다. 액체 약학 제제 분야에 사용되는 완충제는 다수가 존재하며, 시트레이트, 포스페이트, 락테이트, 히스티딘, 글루타메이트, 말리에이트, 타르트레이트 또는 숙시네이트를 들 수 있으나 이들에 한정되지 않는다. 바람직한 완충제 종은 통상적으로 높은 완충능을 유지하기 위해 최적의 단백질 안정성을 위한 바람직한 pH에 가까운(+/-1 pH 단위) pKa를 갖는 것 중에서 선택되며, 일련의 다양한 완충제 종 중에 놓였을 때 특정 단백질에 대해 관찰되는 입증된 최고 안정성과 관련되어 있다. 제제의 적절한 pH 범위는 일반적으로 일련의 다양한 pH 제제 중에 놓였을 때 특정 단백질에 대해 관찰되는 입증된 최고 안정성과 관련된 것으로부터 선택된다.

본 발명의 특정 실시형태에서, 본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제는 시트레이트를 포함하며, 바람직하게는 10 mM 내지 100 mM, 10 mM 내지 80 mM, 10 mM 내지 60 mM, 25 mM 내지 60 mM, 바람직하게는 40 mM 내지 60 mM, 또는 50 mM의 시트레이트 농도를 포함한다.

추가적인 특정 실시형태에서, 본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제는 pH가 4 내지 7, 바람직하게는 4 내지 6, 바람직하게는 4.5 내지 5.5, 또는 5이다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 제7 실시형태에서, 항체는 콜로니 자극 인자-1 수용체(CSF1R)에 특이적으로 결합한다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 제8 실시형태에서, 항체는 인간 CSF1R에 특이적으로 결합한다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 제9 실시형태에서, 항체는 CSF1R을 중화시킨다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 제10 실시형태에서, 항체는 인간화 또는 인간 항체이다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 제11 실시형태에서, 항체는 (a) 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2 및 서열 번호 3에 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 경쇄, 및 (b) 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5 및 서열 번호 6에 정의된 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄를 포함한다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 제12 실시형태에서, 항체는 서열 번호 7 또는 8에 정의된 가변 경쇄, 및 서열 번호 11 또는 12에 정의된 가변 중쇄를 포함한다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 추가적인 실시형태에서, 항체는 서열 번호 9 또는 10에 정의된 경쇄 및 서열 번호 13 또는 14에 정의된 중쇄를 포함한다.

제13 실시형태에서, 본 발명의 액체 약학 제제는 pH 5의 40　mM 내지 60 mM의 시트레이트 완충제, 100 mM 내지 150 mM의 글리신, 100 mM 내지 150 mM의 수크로스 및 0.02% 내지 0.1%의 폴리솔베이트 80을 포함한다.

추가적인 특정 실시형태에서, 본 발명에 따른 액체 약학 제제는 50 mg/ml 이상의 항체, pH 5의 50 mM의 시트레이트 완충제, 125 mM의 글리신, 125 mM의 수크로스 및 0.05%의 폴리솔베이트 80을 포함하며, 여기서 항체는 항-CSF1R 항체이다.

본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 액체 약학 제제의 또 다른 실시형태에서, 안정한 약학 제제는 약 35℃에서 3개월 저장한 후에 측정된 고분자량 종(HMWS)의 10% 이하, 바람직하게는 5% 이하, 더 바람직하게는 3.5% 이하의 증가를 나타낸다. 대안적으로, 안정한 약학 제제는 각각의 경우에 약 25℃에서 3개월 저장한 후에 측정된 고분자량 종(HMWS)의 1.2% 이하, 바람직하게는 1.05% 이하의 증가를 나타낸다. 바람직하게는, 제제 중의 HMWS의 양은 바람직하게는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정된다.

추가적인 실시형태에서, 본 발명은 서열 번호 9 또는 10에 정의된 경쇄 및 서열 번호 13 또는 14에 정의된 중쇄를 갖는 항체와 같은, CSF1R에 특이적으로 결합하는 항체를 활성 성분으로서 포함하는 본원에 개시된 실시형태 중 어느 것의 액체 약학 제제를 치료적 유효량으로 포유동물, 특히 인간 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물, 특히 인간 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서, 포유동물, 특히 인간 대상체는, CSF1R에 특이적으로 결합하는 항체를 사용한 치료를 통해 개선될 수 있는 질환을 가지고, 여기서 상기 질환은 암, 예를 들어, 백혈병 및 비호지킨 림프종, 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 성인 급성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, 성상세포종, 기저세포암, 담도암, 방광암, 골암, 예컨대 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 신경교종, 상의세포종, 수모세포종, 유방암, 기관지 선종, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 결장암, 대장암, 자궁내막암, 식도암, 유잉 육종(Ewing's family of tumors), 두개내 생식세포 종양, 성선외 생식세포 종양, 간외 담도암, 망막아세포종, 담낭 및 담관암, 위(위장)암, 위장관 유암종, 위장관 기질 종양(GIST), 생식세포 종양, 임신성 융모성 종양, 모양 세포성 백혈병, 두경부암, 간세포(간)암, 림프종, 예컨대 호지킨 림프종, 버킷 림프종, 피부 T 세포 림프종, 예컨대 균상식육종 및 세자리 증후군(Sezary syndrome), 하인두암, 흑색종, 예컨대 안구내 흑색종, 카포시 육종, 신장(신세포)암, 후두암, 순암 및 구강암, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암 또는 소세포 폐암, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 메르켈 세포 암종, 중피종, 구강암(mouth cancer), 다발성 골수종, 골수 형성이상 증후군, 비인두암, 신경아세포종, 구인두암, 난소암, 췌장암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 크롬친화성 세포종, 송과체아세포종 및 천막위 원시 신경외배엽 종양, 하수체 종양, 형질 세포 신생물, 흉막폐아세포종, 전립선암, 직장암, 횡문근육종, 침샘암, 육종, 고환암, 인후암, 흉선종, 갑상선암, 요도암, 또는 윌름스 종양이다.

또 다른 추가적 실시형태에서, CSF1R에 특이적으로 결합하는 항체를 사용한 치료를 통해 개선될 수 있는 질환은 섬유성 질환, 예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 특발성 폐 섬유증 및 낭성 섬유증, 관형 위축 및 간질 섬유증을 포함한 신장 섬유증, 간 섬유증, 간경변증, 원발성 경화성 담관염, 원발성 담즙성 간경변증, 심내막심근 섬유증, 종격 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증, 진행성 괴상 섬유증, 신성 전신 섬유증, 크론병, 켈로이드, 심근경색, 경피증, 전신 경화증 및 관절 섬유증이다.

본 발명의 액체 약학 제제는 환자에게 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 적절하게 투여될 수 있고, 진단을 받은 때부터 임의의 시점에 환자에게 투여될 수 있으며; 이것은 단독 치료로서 또는 앞서 기재한 병태를 치료하는 데 유용한 다른 약물 또는 치료제와 병용하여 투여될 수 있다.

항체 분자는 액체 약학 조성물의 단독 활성 성분일 수 있다. 대안적으로, 항체는 1종 이상의 다른 치료적 활성 성분과 병용하여, 예를 들어 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 따라서, 액체 약학 조성물 중의 항체 분자는 예를 들어, 상피 성장 인자 수용체 패밀리(EGFR, HER-2) 항체, 혈관 내피세포 성장 인자 수용체(VEGFR) 항체, 혈소판 유래의 성장 인자 수용체(PDGFR) 항체를 비롯한 다른 항체 성분, 또는 비항체 성분, 예컨대 이마티닙, 다사티닙, 니올티닙, 바수티닙, 제피티닙, 에를로티닙, 템시롤리무스, 반데타닙, 베무라페닙, 크리조티닙, 보리노스타트, 로미뎁신, 보르테조밉, 소라페닙, 수니티닙, 파조파닙, 레고라페닙, 카보잔티닙, 페르페니돈, 스테로이드 또는 다른 약물 분자를 포함한 다른 활성 성분들과 병용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 액체 약학 조성물은 CSF1R에 특이적으로 결합하는 항체를 제1 활성 성분으로서 포함하고, 제2 활성 성분을 추가로 포함한다.

본원에서 사용되는 활성 성분은 적절한 용량에서 치료 효과와 같은 약리학적 효과를 갖는 성분을 의미한다.

약학 조성물은 적절하게는 치료적 유효량의 항체를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료적 유효량"은 표적 질환 또는 병태를 치료, 개선 또는 예방하거나, 검출 가능한 치료적, 약리학적 또는 예방적 효과를 나타내는 데 필요한 치료제의 양을 의미한다. 임의의 항체에 있어서, 치료적 유효량은 처음에 세포 배양 어세이 또는 동물 모델에서, 통상적으로 설치류, 토끼, 개, 돼지 또는 영장류에서 추산될 수 있다. 동물 모델은 또한 적절한 농도 범위 및 투여 경로를 결정하기 위해 이용될 수 있다. 그 후, 그러한 정보를 인간에의 투여를 위한 유용한 용량 및 경로를 결정하는 데 이용할 수 있다.

인간 대상체에 대한 정확한 치료적 유효량은 질환 상태의 중증도, 대상체의 전신 건강, 대상체의 나이, 체중 및 성별, 식이요법, 투여 시점 및 빈도, 약물 조합(들), 반응 감수성 및 치료에 대한 내성/반응에 따라 달라진다. 이 양은 통상적인 실험에 의해 결정될 수 있으며, 임상의의 판단 범위 내에 있다. 일반적으로, 항체의 치료적 유효량은 0.01 mg/kg 내지 500 mg/kg, 예를 들어 0.1 mg/kg 내지 200 mg/kg, 예컨대 100　mg/kg이다.

약학 조성물은 용량당 소정량의 본 발명의 활성 물질을 함유하는 단위 제형으로 편리하게 제공될 수 있다.

상기 질환들의 치료를 위해, 적절한 투여량은, 예를 들어 이용되는 특정 항체, 치료되는 대상체, 투여 방식 및 치료 대상 병태의 성질 및 중증도에 따라 달라진다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 액체 약학 제제는 정맥내 또는 피하 경로에 의해 투여된다. 정맥내 주사를 통해 투여될 경우, 이것은 볼루스 주사 또는 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 본 발명의 실시형태 중 어느 것에 따른 약학 제제는 또한 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 약학 제제는 시린지, 주사 디바이스, 예컨대 오토인젝터, 무바늘 디바이스, 임플란트 및 패치를 사용하여 주사 또는 투여될 수 있다. 본 발명의 제제는 또한 그러한 전달을 위해 상기 제제를 함유하는 흡입 디바이스를 사용하여, 예를 들어, 네뷸라이저 또는 액체 흡입기를 사용하여 흡입을 통해 투여될 수 있다.

항체 분자의 제조 방법은 전형적으로 본 발명의 항체 분자를 코딩하는 DNA로부터 단백질의 발현을 유도하는 데 적합한 조건 하에 항체 서열을 코딩하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체 분자를 단리하는 단계를 포함한다.

항체 분자는 중쇄 폴리펩티드 또는 경쇄 폴리펩티드만 포함할 수 있고, 이 경우 중쇄 폴리펩티드 또는 경쇄 폴리펩티드만을 코딩하는 서열이 숙주 세포를 형질감염시키는 데 사용될 필요가 있다. 중쇄 폴리펩티드와 경쇄 폴리펩티드를 둘 다 포함하는 생성물의 제조를 위해서는, 세포주를 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 제1 벡터와 중쇄 폴리펩티드를 코딩하는 제2 벡터의 두 벡터로 형질감염시킬 수 있다. 대안적으로, 경쇄 폴리펩티드 및 중쇄 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 단일 벡터가 사용될 수 있다.

산업적 규모에 따라 제조될 수 있는 항체 또는 항체 단편은 재조합 항체 단편을 코딩하는 하나 이상의 발현 벡터로 형질감염된 진핵 숙주 세포를 배양함으로써 생성할 수 있다. 진핵 숙주 세포는 바람직하게는 포유동물 세포이고, 더 바람직하게는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포이다.

포유동물 세포는 그 성장과 재조합 단백질의 발현을 지지하는 임의의 배지에서 배양할 수 있으며, 바람직하게는 배지는 동물 혈청 및 펩톤과 같은 동물 유래의 제품이 없는 화학적 규정 배지이다. 세포 성장과 단백질 생산을 가능하게 하는 적절한 농도로 존재하는 비타민, 아미노산, 호르몬, 성장 인자, 이온, 완충제, 뉴클레오사이드, 글루코스 또는 등가의 에너지원의 다양한 조합을 포함하는, 당업자가 입수할 수 있는 다양한 세포 배양 배지가 있다. 추가적인 세포 배양 배지 성분들이 세포 배양 사이클 동안 다양한 시점에 적절한 농도로 세포 배양 배지에 포함될 수 있으며, 이것은 당업자에게 알려져 있다.

포유동물 세포 배양은 임의의 적절한 컨테이너, 예컨대 쉐이크 플라스크 또는 바이오리액터에서 수행할 수 있으며, 이것들은 요구되는 생산 규모에 따라 반회분식으로 작동될 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다. 이러한 바이오리액터는 교반형 탱크 또는 에어 리프트형 반응기일 수 있다. 1,000 L 초과 50,000 L, 바람직하게는 5,000 L 내지 20,000 L, 또는 내지 10,000 L의 용량을 갖는 다양한 대형 규모의 바이오리액터가 이용 가능하다. 대안적으로, 2 L 내지 100 L와 같은 더 작은 규모의 바이오리액터도 항체 또는 항체 단편을 제조하는 데 이용될 수 있다.

항체 또는 이의 항원 결합 단편은 일반적으로 포유동물 숙주 세포 배양물, 통상적으로 CHO 세포 배양물의 상청액에서 발견된다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 관심있는 단백질이 상청액에 분비되는 CHO 배양 공정의 경우, 상기 상청액은 당업계에 공지된 방법에 의해, 일반적으로 원심분리에 의해 수집한다.

따라서, 항체 제조 방법은 세포 배양 후 단백질 정제 전에 원심분리 및 상청액 회수 단계를 포함한다. 추가적인 특정 실시형태에서, 상기 원심분리는 연속 원심분리이다. 불명확함을 피하기 위해, 상청액은 세포 배양물의 원심분리로부터 얻어지는 침전된 세포 위에 놓이는 액체를 나타냄을 말해 둔다.

대안적으로, 숙주 세포는 원핵 세포, 예컨대 그램 음성 박테리아이다. 더 바람직하게는, 숙주 세포는 이 콜라이(E. coli) 세포이다. 단백질 발현을 위한 원핵 숙주 세포는 당업계에 잘 알려져 있다(Terpe, K. (2006). Overview of bacterial expression systems for heterologous protein production: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems. Appl Microbiol Biotechnol 72, 211-222.). 숙주 세포는 항체 단편과 같은 관심있는 단백질을 생산하도록 유전자 조작된 재조합 세포이다. 재조합 이 콜라이 숙주 세포는 MC4100, TG1, TG2, DHB4, DH5α, DH1, BL21, K12, XL1Blue 및 JM109를 비롯한 임의의 적절한 이 콜라이 균주로부터 유래될 수 있다. 일례는 재조합 단백질 발효를 위해 통상적으로 사용되는 숙주 균주인 이 콜라이 균주 W3110(ATCC 27,325)이다. 변형된 이 콜라이 균주, 예를 들어 대사 돌연변이체 또는 프로테아제 결손 이 콜라이 균주를 배양함으로써 항체 단편을 또한 제조할 수 있다.

본 발명의 방법에 따라 정제될 수 있는 항체 단편은, 단백질의 성질, 생산 규모 및 사용되는 이 콜라이 균주에 따라, 이 콜라이 숙주 세포의 주변세포질 또는 숙주 세포 배양물 상청액에서 발견된다. 이들 구획에 단백질을 표적화하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(Makrides, S.C. (1996). Strategies for achieving high-level expression of genes in Escherichia coli. Microbiol Rev 60, 512-538.). 이 콜라이의 주변세포질로 단백질을 안내하는 적절한 신호 서열의 예로는 이 콜라이 PhoA, OmpA, OmpT, LamB 및 OmpF 신호 서열을 들 수 있다. 천연 분비 경로에 의존함으로써 또는 단백질 분비를 유발하는 외막의 제한된 누출을 유도함으로써 상청액에 단백질을 표적화할 수 있으며, 그 예로는 pelB 리더의 사용, 단백질 A 리더의 사용, 박테리오신 방출 단백질의 공발현, 미토마이신 유도 박테리오신 방출 단백질과 함께 글리신을 배양 배지에 첨가하는 것 및 막 투과화를 위한 kil 유전자의 공발현이 있다. 더 바람직하게는, 재조합 단백질은 숙주 이 콜라이의 주변세포질에서 발현된다.

이 콜라이 숙주 세포에서의 재조합 단백질의 발현은 또한 유도성 시스템의 제어 하에 있을 수 있으며, 이로써 이 콜라이에서의 재조합 항체의 발현은 유도성 프로모터의 제어 하에 있다. 이 콜라이에 사용하기에 적합한 다수의 유도성 프로모터가 당업계에 잘 알려져 있으며, 프로모터에 따라, 증식 배지 중의 특정 물질의 농도 또는 온도 등의 요인을 변경함으로써 재조합 단백질의 발현을 유도할 수 있다. 유도성 프로모터의 예로는 락토스 또는 비가수분해성 락토스 유사체인 이소프로필-b-D-1-티오갈락토피라노사이드(IPTG)에 의해 유도될 수 있는 이 콜라이 lac, tac, 및 trc 프로모터 및 각각 포스페이트, 트립토판 및 L-아라비노스에 의해 유도되는 phoA, trp 및 araBAD 프로모터를 들 수 있다. 발현은, 예를 들어, 유도물질의 첨가에 의해, 또는 유도가 온도 의존적인 경우 온도 변화에 의해 유도할 수 있다. 재조합 단백질 발현의 유도가 배양물에 유도물질을 첨가하는 것에 의해 이루어지는 경우, 발효 시스템 및 유도물질에 따라 임의의 적절한 방법에 의해, 예를 들어, 단독 샷 첨가 또는 다중 샷 첨가에 의해 또는 유도물질을 공급물을 통해 점차적으로 첨가하는 것에 의해 유도물질을 첨가할 수 있다. 유도물질의 첨가와 실제 단백질 발현 유도 사이에 지연이 있을 수 있음이 이해될 것이며, 예를 들어, 유도물질이 락토스인 경우, 락토스에 앞서 임의의 기존의 탄소원이 이용되는 동안 단백질 발현의 유도가 일어나기 전에 지연이 있을 수 있다.

이 콜라이 숙주 세포 배양물(발효물)은 이 콜라이의 성장과 재조합 단백질 발현을 지지하는 임의의 배지 중에서 배양할 수 있다. 배지는, 예를 들어 문헌[Durany O, et al. (2004)]에 기재된 것과 같은 임의의 화학적 규정 배지일 수 있다. 에스케리키아 콜라이에서의 재조합 푸쿨로스-1-포스페이트 알돌라제의 발현에 대한 연구는 문헌[Process Biochem 39, 1677-1684]을 참조할 수 있다.

이 콜라이 숙주 세포의 배양은 요구되는 생산 규모에 따라 쉐이크 플라스크 또는 발효기와 같은 임의의 적절한 컨테이너에서 수행할 수 있다. 1,000 리터 초과 내지 약 100,000 리터의 용량을 갖는 다양한 대형 발효기가 이용 가능하다. 바람직하게는, 1,000 내지 50,000 리터, 더 바람직하게는 1,000 내지 25,000, 20,000, 15,000, 12,000 또는 10,000 리터의 발효기가 사용된다. 0.5 내지 1,000 리터의 용량을 갖는 더 작은 규모의 발효기도 사용될 수 있다.

이 콜라이의 발효는, 임의의 적절한 시스템에서, 요구되는 단백질 및 수율에 따라, 예를 들어, 연속식, 회분식 또는 반회분식 모드로 수행할 수 있다. 회분식 모드는 요구되는 경우 영양물질 또는 유도물질의 샷 첨가와 함께 이용할 수 있다. 대안적으로, 반회분식 배양이 이용될 수 있고, 발효가 완료될 때까지 성장률을 제어하기 위해 이용되는 하나 이상의 영양물질 공급 레짐과 발효기 내에 초기에 존재하는 영양물질을 이용하여 유지할 수 있는 최대 비성장률에서 유도 전 회분식으로 배양물을 배양한다. 반회분식 모드는 또한 이 콜라이 숙주 세포의 대사를 제어하고 더 높은 세포 밀도에 도달할 수 있도록 유도 전에 이용될 수 있다.

필요에 따라, 발효 배지로부터 숙주 세포를 수집할 수 있으며, 예를 들어, 숙주 세포를 원심분리, 여과 또는 농축에 의해 샘플로부터 수집할 수 있다. 이 경우, 공정은 일반적으로 단백질을 추출하기 전에 원심분리 및 세포 회수 단계를 포함한다.

항체 단편과 같은 관심있는 단백질이 숙주 세포의 주변세포질 공간에서 발견되는 이 콜라이 배양 공정의 경우, 숙주 세포로부터 단백질을 방출시키는 것이 필요하다. 이 방출은, 기계적 또는 압력 처리, 동결 해동 처리, 삼투압 충격, 추출제 및/또는 열 처리에 의한 세포 용해와 같은 임의의 적절한 방법에 의해 수행할 수 있다. 단백질 방출을 위한 그러한 추출 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 제조 방법은 단백질 정제 전에 추가적인 단백질 추출 단계를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "항체" 또는 "항체들"은 단클론 또는 다클론 항체를 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "항체" 또는 "항체들"은 당업계에 공지된 재조합 기술에 의해 생성되는 재조합 항체를 포함하나 이들에 한정되지 않는다. "항체" 또는 "항체들"은 임의의 종의 항체, 특히 포유동물 종의 항체를 포함하며, 2개의 실질적으로 완전한 중쇄와 2개의 실질적으로 완전한 경쇄를 갖는 항체, 예컨대 IgA₁, IgA₂, IgD, IgG₁, IgG_2a, IgG_2b, IgG₃, IgG₄, IgE 및 IgM 및 이들의 변형된 변이체를 비롯한 임의의 이소타입의 인간 항체, 비인간 영장류 항체, 예를 들어, 침팬지, 개코원숭이, 붉은 털 원숭이(rhesus) 또는 사이노몰거스 원숭이 유래의 항체; 설치류 항체, 예를 들어, 마우스, 래트, 또는 토끼 유래의 항체; 염소 또는 말 항체; 및 낙타과 항체(예를 들어, 낙타 또는 라마 유래의 항체, 예컨대 나노바디^TM) 및 이들의 유도체; 또는 조류 종의 항체, 예컨대 닭 항체 또는 상어 항체 등의 어류 종의 항체를 포함한다. 용어 "항체" 또는 "항체들"은 또한, 적어도 하나의 중쇄 및/또는 경쇄 항체 서열의 제1 부분이 제1 종으로부터 유래되고, 중쇄 및 경쇄 항체 서열의 제2 부분이 제2 종으로부터 유래되는 "키메라" 항체를 의미한다. 본원에서 관심있는 키메라 항체는 비인간 영장류(예를 들어, 구대륙 원숭이(Old World Monkey), 예컨대 개코원숭이, 붉은 털 원숭이 또는 사이노몰거스 원숭이) 유래의 가변 도메인 항원 결합 서열 및 인간 불변 영역 서열을 포함하는 "영장류화" 항체를 포함한다. "인간화" 항체는 비인간 항체로부터 유래되는 서열을 포함하는 키메라 항체이다. 대개, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역 유래의 잔기가, 원하는 특이성, 친화성 및 활성을 갖는 마우스, 래트, 토끼, 닭 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종(공여자 항체)의 초가변 영역[또는 상보성 결정 영역(CDR)] 유래의 잔기로 치환되는 인간 항체(수용자 항체)이다. 대부분의 경우, CDR 외부의, 즉 프레임워크 영역(FR) 내의 인간(수용자) 항체의 잔기가 상응하는 비인간 잔기로 추가로 치환된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 추가로 개선하기 위해 이루어진다. 인간화는 인간에 있어서 비인간 항체의 면역원성을 감소시키며, 이로써 항체를 인간 질병의 치료에 적용하는 것을 촉진한다. 인간화 항체 및 이를 제조하기 위한 몇 가지 다양한 기술이 당업계에 잘 알려져 있다. 용어 "항체" 또는 "항체들"은 또한 인간 항체를 의미하며, 이것은 인간화의 대안으로서 생성될 수 있다. 예를 들어, 면역화되면, 내인성 쥐과동물 항체 생성 없이 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 트랜스제닉 동물(예를 들어, 마우스)을 제조할 수 있다. 예를 들어, 키메라 및 생식세포계 돌연변이 마우스에 있어서의 항체 중쇄 연결 영역(JH) 유전자의 동형접합 결실은 내인성 항체 생성을 완전히 억제하는 것으로 알려져 있다. 이러한 생식세포계 돌연변이 마우스에서의 인간 생식세포계 면역글로불린 유전자 어레이의 이전은, 상기 항원으로 인간 생식세포계 면역글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 동물을 면역화할 때 특정 항원에 대해 특이성을 갖는 인간 항체를 생성하게 된다. 이러한 트랜스제닉 동물을 제조하는 기술과 그러한 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 단리하고 생성하는 기술은 당업계에 공지되어 있다. 대안적으로, 트랜스제닉 동물, 예를 들어, 마우스에서, 마우스 항체의 가변 영역을 코딩하는 면역글로불린 유전자만 상응하는 인간 가변 면역글로불린 유전자 서열로 대체한다. 항체 불변 영역을 코딩하는 마우스 생식세포계 면역글로불린 유전자는 변경되지 않는 채로 남는다. 이러한 방식으로, 항체 이펙터는 트랜스제닉 마우스의 면역계에 있어서 기능을 하며, 그 결과 B 세포 발달은 실질적으로 변화하지 않고, 이는 생체내에서 항원이 공격할 때 개선된 항체 반응을 유도할 수 있다. 관심있는 특정 항체를 코딩하는 유전자가 그러한 트랜스제닉 동물로부터 단리되었을 때, 불변 영역을 코딩하는 유전자를 인간 불변 영역 유전자로 대체하여 완전 인간 항체를 얻을 수 있다. 시험관내에서 인간 항체/항체 단편을 얻기 위한 다른 방법은 파지 디스플레이 또는 리보솜 디스플레이 기법과 같은 디스플레이 기법에 기초한 것이며, 이 때 공여자의 면역글로불린 가변(V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 유래되거나 적어도 부분적으로 인공적으로 만들어진 재조합 DNA 라이브러리가 사용된다. 인간 항체를 생성하기 위한 파지 및 리보솜 디스플레이 기법은 당업계에 잘 알려져 있다. 인간 항체는 또한 관심있는 항원으로 생체외에서 면역화된 단리된 인간 B 세포로부터 생성할 수 있으며, 그 후 융합하여 하이브리도마를 생성할 수 있고, 이것은 그 후 최적 인간 항체에 대해 스크리닝될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 "항체" 또는 "항체들"은 또한 아글리코실화(aglycosylated) 항체를 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "항체" 또는 "항체들"은 인간 유래의 항체(예를 들어, IgG) 및 다른 포유동물 종 유래의 항체를 비롯한 임의의 종의 비절두형 항체뿐만 아니라 항체 단편을 의미하기도 한다. 항체 단편은 당업계에 공지되어 있는 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린 도메인을 포함하고, 하나 이상의 항원(들)에 결합한다. 본 발명에 따른 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')₂, 및 Fv 및 scFv 단편뿐만 아니라; Fab-Fv 또는 Fab-Fv-Fv 구성체를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는, 항체 단편 또는 항체로부터 형성되는 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 도메인 항체(dAb), 예컨대 sdAb, VHH 및 VNAR 단편, 단일쇄 항체, 이중 특이적 항체, 삼중 특이적 항체, 사중 특이적 항체 또는 다중 특이적 항체를 포함한다. 상기에 정의된 항체 단편은 당업계에 공지되어 있다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "중화시킨다"는 특이적으로 결합하는 분자의 생물학적 효과를 억제하거나 실질적으로 감소시키는 항체를 말한다. 따라서, "항체가 CSF1R을 중화시킨다"라는 표현은 CSF1R에 특이적으로 결합하고, 그 생물학적 리간드 중 적어도 하나에 대한 이 수용체의 결합으로부터 얻어지는 생물학적 효과를 억제하거나 실질적으로 감소시키는 항체를 의미한다. CSF1R을 중화시키는 항체의 한 가지 특정 유형은 CSF1R에 대한 생물학적 리간드 중 하나 이상의 결합을 차단하거나 실질적으로 감소시킨다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "콜로니 자극 인자-1 수용체" 또는 "CSF1R"은 CSF1 및 인터루킨 34(IL34)에 대한 세포 표면 수용체로서 작용하고 조혈 전구 세포, 특히 단핵 식세포, 예컨대 대식세포 및 단핵구의 생존, 증식 및 분화의 조절에 있어서 필수적 역할을 하는 타이로신 단백질 키나제를 의미한다. 이것은 IL34 및 CSF1에 반응하여 향염증성 케모카인의 방출을 촉진함으로써 선천성 면역 및 염증 과정에 있어서 중요한 역할을 한다. CSF1R은 또한 파골세포 증식 및 분화의 조절, 골 흡수의 조절에 있어서 중요한 역할을 하고, 정상적인 뼈와 치아 발달에 필요하다. CSF1R은 정상적인 남성 및 여성 생식력과, 임신 중 유선에 있어서의 유선관 및 선방(acinar) 구조의 정상적인 발달에 필요하다. 이것은 또한 액틴 세포골격의 재조직화를 촉진하고, 막 러플(membrane ruffle)의 형성, 세포 부착 및 세포 이동을 조절하며, 암 세포 침습을 촉진한다.

CSF1은 대식세포의 생성, 분화 및 기능을 제어하는 사이토카인이고, CSF1R은 이 사이토카인의 생물학적 효과를 전부는 아니더라도 대부분 매개한다.

본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "Ab969.g2"는 CSF1-R에 특이적으로 결합하고, (a) 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2 및 서열 번호 3에 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 경쇄; 및 (b) 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5 및 서열 번호 6에 정의된 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체를 의미한다. 이 Ab969.g2 항체는 PCT/EP2014/068050에 이미 기재되어 있다.

항체를 언급할 때 본원에서 사용되는 바와 같은 "CSF1R에 특이적으로 결합한다", "CSF1R에 특이적으로 결합하는"이란 용어 및 상당 어구는 항체가 생물학적으로 의미있는 효과를 나타내도록 충분한 친화성와 특이성을 가지고 CSF1R에 결합한다는 것을 의미한다. 선택된 항체는 일반적으로 CSF1R에 대한 결합 친화성을 가지며, 예를 들어, 항체는 100 nM 내지 1 pM의 Kd 값으로 CSF1R에 결합할 수 있다. 항체 친화성은 예를 들어 표면 플라스몬 공명에 기초한 분석법, 예컨대 BIAcore 분석법; 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA); 및 경쟁 분석법(예를 들어, RIA's)에 의해 측정할 수 있다. 본 발명의 의미 내에서, 비한정적인 예로서 이중 특이적 항체의 경우와 같이, CSF1R에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 분자에도 결합할 수 있다.

실시예

실시예 1

50　mg/mL 농도의 항체 Ab969.g2의 다양한 약학 제제를 제조하였다. 저장 시 단백질 안정성에 미치는 그 효과를 조사하기 위해, 수크로스, 트레할로스, 만니톨, 솔비톨, 글리신, 염화나트륨, 프롤린, 알라닌을 비롯한 다수의 안정제를 스크리닝하였다.

통상적으로, 제제당 1종의 안정제를 테스트하지만, 제제 선택 작업 과정에서, 110개의 테스트한 제제 중 21개가 2종의 안정제의 조합(예를 들어, 7개 제제에서 글리신과 염화나트륨, 7개 제제에서 수크로스와 염화나트륨, 7개 제제에서 수크로스와 글리신)을 포함하였다. 제제 안정성 특성을 평가하기 위해 110개 제제를 5℃, 25℃ 및 35℃에서 3개월 저장하였다.

모든 제제를, 새로 제조된 그 상태로, 그리고 5℃, 25℃ 또는 35℃에서 1개월, 2개월 및 3개월 저장한 후에, 복수의 분석 방법(시각적 관찰, pH, 농도, 동적 광 산란, 크기 배제 크로마토그래피, 전하 배리언트, 역상 크로마토그래피)을 이용하여 분석하였다. 3개월 연구 종료 시, 총 110개의 제제를 서로 구별할 수 있는 임계적 분석은 시각적 관찰(가시적 침전이 발생하였는지 여부)과 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의한 응집물 또는 고분자량 종(HMWS) 수준의 증가인 것으로 나타났다. 테스트한 110개 중 13개 제제만이 5℃ 및 25℃의 임계 저장 온도에서 모든 시점에서 가용성(시각적 침전물 없음)이었다. 이들 13개 가용성 제제 중에서 시트레이트 완충제 중 안정제 125　mM 글리신 및 125　mM 수크로스를 함유하는 제제가 SEC로 측정 시 HMWS의 가장 낮은 증가를 나타내었다.

제제 중 수크로스와 글리신 조합의 상승적 효과는, 단일 안정제 제제(250 mM 글리신 또는 250 mM 수크로스)에 대해 얻은 임계 분석 데이터를 상기 조합 안정제 제제에 대해 얻은 임계 분석 데이터와 비교할 때 알 수 있다.

글리신 베이스의 제제는 25℃에서 2개월 저장한 후 침전을 나타내었기 때문에 중단된 반면(하기 표 1 참조), 수크로스 또는 수크로스+글리신 제제는 모든 조건에서 3개월 저장 후 용액으로 남아있어, 단일 또는 조합 안정제로서 사용된 수크로스가 시각적 침전 위험을 감소시킨다는 것을 보여준다.

적절한 제제를 찾을 때 침전 이외의 중요한 또 다른 고려사항은 육안으로 볼 수 없는 항체의 분해 및 응집으로 인한 고분자량 종(HMWS)의 형성이다. 제제 중의 HMWS의 존재는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 이용하여 측정한다.

일반적으로, 약품의 고려되는 장기 저장 조건에서, 5% 이하의 HMWS 수준이 출시 및 안정성 고려사항을 충족하는 것으로 간주되어, 허용될 수 있다.

2개월 또는 3개월 후 SEC에 의해 측정된 HMWS의 증가는 하기 표 2 및 3에 각각 제공되며, 이는 단일 또는 조합 안정제로서 사용된 글리신이 SEC로 측정 시 HMWS의 증가율을 감소시킨다는 것을 보여준다.

상기 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 수크로스와 글리신의 조합을 포함하는 제제는 최저 HMWS 증가를 나타내어, 수크로스만을 포함하는 제제보다 약 35% 더 긴 예상 보존 수명을 제공한다. 안정제의 이러한 조합은, 테스트한 모든 저장 조건에 대해 시간이 경과하여도 가시적 침전이 없음과 결부되어, 액체 단백질 제제, 더 구체적으로 항체 액체 제제에 사용하기에 놀라울 정도로 유익한 것으로 확인되었다.

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Claims

활성 성분으로서의 항체와, 글리신 및 수크로스를 포함하는 액체 약학 제제.
제1항에 있어서, 20 mM 내지 200 mM의 농도로 글리신을 포함하는 액체 약학 제제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 20 mM 내지 200 mM의 농도로 수크로스를 포함하는 액체 약학 제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 50 mg/ml 이상의 항체를 포함하는 액체 약학 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제를 포함하는 액체 약학 제제.
제5항에 있어서, 0.01% 내지 10%의 폴리솔베이트 80을 포함하는 액체 약학 제제.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 콜로니 자극 인자-1 수용체(CSF1R)에 특이적으로 결합하는 것인 액체 약학 제제.
제7항에 있어서, 항체가 인간 CSF1R에 특이적으로 결합하는 것인 액체 약학 제제.
제7항 또는 제8항에 있어서, 항체가 CSF1R을 중화시키는 것인 액체 약학 제제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간화 또는 인간 항체인 액체 약학 제제.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
a) 각각 서열 번호 1, 서열 번호 2 및 서열 번호 3에 정의된 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 경쇄; 및
b) 각각 서열 번호 4, 서열 번호 5 및 서열 번호 6에 정의된 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄
를 포함하는 것인 액체 약학 제제.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 번호 7에 정의된 가변 경쇄 및 서열 번호 11에 정의된 가변 중쇄를 포함하는 것인 액체 약학 제제.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
- pH 5의 40 내지 60 mM의 시트레이트 완충제;
- 100 내지 150 mM의 글리신;
- 100 내지 150 mM의 수크로스; 및
- 0.02 내지 0.1%의 폴리솔베이트 80
을 포함하는 액체 약학 제제.