KR20190104213A - 장기 보존 및/또는 관류 용액 - Google Patents

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Abstract

분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액이 제공된다. 본 용액은 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 포함하고, 6.6 내지 7.8의 pH를 갖고, 가열 살균을 거친 것에 근거하여 무균이다. 또한 상기 용액을 제조하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 초기 용액을 수득하기 위해 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 혼합하는 단계, 필요에 따라 초기 용액의 pH를 7.0 내지 7.8로 조절하는 단계 및 초기 용액을 가열 살균하여 장기 보존/및 또는 관류 용액을 수득하는 단계를 포함한다. 또한, 분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 플러싱 하는 방법이 제공된다. 또한, 수용자로의 최종 이식을 위한 준비로 기증자로부터 제거된 후 분리된 폐를 플러싱, 저장 및/또는 운송하는 방법이 제공된다.

Description

장기 보존 및/또는 관류 용액
본 발명은 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액 및 이의 제조 및 사용방법에 관한 것으로, 상기 용액은 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 포함하고, 6.6 내지 7.8의 pH를 갖고, 가열 살균을 거친 것에 근거하여 무균이다.
덱스트란(Dextran) 용액은 다양한 의료 목적으로 50년 넘게 사용되어 왔다. Perfadex® 용액은 1970년대 초 장기 관류를 위해 개발된 가열 살균된 덱스트란 용액이다. 지난 15 내지 20년 동안, Perfadex® 용액은 이식 전 폐의 보존을 위한 주요 제품이 되었다. Macrodex® 용액과 Rheomacrodex® 용액은 수술 동안 및 외상 환자에 혈장 증량제로 훨씬 더 오랫동안 사용되어 왔다. PrimECC® (PCT/EP2011/069524) 용액은 체외 순환기용 프라이밍 용액으로 표현되는 또 다른 덱스트란 용액이다. 이러한 용액들 모두는 약 4 내지 6의 준-생리학적 pH로 상업적으로 제공된다. 이 용액들은 포스페이트 및/또는 바이카보네이트로 약간 완충될 수 있지만, 가열 살균 동안 덱스트란의 가수분해로 인해 pH가 감소함에 따라 상업적으로 제공되는 제품의 pH는 사용 온도에서 6.6 미만 및 종종 6 미만이다. 이 준-생리학적 pH는 산도가 약하기 때문에 Macrodex® 용액 또는 PrimECC® 용액과 같이 주입되는 제품에 대한 주된 관심사가 아니어 왔으며, 혈장 내용물, 주로 혈청 알부민은 혈장 내의 생리학적 pH를 유지하기 위해 순간적으로 완충한다.
분리된 장기를 플러쉬 하거나 관류시키기 위해 덱스트란 용액을 사용하는 경우, 혈청 알부민과 같은 혈장 성분이 많지 않으며, 이에 따라 완충 능력은 분리된 장기 또는 조직에서 감소된다. 따라서, 실제로 사용자들은 일반적으로 사용 직전에 생리학적 pH에 도달하기 위해 트리스(하이드록시메틸)아미노메테인(이하에서는 TPJS 또는 THAM이라함) 또는 유사한 완충제들로 Perfadex® 용액을 완충한다. 사용자에 의한 Perfadex® 용액의 완충(사전-사용 완충이라고도 함)은 용인되어 왔지만, 제품이 바로 사용할 수 있도록 제공되지 않는 경우 실수를 저지를 위험이 항상 있다. 사용자가 용액을 완충하는 것을 완전히 잊을 수 있거나 사용자가 잘못된 농도 또는 잘못된 완충제를 사용할 수 있다. 이러한 상황 중 어느 하나라도 분리된 장기, 예를 들어 폐나 폐장의 질에 부정적인 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 바로 사용할 수 있는 사전-완충된 장기 관류 용액은 사용자 편의성뿐만 아니라 장기 보존 안정성을 향상시킨다.
WO2012/142487 에는 덱스트란 40, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 글루코스와 같은 영양분, 호르몬, 완충제 등을 포함하는 OCS 용액으로 불리는 폐 관류 용액이 기재되어 있다. 이 문헌은 OCS 용액의 pH는 생산 동안에 관찰되고, OCS용액은 가열 살균 되며, OCS 용액은 사용 전에 세포 배지로 보충되고, 그 결과된 배지의 pH는 사용 전에 예를 들어 바이카보네이트로 조절되는 것(단락[0010], [0035], [0045] 및 [0066])을 교시하며, 이는 OCS용액은 사용 전에 추가 완충이 필요한 준-생리학적 pH로 제공되는 것을 시사한다.
STEEN 용액 (PCT/SE01/02419)과 같이 비-오토클레이브 살균 여과된 덱스트란 용액은 약 15년 동안 생리학적 pH로 사용되어 왔지만, 본 발명자들의 지식에 따르면 의료용의 6.6 내지 7.8 사이의 pH를 갖는 가열 살균된 덱스트란 용액은 이용 가능하지 않아 왔다. 살균 여과는 일반적으로 낮은 덱스트란 함량을 갖는 저 볼륨 제품에 허용될 수 있다. 그렇지 않으면 덱스트란이 필터를 막아버릴 것이다.
특히 글루코스를 포함하는 용액, 특별히 복막 투석용 용액의 가열 살균에 대한 또 다른 문제점은 글루코스가 독성 분해 산물로 분해되는 것이다. 가열 살균 동안 용액의 pH를 약 3으로 더 낮추거나 살균 동안 전해질과 글루코스를 분리함으로써 이러한 독성 부산물을 감소시키려는 시도들이 있어 왔다(Ledebo et al., 2000 및 Wieslander et al., 1995).
글루코스 분해의 동일한 문제는 장기 보존과 같이 다양한 의료 목적을 위한 덱스트란 용액의 제조로부터 알려져 있다. 이 문제에 대한 주된 해결책은 장기의 물질대사를 지원하기 위한 최종 생성물 내에서 충분한 글루코스 확보를 위해 살균전에 용액 내의 글루코스의 양을 증가시키는 것이었다. 이 해결책은 글루코스 분해 산물의 어느 잠재적 독성 효과도 고려하지 않는다. 오히려 생산 중에 지나치게 많은 글루코스가 잠재적으로 독성이 있는 글루코스 분해 산물의 양을 증가시켜 문제를 악화시킨다.
본 발명의 개요
본 발명은 이러한 문제들을 해결하고 추가적인 이점들을 제공하는 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액을 제공한다. 본 용액은 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 포함한다. 본 용액은 6.6 내지 7.8의 pH를 갖고 가열 살균을 거친 것에 근거하여 무균이다. 상기 분리된 조직 또는 장기는, 예를 들어, 폐, 심장, 간, 신장, 췌장 및/또는 창자 중에서 선택될 수 있다. 본 용액은 가열 살균 전에 사용 온도를 위한 생리학적으로 허용되는 pH로 완충(사전-완충(pre-buffering)이라고도 함)되고, 가열 살균 전에 세포외액을 모방하기 위해 칼슘 이온으로 보충(사전-칼슘 보충(pre-calcium supplementation)이라고도 함)되고, 그 후 가열살균을 거친다. 따라서, 이 결과된 용액은 사용 전에 칼슘 또는 어느 다른 화합물로 어떤 추가 보충이나 어떤 추가 완충이 필요하지 않으므로, 바로 사용할 수 있다. 더욱이, 가열 살균 전 사전-칼슘 보충 및 사전-완충의 조합은 가열 살균 동안 글루코스를 보호하고, 용액 내의 더 높은 글루코스 농도를 유지함으로써 잠재적으로 독성이 있는 분해 산물의 생성을 감소시킨다.
또한, 본 발명은 분리된 조직 및 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 (1) 초기 용액을 수득하기 위해 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 혼합하는 단계를 포함한다. 또한, 상기 방법은 (2) 필요에 따라 초기 용액의 pH를 7.0 내지 7.8로 조절하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 (3) 초기 용액을 가열 살균하여 장기 보존 및/또는 관류 용액을 수득하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 관류하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 (1) 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액의 볼륨(volume)을 상기 용액이 저장되어 있는 무균 용기로부터 수득하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 (2) 상기 용액의 수득된 볼륨을 분리된 조직 또는 장기에 투여하여 분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 관류하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 수용자로의 최종 이식을 위한 준비로 기증자로부터 제거된 후 분리된 폐를 플러싱(flushing), 저장 및/또는 운송하는 방법을 포함한다. 상기 방법은 (1) 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액의 플러싱 볼륨(flushing volume)으로 기증자의 분리된 폐를 플러싱 하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 (2) 무균 장기 저장 용기를 적어도 부분적으로 상기 용액의 필링 볼륨(filling volume)으로 채우고 분리된 폐를 상기 용액의 필링 볼륨에 담그는 단계를 포함한다.
장기 보존 및/또는 관류 용액
앞서 언급된 것과 같이, 본 발명은 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액을 제공한다. 본 용액은 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 포함한다. 본 용액은 6.6 내지 7.8의 pH를 갖고, 가열 살균을 거친 것에 근거하여 무균이다.
덱스트란(예를 들어, 덱스트란 40) 및 낮은 수준(예를 들어, 세포밖(extracellular) 수준)의 칼륨을 포함하는 용액들은 1960년대 이래로 장기 보존에 사용되어 왔으며, 예들 들어 덱스트란 용액(dextran solutions), 덱스트란 40 용액(Dextran 40 solutions) 및/또는 LPD 용액(LPD solutions)으로 다양하게 일컬어진다.
1990년대 후반, Perfadex® 용액 이라고 명명된 LPD 용액은 폐와 같이 내피(endothelium)가 풍부한 장기들에 사용하기 위한 주요한 보존 용액이 되었다. Perfadex® 용액의 조성(질량/L 로 규정됨)은 하기와 같다.
덱스트란-40(Dextran-40) 50 g
염화나트륨(Sodium Chloride) 8 g
D-글루코스 모노하이드레이트(D-Glucose monohydrate) 1 g
염화칼륨(Potassium Chloride) 400 mg
마그네슘 설페이트 7H2O (Magnesium sulphate 7H2O) 200 mg
디소듐 포스페이트 12H2O (Disodium phosphate 12H2O) 117 mg
포타슘 디하이드로젠 포스페이트(Potassium dihydrogen phosphate) 63 mg
생리학적으로 허용할 수 있고 혈장에 비교적 가까운 전해질 조성을 갖기만 한다면 대체 가능한 전해질 조성물들은 사용될 수 있다.
덱스트란
언급된 것과 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 덱스트란을 포함한다. 덱스트란은 α-링크된 D-글루코피래노실(α -linked D-glucopyranosyl) 반복 유닛의 선형 주쇄를 갖는 분자량이 1000 달톤(Da) 이상인 다당류로, 상기 다당류는 그 구조에 따라 클래스 1, 클래스 2 및 클래스 3의 세 클래스로 그룹화될 수 있다. 상업적으로 입수할 수 있는 덱스트란은 원료 및/또는 중량평균 분자량에 따라 분류될 수 있다. 상업적으로 입수할 수 있는 덱스트란은, 예를 들어 뉴코노스토크 종(Leuconostoc spp) 또는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로부터 수득된 덱스트란을 포함한다. 또한, 상업적으로 입수할 수 있는 덱스트란은, 예를 들어, 대략 20000 Da의 중량 평균 분자량을 갖는 데스트란(덱스트란 20 이라고도 함), 대략 40000 Da의 중량 평균 분자량을 갖는 덱스트란(덱스트란 40 이라고도 함), 대략 60000 Da의 중량 평균 분자량을 갖는 덱스트란(덱스트란 60 이라고도 함) 대략 70000 Da의 중량 평균 분자량을 갖는 덱스트란(덱스트란 70 이라고도 함) 및 이러한 데스트란들의 혼합물 및 다른 것들의 혼합물을 포함한다.
덱스트란 40은 불필요하게 점성을 증가시키지 않고 덱스트란 용액에서 충분한 삼투압을 제공하는 최적의 분자 크기로 인해 장기 보존에 이상적이다(특히 덱스트란 용액 내에서 40 내지 60 g/L, 바람직하게 50 g/L로 제공되는 경우). 그러나, 텍스트란 60, 덱스트란 70 또는 덱스트란 20과 덱스트란 70 사이의 삼투 분자 크기 분포를 갖는 어느 다른 덱스트란은 허용될 만한 결과를 제공하기 위해 덱트스란 40을 대체할 수 있다.
따라서, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액의 일부 구체예에서, 본 덱스트란은 20000 내지 70000 Da(예를 들어 30000 내지 50000 Da 또는 33000 내지 42000 Da)의 중량 평균 분자량을 갖는다. 또한, 일구 구체예에서 본 덱스트란은 덱스트란 40(Dextran 40)을 포함한다. 또한, 일부 구체예에서, 본 덱스트란은 본 용액 내에 40 내지 60 g/L(예를 들어 45 내지 55 g/L, 48 내지 52 g/L 또는 50 g/L)의 농도로 존재한다. 또한, 일부 실시예에서, 본 덱스트란은 뉴코노스토크 종(Leuconostoc spp) 또는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로부터 수득된 덱스트란을 포함한다.
글루코스, 칼슘 이온 및 완충제
언급된 것과 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 또한 글루코스 및 칼슘 이온을 포함한다.
지난 15년 동안 Perfadex® 용액은 이식 전 모든 폐 이식의 약 90% 에서 사용되었다. 모든 다른 상업적 덱스트란 40 용액과 마찬가지로, Perfadex® 용액은 약 4 내지 6의 낮은 pH에서 상업적으로 제공되었고, 이에 따라 사용 직전에 보다 높은 pH를 얻기 위한 완충이 요구되었다. 이 완충은 대부분 TPJS로 수행되었다. Perfadex® 용액이 낮은 pH로 제공되는 이유는 제품, 특히 그 안의 글루코스의 안정성을 증가시키기 위함이나, 가열 살균 동안 전혀 증가되지 않는다. 하기에서 상세히 논의되는 것과 같이, 본 발명자들은, 선행 기술과 달리, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액에서 가열 살균 전 7.0 내지 7.8, 바람직하게는 7.4 ± 0.2로 증가된 pH가 가열 살균 과정 동안 글루코스를 안정화시키는 것을 보여준다
또한, 사용 직전 Perfadex® 용액에 칼슘 이온의 무균 용액을 보충하는 것이 내피(endothelium)에 유용한 것으로 보여지기 때문에(Ingemansson et al., 1996), 많은 사용자들은 사용 직전에 Perfadex® 용액에 칼슘 이온의 무균 용액을 보충하였다. 사용 직전까지 칼슘 이온이 Perfadex® 용액에 포함되지 않은 한 가지 이유는, 칼슘 이온이 Perfadex® 용액의 가열 살균전에 첨가되면 칼슘 포스페이트가 가열 살균 및 후속하는 저장 동안 침전될 것이 예상되었기 때문이다. 놀랍게도, 본 발명가들은 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액이 가열 살균 또는 가열 살균 후 24개월 동안의 후속 저장 동안 침전물의 형성을 나타내지 않는 것을 보여 주었다. 또한, 선행 기술과 달리, 본 발명자들은 7.0 내지 7.8, 바람직하게 7.4 ± 0.2의 pH와 함께 칼슘 이온의 보충이 가열 살균 동안 글루코스를 상승 작용에 의해 안정화시키는 것을 보여 주었다.
이러한 이유들로 TRIS 완충 및 Perfadex® 용액의 및 칼슘 이온 보충은 유익하거나 심지어 최종적인 사용에 필수적이라고 이해되었으나, 가열 살균 및 저장 동안 예상되는 문제들로 인해 TRIS 및 칼슘 이온 모두는 사용 직전까지 Perfadex® 용액에 미리 제공되지 않았다. 가열 살균 전의 사전-완충 및 사전-칼슘 보충에 기초한 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액의 한 가지 장점은 본 장기 보존 및/또는 관류 용액은 바로 사용할 수 있는 제품으로 제공될 수 있는 것이다. 바로 사용할 수 있는 제품은 사용자에게 편의를 제공하고, 추가 완충 또는 다른 보충이 필요하지 않을 때 잘못된 완충 및/또는 다른 보충과 관련된 위험이 적기 때문에 안전성을 향상시킨다.
따라서, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액의 일부 구체예에서, 글루코스는 가열 살균 전에 0.5 내지 5 g/L(예를 들어, 0.6 내지 3 g/L, 0.8 내지 2 g/L, 0.9 내지 1.5 g/L, 또는 1 g/L)로 본 용액 내에 존재했다. 이에 따르면 글루코스는 본 장기 보존 및/또는 관류 용액을 수득하기 위한 가열 살균을 초기 용액에 수행하기 전, 즉 가열 살균 동안 발생하는 글루코스의 부분적 분해 전에 0.5 내지 5 g/L 로 초기 용액에 존재함을 의미한다. 따라서, 일부 실시예에서, 글루코스는 초기 용액에 0.5 내지 5 g/L로 첨가될 수 있고, 그 후 초기 용액에 가열 살균을 수행할 수 있으며 이로써 글루코스가 용액 내에 0.5 내지 5 g/L로 존재한 장기 보존 및/또는 관류 용액을 제공할 수 있다.
또한, 일부 구체예에서, 가열 살균 동안의 글루코스 분해는 10% 미만(예를 들어, 9.5% 미만 또는 9.0%미만)이었다. 이에 따르면 본 장기 보존 및/또는 관류 용액을 수득하기 위한 초기 용액의 가열 살균은 초기 용액에 존재하는 글루코스 농도 보다 낮은 글루코스 농도를 갖는 장기 보존 및/또는 관류 용액을 초래하는 것을 의미하며, 글루코스 농도의 감소는 가열 살균 동안 발생하는 글루코스의 부분적 분해에 기인한 것으로, 이 감소는 초기 용액 내에 존재하는 글루코스 농도의 10% 미만이다.
또한, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액의 일부 구체예에서, 칼슘 이온은 0.3 내지 1.5 mM(예를 들어, 0.4 내지 1 mM 또는 0.5 mM)의 농도로 용액 내에 존재한다. 또한, 일부 구체예에서, 본 용액은 5 내지 25℃에서 24개월 동안 저장되는 동안 침전물을 초래하지 않는다. 또한 일부 구체예에서, 본 용액은 포스페이트 이온을 더 포함한다. 또한 일부 구체예에서, 포스페이트 이온은 0.2 내지 0.8 mM(예를 들어, 0.7 내지 0.8 mM)의 농도로 용액 내에 존재한다.
용액 온도, 완충제 선택 및 pH
언급된 것과 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 완충제를 포함한다. 또한, 본 용액은 6.6 내지 7.8의 pH를 갖고, 가열 살균을 거친 것에 근거하여 무균이다.
장기 플러쉬 관류 및 보존은 준-생리학적 온도에서 이루어진다. 일반적으로 실온 플러쉬(flush)는 장기 플러싱(flushing)이 시작될 때 이루어지며, 그 후 2 내지 15℃에서 저온 플러쉬 및 저온 보존이 이루어진다. 대응 덱스트란 용액의 pH는 온도에 의존한다. 이는 TRIS와 같은 완충제가 덱스트란 용액에 사용될 때 특히 그렇다. TRIS 완충된 용액의 pH는 섭씨 1도 감소 당 약 0.01 pH 유닛이 증가한다. 통상적으로 pH는 실온, 즉 18 내지 25℃, 보다 특별히 25℃에서 측정된다. 25℃에서 5℃로 온도가 변하면 TRIS 완충된 용액의 pH는 약 0.2 pH 유닛만큼 증가된다.
조직, 특히 폐는 7.4 미만의 pH에서 보다 7.4 초과, 특히 7.8 초과의 pH에서 더 민감하다. 따라서, 덱스트란 용액의 pH는 임의의 사용 온도에서 7.8을 초과하지 않는 것이 이로우며, 가급적이면 7.6을 초과하지 않는 것이 이롭다. 더 낮은 범위에서, 덱스트란 용액의 pH는 더 낮은 온도 에서 다소 높아질 수 있기 때문에, 25℃에서 측정된 6.6과 같은 낮은 pH는 2 내지 15℃에서 저장용으로 허용될 수 있다. 특히 보존 동안 보다 플러싱 동안 혈관구조(vasculature) 내에 더 많은 혈청 알부민이 존재하고 이 혈청 알부민이 덱스트란 용액의 약산성을 완충할 것이기 때문에, 폐조직은 또한 6.6과 같은 낮은 pH를 갖는 용액으로 실온에서 플러싱하는 짧은 시간을 지속할 수 있다.
언급된 것과 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 TRIS로 사전-완충될 수 있다. TRIS로 사전-완충하는 것은 TRIS 완충제의 온도 의존성을 이용함으로써 의도된 사용 온도에서 가열 살균 후 허용되는 pH를 유지하며, 사용자는 완충할 필요가 없다. 가열 살균 전 용액의 pH(즉, 장기 보존 및/또는 관류 용액을 얻기 위해 가열 살균 될 초기 용액의 pH)는 가열 살균 전 실온 또는 25℃에서 바람직하게 7.0 내지 7.8, 더욱 바람직게하는 7.2 내지 7.6이어야한다. 용액의 pH는 글루코스 및 덱스트란 분해 때문에 가열 살균 후 0.4 pH 유닛까지, 특히 0.1 내지 0.3 pH 유닛까지 감소할 것이다. 따라서, 가열 살균 전 실온 또는 25℃에서 7.0 내지 7.8, 더욱 바람직게하는 7.2 내지 7.6의 pH를 갖는 초기 용액을 제조함으로써, 장기 보존 및/또는 관류 용액은 가열 살균 후 장기 보존 및/또는 관류에 적합한 pH, 예를 들어 실온 또는 25℃에서 6.6 내지 7.8의 pH, 6.7 내지 7.7의 pH 또는 6.9 내지 7.6의 pH를 갖게 된다.
이해되는 바와 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 또한TRIS와 다른 완충제 또는 TRIS에 추가된 완충제, 예를 들어 TRIS에 대해 논의 된 것과 유사한 원칙에 근거한 TRIS와 다르거나 TRIS에 추가된 유기 또는 생물학적 완충제로 사전-완충될 수 있다. 이러한 대안적인 완충제의 일 예는 BIS-TRIS이다.
또한 이해되는 바와 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 적절한 온도에서 적절한 시간 동안(예를 들어, 121℃에서 20 분 이상 또는 12 - 15의 F0에 도달하는 대체 온도 및 시간) 오토클레이브에서 증기 살균(steam sterilization)에 기초하여 가열 살균 될 수 있다.
따라서, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액의 일부 구체예에서 본 완충제는 1 내지 15 mM(예를 들어, 1.5 내지 10 mM, 2 내지 5 mM 또는 3 mM)의 농도로 용액 내에 존재하는 유기 또는 생물학적 완충제를 포함한다. 또한, 일부 실시예에서 본 유기 또는 생물학적 완충제는 1 내지 5 mM(예를 들어, 1.5 내지 4 mM 또는 3 mM)의 농도로 TRIS 를 포함한다.
또한, 일부 구체예에서 본 장기 보존 및/또는 관류 용액은 실온, 예를 들어 18 내지 25℃ 또는 25℃에서 6.6 내지 7.8의 pH를 갖는다. 또한, 일부 구체예에서 본 용액은 실온, 예를 들어 18 내지 25℃ 또는 25℃에서 6.7 내지 7.7의 pH 또는 6.9 내지 7.6의 pH를 갖는다.
또한, 일부 구체예에서 본 장기 보존 및/또는 관류 용액은, 예들 들어, 115 내지 130 ℃ 또는 118 내지 123℃ 또는 121℃에서, 적어도 5분 또는 적어도 10분 또는 적어도 20분 이상, 적어도 10 또는 적어도 12 또는 적어도 15 또는 12 내지 15의 F0을 달성하기 위해 오토클레이브에서 증기 살균에 기초한 가열 살균을 거친 것에 근거하여 무균이다.
가열 살균 동안의 글루코스 분해
더욱 상세히 글루코스 분해를 고려하면, 가열 살균 동안의 글루코스 분해는 복막 투석용 용액에서 복막 영양 용액에 관하여 주로 연구되었다. 이러한 용액들은 상대적으로 고농도, 대체로 약 1.5 %의 글루코스를 포함하고 종종 동일한 환자에게 반복적으로 사용된다. 복막 투석 용액에서의 글루코스 분해의 문제, 그 독성 효과 및 이러한 독성 효과를 방지하기 위해 취해진 예방책은 스웨덴 룬드(Lund)에 있는 Gambro AB의 연구자들과 함께 룬드 대학 병원(University Hospital of Lund)의 연구자들에 의해 철저히 연구되었다. 그 결과들은 다수의 간행물에 공개되었으며, 그 중 일부는 Nilsson Thorell et al., 1993, Ledebo et al., 2000 및 Wieslander et al., 1995에서 인용되었다. Nilsson Thorell et al., 1993에서 다수의 글루코스 분해산물이 아세트알데하이드(acetaldehyde), 5-HMF, 글리옥살(glyoxal), 메틸글리옥살(methylglyoxal), 포름알데하이드(formaldehyde) 및 2-푸르알데하이드(2-furaldehyde)로 확인되었다. 또한 복막 투석 용액의 가열 살균 후 나타나는 세포 독성 효과의 원인이 될 수 있는 정체불명의 분해 산물이 더 존재한다고 결론지어 졌다.
Ledebo et al., 2000 및 Wieslander et al., 1995 에서 제안된 글루코스 분해를 방지하기 위한 해결책은 주로 가열 살균을 피하는 것에 기초한다. 용액을 가열 살균 해야하는 경우에는 가열 살균을 낮은 pH, 우선적으로 약 3 내지 3.5 에서 수행해야 하거나 글루코스를 전해질과 함께 살균해서는 안된다.
장기 관류를 위한 덱스트란 용액에서 글루코스 농도는 일반적으로 약 0.05 내지 0.5%이다. 가열 살균 동안 글루코스는 분해되고, 이는 가열 살균 후의 최종 생성물에서 추정된 목표에 적어도 근접하도록 약 5 내지 10%의 생산 중 글루코스의 과보충을 통해 상쇄된다는 것이 잘 알려져 있다. 통상적으로, 글루코스의 10 내지 15 %는 상술된 것과 같이, 예를 들어, 12 내지 15의 F0를 달성하기 위한 증기 살균에 기초한 가열 살균 동안 분해된다. 아마도 후속하는 노출이 짧고 1회 이기 때문에, 분해산물의 잠재적인 독성 효과는 고려되지 않았다. 장기 관류를 위한 덱스트란 용액의 사용에서 이러한 직접적인 독성은 관찰되지 않았지만, 본원에 개시된 장기 보존 및 관류 용액으로 달성되는 것과 같은 잠재적인 독성 글루코스 분해산물의 감소는 생성물의 안정성을 더욱 향상시키기 때문에 유익할 수 있다. 장기 보존 및/또는 관류 용액의 생산 동안 안정화된 글루코스를 통한 또 다른 장점은 분리된 조직 또는 장기의 저장 동안 물질대사를 지원할 수준의 최종 생성물 내에서의 중요한 글루코스 함량을 더 잘 보장한다는 것이다.
글루코스 안정화
더욱 상세히 글루코스 안정화를 고려하면, 참조된 선행기술 Ledebo et al., 2000 및 Wieslander et al., 1995 에 나타난 것과 같이, 낮은 pH는 글루코스 분해 및 글루코스 분해산물의 형성을 감소시키는데 필수적인 것으로 고려된다. 게다가 Wieslander et al., 1995 는 Ca2+ 는 글루코스 분해를 위한 촉매 물질이라고 명시하고 있으며, Ca2+ 는 Mg2+, Cl- 및 Na+ 이온과 마찬가지로 가열 살균 동안 글루코스로부터 분리되어야 한다고 제안한다.
앞서 언급된 것과 같이, 본 발명가들은 선행기술과 달리, 가열 살균 전에 7.0 내지 7.8, 바람직하게는 7.4 ± 0.2의 증가된 pH는 예를 들어 12 내지 15의 F0를 달성하기 위한 상술된 증기 살균에 다시 기초한 가열 살균 과정 동안 글루코스를 안정시킨다. 또한 언급된 것과 같이, 선행기술과 달리 본 발명가들은 7.0 내지 7.8, 바람직하게는 7.4 ± 0.2의 pH와 함께 칼슘 이온의 보충은 가열 살균 동안 글루코스를 상승 작용에 의해 안정화시키는 것을 보여주었다. 용액이 증가된 pH 없이 칼슘 이온으로 보충되는 경우에는 안정화 효과가 나타나지 않는다. 실시예 1의 표 2에 나타난 것과 같이, pH이 조절이 없고 용액과 TRIS와 같은 가열 살균 안정된 유기 또는 생물학적 완충제가 없는 두 가지 용액(즉, LPD 및 LPD + CaCl2)은 가열 살균 중 글루코스의 분해 때문에 거의 13%의 글루코스가 손실되는 반면, 7.4 ± 0.2의 pH로 조절된 TRIS 완충된 용액(LPD + TRIS)에서는 분해가 10% 미만이고 TRIS 완충된 용액에 칼슘 이온 또한 보충된 용액(LPD + TRIS + CaCL2)에서는 분해가 9% 미만이다.
상술된 것과 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 생리학적으로 허용 가능한 pH로 사전-완충되고 본 용액에 대해 보다 혈장과 유사한 전해질 기질을 제공할 수 있는 칼슘 이온의 낮은 농도로 보충된다. TRIS를 통한 생리학적으로 허용 가능한 pH로의 완충은 가열 살균 동안 글루코스-보호 효과를 갖는다. 또한 용액의 생리학적으로 허용 가능한 pH 및 칼슘 이온의 조합은 가열 살균 동안 글루코스를 상승작용에 의해 더 안정시킨다.
완충제의 선택
더욱 상세히 완충제를 고려하면, 가열 살균을 위해 의도된 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액을 위한 완충제는 MOPS 및 HEPES와 같은 많은 완충제들이 가열 살균 동안 분해될 수 있으므로 신중히 선택되어야 한다. 거의 생리학적인 전해질 용액을 위한 완충제를 선택할 때 또 다른 중요한 요인은 생산 중 및 제품의 저장 수명 동안 완충제와 2가 양이온 사이의 침전물에 대한 위험이다. 바이카보네이트 및 포스페이트은 모두 용해 한도보다 높은 농도로 존재하는 경우 칼슘 및 마그네슘 이온과 함께 침전하는 것으로 알려져 있다. 가열 살균이 가능하고 2가 양이온과 함께 침전물을 형성하지 않는 동일한 두 가지 성질을 제공하는 다른 완충제들이 사용될 수 있지만, TRIS는 가열 살균된 용액에 대해 이상적인 완충제이다. 25℃ 이하 또는 바람직하게 15℃ 이하의 저체온에서 사용하기 위한 관류 및/또는 보존 용액에서 사용되는 완충제에 대한 또 다른 유익한 요인은 온도에 대한 pH 의존성이다. 앞서 언급된 것과 같이, TRIS는 섭씨 1도 감소 당 약 0.01의 pH 증가를 제공한다. 이는 더 낮은 사용 온도에서 요구되는 허용 가능한 생리학적 pH가 손상됨 없이 본 용액이 제품에 안정성을 제공하는 실온에서 약간 낮은 pH로 저장될 수 있음을 의미한다.
완충제의 농도는 생성물의 저장 수명 동안 6.6 내지 7.8의 pH를 유지하기에 충분해야 하지만 조직에 대한 어느 독성 수준을 초과해서는 안된다. TRIS의 경우 1 내지 15 mM, 또는 바람직하게 1 내지 5 mM의 최종 용액에서의 농도는 충분하고 안전한 것으로 여겨진다.
칼슘 이온 공급원
본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액을 위한 칼슘 이온 공급원은 칼슘 락테이트(calcium lactate), 칼슘 글루코네이트(calcium gluconate) 또는 바람직하게 염화칼슘(calcium chloride)과 같은 임의의 용해 가능하고 생리학적으로 허용 가능한 칼슘 이온 염일 수 있다. 장기 보존 및/또는 관류 용액 내의 칼슘 이온의 농도는 인간 혈장 내 농도와 유사해야 하며, 이는 약 1.5mM이다. 약간 더 낮은 농도는 용액 내 존재하는 포스페이트 이온과의 침전 위험을 줄이기 때문에 유용할 수 있다. 따라서 용액 내 칼슘 이온의 최적 농도는 0.3 내지 1.5 mM이다.
물
언급된 것과 같이, 본원에 개시된 장기 보존 및/또는 관류 용액은 물을 또한 포함한다. 적합한 물은 주사용 증류수와 같은 특별한 고품질의 물을 포함한다.
장기 보존 및/또는 관류 용액을 제조하는 방법
앞서 언급된 것과 같이, 본 발명은 또한 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 방법은 (1) 초기 용액을 수득하기 위해 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 혼합하는 단계를 포함한다. 또한, 상기 방법은 (2) 필요에 따라 초기 용액의 pH를 7.0 내지 7.8 또는 7.2 내지 7.6으로 조절하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 (3) 초기 용액을 가열 살균하여 장기 보존 및/또는 관류 용액을 수득하는 단계를 포함한다.
분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 관류하는 방법.
앞서 언급된 것과 같이, 본 발명은 또한 분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 관류하는 방법을 제공한다.
상기 방법은 (1) 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액의 볼륨을 상기 용액이 저장되어 있는 무균 용기로부터 수득하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 (2) 상기 용액의 수득된 볼륨을 분리된 조직 또는 장기에 투여하여 분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 관류하는 단계를 포함한다. 상기 무균 용기는, 예를 들어, 용기들 중에서도 1000mL 무균 유체 백 또는 3000 mL 무균 유체 백과 같은 무균 유체 백(sterile fluid bag)일 수 있다.
상기 방법의 일부 구체예에서, 상기 (1) 단계의 수득하는 단계는 무균 튜빙(tubing)을 무균 용기에 삽입하는 단계 및 상기 용액의 볼륨을 무균 용기로부터 뮤균 튜핑을 통해 흐르게 하는 단계를 포함하고, 상기 (2) 단계의 투여하는 단계는 상기 용액의 수득된 볼륨을 무균 튜빙으로부터 분리된 조직 또는 장기로 투여하는 단계를 포함한다.
또한 일부 구체예에서, 상기 (2) 단계의 투여하는 단계는 25℃ 이하의 저체온에서 수행된다. 예를 들어, 일부 구체예에서 상기 (2) 단계의 투여하는 단계는 2 내지 15℃의 저체온에서 수행된다.
또한, 일부 구체예에서, 상기 용액의 수득된 볼륨은 (1) 단계 및 (2) 단계 동안 또는 (1) 단계와 (2) 단계 사이에 추가 성분으로 보충되지 않는다. 이러한 구체예들에 따르면, 상기 용액의 수득된 볼륨은 (1) 단계 및 (2) 단계 동안 또는 (1) 단계와 (2) 단계 사이에 추가 완충제, 산 또는 염기, 배양 배지 또는 임의의 다른 추가성분들로 보충되지 않는다. 이해되는 바와 같이, 이러한 구체예에 따라 본 용액은 바로 사용할 수 있도록 제공된다. 또한 이해되는 바와 같이, 다른 구체예에서 본 용액의 수득된 볼륨은 보존 및/또는 관류 상황에 따라 추가 성분으로 추가 보충될 수 있다.
또한 일부 구체예에서, 상기 분리된 조직 또는 장기는 폐, 심장, 간, 신장, 췌장 및/또는 창자 중 하나 이상을 포함한다. 상기 분리된 조직 또는 장기는 기증자 체강 내에서 분리된 순환기(circulatory) 또는 기증자 신체로부터 회수된 후의 순환기 또는 순차적으로 기증자 체강 내에서 분리되고 기증자 신체로부터 회수된 순환기 일 수 있다.
수용자로의 최종 이식을 위한 준비로 기증자로부터 제거된 후 분리된 폐를 플러싱, 저장 및/또는 운송하는 방법
앞서 언급된 것과 같이, 본 발명은 또한 수용자로의 최종 이식을 위한 준비로 기증자로부터 제거된 후 분리된 폐를 플러싱, 저장 및/또는 운송하는 방법을 제공한다.
상기 방법은 (1) 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액의 플러싱 볼륨으로 기증자의 분리된 폐를 플러싱하는 단계를 포함한다. 또한, 상기 방법은 (2) 무균 장기 저장 용기를 적어도 부분적으로 상기 용액의 필링 볼륨으로 채우고 분리된 폐를 상기 용액의 필링 볼륨에 담그는 단계를 포함한다.
이 방법에 따르면 본 장기 보존 및/또는 관류 용액은 이식과 관련하여 폐의 저장, 급속 냉각 및 관류에 사용될 수 있는 칼슘 및 덱스트란 40을 함유하는 사전-완충된 세포외 용액의 역할을 할 수 있다. 권장 온도에서의 본 용액의 투여는 장기의 대사 요구량을 줄이기 위해 장기를 효과적으로 냉각시킬 것이다. 무균 기술이 사용되어야 한다.
또한 이 방법에 따르면, (1) 단계 및 (2) 단계는 다양한 순서로 수행될 수 있다. 예를 들어 (1) 단계의 플러싱하는 단계가 처음으로 수행되고 다음으로 (2) 단계의 채우는 단계가 수행된 후 (2) 단계의 담그는 단계가 수행될 수 있다. 또한 예를 들어, (2) 단계의 채우는 단계가 처음으로 수행되고 다음으로 (1) 단계의 플러싱하는 단계가 수행된 후 (2) 단계의 담그는 단계가 수행될 수 있다. 또한 예를 들어, (1) 단계의 플러싱 하는 단계 및 (2) 단계의 채우는 단계가 동시에 수행된 후 (2) 단계의 담그는 단계가 수행될 수 있다.
상기 방법의 일부 구체예에서, (1) 단계의 플러싱하는 단계는 순환으로부터 혈액을 보다 완전히 제거하기 위해 초기에는 실온에서 수행된 후 2 내지 8℃에서 저온 플러싱(cold flushing)이 수행될 수 있다. 플러싱은 바람직하게 앞방향(antegrade) 및 역방향(retrograde) 모두에서 수행되어야 한다. (2) 단계에 따른 채우는 단계는 바람직하게 2 내지 8℃에서 수행된다. 예를 들어 이는 실온으로 우선 제공 된 후 2 내지 8℃가 되는 본 용액의 플러싱 볼륨에 기초하여 2 내지 8℃로 제공되는 본 용액의 필링 볼륨에 의해 수행될 수 있다.
또한 일부 구체예에서, 상기 (1) 단계의 플러싱 하는 단계는 분리된 폐의 배출수를 발생시키고 상기 배출수가 투명해질 때까지 수행된다. 예를 들어, 상기 플러싱 하는 단계는 분리된 폐의 배출수를 발생시키기 위해 지속적인 흐름으로 본 용액의 플러싱 볼륨을 투여함으로써 수행될 수 있다. 또한 예를 들어, 상기 플러싱 하는 단계는 배출물이 플러싱에 사용되지 않은 장기 보존 및/또는 관류 용액의 기준 볼륨과 동일한 투명도를 가질 때까지 수행될 수 있다.
또한 일부 구체예에서, 본 용액의 플러싱 볼륨은 기증차의 체중 kg 당 50 내지 75mL의 용액 및/또는 3 내지 8 L의 용액에 해당하지만, 다른 구체예에서는 플러싱 볼륨이 상기 볼륨보다 더 크거나 더 작을 수 있다.
또한 일부 구체예에서, 상기 방법은 (3) 무균 장기 저장 용기를 상기 용기에 들어 있는 분리된 폐와 함께 무균 마개로 밀봉하는 단계; 및 그 후 (4) 분리된 폐를 수용자에게 이식하기 전 상기 무균 저장 용기를 폐의 초기 질에 따라 12 시간 이하의 시간 동안 2 내지 8℃에서 유지하는 단계를 더 포함하며, 상기 (3) 단계 및 (4) 단계는 (1) 단계 및 (2) 단계 후에 수행된다.
이러한 구체예에 따르면, (4) 단계의 유지하는 단계는, 예를 들어 무균 장기 저장 용기를 밀봉된 상태로 2 내지 8℃의 단열 처리가 잘 된 카톤(carton) 또는 운송 케이스 내에 배치함으로써 수행될 수 있다. 이러한 예에서, 무균 장기 저장 용기를 둘러싸기 위해 얼음을 사용할 수 있지만 얼음이 분리된 폐와 직접 접촉해서는 안된다.
또한 이러한 구체예에 따르면, 분리된 폐는 분리된 폐를 수용자로 이식하기 전에 분리된 폐의 초기 질에 기초하여 1 내지 12 시간, 3 내지 12 시간, 6 내지 12 시간, 9 내지 12 시간, 10 내지 12 시간 또는 11 내지 12시간 동안 저장될 수 있다. 또한 이러한 구체예에 따르면, 분리된 폐가 저장되는 동안 상기 분리된 폐는 수용자, 예를 들어 병원 및/또는 장기 이식 센터와 같은 의료 시설 내에서 이송되는 수용자 또는 의료 시설 간 이송되는 수용자에게 운송될 수 있다.
또한 일부 구체예에서, 본 용액의 플러싱 볼륨은 상기 용액이 저장되어 있는 하나 이상의 무균 용기로부터 수득된다. 상기 하나 이상의 무균 용기는 앞서 논의된 것과 같은 무균 용기(예를 들어, 하나 이상의 1000mL 무균 유체 백 및/또는 하나 이상의 3000 mL 무균 유체 백)일 수 있다. 이러한 구체예에 따르면, 본 용액의 플러싱 볼륨은 (1) 단계 전에 또는 (1) 단계 동안 추가 성분으로 보충되지 않는다.
또한 일부 구체예에서, 본 용액의 필링 볼륨은 상기 용액이 저장되어 있는 하나 이상의 무균 용기로부터 수득된다. 상기 하나 이상의 무균 용기는 앞서 논의된 것과 같은 무균 용기(예를 들어, 하나 이상의 1000mL 무균 유체 백 및/또는 하나 이상의 3000 mL 무균 유체 백)일 수 있다. 이러한 구체예에 따르면, 본 용액의 필링 볼륨은 (2) 단계 전에 또는 (2) 단계 동안 추가 성분으로 보충되지 않는다.
또한 일부 구체예에서, 본 장기 보존 및/또는 관류 용액은 상기 방법의 어느 단계 전에 또는 상기 방법의 어느 단계 동안 추가 성분으로 보충되지 않는다. 이해되는 바와 같이, 이러한 구체예에 따르면, 본 용액은 바로 사용할 수 있도록 제공된다. 또한 이해되는 바와 같이, 다른 구체예에서 본 용액의 일부 볼륨은 플러싱, 저장 및/또는 운송 상황에 따라 추가 성분으로 보충될 수 있다.
실시예 1
표 1에 따라 네 가지 시험 용액을 제조하였다.
성분 LPD LPD + TRIS LPD + CaCl2 LPD + TRIS + CaCl2
덱스트란-40
(Dextran-40)		 50 g 50 g 50 g 50 g
염화나트륨
(Sodium Chloride)		 8 g 8 g 8 g 8 g
D-글루코스 모노하이드레이트
(D-Glucose monohydrate)		 1 g 1 g 1 g 1 g
염화칼륨
(Potassium Chloride)		 400 mg 400 mg 400 mg 400 mg
마그네슘 설페이트 7H2O
(Magnesium sulphate 7H2O)		 200 mg 200 mg 200 mg 200 mg
디소듐 포스페이트 12H2O
(Disodium phosphate 12H2O)		 117 mg 117 mg 117 mg 117 mg
포타슘 디하이드로젠 포스페이트
(Potassium dihydrogen phosphate)		 63 mg 63 mg 63 mg 63 mg
TRIS 해당 없음 74 mg 해당 없음 74 mg
염화칼슘 2H2O
(Calcium Chloride 2H2O)		 해당 없음 해당 없음 242 mg 242 mg
물(주사용증류수) 1 L가 되도록추가 1 L가 되도록 추가 1 L가 되도록 추가 1 L가 되도록 추가
pH 조절 해당 없음 7.4 +7-0.2 해당 없음 7.4 +/- 0.2
네 가지 용액 모두 동시에 15의 F0에 해당하는 121℃에서 20분 동안 오토클레이브하였다.
가열 살균 후의 각 용액에서의 글루코스 분해는 글루코스 주사액 내의 덱스트란 40에 대한 미국 약전(US Pharmacopeia)에 따른 HPLC DRI 글루코스 분석을 사용하여 측정되었다. 이 결과는 표 2에 요약되어 있다.
용액 % 글루코스 분해
LPD 12.84
LPD + CaCl2 12.64
LPD + TRIS 9.8
LPD + TRIS + CaCl2 8.75
칼슘 이온 자체는 사전-완충이 제공하는 것과 같은 글루코스 안정화 효과를 제공하지 않았다. 그러나 칼슘 이온 및 사전-완충의 조합은 상승적인 글루코스 안정화 효과를 제공하였다.
침전물의 형성은 또한 두 가지 용액에서 측정되었다. 표 3에는 LPD 및 LPD + 칼슘 + TRIS의 서로 다른 두 온도에서 24개월 보관 후의 탁도계 데이터가 요약되어 있다. 탁도의 측정은 유럽 약전(European Pharmacopeia), 2.2.1 Clarity and Degree of Opalescence of Liquids의 방법을 사용하여 수행되으며, 탁도는 nephelometric turbidity units (이하, NTU)으로 표현되었다.
24 개월 PhEur 2.2.1 에 따른 탁도
(5 ℃에서 저장)		 PhEur 2.2.1에 따른 탁도 (25 ℃에서 저장)
LPD 1.84 NTU 1.76 NTU
LPD + 3 mM TRIS + 0.5 mM Ca2+ 1.61 NTU 1.60 NTU
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Claims (26)

  1. 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액으로서,
    상기 용액은 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 포함하고,
    상기 용액은 6.6 내지 7.8의 pH를 갖고, 가열 살균을 거친 것에 근거하여 무균인, 장기 보존 및/또는 관류 용액.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 덱스트란은, 20000 내지 70000 달톤의 중량평균 분자량(Mw)를 갖는, 용액.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 덱스트란은, 덱스트란 40(Dextran 40)을 포함하는 용액.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 덱스트란은, 40 내지 60 g/L의 농도로 용액 내에 존재하는, 용액.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 글루코스는 가열 살균 전에 0.5 내지 5 g/L로 용액 내에 존재한, 용액.
  6. 제5항에 있어서,
    가열 살균 동안 상기 글루코스 분해가 10% 미만인, 용액.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 칼슘 이온은 0.3 내지 1.5 mM의 농도로 용액 내에 존재하는, 용액.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 용액은 5 내지 25℃ 에서 24개월의 저장 동안 침전물을 발생시키지 않는, 용액.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 완충제는 1 내지 15 mM의 농도로 용액 내에 존재하는 유기 또는 생물학적 완충제를 포함하는, 용액.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 유기 또는 생물학적 완충제는 1 내지 5 mM의 농도로 트리스(하이드록시메틸)아미노메테인 (TRIS)을 포함하는 용액.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용액은 포스페이트 이온을 더 포함하는, 용액.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 포스페이트 이온은 0.2 내지 0.8 mM의 농도로 용액 내에 존재하는, 용액.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액을 제조하는 방법에 있어서,
    (1) 초기 용액을 수득하기 위해 덱스트란, 글루코스, 칼슘 이온, 완충제 및 물을 혼합하는 단계;
    (2) 필요에 따라 초기 용액의 pH를 7.0 내지 7.8로 조절하는 단계; 및
    (3) 초기 용액을 가열 살균하여 장기 보존 및/또는 관류 용액을 수득하는 단계;를 포함하는, 장기 보존 및/또는 관류 용액을 제조하는 방법.
  14. (1) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액의 볼륨(volume)을 상기 용액이 저장되어 왔던 무균 용기로부터 수득하는 단계; 및
    (2) 상기 용액의 수득된 볼륨을 분리된 조직 또는 장기에 투여하여 분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 관류하는 단계;를 포함하는, 분리된 조직 또는 장기를 보존 및/또는 관류하는 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 (1) 단계의 수득하는 단계는, 무균 튜빙(tubing)을 무균 용기에 삽입하는 단계 및 상기 용액의 볼륨을 무균 용기로부터 무균 튜빙을 통해 흐르게 하는 단계를 포함하고,
    상기 (2) 단계의 투여하는 단계는, 상기 용액의 수득된 볼륨을 무균 튜빙으로부터 분리된 조직 또는 장기로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서,
    상기 (2) 단계의 투여하는 단계는 25℃ 이하의 저체온에서 수행되는, 방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 (2) 단계의 투여하는 단계는 2 내지 15℃의 저체온에서 수행되는, 방법.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용액의 수득된 볼륨은 (1) 단계 및 (2) 단계 동안 또는 (1) 단계와 (2) 단계 사이에 추가 성분으로 보충되지 않는, 방법.
  19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 분리된 조직 또는 장기는 폐, 심장, 간, 신장, 췌장 및 또는 창자 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
  20. (1) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 분리된 조직 또는 장기를 위한 장기 보존 및/또는 관류 용액의 플러싱 볼륨(flushing volume)으로 기증자의 분리된 폐를 플러싱 하는 단계; 및
    (2) 무균 장기 저장 용기를 적어도 부분적으로 상기 용액의 필링 볼륨(filling volume)으로 채우고, 분리된 폐를 상기 용액의 필링 볼륨에 담그는 단계를 포함하는, 수용자로의 최종 이식을 위한 준비로 기증자로부터 제거된 후 분리된 폐를 플러싱, 저장 및/또는 운송하는 방법.
  21. 제20항에 있어서,
    상기 (1) 단계의 플러싱 하는 단계는 초기에는 실온에서 수행되며 그 후에는 2 내지 8℃에서 수행되고,
    상기 (2) 단계의 채우는 단계는 2 내지 8℃에서 수행되는, 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서,
    상기 (1) 단계의 플러싱 하는 단계는 분리된 폐의 배출수를 발생시키고 상기 배출수가 투명해질 때까지 수행되는, 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용액의 플러싱 볼륨은 기증자의 체중 kg 당 50 내지 75 mL의 용액 및/또는 3 내지 8 L의 용액에 해당하는, 방법.
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    (3) 무균 장기 저장 용기를 상기 용기에 들어 있는 분리된 폐와 함께 무균 마개로 밀봉하는 단계; 및 그 후 (4) 분리된 폐를 수용자에게 이식하기 전 무균 장기 저장 용기를 12시간 이하의 시간 동안 2 내지 8℃ 에서 유지하는 단계를 더 포함하고,
    상기 (3) 단계 및 (4) 단계는 (1) 단계 및 (2) 단계 후에 수행되는, 방법.
  25. 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용액의 플러싱 볼륨은 상기 용액이 저장되어 있는 하나 이상의 무균 용기로부터 수득되고,
    상기 용액의 플러싱 볼륨은 (1) 단계 전에 또는 (1) 단계 동안 추가 성분으로 보충되지 않는, 방법.
  26. 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용액의 필링 볼륨은 상기 용액이 저장되어 있는 하나 이상의 무균 용기로부터 수득되고,
    상기 용액의 필링 볼륨은 (2) 단계 전에 또는 (2) 단계 동안 추가 성분으로 보충되지 않는, 방법.
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