KR20200047524A

KR20200047524A - B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20200047524A
Application number: KR1020207003267A
Authority: KR
Inventors: 이 장
Original assignee: 이쉥 바이오파마(싱가포르)피티이 리미티드
Priority date: 2017-08-10
Filing date: 2018-08-01
Publication date: 2020-05-07
Also published as: US11690909B2; SG11202000347UA; US20220211840A1; RU2020108205A; CN110944662A; CU24699B1; US11135286B2; WO2019032046A1; AU2018313636B2; CU20200009A7; PH12020500176A1; MY202256A; US20200222529A1; BR112020002627A2; CA3070935A1; RU2020108205A3; MX2020001226A; EP3664840A1; ZA202001413B; AU2018313636A1

Abstract

B형 간염 바이러스 감염 및 B형 간염 바이러스 감염 매개된 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물 및 그 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 조성물은 폴리리보이노신산-폴리리보시티딜산 (PIC), 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, 및 B형 간염 바이러스 표면 항원을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 PIC, 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, B형 간염 바이러스 표면 항원 및 B형 간염 바이러스 핵심 항원을 포함한다. 본 개시는 또한 B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한, 특히 만성 HBV 감염을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.

Description

B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물 및 이의 용도

관련 출원

본 출원은 2017년 8월 10일에 출원된 싱가포르 출원 번호 10201706540X의 우선권을 주장한다. 상기 출원의 전문은 본원에 참조로 포함된다.

기술분야

본 출원은 B형 간염 바이러스 감염 및 B형 간염 바이러스 감염 매개 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 출원은 폴리리보이노신산-폴리리보시티딜산 (PIC), 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, B형 간염 바이러스 표면 항원, 및/또는 B형 간염 바이러스 핵심 항원을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 출원은 또한 B형 간염 바이러스 감염 또는 B형 간염 바이러스 감염 매개 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

B형 간염 바이러스 (HBV) 감염은 중요한 전세계적인 건강 문제이다. 거의 20억명의 사람들이 B형 간염 보균자이며, 그들 중 약 4억명이 지속적인 감염으로 고통받고 있다 (유럽 간 학회, EASL Clinical Practice Guidelines: management of chronic hepatitis B virus infection. J. Hepatol. 2012. 57 (1):167-185). 간경변, 간부전, 또는 간암은 만성 감염 환자의 15% 내지 40%에서 발생한다 (Lok AS, McMahon BJ, Chronic hepatitis B: update 2009. Hepatology. 2009. 50 (3):661-662). 매년 만성 감염, 예컨대 간경변 및 간암의 결과로 60만명이 사망하는 것으로 추정된다 (Lok AS et al., Chronic hepatitis B. Hepatology. 2007. 45:507-539; World Health Organization, hepatitis B (Fact sheet N°204). 2013; National Institutes of H. National Institutes of Health consensus development conference statement: Management of hepatitis B. Ann Intern Med. 2009. 150:104-110).

현재, 10 μg 또는 20 μg의 B형 간염 바이러스 표면 항원 (HBsAg)이 예방적인 B형 간염 백신에 사용된다. 그러나, 혈액투석 치료를 받은 환자 또는 이식전 환자에게 40 μg의 HBsAg가 투여될 수 있다 (Mahoney FJ., Update on Diagnosis, Management, and Prevention of hepatitis B Virus Infection, Clin. Microbiol. Rev. 1999, 12:351-366; Bock M et al., hepatitis B vaccination in haemodialysis patients: A randomized clinical trial. Nephrology 2009; 14:267-272; Somi MH et al., Improving hepatitis B vaccine efficacy in end-stage renal diseases patients and role of adjuvants. ISRN Gastroenterol. 2012; 2012:960413; Bauer T and Jilg W., hepatitis B surface antigen-specic T and B cell memory in individuals who had lost protective antibodies after hepatitis B vaccination, Vaccine 2006; 24:572-577). 임상 조건 하에서, 60 μg, 80 μg, 또는 90 μg HBsAg를 포함하는 백신을 투여하는 것이 안전하다.

HBV 입자의 내부 구성요소에 위치한 B형 간염 바이러스 핵심 항원 (HBcAg)은 HBV 감염 또는 HBV 감염 매개된 질환의 한 지표이다. 미국 특허 출원 번호 20170049817호는 변형된 HBcAg를 사용하여 HBV에 대한 조성물을 제조하는 것을 개시하였다. 미국 특허 출원 번호 20170049817호의 전문은 본원에 참조로 포함된다.

나아가, 일부 환자는 HBV에 걸리기 쉽고, 표준 면역화 프로토콜에 내성을 보인다. 혈액투석 치료를 받을 때, 말기 신장 질환을 가진 환자는 정상인보다 더 높은 유병률 및 더 불리한 예후를 보인다. 그러나, HBV 백신으로의 예방접종 후, 요독증 환자 또는 이식전 환자는 면역력이 있는 개체에서의 혈청전환율보다 상당히 더 낮은 혈청전환율을 보인다. 보호 항체가 생성되긴 하지만, 피크 항체 역가는 낮고 면역 반응 기간 또한 짧다 (Bauer T. and Jilg W., hepatitis B surface antigen-specific T and B cell memory in individuals who had lost protective antibodies after hepatitis B vaccination, Vaccine 2006; 24:572-577; Bock M, Barros E and JV Veronese F, hepatitis B vaccination in haemodialysis patients: A randomized clinical trial, Nephrology 2009; 14, 267-272).

40 μg의 HBsAg (일반적으로 사용되는 투여량의 2배)를 포함한 백신이 투석 환자에게 투여될 때, 백신의 효과는 만족스럽지 못하고, 예방접종된 모든 대상체의 약 50% 내지 60% 만이 보호 항체를 발생시켰다 (Mary S et al., High-Dose hepatitis B Vaccine in Patients Waiting for Lung Transplantation, Presentation at the Fifth Annual Conference on Vaccine Research, Baltimore, Maryland, May 7, 2002).

나아가, 5%의 성인만이 HBV로 급성 감염된 후에 만성 감염으로 발달되었다. 만약 대상체가 출생전후기에 감염된다면, 대상체는 만성 감염에 걸릴 가능성이 더 많다. 첫 번째 급성 감염 후에, 5세 미만의 아동의 25% 내지 30%가 만성 감염으로 발달되었고, HBeAg 양성인 어머니에게서 태어난 유아의 90%가 만성 감염에 걸릴 위험이 있다 (Mahoney FJ, Update on Diagnosis, Management, and Prevention of hepatitis B Virus Infection, Clin. Microbiol. Rev. 1999; 12:351-366). 또한, 급성 감염 (예를 들어, HIV 감염) 후의 면역억제된 환자는 만성 HBV 감염이 발생하기 쉽다 (Mehta N et al., Impaired generation of hepatitis B virus-specific memory B cells in HIV infected individuals following vaccination. Vaccine. 2010. 7; 28(21): 3672-8).

미국 식품의약국 (US FDA)은 다음의 약물을 만성 HBV 감염 치료제의 대체제로서 승인하였다: 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 변형 IFN-α, 및 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드 유사체 (예를 들어, 라미부딘(Lamivudine)). 만성 HBV 감염 치료제 및 이들 약물은 질환 발달을 정지시키기 위해 사용되며, 이것은 항바이러스 약물 또는 PEG 변형 IFN-α의 장기 투여가 피할 수 없음을 의미한다.

그러나, 현재, 항바이러스 치료는 자주 실패를 나타낸다. 환자의 약 30%가 치료 목표를 달성하고, 환자의 10%만이 치료되는 것으로 여겨진다. 장기 항바이러스 치료는 바이러스에 대한 내성을 생성시킬 가능성이 더 많고, IFN-α는 상당한 부작용을 유발할 수 있다 (Nebbia G et al., hepatitis B 감염: current concepts and future challenges. QJM. 2012. 105(2):109-13). 그러므로, 만성 감염에 대해 적당한 치료 효과를 가진 치료제가 요구된다.

다중특이적 항바이러스 CD4⁺ 및 CD8⁺ T 세포 반응이 급성 감염으로부터 회복된 환자에서 관찰된다. 이들 반응은 만성 환자에서의 반응보다 더 강력하고, 만성 환자에서 바이러스-특이적 T 세포 반응은 약하며 즉각적이다 (Webster, G. J et al., Longitudinal analysis of CD8⁺ T cells specic for structural and nonstructural hepatitis B virus proteins in patients with chronic hepatitis B: implications for immunotherapy. J Virol. 2004; 78:5707-5719; Urbani, S et al., Acute phase HBV-specic T cell respoces associated with HBV persistence after HBV/HCV co-infectio. Hepatology. 2005; 41:826-831).

그러므로, CD4⁺ 및 CD8⁺ T 세포 면역 반응을 효과적으로 활성화시킴으로써 치료용 백신을 개발하는 것은 잠재적으로 유망한 전략이다 (Sobao Y et al., J Hepatol 2002; 36:105-15; Sette AD et al., The Journal of Immunology 2001; 166: 1389-1397; Chang, J. J et al., J Virol 2005; 79:3038-3051; Guidotti LG et al., Science 1999; 284:825-9; Webster, G. J et al., Hepatology 2000; 32:1117-1124; Wieland, S. F. & Chisari, F. V. J Virol 2005; 79:9369-9380; Webster, G. J et al., J Virol 2004; 78:5707-719; Urbani, S et al., Hepatology 2005; 41:826-31; Maini, M. K et al., J Exp Med 2000; 191:1269-1280).

고역가 CD4⁺ 및 CD8⁺ T 세포 면역 반응은 급성 HBV 감염에서 바이러스를 제거할 수 있는 것으로 보고된다 (Mary S et al., High-Dose hepatitis B Vaccine in Patients Waiting for Lung Transplantation, Presentation at the Fifth Annual Conference on Vaccine Research, Baltimore, Maryland, May 7, 2002; Rehermann B et al., Nature Reviews Immunology 2005; 5:215-229; Bertoletti A et al., Journal of Hepatology 2003; 39:115-124; Bertoletti A et al., Journal of General Virology 2006; 87:1439-1449; Guidotti LG et al., Ann Rev Immunol 2001; 19:65-91; Ferrari C et al., J Immunol 1990; 145:3442-9; Penna A et al., J Clin Invest 1996; 98:1185-94; Penna A et al., Hepatology 1997; 25:1022-7; Rehermann B et al., J Exp Med 1995; 181:1047-58; Jung M et al., Virology 1999; 261:165-72).

전임상 연구로부터의 관찰에 따르면, 일부 방법이 HBV DNA 로드를 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 한 방법은 예방접종 전에 라미부딘에 의한 단기 세척을 수행한다. 다른 실례로, 일부 방법은 HBsAg 백신에 대한 T 세포 매개된 면역 반응을 유도하는 것을 포함한다 (Bertoletti A et al., Curr Opin Immunol 2000; 12:403-8; Chisari FV. American Journal of Pathology 2000; 156:1117-1132; Kakimi K et al., J Exp Med 2000; 192:921-30; Kakimi K et al., J Immunol 2001; 167:6701-5; Thimme R et al., J Virol 2003; 77:68-76; Pol S et al., Lancet. 1994; 344:342; Mancini M et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1996; 93:12496-12501).

알럼(alum) 보조제는 일반적으로 항체 매개된 면역력을 활성화하기 위하여 사용되고, HBV 감염에 대한 효과적인 예방책을 세우는 것을 돕는다. 그러나 알럼 보조제는 효과적인 T 세포 매개된 면역 반응을 발생시킬 수는 없다.

폴리리보이노신산-폴리리보시티딜산 (PIC, 폴리 I:C로도 언급됨)은 강력한 면역조절제인 것으로 증명되지만, 인간 테스트에서는, 아마도 인간 혈청 뉴클레아제에 의한 빠른 분해로 인해 그렇지 않다.

PIKA로도 언급되는 안정화된 PIC (PIC, 하나 이상의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 하나 이상의 양이온, 및 PIKA를 제조하기 위한 다른 물질을 포함한 조성물)는 용액 (PH: 6.0 내지 8.0)에 의해 용해될 수 있다. PIKA는 중화 항체의 생성을 증강시킬 수 있고, T 세포 매개된 면역을 유도할 수 있다 (Li L et al., Zhong Guo Mian Yi Xue Za Zhi 2006; 22:983-986). 본 개시에 따르면, PIC, 항생물질 및 양이온은 WO2006/131023에서 개시된 것들일 수 있다. WO2006/131023의 개시는 본원에 참조로 포함된다.

미국 특허 출원 공개 번호 20090136538 A1은 상업적으로 이용가능한 B형 간염 백신이 알루미늄 하이드록사이드 보조제에 흡수된 정제된 HBsAg로 이루어진 액체 현탁액인 것을 개시한다. B형 간염 백신은 열안정성 백신이지만, 20℃ 내지 26℃에서 9개월 후에, 36℃ 내지 40℃에서 1개월 후에, 및 45℃에서 3일 후에 백신 효능의 50% 손실이 관찰되는 것으로 보고되었다. 그러므로, 특히 일부 개발도상국 또는 지역에서 더 넓은 면역화 커버리지를 허용하고 면역화의 안전성을 부스팅하기 위하여 안정적인 B형 간염 백신이 필요하다. 미국 특허 출원 공개 번호 20090136538A1의 전체 개시는 본원에 참조로 포함된다.

B형 간염 바이러스 감염 또는 HBV 감염 매개된 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물, 및 그것의 사용 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 조성물은 PIC, 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, 및 HBsAg를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 PIC, 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, HBsAg 및 HBcAg를 포함한다.

일부 구체예에서, 조성물 중의 PIC의 농도는 250 μg/단위 용량 내지 6000 μg/단위 용량의 범위이다. 일부 구체예에서, HBsAg 대 PIC의 비율은 1:50 내지 1:5의 범위이다. 일부 구체예에서, HBcAg 대 PIC의 비율은 1:50 내지 1:5의 범위이다.

일부 구체예에서, 단위 용량은 0.1 ml 내지 250.0 ml 범위의 부피로 표시된다.

본 개시의 한 측면에 따르면, 조성물은 보호 항체 생성, 및/또는 CD4⁺ 및 CD8⁺ T 세포 매개된 면역 반응을 유도할 수 있다. 조성물은 HBV 감염을 예방하거나, HBV 감염을 완하시키거나, HBV 감염 발생을 억제하거나, 및/또는 HBV를 제거할 수 있다.

본 개시의 한 측면에 따르면, 조성물은 HBV에 영향을 받지 않은 대상체, 만성 HBV 대상체, 및 급성 HBV 대상체에게 투여될 수 있고, HBV에 대한 면역 반응을 유도 또는 증강시킬 수 있다.

본 개시의 한 측면에 따르면, 조성물은 대상체에게 일정 빈도로 투여된다. 일부 구체예에서, 빈도는 2개월마다 1회, 2개월마다 2회, 2개월마다 3회, 2개월마다 4회, 2개월마다 5회, 1개월마다 1회, 1개월마다 2회, 3주마다 1회, 3주마다 2회, 2주마다 2회, 2주마다 1회 및 매주 1회를 포함할 수 있다.

본 개시의 다른 측면에 따르면, 본 개시는 키트를 제공한다. 키트는 적어도 하나의 용기를 포함한다. 일부 구체예에서, 용기는 조성물, 또는 조성물의 적어도 하나의 구성요소를 포함한다.

본 개시는 예시적인 구체예의 관점에서 한층 더 기술된다. 이들 예시적인 구체예의 일부는 도면을 참조로 상세하게 기술된다. 이들 구체예는 비제한적인 예시적인 구체예이고, 도면에서 유사한 참조 숫자는 도면의 여러 도면에 걸쳐 유사한 구조를 나타낸다.
도 1은 본 개시의 일부 구체예에 따른 투여 후의 마우스의 항-HBsAg IgG의 생성을 도시하고;
도 2는 본 개시의 일부 구체예에 따른 투여 후의 마우스의 항-HBsAg IgG1의 생성을 도시하며;
도 3은 본 개시의 일부 구체예에 따른 투여 후의 마우스의 항-HBsAg IgG2a의 생성을 도시하고;
도 4는 본 개시의 일부 구체예에 따른 투여 후의 마우스의 비장에서의 IFN-γ 반점 형성 세포의 수를 나타내는 도표이며;
도 5는 본 개시의 일부 구체예에 따른 투여 후의 건강한 인간 대상체의 PBMC에서의 IFN-γ 반점 형성 세포의 수를 나타내는 도표이고;
도 6은 본 개시의 일부 구체예에 따른 전체-투여량 대조군에서 한 대상체의 유동 세포분석 스펙트럼을 도시하며;
도 7은 본 개시의 일부 구체예에 따른 한 단일 펩타이드의 자극 하에서 예방접종된 건강한 인간 대상체의 PBMC 사이토카인 생성을 도시하고;
도 8은 본 개시의 일부 구체예에 따른 HBV-도입유전자 마우스에 대한 조성물의 영향을 도시한다.

다음의 상세한 설명에서, 많은 특정한 상세한 내용은 관련된 개시의 철저한 이해를 제공하기 위하여 실시예에 의해 제시된다. 그러나, 본 개시는 그러한 상세함 없이도 실시될 수 있다는 것이 기술분야의 숙련된 사람들에게 나타나야 한다. 개시된 구체예들에 대한 다양한 변형 또한 기술분야의 숙련된 사람들에게 나타나며, 본원에서 정의된 일반적인 원리는 본 개시의 사상 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 다른 구체예 및 적용에도 적용될 수 있다.

다르게 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 기술분야의 숙련된 사람들에 의해 통상적으로 이해되는 것과 같은 의미를 가지는 것으로 인지될 것이다.

단일한 형태를 나타내는 단어들은 맥락상 분명하게 다른 것을 표시하지 않는 한 복수의 대상물을 포함한다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "및/또는"은 관련된 열거된 항목의 임의의 및 모든 하나 이상의 조합을 포함하는 것으로 인지될 것이다. 추가로 용어 "포함한다"는, 본 개시에서 사용될 때, 요소, 단계, 작동, 및/또는 구성요소의 존재를 명시하지만, 하나 이상의 다른 요소, 단계, 작동, 및/또는 그것들의 구성요소의 존재 또는 첨가를 배제하지 않는다는 것이 인지될 것이다.

다르게 표시되지 않는 한, 용어 "치료하는", "치료"는 조성물을 투여하고 면역 반응을 유도 또는 증강시킴으로써 HBV 감염을 완화시키고, 질환 발생을 억제하며, 및/또는 HBV를 제거하는 것을 의미하는 것이 인지되어야 한다. 다르게 표시되지 않는 한, 용어 "예방하는", 또는 "예방"은 조성물을 투여하고 면역 반응을 유도 또는 증강시킴으로써 바이러스 침습에 대한 효과적인 방어를 발생시키는 것을 의미한다.

본 개시는 HBV 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물을 제공한다. 본 개시의 일부 구체예에서, 조성물은 PIC, 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, 및 HBsAg를 포함한다. 본 개시의 일부 구체예에서, 조성물은 추가로 HBcAg 및/또는 조성물을 실행하기 위한 임의의 다른 구성요소를 포함할 수 있다.

조성물의 구성요소는 제한되지 않는 것이 주지되어야 한다. 본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물의 구성요소는 특정 속성의 하나 이상, 보통 조합에 의해 가장 잘 정의된다. 특정 속성은 분자량, 분자 크기, 농도, PH, 가용성, 또는 본 개시에 따르는 임의의 다른 속성을 예로 들 수 있다. 예를 들어, 조성물은 조성물의 PH를 조정하기 위하여 여러 물질 (예컨대, 중탄산 나트륨)을 포함할 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물의 PIC 분자는 분자량에 있어서 이종성이다. 본원에서 사용되는 바 용어 "이종성"은 조성물의 PIC 분자가 상이한 분자량을 가지는 것을 의미한다. 일부 구체예에서, 66,000 달톤 (66,000 달톤은 6.4 스베드베리와 같음)과 같거나 더 큰 분자량을 가진 PIC 분자가 조성물에 사용될 수 있다. 예를 들어, 그것의 분자량이 66,000 달톤 내지 1,200,000 달톤 (즉, 6.4 내지 24.0 스베드베리)의 분자량의 PIC 분자가 조성물에 사용될 수 있다. 다른 실례로서, PIC 분자의 분자량은 150,000 달톤보다 더 클 수 있다. 일부 구체예에서, PIC 분자의 분자량은 100,000 달톤 내지 200,000 달톤, 300,000 달톤 내지 4,000,000 달톤, 500,000 달톤 내지 1,000,000 달톤, 1,000,000 달톤 내지 1,500,000 달톤, 1,500,000 달톤 내지 2,000,000 달톤, 2,000,000 달톤 내지 2,500,000 달톤, 2,500,000 달톤 내지 3,000,000 달톤, 3,000,000 달톤 내지 3,500,000 달톤, 3,500,000 달톤 내지 4,000,000 달톤, 4,000,000 달톤 내지 4,500,000 달톤, 또는 4,500,000 달톤 내지 5,000,000 달톤의 범위일 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물 중의 항생물질은 토브라마이신(tobramycin), 안트라사이클린(anthracycline), 부티로신 설페이트(butyrosin sulfate), 겐타마이신(gentamicin), 하이드로마이신(hygromycin), 아미카신(amikacin), 다이베카신(dibekacin), 네브로마이신(nebramycin), 베타-락탐(beta-lactam), 네오마이신(neomycin), 퓨로마이신(puromycin), 스트렙토마이신(streptomycin), 스트렙토조토신(streptozotocin), 카나마이신(kanamycin), 등, 또는 이것들의 임의의 조합일 수 있다. 일부 구체예에서, 항생물질은 카나마이신일 수 있다.

본 개시에 따르면, 항생물질의 농도는 10 단위/ml 내지 100,000 단위/ml의 범위일 수 있다. 한 특정 구체예에서, 항생물질의 농도는 100 단위/ml 내지 10,000 단위/ml의 범위일 수 있다. 다른 특정 구체예에서, 항생물질의 농도는 500 단위/ml 내지 5,000 단위/ml의 범위일 수 있다. 농도는 여러 속성 (예컨대, 장기간 부작용 또는 고투여량 항생물질 사용, 항-항생물질 미생물의 유도, 등)에 따라 설정될 수 있는 것이 주지되어야 한다. 일부 구체예에서, 항생물질 (예컨대, 카나마이신)의 농도는 전임상 안전성 및 독물학 평가에 따라 1000 IU/ml 이하이다.

기술분야의 숙련된 사람들에게, 항생물질 및 농도는 제한적이지 않다는 것이 주지되어야 한다. 일부 구체예에서, 항생물질 및 농도는 대상체의 특징 (예컨대, 연령, 항생물질 알레르기, 등) 및 임의의 다른 특징에 따라 설정될 수 있다. 예를 들어, 5세 미만의 아동의 경우, 항생물질의 농도는 감소될 수 있다. 예를 들어, 암피실린-유사 항생물질에 대해 알레르기가 있는 대상체의 경우, 조성물질의 항생물질은 비-암피실린 항생물질 (예컨대, 카나마이신, 등)일 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 양이온이 유기 또는 무기 염 또는 착체 (예컨대, 염화물, 플루오르화물, 수산화물, 인산염, 황산염, 등)를 초함한, 염 또는 착체에 의해 제공된다. 예를 들어, 양이온은 칼슘일 수 있고, 이것은 탄산 칼슘, 염화 칼슘, 플루오르화 칼슘, 수산화 칼슘, 인산 칼슘, 또는 황산 칼슘에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 양이온으로는, 한정하는 것은 아니지만, 칼슘, 카드뮴, 리튬, 마그네슘, 세륨, 세슘, 크로뮴, 코발트, 중수소, 갈륨, 요오드, 철, 및/또는 아연을 들 수 있다. 한 특정 구체예에서, 양이온은 칼슘일 수 있다. 본 개시의 일부 구체예에 따르면, 양이온의 농도는 0.01 μmol/단위 용량 내지 10 mmol/단위 용량의 범위일 수 있다. 한 특정 구체예에서, 양이온의 농도는 0.02 μmol/단위 용량 내지 5 mmol/단위 용량의 범위이다. 다른 특정 구체예에서, 양이온의 농도는 0.1 μmol/단위 용량 내지 1 mmol/단위 용량의 범위이다. 한 보다 특정한 구체예에서, 양이온의 농도는 0.1 μmol/단위 용량 내지 100 μmol/단위 용량의 범위이다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, PIC의 농도는 250 μg/단위 용량 내지 6000 μg/단위 용량의 범위일 수 있다. 일부 구체예에서, PIC의 농도는 250 μg/단위 용량, 500 μg/단위 용량, 1000 μg/단위 용량, 1500 μg/단위 용량, 2000 μg/단위 용량, 3000 μg/단위 용량, 4000 μg/단위 용량, 5000 μg/단위 용량, 또는 6000 μg/단위 용량일 수 있다. PIC의 농도는 제한되지 않는다. PIC의 농도는 250 μg/단위 용량 내지 6000 μg/단위 용량 중의 임의의 값일 수 있다. 예를 들어, PIC의 농도는 500 μg/단위 용량 내지 4000 μg/단위 용량, 1000 μg/단위 용량 내지 3000 μg/단위 용량, 1000 μg/단위 용량 내지 2500 μg/단위 용량의 범위일 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물이 성인에게 투여될 때, PIC의 농도는 500 μg/단위 용량, 1000 μg/단위 용량, 1500 μg/단위 용량, 2000 μg/단위 용량, 또는 500 μg/단위 용량 내지 2000 μg/단위 용량 중의 임의의 값일 수 있다. 조성물이 청소년 (예컨대, 아동)에게 투여되는 경우에, PIC의 농도는 250 μg/단위 용량, 500 μg/단위 용량, 1000 μg/단위 용량, 1250 μg/단위 용량, 또는 250 μg/단위 용량 내지 1250 μg/단위 용량 중의 임의의 값일 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 단위 용량은 조성물의 특정 용량의 중량, 부피, 또는 임의의 다른 특징을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 단위 용량은 조성물의 한 개별 포장 (예컨대, 정제)의 부피를 나타낼 수 있다. 단위 용량은 조성물의 구성요소의 중량, 부피, 또는 임의의 다른 특징을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 단위 용량은 조성물의 한 특정 용량 중의 PIC 또는 PIKA의 농도를 나타낼 수 있다. 일부 구체예에서, 단위 용량은 조성물의 한 특정 용량의 부피를 나타낼 수 있다. 단지 예를 들자면, 한 개별 포장의 부피에 의해 표시된 단위 용량의 값은 0.1 ml, 0.15 ml, 0.2 ml, 0.5 ml, 1.0 ml, 1.5 ml, 2.0 ml, 2.5 ml, 3.0 ml, 4.0 ml, 5.0 ml, 10.0 ml, 20.0 ml, 30.0 ml, 40.0 ml, 50.0 ml, 60.0 ml, 70.0 ml, 80.0 ml, 90.0 ml, 100.0 ml, 150.0 ml, 200.0 ml, 250.0 ml, 또는 0.1 ml 내지 250.0 ml 중의 임의의 값일 수 있다. 기술분야의 숙련된 사람들에게는, 높거나 낮은 단위 용량은 임상 조작을 위해 편리하지 않을 수 있는 것으로 인지된다. 단위 용량은 투여 방법 (예컨대, 비강 전달, 정맥내 주사, 경구 전달, 등), 대상체의 특징 (예컨대, 인간, 체중, 예방접종 기록, 등), 조성물의 특징 (예컨대, PIC의 농도, 조성물의 PH, 등), 및/또는 임의의 다른 속성을 포함한 몇몇 속성에 따라 설정될 수 있다. 예를 들어, 조성물이 유사한 키 또는 유사한 무게를 가진 인간 대상체 또는 다른 대상체에게 주사에 의해 투여될 때, 단위 용량의 값은 0.5 ml 내지 1.0 ml의 범위일 수 있다. 다른 실례로, 투여 방법이 비강 전달일 때, 단위 용량의 값은 0.15 ml 내지 0.2 ml의 범위일 수 있다. 보다 구체적으로, 다른 실례로, 조성물이 유사한 크기 또는 유사한 무게를 가진 인간 대상체 또는 다른 대상체에게 정맥내 주사에 의해 투여될 때, 단위 용량의 값은 30.0 ml 내지 100.0 ml의 범위일 수 있다. 비록 본원에서 사용된 단위 용량이 조성물의 부피를 나타내긴 하지만, 조성물이 액체 조성물로 제한되는 것을 의미하는 것은 아니다. 예를 들어, 조성뭉리 고체 형태 (예컨대, 건조 분말, 냉동 건조 분말, 등)인 경우이고 추가로 액체 형태로 제조될 수 있을 때, 단위 용량은 액체 형태의 조성물의 부피를 나타낼 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물은 조성물을 안정화시키기 위한 물질을 추가로 포함할 수 있다. 단순히 예를 들면, 그 물질은 젤라틴, 당류, 과립당, 락토오스, 말토오스, 트레할로오스, 글루코오스, 저분자 덱스트란, 소르비톨, 폴리소르베이트 20, 만니톨 PEG, 인간 혈액 알부민, 재조합 인간 혈청 알부민, 카프릴산 나트륨, 우레아, 수산화 알루미늄, 페놀 레드, 염화 마그네슘, 염화 칼륨, 염화 나트륨, 티오황산 나트륨, 2수소 칼륨, 아스코르브산, 트라이클로로메탄, 페놀, 티오메르살, 등, 또는 이것들의 임의의 조합을 들 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물은 생리적으로 허용되는 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 단순히 예를 들면, 생리적으로 허용되는 완충제는 아세테이트 완충제, 트리스아민 완충제, 중탄산염 완충제, 탄산염 완충제, 인산염 완충 식염수, 등, 또는 이것들의 임의의 조합을 들 수 있다. 생리적으로 허용되는 완충제의 PH 값은 6.0 내지 8.0일 수 있다. 일부 구체예에서, 생리적으로 허용되는 완충제의 PH 값은 6.0, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 또는 6.0 내지 8.0 중 임의의 값일 수 있다. 일부 특정 구체예에서, 생리적으로 허용되는 완충제는 인산염 완충 식염수 (PH: 7.3 내지 7.5)이다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물은 건조 분말, 용액 (예컨대, 비경구용 용액, 수성 용액, 식염수 용액, 현탁액, 연고, 액적, 에멀션, 겔, 시럽, 장액, 등), 정제, 코팅정, 좌제, 환약, 과립, 당의정, 캡슐, 등, 또는 이것들의 임의의 조합의 형태로 있을 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물은 비경구용 용액으로 제조될 수 있다. 조성물의 형태는 제한되지 않는다. 관련 기술에서 기술된 조성물의 형태 및 그것의 제조 (예컨대, Stanley A Plotkin et al., Vaccine, 4^th edition, W.B. Saunders Company 2003)가 본 개시의 사상 및 범주 내에 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, HBsAg는 한세눌라 다형체(Hansenula Polymorpha), 중국 햄스터 난소 세포 (CHO 세포), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 곤충 발현 시스템, 등, 또는 이것들의 임의의 조합을 포함한 유기체에 의해 생성될 수 있다. 99% 이상의 순도를 가진 HBsAg는 유아, 5세 미만의 아동, 및 성인에게 투여될 수 있다. 본 개시의 일부 구체예에 따르면, HBcAg는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. HBcAg는 대장균, 한세눌라 다형체, 피키아 파스토리스, 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae), 곤충 발현 시스템, 등, 또는 이것들의 임의의 조합에 의해 생성될 수 있다.

일부 구체예에서, HBsAg 대 PIC의 중량비는 1:50, 1:40, 1:30, 1:25, 1:20, 3:50, 1:15, 1:10, 1:5, 또는 1:50 내지 1:5 중의 임의의 값일 수 있다. 일부 특정 구체예에서, HBsAg 대 PIC의 중량비는 1:25일 수 있다. HBsAg 대 PIC의 중량비는 제한되지 않는다는 것이 주지되어야 한다. 예를 들어, 1:25에 가까운 (예컨대, 이 값의 10% 낮거나 높은) HBsAg 대 PIC의 중량비를 가진 조성물은 적당한 안정성을 제공할 수 있고, 더 먼저 또한 더 강력한 (즉, 고역가의 항체가 생성됨) 체액성 면역 반응 및 T 세포 매개된 면역 반응을 유도할 수 있다.

일부 구체예에서, 조성물 중의 HBsAg의 농도는 10 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량의 범위일 수 있다. 단순히 예를 들어, 조성물 중의 HBsAg의 농도는 10 μg/단위 용량, 15 μg/단위 용량, 20 μg/단위 용량, 25 μg/단위 용량, 30 μg/단위 용량, 35 μg/단위 용량, 40 μg/단위 용량, 50 μg/단위 용량, 60 μg/단위 용량, 70 μg/단위 용량, 80 μg/단위 용량, 90 μg/단위 용량, 100 μg/단위 용량, 또는 10 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량 중의 임의의 값일 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물 중의 HBsAg의 농도는 주 20 μg/단위 용량, 40 μg/단위 용량, 또는 60 μg/단위 용량일 수 있다.

일부 구체예에서, 조성물 중의 HBcAg의 농도는 10 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량의 범위일 수 있다. 단순히 예를 들면, 조성물 중의 HBcAg의 농도는10 μg/단위, 15 μg/단위 용량, 20 μg/단위 용량, 25 μg/단위 용량, 30 μg/단위 용량, 35 μg/단위 용량, 40 μg/단위 용량, 50 μg/단위 용량, 60 μg/단위 용량, 70 μg/단위 용량, 80 μg/단위 용량, 90 μg/단위 용량, 100 μg/단위 용량, 또는 10 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량 중 임의의 값일 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물 중의 HBcAg의 농도는 10 μg/단위 용량 내지 50 μg/단위 용량, 또는 50 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량의 범위일 수 있다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, 조성물은 HBV 미감염 대상체, 만성 HBV 감염 대상체 (본 개시에서 "만성 대상체" 또는 "만성 HBV 대상체"로도 언급됨), 및 급성 HBV 감염 대상체 ("급성 대상체" 또는 "급성 HBV 대상체"로도 언급됨)에게 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 개시의 조성물은 항원과 알럼 보조제의 조합보다 더 강력한 CD4⁺ T 세포 및 CD8⁺ T 세포 면역 반응을 유도할 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 조성물은 항원과 알럼 보조제의 조합보다 더 높은 사이토킨 생성 (2 내지 30배)을 유도할 수 있다.

한 특정 구체예에서, 조성물은 20 μg/단위 용량 HBsAg, 20 μg/단위 용량 HBcAg 및 500 μg/단위 용량 PIC를 포함할 수 있다. 다른 특정 구체예에서, 조성물은 40 μg/단위 용량 HBsAg, 40 μg/단위 용량 HBcAg 및 1000 μg/단위 용량 PIC를 포함할 수 있다.

본 개시의 한 측면에 따르면, 조성물은 HBV 감염, 바람직하게는 만성 HBV 감염을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있다.

본 개시의 한 측면에 따르면, HBV 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물은 건조 분말 또는 냉동 건조 분말의 형태로 있다.

본 개시의 한 측면에 따르면, 조성물은 HBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위해 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 의약은 예방용 백신, 치료용 백신, 백신 조제물, 등을 포함할 수 있다. 한 특정 구체예에서, 조성물은 만성 HBV 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위해 사용될 수 있다.

본 개시의 또 다른 측면에 따르면, HBV 감염을 치료 및/또는 예방하는 방법이 제공된다. 방법은 조성물의 특징 (예컨대, 단위 용량, PH, 등), 투여 방법 (예컨대, 경구 전달, 비강 전달, 정맥내 주사, 등), 대상체의 특징 (예컨대, 연령, 성별, 항생물질 알레르기, 등), 사용 목적 (예컨대, HBV 감염에 대한 치료 또는 예방), 및/또는 대상체에게 조성물의 투여를 실행하기 위한 임의의 다른 속성에 따라 구성될 수 있다. 단순히 예를 들면, 일부 구체예에서, 조성물이 HBV 감염을 치료하기 위해 사용될 때, 방법은 치료 유효량의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 유사하게, 조성물이 HBV 감염을 예방하기 위해 사용될 때, 방법은 예방 유효량의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "치료 유효량"은 T 세포 매개된 면역 반응을 유도하고 감염을 완화 또는 제거하기에 충분한 양을 나타낸다. 본원에서 사용되는 용어 "예방 유효량"은 바이러스 감염에 대해 보호 항체를 유도하기에 충분한 양을 나타낸다. 예를 들어, 세계 보건 기구 (WHO)에 의해 권장되는 바, 보호 항체의 농도는 적어도 10 mIU/ml일 수 있다.

일부 구체예에서, 조성물은 조성물의 특징에 다라 구성될 수 있다. 조성물의 특징은 단위 용량, 조성물의 PH, 등을 들 수 있다. 예를 들어, 방법은 생리적으로 허용되는 완충제를 조성물에 첨가함으로써 조성물의 PH를 6.0 내지 8.0으로 조정하는 단계를 포함할 수 있다. 다른 실례로, 방법은 단위 용량의 값에 따라 대상체에게 특정량 (예컨대, 단위 용량보다 더 적은 양, 더 많은 양, 또는 동등한 양)의 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 방법은 투여 방법에 따라 구성될 수 있다. 예를 들어, 투여는 전신적이거나 또는 국소적일 수 있다. 투여 방법은 비경구 주사 (예컨대, 근육내 주사, 복강내 주사, 정맥내 주사, 피하 주사, 피내 전달, 종양내 전달, 종양 부근 전달, 등), 피부를 통한 전달, 및 방법의 실행을 위한 임의의 다른 투여 방법을 포함할 수 있다. 보다 구체적으로, 일부 구체예에서, 투여 방법은 추가로 직장 전달, 질 전달, 비강 전달, 경구 전달, 안과적 전달, 혀밑 전달, 및 흡입을 포함할 수 있다. 투여 방법은 제한되지 않는 것이 주지되어야 한다. 기술분야의 숙련된 사람들에게, 다양한 변형 및 변경은 여전히 본 개시의 사상 및 범주 내에 있다.

일부 구체예에서, 방법은 투여 빈도에 따라 구성될 수 있다. 투여 빈도는 2개월마다 1회, 2개월마다 2회, 2개월마다 3회, 2개월마다 4회, 2개월마다 5회, 1개월마다 1회, 1개월마다 2회, 3주마다 1회, 3주마다 2회, 2주마다 2회, 2주마다 1회, 매주 1회, 또는 방법을 실행하기 위한 임의의 다른 적합한 빈도일 수 있다. 예를 들어, 조성물이 HBV 미감염 대상체에게 투여될 때, 예방 유효량의 조성물은 대상체에게 2개월마다 3회, 1개월마다 2회, 또는 6개월마다 3회 투여될 수 있다. 다른 실례로, 조성물이 HBV 감염 대상체에게 투여될 때, 치료 유효량의 조성물은 대상체에게 2개월마다 4회, 2개월마다 5회, 1개월마다 2회, 3주마다 1회, 3주마다 2회, 또는 매주 1회 투여될 수 있다. 본 개시에 따르면, 1개월은 28, 29, 30, 또는 31일과 같고, 1주는 7일과 같다.

일부 특정 구체예에서, 방법은 조성물을 대상체에게 2개월마다 3회 (예컨대, 근육내 주사에 의해) 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 방법은 다음의 단계들을 포함할 수 있다:

1) 제0일에, 제1양의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계;

2) 제25일 내지 제31일에, 제2양의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계;

3) 제53일 내지 제59일에, 제3양의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계.

제1양, 제2양, 및 제3양은 동일하거나, 서로 상이할 수 있다. 예를 들어, 제1양, 제2양, 및 제3양 중 적어도 하나는 치료 유효량, 또는 예방 유효량과 같다. 다른 실례로, 제1양, 제2양, 및 제3양 중 적어도 하나는 HBsAg의 농도 (예컨대, 20 μg/단위 용량, 40 μg/단위 용량, 등), HBcAg의 농도 (예컨대, 10 μg/단위 용량, 20 μg/단위 용량, 50 μg/단위 용량, 100 μg/단위 용량, 등), 및/또는 PIC의 농도 (예컨대, 500 μg/단위 용량, 1000 μg/단위 용량)에 따라 설정된다. 일부 구체예에서, 제1양, 제2양, 및 제3양 중 적어도 하나는 20μg/단위 용량 HBsAg 및 500 μg/단위 용량 PIC를 포함한다. 일부 구체예에서, 제1양, 제2양, 및 제3양 중 적어도 하나는 40 μg/단위 용량 HBsAg 및 1000 μg/단위 용량 PIC를 포함한다. 일부 구체예에서, 제1양, 제2양, 및 제3양 중 적어도 하나는 10 μg/단위 용량 내지 50 μg/단위 용량 HBcAg를 포함한다. 일부 구체예에서, 제1양, 제2양, 및 제3양 중 적어도 하나는 50 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량 HBcAg를 포함한다.

본 개시의 일부 구체예에 따르면, HBV 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 키트가 제공된다. 키트는 하나의 용기, 하나의 바늘, 주사용 물, 매뉴얼, 등, 또는 이것들의 임의의 조합 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 3개의 용기를 포함할 수 있다. 용기에 함유된 조성물은 조성물의 동일하거나 상이한 제제 및/또는 양을 포함할 수 있다. 예를 들어, 적어도 하나의 용기 (예컨대, 2개, 또는 3개의 용기)는 20 μg/단위 용량의 HBsAg 및 500 μg/단위 용량의 PIC를 포함할 수 있다. 적어도 하나의 용기 (예컨대, 2개, 또는 3개의 용기)는 10 μg/단위 용량 내지 20 μg/단위 용량의 HBcAg를 포함할 수 있다. 다른 실례의 경우, 적어도 하나의 용기 (예컨대, 2개, 또는 3개의 용기)는 40 μg/단위 용량의 HBsAg 및 1000 μg/단위 용량의 PIC를 포함할 수 있다. 적어도 하나의 용기 (예컨대, 2개, 또는 3개의 용기)는 50 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량의 HBcAg를 포함할 수 있다. 일부 다른 구체예에서, 한 용기 안의 조성물은 액체 형태 (예컨대, 현탁액, 용액 등)일 수 있다. 일부 구체예에서, 한 용기 안의 조성물은 고체 형태 (예컨대, 건조 분말, 냉동-건조 분말, 등)일 수 있다. 고체 형채의 조성물은 액체 형태 (예컨대, 현탁액, 용액, 등)로 제조될 수 있고, 사용 전에 하나 이상의 멸균된 용기 (예컨대, 튜브, 병, 앰풀, 주사기, 등)에 보관될 수 있다.

실시예

실시예 1: 조성물의 제조

일부 구체예에서, 조성물은 HBsAg, PIC, 카나마이신, 및 염화 칼슘을 포함하며, 이때 HBsAg 대 PIC의 비율은 1:25이다. 보다 구체적으로, 조성물은 40 μg/단위 용량의 HBsAg, 1000 μg/단위 용량의 PIC, 800 IU/단위 용량의 카나마이신, 및 0.16 μmol/단위 용량의 Ca²⁺를 포함한다.

일부 구체예에서, 조성물은 HBcAg, HBsAg, PIC, 카나마이신, 및 염화 칼슘을포함한다. 조성물은 40 μg/단위 용량의 HBsAg, 1000 μg/단위 용량의 PIC, 800 IU/단위 용량의 카나마이신, 및 0.16 μmol/단위 용의 Ca²⁺를 포함한다. 보다 구체적으로, HBcAg의 농도는 10 μg/단위 용량 내지 50 μg/단위 용량의 범위이다.

일부 구체예에서, 조성물은 HBcAg, HBsAg, PIC, 카나마이신, 및 염화 칼슘을 포함한다. 조성물은 40 μg/단위 용량의 HBsAg, 1000 μg/단위 용량의 PIC, 800 IU/단위 용량의 카나마이신, 및 0.16 μmol/단위 용량의 Ca²⁺를 포함한다. 보다 구체적으로, HBcAg의 농도는 50 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량의 범위이다.

실시예 2: 전임상 독성학 연구

실시예 2는 본 개시의 일부 구체예에 따르는 조성물 및 그것의 주요 구성요소 (PIC, 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 및 적어도 하나의 양이온, 포괄적으로, "PIKA"를 포함함)의 전임상 독성학 연구를 예시한다. 표 1에서 예시되는 것과 같이, 실시예 2에서 사용한 마우스는 평균 체중이 0.019 kg이었고, 8 μg의 HBsAg (0.4 mg/kg) 및 200 μg의 PIC (10 mg/kg)를 포함한 0.2 ml의 조성물을 견디거나, 또는 200 μg의 PIC (10 mg/kg)를 포함한 0.2 ml의 PIKA를 견딜 수 있었다. 마우스에 사용한 조성물의 투여량은 인간에서 사용한 권장 투여량 (20 μg HBsAg (0.0003 mg/kg) 및 500 μg PIKA (0.0083 mg/kg))보다 약 1,200배 더 많다. 인간에서 사용된 권장된 최대 투여량은 권장된 최소 투여량의 2배이며, 이것은 600의 안전 한도 (MoS)를 제공한다. 설치류 래트의 만성 독성학 연구에 따르면, MoS의 값은 각각, 인간에서 권장된 최소 투여량에 대해 600이고, 인간에서 권장된 최대 투여량에 대해서는 300이다. 영장류의 전임상 연구에 따르면, MoS의 값은 각각, 인간에서 권장된 최소 투여량에 대해 40이고, 인간에서 권장된 최대 투여량에 대해 20이다.

전임상 독성학 연구에서의 MoS

안전	PIC 또는 PIKA의 MoS	조성물의 MoS
설치류의 급성 독성학
인간에서 권장된 최소 투여량	1,200	1,200
인간에서 권장된 최대 투여량	600	600
설치류의 만성 독성학
인간에서 권장된 최소 투여량	600	600
인간에서 권장된 최대 투여량	300	300
영장류의 만성 독성학
인간에서 권장된 최소 투여량	40	40
인간에서 권장된 최대 투여량	20	20
예시적인 인간 대상체의 체중을 60 kg으로 가정하면, MoS는 다음과 같이 정의된다: MoS = (전임상 연구에 사용된 투여량, mg/kg) ÷ (인간에서 권장된 투여량, mg/kg)

실시예 3: 설치류의 면역 반응의 전임상 연구

방법론

실시예 3에서 사용한 설치류는 생후 6주령의 BALB/c 마우스이며, 그것을 6개 그룹으로 나눈다. 각 그룹은 18마리의 마우스를 포함한다 (체중이 17.3 g 내지 20.7 g 범위에 있는 9마리 수컷; 체중이 19.0 g 내지 23.7 g 범위에 있는 9마리 암컷). 표 2에서 예시되는 것과 같이, 조성물 및 다른 물질을 제1일, 8일, 22일, 36일, 50일, 64일 및 78일에 경골 전방 주사에 의해 투여한다.

투여 계획

그룹	그룹 명칭	BALB/c 마우스	HBsAg (μg)	보조제		대조군
그룹	그룹 명칭	BALB/c 마우스	HBsAg (μg)	PIKA (μg)	알럼 (μg)	PBS (μl)
1	용매 대조군 그룹	9M, 9F	-	-	-	250
2	항원 대조군 그룹	9M, 9F	15	-	-	-
3	백신 대조군 그룹	9M, 9F	3	-	80	-
4	저투여량 그룹	9M, 9F	3	50	-	-
5	중간 투여량 그룹	9M, 9F	9	150	-	-
6	고투여량 그룹	9M, 9F	15	250	-	-

제3일, 24일, 38일, 52일, 66일, 80일, 및 106일에, 체액성 면역 반응을 결정하기 위하여, 항-HBsAg 항체의 역가를 측정하기 위한 혈액 샘플을 얻는다.

제38일, 80일, 및 106일에, 각 그룹으로부터 3마리의 수컷 및 3마리의 암컷을 희생시켜서 T 세포 매개된 면역 반응을 결정한다. HBsAg 또는 HBsAg CD8⁺ 펩타이드를 비장 세포의 시험관내 자극에 사용한다. IFN-γ를 생성하는 비장 세포의 빈도를 ELISPOT에 의해 측정한다.

결과

도 1, 도 2, 및 도 3에서 나타낸 것과 같이, 조성물 (HBsAg 및 PIKA를 포함함)은 더 강력한 체액성 면역 반응 (IgG, IgG1, 및 IgG2a의 생성에 의해 표시됨)을 유도하며, 이것은 PIKA가 HBsAg에 대한 면역 반응을 상당히 증강시키는 것을 나타낸다.

도 3에 따르면, 조성물은 강력한 Th1 타입 면역 반응을 생성하고 IgG2a의 생성을 상당히 증가시킨다.

도 4에 따르면, ELISPOT 실험의 결과는 IFN-γ를 생성하는 비장 세포의 수가 시험관내 자극 후에 상당히 증가하는 것을 나타낸다. 조성물 (HBsAg 및 PIKA를 포함함)은 T 세포 매개된 면역 반응을 상당히 증강시킨다.

IgG2a 역가의 증가하는 값은 조성물에 의해 유도된 주요 면역 반응이 Th1 타입 면역 반응에 속하는 것임을 나타낸다. Th1 타입 면역 반응 및 세포 면역 반응은 치료용 백신의 중요한 효과이다. Th1 타입 면역 반응은 바이러스 감염을 방지하고, 감염된 세포를 제거한다. 또한, IFN-γ를 생성하는 비장 세포의 수의 증가는 조성물이 세포 면역 반응을 상당히 증강시키는 것을 나타낸다.

실시예 4: 영장류의 만성 독성학 연구

실험실:

실시예 4를 중국 국립 제약 및 생물학 제품 관리 연구소, 약물 안전 평가 센터에서 수행한다.

방법론

실시예 4에서 사용한 영장류는 5개 그룹으로 나눈 레수스 원숭이이다. 각 그룹은 8마리의 레수스 원숭이를 포함한다 (4마리 암컷 및 4마리 수컷; 생후 1.6 내지 3.2년; 3 내지 3.5 kg). 조성물, HBsAg, PIKA 또는 PBS를 표 3에 따라 영장류에게 3개월 안에 5회 투여한다 (제0일, 14일, 28일, 56일, 및 84일).

그룹 나누기 및 투여 계획

그룹	동물	HBsAg		PIKA		대조군
그룹	동물	투여량 (μg)	농도 (mg/kg)	투여량 (μg)	농도 (mg/kg)	대조군
1	4마리 수컷, 4마리 암컷	-	-	1,000	0.31	-
2	4마리 수컷, 4마리 암컷	40	0.012	-	-	-
3	4마리 수컷, 4마리 암컷	40	0.012	1,000	0.31	-
4	4마리 수컷, 4마리 암컷	60	0.018	1,500	0.46	-
5	4마리 수컷, 4마리 암컷	-	-	-	-	PBS

각 그룹은 40 μg의 HBsAg 및 1,000 μg의 PIC (또는 PIKA), 또는 60 μg의 항원 HBsAg 및 1,500 μg의 PIC (또는 PIKA)를 받는다.

국소적 (예컨대, 투여 부위) 및 전신적 임상 증상이 관찰되며, 혈액 샘플을 2일부터 126일까지 5회 얻는다. 제85일 (즉, 제5 투여 후 24시간) 및 제126일에, 원숭이들을 희생시킨다. 암컷 원숭이로부터의 36개 기관 및 수컷 원숭일부터의 32개 기관을 조직학적 검사에 사용한다.

조직학적 검사

조직학적 검사는 다음을 포함한다:

- 임상 증상,

- 외모, 털, 활동, 반응, 호흡, 자세, 머리-어깨 (눈, 귀, 입, 코 포함), 복부, 항문, 회음부, 피부색, 근육 긴장, 외상, 종양;

- 증상 관련 행동;

- 투여 부위의 증상;

- 체중;

- 급식;

- 체온;

- 혈액학: T, APTT, RBC, WBC, HGB, HCT, MCV, MCH, MCHC, PLT, MPV, 망상 적혈구 수 %, Neut %, Lymph %, Mono %, Eos %, Baso %;

- 생화학적 테스트: AST, ALT, BUN, CHO, GLU, TBIL, CRE, ALP, CK, LDH, TP, ALB, TG, GGT, Ca, P, K⁺, Na⁺, Cl^-, IgA, IgG, IgM, C3, C4;

- 소변 테스트;

- 다음 기관의 병리학적 및 조직학적 분석: 뇌, 척수, 심장, 동맥, 폐 (기관지 포함), 간, 신장, 비장, 췌장, 위, 십이지장, 공장, 회장, 결장, 직장, 맹장, 고환, 부고환, 전립선, 난소, 자궁, 질, 방광, 뇌하수체, 갑상선, 부갑상선, 턱밑 샘, 부신, 좌골 신경, 근육, 장간막 림프절, 사타구니 림프절, 흉선, 유선, 흉골, 투여 부위;

- 체액성 면역 반응: ELISA에 의해 측정된 혈청 중의 항체 역가.

결과

국소적 또는 전신적 증상은 관찰되지 않는다. 혈액 검사 및 혈청 생화학적 검사에서 비정상적인 변화는 관찰되지 않는다. 비장 조직학적 검사의 결과는 비장 백색 펄프의 배아 중심에서 활성화된 대식세포 및 유사분열의 수의 증가를 나타낸다. 비장 백색 펄프의 배아 중심은 림프구 증식의 주요 구역, 특히 항원 자극 후 B 세포 활성화의 주요 구역이다. PIKA는 항원에 대한 면역 반응을 증강시키고, 림프구 증식을 유도한다. 비장 괴사 또는 세포 사멸은 관찰되지 않는다. 그러므로, 결과는 비장의 조직학적 변화가 병리적인 것이 아니며, 생리적인 것을 나타낸다: 면역 반응은 가역적이다. 비정상적인 현상은 임의의 다른 기관의 조직학적 결과에서 관찰되지 않는다.

혈청 중의 항체 역가는 영장류가 HBsAg 및 PIKA를 포함하는 조성물의 투여 후에 증강된 체액성 면역 반응을 발생시킨 것을 나타낸다. 표 4는 영장류의 면역 반응을 예시한다.

혈청의 항체 역가

그룹	HBsAg (mg/kg)	PIC 또는 PIKA (mg/kg)	항체 역가
그룹	HBsAg (mg/kg)	PIC 또는 PIKA (mg/kg)	제0일	제21일	제43일	제85일	제100일	제126일
1	-	0.31	0	0	0	0	0	0
2	0.012	-	0	2	6	148	620	253
3	0.012	0.31	0	72	444	1585	4502	2379
4	0.018	0.46	0	140	602	5261	11459	4912
5	PBS		0	0	0	0	0	0

실시예 5: 건강한 인간 대상체에서 조성물의 임상 연구

실험실

싱가포르 종합병원 위장병학 및 간장학과; 싱가포르 창이 종합병원 임상 시험 및 연구실.

방법론

건강한 인간 대상체를 무작위로 3개 그룹으로 나눈다. 3개 그룹 중 2개 그룹은 증가하는 용량의 조성물을 받고, 세 번째 그룹은 상업적으로 이용 가능한 hbv 백신을 받는다. 조성물 및 백신을 근육내 주사로서 팔뚝의 삼각근 영역에 투여한다.

조성물 및 백신

그룹 A (또는 "절반 투여량" 그룹): 20 μg의 HBsAg 및 500 μg의 PIKA를 포함하는 조성물;

그룹 B (또는 "전체 투여량" 그룹): 40 μg의 HBsAg 및 1000 μg PIKA를 포함하는 조성물;

그룹 C (또는 "대조군" 그룹): 20 μg의 HBsAg 및 500 μg의 알럼 보조제를 포함하는 백신 (예컨대, GSK로부터의 상업적으로 이용가능한 백신: ENGERIX^TM-B).

투여 계획

이중-맹검 시험을 실행하기 위하여, 대상체는 표 5에 예시된 것과 같이 6개월 안에 조성물 및 백신을 3회 받고 위약을 1회 받는다.

투여 계획

그룹	제0일	제7일	제28일	제56일	제84일	제168일	제196일
A & B	x		x	x		o
C	x		x	o		x

x는 조성물 또는 백신의 투여를 의미하고; o는 위약의 투여를 의미한다.

결과

1. 투여량의 안전 프로파일

실시예 5에서 사용한 조성물 및 백신의 투여량은 실시예 1에서의 투여량을 기반으로 한다. 영장류 및 설치류의 전임상 독성학 연구는 안전 프로파일에 대한 주요 정보를 제공한다. 실시예 2는 조성물, 또는 PIKA 단독의 허용도를 평가한다.

상업적으로 이용가능한 백신의 사용이 또한 고려된다. 상업적으로 이용가능한 백신은 일반적으로 6개월 안에 3회 투여된다 (10 μg 또는 20 μg HBsAg). 투석 대상체 및 이식받을 대상체의 경우, 백신은 4회 투여되고 (40 μg HBsAg), 각각 0개월, 1개월, 2개월, 및 6개월 안에 수행될 수 있다.

전임상 면역학적 연구는 추가로 권장된 투여량이 적당한 면역 반응을 제공하는 것을 확인시켜준다. 결과에 따르면, 항원 대 PIKA의 비율이 1:25와 같거나 거의 1:25일 때, 체액성 면역 반응 및 T 세포 매개된 면역 반응은 적당한 균형에 도달한다. 기술분야의 숙련된 사람들에게, 항원 대 PIKA의 비율 (1:25)을 증가시키는 것은 체액성 면역 반응을 증강시킬 수 있다.

HBsAg의 고투여량 (40 μg)을 임상 연구에 적용시키기 위하여, 조성물은 비율 (1:25)에 따라 1000 μg의 PIKA를 포함한다. 실시예 1의 결과에 다르면, 대상체는 40 μg의 HBsAg 및 1000 μg의 PIKA를 견딜 수 있다. 임상적 위험을 감소시키기 위하여, 절반 투여량 그룹의 대상체에게 20 μg의 HBsAg 및 500 μg의 PIKA를 투여한다. 절반 투여량 그룹의 안전 프로파일은 40 μg의 HBsAg 및 1000 μg의 PIKA의 조합이 최적임을 나타낸다.

2. 최적화된 투여 계획

종래의 투여 계획 (6개월 안에 3회)을 변형시킴으로써, 조성물은 보다 효과적이다. 본 개시는 보호성 항바이러스 항체 생성을 유도하기 위한 가속화된 투여 계획을 추가로 제공한다. 보다 구체적으로, 가속화된 투여 계획은 종래의 투여 계획보다 더 빈번한 투여를 가지며, 그 결과로서, 가속화된 투여 계획은 T 세포 매개된 면역 반응을 유도할 수 있다. 실시예 5에서, 투여 계획 (2개월 안에 3회)은 2개의 투여 간격 사이의 대상체의 위험을 감소시키기에 충분한 시간, 및 면역 반응을 관찰하기에 충분한 시간을 제공한다.

3. 항체 역가

체액성 면역 반응의 결과는 제0일, 56일, 84일, 및 196일에 수집된 각 그룹의 혈액 샘플의 평가를 기반으로 한다. 혈액 샘플을 항-HBV 항체의 역가를 획득하기 위해 평가한다. 그 결과는 대조군 그룹 (그룹 C, 상업적으로 이용가능한 백신 ENGERIX^TM-B)을 능가하는 조성물의 면역원성을 보여준다. 표 6에 따르면, 결과는 전체 투여량 그룹 (그룹 B) 및 절반 투여량 그룹 (그룹 A) 둘 다, 일단 가속화된 투여된 스케줄로 적용된 후에 보다 강력하고 보다 빠른 면역 반응을 생성하는 것을 나타낸다.

10 mIU/ml의 역가를 가진 대상체의 수 및 백분율

그룹	N	조성물		알럼 (μg)	10 mIU/ml의 역가를 가진 대상체의 수 및 백분율
그룹	N	HBsAg (μg)	PIKA (μg)	알럼 (μg)	제0일	제56일	제84일	제196일
A	11	20	500	-	0(0%)	8(72.73%)	10(90.91%)	10(90.91%)
B	10	40	1000	-	0(0%)	10(100%)	10(100%)	10(100%)
C	11	20	-	500	0(0%)	6(54.55%)	7(63.64%)	9(81.82%)

N은 그룹의 대상체의 수를 의미한다.

WHO는 HBV 감염으로부터의 보호를 제공하기 위해 항바이러스 항체의 표준 역가가 10 mIU/ml이어야 할 것을 권장한다. 표 6에 따르면, 제56일에 (즉, 제2 투여 후에), 전체 투여량 그룹의 모든 대상체가 표준 역가를 가진 한편, 절반 투여량 그룹의 72.73% 및 대조군 그룹의 54.55%가 표준 역가를 가졌다. 제196일에, 전체 투여량 그룹, 절반 투여량 그룹, 및 대조군 그룹에서 표준 역가를 가진 대상체의 백분율은 각각 100%, 90.91%, 및 81.82%이다.

150 mIU/ml의 역가를 가진 대상체의 수 및 백분율

그룹	N	조성물		알럼 (μg)	10 mIU/ml의 역가를 가진 대상체의 수 및 백분율
그룹	N	HBsAg (μg)	PIKA (μg)	알럼 (μg)	제0일	제56일	제84일	제196일
A	11	20	500		0(0%)	3(27.27%)	9(81.82%)	10(90.91%)
B	10	40	1000		0(0%)	4(40%)	10(100%)	10(100%)
C	11	20		500	0(0%)	4(36.36%)	4(36.36%)	5(45.45%)

N은 그룹의 대상체의 수를 의미한다.

표 7에 따르면, 전체 투여량 그룹 (그룹 B) 및 절반 투여량 그룹 (그룹 A)의 대상체는 각각 제84일 및 제196일에 더 강력한 체액성 면역 반응을 획득한다. 제84일에, 전체 투여량 그룹의 모든 대상체는 150 mIU/ml을 넘는 항체 역가를 가지며; 절반 투여량 그룹의 대상체의 81.82%, 및 대조군 그룹의 대상체의 36.36%가 150 mIU/ml을 넘는 항체 역가를 가진다. 제196일에, 전체 투여량 그룹, 절반 투여량 그룹, 및 대조군 그룹에서 150 mIU/ml을 넘는 역가를 가진 대상체의 백분율은 각각 100%, 90.91%, 및 45.45%이다.

모든 임상 연구는 추가로 HBV 특이적 T 세포 매개된 면역 반응을 조사한다. HBV 특이적 T 세포 매개된 면역 반응을 각 웰 (10⁵개 세포를 포함함)에서 반점 형성 단위 (SFU)에 의해 평가한다. 도 5에 예시된 것과 같이, 제56일에, 전체 투여량 그룹 (그룹 B) 및 절반 투여량 그룹 (그룹 A)의 대상체의 평균 SFU는 각각 230 및 138인 한편, 대조군 그룹 (그룹 C)에서 SFU는 관찰되지 않는다. 제84일에, 전체 투여량 그룹 및 절반 투여량 그룹의 대상체의 평균 SFU는 각각 134 및 157인 한편, 대조군 그룹의 대상체의 평균 SFU는 186이다. 제196일에, 전체 투여량 그룹 및 절반 투여량 그룹의 대상체의 평균 SFU는 제84일의 그것과 유사한 한편, 대조군 그룹의 대상체의 평균 SFU는 단지 24에 불과하다.

나아가, ELISPOT의 결과에 따라 선택한 한 대상체로부터의 CD4⁺T 세포의 사이토카인 생성을 유동 세포분석에 의해 평가한다. 도 7에서 예시된 것과 같이, 한 단일 펩타이드의 자극 하에, 전체 투여량 그룹 (그룹 B)의 대상체로부터의 CD4⁺T 세포는 3가지 사이토카인 (IFN-γ，TNF-α, 및 IL-2를 포함함)을 발현하는 한편, 절반 투여량 그룹 (그룹 A) 및 대조군 그룹 (그룹 C)의 대상체로부터의 CD4⁺T 세포는 3가지 사이토카인 중 2개를 발현한다. 도 6은 전체 투여량 그룹의 한 대상체의 유동 세포분석 결과를 예시한다.

임상 연구 결과는 전체 투여량 그룹 및 절반 투여량 그룹이 조성물에 대한 적당한 내성을 보이는 것을 나타낸다. 고역가 체액성 면역 반응 및 T 세포 매개된 면역 반응은 조성물이 만성 HBV 대상체에서 효과적인 보호를 유도할 수 있음을 나타낸다.

실시예 6: HBV 감염된 환자에 미치는 조성물의 영향

환자 1:

39세 남성인 미스터 자오는 9년 동안 HBV로 감염되었다 (HBsAg +; HBeAg +; HBcAb +). 그는 라미부딘(Lamivudine) 또는 엔테카비어(Entecavir)를 섭취함으로써 항바이러스 치료를 받았다. 항바이러스 치료를 2개월 동안 중단한 후에, 테스트 결과 HBV-DNA의 농도는 3.6x10⁶ 복사물/ml이었고; HBsAg의 농도는 225 ng/ml보다 컸으며; HBeAg의 농도는 76.5 PEIU/ml보다 컸고; 항-HBeAg 항체는 음성이었으며; 항-HBcAg 항체의 농도는 3 PEIU/ml인 것으로 나타났다. 조성물을 2주마다 또는 4주마다 1회 투여하였다. 40 μg의 HBsAg 및 1000 μg의 PIKA를 포함한 조성물을 매번 투여하였다. 제1 투여 후 제112일부터 제330일 (최종 투여)까지, 조성물의 투여량을 50 μg의 HBsAg 및 1500 μg의 PIKA로 증가시켰다. 제260일부터, HBV-DNA의 농도는 감소하기 시작하였다. 제302일에, HBV-DNA의 농도는 1.5x10⁴ 복사물/ml이었다. 한편, HBeAg의 농도는 서서히 감소하였다. 제1 투여 후 2년 후에, HBeAg의 농도는 38.27 PEIU/ml에 도달하였다. 조성물의 투여 중에, 제42일에 ALT 및 AST의 농도는 일시적인 상승을 보였고, 제260일부터 농도는 정상으로 회복되었다.

환자 2:

46세 남성인 미스터 송은 4년 동안 HBV로 감염되었다 (HBsAg +; HBeAg +; HBcAb +). 그는 항-HBV TF를 섭취함으로써 항바이러스 치료를 받았다. 조성물의 투여 전에, 테스트는 HBV-DNA의 농도는 6.0x10³ 복사물/ml이었고; HBsAg의 농도는 225 ng/ml보다 컸으며; HBeAg는 음성이었고; 항-HBeAg의 농도는 2.0 PEIU/ml보다 컸으며; 항-HBcAg 항체의 농도는 3.9 PEIU/ml보다 컸고; ALT는 비정상 (57 U/L)인 것을 보였다. 조성물을 2주마다 또는 4주마다 1회 투여하였다. 40 μg의 HBsAg 및 1000 μg의 PIKA를 포함한 조성물을 매번 투여하였다. 제1 투여 후 제112일부터 시작하여, 조성물의 투여량을 50 μg의 HBsAg 및 1500 μg의 PIKA로 증가시켰다. 제171일에, HBV-DNA의 농도는 감소하였다 (< 500 복사물/ml). 제302일에, HBV-DNA의 농도는 1.5x10⁴ 복사물/ml이었다. HBsAg의 농도는 77.35 ng/ml로 떨어졌고, ALT는 정상으로 회복되었다. 제246일부터 제330일까지, 60 μg의 HBsAg 및 20000 μg의 PIKA를 포함한 조성물을 2주마다 또는 4주마다 1회 투여하였다. 제1 투여로부터 2년 후에, HBV-DNA의 농도는 500 복사물/ml보다 아래였고, HBsAg의 농도는 3.17 ng/ml이었으며, ALT의 농도는 정상으로 회복되었다.

환자 3:

32세 남성인 미스터 장은 8년 동안 HBV로 감염되었다 (HBsAg +; HBeAb +; HBcAb +). 조성물의 투여 전에, 테스트는 HBV-DNA는 음성이었고; HBsAg의 농도는 225 ng/ml보다 컸으며; HBeAg는 음성이었고; 항-HBeAg의 농도는 2.0 PEIU/ml보다 컸으며; 항-HBcAg 항체의 농도는 3.9 PEIU/ml보다 컸음을 보였다. 조성물을 2주마다 또는 4주마다 1회 투여하였다. 40 μg의 HBsAg 및 1000 μg의 PIKA를 포함한 조성물을 매번 투여하였다. 제1 투여 후 제112일부터 시작하여, 조성물의 투여량을 50 μg의 HBsAg 및 1500 μg의 PIKA로 증가시켰다. 제171일에, HBsAg의 농도는 49.86 ng/ml로 떨어졌다.

실시예 7. 조성물의 상이한 유형의 영향

실시예 7에서, 고수준의 HBV DNA를 발현하는 18마리의 HBV-형질전환 마우스를 사용한다. 모든 마우스를 각각 6마리씩을 포함한 3개 그룹 (그룹 A, 그룹 B, 및 그룹 C)으로 나누었다. 표 8에 따라, 조성물 및 다른 물질을 각 그룹의 마우스에게 투여한다. 조성물 및 다른 물질을 12주 동안 매주 1회 마우스에게 투여한다. 최종 투여 후 7-일 관찰을 수행한다. 각 마우스의 체중을 주당 2회 측정한다. 제1 투여 후, HBV DNA를 각각 제0일, 21일, 및 42일에 측정한다.

마우스에 투여된 조성물

그룹 명칭	조성물
그룹 명칭	PBS	PIKA	HBsAg	HBcAg
그룹 A	+
그룹 B		50 μg	10 μg
그룹 C		50 μg	10 μg	10 μg

도 8에 따르면, 고수준의 HBV-DNA를 발현하는 마우스에서도, 그룹 B 및 그룹 C로부터의 마우스에 조성물이 투여된 후에, HBV DNA는 감소하며, 이것은 조성물이 HBV 감염을 상당히 예방하고 치료하는 것을 나타낸다.

실시예 7은 단지 실례인 것을 주지하여야 한다. 기술분야의 숙련된 사람들은 실시예 7의 형태 및 상세한 내용을 본 개시의 사상 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 변경시킬 수 있다. 예를 들어, HBsAg 및/또는 HBcAg 대 PIC (또는 PIKA)의 비율은 1:50, 1:40, 1:30, 1:25, 1:20, 3:50, 1：15，1:10, 1:5, 또는 1:50 내지 1:5 사이의 임의의 값일 수 있다.

실시예 8. 조성물의 안정성

실시예 8에서, 조성물의 3개의 배치를 사용한다. 각각의 배치를 2개 그룹으로 나눈다 (2개 그룹은 각각 37℃ 및 25℃의 온도로 조정된 인큐베이터에 놓음). 알럼 보조제 및 HBsAg를 포함하는 B형 간염 백신을 대조군으로서 사용한다. 조성물 그룹을 37℃에 1주, 2주, 및 4주 동안 놓고, 연속적으로 희석하여 마우스에 투여한다. 혈액 샘플을 수집하여 HBsAg를 측정한다. 조성물 및 대조군 백신의 ED₅₀의 비율을 측정한다. 조성물 그룹을 25℃에 1개월, 2개월, 3개월 및 4개월 동안 놓고 연속적으로 희석하여 마우스에 투여한다. 혈액 샘플을 수집하여 HBsAg를 측정한다. 조성물 및 대조군 백신의 ED₅₀의 비율을 측정한다.

표 9에 따르면, 37℃에 놓인 후, 본 개시의 조성물은 대조군 B형 간염 백신보다 높은 효능을 보이며; 25℃에 놓인 후, 본 개시의 조성물은 또한 대조군 B형 간염 백신보다 높은 효능 및 안정성을 보인다.

조성물의 안정성 연구

배치 효능		알럼+HBsAg 1 2 3			PIKA+HBsAg 1 2 3
온도	시간/기간	알럼+HBsAg 1 2 3			PIKA+HBsAg 1 2 3
4℃	제0일	6.2	6.2	4.4	8.2	7.4	11.7
37℃	1주	4.2	4.5	5.6	5.0	6.7	2.9
	2주	4.9	3.8	4.1	10.1	10.1	4.4
	4주	3.9	2.4	3.2	4.5	4.0	7.9
25℃	1개월	6.3	5.6	5.4	10.9	24.2	7.9
	2개월	5.4	5.4	5.7	13.1	9	7.4
	3개월	3.0	4.4	3.9	14.1	17.9	7.1
	6개월	1.7	2.3	1.8	18.3	9.3	9.9

비록 한 유형의 조성물 (즉, PIKA 및 HBsAg를 포함한 조성물)이 실시예 8에서 사용되지만, 실시예 8은 예시적인 것이고 범주는 제한되지 않는다는 것을 주지하여야 한다. 기술분야의 숙련된 사람들에게는, 실시예 8의 형태 및 상세한 내용의 다양한 변화가 본 개시의 범주로부터 벗어나지 않으면서 만들어질 수 있다. 단지 실례로, 다른 유형의 조성물 (예컨대, PIKA, HBsAg 및 HBcAg를 포함하는 조성물)을 실시예 8에 사용할 수 있다. 또 다른 실례로, 기술분야의 숙련된 사람들은 상이한 농도의 조성물, 또는 조성물의 각 물질의 상이한 농도를 사용할 수 있다. 예를 들어, HBsAg 및/또는 HBcAg to PIC (또는 PIKA)의 비율은 1:50, 1:40, 1:30, 1:25, 1:20, 3:50, 1：15，1:10, 1:5, 또는 1:50 내지 1:5 사이의 임의의 값일 수 있다.

본 개시에 따르면, 조성물은 다음 장점 중 적어도 하나를 제공한다:

- 급성 및 만성 독성학 연구 둘 다에서 양호한 안전성;

- 체액성 면역 반응의 증강, 및 고역가의 생성 및 보다 빠른 항체 생성;

- T 세포 매개된 면역 반응의 효과적인 촉발;

- HBV 감염 대상체에서 HBV DNA 로드의 감소.

본 개시가 특정 구체예를 참조로 기술된 한편으로, 구체예는 예시적인 것이고 범주는 제한되지 않는 것이 인지될 것이다. 본 개시의 대체 구체예는 본 개시가 속하는 기술분야에서 통상적인 지식을 가진 사람들에게 명백해질 것이다. 이러한 대체 구체예는 본 개시의 사상 및 범주 내에 포함되는 것으로 간주된다.

Claims

B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물로서, 폴리리보이노신산-폴리리보시티딜산 (PIC), 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, 및 HBsAg를 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, HBcAg를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, HBsAg는 한세눌라 다형체, CHO 세포, 곤충 발현 시스템, 사카로마이세스 세레비시아에, 또는 피키아 파스토리스에 의해 생성되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제2항에 있어서, HBcAg는 대장균, 한세눌라 다형체, 곤충 발현 시스템, 사카로마이세스 세레비시아에, 또는 피키아 파스토리스에 의해 생성되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물은 B형 간염 바이러스 미감염 대상쳉, 만성 B형 간염 바이러스 대상체, 또는 급성 B형 간염 바이러스 대상체에게 투여될 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물은 근육내 주사, 복강내 주사, 정맥내 주사, 피하 주사, 경피 전달, 피내 전달, 비강 전달, 안과적 전달, 경구 전달, 혀밑 전달, 종양 부근 전달, 및 종양내 전달로 이루어지는 군으로부터 선택된 한가지 방법에 의해 대상체에게 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 항생물질은 토브라마이신, 안트라사이클린, 부티로신 설페이트, 겐타마이신, 하이그로마이신, 아미카신, 다이베카신, 네브라마이신, 베타-락탐, 네오마이신, 푸로마이신, 스트렙토마이신, 스트렙토조토신, 및 카나마이신을 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 폴리아미드 화합물은 스퍼미딘 염, 스퍼미딘, N-(3-아미노프로필), N-(3-아미노프로필)-1,4-부탄다이아민, 스퍼민 BR, 스퍼민, OS-다이메틸포스포라미도티오에이트, 폴리리신, 및 아미노글리코시드를 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 양이온은 칼슘, 카드뮴, 리튬, 마그네슘, 세륨, 세슘, 크로뮴, 코발트, 중수소, 갈륨, 요오드, 철, 및 아연을 포함하는 군으로부터 TT선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, HBsAg 대 PIC의 비율은 1:50 내지 1:5의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제10항에 있어서, HBsAg 대 PIC의 비율은 1:50, 1:40, 1:30, 1:25, 1:20, 3:50, 1:15, 1:10, 또는 1:5인 것을 특징으로 하는 조성물.
제2항에 있어서, HBcAg 대 PIC의 비율은 1:50 내지 1:5의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제12항에 있어서, HBcAg 대 PIC의 비율은 1:50, 1:40, 1:30, 1:25, 1:20, 3:50, 1:15, 1:10, 또는 1:5인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물 중의 PIC의 농도는 250 μg/단위 용량 내지 6000 μg/단위 용량의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제14항에 있어서, 조성물 중의 PIC의 농도는 500 μg/단위 용량, 1000 μg/단위 용량, 1250 μg/단위 용량, 1500 μg/단위 용량, 2000 μg/단위 용량, 또는 3000 μg/단위 용량인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물 중의 HBsAg의 농도는 10 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제16항에 있어서, 조성물 중의 HBsAg의 농도는 10 μg/단위 용량, 20 μg/단위 용량, 30 μg/단위 용량, 40 μg/단위 용량, 50 μg/단위 용량, 60 μg/단위 용량, 70 μg/단위 용량, 80 μg/단위 용량, 90 μg/단위 용량, 또는 100 μg/단위 용량인 것을 특징으로 하는 조성물.
제2항에 있어서, 조성물 중의 HBcAg의 농도는 10 μg/단위 용량 내지 100 μg/단위 용량의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제18항에 있어서, 조성물 중의 HBcAg의 농도는 10 μg/단위 용량, 20 μg/단위 용량, 30 μg/단위 용량, 40 μg/단위 용량, 50 μg/단위 용량, 60 μg/단위 용량, 70 μg/단위 용량, 80 μg/단위 용량, 90 μg/단위 용량, 또는 100 μg/단위 용량인 것을 특징으로 하는 조성물.
제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 한 단위 용량은 0.1 ml 내지 250.0 ml의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제20항에 있어서, 상기 단위 용량은 0.1 ml, 0.15 ml, 0.2 ml, 0.5 ml, 1.0 ml, 1.5 ml, 2.0 ml, 2.5 ml, 3.0 ml, 4.0 ml, 5.0 ml, 10.0 ml, 20.0 ml, 30.0 ml, 40.0 ml, 50.0 ml, 60.0 ml, 70.0 ml, 80.0 ml, 90.0 ml, 100.0 ml, 150.0 ml, 200.0 ml, 또는 250.0 ml인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물은 젤라틴, 당류, 과립당, 락토오스, 말토오스, 트레할로오스, 글루코오스, 저분자 덱스트란, 소르비톨, 폴리소르베이트 20, 만니톨 PEG, 인간 혈액 알부민, 재조합 인간 혈청 알부민, 카프릴산 나트륨, 우레아, 수산화 알루미늄, 페놀 레드, 염화 마그네슘, 염화 칼륨, 염화 나트륨, 티오황산 나트륨, 2수소 칼륨, 아스코르브산, 트라이클로로메탄, 페놀, 및 티오메르살을 포함하는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 물질을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물은 추가로 적어도 하나의 생리적으로 허용되는 완충제를 포함하고, 생리적으로 허용되는 완충제는 아세테이트 완충제, 트리스아민 완충제, 중탄산염 완충제, 탄산염 완충제, 인산염 완충 식염수를 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물의 PH는 6.0 내지 8.0의 범위인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물은 액체 또는 고체 형태이고, 상기 액체 형태는 비경구용 용액, 현탁액, 연고, 에멀션, 액적, 시럽, 및 겔을 포함하는 군으로부터 선택되며; 상기 고체 형태는 건조 분말, 냉동 건조 분말, 정제, 캡슐, 좌제, 과립, 및 당의정을 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하는 방법으로서, 대상체에게 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조성물은 PIC, 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, 및 HBsAg를 포함하는 것인 방법.
제26항에 있어서, 조성물은 추가로 HBcAg를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제26항 또는 제27항에 있어서, 상기 방법은 조성물을 대상체에게 2개월마다 1회, 2개월마다 2회, 2개월마다 3회, 2개월마다 4회, 2개월마다 5회, 1개월마다 1회, 1개월마다 2회, 3주마다 1회, 3주마다 2회, 2주마다 2회, 2주마다 1회, 또는 매주 1 회 투여하는 것을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 HBV 미감염 대상체, 만성 HBV 대상체, 또는 급성 HBV 대상체인 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서, 상기 대상체는 인간 또는 동물인 것을 특징으로 하는 방법.
B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 안정적인 조성물로서, 폴리리보이노신산-폴리리보시티딜산 (PIC), 적어도 하나의 항생물질 또는 폴리아미드 화합물, 적어도 하나의 양이온, 및 HBsAg를 포함하며;
HBsAg 대 PIC의 비율은 1:50 내지 1:5의 범위인 것인, 안정적인 조성물.
제31항에 있어서, HBcAg를 포함하며, HBsAg 대 PIC의 비율은 1:50 내지 1:5의 범위인 것을 특징으로 하는 안정적인 조성물.