KR20200043930A - Stat3 억제제 제형 - Google Patents

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KR20200043930A
KR20200043930A KR1020197032793A KR20197032793A KR20200043930A KR 20200043930 A KR20200043930 A KR 20200043930A KR 1020197032793 A KR1020197032793 A KR 1020197032793A KR 20197032793 A KR20197032793 A KR 20197032793A KR 20200043930 A KR20200043930 A KR 20200043930A
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KR1020197032793A
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로버트 에이치. 슈메이커
조나단 엠. 화이트
샨커 굽타
마이클 더블유. 러벌
Original Assignee
더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈
쥐엘쥐 파마, 엘엘씨
엠알아이글로벌
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Abstract

2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산 및 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올로서 공지된 STAT3 억제제로부터 제조된 염이 개시된다. 상기 염은 물에 용해되며 장기간 안정하다. 상기 염을 포함하는 약제학적 조성물 및 상기 염을 투여하여 유방암과 같은 암을 예방 및 치료하는 방법이 추가로 제공된다.

Description

STAT3 억제제 제형
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 4월 5일자로 출원된 미국 가특허출원 62/481,960의 이익을 주장하며, 이 출원의 전문은 본 출원에 참조로 포함된다.
연방정부 후원 연구 또는 개발에 대한 진술
본 발명은 미국 국립 보건원의 국립 암 연구소에 의해 프로젝트 번호 110775.05.015.04 (A) 하에 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 대한 특정 권리를 갖는다.
화합물 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산 (2-하이드록시-4-(2-(토실옥시)아세트아미도)벤조산으로도 또한 공지됨):
Figure pct00001
은 NSC-74859 및 S3I-201로서 흔히 당해 분야에 공지되어 있으며, 전사의 신호 전달인자 및 활성인자 3 (signal transducer and activator of transcription 3: STAT3) DNA-결합 활성의 강력한 억제제이다 (시험관내에서 86 + 33 μM의 IC50). 특히, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산은 활성화된 STAT3을 발현하는 종양 세포에서 아폽토시스를 유도한다. 결과적으로, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산은 각종 암을 치료하는데 효과적인 것으로 나타났다. 그러나, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산은 물과 에탄올에 잘 용해되지 않으므로, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산의 실제 투여는 용이하게 실현가능하지 않다.
따라서, 개선된 투여 및 효능으로 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하기 위한 활성제로서 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산을 함유하는 개선된 제형에 대한 충족되지 않은 필요성이 여전히 존재한다.
발명의 개요
본 발명은 물에 쉽게 용해되어 안정한 약제학적 조성물을 제공하는 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산의 신규한 염을 제공한다. 특히, 본 발명은 본 출원에서 "화학식 1"로서 명명되는 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
Figure pct00002
.
본 발명은 화합물 1 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다.
화합물 1을 포함하는 약제학적 조성물로 암을 예방하고 치료하는 것을 포함하는 암 치료 방법이 또한 제공된다.
도 1은 물 중에서 LiOH (도 1a), NaOH (도 1b), K2CO3 (도 1c) 또는 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올 (도 1d)의 존재하에 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산의 안정성을 도시하는 일련의 고성능 액체 크로마토그래피 (high performance liquid chromatography: HPLC) 크로마토그램이다. 상기 데이터를 생성하는데 사용되는 조건하에, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산은 8.6분에서 용출된다.
도 2는 토실기의 손실에 의한 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산의 분해를 도시하는 반응식이다.
도 3은 본 발명의 한 실시형태에서 화합물 1의 합성을 도시하는 화학 반응식이다.
도 4는, 2주 치료 후의 대조군 (비투여)과 비교하여, 다양한 용량 (500 mg/kg 체중 (body weight: BW)/일, 250 mg/kg BW/일 또는 125 mg/kg BW/일)으로 암컷 마우스 유선 종양 바이러스 (mouse mammary tumor virus: MMTV)/neu 마우스의 정상 유선에서 Ki67 발현을 억제하는 화합물 1의 수용액의 능력을 나타내는 막대 그래프이다.
도 5는, 2주 치료 후의 대조군 (비투여)과 비교하여, 다양한 용량 (500 mg/kg BW/일, 250 mg/kg BW/일 또는 125 mg/kg BW/일)으로 암컷 MMTV/neu 마우스의 정상 유선에서 STAT3 발현을 억제하는 화합물 1의 수용액의 능력을 나타내는 막대 그래프이다.
도 6은 화학 예방 연구 동안 암컷 MMTV/neu 마우스의 시간 (일령) 경과에 따른 체중 증가 (그램)에 대한 다양한 용량의 화합물 1의 효과를 입증하는 그래프이다. 화합물 1은 50일령부터 연구 종료시까지 마우스에 투여되었다 (4개월 치료). 투여 용량은 비투여 약물의 대조군 (◆)에 대해 500 mg/kg BW/일 (●), 250 mg/kg BW/일 (■) 및 125 mg/kg BW/일 (▲)이었다.
도 7은 시간 (일) 경과에 따른 암컷 MMTV/neu 마우스의 디메틸벤즈안트라센 (DMBA)-유도된 유선암의 출현에 대한 다양한 용량의 화합물 1에 대한 효과를 입증하는 그래프이다. 화합물 1은 50일령부터 연구 종료시까지 마우스에 투여되었다 (4개월 치료). 투여 용량은 비투여 약물의 대조군 (◆)에 대해 500 mg/kg BW/일 (●), 250 mg/kg BW/일 (■) 및 125 mg/kg BW/일 (▲)이었다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
[화합물 1]
Figure pct00003
화합물 1은, 놀랍게도 물에 잘 용해되고 개선된 안정성을 투명한 제형에 제공할 수 있는 것으로 밝혀진, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산과 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올의 염이다.
미국 특허 7,960,434는 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산의 염을 대략적으로 기재하고 있다. 그러나, 미국 특허 7,960,434는 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올로부터 염을 제조하는 것을 개시하거나 시사하고 있지 않다.
화합물 1은 비정질, 결정질 또는 반결정질일 수 있다. 본 출원에서 사용되는 "결정질"이라는 용어는, 규칙 구조를 갖고 급격한 융점을 가지며 저점도 액체를 형성하는 융점까지 승온하에 고체를 유지하는 물질을 지칭한다. "비정질"이라는 용어는 랜덤 구조를 갖는 물질 (예를 들어, 반복 배열 없음)을 지칭하는 반면, "반결정질"은 결정질 및 비정질 부분 둘 다의 조합을 갖는 물질을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 화합물 1은 결정질이다.
치료 방법에서 매우 효과적이기 위해서는 화합물 1을 가능한 순수한 형태로 사용해야 한다. 정제 기술은 당해 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 결정화, 추출, 여과, 크로마토그래피, 증류 및 승화를 포함한다. 화합물 1의 순도는, 예를 들어, 융점을 측정함으로써 시험될 수 있다. 전형적으로, 화합물 1은 적어도 85% 순수하다 (예를 들어, 적어도 90% 순수하거나, 적어도 92% 순수하거나, 적어도 95% 순수하거나, 적어도 96% 순수하거나, 적어도 97% 순수하거나, 적어도 98% 순수하거나, 적어도 99% 순수하다). 본 발명의 특정 양태에서, 화합물은 1은 적어도 98% 순수하다.
화합물 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산은 상업적으로 구입하거나 일상적인 화학 절차를 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 7,960,434의 반응식 1에 제시된 합성을 참조하며, 이 특허의 개시 내용은 참조로 포함된다.
2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올은 시판되고 있으며, 예를 들어, TRIZMA™ 또는 Tris 염기 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)로서 공지되어 있다.
본 출원에서 기재된 방법은 화합물 1을 약제학적 조성물의 형태로 투여하는 것을 포함한다. 특히, 약제학적 조성물은 유효량의 화합물 1 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 출원에서 기재된 약제학적으로 허용되는 부형제, 예를 들어, 비히클, 보조제, 담체 또는 희석제는 당해 분야의 통상의 기술자에게 잘 공지되어 있으며, 용이하게 이용가능하다. 전형적으로, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 활성 화합물(들)에 화학적으로 불활성인 것 및 사용 조건하에 유해한 부작용 또는 독성이 없는 것이다.
상기 약제학적 조성물은 경구, 설하, 경피, 피하, 국소, 상피 또는 점막피부 내층을 통한 흡수, 정맥내, 비강내, 동맥내, 근육내, 종양내, 종양주위, 복강내, 척수강내, 직장내, 질내 또는 에어로졸 제형으로서 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 상기 약제학적 조성물은 경구로 또는 정맥내로 투여된다. 바람직하게는, 상기 약제학적 조성물은 경구 제형이다.
임의의 실시형태에 따르면, 화합물 1은 이를 필요로 하는 대상체에게 경구로 투여될 수 있다. 경구 투여에 적합한 제형은 (a) 물, 식염수 또는 오렌지 주스와 같은 희석제에 용해되고 사이클로덱스트린 (예를 들어, α-, β- 또는 γ-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필 사이클로덱스트린) 또는 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, PEG400)과 같은 첨가제를 포함할 수 있는 유효량의 화합물과 같은 액체 용액; (b) 각각 예정된 양의 활성 성분을 고체 또는 과립으로서 함유하는 캡슐, 샤세제, 정제, 로젠지 및 구내정; (c) 분말; (d) 적절한 액체 중의 현탁액; 및 (e) 적합한 유화액 및 젤로 이루어질 수 있다.
액상 제형은 약제학적으로 허용되는 계면 활성제, 현탁제 또는 유화제의 첨가 또는 첨가 없이 물 및 알코올, 예를 들어, 에탄올, 벤질 알코올 및 폴리에틸렌 알코올과 같은 희석제를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 에탄올, 물, 또는 에탄올과 물의 조합을 포함한다. 바람직하게는, 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 물을 포함한다. 특정 양태에서, 상기 약제학적 조성물은 투명한 용액 (예를 들어, 투명한 수용액)이다.
캡슐 형태는, 예를 들어, 계면 활성제, 윤활제 및 불활성 충전제, 예를 들어, 락토오스, 수크로오스, 인산 칼슘 및 옥수수 전분을 함유하는 통상적인 경질-쉘 또는 연질-쉘 젤라틴 유형일 수 있다. 정제 형태는 락토오스, 수크로오스, 만니톨, 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산, 미세결정질 셀룰로오스, 아카시아, 젤라틴, 구아 검, 콜로이드성 이산화 규소, 크로스카멜로오스 나트륨, 탈크, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 아연, 스테아르산 및 기타 부형제, 착색제, 희석제, 완충제, 붕해제, 습윤제, 보존제, 향미제 및 약리학적으로 상용되는 담체 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 로젠지 형태는 활성 성분을 향미제, 일반적으로, 수크로오스와 아카시아 또는 트라가칸트 중에 포함할 수 있고, 파스티유는 활성 성분을 젤라틴과 글리세린 또는 수크로오스와 아카시아와 같은 불활성 베이스 중에 포함하고, 유화액, 젤 등은 활성 성분에 추가하여 당해 분야에 공지된 바와 같이 이러한 담체를 포함한다.
비경구 투여에 적합한 제형으로는, 항산화제, 완충제, 정균제, 및 제형을 대상 수용자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 포함할 수 있는 수성 및 비수성의 등장성 멸균 주사액; 및 현탁제, 가용화제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액이 포함된다. 화합물 1은, 물, 식염수, 수성 덱스트로오스 및 관련 당 용액, 알코올 (예를 들어, 에탄올, 이소프로판올 또는 헥사데실 알코올), 글리콜 (예를 들어, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜), 글리세롤 케탈 (예를 들어, 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-메탄올), 에테르 (예를 들어, 폴리(에틸렌글리콜) 400), 오일, 지방산, 지방산 에스테르 또는 글리세라이드, 또는 아세틸화된 지방산 글리세라이드를 비롯한 멸균 액체 또는 액체들의 혼합물과 같은 약제학적 담체와 함께 생리학적으로 허용되는 희석제 중에, 약제학적으로 허용되는 계면 활성제 (예를 들어, 비누 또는 세제), 현탁제 (예를 들어, 펙틴, 카보머, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 또는 카복시메틸셀룰로오스) 또는 유화제 및 기타 약제학적 아쥬반트를 첨가하거나 첨가하지 않고 투여될 수 있다.
비경구 제형에 사용될 수 있는 오일로는 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 오일이 포함된다. 오일의 구체적인 예로는 땅콩, 대두, 참깨, 면실, 옥수수, 올리브, 바셀린 및 미네랄이 포함된다. 비경구 제형에 사용하기에 적합한 지방산으로는 올레산, 스테아르산 및 이소스테아르산이 포함된다. 에틸 올레에이트 및 이소프로필 미리스테이트는 적합한 지방산 에스테르의 예이다. 비경구 제형에 사용하기에 적합한 비누는 지방 알칼리 금속, 암모늄 및 트리에탄올 아민 염을 포함하고, 적합한 세제로는 (a) 예를 들어, 디메틸 디알킬 암모늄 할라이드 및 알킬 피리디늄 할라이드와 같은 양이온성 세제, (b) 예를 들어, 알킬, 아릴 및 올레핀 설포네이트, 알킬, 올레핀, 에테르 및 모노글리세라이드 설페이트 및 설포석시네이트와 같은 음이온성 세제, (c) 예를 들어, 지방 아민 옥사이드, 지방산 알칸올아미드 및 폴리옥시에틸렌-폴리프로필렌 공중합체와 같은 비이온성 세제, d) 예를 들어, 알킬-베타-아미노프로피오네이트 및 2-알킬-이미다졸린 4차 암모늄 염과 같은 양쪽성 세제 및 (e) 이들의 혼합물이 포함된다.
비경구 제형은 전형적으로 용액 중에 약 0.5 내지 약 25 중량%의 화합물 1을 함유할 것이다. 적합한 보존제 및 완충제가 이러한 제형에 사용될 수 있다. 주사의 부위에서 자극을 최소화하거나 제거하기 위해서, 이러한 조성물은 약 12 내지 약 17의 친수성과 친유성 비 (hydrophile-lipophile balance: HLB)를 갖는 1종 이상의 비이온성 계면 활성제를 포함할 수 있다. 이러한 제형 중 계면 활성제의 양은 약 5 내지 약 15 중량%의 범위이다. 적합한 계면 활성제로는 프로필렌 옥사이드와 프로필렌 글리콜의 축합에 의해 형성된 폴리에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어, 소르비탄 모노올레에이트, 및 에틸렌 옥사이드와 소수성 염기의 고분자량 부가물이 포함된다. 비경구 제형은 단일 용량 또는 다중 용량의 밀봉된 용기, 예를 들어, 앰풀 및 바이알로 제공될 수 있으며, 사용 직전에 주사용 멸균 액체 담체 (예를 들어, 물)의 첨가만을 필요로 하는 냉동-건조된 (동결 건조) 상태로 보관될 수 있다. 즉석 조제용 주사액 및 현탁액은 이전에 기재된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
주사용 조성물에 효과적인 약제학적 담체에 대한 요건은 당해 분야의 통상의 기술자에게 잘 공지되어 있다. 문헌 [Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Co., Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982)] 및 [ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)]을 참조한다.
국소적으로 적용되는 조성물은 일반적으로 액체 (예를 들어, 구강 청결제), 크림, 페이스트, 로션 및 젤의 형태이다. 국소 투여는 구강, 구강 상피, 구개, 치은 및 비점막을 비롯한 구강 점막에 대한 적용을 포함한다. 상기 담체는 액체, 고체 또는 반고체일 수 있다. 실시형태에서, 상기 조성물은 구강 청결제와 같은 수용액이다. 대안적으로, 상기 조성물은 다양한 구성성분을 위한 분산액, 유화액, 젤, 로션 또는 크림 비히클일 수 있다. 하나의 실시형태에서, 주요 비히클은 물, 또는 실질적으로 중성이거나 실질적으로 중성이 되게 만들어진 생체적합성 용매이다. 액체 비히클은 목적하는 pH, 컨시스턴시 및 점도를 수득하기 위해 당해 분야에 공지된 바와 같은 다양한 유화제 또는 분산제와 함께 항자극제, 완충제, 알코올, 글리세린 및 미네랄 오일과 같은 기타 물질을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 분말 또는 과립과 같은 고체로서 제조될 수 있는 것이 가능하다. 상기 고체는 사용하기 전에 물 또는 생체적합성 용매에 직접 적용되거나 용해되어, 실질적으로 중성 (예를 들어, 약 pH 7)이거나 실질적으로 중성이 되게 만들어진 후 표적 부위에 적용될 수 있는 용액을 형성할 수 있다. 본 발명의 실시형태에서, 피부에 국소 적용하기 위한 비히클로는 물, 완충 용액, 다양한 알코올, 글리콜, 예를 들어, 글리세린, 지질 물질, 예를 들어, 지방산, 미네랄 오일, 포스포글리세라이드, 콜라겐, 젤라틴 및 실리콘계 물질이 포함될 수 있다.
한 실시형태에서, 담체 및 존재하는 임의의 다른 부형제를 포함하는 약제학적 조성물 (예를 들어, 수용액) 중 화합물 1의 용해도는 적어도 5 mg/mL, 적어도 10 mg/mL, 적어도 20 mg/mL, 적어도 30 mg/mL, 적어도 40 mg/mL 또는 적어도 50 mg/mL이다. 특히, 상기 용해도는 약 40 mg/mL, 약 45 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 55 mg/mL, 약 60 mg/mL 또는 약 65 mg/mL일 수 있다.
화합물 1을 포함하는 수용액과 같은 화합물 1을 포함하는 약제학적 조성물은 전형적으로 적어도 1 시간 (예를 들어, 적어도 2 시간, 적어도 3 시간, 적어도 4 시간, 적어도 5 시간, 적어도 6 시간, 적어도 12 시간, 적어도 18 시간, 적어도 24 시간, 적어도 36 시간, 적어도 2 일, 적어도 2.5 일, 적어도 3 일, 적어도 3.5 일, 적어도 4 일, 적어도 4.5 일, 적어도 5 일, 적어도 5.5 일, 적어도 6 일, 적어도 6.5 일 또는 적어도 7 일 (1 주일)) 동안 (예를 들어, 실온에서 및/또는 실온 미만의 온도에서) 안정하다.
장기간 안정성을 증가시키는데 도움을 주기 위해, 약제학적 조성물은, 경우에 따라, 20℃ 이하, 15℃ 이하, 12℃ 이하, 10℃ 이하, 8℃ 이하, 5℃ 이하, 2℃ 이하 또는 0℃ 이하에서 조성물을 저장하는 것을 비롯하여 실온 미만의 온도에서 저장될 수 있다. 온도의 하한은, 예를 들어, -40℃ 이상, -30℃ 이상, -20℃ 이상, -10℃ 이상 또는 0℃ 이상일 수 있다. 전술한 종점들 중 임의의 2개는 폐쇄형 범위를 정의하는데 사용될 수 있거나, 개방형 범위를 정의하는데 단독으로 사용될 수 있다. 본 발명의 특정 양태에서, 약제학적 조성물은 담체로서 물을 포함하는 투명한 용액이다. 바람직하게는, 이러한 조성물은 실온 미만의 온도 (예를 들어, -30℃ 내지 0℃, 약 0℃ 또는 약 -20℃)에서 저장된다.
약제학적 조성물은 목적하는 제형 및/또는 치료에 적합한 임의의 pH를 가질 수 있다. 전형적으로, 약제학적 조성물은 약 7의 pH, 예를 들어, 약 6~8 (예를 들어, 6.0과 8.0 사이, 6.5와 7.5 사이, 6.6과 7.4 사이, 및 6.7과 7.3 사이)의 pH를 갖는다.
본 발명에 따른 대상체 (예를 들어, 사람과 같은 포유 동물)에게 투여되는 용량은 목적하는 반응에 영향을 미치기에 충분해야 한다. 당해 분야의 통상의 기술자는 투약량이 대상체의 연령, 병태 또는 질병 상태, 질병에 대한 소인, 유전적 결함 또는 결함들, 및 체중을 비롯한 다양한 요인에 좌우될 것이라는 것을 인식할 것이다. 용량의 크기는 또한 투여의 경로, 시기 및 빈도 뿐만 아니라, 화합물 1의 투여 및 목적하는 효과에 수반될 수 있는 임의의 불리한 부작용의 존재, 성질 및 정도에 의해 결정될 것이다. 다양한 병태 또는 질환 상태가 복수의 투여를 수반하는 연장된 치료를 필요로 할 수 있다는 것은 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 인식될 것이다.
본 발명의 방법은 유효량의 화합물 1을 투여하는 것을 포함한다. "유효량"은 개체에서의 유의미한 이점, 예를 들어, 종양 세포 세포 독성의 적어도 하나의 양태의 촉진 (예를 들어, 성장의 억제, 세포 증식의 감소, 암 세포의 생존의 억제, 아폽토시스의 유도, 증식의 감소, 종양 (예를 들어, 고형 종양)의 크기 및/또는 질량의 감소), 또는 특정 암과 연관된 다른 관련 의학적 병태(들)의 치료, 치유, 예방, 발병 지연, 위험 감소, 정지 또는 개선을 나타내기에 충분한 양을 의미한다. 대상체에서 관찰되는 유의미한 이점은 임의의 적합한 정도 (10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상)까지일 수 있다. 일부 양태에서, 화합물 1의 투여 후에 암의 1종 이상의 증상을 예방, 감소, 지연, 정지 및/또는 제거함으로써, 암을 적어도 어느 정도까지 효과적으로 예방 및/또는 치료한다. 특정 실시형태에서, 대상체에 대한 화합물 1의 투여시, 암 세포 성장이 예방되고, 암 세포의 출현이 지연되고, 암 세포의 수가 감소되고/되거나, 암 세포가 수축 및/또는 사멸된다.
유효량은 대상체에서 목적하는 생물학적 효과 및 치료되는 병태에 따라 달라질 수 있다. 이와 관련하여, 화합물 1의 임의의 적합한 용량은 치료되는 암의 유형에 따라 대상체 (예를 들어, 사람)에게 투여될 수 있다. "유효량"을 결정할 때에 고려되는 다양한 일반적인 고려 사항은, 당해 분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 [Gilman et al., eds., Goodman And Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8th ed., Pergamon Press, 1990] 및 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990]에 기재되어 있고, 이들 문헌의 전문은 본 출원에 참조로 포함된다. 화합물 1의 용량은 바람직하게는 포유 동물의 체중 1 킬로그램 (kg) 당 약 0.1 mg (mg/kg) 부터 (예를 들어, 약 0.5 mg/kg 부터, 약 0.75 mg/kg 부터, 약 1 mg/kg 부터, 약 2 mg/kg 부터, 약 3 mg/kg 부터, 약 5 mg/kg 부터, 약 10 mg/kg 부터, 약 20 mg/kg 부터, 약 30 mg/kg 부터, 약 40 mg/kg 부터, 약 50 mg/kg 부터, 약 60 mg/kg 부터, 약 75 mg/kg 부터, 약 90 mg/kg 부터, 약 100 mg/kg 부터, 약 125 mg/kg 부터, 약 150 mg/kg 부터, 약 175 mg/kg 부터, 약 200 mg/kg 부터, 약 225 mg/kg 부터, 약 250 mg/kg 부터, 약 275 mg/kg 부터, 약 300 mg/kg 부터, 약 325 mg/kg 부터, 약 350 mg/kg 부터, 약 375 mg/kg 부터, 약 400 mg/kg 부터), 약 800 mg/kg 까지 (예를 들어, 약 425 mg/kg 까지, 약 450 mg/kg 까지, 약 475 mg/kg 까지, 약 500 mg/kg 까지, 약 525 mg/kg 까지, 약 550 mg/kg 까지, 약 575 mg/kg 까지, 약 600 mg/kg 까지, 약 625 mg/kg 까지, 약 650 mg/kg 까지, 약 675 mg/kg 까지, 약 700 mg/kg 까지, 약 725 mg/kg 까지, 약 750 mg/kg 까지 또는 약 775 mg/kg 까지)의 범위이다. 전술한 종점들 중 임의의 2개는 폐쇄형 범위를 정의하는데 사용될 수 있거나, 개방형 범위를 정의하는데 단독으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 화합물 1의 용량은 바람직하게는 약 100 mg/kg/일 내지 약 600 mg/kg/일, 약 125 mg/kg/일 내지 약 500 mg/kg/일, 약 200 mg/kg/일 내지 약 550 mg/kg/일, 약 250 mg/kg/일 내지 약 500 mg/kg/일의 범위, 약 250 mg/kg/일 또는 약 500 mg/kg/일이다.
항시적 STAT3 활성은 당뇨병성 신병증, 2형 당뇨병에서의 골격근 인슐린 저항성, 자궁 내막증, 우울증, 천식, 대장염, 신장 섬유증, 염증성 장 질환, 전신 홍반성 루푸스 (systemic lupus erythematosus: SLE), 알츠하이머병, 헌팅턴병 및 자폐증과 같은 다수 유형의 암 및 기타 질환에 대한 마커이다. 예를 들어, 문헌 [Gkouveris et al., Journal of Cancer Therapy, 2015; 6: 709-726], 국제공개공보 WO 2012/159107 및 WO 2010/062681을 참조한다. 암 세포와 관련하여, 비정상적인 STAT3은 종양 세포 침습 및 전이를 촉진하는 것으로 여겨진다. 예를 들어, 문헌 [Yue et al., Expert Opinion Investig Drugs, 2009; 18(1): 45-56]을 참조한다. 따라서, 본 발명의 일부 양태에서, 화합물 1은 암 세포와 같은 세포에서 STAT3 활성을 억제 및/또는 감소시킨다.
STAT3의 억제는 당해 분야에서 전형적으로는 STAT3 인산화/활성화의 예방, DNA 결합의 억제 또는 STAT3 이량체 형성의 억제를 통한 암의 실행가능한 치료로서 기술되어 왔다. STAT3 활성의 억제는 암 세포에서 아폽토시스를 유도하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 문헌 [Gkouveris et al., Journal of Cancer Therapy, 2015; 6: 709-726]을 참조한다. 따라서, 화합물 1은 암에 대한 치료 방법의 일부로서 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. 특히, 본 발명은, 유효량의 화합물 1을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암 (예를 들어, 유방암)을 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법에서, 전형적으로는 암의 출현의 지연이 있거나, 암 세포가, 특히, 특정 암에 대한 위험이 있는 대상체에서 형성되지 않는다. 유효량의 화합물 1을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암 (예를 들어, 유방암)을 치료하는 방법이 추가로 제공된다. 이러한 방법에서, 암 세포는 사멸, 수축, 억제되고/되거나, 수가 감소된다.
치료 또는 예방되는 암의 유형은 특별히 제한되지 않지만, 특정 양태에서, 암은 동일한 유형의 정상 조직에 비해 증가된 STAT3 활성 및/또는 증가된 Ki67 발현을 갖는 것을 특징으로 한다. 예를 들어, 문헌 [Garcia et al., Cell Growth Differ, 1997; 8(12): 1267-1276], [Watson et al., Br J Cancer, 1995; 71(4): 840-844], [Huang et al., Gynecol Oncol, 2000; 79(1): 67-73], [Dhir et al., Prostate, 2002; 51(4): 241-246], [Mora et al., Cancer Res, 2002; 62(22): 6659-6666], [Corvinus et al., Neoplasia, 2005; 7(6): 545-555], [Guo et al., Am J Transl Res, 2009; 1(3): 283-290], [Schaefer et al., Oncogene, 2002; 21(13): 2058-2065] 및 [Wei et al., Oncogene, 2003; 22(3): 319-329]을 참조한다. 예를 들어, STAT3은 에스트로겐 수용체 (estrogen receptor: ER), 프로게스테론 수용체 (progesterone receptor: PR) 및 사람 표피 성장 인자 수용체 2 (HER2/Neu)의 발현이 결여된 모든 유방암, 특히, 삼중 음성 유방암의 40% 이상에서 항시적으로 활성이다 (문헌 [Banerjee et al., Int J Cancer, 2016; 138(11): 2570-2578]). 활성화된 STAT3은 또한 에스트로겐 생합성 및 ER-양성 유방 상피 세포의 후속 증식을 유도하는 것으로 나타났으며 (문헌 [Ishii et al., Cancer Res, 2008; 68(3): 852-860]), 종양 재발-촉진성 줄기 세포-유사 유방암 세포의 유지 및 비-암 줄기 세포 집단의 유방암 줄기 세포-유사 세포로의 전환에서 역할을 하는 것으로 생각된다 (문헌 [Marotta et al., J Clin Invest, 2011; 121(7): 2723-2735]). 따라서, 본 STAT3 억제제는, STAT3 억제제가 복수의 유방암 서브형을 잠재적으로 예방할 수 있다는 점에서 FDA-승인된 유방암 예방제인 타목시펜 및 랄록시펜에 비해 독특한 이점을 제공한다. 또한, STAT3 억제제로서의 화합물 1은 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (selective estrogen receptor modulator: SERM)인 타목시펜 및 랄록시펜과 뚜렷이 구별되는 작용 메카니즘을 갖기 때문에, 이러한 억제제는 또한 이들 약물에 대한 발달된 내성을 갖는 ER-양성 유방암에 대해 특히 유용할 수 있다.
본 발명의 방법으로 치료가능한 암의 예로는 두경부, 눈, 피부, 입, 목구멍, 식도, 가슴, 뼈, 폐, 결장, S자 결장, 직장, 위, 전립선, 유방, 난소, 신장, 간, 췌장, 뇌, 장, 심장 또는 부신의 암이 포함된다. 보다 구체적으로, 암으로는 고형 종양, 육종, 암종, 섬유 육종, 점액 육종, 지방 육종, 연골 육종, 골원성 육종, 척삭종, 혈관 육종, 내피 육종, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근 육종, 횡문근 육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 신세포 암종, 간세포 암종, 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 배아성 암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 카포시 육종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경초종, 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 혈액 매개성 종양, 급성 림프아구성 백혈병, 급성 림프아구성 B-세포 백혈병, 급성 림프아구성 T-세포 백혈병, 급성 골수아구성 백혈병, 급성 전골수세포성 백혈병, 급성 단아구성 백혈병, 급성 적백혈병성 백혈병, 급성 거핵아구성 백혈병, 급성 골수단구성 백혈병, 급성 비림프구성 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 만성 골수세포성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 모발상 세포 백혈병 또는 다발성 골수종이 포함된다. 예를 들어, 문헌 [Harrison's Principles of Internal Medicine, Eugene Braunwald et al., eds., pp. 491 762 (15th ed. 2001)]을 참조한다. 일부 양태에서, 상기 암은 고형 종양이다.
한 실시형태에 따르면, 치료 및/또는 예방되는 암은 백혈병, 다발성 골수종, 췌장암, 신장암, 뇌암, 두경부암, 간암, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 난소암 및 전립선 암으로부터 선택된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 암은 유방암, 난소암, 전립선암, 대장암, 신장암, 뇌암 또는 췌장암이다. 더 또 다른 실시형태에서, 상기 암은 췌장암, 간암 또는 유방암이다. 바람직하게는, 치료 및/또는 예방되는 암은 유방암이다.
치료되는 대상체는 치료를 필요로 하고, 암이 있거나 암에 대한 위험이 있고/있거나, 암이 있는 것으로 의심된다. 대상체는 연령, 유전적 소인 (예를 들어, 암의 가족력 및/또는 유전자 스크리닝 어세이의 결과), 방사선에 대한 노출, 연기에 대한 노출, 미립자의 흡입, 돌연변이원의 소비 및/또는 식이를 비롯한 다양한 요인에 기초하여 암에 대한 위험에 있을 수 있다. 특정 암으로 진단된 적어도 1명의 일차 친척 (즉, 부모, 형제자매 및/또는 자녀)이 있는 개체는, 상기 개체가 해당 암에 대한 평균 위험보다 더 높다는 것을 시사할 수 있다. 특정 암으로 진단된 2명의 일차 친척은 위험을 추가로 증가시킨다. 개체는 자가 검사, 임상 검사, 유방촬영사진, 파파니콜로 검사, 초음파 검사, 디지털 유방 단층촬영술, 생검, 자기 공명 영상 (magnetic resonance imaging: MRI), X선, 대장내시경 검사, 혈액 검사, 소변 검사, 직장 검사 및 저용량 컴퓨터 단층촬영 (ow-dose computed tomography: LDCT)을 비롯하여 다양한 유형의 암에 대해 대해 스크리닝 및/또는 진단될 수 있다. 특정 예에서, 1형 유방암 (breast cancer type 1: BRCA1) 유전자 및/또는 HER2 유전자에서의 돌연변이 및/또는 1종 이상의 공지된 암 바이오 마커 (예를 들어, Ki67, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 전립선-특이 항원 (prostate-specific antigen: PSA), CA-125)의 높은 발현을 갖는 것으로 밝혀진 대상체는, 전형적으로 암 (예를 들어, 유방암, 전립선암, 난소암)에 대한 위험이 있거나 암이 있는 것으로 의심되는 개체로서 인식될 수 있다. 특정 예에서, 대상체는 세포 성장 속도 (예를 들어, 새로운 암 세포를 형성하기 위해 성장하고 분열하는 종양 내의 암 세포의 비율)에 대해 스크리닝될 수 있다. Ki67의 수준이 측정될 수 있으며, Ki67의 비율이 높을수록, 암 세포는 보다 급격하게 성장할 것이다. 대상체의 혈액, 조직, 소변 또는 혈액 골수의 샘플에서 시험될 수 있는 다른 가능한 종양 마커로는, 예를 들어, AFP, ALK 유전자 재배열, B-세포 면역글로불린 유전자 재배열, B2M (베타 2-마이크로글로불린), BCR-ABL, CA 15-3, Ca-19-9, 칼시토닌, 암 배아 항원 (carcino-embryonic antigen: CEA), 크로모그라닌 A (CgA), 데스-감마-카복시 프로트롬빈 (des-gamma-carboxy prothrombin: DCP), EGFR 돌연변이, 피브린, 피브리노겐, 가스트린, 사람 융모성 생식선 자극 호르몬 (human chorionic gonadotropin: hCG), JAK2 돌연변이, KRAS 돌연변이, 락테이트 데하이드로게나아제 (lactate dehydrogenase: LD), 단클론 면역글로불린, 가용성 메소텔린-관련 펩타이드 (soluble mesotheline-related peptide: SMRP), T-세포 수용체 유전자 재배열, 티이로글로불린, 21-유전자 서명, 70-유전자 서명이 포함된다.
개체의 특정 암에 대한 위험을 평가하기 위한 스크리닝 지침은 암에 따라 달라진다. 예를 들어, 유방암 스크리닝은 (i) 45세 초과의 평균 위험이 있는 것으로 간주되는 개체 및 (ii) 평균 위험 보다 높은 (예를 들어, BRCA1, BRCA2, HER2 및/또는 CHEK2 유전자 돌연변이에 대해 양성인 것으로 검사된 유방암 및/또는 10세와 30세 사이에 흉부 방사선의 이력이 있는 적어도 한명의 부모, 형제자매 또는 자녀가 있는) 것으로 간주되는 개체에 대해 권장된다. 대장 암 스크리닝은 50세 초과의 평균 위험이 있는 개체에게는 권장되지만, 일차 친척이 대장 용종 또는 암이 있고/있거나, 개체가 염증성 장 질환 (예를 들어, 크론병 또는 궤양성 대장염)이 있고/있거나, 개체가 가족성 선종성 용종증 (familial adenomatous polyposis: FAP) 또는 유전성 비용종성 대장암 (린치 증후군)과 같은 유전적 증후군이 있는 경우, 검사는 위험이 더 높은 것으로 평가된 개체에 대해 더 빨리 수행될 수 있다. 개체가 흡연의 이력이 있거나 현재 흡연하거나 과거 15년 이내에 끊었으며 55세와 80세 사이인 경우, 개체는 폐암에 대한 위험이 있을 수 있다. 개체가 아프리카계 미국인이고/이거나, 60세 이전에 전립선암으로 진단된 일차 친척이 있고/있거나, 75세 이전에 전립선암으로 사망한 일차 친척이 있는 경우, 남성 개체는 전립선 암에 대한 위험이 있을 수 있다.
본 출원에서 기재된 방법의 특정 실시형태에서, 화합물 1은 1종 이상의 (예를 들어, 2종, 3종 또는 그 이상의) 추가의 항암제 (예를 들어, 화학요법제) 및/또는 방사선 요법과 공동-투여될 수 있다. "공동-투여되는" 또는 "공동-투여"라는 용어는 동시 또는 순차적 투여를 지칭한다. 화합물은 또 다른 화합물의 투여 이전에, 동시에 또는 이후에 투여될 수 있다.
항암제의 예로는 백금 화합물 (예를 들어, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴), 알킬화제 (예를 들어, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 클로람부실, 질소 머스타드, 티오테파, 멜팔란, 부설판, 프로카바진, 스트렙토조신, 테모졸로마이드, 다카바진, 벤다무스틴), 항종양 항생제 (예를 들어, 다우노루비신, 독소루비신, 아이다루비신, 에피루비신, 미톡산트론, 블레오마이신, 미토마이신 C, 플리카마이신, 닥티노마이신), 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀 및 도세탁셀), 항대사물질 (예를 들어, 5-플루오로우라실, 사이타라빈, 프레메트렉세드, 티오구아닌, 플록슈리딘, 카페시타빈 및 메토트렉세이트), 뉴클레오사이드 유사체 (예를 들어, 플루다라빈, 클로파라빈, 클라드리빈, 펜토스타틴, 넬라라빈), 토포아이소머라아제 억제제 (예를 들어, 토포테칸 및 이리노테칸), 저메틸화제 (예를 들어, 아자시티딘 및 데시타빈), 프로테오좀 억제제 (예를 들어, 보르테조밉), 에피포도필로톡신 (예를 들어, 에토포사이드 및 테니포사이드), DNA 합성 억제제 (예를 들어, 하이드록시우레아), 빈카 알칼로이드 (예를 들어, 비크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 및 빈블라스틴), 타이로신 키나아제 억제제 (예를 들어, 이마티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 소라페닙, 수니티닙), 단클론 항체 (예를 들어, 리툭시맙, 세툭시맙, 파네투무맙, 토시투모맙, 트라스투주맙, 알렘투주맙, 젬투주맙 오조가마이신, 베바시주맙), 니트로소우레아 (예를 들어, 카르무스틴, 포테무스틴 및 로무스틴), 효소 (예를 들어, L-아스파라기나아제), 생물제제 (예를 들어, 인터페론 및 인터루킨), 헥사메틸멜라민, 미토테인, 혈관형성 억제제 (예를 들어, 탈리도마이드, 레날리도마이드), 스테로이드 (예를 들어, 프레드니손 , 덱사메타손 및 프레드니솔론), 호르몬제 (예를 들어, 타목시펜, 랄록시펜, 류프롤라이드, 비칼루타마이드, 그라니세트론, 플루타마이드), 아로마타아제 억제제 (예를 들어, 레트로졸 및 아나스트로졸), 삼산화 비소, 트레티노인, 비선택적 사이클로옥시게나아제 억제제 (예를 들어, 비스테로이드성 항염증제, 살리실레이트, 아스피린, 피록시캄, 이부프로펜, 인도메타신, 나프로신, 디클로페낙, 톨메틴, 케토프로펜, 나부메톤, 옥사프로진), 선택적 사이클로옥시게나아제-2 (COX-2) 억제제 또는 이들의 임의의 조합이 포함된다. 일부 바람직한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체, 화합물 1, 및 타목시펜, 랄록시펜, 또는 타목시펜과 랄록시펜 둘 다 중 하나를 포함한다.
본 발명의 목적상, "대상체"라는 용어는 전형적으로 포유 동물에 관한 것이다. 포유 동물로는 마우스와 같은 쥐목, 및 토끼와 같은 토끼목이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 일부 양태에서, 상기 포유 동물은 고양이과 (고양이) 및 개과 (개)를 비롯한 육식목, 소과 (소) 및 돼지과 (돼지)를 비롯한 우제목, 또는 말과 (말)을 비롯한 말목으로부터 유래된다. 일부 양태에서, 상기 포유 동물은 영장목, 세보이드 (Ceboids) 또는 시미오이드 (Simioids) (원숭이) 또는 안트로포이드 (Anthropoids) 목 (사람 및 유인원)이다. 본 발명의 실시형태에서, 치료되는 대상체는 사람이다. 상기 대상체는 남성 또는 여성일 수 있으며, 본 발명의 일부 양태에서는 상기 대상체가 여성이다.
하기 실시예는 본 발명을 추가로 설명하지만, 물론 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1
본 실시예는 다양한 염기의 존재하에 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산의 안정성을 입증한다.
액체 크로마토그래피-질량 분광법 (liquid chromatography-mass spectrometry: LC-MS) 연구를 수행하였으며, 여기서, LiOH, NaOH, K2CO3, NaHCO3 및 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올 (TRIZMA™, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)을 비롯한 1.1 몰당량의 다양한 염기를 칭량하고, 물에 용해시키고, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산에 첨가하였다. 생성된 혼합물은 용해도와 안정성 둘 다에 대해 검사되었으며, 그 결과는 UV 및 질량 분광법 검출과 함계 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)로 분석되었다.
검사한 모든 염기의 경우, 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산은 우수한 수용성을 나타냈지만, 모든 염이 안정하지는 않았다 (도 1a~1d). 질량 스펙트럼 데이터에서 볼 수 있는 바와 같이, 주요 분해물은 토실레이트기의 손실이었다 (도 2). 분해는 수산화 나트륨과 같은 보다 강한 염기에서 훨씬 더 두드러졌다. 보다 약하고 보다 입체 장애된 염기인 TRIZMA™는 우수한 용해도 (pH 7의 물에서 약 60 mg/mL의 용해도)를 제공하며, 생성물은 초기 분석 동안 (상온에서 물에서 최대 약 8 시간까지) 안정적으로 유지되는 것으로 결정되었다.
실시예 2
본 실시예는 본 발명의 한 실시형태에서 화합물 1의 합성을 입증한다.
2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산 (1.52 g, GLG-Pharma, Jupiter, FL, lot AL650-78-4)을 11 mL의 이소프로판올 및 18 mL의 테트라하이드로푸란 (THF) 중에 용해시켰다. 별도의 용기에서, 506 mg의 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올 (TRIZMA™, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Lot SLBK9274V)을 1.0 mL의 증류수 중에 용해시켰다. 2개의 혼합물을 합하고, 30분 동안 혼합하고, 0.2 μm의 나일론 막 필터를 통해 여과시키고, 이어서, 가열 하에 진공 증류시켰다. 대략 부피의 1/2, 예를 들어, 약 15mL이 남을 때까지, 증류를 계속하였다. 이소프로판올 (15 mL)을 첨가하고, 부피의 1/2이 남을 때까지 증류를 계속하고, 이어서, 15 mL의 에틸 아세테이트를 첨가하고, 3원 혼합물의 증류를 계속하였다. 증류액의 1/2을 제거한 후, 에틸 아세테이트 첨가를 2회 더 반복하고, 최종 증류에 의해 부피를 약 5 mL로 감소시켜 투명한 오일을 수득하였다. 다음으로, 5 mL의 이소프로판올을 첨가하여 투명한 용액을 수득하고, 이어서, 25 mL의 에틸 아세테이트를 적가하여 백색 고체의 침전을 초래하였다. 고체 생성물을 여과에 의해 수집하고, 필터 케이크를 10 mL의 에틸 아세테이트로 세척하였다. 단리된 생성물을 진공하에 건조하여 1.4 g (수율 69%)의 흡습성 물질을 수득하였다.
내부 자외선 (UV) 검출기가 장착된 LC-2010CHT 액체 크로마토그래프 (Shimadzu, Columbia, MD)를 사용하여, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 수행하였다. 검출은 261 nm에서 이루어졌다. Shimadzu-LC에 결합된 API-4000™ 삼중 4극 질량 분광계 (Sciex, Framingham, MA)에 의해 질량 분광법을 수행하였다. ANALYST™ Software, 버전 1.5.1 데이터 시스템 (Sciex, Framingham, MA)에 의해 결과를 획득하고 처리하였다. 컬럼 온도를 40℃로 유지한 채로 XSELECT™ HSS T3 C18, 75×3.0 mm, 3.5 μm의 칼럼 (Waters Corporation, Milford, MA)을 사용하여 HPLC 분리를 수행하였다. 이동상은 (A) 물 중의 0.1% 포름산 (LC-MS 등급, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 및 (B) 아세토니트릴 중의 0.1% 포름산 (LC-MS 등급, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)으로 이루어졌다. HPLC 용출 프로그램은 다음 구배 경사로 이루어졌다 - 5분 동안 30% B, 20분에 걸친 90% B로의 선형 경사, 5분 동안 90% B에서 유지. 이것을 총 30분에 걸쳐 0.5 ml/분으로 수행하고, 다음 주입 전에 30% B의 5분 재평형화 기간을 수행하였다. 샘플을 5 μL의 주입 부피로 0.5 mg/mL의 농도로 주입 하였다. 0.5, 0.25, 0.1 및 0.05 mg/mL의 농도에서 표준 보정 곡선을 통해 선형성을 확립하였다 (r2 = 0.9997). 질량 분광계 파라미터는 표 1에 나타낸 바와 같았다.
스캔 유형 Q1 MS
극성 양성
이온 공급원 ESI-터보 스프레이
시작/정지 (Da) 100.0/600.0,
시간 = 0.50초
CUR 40.0
GS1 40.0
GS2 40.0
IS 2500.00
TEM 500.0
Ihe ON
DP 20
EP 10
대안적으로, 내부 자외선 (UV) 검출기가 장착된 Agilent 1100 액체 크로마토그래프 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA)를 사용하여 HPLC를 수행하였다. 검출은 261 nm에서 이루어졌다. Agilent ChemStation 데이터 시스템 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA)으로 결과를 획득하고 처리하였다. 컬럼 온도를 주위 온도로 유지한 채로 XBridge C18, 150×4.6 mm, 3.5 μm의 칼럼 (Waters Corporation, Milford, MA)을 사용하여 HPLC 분리를 수행하였다. 이동상은 (A) 물 중의 0.1% 포름산 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 및 (B) 아세토니트릴 중의 0.1% 포름산 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)으로 이루어졌다. HPLC 용출 프로그램은 다음 구배 경사로 이루어졌다 - 5분 동안 20% B, 20분에 걸친 90% B로의 선형 경사, 5분 동안 90% B에서 유지. 이것을 총 30분에 걸쳐 0.75 ml/분으로 수행하고, 다음 주입 전에 20% B의 5분 재평형화 기간을 수행하였다. 샘플을 5 μL의 주입 부피로 0.5 mg/mL의 농도로 주입 하였다.
실시예 3
본 실시예는 본 발명의 한 실시형태에서 화합물 1의 합성을 입증한다.
2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산 (10 mmol)의 용액을 THF/EtOH (1:1) (250 mL) 중에 용해시키고, 생성된 용액을 빙욕에서 0℃로 냉각시켰다. 용액이 냉각되면, 2-아미노-2-(하이드록시메틸)-1,3-프로판디올 (TRIZMA™, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) (10 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 90분 동안 교반하였다. 완료시, 상기 혼합물을 실온 이하로 유지하도록 주의하면서 용매를 제거하였다. 생성된 잔류물을 펜탄으로 분쇄하고, 0℃에서 2시간 동안 고진공하에 둔 후 아르곤으로 다시 채웠다. 생성된 백색 고체 (정량적 수율)를 즉시 사용가능할 때 까지 냉동기 (-20℃)에 보관하였다.
실시예 4
본 실시예는 본 발명의 한 실시형태에서 화합물 1을 포함하는 제형의 약동학적 (pharmacokinetic: PK) 연구를 입증한다.
화합물 1 (750 mg)을 10 mL의 멸균수 (75 mg/mL) 중에 용해시켰다. 생성된 용액을 0.2 μm의 주사기 필터를 통해 여과하여 투명한 무색 용액을 수득하였다. 이어서, 이러한 용액을 표준에 대한 HPLC에 의한 실제 농도에 대해 분석하였다. 농도가 결정되면, 상기 용액을 적절하게 희석하여 50 mg/mL 용액을 달성하였다. 상기 제형은 즉시 사용하거나 -20℃에서 보관하여 나중에 사용하기에 적합하였다.
비교 목적으로, 카복시메틸셀룰로오스 (carboxymethylcellulose: CMC) 중의 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산의 현탁액을 다음과 같이 제조하였다. 여과수를 사용하여 CMC의 0.5% 용액을 제조하였다. 0.5% CMC 용액 10 mL 중에 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산 500 mg을 용해시켜 50 mg/mL 현탁액을 제조하였다. pH를 6.0~6.5로 조정하였다. 상기 용액은 즉시 사용하거나 최대 24시간 동안 실온에서 보관하여 나중에 사용하기에 적합하다.
Charles River Laboratories (Wilmington, MA)로부터 8 내지 9주령 및 20 내지 30g의 70마리의 암컷 FVB-N 마우스를 조달하였다. 카복시메틸셀룰로오스 (CMC)와 혼합된 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산 또는 화합물 1의 3회 용량 수준 중 하나로 48마리에게 경구 위관 영양 (oral gavage: PO)에 의해 투여하고, 화합물 1의 1회 용량 수준으로 8마리에게 정맥내 (IV) 투여하고, 1마리에게 위약으로 IV 투여하였다 (표 2 참조). 2마리의 마우스 (그룹 A 중 1마리 및 그룹 D 중 1마리)에게 잘못 투여하였으므로, 여분으로부터 추가의 2마리의 마우스를 사용하여 마우스를 교체하였다.
PTKS 연구 용량 그룹 동물 #/용량 동물 총수
IV - 50 mg/kg A 8 8
IV 위약 - 0 mg/kg B 1 1
화합물 1
PO 500 mg/kg C 8 8
PO 250 mg/kg D 8 8
PO 125 mg/kg E 8 8
CMC 제형
PO 500 mg/kg F 8 8
PO 250 mg/kg G 8 8
PO 125 mg/kg H 8 8
총 57
a 시점: 5, 10, 15, 30, 60, 90, 180 및 1440분.
투약 계획을 다음과 같이 수립하였지만, 실제 투여량은 연구 전에 마우스의 측정된 중량을 기준으로 하였다. 투여 전에 용액을 직접 제조하였으며, 임의의 미사용된 물질을 냉동 보관하였다.
● 125 mg/kg 용량의 경우 - 0.06 mL은 25 g의 마우스에게 250 mg/kg을 제공할 것이다.
- 125 mg/kg * 0.025 kg 마우스 = 3.125 mg; 3.125 mg ÷ 50 mg/mL = 0.06 mL
● 250 mg/kg 용량의 경우 - 0.125 mL은 25 g의 마우스에게 250 mg/kg을 제공할 것이다.
- 250 mg/kg * 0.025 kg 마우스 = 6.25 mg; 6.25 mg ÷ 50 mg/mL = 0.125 mL
● 500 mg/kg 용량의 경우 - 0.25 mL은 25 g의 마우스에게 250 mg/kg을 제공할 것이다.
- 500 mg/kg * 0.025 kg 마우스 = 12.5 mg; 12.5 mg ÷ 50 mg/mL = 0.250 mL
마우스를 수령 후 72시간 이내 및 연구일-1에 다시 칭량하였다. 마우스를 이환 및 빈사 상태에 대해 0일째 이전에 매일 1회 및 투여 후 24시간 동안 0일째에 시작하여 매일 적어도 2회 관찰하였다. 그룹 A~H 중 어떠한 마우스도 투여 후 독성의 징후를 나타내지 않았으며, 투여된 임의의 용량에서 마우스에 대한 화합물 1 또는 CMC 제형의 경구 또는 IV 투여로 인한 사망은 없었다.
용량 투여 후 8개의 시점에서 개별 마우스로부터 혈액 샘플을 수득하였다: 상기 표 2에서 나타낸 바와 같이 1마리의 마우스/시점/용량 그룹을 사용하여 투여 후 5, 10, 15, 30, 60, 90, 180 및 1440분. 동물을 방혈시키고, 분석용 혈장을 수득하기 위해 원심 분리 전에 수집한 혈액 샘플을 적어도 3분이지만 30분 이하 동안 냉각시켰다. 각각의 동물을 CO2를 통해 마취시키고, 방혈 후 기흉으로 사망을 확인하였다. 역상 분석 방법을 사용하여, 화합물 1의 농도를 결정하기 위해 모든 혈장 샘플을 UHPLC-UV-MS에 의해 분석하였다. 말단 반감기, AUC, 생체이용률 (F), C최대 및 T최대를 포함한 PK 파라미터를 계산하기 위한 PK 데이터의 비구획 분석 (noncompartmental analysis: NCA)을 사용하였다. 결과는 표 3에 나타나 있다.
경로 파라미터 a , 단위 화합물 1 CMC 제형
IV 용량, mg/kg 50
C최대, μg/ml 3.6
T최대, 분 --
t1/2, 분 16
AUC0-∞, μg/ml·분 59
AUC_%Extrap,% 1.4
CL, mL/분/kg 849
Vss, L/kg 20
MRT, 분 16
PO 용량, mg/kg 500 250 125 500 250 125
C최대, μg/ml 740 90 68 85 172 29
T최대, 분 15 15 5 15 10 10
t1/2, 분 62 84 65 113 63 260
AUC0-∞, μg/ml·분 14 7.0 8.0 11 9.3 1.9
AUC_%Extrap,% 11 23 14 34 16 ND
F,% 2.4 2.4 5.4 1.9 3.1 1.3
CL, mL/분/kg 850 848 847 850 847 ND*
MRT, 분 78 127 99 169 99 ND
a 약어: C최대, 최대 혈장 농도; t1/2, 말단 제거 반감기; T최대, C최대에 도달하는 시간; AUC0-∞, 0시간에서부터 무한 시간까지의 혈장 농도-시간 곡선하의 면적; CL, 제거율; Vss, 정상 상태의 분포 부피; F, 경구 생체이용률; MRT, 평균 체류 시간; ND, 측정되지 않음.
* NCA는 AUC, CL 및 MRT를 예측하지 못하였다. AUC0-3h는 본 출원에서 보고된다.
혈장 안정성 분석의 경우, 시료 제조는 0.9 mL의 아세토니트릴을 함유하는 1.5 mL의 스냅 캡 마이크로 원심 분리 튜브 내에 부피측정으로 피펫팅한 0.1 mL의 혈장을 취하는 것으로 이루어졌다. 상기 튜브를 약 1분 동안 와동시킨 다음, 약 5분 동안 약 10,000 rpm에서 원심 분리하였다. 상청액을 분석용 HPLC 바이알 내로 옮겼다.
화합물 1 표준을 함유하는 스냅 캡 마이크로 원심 분리 튜브 내에서 0.1 mL의 블랭크 혈장을 스파이킹하여 보정 곡선을 제조하였으며, 5 ng/mL 내지 1,000 ng/mL의 표준의 범위를 생성하였다. 피크 면적 반응은 5 ng/mL의 검출 한계 (limit of detection: LOD) (3:1의 신호 대 잡음) 및 20 ng/mL의 정량 한계 (limit of quantitation: LOQ)에 의해 상기 범위에 걸쳐 선형인 것으로 밝혀졌다.
UV 및 MS (Waters XEVO™ G2-XS Quadrupole Time of Flight (Q-TOF)) 검출기 (Waters Corporation, Milford, MA)가 장착된 Waters ACQUITY™ 초고성능 액체 크로마토 그래피 (ultra performance liquid chromatography: UPLC)를 사용하여 크로마토그래피 분리를 수행하였다. 오토샘플러를 10℃로 설정한 채로 ACQUITY™ UPLC BEH C18, 1.7 μm의 컬럼을 주위 온도에서 사용하였다. 이동상은 물 중의 0.1% 포름산 (이동상 A) 및 아세토니트릴 중의 0.1% 포름산 (이동상 B)으로 이루어졌으며, 0.5 mL/분에서 7분 동안 용출되었다. 구배를 사용하여 1분 동안 90% A:10% B로 시작한 후, 4분에 걸쳐 10% A:90% B로 선형적으로 증가시키고, 1분 동안 10:90 (A:B)로 1분 유지하고, 마지막으로 90:10 (A:B)으로 1분 재평형화 기간을 유지하였다. 주입 부피는 5 μL이었으며, UV 검출은 261 nm에서 기록되었다. 질량 스펙트럼 데이터를 100~800 amu 범위에 걸쳐 음성 전자분무 이온화 모드에서 수집하였으며, m/z 364에서 데이터 획득 후에 생성물 이온 추출을 수행하였다. 공급원은 45의 플 콘 오프셋 및 80의 공급원 오프셋과 함께 2 kV (모세관)로 설정하였다. 공급원 온도는 150℃로, 탈용매화 가스 및 온도는 각각 800 L/h 및 500℃로 설정하였다. 코어 가스 흐름은 20 L/h로 설정하였다. MASSLYNX™ 소프트웨어, 버전 4.1 (Waters Corporation, Milford, MA)하에, 기기를 제어하고 데이터를 수집하였다.
화합물 1에 대한 혈장 안정성을 평가하기 위해, 물질을 마우스 혈장에 용해시키고 시간 경과에 따라 분석하였다. 초기에, 상기 샘플을 매일 평가하였지만, 어떠한 2-하이드록시-4-[[2-[[(4-메틸페닐)설포닐]옥시]아세틸]아미노]벤조산도 1일 후에 관찰되지 않았기 때문에, 안정성이 짧은 것은 분명하였다. 이어서, 시간별 분석을 수행하였으며, 주위 조건에서 현저한 감소를 나타냈다 (표 4 참조). 마지막으로, -20℃에서의 혈장 안정성 연구를 수행하였는데, 안정성의 증가는 크지 않았지만, 증가된 안정성을 나타냈다 (표 5 참조). 주위 온도에 대한 시간 측정은, 일 단위 (표 5)로 측정된 -20℃에 대한 시간과 비교하여, 시간 단위 (표 4)로 작성되어 있다.
시간 (시간) 회복 % *
0 88.6
1 61.2
2 52.6
3 28.7
5 21.3
6 15.8
* 새로 제조된 표준과의 비교에 기초하여 회복됨
시간 (일) 회복 % *
0 94.5
1 76.6
2 65.7
3 58.0
6 46.6
* 새로 제조된 표준과의 비교에 기초하여 회복됨
아세토니트릴 추출물 (시료 제조 후) 중에서의 안정성은 6일에 걸쳐 거의/전혀 분해되지 않고 양호하였다 (표 6 참조). 따라서, 데이터 변동을 최소화하기 위해 샘플을 보다 안정한 형태 (아세토니트릴)로 가능한 빨리 추출하는 것이 바람직하였다. 특히, 분석용 혈장 샘플을 제공하기 위해 혈액 샘플에 대해 원심 분리가 수행되면, 아세토니트릴로의 추출을 가능한 신속히 (예를 들어, < 1시간) 수행하였다.
시간 (일) 회복 % *
0 89
2 89
3 90
6 90
* 새로 제조된 표준과의 비교에 기초하여 회복됨
실시예 5
본 실시예는 화합물 1이 정상 유선 조직에서 Ki67 발현을 억제한다는 것을 입증한다.
유방 유관 상피 세포를 화합물 1의 500 mg/kg, 250 mg/kg 또는 125 mg/mg 체중 (BW)/일에 상응하는 용량과 접촉시켰다. 어떤 화합물과도 접촉하지 않은 세포를 대조군으로서 사용하였다. 정상 유관 상피의 면역 조직 화학 분석에 의해 Ki67 발현을 평가하였다. 자동화 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 염색된 부분을 스캔하고 정량화하였다.
결과들은 도 4에 도시되어 있다. 처리 2주 후, 화합물 1의 500 mg/kg 체중 (BW)/일의 용량은 Ki67을 83%까지 억제하는 반면, 화합물 1의 250 mg/kg BW/일의 용량은 Ki67을 85%까지 억제하는 것으로 관찰되었다. Ki67은 유방암 및 기타 암의 발달에 대한 바이오 마커인 것으로 간주되기 때문에, 특히 건강한 조직에서 Ki67을 억제하는 능력은 유방암과 같은 암의 예방에 대한 실행가능한 경로를 나타낸다.
실시예 6
본 실시예는 화합물 1이 정상 유선 조직에서 STAT3 발현을 억제한다는 것을 입증한다.
유방 유관 상피 세포를 화합물 1의 500 mg/kg, 250 mg/kg 또는 125 mg/mg 체중 (BW)/일에 상응하는 용량과 접촉시켰다. 어떤 화합물과도 접촉하지 않은 세포를 대조군으로서 사용하였다. 정상 유관 상피의 면역 조직 화학 분석에 의해 STAT3 발현을 평가하였다. 자동화 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 염색된 부분을 스캔하고 정량화하였다.
결과들은 도 5에 도시되어 있다. 처리 2주 후, 화합물 1의 500 mg/kg BW/일의 용량은 STAT3을 75%까지 억제하고, 화합물 1의 250 mg/kg BW/일의 용량은 STAT3을 44%까지 억제하고, 화합물 1의 125 mg/kg BW/일의 용량은 STAT3을 8.8%까지 억제하는 것으로 관찰되었다. 증가된 STAT3 활성은 유방암 및 기타 암의 발달에 대한 바이오 마커인 것으로 간주되기 때문에, 특히 건강한 조직에서 STAT3을 억제하는 능력은 유방암과 같은 암의 예방에 대한 실행가능한 경로를 나타낸다.
실시예 7
본 실시예는 화합물 1이 생체내 연구에서 유방암의 발병을 지연시킬 수 있다는 것을 입증한다.
50일령의 암컷 MMTV/Neu 마우스에게 500, 250 및 100 mg/kg BW/일의 용량으로 5회/주의 위관 영양에 의해 화합물 1을 제공하였다. 음성 대조군에게 비히클 (정제수)만을 투여하였다. 종양 형성을 가속화하기 위해, 마우스에게 57일령에 시작하여 4주 동안 1회/주의 위관 영양에 의해 7,12-디메틸벤즈[a]안트라센 (DMBA)을 제공하였다. DMBA 노출 4개월 후에 연구를 종료하였다. 처리 기간 동안, 마우스의 체중 및 촉지성 유선 종양의 출현을 각각 매주 및 2주마다 모니터링하였다. 체중 감소 또는 독성은 실험 과정 전체에 걸쳐 어떠한 그룹에서도 관찰되지 않았다 (도 6).
화합물 1에 의한 처리는, 비히클-단독 대조군과 비교하여, 유선 종양의 발병률, 다중도 및 중량에서 용량-의존적 감소를 초래하였다 (도 7). 시험한 모든 용량에서, 화합물 1은 암컷 마우스에서 DMBA-유도된 유방암의 발병을 지연시킬 수 있었다. 500 mg/kg BW/일의 용량은 유방암을 예방하는데 있어서 가장 큰 효과를 나타냈다.
본 출원에서 인용된 간행물, 특허 출원 및 특허를 비롯한 모든 참고 문헌은, 각각의 참고 문헌이 개별적으로 그리고 구체적으로 참조로 포함되도록 명시되고 본 출원에서 이의 전문이 제시된 것처럼, 동일한 정도로 본 출원에 참조로 포함된다.
본 발명을 기술하는 맥락에서 (특히, 다음 청구범위의 맥락에서)의 단수 ("a" 및 "an") 및 "상기" 및 "적어도 하나"와 같은 용어 및 유사한 지시 대상의 사용은, 달리 본 출원에서 명시되지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는다면, 단수와 복수를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. "적어도 하나"라는 용어와 그 뒤에 하나 이상의 항목 목록 (예를 들어, "A 및 B 중 적어도 하나")의 사용은, 달리 본 출원에서 명시되지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는다면, 나열된 항목들로부터 선택된 하나의 항목 (A 또는 B) 또는 열거된 항목들 중 둘 이상의 임의의 조합 (A 및 B)을 의미하는 것으로 해석되어야 한다. "포함하는 (comprising)", "갖는", "포함하는 (including)" 및 "함유하는"이라는 용어는, 달리 언급되지 않는다면, 개방형 용어 (즉, "포함하지만 이에 제한되지 않는"을 의미함)로 해석되어야 한다. 본 출원에서 값의 범위에 대한 언급은, 달리 본 출원에서 명시되지 않는다면, 해당 범위에 속하는 각각의 별개의 값을 개별적으로 지칭하는 약칭 방법의 역할을 하는 것으로 단순히 의도되며, 각각의 별개의 값은 마치 본 출원에서 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 포함된다. 본 출원에서 기술된 모든 방법들은, 달리 본 출원에서 명시되지 않거나, 달리 문맥상 명백하게 모순되지 않는다면, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 출원에서 제공된 임의의 예 및 모든 예들, 또는 예시적인 표현 (예를 들어, "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 보다 잘 분명히 보여주기 위한 것이며, 달리 청구되지 않는다면, 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니다. 본 명세서에서의 어떠한 표현도 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 미청구된 구성요소를 가리키는 것으로 이해되어서는 안된다.
본 발명을 수행하기 위해 본 발명자들에게 공지된 최선의 방법을 비롯하여, 본 발명의 바람직한 실시형태들이 본 출원에 기재되어 있다. 이러한 바람직한 실시형태들에 대한 변형은 상술한 설명을 정독하면 당해 분야의 통상의 기술자들에게 명백해질 수 있다. 본 발명자들은 통상의 기술자들이 이러한 변형을 적절하게 사용하기를 예상하며, 본 발명자들은 본 발명이 본 출원에서 구체적으로 기재된 것과는 달리 실시되기를 의도한다. 따라서, 본 발명은 적용가능한 법에 의해 허용되는 바와 같이 본 출원에 첨부된 청구범위에서 인용된 대상물에 대한 모든 변형과 균등물을 포함한다. 더욱이, 상기에서 기재된 구성요소들의 모든 가능한 변형들 중 상기에서 기재된 구성요소들의 임의의 조합은, 달리 본 출원에서 명시되지 않거나, 달리 문맥상 명백하게 모순되지 않는다면, 본 발명에 포함된다.

Claims (15)

  1. 하기 화학식의 화합물:
    Figure pct00004
  2. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 결정질인, 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화합물이 적어도 85% 순수한, 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용되는 담체가 물을 포함하는, 약제학적 조성물.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 조성물이 0℃ 미만의 온도로 존재하는, 약제학적 조성물.
  7. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 약 7의 pH를 갖는, 약제학적 조성물.
  8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 투명 용액인, 약제학적 조성물.
  9. 제4항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 경구 제형인, 약제학적 조성물.
  10. 제4항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 예방하는데 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
  11. 제4항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 치료하는데 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 암이 동일한 유형의 정상 조직에 비해 증가된 STAT3 활성 및/또는 증가된 Ki67 발현을 갖는, 약제학적 조성물.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 백혈병, 다발성 골수종, 췌장암, 두경부암, 간암, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 난소암 및 전립선 암으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 상기 암이 췌장암, 간암 또는 유방암인, 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 암이 유방암인, 약제학적 조성물.
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