KR20200049822A

KR20200049822A - 병용 암 치료법

Info

Publication number: KR20200049822A
Application number: KR1020207009182A
Authority: KR
Inventors: 알버트 비. 다이서로스; 나지 하비브
Original assignee: 마이크로벡스, 엘엘씨
Priority date: 2017-09-01
Filing date: 2018-08-29
Publication date: 2020-05-08
Also published as: US20240189422A1; US20190070289A1; CN111315396A; US11839655B2; EP3675891B1; EP3675891A4; JP2020532553A; WO2019046377A1; EP3675891A1; CA3073992A1

Abstract

주입에 의해 투여되는 PD-1 또는 PD-L1 항체와 같은 체크 포인트 억제제 항체 성분을 포함하는, 일반적인 기간 내에 환자에게 투여하기 위한 2개의 별개의 면역 요법 치료법을 병용함으로써 암 환자를 치료하기 위한 방법 및 병용, 및 피하 투여되는 TAA/ecdCD40L 백신 성분, 여기서 투여되는 초기 항체 성분에는 적어도 몇 개의 연속적인 항체 부스트가 이어지고, 투여되는 초기 백신 성분에는 적어도 수 개의 연속적인 백신 부스트가 있으며, 이때 각각의 초기 및 부스트는 적어도 상기 일반적인 시간의 기간으로서, 상기 2개의 별개의 면역 요법 치료법의 병용 투여는 단독 요법으로서 단독으로 투여될 때 2개의 별개의 면역 요법 성분 치료법 중 어느 하나의 치료 효과에 비해 향상된 치료 효과를 제공한다.

Description

병용 암 치료법

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2017년 9월 1일자로 출원된 미국 가출원 번호:62/553,363; 2017년 9월 25일자로 출원된 62/562,636; 및 2017년 12월 6일에 출원된 62 /595,106 및 2018년 1월 29일에 출원된 미국 출원 제 15/882,181호에 개시되어 있으며, 그 개시 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

본 발명은 암 환자 개인에게 투여를 위해 TAA/ecdCD40L 치료 백신과 조합된 항-체크 포인트 억제 항체로 구성된 암에 대한 병용 요법을 사용함으로써, 신체가 암 세포에 대한 면역 반응을 증폭시킬 수 있도록 신체 자체의 면역 시스템을 향상시키는 것에 관한 것이다. 항-체크 포인트 억제 항체 요법과 병용될 때 출원인의 백신의 부가 효과는 단일 요법으로서 사용될 때 백신 또는 항-체크 포인트 억제 항체 요법보다 암성(cancerous) 종양을 제거하기 위한보다 효과적인 치료 접근법을 제공한다.

본원에 기재된 출원인의 실험은, (i) 첫 번째 실험(실험 1)에서 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터의 단일 요법 피하 주사의 효과를, 현재 시판되고 있는 항-PD-1 체크 포인트 억제 항체 요법의 단일 요법 복강 내 주사에 의한 효과와 여러 번에 걸쳐 상이한 대상에게 개별 투여하여 비교하도록 설계되었다. (ii) 두 번째 실험(실험 2)에서 2가지 요법(백신 벡터 요법 및 체크 포인트 억제제 PD-1 항체 요법)의 병용은 인간 MUC-1 항원에 대해 양성인 마우스 유방암 E3 세포주의 성장 속도를 어느 것보다 크게 억제할 수 있다. 단독으로 적용되는 두 가지 치료법 중 다른 기준 중에서, 본 출원인의 목표는 PD-1 항체와 TAA/ecdCD40L 백신의 병용 투여가, 종양 결절로 유입되는 항원 특이적 T 세포의 수를 증가시켜 (i) 개체에서 정상 조직(비 암성 종양)의 파괴가 감소된 종양 세포 사멸 갯수에 의한 효능 증가, (ii) 개체의 생존 기간 증가, 및 (iii) 비교적 짧은 기간에 걸친 항체의 감소된 용량 수준을 허용하는지 여부를 결정하는 것이었다.

종양에 대한 CD8 이펙터 T 세포의 반응을 억제하는 종양 세포상의 PD-L1 리간드와 T 세포상의 PD-1 수용체의 상호 작용으로부터 T 세포를 방출하기 위한 항-PD-1 체크 포인트 억제 항체 요법의 현재 사용은 잘 알려져 있다. 출원인의 백신 플랫폼은 현재 면역 자극성 단백질 CD40L을 종양 항원 특이적 방식으로 사용하여 수지상 세포를 활성화 시키고,이어서 신체의 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포를 활성화시켜 표적 항원을 보유하는 다른 세포를 공격한다.

현재 실험 연구에서, Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터 요법(단독 및 항-PD-1 체크 포인트 억제 항체 요법과 병용)의 항암 활성은 인간 MUC-1 유전자에 대해 양성인 동종이식(syngeneic) E3 마우스 유방암 세포주를 보유하는 면역 적합성 BALB/c 마우스에서 평가되었다. E3 마우스 유방암 세포주는 면역 요법 관련 제품의 효능을 시험하기 위해 동종이식 종양 모델로서 사용되어왔다. 연구는 종양 부피, 생존 및 체중을 정기적으로 관찰하면서 대략 16-18주 동안 수행되었다. 이 특정 실험에서, 아데노 바이러스 발현 벡터가 백신으로서 사용되었지만, 논의될 바와 같이 백신의 몇몇 대안적인 버전이 존재한다.

출원인의 백신 벡터는 분비성 폴리펩타이드를 암호화하는 전사 단위를 포함하고, 상기 폴리펩타이드는 CD40 리간드의 세포 외 도메인(ecd)의 상류(upstream)에 종양 항원 상류의 분비 신호 서열을 포함하며, 이는 CD40L을 분비 가능하게 하는 막 횡단 도메인이 없거나 실질적으로 모두 존재한다. 또한, 유효량의 백신 벡터를 투여함으로써 종양 항원을 발현하는 세포에 대한 면역 반응을 생성하는 방법이 제공된다.

정의

"TAA"는 표적 관련 항원(target associated antigen) 및/또는 종양 관련 항원(tumor associated antigen)을 의미한다. TAA가 관심 항원이 될 것이다. 예를 들어 뮤신 항원일 수있다.

"암"또는 "종양"은 암종, 육종, 흑색종, 림프종, 백혈병에 관계없이 고형 또는 비고형암 유형의 모든 종류의 암 또는 암 전이를 의미한다.

"Ad"는 아데노 바이러스 벡터를 의미하지만, 생체 내에서 투여 될 때 표적 세포로 들어가서 암호화된 단백질을 발현할 수있는 임의의 바이러스 또는 비 바이러스 발현 벡터가 사용된다. 아래의 "벡터"정의를 참조하라.

"ecd"는 CD40 리간드의 세포 외 도메인을 의미하고 분비를 억제하는 막 통과 도메인을 적어도 배제한다.

"MUC-1"은 뮤신 항원의 임의의 다른 형태가 사용될 수 있지만 한 유형의 뮤신 항원을 지칭한다.

"sig"는 분비 신호를 의미한다.

"AB"는 항체를 의미한다.

"㎍"는 마이크로그램을 의미한다.

"mg"은 밀리그램을 의미한다.

"mm"은 밀리미터를 의미한다.

"sc"는 피하를 의미한다.

"VPU"는 단위당 바이러스 입자를 의미한다.

"DC"는 수지상 세포를 의미한다.

"기준선(baseline)"은 실험 1 및 2에 대해 1일에서 종양 부피(TV)를 의미한다. 1일에 연구 개시에 대해 50-100mm³ 사이의 TV 선택에 대해서는 표 1 및 2의 무작위화 및 연구 개시를 참조한다.

"유효량"은 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료할 때 수용자에서 면역 반응을 생성(또는 생성에 기여)하는데 효과적인 본 발명의 교시에 따른 암 작용제 투여 및/또는 치료의 양을 의미한다. "유효량" 또는 용량 수준은 다양한 인자에 의존할 것이고 치료되는 장애, 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 바이러스 벡터의 제거 속도, 바이러스성 벡터와 함께 사용되거나 일치하는 약물, 장애의 중증도, 환자의 임상 병력, 환자의 연령, 체중, 성별, 식이, 신체 상태 및/또는 일반적인 건강, 치료 기간 등에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 실험에 사용된 명시된 양보다 많거나 적을 수 있으며, 치료 유효량을 결정하기 위해 고려된 사항에 의존한다. 치료적 유효량을 결정할 때 고려되는 다양한 일반적인 고려 사항은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어, Gilman et al., eds., Goodman 및 Gilman의“치료의 약리학적 기초, Pergamon Press; 및 레밍턴의 제약 과학, Mack Publishing Co., PA, Easton.가 있다.

"병용 요법", "병용 치료"또는 "병용으로"는 적어도 상기 2개의 별개의 치료제를 사용하여, 소정의 시간 내에 적어도 동시에 및/또는 상이한 시간에 적어도 백신 및 체크 포인트 억제제 치료를 의미한다 .

"체크 포인트 억제제" 및/또는 "항체"는 어떻게 투여되는지에 상관 없이, 신체의 T 세포를 사용하여 면역 체계가 부분적으로 또는 전체적으로 암을 공격하는 것을 방지할 수 있는 신체 내 체크 포인트의 차단을 해제하기 위해 개인 (또는 동물)에게 투여하기 위해 상업화 및/또는 판매되는지 여부에 관계없이 설계된 하나 이상의 상업용 약물 및/또는 비 상업용 약물을 의미한다.

"PD-1"은 체크 포인트 억제제 항체의 일례를 의미한다.

"세포주"는 본 출원의 실험예에서 BALB/c 마우스의 hMUC-1 양성 E3 마우스 유방암 세포주를 의미한다(Victoria Carr-Brendel et al, Cancer Research 60 : 2435, 2000; EL-Nasir Lalani et al., JBC 266 : 15420, 1991).

"PFU"는 단위 부피당 플라크를 형성 할 수있는 입자의 수를 의미한다.

"TGI"는 종양 성장 억제(tumor growth inhibition)를 의미한다.

"MHC"는 주조직 적합성 복합체(major histocompatibility complex)를 의미한다.

"SEM"은 구조 방정식 모델링(structural equation modeling)을 의미한다.

"Kaplan-Meier"또는 "K-M"은 제품 한계 추정기로도 알려진 Kaplan-Meier 추정를 의미하고, 수명 데이터에서 생존 함수를 추정하는 데 사용되는 비모수 통계이다. 의학 연구에서 종종 치료 후 일정 시간 동안 생존하는 환자의 비율을 측정하는 데 사용된다. 이 평가자는 Edward L. Kaplan과 Paul Meier의 이름을 따서 명명되었으며, 이들은 각각 미국 통계 협회 저널에 유사한 사본을 제출했다.

"MDSC"는 골수-유래 억제 세포(myeloid-derived suppressor cell)를 의미한다.

"CD11b"는 골수 억제 세포에 대한 마커이다.

"ORR"은 전체 반응 속도(overall response rate)를 의미합니다.

"TAA"는 종양/표적 관련 항원(tumor/target associated antigen)을 의미한다.

"분비"는 융합 단백질 TAA/ecdCD40L과 관련하여 사용되며, 융합 단백질은 TAA/ecdCD40L 분비가 일어나지 않는 세포의 막 횡단 도메인과 같은 요소와 반대되는 융합 단백질의 분비가 발생하는 요소(분비 또는 신호 서열과 같은)를 포함하는 것을 의미한다.

"항원"은 인간, 포유 동물, 조류 또는 다른 동물이 면역 반응을 생성할 수 있는 광범위한 임의의 항원 또는 이의 부분을 의미한다. 본 출원에서 사용된 항원은 광범위하게 면역 반응이 지시될 수 있는 하나 이상의 항원 결정기를 함유하는 분자를 지칭한다. 면역 반응은 세포 매개, 체액 또는 둘 다일 수 있다.

"벡터"는 전사 단위(일명 "발현 벡터")를 함유하는 용어이고, 본원에 사용 된 바와 같이 생체 내 투여시 표적 세포로 진입하여 암호화된 단백질을 발현할 수있는 바이러스 및/또는 비 바이러스 성 발현 벡터를 지칭한다. 생체 내 전달 및 외인성 단백질의 발현에 적합한 바이러스 벡터는 잘 알려져 있으며 아데노 바이러스 벡터, 아데노 관련 바이러스 벡터, 레트로 바이러스 벡터, 백시니아 벡터, 폭스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터 등을 포함한다. 바이러스 벡터는 바람직하게는 정상 세포에서 복제 결함이 된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,669,942; 6,566,128; 6,794,188; 6,110,744 및 5,133,029를 참조하라. 벡터는 정맥 내, 동맥 내, 근육 내, 피하 등과 같은 비경구로 투여될 수 있다. 투여는 또한 경구, 비강, 직장, 경피 또는 에어로졸 흡입일 수있다. 벡터는 볼루스(bolus)로서 투여되거나 천천히 주입될 수 있다. 본 출원에서 벡터는 바람직하게는 피하 투여된다.

본원에 사용된 "전사 단위"는 발현 벡터와 관련되고, RNA 폴리머라제에 의해 단일의 연속적인 mRNA 가닥으로서 전사되는 DNA의 스트레치를 의미하며, 전사의 개시 및 종결에 대한 신호를 포함한다. 전사 유닛은 프로모터 및 선택적으로 임의의 상류 또는 하류 인핸서 요소와 같은 전사 및/또는 번역 발현 제어 요소와 작동 가능하게 연결되어 있다. 유용한 프로모터/인핸서는 사이토 메갈로 바이러스(CMV) 즉시-초기 프로모터/인핸서이다. 미국 특허 번호 5,849,522 및 6,218,140을 참조하라.

본원에 사용된 "CD40 리간드"(CD40L)는 CD154 또는 TNF5로 알려진 분자의 전체 길이 또는 부분을 지칭한다. CD40L은 N-말단에 세포질 도메인, 막 관통 영역 및이어서 C-말단에 세포 외 도메인( "ecd")을 갖는 II 형 막 폴리펩타이드이다. 달리 명시하지 않는 한, 전체 길이 CD40L은 본원에서 CD40L로 지정된다. 마우스 및 인간으로부터의 CD40L의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 당업계에 잘 알려져 있다. 또한, CD40L의 의미 내에는 융합 단백질과 함께 면역 반응을 유도하는 리간드의 능력을 변경시키지 않는 보존적 아미노산 변화 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 서열의 변형이 포함된다.

TAA/ecdCD40L 백신 플랫폼

TAA/ecdCD40L 표적 백신 플랫폼은 하나 이상의 출원인에 의해 여러 특허 및 공보에 완전히 기재되어 있다. CD40L은 면역 자극 단백질이다. CD40L 단백질의 변형된 형태인 세포 외 도메인(ecd)은 수지상 세포(DC)상의 CD40 수용체에 대한 TAA에 부착되어 수지상 세포를 활성화시키고 클래스 I 및 클래스 II MHC에서의 인간 MUC-1 항원의 제시를 촉진(선택된 뮤신 단편을 사용하여)시키고 MUC-1 항원은 인간 MUC-1 양성 암 세포를 공격하고 사멸시키는 T 세포를 활성화시킨다. 예를 들어, 미국 특허 번호 8,119,117, 미국 특허 번호 8,299,229 및 / 또는 미국 특허 번호 9,533,036을 참조하라. TAA(표적 관련 항원 및/또는 종양 관련 항원)는 암 환자의 특정 부류의 관심 대상 표적 항원이다. 미국 특허 제 8,299,229 호에서, TAA는 인간 뮤신 항원의 단편이고, 특히 인간 MUC-1은 관심의 항원이다. 따라서, TAA/ecdCD40L은 항-PD-1 체크 포인트 억제 항체와 대조적으로, 관심있는 종양(항원 특이적)을 표적으로 하는 표적 백신으로서, T 세포상의 PD-1 수용체에 결합하지만, 임의의 특정 종양 관련 항원(항원 비특이적)을 표적하는 것은 아니다 .

본 발명에 사용하기 위해 적용될 수 있는 이 백신의 여러 버전이 있다 : (a) TAA/ecdCD40L 전사 단위가 초기 프라이밍 주사로 사용된 복제 능력이 없는 아데노 바이러스 벡터(Ad-sig-TAA/ecdCD40L)에 매립된 후 TAA/ecdCD40L 단백질의 적어도 2 회의 피하 주사; (b) 백신이 TAA/ecdCD40L 단백질로만 구성된 것, 및 (c) TAA/ecdCD40L 단백질의 전사 단위가 플라스미드 DNA 발현 벡터에 삽입되는 것. TAA는 링커를 통해 강력한 면역 자극 신호 CD40 리간드(CD40L)의 세포 외 도메인의 아미노 말단에 연결된다. 본 실험에 사용된 바람직한 TAA/ecdCD40L 단백질은 뮤신 항원 단편을 포함하고 아데노 바이러스 발현 벡터 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L이다. 본 출원에 사용되는 아데노 바이러스 발현 벡터 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L의 구성은 본 출원인 중 하나가 공동 발명자로 열거된 미국 특허 제 8,299,229호에서 수집되거나 도출될 수 있다. 상기 아데노 바이러스 발현 벡터의 구성이 상당히 상세하게 언급 된 상기 '229 특허의 열 13 내지 16을 참조한다. 또한, 특허 명세서 및 도면 전체에서 발현 벡터 및 아데노 바이러스 발현 벡터에 대한 논의 및 설명을 참조한다.

TAA를 CD40L에 부착시키는 것은 (a) 수지상 세포(DC)뿐만 아니라 B 세포 및 T 세포상의 CD40 수용체에 TAA/ecdCD40L 단백질의 결합이, 이들 세포를 활성화시켜 노인의 CD4 헬퍼 T 세포의 원형질 막에서 누락된 CD40L 신호를 대체한다; 그리고 (b) 일단 TAA/ecdCD40L 단백질이 DC의 CD40 수용체에 결합되면, TAA가 클래스 I 뿐만 아니라 클래스 II MHC 제시 경로를 통해 처리될 수 있는 방식으로 전체 TAA/ecdCD40L 단백질이 수지상 세포(DC)로 내재화된다. 활성화 된 TAA가 적재된 DC는 이어서 국소 림프절(8)로 이동하여 TAA 특이적 CD8 이펙터 T 세포의 활성화 및 확장을 유도할 수 있다.

이들 항원 특이적 CD8 이펙터 세포는 림프절에서 수가 증가하여 림프절에서 말초 혈액으로 빠져 나간다. 항원 특이적 CD8 이펙터 T 세포는 혈관 내 구획을 빠져 나와 염증 또는 감염의 혈관 외 부위로 들어간다. 이 백신이 염증 부위에서 항원 특이적 CD8 이펙터 T 세포를 증가 시킨다는 것을 보여줄뿐만 아니라, TAA/ecdCD40L 단백질에 의한 B 세포의 활성화 및 확장은 혈청 내의 TAA 특이적 항체 수준을 증가시킨다.

미국 특허 제 9,533,036호에 언급된 바와 같이, 출원인의 백신은 암 항원 또는 감염원 항원에 대해 면역화가 되는 젊고 건강한 개인과 비교하여 감소된 수준의 CD40 리간드를 나타내는 CD4 T 세포를 갖는 개체의 면역 반응성을 증가시킨다(고령자뿐만 아니라 감소된 수준의 CD40 리간드를 갖는 어린 개체를 포함하는 경우). 이는 암 또는 감염원 항원 및 ecdCD40 리간드를 갖는 분비성 융합 단백질을 암호화하는 전사 단위를 갖는 유효량의 발현 벡터를 개체에게 투여함으로써 달성되며, 여기서 발현 벡터 백신의 초기 투여 후 다수의 백신의 후속 부스트를 수행한다. 또한 언급한 바와 같이, 백신 요법은 1년 이상의 장기 기억(long-term memory)을 제공한다.

임의의 이론에 의해 구속되기를 원하지는 않지만, 벡터의 피하 주사 부근에서 감염된 세포는 뮤신 항원/CD40 리간드 융합 단백질을 방출하고, 이어서 항원 제시 세포 상의 CD40 수용체에 결합하고, 결합된 융합 단백질은 예를 들어, Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 발현 벡터로 감염된 세포 주변의 수지상 세포와 같은 항원 제시 세포에 의해 단백질이 흡수된다. 이어서, 내재화 된 인간 뮤신 항원은 생성된 뮤신 항원 펩타이드가 소포체로 트래피킹되어 프로테아좀에서 소화되어 클래스 I MHC 분자에 결합할 것이다. 결국 수지상 세포는 수지상 세포의 표면에서 클래스 I MHC 분자에 결합된 인간 뮤신 항원을 제시할 것이다. 이어서, 활성화 된 종양 항원-로드 항원 제시 세포(DC)는 백신 발현 벡터의 최초 주사 부위의 림프 배수 영역에 있는 국소 림프절 또는 비장과 같은 2차 림프 기관을 보유하는 림프구로 이동한다.

인간 뮤신 항원/ecdCD40L 단백질의 2주 연속 방출 동안, 종양 관련 항원을 보유한 세포를 인식하고 사멸시킬 수 있는 CD8 세포 독성 T 세포 림프구는 활성화되고 항원이 로딩된 수지상 세포의 존재에 의해 림프절 및 비장에서 확장될 것이다. 벡터 감염된 세포로부터의 연속 방출에 의한 뮤신 항원 특이적 세포 독성 T 세포의 자극 및 확장의 연속적인 성질은 비 분비성인 CD40 리간드에 연결된 인간 뮤신 항원으로 구성된 융합 단백질을 코딩하는 전사 단위를 보유한 벡터를 사용하여 가능한 것보다 더 큰 면역 반응을 생성하는 것으로 여겨진다. 실험예에서, TAA는 인간 MUC-1의 인간 뮤신 항원 펩티드이지만, 다른 펩티드 및 다른 항원이 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 8,119,117에서, HPV의 E6 또는 E7 단백질의 사용이 보여진다. 미국 특허 제 8,299,229 호에서, column 8에는 TAA로서 사용될 수있는 뮤신 펩티드를 갖는 표 1이 제시되어 있다.

바람직한 구체예에서, 면역-치료 발현 벡터는 바이러스 발현 벡터 또는 비 바이러스 성 발현 벡터일 수 있고; 예 : 아데노 바이러스 발현 벡터; 항원 단편은 MUC1, MUC2, MUC3, MUC3A, MUC3B, MUC4, MUC5AC, MUC5B, MUC6, MUC7, MUC8, MUC9, MUC12, MUC13, MUC15, MUC16, MUC17 및 MUC19-MUC22를 포함하는 군으로부터 선택된 뮤신으로부터 유래된 것; 뮤신 항원은 뮤신의 세포 외 도메인으로부터의 단편을 포함하고; 또는 뮤신의 하나 이상의 직렬 반복; 본 발명에 사용된 뮤신 항원 단편은 MUC1로부터 유래되고; 전사 단위는 종양 항원과 CD40 리간드 사이의 링커를 암호화하는 서열을 포함한다. 적합한 링커는 길이 및 조성이 다양할 수 있다. 발현 벡터는 전사 단위의 전사를 제어하기 위한 인간 사이토 메갈로 바이러스 프로모터/인핸서를 포함할 수 있다. 종양 세포는 뮤신 패밀리 이외의 것일 수 있고, 임의의 종류 또는 특징의 암 세포 일 수 있으며, 방법은 암 세포 또는 뮤신에 대한 세포 독성 CD8+ T 세포의 생성에서 다른 것들 중에서도 결과를 초래한다. 암은 조절되지 않은 성장, 침습 또는 전이를 겪는 대상체의 임의의 세포일 수 있다. 암은 골수성 백혈병, 방광암, 뇌암, 유방암, 전립선 암, 난소암, 신경계 암, 두경부암, 두경부 편평 세포 암종, 신장암, 폐암, 예를 들어 소세포폐암 및 비소세포 폐암(NSCLC), 췌장암, 결장암 등.

체크포인트 억제제

면역 반응 시스템의 중요한 능력은 신체의 정상 세포와 암 세포와 같이“외래”로 보이는 세포를 구별하는 능력이다. 이 능력은 면역계가 정상 세포를 손상시키지 않으면서 암(외부) 세포를 공격할 수 있게 한다. 면역 반응에 의해 사용되는 하나의 이러한 메커니즘은 면역학적 "체크 포인트"-CD8 이펙터 T 세포 림프구 세포에 존재하는 PD-1 수용체와 같은 분자의 클래스이다. 신체의 정상 세포에서 발현 된 PD-1 리간드 또는 암 환자의 경우, 종양 세포상의 PD-L1이 T 세포의 PD-1 수용체에 결합하면, 이들 T 세포가 억제되고 결국 죽는다. 이것은 신체의 종양 정상 세포가 면역 반응에 의해 부착되는 것을 막는 메커니즘이다. 이것은 또한 암 세포가 면역 반응에 의한 공격을 피할 수 있는 메커니즘이다. T 세포의 PD-1 수용체 및 암 세포의 PD-L1 리간드의 상호 작용을 차단하는 항-PD-1 또는 PD-L1 억제 항체(이는 항체의 다수의 후속 부스트를 갖는 항체의 초기 투여를 포함하나 이에 제한되지 않음)의 투여는 PD-L1 양성 종양 세포의 성장을 억제시킨다. CTLA-4는 일부 T 세포의 또 다른 단백질로 면역계를 점검하기 위한 일종의 "오프 스위치" 역할을 한다.

PD-1은 T 세포라 불리는 면역 세포상의 체크 포인트 단백질이다. 활성화 된 T 세포에는 억제 수용체의 여러 유형의 체크 포인트가 있다. PD-1은 하나의 예일뿐이다. 일반적으로 T 세포가 신체의 정상 세포를 공격하는 것을 막는 일종의 "끄기 스위치" 역할을 한다. 그러나 이펙터 T 세포의 PD-1 수용체가 종양 세포의 PD-L1에 부착될 때, 그 세포는 보호된다. PD-1이 PD-L1에 결합할 때, 그것은 기본적으로 T 세포가 PD-L1만을 갖는 세포를 떠나도록 지시한다. 일부 암 세포에는 다량의 PD-L1이 있어 면역 공격을 피하는 데 도움이 된다. PD-1 또는 PD-L1을 표적으로 하는 모노클로날 항체는 이 결합을 차단하여 암 세포에 대한 면역 반응을 강화시킬 수 있다. 이 항체는 특정 암 치료에 많은 가능성을 보여주었다. 현재의 일반적인 관행은 효능을 달성하기 위해 2년에 걸쳐 일반적으로 정맥 주사 주입(예를 들어, 나노 기술의 사용을 통해 다른 약물 전달 방법이 사용될 수 있지만)이지만 2주 내지 3주마다 체크 포인트 억제제 요법을 투여하는 것이다.

약물 전달은 전형적으로 약물 존재의 양 및 지속 기간 둘 다와 관련된다. 의료 기기 또는 약물 기기 병용 제품이 포함될 수 있다. 약물 전달 기술은 약물 효능 프로파일, 흡수, 분배 및 제거를 수정하여 환자의 편의성 및 규정 준수뿐만 아니라 제품 효능 및 안전성 향상의 이점을 제공한다. 가장 일반적인 투여 경로에는 바람직한 비 침습성 경구(입을 통한), 국소(피부), 경 점막(예 : 직장) 및 흡입 경로가 포함된다. 많은 약물은 효소적 분해에 취약하거나 분자 크기 및 전하 문제로 인해 치료적으로 효과적이기 때문에 효율적으로 전신 순환계로 흡수 될 수 없다. 이러한 이유로, 많은 단백질 및 펩티드 약물은 주사 또는 나노 니들 어레이에 의해 전달되어야 한다. 어쨌든, 체크 포인트 억제제에 대한 임의의 적절한 약물 전달 메카니즘은 주입 이외의 것일 수 있으며 출원인 백신에 대한 피하 투여 접근법의 사용 이외의 것으로 여겨진다.

불행하게도, 체크 포인트 억제제 항체 요법은 일부 암의 치료에서 상당한 진보가 있지만 종양 특이적 항원을 표적으로 하지는 않는다. 더욱이, 암 환자의 많은 부분 집합은 이러한 새로운 면역 요법에 반응하지 않으며, 이는 이들 및 다른 문제를 극복하기 위한 병용 요법에 대한 연구를 강화시켰다. 체크 포인트 억제제 요법을 다수의 다른 가능한 요법 다수와 병용함으로써 체크 포인트 억제제의 효능을 최상으로 증가시키는 방법을 결정하기 위해 현재 많은 연구가 진행되고 있다. 어떤 사람들은 체크 포인트 억제제 요법과 방사선 요법을 결합하는 것이 하나의 해결책이라고 생각한다. 다른 사람들은 체크 포인트 억제제 요법과 화학 요법을 병행하고 있습다. 또 다른 사람들은 화학 방사선 요법과의 병용을 연구하고 있다. 또 다른 사람들은 몇 가지 새로운 분자의 사용을 연구하고 있다. 대부분의 전문가들은 수술, 방사선 및 화학 요법과 같은 전통적인 요법의 대체물로 면역 요법을 구상하지 않는다. 또한, 체크 포인트 억제제 투여 및 스케줄링이 비용 동인(cost driver)인 것으로 알려져 있다. 출원인은 비 표적화된 PD-1 체크 포인트 억제 항체 수용체의 투여를 특정 종양 항원(예를 들어 MUC-1)을 표적으로 하는 TAA/ecdCD40L 백신과 병용함으로써, 이러한 병용이 항-종양 면역 반응의 강도를 증가시킬 수 있고 동시에, 투여 및/또는 용량 스케쥴링을 감소시켜 환자에 대한 부작용을 포함하는 임의의 잠재적 독성을 추가로 감소시킬 수 있다고 생각한다.

출원인은 TAA/ecdCD40L 백신 및 항 PD-1 항체 요법의 병용이 TAA/ecdCD40L 백신 요법으로 적절하게 자극된다면 "저온의" 또는 비염증성(낮은 수준의 침윤성 CD8 이펙터 T 세포) 종양이 반응할 것이라는 견해를 갖는다. 이는 마우스에서 TAA + 피하(sc) 종양 결절에서 TAA 특이적 CD8 T 세포를 증가시키는 표적 요법이다. 5705 페이지의 Fig 4와 5B를 참조하라(Tang YC et al, Journal of immunology 177 : 5697-5707, 2006). 전술한 내용에도 불구하고, 출원인은 이들 2가지 상이한 면역 요법 접근법이 이들의 투여(피하 및 주입 또는 사용된 다른 전달 접근법) 및 그들의 작동 방식 모두에서 현저히 다르다는 것을 이해했다. 체크 포인트 억제제는 T 세포상의 PD-1 수용체와 암 세포상의 PD-L1 리간드의 상호 작용을 차단하기 위해 항-PD-1 또는 PD-L1 억제 항체의 투여에 비-항원 특이적이다. 대조적으로, TAA/ecdCD40L 백신 요법은 항원 특이적이며 수지상 세포 활성화를 통해 작용한다. 분명히 약물 개발은 예측 가능한 과학이 아니다. 완전히 다른 메커니즘을 통해 작동하는 두 가지 별개의 요법을 병용하여 사용하는 것은 여러 가지 이유로 서로 호환되지 않을 수 있다. 따라서, 이 두 가지 별개의 치료법의 호환성을 평가하고 이들의 병용 사용이 양립 가능한지 여부를 결정하는 것이 실험의 목표였으며, 그렇다면 허용 불가능하거나 참을 수 없는 독성 부작용이 발생할 수 있다. 이러한 이유로, 일부는 예를 들어 환자를 동시에 보다는 오히려 순차적으로 치료함으로써 적어도 하나의 약물에 반응하는 환자의 확률을 최대화하여, 부작용을 감소시키고, 효과가 있을 때 더 많은 투여량을 가능하게 하고, 잠재적으로 치료 비용을 낮출 수있다. 실험의 추가 목표는 항-PD-1 항체 요법에 TAA/ecdCD40L 요법의 추가 또는 병용이 실제로 종양을 저온에서 고온으로 전환 시킬 수 있을뿐만 아니라 백신 요법 단독으로 인한 치료 효과 외에 PD-1 항체 요법에 대한 전체 반응률을 증가시킬 수 있는지 확인하는 것이었다.

실험 프로토콜은 150만 E3 마우스 유방암 세포주(인간 MUC-1에 양성)를 BALB/c 마우스 sc에 주사하고, 종양이 75-100 mm³까지 성장하도록 하고(촉지 가능), Ad-sig-hMUC-1/ecdCd40L 백신 및 항-PD-1 항체로 개별적으로 치료한 후, 상기 백신 및 항체를 병용으로 사용하여 대조군 마우스 또는 E2 대조군 무처리 마우스와 비교하여 실험의 하나 또는 이상의 목표에 대한 답을 결정하는데 도움을 줄 수 있도록 요구했다.

광범위한 실험 후, 일반적인 기간에 걸쳐 항-PD-1 체크 포인트 억제 항체 요법 및 TAA/ecdCD40L 백신 요법의 병용 투여를 포함하는 본 발명은 광범위한 실험 후에 마우스 모델에서 종양 결절의 성장에 대한 억제 효과를 증가시켜 TAA 양성 암 세포의 성장에 대한 병용 투여의 억제 효과가 단독 요법으로서 단독으로 사용될 때 항체 또는 백신보다 유의하게 더 증가하는 것으로 밝혀졌다. T 세포상의 PD-1 수용체와 암 세포상의 PD-L1 또는 PD-L2 리간드와의 상호 작용을 차단하는 체크 포인트 억제제 항체의 예는 예를 들어 펨브로리자맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 트레멜리무맙, 이필리무맙 및 더발루맙을 포함한다. 체크 포인트 억제제의 억제된 효과로부터 T 세포를 방출하여 T 세포가 신체의 종양 세포를 공격할 수 있게 하는 상기 예시적인 항체 또는 유사한 항체 중 임의의 하나 이상을 본원에서 "체크 포인트 억제제"로 지칭한다.

따라서, 이 결과는 PD-1 항체 요법과 병용될 때, 백신 요법이 CD8 이펙터 T 세포의 암성 종양 조직으로의 진입을 촉진시켜서, 저온의 비염증성 암성 종양 조직을 보다 반응성이 높은 암성 종양 조직으로 변환시킨다.

재료&실험 시스템

종 : Mus musculus

계통 : BALB/c

출처 : Envigo

성별 및 연령 : 암컷; 5-6 주

체중 : 20-22g

그룹 수 : 8

동물/그룹 수 : n= 10

암 세포주 : hMUC-1 양성 E3 마우스 유방암 세포주

세포 접종 밀도 : 100㎕의 무혈청 배지(20% 마트리겔 함유)에서 1.5×10⁶ cells/동물

세포 주입 부위 : 유선 지방 패드 (4번째 쌍)

연구 개시 : 종양 부피(50-100mm³)

연구 기간 : 16-18 주

시험 항목 : Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터; ^*항-PD-1 항체

보관 조건 : Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L : -60℃

(참고 :이 바이알은 -60℃의 Revco 냉동고에 보관된다. 바이알을 녹일 때, 바이알은 얼음의 중심핵이 거의 감지되지 않을 때까지 회전되고 그 후 수조에서 제거된다).

항-PD-1 항체 : 2-8℃

복용량 및 투여 일정 : Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터-1, 8, 22, 40 및 60일에 0.1×10⁸ PFU, 1×10⁸ PFU, 10×10⁸ PFU

항-PD-1 항체-1, 4, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 40 및 60 일에 20㎍, 100㎍ 및 250㎍/동물

벡터 투여 경로 : 피하-Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신

복강 내-항-PD-1 항체

종양 부피 및 체중 측정 : 이틀에 한 번

종양 종점 종양 세포 주사 후 60일 또는 종양 결절의 크기가 1cm (1000mm³)보다 큰 경우

참고 : 항-PD-1 항체는 BIOXCELL-VivoMAb 항-마우스 PD-1(CD279); 클론 : RMP1-14 카탈로그 번호 : BE0146

E3 세포주

출원인의 실험에 사용된 E3 세포주는 CRT(Cancer Research Technology, Limited)의 라이센스하에 이 실험의 목적으로 공급되었다. 인간 MUC-1 양성 E3 마우스 유방암 세포주인 E3 세포주로 알려진 물질에 관한 상세한 내용은 Victoria Carr-Brendel et al., Cancer Research 60 : 2435, 2000; El-Nasir Lalani et al., Journal of Biological Chemistry 266 : 15420, 1991.에 출판된 상세 설명이 개시되어 있다.

연구 세부사항

실험을 위한 연구 세부 사항은 하기 표 1에 정리되어 있다.

E3 세포 접종 밀도	연구 시작 시 종양 부피	동물/그룹의 개수	그룹	치료	용량	투여 경로	투여 스케쥴	종양 부피&체중 측정	연구 종료&종점
100㎕의 무혈청 배지(20% 마트리겔 함유)에 1.5×10⁶ 의 hMUC-1 양성 E3 마우스 유방암 세포를 동물의 유선 지방 패드에 접종	50-100mm	실험 1-10	그룹 I&Ⅱ-벡터 백신	Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터	0.1×10⁸ PFU	피하	1, 8, 22, 40 및 60일	이틀에 한번	종양 세포의 주입 60일 후 또는 종양 결절의 크기가 지름으로 1 cm(1000mm3)보다 커질 때 종점: 생존(100일) 피하 종양(종양 부피 vs 시간)의 성장 속도 희생될 때 피하 종양의 조직병리학적 분석 IHC-유선 지방 패드 종양-CD8 이펙터 T 세포 염색됨
		10		Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터	1.0×10⁸ PFU	피하	1, 8, 22, 40 및 60일

		10	그룹 Ⅲ&Ⅳ-항 PD-1 항체 (항-마우스 PD-1 In vivoMAb(CD279); 클론: RMP1-14 카탈로그#: BE0146; 출처-BIOXCELL)	항-PD-1 항체	20㎍/동물	복강 내	1, 4, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 40 및 60일
		10		항-PD-1 항체	100㎍/동물	복강 내	1, 4, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 40 및 60일

		10	그룹 Ⅴ (무처리 대조군 마우스)
		실험 2-각 그룹에 5마리의 동물	그룹 A&B 벡터 백신 및 항-PD-1 항체 그룹 C-대조군(무처리)	Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터 항-PD-1 항체	그룹 A-0.1×10 ⁸ PFU&20ug 그룹 B-1.0×10 ⁸ PFU&1000ug	백신 벡터-피하 항-PD-1 항체-복강 내	1, 8, 22, 40 및 60일 1, 4, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 40 및 60일	이틀에 한번

참조: 실험 1에서 백신 발현 벡터(Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L) 및 항-PD-1 항체(그룹 Ⅰ-Ⅳ)의 용량은 상기 표 1에 언급된 값에 따라 단일 요법으로서 시험 마우스를 분리하도록 제공되었고, hMUC-1 양성 E3 마우스 유방암 세포주의 성장 속도를 부분적으로 억제하는 것으로 나타났으며, 40일째에 상기 확인된 2가지 요법 병용에서, 그룹 A 및 그룹 B가 병용 요법 실험으로 실험 2에 대해 선택되었다. .

투약 스케줄 : (백신 및 항체의) 바람직한 투약 스케줄 요법 병용이 상기 표 1 및 하기 표 2에 개시되어 있지만, 저용량 및 고용량 병용 요법 모두에 대해, 상이한 기간에 걸친 대안적인 투여가 유방암 세포주, 및/또는 면역-관련 반응 기준에 따라 측정 된 최상의 전체 반응 및 전체 생존을 위해 대안적으로 결정될 수 있는 상이한 종류의 암에 대해 사용될 수 있다. 바람직한 투여량 및 투여 사이의 타이밍은 또한 바람직하게는 백신 및 항체의 별도의 임상 용도에서 별도로 결정된 것일 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 항체 투여 투여량은 또한 환자의 킬로그램 체중 당 밀리그램 수에 따라 달라질 수 있으며, 이에 의해 투여는 2주 또는 3주마다 이다.

종양 세포의 준비-실험 1

본 실험에서 모든 세포 배양 절차는 멸균 기술에 따라 후드에서 수행되었다. E3 세포주는 T75 및 T150 mm 배양 플라스크를 사용하여 10% 소태아 혈청(FBS)이 보충된 배지에서 성장되었다.

백신 또는 항-PD-1 항체는 마우스에서 공지된 치료 수준(백신의 1억 VP 및 항-PD-1 항체의 100 마이크로그램)의 용량 수준 및 기타로 하기에 언급된 바와 같이 투여된다. 예를 들어, 용량은 마우스의 치료 수준(천만 VP의 백신 및 20 마이크로그램의 항-PD-1 항체) 미만이었다. 동물 용량 수준은 또한 마우스에 대해 알려진 치료 수준인 250㎍ 만큼 될 수 있다.

하기 차트에 도시된 것과 유사한 인간 용량 수준은 일반적으로 0.1×10¹¹ VPU 내지 1.0×10¹¹ 벡터 입자(VP)의 범위에 있는 반면, 항-PD-1 항체의 유사한 인간 항체 용량 수준은 일반적으로 20mg에서 250mg의 범위에 있어야 한다. 일부 항체의 용량 수준(PD-1, PD-L1 및/또는 CTLA 4)의 투여는 인간 체중을 기준으로 한다. 예를 들어, 일부 항체의 인간 용량 수준은 일반적으로 2 mg/kg 내지 12 mg/kg이다.

임의의 요법 및/또는 약물의 투여와 함께, 독성 가능성에 대한 신중한 고려가 필요하므로, 제공될 임의의 치료의 여러 용량 수준을 신중하게 평가하는 것이 중요하다. 이를 염두에 두고, 본 실험을 위해 선택된 용량 수준은 실험 용량 수준을 최대화하기 보다는 최소화하기 위해 기울어졌으며, 이는 인간에 대한 병용 요법을 적용할 때 가이드로서 사용될 수 있다는 것을 이해한다. 따라서, 실험에서, 출원인은, 인간을 위한 임상 시험에서 출원인이 사용한 독성 문제가 발생하지 않은 낮은 등가 백신 용량 수준과, 인간 적용에 사용되는 독성 효과가 최소화되는 것으로 여겨지는 항체의 낮은 동량 용량 수준을 사용하는 것을 선택한다.

항-PD-1 항체의 독성 : 항-PD-1 항체의 독성이 검토되었다(J.Naidoo, DB Page and BT Li et al., Toxicities of the antni-PD-1 and anti-PD-1 immune checkpoint antibodies. Annals of Oncology 26:2375-2391, 2015.) 이러한 부작용에는 경증자가 면역 질환과 유사한 내분비선 뿐만 아니라 피부, 간, 폐, 위장관의 염증 상태가 포함됩니다. 따라서, 효과적이라면 치료를 위해 가능한 최저 용량 수준의 항-PD-1 항체를 사용하는 것이 바람직할 것이다.

출원인은 실험 2에서 그들의 TAA/ecdCD40L 백신을 체크 포인트 억제 항체와 선택적으로 병용함으로써, 항체는 TAA/ecdCD40L 백신과 함께 제공될 때 훨씬 더 낮은 용량으로 효과적일 수 있고/있거나 더 적은 용량의 항-PD-1 항체가 필요할 수 있기 때문에, 항-PD-1 항체로 인해 항-PD-1 항체와 관련된 이들 독성 문제 중 일부가 감소될 수 있는 가능성이 있다고 믿었다.

시험 화합물	경로	용량	용량 부피	스케쥴
Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 벡터	등 피하 주사	0.1×10⁸ PFU	100㎕/동물	1, 8, 22, 40 및 60일
		1×10⁸ PFU	200㎕/동물

항-PD-1 항체	복강 내 주사	20㎍/동물	100㎕/동물	1, 4, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 40 및 60일
		100㎍/동물	100㎕/동물

연구 개요

관찰 및 종점(End Points)

● 체중 및 종양 부피는 연구 기간 동안 이틀에 한번 측정되었다.

● 종양 부피는 하기 수학식을 사용하여 계산되었다:

종양 부피(mm³)= V=Pi/6(LD)(PD)2 LD=가장 긴 지름 및 PD=LD에 수직인 직경

● % 종양 성장 억제(TGI)는 비히클 대조군과 통계적으로 계산되고 비교되었다.

● 생존 데이터 또한 나열되고 묘사되었다.

● 부검 : 종양 수집 : 실험 기간 말(100일)에 살아있는 모든 동물을 안락사시키고 유선 지방 패드의 종양 결절을 수확했다.

● 조직학 : 종양 조직을 24시간 동안 10% 중성 완충 포르말린에 고정시켰다. 이어서 종양 조직을 처리하고 파라핀 포매된 조직 블록을 제조하였다. 5 마이크론 두께의 미세한 부분을 취하여 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 병리학자는 종양, 다형성, 섬유 혈관 기질, 유사 분열 인물, 괴사 부위 등의 형태 및 염증 변화에 대해 슬라이드를 검사했다.

● IHC : 염색되지 않은 폴리-1-라이신 슬라이드를 마우스 CD8 이펙터 T 세포의 IHC 감지에 사용했다.

도면

도 1은 실험 1에서, 각각의 5개 그룹(4 개의 단일 요법 그룹 및 대조군) 각각에 대한 일(1일 내지 57일, 55일째에 모든 대조군 마우스가 만료됨) 별 종양 부피(mm³) 성장을 그래프로 도시한다.

도 1A는 실험 1에서, 실험 1이 종료된 99일까지의 일(days) 별 각각의 5개의 그룹(4개의 단일 요법 그룹 및 하나의 대조군) 각각에 대한 종양 부피(mm³) 성장을 그래프로 도시한다.

도 2는 제 1 실험 부분의 57일에 도 1의 각각의 단일 요법 그룹에 대한 종양 부피 및 대조군의 55일의 동물 생존 기간에서 마지막 날에 TGI(종양 성장 억제)에 대한 도 1의 그래픽 표현의 표 목록이다.

도 3은 55일까지 종양 부피 성장 동역학 및 실험 1 및 실험 2의 그래픽 표현이며, 일 별 종양 부피(mm³) 성장을 도시한다.

도 4는 언급된 종양 부피 컬럼이 실험 2의 55일에 있고, % T/C(대조군 부피에 대한 종양 부피)가 55일에서의 종양 성장 백분율을 나타내는, 도 3의 그래픽 표현의 표 목록이다.

도 5는 대조군 동물 생존 기간의 마지막 날 55까지의 두 대조군과 함께, 실험 1의 2개의 단일 요법 고용량 그룹 및 실험 2의 고용량의 실험 2의 단독 일에 대한 종양 성장 동역학을 그래프로 도시한다.

도 5a는 99일에 실험 1의 종결 및 113일에 실험 2까지의 두 대조군을 갖는 고용량 조합(실험 2) 및 각각의 고용량 단일 요법(실험 1)의 종양 성장 동역학을 그래프로 도시한다.

도 6은 55일째의 고용량 그룹 및 실험 1 및 2의 대조군 및 % T/C의 도 5의 그래픽 표현 값의 표 목록이다.

도 7은 55일까지의 두 대조군과 함께 실험 1의 2개의 단독의 단일 요법 저용량 그룹 및 실험 2의 저용량 병용의 종양 성장 동역학을 그래프로 도시한다.

도 7a는 99일째 실험 1의 종결 및 113일째 실험 2의 종료까지의 두 대조군을 갖는 저용량 조합(실험# 2) 및 각각의 단일 요법(실험 # 1)의 종양 성장 동역학을 그래프로 도시한다.

도 8은 55일째에 저용량 그룹 및 실험 1 및 2에 대한 대조군 및 % T/C의 도 7의 그래픽 표현을 표로 나타낸 것이다.

도 9는 백신 및 PD-1 항체의 고용량 및 저용량 병용 둘 다의 치료(그래픽 및 표 형식) 및 113일까지의 마우스 모델에서 E3 유방암의 종양 부피 성장을 억제하는 실험 2에 대해서만 대조군을 도시한다.

도 10은 대조군, 단일 요법 및 고용량 병용에 대해, 자연적으로 죽은 마우스에 대해서만 실험 1 및 2의 중간 생존율 백분율의 그래픽 묘사이다.

도 10A는 자연적으로 사망한 마우스에 대해서만 대조군, 단일 요법 및 저용량 병용에 대해 실험 1 및 2의 중간 생존율 백분율의 그래픽 묘사이다.

도 11 및 11a는 함께 자연적으로 죽은 마우스에 대한 두 대조군, 4개의 단일 요법 그룹, 고용량 병용 및 저용량 병용에 대해 E3 종양 보유 마우스의 평균 생존의 KM(Kaplan-Meier) 추정치의 치료 그룹별 표 목록을 도시한다.

도 12는 대조군과 비교하여 고용량 및 저용량 백신 및 PD-1 항체 병용으로 처리된 E3 SC 종양 결절 마우스에서 CD8 양성 세포에 대해 양성인 세포 백분율을 실험 2에 대해 나타내는 막대 그래프이다.

도 13은 실험 2에 대해, 고용량 및 저용량 백신 및 PD-1 항체 병용으로 처리 된 E3 SC 종양 결절 마우스에서 CD11b 양성 세포에 대해 양성인 세포 비율 대조군과 비교한 막대 그래프이다.

도 14는 백신 및 PD-1 항체로 처리된 E3 SC 종양 결절 마우스에서 CD8 및 CD11b에 대해 양성인 세포 백분율인 도 12 및 13의 실험 2의 표 목록이다.

실험의 값은 실험 1에서 1-10 동물 및 실험 2의 1-5 동물의 평균 +/- SEM으로 각 그룹에서 표현된다. 통계 분석은 2-way ANOVA에 의해 수행된 후 그래프 패드 프리즘(버전 5)을 사용하여 Bonferroni 사후 테스트에 의해 수행된다.

상기 참조된 그래픽 도면에서의 모든 그래픽 표현과 관련하여, 종양 성장 곡선에서의 갑작스런 변화는 그래픽 도면에서의 각각의 그룹으로부터 하나 이상의 동물의 사망률/인간 안락사에 기인한다.

실험 1 평가/결과

실험 1-인간 MUC-1 양성 E3 마우스 유방암 세포주의 성장률에 대한 TAA/ecdCD40L 백신 및 단일 요법으로서의 항-PD-1 항체 투여의 효과(각각 개별적으로 제공됨)의 연구 : 본 실험에서 전반적인 고려의 첫 번째 부분으로서, 출원인은 TAA/ecdCD40L 백신 플랫폼 및 항-PD-1 항체를 테스트하여 이들 각각에 백신 및 항체를 투여하여 각 요법을 단독 요법으로 단독으로 사용하고 병용 요법으로 사용하지 않을 때의 종양 성장을 억제할 효과적인 치료 능력을 개별적으로 결정한다. 즉각적인 효능 연구의 종양 성장 동역학을 제어하기 위해 개별적으로 투여될 때 이들 치료적 능력은 도 1에 도시되어 있는데, 여기서 "y"축은 입방 mm³에서의 종양 성장을 나타내고 "x"축은 일 단위의 시간을 나타내고, 도 2에 표시된 표와 함께 도 1에 기록된 데이터를 표 형식으로 추가로 나열한다.

본 명세서의 표 1 및 표 2에 부분적으로 반영된 바와 같이, 마우스에 먼저 E3 유선 세포주를 주사한 다음 약 40일 후에 종양 성장이 대략 76mm³ 일 때 병용 연구가 시작되었다. 이어서, 0.1×10⁸ PFU 및 AB20의 저용량 병용 그룹 및 1.0×10⁸ PFU 및 AB100의 고용량 병용 그룹을 각각 실험 2의 1일에 개시하였다. 초기 적용 가능한 벡터 백신을 피하 주사 하였다(고용량 또는 저용량 병용) 8일, 22일, 40일 및 60일에 각각의 (고용량 또는 저용량) 벡터 백신 부스트가 이어졌다. 동시에, 초기 PD-1 항체 투여(복강 내)도 1일에 개시되었다(4일, 7, 10일, 13일, 17일, 20일, 23일, 40일 및 60일에 각각의 용량 및 저용량 병용 그룹). 그 후 각각의(고용량 또는 저용량) 부스트가 투여되었다. 백신 부스트도 벡터 였지만, 융합 단백질 부스트는 2014년 9월 9일에 출원된 미국 특허 제 8,828,957호에 도시된 바와 같이, 최초의 벡터 백신 주사 후에 투여 되었을 수 있다. 병용 실험 투여 기간은 60일이고, 병용 투여 기간은 예를 들어 120일, 180일, 360일 및/또는 2년일 수 있다. 대안적으로, 백신 및 약물의 병용 투여는 예를 들어 초기 60일 후에 임의의 시점에서 중단될 수 있어서, 체크 포인트 억제제 또는 백신이 단일 요법으로서 계속될 수 있다. 독성 및 대상체의 최대 관심사인 것으로 결정된 다른 문제에 따라 이러한 모든 가능성이 고려될 수 있다.

도시된 바와 같이,이 실험 부분은 57일에 걸쳐 수행되었고, 55일에 모든 대조군 동물이 만료되었다. 도시된 바와 같이, TAA/ecdCD40L 백신 및 항-PD-1 항체의 시험된 모든 용량은 대조군으로 나타낸 무처리 대조군 마우스에서 종양 결절의 성장과 비교하여 성장하는 종양 결절의 성장을 억제하였다. 실험 1은 기준선 또는 1일부터 57일의 기간에 걸쳐 수행되며, 여기서 y축 상의 상기 언급된 기준선 종양 부피는 도 1에서 76 mm³이다.

다른 도면은 55일 기간을 초과하여 계속되는 실험을 도시할 것이지만, 55일 기간은 대조군 마우스가 55일까지 생존했기 때문에 실험 1의보다 대표적인 그림으로 간주되어, 비교군 대비 대조군은 55일 이후에는 도시되지 않았다. 그럼에도 불구하고, 생존 및 부수적인 고려 사항은 실험 1 및 실험 2에 대해 100일 이후까지 시험을 계속하기 위한 기반이다.

실험 1에서, 각각 10마리의 마우스로 5개의 실험 그룹이 구성되어 있다. 그룹 VI은 치료를 받지 않은 "대조군 그룹이다. 두 가지 백신 용량 그룹이 있다. 하나의 백신 용량 그룹 I은 0.1×10⁸ VP 였고, 다른 백신 용량 그룹 II는 1.0×10⁸ VP였다. PD-1 항체 용량 수준 그룹은 2개였다. 제1 항체 그룹 III은 20㎍으로 처리되었고, 제2 항체 그룹 IV는 100㎍으로 처리되었다. 도 1 및 도 2에 도시된 바와 같이, 각각의 단일 요법 치료(백신 및 PD-1 항체)는 종양 성장을 늦추거나 억제하는 능력을 가졌다. 각 백신 및 항체의 더 높은 용량 수준은 더 느린 종양 성장을 유발하는 데 더 효과적인 것으로 나타났다. 그럼에도 불구하고, 종양 성장은 여전히 모든 경우에서 일어났다. 이 실험예에서, 치료제가 1일에 처음 투여되었을 때, 기준선 판독값은 도 1에 나타낸 바와 같이 76 mm³이다. 도 1A는 실험 1이 종료되었을 때 55일 내지 99일에 걸쳐 수행된 단일 요법 성장 동역학을 도시한다.

도 2의 표에서“종양”(mm³)이라는 중간 열에서 숫자“n”은 여전히 생존해있는 동물의 수를 나타낸다. 57일까지의 첫 번째 실험에서 다수의 동물이 종양 성장의 결과로서 사망했다는 것이 주목된다. 도 1에 도시된 종양 성장 곡선의 관찰에 기초하여, 실험 2에 대한 병용(PD-1 용량 및 백신 용량) 요법의 40일에 다양한 종양 성장 곡선 중에서 선택하도록 결정하였다. 이를 기초로, 실험 2에 대한 그룹 A 병용 요법으로서 저용량 백신 0.1×10⁸ PFU 및 AB20㎍을 병용하는 것으로 결정되었고, 또한, 실험 2에 대한 그룹 B 병용 요법으로서 고용량 백신 1.0×10⁸ PFU 및 AB100㎍을 병용하기 위해 실험 2에 대한 그룹 C로 대조군을 지정하였다. 실험 2에서 이들 3개의 그룹 각각에서 마우스 수는 5마리이다. 실험 2에 사용된 마우스는 실험 1에 사용된 동일한 출처 및 동일한 종 및 마우스 계통으로부터 유래되었다. 따라서, 실험 2는 실험 1의 40일에 시작되었고 실험 1은 계속되었다.

실험 2 평가/결과

병용 치료 투여 시험 : 종양 성장 : 도 3 및 4, 각각의 실험 1 및 2에 대한 2개의 제어 곡선, 실험 1의 백신 및 항체 단일 요법 곡선, 및 고용량 군(1.0×10⁸ PFU 및 AB100ug), 저용량 군(0.1×10⁸ 및 AB20μg)의 백신 요법 및 항체 AB 요법이 병용된 경우를 도시하고 있다. 즉 도 3에 도시된대로, 공통 시간 동안 병용 요법으로서 투여될 때, 2개의 조합된 요법이 동시에 및/또는 상이한 시간에 투여되는 경우, 병용은 성공적으로 억제할 뿐만 아니라 또는 백신 또는 항체 단일 요법의 개별 투여에 의해 달성되는 것보다 종양 성장의 억제를 증가시키지만, 고용량 백신 및 AB100 그룹 병용은 대략 8일과 20일 사이에 초기 단계에서 기준선 미만으로 종양 퇴행을 유발할 수 있었다.

상기 표 1 및 2에 부분적으로 반영되고, 실험 1과 유사하게, 마우스에 먼저 E3 유선 세포주를 주사한 다음 약 40일 후에 종양 성장이 대략 75mm³ 일 때 각 동물 그룹 A 및 B에 대한 백신 및 항체 병용(고용량 및 저용량 병용)이 피하 주사되어, 연구를 개시하였고, 그 후 각각의 벡터 백신 용량 수준에 대해 8일, 22일, 40일 및 60일에 및 각각의 PD-1 항체 용량 수준에 대한 4, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 40 및 60일에 부스트(개별 그룹의 동물에 적합한 고용량 및 저용량)가 수행되었다. 백신 부스트 또한 벡터였지만, 출원인의 미국 특허 제 8,828,957 호에 도시된 바와 같이, 초기 벡터 백신 주사 후에 융합 단백질 부스트가 투여될 수 있음을 다시 주목해야한다. 도시된 바와 같이, 병용 요법은 1일, 40일 및 60일에 모두 투여되었다. 초기 용량은 동일한 날에 투여되었고, 2개의 마지막 용량은 동일한 날(40 및 60 일)에 투여되었다. 공통 기간 내에 투여되었지만 나머지 요법 부스트(백신 및 항체)는 각각 다른 날에 투여되었다.

도 4의 표 목록은 고용량 및 저용량(그룹 I-IV) 및 각각에 대한 조합 요법(그룹 A 및 B)에 대해 실험 1 및 2(그룹 VI 및 그룹 C)의 대조군, 및 백신 및 항체의 별도의 단일 요법 투여를 포함하여 실험 1의 55일과 비교한 실험 2의 55일에서의 도 3의 결과를 도시한다. 55일에서의 종양 부피를 나타내는 도 4의 종양 부피 컬럼 및 T/C의 백분율(55일에 대조군 부피에 대한 종양 부피)로부터, 병용 요법의 이점은 부가적인 것 이상인 것으로 나타났다. 실제로, 각각의 경우, 고용량 및 저용량에서, 증가는 2배 증가에 근접하거나 이보다 더 컸다. 예를 들어, 도 4의 우측 칼럼에서, 고용량 % T/C(대조군 성장에 대한 종양 성장의 백분율)는 20% 인 반면, 고용량 단일 요법(0.1×10⁸ PFU 백신 및 AB20)은 각각 36% 및 37% 였다.

실험 1의 43일과 실험 2의 43일에 각각 다른 관점에서 그리고 조금 더 이른 시점에서, 단일 요법 실험 1과 병용된 실험 2에 대한 각각의 대략적인 측정으로부터, 단일 요법 고용량 백신 종양 부피 평균은 228mm³ 였고, 단일 치료 AB100 고용량 종양 부피 평균은 237mm³ 였으며, 반면에 병용된 고용량 종양 부피 평균은 116mm³ 였다. 병용 요법의 후자의 종양 억제 능력은 실험의 희망적인 목표 였지만, 본 명세서에서 진보된 많은 이유 때문에 예상되지 않았으며 억제의 정도는 놀라웠다.

또 다른예, 실험 1의 43일 및 실험2의 43일에, 각각의 단일 요법 실험 1 및 병용된 실험 2에 대한 대략적인 측정으로부터, 단일 요법 저용량 백신 종양 부피 평균은 323mm³, 단일 요법 AB20 저용량 종양값 평균은 343mm³이고, 병용된 저용량 종양 부피 평균은 153mm³ 였다.

도 5 및 6은 실험 1에서 별도의 고용량 백신 및 항체 단일 요법 투여와 비교하여 실험 2에서의 고용량 병용 단독의 비교를 제공한다. 도 5A는(각 단일 요법 및 병용 요법에 대해) 실험 2가 종료된 113일째 확장된 고용량 그래픽을 나타낸다. 유사하게, 55일까지, 도 7 및 8은 실험 1에서의 별도의 저용량 백신 및 항체 단일 요법 투여와 비교하여 실험 2에서의 저용량 병용의 비교를 제공한다. 도 7A는 113일까지 연장된 저용량 그래픽을 도시한다. 실험 2가 종료되었을 때 도 9는 추가로 실험 2에 대한 대조군과 비교하여, 저용량 및 고용량 병용 요법의 성장 동역학을 도시하였고, 실험 2는 생존 고려를 위해 113일째까지 계속되었고, 출원인은 도시된 바와 같이 고용량 병용이 보다 양호한 성장 억제를 나타내는 보다 바람직한 병용임을 확인하였다.

병용 치료 투여 : 생존 :도 10에 나타낸 바와 같이, 고용량 병용에 대한 병용 시험에서 동물의 생존에 관해서는, 고용량 병용 처리된 마우스가 상당한 기간 동안 생존한 것은 놀랍고 예상치 못한 일이었다. 도 11A에 열거된 바와 같이, E3 종양 보유 마우스의 중간 생존의 카플란-마이어 추정치를 사용하여, 고용량 조합 그룹 A의 KM 중간 생존은 99.5이며, 다른 모든 그룹을 상당한 차이로 초과 하였다. 도 10A 및 11(KM 평균 생존 표)은 저용량 조합 요법에 대한 생존을 도시한다.

실험의 일부로서, 관찰된 병리학적 변화를 평가하기 위해 모든 처리 그룹의 종양 슬라이드의 면역 조직 화학을 수행한 후 CD8 및 CD11b 양성 세포에 대한 정량적 평가를 수행하였다. 각 CD8 및 CD11b 염색에 대한 프로토콜이 개발되었다. 각각의 경우에, 각각의 슬라이드에 대한 3개의 상이한 현미경 필드로부터의 300개의 세포가 CD8 및 CD11b 마커에 대해 계수되었다. 양성 세포 백분율은 CD8 및 CD11b 마커에 대해 300개의 세포로부터 계산되었다.

도 12에 도시된 바와 같이, 실험 2에서, 백신 요법 및 PD-1 항체 요법으로의 병용된 치료는 각각의 경우 대조군과 비교하여 양성 CD8 이펙터 T 세포의 백분율 증가를 분명히 유도하였다. CD8 퍼센트 양성 세포는 저용량 병용과 비교하여 고용량 병용에서 약간 더 높았다. 대조군(무처리) 그룹에서는 양성 CD8 세포가 관찰되지 않았다. 고용량 병용에 대한 오차 막대는 처리되지 않은 대조군 마우스의 오차 막대와 겹치지 않는다. 따라서, 이 결과는 PD-1 항체 요법과 병용될 때, 백신 요법이 CD8 이펙터 T 세포의 암성 종양 조직으로의 진입을 촉진시켜서, 저온의 비염증성 암성 종양 조직을 보다 반응성이 높은 암성 종양 조직으로 변환시키는 것으로 여겨진다.

동시에,도 13에 도시된 바와 같이, 고용량의 항체 및 백신 요법의 치료는 대조군과 비교하여 CD11b에 양성인 세포의 백분율의 감소를 유도하였다. CD11b에 대한 양성 세포 백분율은 고용량 병용 치료와 비교하여 저용량 병용 치료에서 약간 더 높았다. CD11b 양성 세포는 대조군(무처리) 그룹에서 최대였다. CD11b는 골수 억제 세포에 대한 마커이다. 따라서, TAA/ecdCD40L 백신-PD-1 항체 병용 치료는 도 13에 도시된 바와 같이 E3 종양 결절에서의 미세 환경을 변화시켰다. 따라서, TAA/ecdCD40L 백신과 PD-1 항체의 병용에 의한 치료는 면역 조절 환경을 억제에서 면역 자극으로 전환시키는 것으로 여겨진다. 이는 도 14의 표 목록에 추가로 도시되어 있으며, 대조군과 비교하여 CD8 이펙터 T 세포의 백분율 증가 및 CD11b 양성 세포의 백분율 감소를 나타낸다.

CD11b 세포의 백분율 감소(골수-유래 억제 세포 또는 MDSC라고도 함)는 T 세포 증식 및 활성화를 억제하는 것으로 알려져 있기 때문에 양성 지표이다. 만성 염증 상태(바이러스 및 박테리아 감염) 또는 암에서 골수 분화는 MDSC의 확장으로 기울어진다. 이러한 MDSC는 염증 부위 및 종양에 침투하여, 예를 들어 T 세포 및 NK 세포(natural killer cell)를 억제함으로써 면역 반응을 정지시킨다. MDSC는 또한 사이토카인의 발현 및 TGF-β와 같은 인자를 통해 혈관 신생, 종양 진행 및 전이를 가속화시킨다. 임상적 및 실험적 증거에 따르면, MDSC 침윤이 높은 암 조직은 환자의 예후가 나쁘고 치료에 대한 내성과 관련이 있는 것으로 나타났다. 따라서, 이들은 주요 치료 표적이 되었으며, 현재의 경우, 병용 요법이 단일 요법에 비해 현저한 개선이 되도록 추가적인 지원을 제공한다.

어떠한 이론에도 구속되고 싶지는 않지만, 실험 결과에 근거하여, 비 표적화에 반응하지 않는 비염증성 또는 저온 종양(낮은 수준의 침윤성 CD8 이펙터 T 세포)이 항 PD-1 항체 요법은 조합 표적 백신 요법으로 PD-1 항체 요법에 반응하는 고온 종양이 되는 것으로 여겨지고, 이로 인해 TAA/ecdCD40L은 마우스에서 TAA 피하 종양 결절에서 TAA 특이적 CD8 T 세포를 증가시킨다. 또한 표적 및 비 표적 접근법이 상이한 유형의 치료 투여(피하 및 복강 내)와 함께 있기 때문에, 이는 효능 및 생존 측면에서 유의한 치료 효과를 갖는 바람직한 효과를 생성하는 것으로 여겨진다.

요약하면, 전술한 내용에도 불구하고, 전체 실험 결과는 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 요법이 치료 반응을 유도할 수 있는 자체 능력 이외에도 촉매 및/또는 자극의 역할을 한다는 증거가 제출되었다. 수명 연장을 위한 생존 시간의 증가를 포함하여 PD-1 항체 요법에 대한 전체 치료 반응 속도의 증가를 가능하게 한다. 명백하게, 예측할 수 없는 암 면역 요법 분야에서 놀랍게도 현저한 개선을 생성하기 위해 두 요법의 상호 작용 및/또는 협력이 존재하며, 이는 암 환자의 치료에서 새로운 접근법으로 제시되고 있다. 따라서, 출원인의 발명은 PD-1 항체 요법과 병용될 때 이중 치료 능력을 나타내는 것으로 여겨지는 백신 요법을 제공한다.

물론, 추가 백신 부스트, 추가 항체 부스트 및/또는 다른 부가적인 치료 형태들이 상기 확인된 공통 기간 내외에서 추가로 투여될 수 있음을 이해해야 한다. 실험 목적으로 60일 동안. 또한, 병용 요법의 적용을 위한 일반적인 기간은 90일, 120일 또는 심지어 180일 이상일 수 있다. 하나 이상의 환자에 대한 병용 요법은 현재 2년 동안 체크 포인트 억제제 항체 요법을 투여하기 위해 현재 처방된 기간 동안 지속될 수 있다. 이 기간 동안에는 용량 변화가 있을 수도 있다. 예를 들어, 초기 백신 용량은 벡터일 수 있지만, 부스트는 융합 단백질일 수 있다. 다른 변형은 용량 증가가 다른 용량 수준이 될 수 있다. 예를 들어, 초기 항체 용량은 100 mg 일 수 있고, 연속적인 항체 부스트는 80 mg일 수 있다. 상기 실험의 목적은 TAA/ecdCD40L 백신 및 항체 요법의 병용이 공통 시간 프레임 내에 함께 적용되는 경우, 암 환자에 대한 치료 및/또는 생존 효과를 향상시키는 심각한 부작용을 일으키지 않으면서 어떤 형태의 상호 작용 및/또는 상승 작용을 생성할 수 있고/있거나 촉매로서 작용할 수 있는지 여부를 결정하는 것이다.

실험 연구의 결과들

1. 백신 및 PD-1 항체의 병용은 각각 치료법 단독에 비해 적어도 2-폴드의 요인에 의해 E3 종양 세포의 성장을 억제하는 효과를 가진다.

2. 두 치료법의 병용은 단독 요법으로 사용되는 각각의 치료법에 의해 달성될 수 없는 하나 또는 그 이상의 이점을 제공한다.

3. 각각의 병용 요법은 병용의 전체적인 효과(효능, 지속성 및/또는 안전성)을 물질적으로 향상시키는데에 의미있는 기여를 제공한다.

4. Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 처리된 마우스(그룹 Ⅱ)(71일)는 무처리 대조군 마우스(각각 56일 및 62.5일의 그룹 Ⅵ 또는 C)에 비해 오래 생존했다.

5. 항-PD-1 처리 마우스(그룹 Ⅵ)은 무처리 대조군 마우스(56일 또는 62.5일)에 비해 오래 생존했다(75일).

6. TAA/ecdCD40L 및 항체의 병용 투여된 마우스(그룹 A)는 단독 백신 요법(71일) 또는 단독 항체 요법(75일) 처리된 마우스 보다 오래 생존했다(99.5일)

7. TAA/ecdCD40L 백신 및 항-PD-1 병용 처리는 CD8 이펙터 T 세포의 증가 및 추가적으로 종양 결절 내의 골수-유래 면역 억제 세포(MDSCs)를 억제하는 세포의 감소를 유도하고, 이로 인해 면역 조절의 억제로부터 면역 조절 환경을 증가시킨다.

다양한 이점

출원인의 실험으로부터 입증된 바와 같이, 예를 들어 본 명세서에서 설명된 방식으로 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신을 체크 포인트 억제제(예를 들어, PD-1)와 함께 사용하는 병용 치료적 접근을 사용하는 것을 밝히는 것은 많은 중요한 이점이있다.

TAA/ecdCD40L 백신 요법은 체크 포인트 억제제 항체 요법과 함께 종양 결절로 유입되는 항원 특이적 T 세포의 수를 증가시켜 효능을 증가시키고, 항원 표적화 백신 및 PD-1 치료 투여의 현재의 통상적인 또는 표준 기간과 비교하여 더 짧은 기간에 걸쳐 항체의 감소된 용량 수준의 항체의 사용 및/또는 용량의 투여로 인해 대상체에서 정상 조직(비 암성 종양)의 파괴를 감소시킨다. 대안적으로, 더 많은 암 환자 집단이 이와 같은 병용에 의해 성공적으로 치료될 수 있다.

강화된 효능과 함께 더 긴 생존 기간이 달성될 수 있다.

치료적 TAA/ecdCD40L 백신의 투여와 병용하여 더 낮은 투여량 수준 및/또는 다수의 항체 투여/주입을 사용함으로써 임상 효능을 감소시키지 않으면서 환자에 대한 독성 문제의 감소.

현재 2년에 걸쳐 2주 내지 3주마다 투여되는 체크 포인트 억제제 요법으로 투여되는 환자를 필요로 하는 용량 빈도의 감소는 효능 감소없이 항체 투여와 관련된 비용을 감소시킬 수있다.

체크 포인트 억제제와 병용된 TAA/ecdCD40L 백신 플랫폼의 적용은, 백신 요법이 면역-치료 기억을 추가로 제공하는 것으로 이전에 입증되었기 때문에 장기간에 걸쳐 생존을 통해 환자에게 이익을 줄 수 있다.

a) 관심있는 종양 항원을 표적으로 하고 b) 백신 단독 요법 단독 또는 항체 단독 요법 단독에 반응하는 환자의 백분율에 비해 복합 면역 요법에 반응하는 환자의 백분율을 확대함으로써 전체 치료의 추가 효과를 증가시킨다 .

백신 요법은 PD-1 항체 요법과 병용될 때, 저온 비염증성 암성 종양 조직을보다 반응성이 높거나 염증이 있는 암성 종양 조직으로 전환시키는 것으로 여겨진다.

상기 다수의 이점은 적절한 투여량 수준에서 병용하여 사용될 때 2개의 요법의 상호 작용이 각각 단독 요법으로서 단독으로 사용될 때 2개의 요법의 합보다 큰 전체 상승 효과 및/또는 상보적인 효과를 생성한다는 것을 강조한다.

Claims

TAA/ecdCD40L 백신 요법 및 체크포인트 억제제 항체 요법 모두를, 일반적인 시간의 기간에 걸쳐, 개인에게 병용 투여하는 것을 포함하고, 단독 요법으로 사용될 때의 백신 또는 체크 포인트 억제제 단독보다 더 큰 치료 효과를 생성하기 위하여, 상기 일반적인 시간의 기간에 걸쳐, 상기 요법의 각각의 순차적인 부스트의 다중 투여를 포함하는, 개인에서 암을 치료하기 위한 면역-치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 TAA/ecdCD40L 백신 요법은 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 발현 벡터를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 백신 요법은 항원 특이적이고 피하로 투여되고 상기 체크포인트 억제제 항체 요법은 항원 비-특이적이고 주입에 의해 투여되는 것인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 일반적인 시간의 기간 중 하나의 날에 초기 백신 요법의 투여 후 적어도 4개의 순차적인 백신 요법 부스트가 이어지고, 상기 일반적인 시간의 기간 중 하나의 날에 초기 체크포인트 억제제 항체 투여 후 적어도 9번의 순차적인 체크포인트 억제제 항체 요법 부스트가 이어지고, 초기 투여 및 부스트는 적어도 60일의 상기 일반적인 시간의 기간에 모두 투여되는 것인, 방법.
제2항에 있어서, 백신 요법을 위한 용량 수준은 0.1×10¹¹ VPU 내지 1.0×10¹¹ VPU 범위에 있는 것인, 방법.
제5항에 있어서, 체크포인트 억제제 항체 요법을 위한 용량 수준은 20mg 내지 250mg의 범위에 있는 것인, 방법.
제5항에 있어서, 체크포인트 억제제 항체 요법을 위한 용량 수준은 2-12mg/kg인 것인, 방법.
추가 부스트를 포함하여 개체에게 투여되도록 구성된 체크포인트 억제제 항체 요법 성분, 및 추가 부스트를 포함하여 개체에게 투여되도록 구성된 TAA/ecdCD40L 백신 요법 성분을 포함하고, 상기 성분 각각의 유효 치료량에서, 병용 투여가 상기 치료 성분 중 어느 하나의 단독 투여에 의한 개체의 면역 반응 증가보다 암을 치료하기 위한 개체의 면역 반응을 증가시키는 능력이 있는, 개인에서 암을 치료하기 위한 약학적 면역-치료 병용.
제8항에 있어서, 상기 체크포인트 억제제 항체 요법 성분은 주입에 의해 투여되는 것으로 설정되고, 상기 TAA/ecdCD40L 백신 요법 성분은 피하 투여되는 것으로 설정되는 것인, 약학적 면역-치료 병용.
제8항에 있어서, 병용 투여의 두 가지 치료적 성분의 각각의 용량 수준은 단독 요법으로 사용되는 두가지 치료적 성분 각각보다, 암 성장을 억제할 수 있고, 생존 가능성을 증가시키는 것인, 약학적 면역-치료 병용.
제8항에 있어서, 병용 투여의 두 가지 치료적 성분의 각각의 용량 수준은 (a) 단독 요법으로 사용될 때 각각 두 개의 치료적 성분보다 암에 대한 CD8 T 세포의 수의 증가를 유도하고, (b) 단독으로 사용될 때 각각 두 개의 치료적 성분보다 골수-유래 면역 억제 세포의 감소를 유도하는 병용 치료적 효과를 발생시키는 것으로 설정된, 약학적 면역-치료 병용.
제8항에 있어서, 백신 요법 성분을 위한 용량 수준은 0.1×10¹¹ VPU 내지 1.0×10¹¹ VPU 범위에 있는 것인, 약학적 면역-치료 병용.
제12항에 있어서, 항체 요법 성분 용량 수준은 20mg 내지 250mg의 범위에 있는 것인, 약학적 면역-치료 병용.
제12항에 있어서, 체크포인트 억제제 항체 요법 성분 용량 수준은 2-12mg/kg의 범위에 있는 것인, 약학적 면역-치료 병용.
제9항에 있어서, 체크포인트 억제제 항체 요법 성분은 PD-L1 항체이고 TAA/ecdCD40L 백신 요법 성분은 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 발현 벡터인 것인, 약학적 면역-치료 병용.
제9항에 있어서, 체크포인트 억제제 요법 항체 성분은 PD-1 항체이고 TAA/ecdCD40L 백신 요법 성분은 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 발현 벡터인 것인, 약학적 면역-치료 병용.
제8항에 따른 약학적 면역-치료 병용을 사용하여 암 환자를 치료하는 방법으로서, 별도의 치료 성분은 각각 일반적인 시간의 기간 내에 투여되고, 상기 각 성분은 상이한 시간 또는 동일한 시간에 투여될 수 있으나, 상기 일반적인 시간의 기간 내에 투여되고 두 성분 모두가 일반적인 시간 중 하나의 날에 초기에 투여되는 것인, 암 환자를 치료하는 방법.
제17항에 있어서, 상기 일반적인 시간의 기간은 적어도 60일 이상이고, 각 요법의 부스트의 두 개 또는 그 이상은 동일한 날에 투여되고, 각 요법의 상기 부스트의 다른 하나는 동시에 투여되지 않는 것인, 암 환자를 치료하는 방법.
첫번째 용량 수준으로 주입하여 투여되는 항원 비-특이적 체크포인트 억제제 항체 요법 성분의 다수 및 두번째 용량 수준으로 피하로 투여되는, TAA가 뮤신 단편인, 항원 특이적 TAA/ecdCD40L 백신 요법의 다수를 포함하고, 백신 요법 성분은 체크포인트 억제제 항체 요법 성분과 병용하여 투여되고, 상기 성분 각각은 첫번째 및 두번째 용량 수준에서 유효량이 설정되고, 체크포인트 억제제 요법 성분의 효능을 증가시켜 환자의 면역 반응을 증가시키고, 단일 요법으로서 작용하는 각 성분에 비해 강화된 면역 반응의 이점을 제공하는, 두 개의 별도의 면역-치료적 성분을 포함하는 암 환자를 치료하기 위한 약학적 병용.
제19항에 있어서, 병용은 백신 요법 용량 수준에서 백신 치료 성분의 초기 접종 이외에 4개 이상의 백신 부스트, 및 체크포인트 억제제 항체 요법 용량 수준에서 항체 치료적 성분의 초기 주입 이외에 10개 이상의 항체 부스트를 포함하는, 약학적 병용.
제19항에 있어서, TAA/ecdCD40L 백신 요법 성분은 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 발현 벡터인 것인, 약학적 병용.
제20항에 있어서, 효과적인 용량 수준에서 두 성분의 병용 투여는 단일 성분으로서 사용되는 상기 치료적 성분보다 더 크게 암 성(cancerous) 종양 성장을 억제하고 환자의 생존 기간을 연장시킬 수 있는 병용 치료적 효과를 유도하는 것인, 약학적 병용.
제21항에 있어서, 백신 요법 성분을 위한 용량 수준은 0.1×10¹¹ VPU 내지 1.0×10¹¹ VPU 범위에 있는 것인, 약학적 병용.
제21항에 있어서, 체크포인트 억제제 항체 요법 성분 용량 수준은 20mg 내지250mg 또는 2-12mg/kg의 범위의 PD-1 또는 PD-L1 항체인 것인, 약학적 병용.
제19항에 있어서, 병용에서의 두 성분은 두 성분이 단독으로 사용될 때에 비해 CD8 T 세포의 증가된 개수를 발생시키는 병용 치료적 효과를 유도할 수 있는 효과적인 용량 수준인 것인, 약학적 병용.
제1항에 있어서, 두 치료법은 상이한 시간 또는 동일한 시간에 투여될 수 있으나, 상기 일반적인 시간의 기간 내에 투여되는 것인, 방법.
환자에서 T 세포의 결합을 차단함으로써 치료법을 제공하기 위해 생체 내(in vivo) 주입으로 투여되는 체크포인트 억제제 항체 치료, 및 환자에서 수지상 세포 활성화를 통해 치료를 유도하기 위해 생체 내(in vivo) 피하 투여되는 발현벡터 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 백신 치료를 포함하고, 첫번째 용량 수준으로 투여되는 초기 체크포인트 억제제 항체는 동일한 첫번째 용량 수준에서 적어도 몇 개의 연속적인 항체 부스트가 이어지고, 두번째 수준에서 투여되는 초기 백신은 동일한 두번째 용량 수준에서 적어도 몇 개의 연속적인 백신 부스트가 이어지고, 초기 투여는 60일 중 하나의 날에 발생하고, 부스트는 일반적인 시간의 기간 내에 투여되도록 하는, 적어도 60일의 일반적인 시간의 기간 내에 환자에게 투여하기 위해 두 개의 별개의 면역-요법 치료법을 병용함으로서 환자에서 암을 치료하는 방법.
제27항에 있어서, 백신 치료를 위한 용량 수준은 0.1×10¹¹ VPU 내지 1.0×10¹¹ VPU 범위에 있는 것인, 방법.
제27항에 있어서, 체크포인트 억제제 항체는 PD-1 항체이고, 치료 용량 수준은 20mg 내지 250mg의 범위 내인 것인, 방법.
제29항에 있어서, 체크포인트 억제제 항체는 PD-L1 항체이고, 치료 용량 수준은 2mg/kg 내지 12mg/kg의 범위 내인 것인, 방법.
제27항에 있어서, 저온으로 여겨지는 환자의 암성(cancerous) 종양은 상기 백신 치료에 의해 고온으로 여겨지는 암으로 변화되어, 환자에서 암 치료에 전체적으로 반응하는 비율을 증가시키는, 방법.
제8항에 있어서, 저온의 종양을 포함하는 것으로 여겨지는 개인의 암은 상기 백신 요법 성분에 의해 저온의 종양에서 고온의 종양으로 변화될 수 있어, 상기 체크포인트 억제제 항체 요법 성분에 의해 환자의 전체적인 반응 비율을 증가시키는, 약학적 면역-치료 병용.
다수의 개별 백신 피하 치료 부스트를 포함하는 첫번째 용량 수준에서 항원 특이적 백신 성분 Ad-sig-hMUC-1/ecdCD40L 및 다수의 항체 성분 치료 부스트를 포함하는 두번째 용량 수준의 항원 비특이적 항체 성분으로 구성되고, 상기 백신 성분 및 항체 성분은 백신 성분을 항체 성분의 효능을 증가시키기 위한 촉매로 작용할 수 있도록 하는 유효량 수준의 양으로 설정되고, 병용은 단일 요법으로 사용된 상기 성분들 중 하나에 대해 암에 대한 환자의 면역 반응을 향상시키도록 적응되는, 환자를 치료하기 위한, 약학적 면역-치료 병용.
제33항에 있어서, 설정된 용량 수준 양은 CD8 이펙터 T 세포 비율의 증가를 유도할 수 있고 골수-유래 면역 억제 세포(MDSCs)의 비율의 감소를 유도할 수 있는, 약학적 면역-치료 병용.
제33항에 있어서, 상기 항체 성분은 PD-1 또는 PD-L1 항체인, 약학적 면역-치료 병용.
제33항에 있어서, 항원 특이적 백신 성분의 용량 수준이 저온으로 여겨지는 암 환자의 종양을 고온으로 여겨지는 종양으로 변환시키는 능력을 가져, 단독 요법으로 사용될 때 항체의 전체적인 반응 비율보다 항체에 대한 암의 전체적인 반응 비율을 증가시키는, 약학적 면역-치료 병용.
제33항에 있어서, 환자의 면역 체계의 증강은 면역 조절 환경의 억제에서 면역 자극으로의 전환을 촉진하도록 구성된 백신 성분 및 항체 성분의 각각의 용량 수준에 의해 달성되는, 면역-치료 병용.
제4항에 있어서, 백신 요법 부스트는 8, 22, 40 및 60일에 제공되고, 항체 부스트는 4, 7, 10, 13, 17, 20, 23, 40 및 60일에 제공되는, 방법.