KR20200051802A - 항-엽산 수용체 알파 항체 접합체 및 이의 용도 - Google Patents

항-엽산 수용체 알파 항체 접합체 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 엽산 수용체 알파(FOLR1)에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 접합체 및 그의 이소폼 및 동족체, 및 약제학적 조성물을 포함하는, 상기 항체 접합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 가변 경쇄는 트라스투주맙의 가변 경쇄이다. 또한 상기 항체 접합체 및 조성물의 제조 방법뿐만 아니라 치료 및 진단 방법에서와 같이 상기 항체 접합체 및 조성물을 사용하는 방법이 제공된다. 상기 항체 접합체는 카밧(Kabat), 코티아(Chothia), 또는 EU 번호 체계에 따른, HC-F404, HC-K121, HC-Y180, HC-F241, HC-221, LC-T22, LC-S7, LC-N152, LC-K42, LC-E161, LC-D170, HC-S136, HC-S25, HC-A40, HC-S119, HC-S190, HC-K222, HC-R19, HC-Y52, 또는 HC-S70으로 이루어진 군에서 선택되는 위치에서의 비천연 아미노산을 포함한다.

Description

항-엽산 수용체 알파 항체 접합체 및 이의 용도
본원은 엽산 수용체 알파(FolRα 또는 FOLR1)에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 접합체 및 약제학적 조성물을 포함하는, 항체 접합체를 포함하는 조성물, 접합체의 제조 방법, 및 접합체 및 조성물을 치료에 사용하는 방법을 제공한다. 상기 접합체 및 조성물은 세포 증식 및 암의 치료 및 예방 방법, 세포 증식 및 암의 검출 방법, 및 세포 증식 및 암의 진단 방법에 유용하다. 상기 접합체 및 조성물은 또한 자가면역 질환, 감염성 질환 및 염증성 상태의 치료, 예방, 검출 및 진단 방법에 유용하다.
엽산 수용체 또는 엽산 결합 단백질(FBP)은 생체 내에서 엽산 및 다른 화합물의 업데이트에 결합하고 기여하는 단일 사슬 당 단백질을 포함한다. 엘우드(Elwood), 1989, J. Biol. Chem. 264:14893-14901. 특정 엽산 수용체는 엽산 및 메토트렉세이트(methotrexate)와 같은 다른 화합물에 대한 높은 친화성 결합 부위를 갖는 단일-사슬 당 단백질이다. 엘우드, p. 14893. 인간 FOLR1 유전자는 3개의 잠재적인 N-연결된 당화 부위를 갖는 약 257개 아미노산을 갖는 30kDa 폴리펩티드인 성인 엽산 수용체를 암호화한다. 엘우드, p. 14893; Lacey 등, 1989, J. Clin. Invest. 84:715-720. 상동 유전자 및 폴리펩티드는 수십 종에서 확인되었다.
성숙한 엽산 수용체 당 단백질은 약 42 kDa의 크기를 가지며 엽산 및 항 엽산의 세포 내로의 내재화에 관여하는 것으로 관찰되었다 엘우드 등, 1997, Biochemistry 36:1467-1478. 인간 암 세포주와 함께, 인간 소뇌 및 신장 세포에서 발현이 관찰되었다. 엘우드 등, 1997, p. 1467. 엽산의 내재화에 더하여, 엽산 수용체는 바이러스, 특히 마르부르크(Marburg) 및 에볼라(Ebola) 바이러스의 세포 진입을 위한 중요한 보조인자인 것으로 밝혀졌다. 챈(Chan) 등, 2001, Cell 106:117-126. 이러한 내재화 특성으로 인해, 엽산 수용체는 진단제 및 치료제의 표적으로서 제안되어 왔다. 예를 들어, 진단제 및 치료제는 엽산 수용체를 발현하는 세포 내로의 내재화를 위해 엽산에 연결되어 왔다. 예를 들어, Leamon, 2008, Curr. Opin. Investig. Drugs 9:1277-1286; Paulos 등, 2004, Adv. Drug Del. Rev. 56:1205-1217을 참고한다.
엽산 수용체 알파(FolRα 또는 FOLR1)는 엽산에 대한 높은 친화성을 갖는 글리코실포스파티딜이노시톨 연결된 세포-표면 당 단백질이다. 신장과 폐의 낮은 수준을 제외하고, 대부분의 정상 조직은 FOLR1을 발현하지 않지만, 높은 수준의 FOLR1이 장액 및 자궁 내막 상피 난소 암(serous and endometrioid epithelial ovarian cancer), 자궁내막 선암종(endometrial adenocarcinoma), 선암종 아형의 비소세포 폐암(NSCLC), 및 삼중 음성 유방암(triple-negative breast cancer, TNBC)에서 발견되었다. FOLR1 발현은 난소 암 환자에서 전이성 병소 및 재발성 암종에서 유지되고, 상피 난소 암 및 자궁내막 암에서의 화학 요법 후에 FOLR1 발현이 관찰되었다. 이러한 특성은, 정상 조직에서 FOLR1의 고도로 제한된 발현과 함께, FOLR1을 암 치료의 유망한 표적으로 만든다. 따라서, 엽산 수용체는 암 및 염증성 상태에 대한 진단제 및 치료제에 대한 잠재적 표적을 제공한다. 이들 엽산 수용체의 특이적 결합 및 표적화를 위해 새로운 항체가 필요하다.
엽산 수용체 알파(FOLR1) 및 엽산 수용체 알파(FOLR1)에 의해 활성화되는 하류 신호전달 과정의 면역 조절을 조절하는 개선된 방법이 필요하다. 또한, 암- 및 암종-형질전환된 세포(cancer- and carcinoma-transformed cells)에서의 엽산 수용체 알파(FOLR1)의 특이적 발현 및 비암 조직(non-cancer tissue)에서의 낮은 발현을 고려해볼 때, 엽산 수용체 알파(FOLR1)를 과발현하는 세포 및 조직을 특이적으로 표적화할 수 있는 개선된 치료제가 필요하다. FOLR1에 대한 항체 접합체는 이러한 질병의 치료 또는 진단을 위해 엽산 수용체 알파를 발현하는 표적 세포로 치료적 또는 진단적 페이로드(payload) 모이어티을 전달하는데 사용될 수 있다.
본원은 엽산 수용체 알파(FOLR1)에 선택적으로 결합하는 항체 접합체를 제공한다. 상기 항체 접합체는 하나 이상의 페이로드(payload) 모이어티에 연결된, 엽산 수용체 알파(FOLR1)에 결합하는 항체를 포함한다. 상기 항체는 공유 결합에 의해 직접적으로 또는 링커에 의해 간접적으로 페이로드에 연결될 수 있다. 엽산 수용체 알파(FOLR1) 항체는 유용한 페이로드 모이어티 및 유용한 링커로서 본원에 상세히 기재되어 있다.
다른 측면에서, 상기 항체 접합체를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 조성물은 약제학적 조성물이다. 임의의 적합한 약제학적 조성물이 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 약제학적 조성물은 비경구 투여용 조성물이다. 추가 측면에서, 본원은 상기 항체 접합체 또는 약제학적 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본원은 상기 항-FOLR1 항체 접합체를 사용하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 하나 이상의 페이로드 모이어티를 엽산 수용체 알파를 발현하는 표적 세포 또는 조직에 전달하는 방법이다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 치료 방법이다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 진단 방법이다. 일부 구체예에서, 방법은 분석 방법이다. 일부 구체예에서, 상기 항체 접합체는 질환 또는 상태를 치료하는데 사용된다. 일부 측면에서, 상기 질환 또는 상태는 암, 자가 면역 질환 및 감염으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 상기 항체 접합체는 인간 엽산 수용체 알파에 결합한다. 일부 구체예에서, 상기 항체 접합체는 또한 인간 엽산 수용체 알파의 동족체(homolog)에 결합한다. 일부 측면에서, 상기 항체 접합체는 또한 시노몰구스 원숭이 및/또는 마우스 엽산 수용체 알파의 동족체에 결합한다.
도 1은, R. Kontermann & S. D
Figure pct00001
bel (Eds.), 항체 공학(Antibody Engineering) vol. 2(pp. 33-51). 스프링거-베라그(Springer-Verlag), 베를린 하이델베르크(Berlin Heidelberg) 내의 Martin A.C.R.(2010). 항체 가변 도메인의 단백질 서열 및 구조 분석(Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains)에서 채택한, CDR-H1에 대한 카밧(Kabat) 및 코티아(Chothia) 번호 체계(numbering system)의 비교를 제공한다.
도 2-4는 본원에 제공된 변이체 항체로부터의 VH 서열(서열번호: 308-366)의 정렬(alignment)을 제공한다. 코티아에 따른 CDR은 하이라이트 표시되어 있고, 카밧에 따른 CDR은 박스로 표시되어 있다.
도 5는, 트라스투주맙 및 본원에 제공된 변이체 항체로부터의 VL 서열(서열번호: 367-369)의 정렬을 제공한다. 코티아에 따른 CDR은 하이라이트 표시되어 있고, 카밧에 따른 CDR은 밑줄이 표시되어 있다.
도 6은, 본원에 개시된 바와 같이 단일 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 KB 자궁경부암 세포로 이식된 마우스에서의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 7a 및 7b는, 본원에 개시된 바와 같이 단일 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 KB 자궁 경부암 세포로 이식된 마우스에서의 종양 성장 곡선 및 25 일째의 종양 크기를 나타내는 그래프이다.
도 8은, 본원에 개시된 2개의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체로 단일-용량 처리한 후 KB 자궁경부암 세포로 이식된 마우스에서 31일째의 최종 종양 크기를 나타내는 산점도(scatter plot)이다.
도 9는, 본원에 개시된 바와 같이 단일 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 KB 자궁경부암 세포로 이식된 마우스에서의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 10a 및 10b는 본원에 개시된 바와 같은 단일 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 KB 자궁경부암 세포로 이식된 마우스에서의 종양 성장 곡선 및 21일째의 종양 크기를 나타내는 그래프이다.
도 11은 본원에 개시된 3개의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체로 단일-용량 처리한 후 KB 자궁경부암 세포로 이식된 마우스에서의 36일째의 최종 종양 크기를 나타내는 산점도이다.
도 12는 본원에 개시된 바와 같은 단일 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스에서의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 13a 및 13b는 본원에 개시된 바와 같은 단일 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스에서의 종양 성장 곡선 및 24 일째의 종양 크기를 나타내는 그래프이다.
도 14a는 본원에 개시된 바와 같은 단일 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스에서의 종양 성장 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 14b는 본원에 개시된 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체로 단일-용량 처리한 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스에서의 21일째의 종양 크기를 나타내는 산점도이다.
도 15는 상이한 엽산 수용체 이소폼(hFOLR1, hFOLR2)을 안정적으로 발현하는 293T 형질전환 세포에 대한 상이한 FOLR1 항체의 결합을 나타내는 플롯을 포함한다.
도 16은 상이한 엽산 수용체 이소폼(hFOLR1, hFOLR2)을 안정적으로 발현하는 293T 형질전환 세포에서의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체의 세포 독성 활성을 나타내는 플롯을 포함한다.
도 17은 본원에 개시된 바와 같은 다양한 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 18a, 18b, 및 18c는 본원에 개시된 바와 같은 다양한 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스에서의 종양 성장 곡선 및 21일째의 종양 크기에 대한 산점도를 포함한다.
도 19a, 19b, 19c, 및 19d는 본원에 개시된 바와 같은 다양한 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체를 투여한 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스에서의 종양 크기를 나타내는 그래프를 포함한다.
도 20은 본원에 개시된 바와 같은 다양한 용량의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체가 투여된 후 Igrov1 난소암 세포가 이식된 마우스에서의 종양 성장 지연을 나타내는 차트이다.
도 21a, 21b, 및 21c는 카보플라틴의 존재 또는 부재 하에 단일 용량의 예시적인 FOLR-1 항체-약물 접합체로 처리된, 확립된 Igrov1 종양을 갖는 동물에서의 종양 성장 차트, 29일째의 종양 크기를 나타내는 산점도, 및 29일째의 종양 성장 억제를 나타내는 차트를 포함한다.
도 22a 및 22b는 확립된 OVCAR3 종양을 갖는 동물에서의 종양 성장 차트 및 31일째의 종양 크기를 나타내는 산점도를 포함한다.
도 23a 내지 23g는 예시적인 FOLR1 항체-약물 접합체가 투여된, 다양한 자궁 내막 환자 유래 이종이식 모델의 종양 성장 곡선을 포함한다.
도 24a 및 24b는 예시적인 FOLR1 항체-약물 접합체, 아벨루맙 또는 이 둘의 조합으로의 처리에 대한 반응으로, MC38-hFOLR1 종양을 갖는 동물의 종양 성장 곡선 및 종양 크기 산점도를 포함한다.
도 25a 및 25b는 예시적인 FOLR1 항체-약물 접합체, 아벨루맙 또는 이 둘의 조합으로의 처리에 대한 반응으로, MC38-hFOLR1 종양을 갖는 동물의 종양 성장 곡선 및 카플란-마이어 생존 플롯(Kaplan-Meier survival plot)을 포함한다.
도 26은 SCID 베이지 마우스(SCID Beige mice)에서의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체의 약동학적 혈장 프로파일을 나타내는 그래프이다.
도 27은 비히클 또는 ADC 분자 1 또는 ADC 분자 17로 처리된 마우스의 혈장에서 검출 된 소분자의 LC/MS 흔적(trace)이다.
도 28은 SCID 베이지 마우스에 투여된 대표적인 FOLR1 항체-약물 접합체의 혈장 안정성(약물-항체 비율, 또는 DAR에 의해 측정됨)을 나타내는 그래프를 포함한다.
도 29는 PBS, 시노몰구스 원숭이 혈장 또는 인간 혈장에서 시험된 바와 같은 다양한 FOLR1 항체-약물 접합체의 혈장 안정성(약물-항체 비율 또는 DAR에 의해 측정됨)을 나타내는 그래프를 포함한다.
도 30은 경쟁자로서 각각의 네이키드 항체(naked antibody)의 존재 하에 다양한 세포에서 ADC 분자 4 및 ADC 분자 21의 세포 독성 활성을 나타내는 그래프를 포함한다.
도 31은 본원에 개시된 FOLR1 항체-약물 접합체의 다양한 용량의 이화대사산물을 투여한 랫트에서의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 32는 시노몰구스 원숭이 혈장, 인간 혈장 및 PBS에서 시험된 바와 같은 비교기 항체-약물 접합체 (comparator ADC)와 비교하여 대표적인 FOLR1 ADC의 안정성을 나타내는 그래프이다.
도 33은 다양한 수준의 PgP를 갖는 세포 및 특정 PgP 억제제의 존재 하에 비교기 항체-약물 접합체(ADC)와 비교하여 본원에 개시된 대표적인 FOLR1 ADC의 이화대사산물의 세포 독성 활성을 나타내는 그래프를 포함한다.
도 34는 확립된 Igrov1 종양을 갖는 마우스에서 측정된 비교기 항체-약물 접합체(ADC)와 비교하여 본원에 개시된 대표적인 FOLR1 ADC의 이화대사산물의 종양 및 혈장 수준을 나타내는 차트이다.
도 35a 및 35b는 본원에 개시된 바와 같은 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체(ADC)에 대한 종양 성장 곡선 및 21일째의 종양 크기를 나타내는 산점도를 포함한다.
도 36은 SCID 베이지 마우스에서의 상이한 FOLR1 항체-약물 접합체의 약동학적 혈장 프로파일을 나타내는 그래프이다.
1. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 다른 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖도록 의도된다. 어떤 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 준비된 참고(ready reference)를 위해 본 명세서에서 정의되며, 본 명세서에서의 이러한 정의의 포함이 본 기술 분야에서 일반적으로 이해되는 것과의 차이를 나타내는 것이라 반드시 해석되는 것은 아니다. 본원에 기술되거나 참고된 기술 및 절차는 당업자에 의해 일반적으로 잘 이해되고, 통상적인 방법론, 예를 들어 Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd ed.(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY에 기술된 광범위하게 이용되는 분자 클로닝 방법론을 사용하여 일반적으로 사용되는 것이다. 적절한 경우, 시판되는 키트 및 시약의 사용과 관련된 절차는 달리 명시되지 않는 한 일반적으로 제조자가 정의한 프로토콜 및 조건에 따라 수행된다.
본원에 사용된, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다.
"약"이라는 용어는 지시된 값 및 그 값의 위 및 아래의 범위를 나타내고 포함한다. 특정 구현예에서, 용어 "약"은 지정된 값 ± 10%, ± 5% 또는 ± 1%를 나타낸다. 특정 구현예에서, 용어 "약"은 지정된 값 ± 해당 값의 단일 표준 편차(one standard deviation)를 나타낸다.
용어 "이의 조합"은 해당 용어가 지칭하는 요소의 모든 가능한 조합을 포함한다. 예를 들어, “α2가 A이면 α3은 D가 아니거나; α5는 S가 아니거나; 또는 α6은 S가 아니거나; 또는 이들의 조합이다"이라는 문장은 α2가 A인 경우 다음 조합을 포함한다: (1) α3이 D가 아니다; (2) α5는 S가 아니다; (3) α6은 S가 아니다; (4) α3은 D가 아니고; α5는 S가 아니고; 및 α6은 S가 아니다; (5) α3은 D가 아니고, 및 α5는 S가 아니다; (6) α3은 D가 아니고, 및 α6은 S가 아니다; 그리고 (7) α5는 S가 아니며, 및 α6는 S가 아니다.
용어 "엽산 수용체 알파(folate receptor alpha)"및 "엽산 수용체 1"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 엽산 수용체 알파는 특히 FOLR1, FolRα, 엽산 결합 단백질, FBP, 성인 엽산 결합 단백질, Folbp1, FR-알파, FRα, KB 세포 FBP 및 난소 종양-관련 항원 MOv18을 포함하는 동의어로도 알려져 있다. 달리 명시되지 않는 한, 상기 용어는 세포에 의해 자연적으로 발현되거나 엽산 수용체 알파 또는 FOLR1 유전자로 형질감염된 세포에 의해 발현되는 인간 엽산 수용체 알파의 임의의 변이체, 이소폼, 및 종 동족체(species homolog)를 포함한다. 엽산 수용체 알파 단백질은, 예를 들어, 인간 엽산 수용체 알파(서열번호: 1)를 포함한다. 일부 구체예에서, 엽산 수용체 알파 단백질은 시노몰구스 원숭이 엽산 수용체 알파(서열번호: 2)를 포함한다. 일부 구체예에서, 엽산 수용체 알파 단백질은 뮤린 엽산 수용체 알파(서열번호: 3)를 포함한다.
용어 "면역글로불린"은 일반적으로 2쌍의 폴리펩티드 쇄: 1쌍의 경쇄(L) 및 1쌍의 중쇄(H)를 포함하는 구조적으로 관련된 단백질의 부류를 지칭한다. "온전한 면역글로불린(intact immunoglobulin)"에서, 이들 4개의 사슬 모두는 이황화 결합에 의해 서로 연결되어 있다. 면역글로불린의 구조는 잘 특성화되어 있다. 예를 들어, Paul, Fundamental Immunology 7th ed., Ch. 5(2013) Lippincott Williams & Wilkins, 필라델피아, PA.를 참고한다. 간단히 말하면, 각각의 중쇄는 전형적으로 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(CH)을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 전형적으로 3개의 도메인, 약어로 CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 전형적으로 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 전형적으로 하나의 도메인, 약어로 CL을 포함한다.
용어 "항체"는 면역글로불린 분자의 유형을 설명하며, 본 명세서에서 가장 넓은 의미로 사용된다. 항체는 구체적으로 온전한 항체(예를 들어, 온전한 면역글로불린) 및 항체 단편을 포함한다. 항체는 하나 이상의 항원-결합 도메인을 포함한다. 항원-결합 도메인의 일례는 VH-VL 이량체(dimer)에 의해 형성된 항원 결합 도메인이다. "엽산 수용체 알파 항체", "항-엽산 수용체 알파 항체", "엽산 수용체 알파 Ab", "엽산 수용체 알파-특이적 항체", "항-엽산 수용체 알파 Ab", "FOLR1 항체", "FolRα 항체”, “항-FOLR1 항체", "항-FolRα 항체", "FOLR1 Ab", "FolRα Ab", "FOLR1-특이적 항체", "FolRα-특이적 항체", "항-FolRα Ab" 또는 "항-FOLR1 Ab"는 본원에 기재된 바와 같이 엽산 수용체 알파 또는 FOLR1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 엽산 수용체 알파(FOLR1)의 세포 외 도메인에 결합한다.
VH 및 VL 영역은 보다 보존된 영역 사이에 배치된 초가변성의 영역("초가변 영역(hypervariable region, HVR)"; 또한, “상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR”)로도 불림)으로 더 세분화될 수 있다. 상기한 보다 보존된 영역을 프레임워크 영역(framework region, FR)이라고 한다. 각각의 VH 및 VL은 일반적으로 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함하며, 다음 순서로 정렬된다(N-말단에서 C-말단 순으로): FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. 상기 CDR은 항원 결합에 관여하며, 항체의 항원 특이성 및 결합 친화도에 영향을 미친다. 그 전문이 참고로서 포함되는, 문헌 [Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]를 참고한다.
임의의 척추동물 종으로부터의 경쇄는 불변 도메인의 서열에 기초하여 카파(kappa) 및 람다(lambda)라 불리는 2가지 유형 중 하나로 배정될 수 있다.
임의의 척추 동물 종으로부터의 중쇄는 5 개의 상이한 클래스(또는 이소형, isotype): IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 중 하나로 배정될 수 있다. 이러한 클래스는 또한 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 지정된다. IgG 및 IgA 클래스는 서열 및 기능의 차이에 기초하여 서브클래스로 추가로 분류된다. 인간은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2와 같은 서브 클래스를 발현한다.
CDR의 아미노산 서열 경계는, Kabat 등, 상기함(“카밧(Kabat)” 번호 체계); Al-Lazikani 등, 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948(“코티아(Chothia)” 번호 체계); MacCallum 등, 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745(“콘택트(Contact)” 번호 체계); Lefranc 등, Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77(“IMGT”번호 체계); 및 Honegge 및 Pl
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ckthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70(“AHo”번호 체계)(이들 각각의 전문이 참고로서 포함됨)에 의해 기술된 것을 포함하는, 알려진 다양한 번호 체계(numbering scheme)를 사용하여 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.
표 1은 카밧 및 코티아 체계에 의해 확인된 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 위치를 제공한다. CDR-H1의 경우, 카밧 및 코티아 번호 체계 모두를 사용하여 잔기 넘버링이 제공된다.
카밧 및 코티아 번호 체계에 따른 CDR의 잔기.
CDR 카밧 코티아
L1 L24-L34 L24-L34
L2 L50-L56 L50-L56
L3 L89-L97 L89-L97
H1 (카밧 번호) H31-H35B H26-H32 또는 H34*
H1 (코티아 번호) H31-H35 H26-H32
H2 H50-H65 H52-H56
H3 H95-H102 H95-H102
* CDR-H1의 C-말단은 카밧 넘버링 관례를 사용하여 번호를 매길 때, 도 1에 도시된 바와 같이 CDR의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.
달리 명시되지 않는 한, 본원의 특정 CDR의 식별에 사용되는 번호 체계는 카 밧/코티아 번호 체계이다. 이들 2개의 번호 체계에 의해 포괄된 잔기가 나뉘어질 때(예를 들어, CDR-H1 및/또는 CDR-H2), 상기 번호 체계는 카밧 또는 코티아로 지정된다. 편의상, CDR-H3은 때때로 본 명세서에서 카밧 또는 코티아로 지칭된다. 그러나, 이것이 존재하지 않는 서열의 차이를 의미하는 것을 의도하는 것이 아니며, 당업자는 서열을 검사함으로써 서열들이 동일한지 혹은 다른지를 쉽게 확인할 수 있다.
CDR은, 예를 들어, www.bioinf.org.uk/abs/abnum/에서 이용가능하고, 문헌 [Abhinandan and Martin, Immunology, 2008, 45:3832-3839(그 전문이 참고로서 포함됨)]에 기술된, Abnum과 같은 항체 넘버링 소프트웨어를 사용하여 배정될 수 있다.
"EU 번호 체계(EU numbering scheme)"는 일반적으로 항체 중쇄 불변 영역에서 잔기를 언급할 때 사용된다(예를 들어, 상기한 카밧(Kabat) 등에서 보고 된 바와 같음). 달리 언급되지 않는 한, EU 번호 체계는 본원에 기재된 항체 중쇄 불변 영역의 잔기를 지칭하기 위해 사용된다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 예를 들어 온전한 항체의 항원 결합 영역 또는 가변 영역과 같은 온전한 항체의 일부를 포함한다. 항체 단편은, 예를 들어, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, scFv(sFv) 단편 및 scFv-Fc 단편을 포함한다.
"Fv" 단편은 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 비공유적으로 연결된 이량체를 포함한다.
"Fab" 단편은, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인에 더하여, 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 포함한다. Fab 단편은 예를 들어 재조합 방법 또는 전장 항체의 파파인 분해에 의해 생성될 수 있다.
"F(ab')2" 단편은 힌지 영역 근처에서 이황화 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 함유한다. F(ab')2 단편은 예를 들어, 재조합 방법 또는 온전한 항체의 펩신 분해에 의해 생성될 수 있다. F(ab') 단편은 예를 들어 ß-멀캅토에탄올(ß-mercaptoethanol)로 처리함으로써 분리(dissociation)될 수 있다.
"단일 사슬 Fv" 또는 "sFv" 또는 "scFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드 사슬에 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 상기 VH 및 VL은 일반적으로 펩티드 링커에 의해 연결된다. Pl
Figure pct00003
ckthun A.(1994)를 참고한다. 일부 구체예에서, 상기 링커는 서열번호: 377이다. 일부 구체예에서, 상기 링커는 서열번호: 378이다. 문헌 [Rosenberg M. & Moore G.P.(Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113(pp. 269-315). Springer-Verlag, New York 내의 Antibodies from Escherichia coli.(그 전문이 참고로서 포함됨)].
"scFv-Fc"단편은 Fc 도메인에 부착된 scFv를 포함한다. 예를 들어, Fc 도메인은 scFv의 C-말단에 부착될 수 있다. 상기 Fc 도메인은, scFv에서의 가변 도메인의 배향(즉, VH-VL 또는 VL-VH)에 따라 VH 또는 VL을 뒤따를 수 있다. 당업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 적합한 Fc 도메인이 사용될 수 있다. 일부 경우에, 상기 Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, IgG1 Fc 도메인은 서열번호: 370 또는 그의 일부를 포함한다. 서열번호: 370은 인간 IgG1 불변 영역의 CH1, CH2 및 CH3의 서열을 제공한다.
용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터의 항체를 지칭한다. 실질적으로 균질한 항체의 집단은 단일클론 항체의 생산 동안 일반적으로 발생할 수 있는 변이체를 제외하고는 실질적으로 유사하고 동일한 에피토프(들)에 결합하는 항체를 포함한다. 이러한 변이체는 일반적으로 오직 소량으로 존재한다. 단일클론 항체는 전형적으로 복수의 항체로부터 단일 항체의 선발을 포함하는 공정에 의해 수득된다. 예를 들어, 선별 과정은 하이브리도마 클론, 파지 클론, 효모 클론, 박테리아 클론 또는 다른 재조합 DNA 클론의 풀(pool)과 같은 복수의 클론으로부터 특별한 클론(unique clone)을 선발하는 것일 수 있다. 선발된 항체는, 예를 들어, 표적에 대한 친화도를 개선시키고("친화도 성숙"), 항체를 인간화하고, 세포 배양에서 그의 생산을 개선시키고/개선시키거나 대상체에서 면역원성을 감소시키기 위해 추가로 변경될 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원(source) 또는 종으로부터 유래되는 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래되는 항체를 지칭한다.
"인간화(humanized)" 형태의 비-인간 항체는 비-인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화 항체는 일반적으로 하나 이상의 CDR로부터의 잔기가 비-인간 항체(공여체 항체, donor antibody)의 하나 이상의 CDR로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(수용체 항체, recipient antibody)이다. 공여자 항체는 원하는 특이성, 친화성 또는 생물학적 효과를 갖는, 마우스, 랫트, 토끼, 닭 또는 비인간 영장류 항체와 같은 임의의 적합한 비-인간 항체일 수 있다. 일부 경우에, 수용체 항체의 선택된 프레임워크 영역 잔기는 공여체 항체로부터의 상응하는 프레임워크 영역 잔기로 대체된다. 인간화 항체는 또한 수용체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 기능을 추가로 개선하기 위해 이루어질 수 있다. 자세한 내용은 문헌 [Jones 등, Nature, 1986, 321:522-525; Riechmann 등, Nature, 1988, 332:323-329; 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2:593-596(이들 문헌 각각의 전문이 참고로서 포함됨)]을 참고한다.
"인간 항체(human antibody)"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나, 인간 항체 레퍼토리(repertoire) 또는 인간 항체-암호화 서열(예를 들어, 인간 공급원으로부터 얻거나 새롭게(de novo) 설계됨)을 이용하는 비인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 것이다. 인간 항체는 구체적으로 인간화 항체를 배제한다.
"단리된 항체(isolated antibody)"는 그의 자연 환경(natural environment)의 성분으로부터 분리 및/또는 회수된 것이다. 자연 환경의 성분은 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 물질을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 단리된 항체는 예를 들어 스피닝 컵 시퀀서(spinning cup sequenator)를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상의 잔기를 수득하기에 충분한 정도로 정제된다. 일부 구체예에서, 단리된 항체는 쿠마시 블루 또는 은 염색에 의한 검출로, 환원 또는 비 환원 조건 하에서 겔 전기 영동(예를 들어, SDS-PAGE)에 의해 균질성(homogenity)으로 정제된다. 단리된 항체는 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에 재조합 세포 내의 인시투(in situ) 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 단리된 항체는 하나 이상의 정제 단계에 의해 제조된다.
일부 구체예에서, 단리된 항체는 적어도 80 중량%, 85 중량%, 90 중량%, 95 중량% 또는 99 중량%으로 정제된다. 일부 구체예에서, 단리된 항체는 적어도 80 부피%, 85% 부피%, 90 부피%, 95 부피% 또는 99 부피%로 정제된다. 일부 구체예에서, 단리된 항체는 적어도 85 중량%, 90 중량%, 95 중량%, 98 중량%, 99 중량% 내지 100 중량%를 포함하는 용액으로서 제공된다. 일부 구체예에서, 단리된 항체는 적어도 85 부피%, 90 부피%, 95 부피%, 98 부피%, 99 부피% 내지 100 부피%를 포함하는 용액으로서 제공된다.
"친화도"는 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호 작용의 총합(sum total)의 강도를 지칭한다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍(예를 들어, 항체 및 항원)의 구성원들 간의 1 : 1 상호 작용을 반영하는 고유 결합 친화도(intrinsic binding affinity)를 지칭한다. 분자 X의 파트너 Y에 대한 친화도는 해리 상수(dissociation constant, KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것을 포함하여 당업계에 공지된 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 친화도는 예를 들어 비아코어(Biacore)® 기기와 같은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술을 사용하여 확인할 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 친화도는 25oC에서 결정된다.
표적 분자에 대한 항체의 결합과 관련하여, 용어 "특이적 결합(specific binding)", "특이적으로 결합하는(specifically binds to)", "특이적(specific for)" "선택적으로 결합하는(selectively binds)"및 "선택적인(selective for)"은 비특이적 또는 비 선택적 상호 작용과는 측정가능하게(measurably) 상이한, 특정 항원(예를 들어, 폴리펩티드 표적) 혹은 특정 항원 상의 에피토프에 결합하는 것을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들어 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 특이적 결합은 또한 표적에 대한 항체 결합 부위를 모방하는 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우, 표적에 대한 항체의 결합이 대조 분자에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 특이적 결합이라 지시된다.
본원에 사용된 용어 "kd"(sec-1)는 특정 항체-항원 상호 작용의 해리 속도 상수를 지칭한다. 이 값은 koff 값이라고도 한다.
본원에 사용된 용어 "ka"(M-1xsec-1)는 특정 항체-항원 상호 작용의 회합 속도 상수(association rate constant)를 지칭한다. 이 값은 kon 값이라고도 한다.
본원에 사용된 용어 "KD"(M)는 특정 항체-항원 상호 작용의 해리 평형 상수를 지칭한다. KD=kd/ka.
본원에 사용된 용어 "KA"(M-1)는 특정 항체-항원 상호 작용의 회합 평형 상수(association equilibrium constant)를 지칭한다. KA=ka/kd.
"친화도 성숙된(affinity matured)" 항체는 변형(들)을 갖지 않는 모 항체와 비교하여 그의 항원에 대한 항체의 친화도의 개선을 초래하는, 하나 이상의 CDR 또는 FR에서의 하나 이상의 변형을 갖는 것이다. 하나의 구체예에서, 친화도 성숙된 항체는 표적 항원에 대한 나노 몰 또는 피코 몰 친화도를 갖는다. 친화도 성숙된 항체는 당업계에 공지된 다양한 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, Marks 등(Bio/Technology, 1992, 10:779-783, 그 전문이 참고로서 포함됨)은 VH 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기술한다. CDR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이 유발은, 예를 들어, 문헌 [Barbas 등(Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91:3809-3813); Schier 등(Gene, 1995, 169:147-155); Yelton 등(J. Immunol., 1995, 155:1994-2004); Jackson 등(J. Immunol., 1995, 154:3310-33199); 및 Hawkins 등(J. Mol. Biol., 1992, 226:889-896) (문헌 각각의 전문이 참고로서 포함됨)]에 기술되어 있다.
본원에서 2 개 이상의 항체와 관련하여 사용될 때, 용어 "경쟁하다" 또는 " 교차 경쟁하다"는 2개 이상의 항체가 항원(예를 들어, 엽산 수용체 알파 또는 FOLR1)에 결합하는 것에 대해 경쟁한다는 것을 나타낸다. 하나의 예시적인 검정에서, FOLR1은 플레이트 상에 코팅되고 제1 항체에 결합하도록 한 후, 제2의 표지된 항체가 첨가된다. 제1 항체의 존재가 제2 항체의 결합을 감소시키면, 항체는 경쟁한다. 다른 예시적인 검정에서, 제1 항체는 플레이트 상에 코팅되고 항원에 결합하도록 한 후, 제2 항체가 첨가된다. 용어 "경쟁하다"는 또한 하나의 항체가 다른 항체의 결합을 감소시키는 것과 상기 항체들이 역순으로 첨가될 때 경쟁이 관찰되지 않는 경우의 항체의 조합을 포함한다. 그러나, 일부 구체예에서, 제1 및 제2 항체는 이들이 첨가되는 순서에 상관없이 서로의 결합을 억제한다. 일부 구체예에서, 하나의 항체는 다른 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상 또는 90% 이상 감소시킨다.
용어 "에피토프"는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 일부를 의미한다. 에피토프는 종종 표면-접근 가능한 아미노산 잔기(surface-accessible amino acid residues) 및/또는 당 측쇄로 구성되며, 특정한 전하 특성뿐만 아니라 특정한 3차원 구조적 특성을 가질 수 있다. 구조적(conformational) 및 비-구조적(non-conformational) 에피토프는 변성 용매(denaturing solvent)의 존재 하에 구조적 에피토프에 대한 결합은 상실되는 반면, 비-구조적 에피토프에 대한 결합은 그렇지 않다는 점에서 구별된다. 에피토프는 결합에 직접 관여하는 아미노산 잔기 및 결합에 직접적으로 관여하지 않는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 항체가 결합하는 에피토프는 예를 들어 상이한 점-돌연변이(point mutation)를 갖는 엽산 수용체 알파(FOLR1)의 변이체에 대한 항체 결합을 시험하는 것과 같은 에피토프 결정을 위한 공지된 기술을 사용하여 결정될 수 있다.
폴리펩티드 서열과 기준 서열 사이의 백분율 "동일성"은 서열을 정렬하고, 필요한 경우, 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 갭을 도입한 후, 기준 서열의 아미노산 잔기와 동일한 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, MEGALIGN(DNASTAR), CLUSTALW, CLUSTAL OMEGA 또는 MUSCLE 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 통상의 기술 내의 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
"보존적 치환(conservative substitution)"또는 "보존적 아미노산 치환"은 화학적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산으로의 아미노산 치환을 지칭한다. 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업계에 잘 알려져 있다. 이러한 치환을 갖는 폴리펩티드 서열은 "보존적으로 변형된 변이체"로 알려져 있다. 이러한 보존적으로 변형된 변이체는 다형성 변이체(polymorphic variant), 종간 동족체(interspecies homolog) 및 대립 유전자(allele)에 추가되고, 이를 배제하지 않는다. 예를 들어, 표 2-4에 제공된 아미노산의 군은, 일부 구체예에서, 서로에 대한 보존적 치환으로 간주된다.
특정 구체예에서, 서로에 대해 보존적 치환으로 간주되는 선택된 아미노산 군.
산성 잔기(Acidic Residues) D 및 E
염기성 잔기(Basic Residues) K, R, 및 H
친수성 비전하 잔기(Hydrophilic Uncharged Residues) S, T, N, 및 Q
지방족 비전하 잔기(Aliphatic Uncharged Residues) G, A, V, L, 및 I
비-극성 비전하 잔기(Non-polar Uncharged Residues) C, M, 및 P
방향족 잔기(Aromatic Residues) F, Y, 및 W
알코올기-함유 잔기(Alcohol Group-Containing Residues) S 및 T
지방족 잔기(Aliphatic Residues) I, L, V, 및 M
시클로알케닐-관련 잔기(Cycloalkenyl-associated Residues) F, H, W, 및 Y
소수성 잔기(Hydrophobic Residues) A, C, F, G, H, I, L, M, R, T, V, W, 및 Y
음전하성 잔기(Negatively Charged Residues) D 및 E
극성 잔기(Polar Residues) C, D, E, H, K, N, Q, R, S, 및 T
양전하성 잔기(Positively Charged Residues) H, K, 및 R
작은 잔기(Small Residues) A, C, D, G, N, P, S, T, 및 V
매우 작은 잔기(Very Small Residues) A, G, 및 S
회전 형성 관련 잔기(Residues Involved in Turn Formation) A, C, D, E, G, H, K, N, Q, R, S, P, 및 T
유연한 잔기(Flexible Residues) Q, T, K, S, G, P, D, E, 및 R
특정 구체예에서, 서로에 대한 보존적 치환으로 간주되는 추가의 선택된 아미노산 군.
군 1 A, S, 및 T
군 2 D 및 E
군 3 N 및 Q
군 4 R 및 K
군 5 I, L, 및 M
군 6 F, Y, 및 W
특정 구체예에서, 서로에 대한 보존적 치환으로 간주되는 추가의 선택된 아미노산 군.
군 A A 및 G
군 B D 및 E
군 C N 및 Q
군 D R, K, 및 H
군 E I, L, M, V
군 F F, Y, 및 W
군 G S 및 T
군 H C 및 M
추가의 보존적 치환은, 예를 들어, 문헌 [Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties 2nd ed.(1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY]에서 찾을 수 있다. 모 항체에서 아미노산 잔기의 하나 이상의 보존적 치환을 수행함으로써 생성된 항체는 "보존적으로 변형된 변이체"로 지칭된다.
용어 "아미노산"은 20 개의 통상적인 자연적으로 존재하는 아미노산을 지칭한다. 자연적으로 존재하는 아미노산은 알라닌(Ala; A), 아르기닌(Arg; R), 아스파라긴(Asn; N), 아스파르트 산(Asp; D), 시스테인(Cys; C); 글루탐산(Glu; E), 글루타민(Gln; Q), 글리신(Gly; G); 히스티딘(His; H), 이소류신(Ile; I), 류신(Leu; L), 리신(Lys; K), 메티오닌(Met; M), 페닐알라닌(Phe; F), 프롤린(Pro; P), 세린(Ser; S), 트레오닌(Thr; T), 트립토판(Trp; W), 티로신(Tyr; Y) 및 발린(Val; V)을 포함한다.
자연적으로 코딩된 아미노산은 당업자에게 공지된 단백질 생성(proteinogenic) 아미노산이다. 여기에는 20 개의 일반적인 아미노산(알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트 산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린) 및 덜 일반적인 피롤리신(pyrrolysine) 및 셀레노시스테인(selenocysteine)이 포함된다. 자연적으로 코딩된 아미노산은 프레닐화 아미노산(prenylated amino acid), 이소프레닐화 아미노산(isoprenylated amino acids), 미리스토일화 아미노산(myristoylated amino acids), 팔미토일화 아미노산(palmitoylated amino acids), N-연결 글리코실화 아미노산(N-linked glycosylated amino acids), O-연결 글리코실화 아미노산(O-linked glycosylated amino acids), 인산화 아미노산(phosphorylated amino acids) 및 아실화 아미노산(acylated amino acids)과 같은 22개의 자연적으로 존재하는 아미노산의 번역 후 변이체를 포함한다.
"비천연 아미노산"이라는 용어는 단백질 생성 아미노산 또는 이의 번역 후 변형된 변이체가 아닌 아미노산을 의미한다. 특히, 상기 용어는 20개의 일반적인 아미노산 또는 피롤리신 또는 셀레노시스테인, 또는 이의 번역 후 변형된 변이체 중 하나가 아닌 아미노산을 지칭한다.
용어 "접합체" 또는 "항체 접합체"는 하나 이상의 페이로드 모이어티에 연결된 항체를 지칭한다. 상기 항체는 본원에 기재된 임의의 항체일 수 있다. 상기 페이로드는 본 명세서에 기술된 임의의 페이로드일 수 있다. 상기 항체는 공유 결합을 통해 페이로드에 직접 연결될 수 있거나, 항체는 링커를 통해 간접적으로 페이로드에 연결될 수 있다. 전형적으로, 상기 링커는 상기 항체에 공유 결합되고 또한 페이로드에 공유 결합된다. 용어 "항체 약물 접합체" 또는 "ADC"는 하나 이상의 페이로드가 약물과 같은 치료적 모이어티(therapeutic moiety)인 접합체를 지칭한다.
용어 "페이로드(payload)"는 항체에 접합될 수 있는 분자 모이어티를 지칭한다. 특정 구체예에서, 페이로드는 치료적 모이어티 및 표지 모이어티(labeling moiety)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
용어 "링커"는 2개 이상의 공유 결합을 형성할 수 있는 분자 모이어티를 지칭한다. 전형적으로, 링커는 항체에 대한 하나 이상의 공유 결합 및 페이로드에 대한 하나 이상의 다른 공유 결합을 형성할 수 있다. 특정 구체예에서, 링커는 항체에 하나 이상의 공유 결합을 형성할 수 있다. 특정 구체예에서, 링커는 페이로드에 대해 하나 이상의 공유 결합을 형성하거나 하나 이상의 페이로드에 대해 공유 결합을 형성할 수 있다. 링커가 항체, 또는 페이로드 또는 둘 다에 대한 결합을 형성한 후, 나머지 구조, 즉 하나 이상의 공유 결합이 형성된 후 링커의 잔기는 여전히 본원에서 "링커"로 지칭될 수 있다. 용어 "링커 전구체"는 항체 또는 페이로드 또는 둘 다와 공유 결합을 형성할 수 있는 하나 이상의 반응기를 갖는 링커를 지칭한다. 일부 구체예에서, 상기 링커는 절단성(cleavable) 링커이다. 예를 들어, 상기 절단성 링커는 조작(engineering)되거나 조작되지 않을 수 있는, 생체 불안정 기능(bio-labile function)에 의해 방출되는 링커일 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 링커는 비-절단성(non-cleavable) 링커이다. 예를 들어, 비-절단성 링커는 항체의 분해 시 방출되는 것일 수 있다.
임의의 질환 또는 장애를 "치료하는" 또는 임의의 질환 또는 장애의 "치료"는 특정 구체예에서 대상체에 존재하는 질환 또는 장애를 개선시키는 것을 지칭한다. 다른 구체예에서, "치료하는" 또는 "치료"은 대상체가 식별할 수 없는(indiscernible) 적어도 하나의 물리적 파라미터를 개선하는 것을 포함한다. 또 다른 구체예에서, "치료하는" 또는 "치료"는 신체적으로(예를 들어, 식별 가능한 증상의 안정화) 또는 생리적으로(예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다로 질환 또는 장애를 조절하는 것을 포함한다. 또 다른 구체예에서, "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 발병 지연 또는 예방을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 대상체에게 투여될 때 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 항체 또는 조성물의 양을 지칭한다. 일부 구체예에서, 치료적 유효량 또는 유효량은 대상체에게 투여될 때 질환을 예방 또는 개선하거나, 질환의 진행을 예방 또는 개선하거나, 증상의 개선을 초래하기에 효과적인, 항체 또는 조성물의 양을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "성장 억제"(예를 들어, 종양 세포와 같은 세포를 지칭하며)는 엽산 수용체 알파(FOLR1) 항체와 접촉하지 않는 동일한 세포의 성장과 비교하여, FOLR1 항체와 접촉할 때 세포 성장(예를 들어, 종양 세포 성장)의 측정 가능한 감소를 포함하는 것으로 의도된다. 일부 구체예에서, 성장은 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99%, 또는 100% 억제될 수 있다. 세포 성장의 감소는 항체 내재화, 아폽토시스(apoptosis), 괴사(necrosis) 및/또는 효과기 기능-매개 활성(effector function-mediated activity)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 메커니즘에 의해 발생할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는 포유 동물 대상체를 의미한다. 예시적인 대상은 인간, 원숭이, 개, 고양이, 마우스, 랫트, 소, 말, 낙타, 조류, 염소 및 양을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 구체예에서, 상기 대상체는 인간이다. 일부 구체예에서, 상기 대상체는 본원에 제공된 항체로 치료 또는 진단될 수 있는 질환을 앓는다. 일부 구체예에서, 상기 질환은 위 암종(gastric carcinoma), 결장직장 암종(colorectal carcinoma), 신장 세포 암종(renal cell carcinoma), 자궁 경부 암종(cervical carcinoma), 비소 세포 폐암종(non-small cell lung carcinoma), 난소암(ovarian cancer), 유방암(breast cancer), 삼중 음성 유방암(triple-negative breast cancer), 자궁 내막암(endometrial cancer), 전립선 암(prostate cancer), 및/또는 상피 기원의 암(cancer of epithelial origin)이다.
본원에 예시된 일부 화학 구조에서, 특정 치환기, 화학기(chemical group) 및 원자는 상기 치환기, 화학기 및 원자가 어떤 원자를 통해 결합하는지를 나타내기 위하여 결합 또는 결합들을 가로지르는 굴곡(curvy)/물결(wavy) 선(예,
Figure pct00004
)으로 표현되어 있다. 예를 들어, 이에 제한되지 않으나,
Figure pct00005
,
Figure pct00006
, 또는
Figure pct00007
와 같은 일부 구조에서, 이 굴곡/물결 선은 예시된 화학 물질(chemical entity)이 결합된 접합체 또는 링커-페이로드 구조의 골격에 있는 원자를 나타낸다. 이에 제한되지는 않으나,
Figure pct00008
와 같은 일부 구조에서, 이 굴곡/물결 선은 예시된 화학 물질이 결합된 접합체 또는 링커-페이로드 구조의 골격의 원자뿐만 아니라 항체 또는 항체 단편의 원자를 나타낸다.
용어 "위치-특이적"은 폴리펩티드의 미리 결정된(predetermined) 서열 위치에서의 폴리펩티드의 변형을 지칭한다. 상기 변형(modification)은 변형(variation)이 거의 없거나 전혀 없는 폴리펩티드의 예측 가능한 단일 잔기에 있다. 특정 구체예에서, 변형된 아미노산은 그 서열 위치에서, 예를 들어 재조합적으로 또는 합성적으로 도입된다. 유사하게, 모이어티는 폴리펩티드의 특정 서열 위치에서 잔기에 "위치-특이적으로" 연결될 수 있다. 특정 구체예에서, 폴리펩티드는 하나 이상의 위치-특이적 변형을 포함할 수 있다.
2. 접합체
본원은 엽산 수용체 알파(FOLR1 또는 FolRα)에 대한 항체의 접합체를 제공한다. 상기 접합체는 페이로드에 직접적으로 공유결합적으로 연결되거나, 또는 링커를 통해 간접적으로 공유결합적으로 연결된 FOLR1에 대한 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 하나의 페이로드에 연결된다. 추가의 구체예에서, 상기 항체는 하나 초과의 페이로드에 연결된다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 그 이상의 페이로드에 연결된다.
상기 페이로드는 당업자에 의해 유용한 것으로 간주되는 임의의 페이로드일 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 페이로드는 치료적 모이어티이다. 특정 구체예에서, 상기 페이로드는 예컨대 라벨인, 진단 모이어티이다. 유용한 페이로드는 아래 섹션과 실시예에 설명되어 있다.
상기 링커는 항체에 대한 하나 이상의 결합 및 페이로드에 대한 하나 이상의 결합을 형성할 수 있는 임의의 링커일 수 있다. 유용한 링커는 아래 섹션과 실시예에 설명되어 있다.
본원에 제공된 접합체에서, 상기 항체는 엽산 수용체 알파(FOLR1 또는 FolRα)에 대한 결합 특이성을 갖는 임의의 항체일 수 있다. FOLR1은 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 특정 구체예에서, FOLR1은 척추 동물 FOLR1이다. 특정 구체예에서, FOLR1은 포유동물 FOLR1이다. 특정 구체예에서, FOLR1은 인간 FOLR1이다. 특정 구체예에서, FOLR1은 마우스 FOLR1이다. 특정 구체예에서, FOLR1은 시노몰구스 FOLR1이다.
특정 구체예에서, 엽산 수용체 알파(FOLR1 또는 FolRα)에 대한 항체는 결합에 대해 본원에 기재된 항체와 경쟁한다. 특정 구체예에서, FOLR1에 대한 항체는 본원에 기재된 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
항체는 전형적으로 다수의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 단백질이다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)를 포함하는 이종사량체(heterotetramer)이다. 각 경쇄는 하나의 공유결합적 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결될 수 있다. 각 중쇄는 하나 이상의 공유결합적 이황화 결합에 의해 다른 중쇄에 연결될 수 있다. 각 중쇄 및 각 경쇄는 또한 하나 이상의 사슬 내(intrachain) 이황화 결합을 가질 수 있다. 당업자에게 알려진 바와 같이, 각각의 중쇄는 전형적으로 가변 도메인(VH)에 이어 다수의 불변 도메인을 포함한다. 각각의 경쇄는 전형적으로 한 말단에서의 가변 도메인(VL) 및 불변 도메인을 포함한다. 당업자에게 알려진 바와 같이, 항체는 전형적으로 그의 표적 분자, 즉 항원에 대한 선택적 친화도를 갖는다.
본원에 제공된 항체는 당업자에게 공지된 임의의 항체 형태를 가질 수 있다. 이들 항체는 전장(full-length) 또는 단편일 수 있다. 예시적인 전장 항체는 IgA, IgA1, IgA2, IgD, IgE, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM 등을 포함한다. 예시적인 단편은 Fv, Fab, Fc, scFv, scFv-Fc 등을 포함한다.
특정 구체예에서, 상기 접합체의 항체는 본원에 기재된 CDR 서열들 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 접합체의 항체는 본원에 기재된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 접합체의 항체는 본원에 기재된 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 접합체의 항체는 본원에 기재된 중쇄 가변 도메인(VH) 및 본원에 기재된 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 접합체의 항체는 본원에 기재된 짝지은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인(paired heavy chain variable domain and a light chain variable domain)(VH-VL 쌍)을 포함한다.
특정 구체예에서, 상기 항체 접합체는 하나 이상의 반응기(reactive group)를 포함하는 항체로부터 형성될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체 접합체는 모든 자연적으로 코딩된 아미노산을 포함하는 항체로부터 형성될 수 있다. 당업자는 여러 자연적으로 코딩된 아미노산들이 페이로드 또는 링커에 접합될 수 있는 반응기를 포함한다는 것을 인식할 것이다. 이들 반응기는 시스테인 측쇄, 리신 측쇄 및 아미노-말단기를 포함한다. 이들 구체예에서, 항체 접합체는 항체 반응기의 잔기에 연결된 페이로드 또는 링커를 포함할 수 있다. 이들 구체예에서, 페이로드 전구체 또는 링커 전구체는 항체 반응기와 결합을 형성할 수 있는 반응기를 포함한다. 전형적인 반응기는 말레이미드 기, 활성화된 카보네이트(p-니트로페닐 에스테르를 포함하나 이에 제한되지 않음), 활성화된 에스테르(N-히드록시숙신이미드, p-니트로페닐 에스테르 및 알데하이드를 포함하나, 이에 제한되지 않음)를 포함한다. 특히 유용한 반응기는 시스테인 및 리신 측쇄에 결합을 형성하기 위한 말레이미드 및 숙신이미드, 예를 들어 N-히드록시숙신이미드를 포함한다. 추가의 반응기는 하기 섹션 및 실시예에 기재되어 있다.
추가의 구체예에서, 상기 항체는 본원에 기재된 바와 같은 반응기를 갖는 하나 이상의 변형된 아미노산을 포함한다. 전형적으로, 상기 변형된 아미노산은 자연적으로 코딩된 아미노산이 아니다. 이들 변형된 아미노산은 링커 전구체 또는 페이로드 전구체에 공유 결합을 형성하는데 유용한 반응기를 포함할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 반응기를 사용하여 변형된 아미노산에 공유 결합을 형성할 수 있는 임의의 분자 물질(molecular entity)에 폴리펩티드를 연결시킬 수 있다. 따라서, 본원에서는 페이로드에 직접적으로 연결되거나 링커를 통해 간접적으로 연결된 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 항체를 포함하는 접합체를 제공한다. 예시적인 변형된 아미노산은 하기 섹션에 기재되어있다. 일반적으로, 변형된 아미노산은 상보적 반응기(complementary reactive group)를 갖는 링커 또는 페이로드에 결합을 형성할 수 있는 반응기를 갖는다.
비천연 아미노산은 항체의 폴리펩티드 사슬에서 선택된 위치에 위치된다. 이들 위치는 비천연 아미노산으로 치환하기 위한 최적의 부위를 제공하는 것으로 확인되었다. 각 위치는 항체 생산을 위한 최적의 구조, 기능 및/또는 방법을 가진 비천연 아미노산을 보유할 수 있다.
특정 구체예에서, 치환을 위한 위치-특이적 위치(site-specific position)는 안정한 항체를 제공한다. 안정성은 당업자에게 명백한 임의의 기술에 의해 측정될 수 있다.
특정 구체예에서, 치환을 위한 위치-특이적 위치는 최적의 기능적 특성을 갖는 항체를 제공한다. 예를 들어, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 그의 표적 항원에 대한 결합 친화도의 손실이 거의 없거나 전혀 없을 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 강화된 결합을 나타낼 수 있다.
특정 구체예에서, 치환을 위한 위치-특이적 위치는 유리하게 제조될 수 있는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 상기 항체는 하기 논의되는 그의 합성 방법에서 유리한 특성을 나타낸다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 생산에서 수율 손실이 거의 없거나 또는 전혀 없을 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 생산에서 향상된 수율을 나타낼 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 tRNA 억제의 손실이 거의 없거나 또는 전혀 없을 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 생산에서 향상된 tRNA 억제를 나타낼 수 있다.
특정 구체예에서, 치환을 위한 위치-특이적 위치는 유리한 용해도를 갖는 항체를 제공한다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 용해도 손실이 거의 없거나 또는 전혀 없을 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 향상된 용해도를 나타낼 수 있다.
특정 구체예에서, 치환을 위한 위치-특이적 위치는 유리한 발현을 갖는 항체를 제공한다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 발현 손실이 거의 없거나 전혀 없을 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 향상된 발현을 나타낼 수 있다.
특정 구체예에서, 치환을 위한 위치-특이적 위치는 유리한 폴딩을 갖는 항체를 제공한다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 적절한 폴딩(folding) 면에서 거의 또는 전혀 손실을 나타내지 않을 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 위치-특이적 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 강화된 폴딩을 나타낼 수 있다.
특정 구체예에서, 치환을 위한 위치-특이적 위치는 유리한 접합이 가능한 항체를 제공한다. 후술하는 바와 같이, 몇몇 비천연 아미노산은 직접적으로 또는 링커를 통해 항체를 제2 작용제(second agent)에 접합시키는 것을 용이하게 하는 측쇄 또는 작용기를 갖는다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 다른 위치에 동일하거나 상이한 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 향상된 접합 효율을 나타낼 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 다른 위치에서 동일하거나 상이한 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 향상된 접합 수율을 나타낼 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 항체는 다른 위치에서 동일하거나 상이한 비천연 아미노산이 없는 항체와 비교하여 향상된 접합 특이성을 나타낼 수 있다.
하나 이상의 비천연 아미노산은 항체의 하나 이상의 폴리펩티드 사슬에서의 선택된 위치-특이적 위치에 위치한다. 상기 폴리펩티드 사슬은 이에 제한되지는 않으나 경쇄 또는 중쇄를 포함하는, 항체의 임의의 폴리펩티드 사슬일 수 있다. 상기 위치-특이적 위치는 임의의 가변 도메인 및 임의의 불변 도메인을 포함하여 항체의 임의의 도메인에 존재할 수 있다.
특정 구체예에서, 본원에 제공된 항체는 위치-특이적 위치에 하나의 비천연 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본원에 제공된 항체는 위치-특이적 위치에 2개의 비천연 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본원에 제공된 항체는 위치-특이적 위치에 3개의 비천연 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본원에 제공된 항체는 위치-특이적 위치에 3개 초과의 비천연 아미노산을 포함한다.
특정 구체예에서, 본원에 제공된 항체는 각각 카밧 또는 코티아 또는 EU 번호 체계에 따른 중쇄 또는 경쇄 잔기 HC-F404, HC-K121, HC-Y180, HC-F241, HC-221, LC-T22, LC-S7, LC-N152, LC-K42, LC-E161, LC-D170, HC-S136, HC-S25, HC-A40, HC-S119, HC-S190, HC-K222, HC-R19, HC-Y52, 또는 HC-S70로 이루어진 군에서 선택되는 위치에서 하나 이상의 비천연 아미노산, 또는 이의 번역 후 변형된 변이체를 포함한다. 이들 명칭에서, HC는 중쇄 잔기를 나타내고 LC는 경쇄 잔기를 나타낸다.
특정 구체예에서, 본원은 화학식 (C1) 또는 (C2)에 따른 접합체 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 입체 이성질체(stereoisomer), 위치 이성질체(regioisomer) 또는 호변 이성질체(tautomer)를 제공한다:
Figure pct00009
(C1)
Figure pct00010
(C2)
상기 식에서,
COMP는 항-FOLR1 항체의 잔기이고;
PAY는 페이로드 모이어티이며;
W 1 , W 2 , W 3 , W 4 및 W 5 는 각각 독립적으로 단일 결합이거나, 부재하거나, 또는 2가 부착기(divalent attaching group)이고;
EG는 부재하거나, 또는 제거기 그룹(eliminator group)이며;
각각의 RT는, 화학식 (C1) 또는 (C2)의 골격에서 또는 EG에 결합된, 방출 트리거 기(release trigger group)이고, 여기서 각각의 RT는 선택적이며;
HP는 단일 결합이거나, 부재하거나, 또는 2가 친수성 기이며;
SG는 단일 결합이거나, 부재하거나, 또는 2가 스페이서 기이고; 및
R은 수소, 말단 접합기(terminal conjugating group), 또는 말단 접합기의 2가 잔기이다.
일부 구체예에서, 화학식 (C1) 또는 (C2)에 따른 접합체는 n개의 PAY 모이어티를 포함하고, 여기서 n은 1 내지 8의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 2이다. 일부 구체예에서, n은 3이다. 일부 구체예에서, n은 4이다. 일부 구체예에서, n은 5이다. 일부 구체예에서, n은 6이다. 일부 구체예에서, n은 7이다. 일부 구체예에서, n은 8이다.
부착기(attaching groups)
부착기는 제거기 그룹(eliminator group), 방출 트리거 기(release trigger group), 소수성 기(hydrophobic group), 스페이서 기(spacer group), 및/또는 접합기(conjugating group)를 화합물 내로 통합시키는 것을 용이하게 한다. 유용한 부착기는 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있고 명백하다. 유용한 부착기의 예가 본원에 제공된다. 특정 구체예에서, 부착기는 W 1 , W 2 , W 3 , W 4 또는 W 5 로 표기된다. 특정 구체예에서, 부착기는 2가 케톤, 2가 에스테르, 2가 에테르, 2가 아미드, 2가 아민, 알킬렌, 아릴렌, 설파이드, 디설파이드, 카보닐렌 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 특정 구체예에서 부착기는 -C(O)-, -O-, -C(O)NH-, -C(O)NH-알킬-, -OC(O)NH-, -SC(O)NH-, -NH-, -NH-알킬-, -N(CH3)CH2CH2N(CH3)-, -S-, -S-S-, -OCH2CH2O-, 또는 이의 역순(예,-NHC(O)-), 또는 이의 조합을 포함할 수 있다.
제거기 그룹(Eliminator group)
제거기 그룹은 생체 내(in vivo) 및/또는 시험관 내(in vitro)에서 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분의 나머지로부터 본원에 기재된 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분의 분리를 용이하게 한다. 제거기 그룹은 또한 방출 트리거 기와 함께 본원에 기술된 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분의 분리를 촉진할 수 있다. 예를 들어, 상기 제거기 그룹 및 방출 트리거 기는 방출 반응에서 반응하여 생체 내 및/또는 시험관 내에서 화합물 또는 접합체로부터 본원에 기재된 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분을 방출할 수 있다. 방출 트리거에 의해 방출 반응이 개시되면, 제거기 그룹은 생물학적 활성 모이어티 또는 프로드러그(prodrug) 형태의 생물학적 활성 부분을 절단하고, 생물학적 활성 모이어티의 활성에 더 이상 영향을 미치지 않는 안정한 비-독성 물질(entity)을 형성한다.
특정 구체예에서, 제거기 그룹은 본원에서 EG로 표기된다. 유용한 제거기 그룹은 본원에 기재된 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 제거기 그룹은:
Figure pct00011
,
Figure pct00012
, 또는
Figure pct00013
이고;
여기서, REG는 수소, 알킬, 바이페닐(biphenyl), -CF3, -NO2, -CN, 플루오로, 브로모, 클로로, 알콕시, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬-C(O)O-, 알킬아미노-C(O)- 및 디알킬아미노C(O)-로 이루어진 군에서 선택된다. 각각의 구조에서, 상기 페닐 고리는 1개, 2개, 3개 또는 일부 경우에는 4개의 REG기에 결합될 수 있다. 제2 및 제3 구조에서, 당업자는 EG가 상기 화학식 (C1)의 설명에 나타낸 바와 같이 화학식 (C1)의 골격 내에 있지 않은 RT에 결합됨을 인식할 것이다. 일부 구체예에서, REG는 수소, 알킬, 바이페닐, -CF3, 알콕시, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬-C(O)O-, 알킬아미노-C(O)- 및 디알킬아미노C(O)-로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, REG는 수소, -NO2, -CN, 플루오로, 브로모 및 클로로로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 제거기 그룹은
Figure pct00014
이다. 특정 구체예에서, 제거기 그룹은
Figure pct00015
이다. 특정 구체예에서, 제거기 그룹은
Figure pct00016
이다.
특정 구체예에서, 제거기 그룹은:
Figure pct00017
,
Figure pct00018
, 또는
Figure pct00019
이고,
여기서, Z는 CH 또는 N일 수 있고, R EG 는 수소, 알킬, 바이페닐, -CF3, -NO2, -CN, 플루오로, 브로모, 클로로, 알콕시, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬-C(O)O-, 알킬아미노-C(O)- 및 디알킬아미노C(O)-로 이루어진 군에서 선택된다. 각각의 구조에서, 상기 페닐 고리는 1개, 2개, 3개 또는 일부 경우에는 4개의 REG기에 결합될 수 있다. 제1 및 제2 구조에서, 당업자는 EG가 상기 화학식(C1)의 설명에 나타낸 바와 같이 화학식 (C1)의 골격 내에 있지 않은 RT에 결합됨을 인식할 것이다. 일부 구체예에서, REG는 수소, 알킬, 바이페닐, -CF3, 알콕시, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬-C(O)O-, 알킬아미노-C(O)- 및 디알킬아미노C(O)-로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, REG는 수소, -NO2, -CN, 플루오로, 브로모 및 클로로로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, EG의 각 REG는 수소이다. 특정 구체예에서, 제거기 그룹은
Figure pct00020
이다. 특정 구체예에서, 제거기 그룹은
Figure pct00021
이다. 특정 구체예에서, 제거기 그룹은
Figure pct00022
이다.
방출 트리거 기 (Release Trigger Groups)
방출 트리거 기는 생체 내 및/또는 시험관 내에서 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분 이외의 나머지로부터 본원에 기재된 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분의 분리를 용이하게 한다. 방출 트리거 기는 또한 제거기 그룹과 함께 본원에 기술된 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분의 분리를 촉진할 수 있다. 예를 들어, 제거기 그룹 및 방출 트리거 기는 방출 반응에서 반응하여 생체 내 및/또는 시험관 내에서 화합물 또는 접합체로부터 본원에 기재된 화합물 또는 접합체의 생물학적 활성 부분을 방출할 수 있다. 특정 구체예에서, 방출 트리거는 종양 환경에서 과발현된 효소의 단백질 분해 작용과 같은, 높은 종양:비 종양 특이성(high tumor:nontumor specificity)을 갖는 생물학적-구동(driven) 반응을 통해 작용할 수 있다.
특정 구체예에서, 방출 트리거 기는 본원에서 RT로 표기된다. 특정 구체예에서, RT는 2가(divalent)이고 화학식(C1)의 골격 내에서 결합된다. 다른 구체예에서, RT는 1가(monovalent)이며 상기 도시된 바와 같이 EG에 결합된다. 유용한 방출 트리거 기는 본원에 기재된 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 방출 트리거 기는 천연 또는 비천연 아미노산의 잔기 또는 당 고리의 잔기를 포함한다. 특정 구체예에서, 방출 트리거 기는:
Figure pct00023
또는
Figure pct00024
이다. 당업자는 제1 구조가 2가이고, 화학식 (C1)의 골격 내에 또는 화학식 (C2)에 도시된 바와 같이 결합될 수 있고, 제2 구조가 1가이고 상기 화학식 (C1)에 도시된 바와 같이 EG에 결합될 수 있음을 인식할 것이다. 특정 구체예에서, 방출 트리거 기는
Figure pct00025
이다. 특정 구체예에서, 방출 트리거 기는
Figure pct00026
이다.
일부 구체예에서, 방출 트리거 기는:
Figure pct00027
(여기서 R1은 H이거나,
Figure pct00028
이고, R2는 CH3, CH2CH2CO2H, 또는 (CH2)3NHCONH2임)의 구조를 갖는 프로테아제-절단성(protease cleavable) R1-Val-X 펩티드이거나;
Figure pct00029
(여기서, Z는 OH 또는 NH2임)의 구조를 갖는 레구마인-절단성(legumain-cleavable) Ala-Ala-Asn 또는 Ala-Ala-Asp 펩티드이거나; 또는
Figure pct00030
의 구조를 갖는 β-글루쿠로니다제-절단성 β-글루쿠로나이드(β-glucuronidase-cleavable β-glucuronide)이다.
당업자는
Figure pct00031
및
Figure pct00032
이 2가 구조이고 화학식 (C1)의 골격 내에 또는 화학식 (C2)에 도시된 바와 같이 결합될 수 있음을 인식할 것이다.
Figure pct00033
구조는 1가이며 상기 화학식 (C1)에 도시된 바와 같이 EG에 결합될 수 있다.
친수성 기(Hydrophilic Groups)
친수성 기는 본원에 기재된 화합물의 친수성을 증가시키는 것을 촉진한다. 증가된 친수성은 생물학적 시스템에서 발견되는 수용액과 같은 수용액에서 더 큰 용해도를 허용하는 것으로 여겨진다. 친수성 기는 또한 본 명세서에서 더 상세히 설명되는 스페이서 기로서 기능할 수 있다.
특정 구체예에서, 친수성 기는 본원에서 HP로 표기된다. 유용한 친수성 기는 본원에 기재된 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 친수성 기는 2가 폴리(에틸렌 글리콜)이다. 특정 구체예에서, 상기 친수성기는 하기 화학식에 따른 2가 폴리(에틸렌 글리콜)이다:
Figure pct00034
;
여기서, m은 1 내지 13, 선택적으로 1 내지 4, 선택적으로 2 내지 4, 또는 선택적으로 4 내지 8의 정수이다.
일부 구체예에서, 상기 친수성 기는 하기 화학식을 갖는 2가 폴리(에틸렌 글리콜)이다:
Figure pct00035
.
일부 다른 구체예에서, 상기 친수성기는 하기 화학식을 갖는 2가 폴리(에틸렌 글리콜)이다:
Figure pct00036
.
다른 구체예에서, 상기 친수성기는 하기 화학식을 갖는 2가 폴리(에틸렌 글리콜)이다:
Figure pct00037
.
다른 구체예에서, 상기 친수성기는 하기 화학식을 갖는 2가 폴리(에틸렌 글리콜)이다:
Figure pct00038
.
일부 구체예에서, 상기 친수성 기는 다음 화학식을 갖는 사슬-제시 술폰산(chain-presented sulfonic acid)을 보유할 수 있다:
Figure pct00039
.
스페이서 기 (Spacer Groups)
스페이서 기는 본원에 기술된 화합물의 접합기 이외의 다른 기로부터 접합기의 간격(spacing)을 용이하게 한다. 이러한 간격은 본원에 기술된 화합물의 제2 화합물로의 보다 효율적인 접합뿐만 아니라 활성 이화대사산물(active catabolite)의 보다 효율적인 절단을 초래할 수 있다. 스페이서 기는 또한 접합기를 안정화시키고 개선된 전체 항체-약물 접합체 특성을 가지고 올 수 있다.
특정 구체예에서, 스페이서 기는 본원에서 SP로 표기된다. 유용한 스페이서 기는 본원에 기재된 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 스페이서 기는 다음과 같다:
Figure pct00040
,
Figure pct00041
, 또는
Figure pct00042
.
특정 구체예에서, 상기 스페이서 기, W 4 및 상기 친수성 기가 조합되어 하기 화학식에 따른 2가 폴리(에틸렌 글리콜)을 형성한다:
Figure pct00043
; 여기서, m은 1 내지 13, 선택적으로 1 내지 4, 선택적으로 2 내지 4, 또는 선택적으로 4 내지 8의 정수이다.
일부 구체예에서, SP는
Figure pct00044
이다.
일부 구체예에서, 상기 2가 폴리(에틸렌 글리콜)은 다음 화학식을 갖는다:
Figure pct00045
.
일부 다른 구체예에서, 2가 폴리(에틸렌 글리콜)은 다음 화학식을 갖는다:
Figure pct00046
.
다른 구체예에서, 상기 2가 폴리(에틸렌 글리콜)은 다음 화학식을 갖는다:
Figure pct00047
.
다른 구체예에서, 상기 2가 폴리(에틸렌 글리콜)은 다음 화학식을 갖는다:
Figure pct00048
.
일부 구체예에서, 상기 친수성 기는 다음 화학식을 갖는 사슬-제시 술폰산을 보유할 수 있다:
Figure pct00049
.
접합기 및 그의 잔기(conjugating groups and residues thereof)
접합기는 본 명세서에 기술된 페이로드의 제2 화합물, 예를 들어 본 명세서에 기술된 항체로의 접합을 용이하게 한다. 특정 구체예에서, 상기 접합기는 본원에서 R로 표기된다. 접합기는 당업자에게 알려진 임의의 적합한 반응 메커니즘을 통해 반응할 수 있다. 특정 구체예에서, 접합기는 본원에 상세히 기술된 바와 같이 [3+2] 알킨-아지드 고리첨가 반응([3+2] alkyne-azide cycloaddition reaction), 역-전자 요구 딜스-알더 리게이션 반응(inverse-electron demand Diels-Alder ligation reaction), 티올-친전자 반응(thiol-electrophile reaction) 또는 카보닐-옥시아민 반응(carbonyl-oxyamine reaction)을 통해 반응한다. 특정 구체예에서, 상기 접합기는 알킨, 스트레인된 알킨(strained alkyne), 테트라진, 티올, 파라-아세틸-페닐알라닌 잔기, 옥시아민, 말레이미드 또는 아지드를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 접합기는 다음과 같다:
Figure pct00050
,
Figure pct00051
,
Figure pct00052
,
Figure pct00053
,
Figure pct00054
,
Figure pct00055
,
Figure pct00056
,
Figure pct00057
,
Figure pct00058
,
Figure pct00059
, -N3, 또는 -SH; 여기서 R 201 은 저급 알킬이다. 일 구체예에서, R 20 1은 메틸, 에틸 또는 프로필이다. 일 구체예에서, R 201 은 메틸이다. 추가의 접합기는 예를 들어 미국 공개특허공보 제2014/0356385호, 미국 공개특허공보 제2013/0189287호, 미국 공개특허공보　제2013/0251783호, 미국 등록특허공보 제8,703,936호, 미국 등록특허공보 제9,145,361호, 미국 등록특허공보　제9,222,940호, 및 미국 등록특허공보 제8,431,558호에 기술되어 있다.
접합 후, 접합기의 2가 잔기가 형성되고 제2 화합물의 잔기에 결합된다. 2가 잔기의 구조는 접합체를 형성하기 위해 사용된 접합 반응의 유형에 의해 결정된다.
특정 구체예에서, 접합체가 [3+2] 알킨-아지드 고리첨가 반응을 통해 형성되는 경우, 접합기의 2가 잔기는 트리아졸 고리 또는 트리아졸 고리를 포함하는 융합된 사이클릭기(fused cyclic group)를 포함한다. 특정 구체예에서 접합체가 스트레인-촉진된 [3+2] 알킨-아지드 고리첨가(strain-promoted [3+2] alkyne-azide cycloaddition, SPAAC) 반응을 통해 형성되는 경우, 접합기의 2가 잔기는 하기와 같다:
Figure pct00060
및/또는
Figure pct00061
.
한 구체예에서, 본원은 화학식 101a 내지 104b 중 어느 하나에 따른 접합체를 제공하며, 여기서 COMP는 항-FOLR1 항체의 잔기를 나타내고 PAY는 페이로드 모이어티를 나타낸다:
Figure pct00062
Figure pct00063
임의의 전술한 구체예에서, 접합체는 n개의 PAY 모이어티를 포함하고, 여기서 n은 1 내지 8의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 2이다. 일부 구체예에서, n은 3이다. 일부 구체예에서, n은 4이다. 일부 구체예에서, n은 5이다. 일부 구체예에서, n은 6이다. 일부 구체예에서, n은 7이다. 일부 구체예에서, n은 8이다.
특정 구체예에서, 본원은 COMP가 하기 화학식 (30)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 404에서, 하기 화학식 (30)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 180에서 하기 화학식 (30)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 241에서 하기 화학식 (30)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 222에서 하기 화학식 (30)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 카밧 또는 코티아 번호 체계에 따른 경쇄 위치 7에서 하기 화학식 (30)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 카밧 또는 코티아 번호 체계에 따른 경쇄 위치 42에서 하기 화학식 (30)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, PAY는 마이탄신, 헤미아스텔린, 아마니틴, 모노메틸 오리스타틴 F(MMAF) 및 모노메틸 오리스타틴 E(MMAE)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, PAY는 마이탄신이다. 특정 구체예에서, PAY는 헤미아스텔린이다. 특정 구체예에서, PAY는 아마니틴이다. 특정 구체예에서, PAY는 MMAF이다. 특정 구체예에서, PAY는 MMAE이다.
Figure pct00064
특정 구체예에서, 본원은 COMP가 하기 화학식 (56)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 404에서, 하기 화학식 (56)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 180에서 하기 화학식 (56)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 241에서 하기 화학식 (56)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 222에서 하기 화학식 (56)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 카밧 또는 코티아 번호 체계에 따른 경쇄 위치 7에서 하기 화학식 (56)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 카밧 또는 코티아 번호 체계에 따른 경쇄 위치 42에서 하기 화학식 (56)에 따른 비천연 아미노산의 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, PAY는 마이탄신, 헤미아스텔린, 아마니틴, MMAF 및 MMAE로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, PAY는 마이탄신이다. 특정 구체예에서, PAY는 헤미아스텔린이다. 특정 구체예에서, PAY는 아마니틴이다. 특정 구체예에서, PAY는 MMAF이다. 특정 구체예에서, PAY는 MMAE이다.
Figure pct00065
특정 구체예에서, 본원은 COMP가 파라-아지도-L-페닐알라닌(para-azido-L-phenylalanine)의 비천연 아미노산 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 404에서, 비천연 아미노산 잔기 파라-아지도-페닐알라닌을 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 180에서 파라-아지도-L-페닐알라닌의 비천연 아미노산 잔기를 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 241에서 비천연 아미노산 잔기 파라-아지도-L-페닐알라닌을 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 EU 번호 체계에 따른 중쇄 위치 222에서 비천연 아미노산 잔기 파라-아지도-L-페닐알라닌을 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 카밧 또는 코티아 번호 체계에 따른 경쇄 위치 7에서 비천연 아미노산 잔기 파라-아지도-L-페닐알라닌을 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, 본원은 COMP가 카밧 또는 코티아 번호 체계에 따른 경쇄 위치 42에서 비천연 아미노산 잔기 파라-아지도-L-페닐알라닌을 나타내는, 화학식 101a-104b 중 어느 하나에 따른 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 특정 구체예에서, PAY는 마이탄신, 헤미아스텔린, 아마니틴, MMAF 및 MMAE로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, PAY는 마이탄신이다. 특정 구체예에서, PAY는 헤미아스텔린이다. 특정 구체예에서, PAY는 아마니틴이다. 특정 구체예에서, PAY는 MMAF이다. 특정 구체예에서, PAY는 MMAE이다.
일부 구체예에서, 본원은, 예를 들어 PCT 공개번호 WO2016/2016/123582에 기재된 바와 같은 변형된 헤미아스텔린 및 링커를 포함하는 항-FOLR1 접합체를 제공한다. 예를 들어, 상기 접합체는 PCT 공개번호 WO 2016/123582에 기재된 바와 같은, 화학식 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, 및 I-XIXb-2, 101-111b, 또는 1-8b 중 임의의 것을 포함하는 구조를 가질 수 있다. 변형된 헤미아스텔린 및 링커를 포함하는 접합체의 예는 하기에 제공된다.
일부 구체예에서, 본원은 접합체 M의 구조를 갖는 항-FOLR1 접합체를 제공한다:
Figure pct00066
여기서, n은 1 내지 6의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 1 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 2이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항-FOLR1 접합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00067
일부 구체예에서, n은 4이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항-FOLR1 접합체는 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00068
일부 구체예에서, 본원은 접합체 P의 구조를 갖는 항-FOLR1 접합체를 제공한다:
Figure pct00069
여기서, n은 1 내지 6의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 1 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 2이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 상기 항-FOLR1 접합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00070
일부 구체예에서, n은 4이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항-FOLR1 접합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00071
일부 구체예에서, 본원은 접합체 Q의 구조를 갖는 항-FOLR1 접합체를 제공한다:
Figure pct00072
.
여기서, n은 1 내지 6의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 1 내지 4의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 2이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 상기 항-FOLR1 접합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00073
일부 구체예에서, n은 4이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항-FOLR1 접합체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00074
항-FOLR1 접합체가 접합체 M, 접합체 P 또는 접합체 Q에 따른 구조를 갖는 임의의 전술한 구체예에서, 괄호로 묶인 구조(bracketed structure)는 항체의 하나 이상의 비천연 아미노산에 공유 결합될 수 있으며, 여기서 하나 이상의 비천연 아미노산은 카밧 또는 카밧의 EU 번호 체계에 따른 HC-F404, HC-Y180 및 LC-K42로 이루어진 군으로부터 선택된 부위에 위치한다. 일부 구체예에서, 괄호로 묶인 구조는 항체의 위치 HC-F404에서 하나 이상의 비천연 아미노산에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 괄호로 묶인 구조는 항체의 위치 HC-Y180에서 하나 이상의 비천연 아미노산에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 괄호로 묶인 구조는 항체의 위치 LC-K42에서 하나 이상의 비천연 아미노산에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 괄호로 묶인 구조는 항체의 HC-F404 및 HC-Y180 위치에서 하나 이상의 비천연 아미노산에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 괄호로 묶인 구조는 항체의 HC-F404 위치의 비천연 아미노산에 공유 결합되고, 적어도 하나의 괄호로 묶인 구조는 항체의 HC-Y180 위치의 비천연 아미노산에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 괄호로 묶인 구조는 항체의 HC-Y180 및 LC-K42 위치에서 하나 이상의 비천연 아미노산에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 괄호로 묶인 구조는 항체의 HC-Y180 위치에서 비천연 아미노산에 공유 결합되고, 적어도 하나의 괄호로 묶인 구조는 항체의 LC-K32 위치에서 비천연 아미노산에 공유 결합된다.
3. 페이로드(payload)
전술한 페이로드 외에, 상기 분자적 페이로드는 당업자가 폴리펩티드에 접합하기를 원하는 임의의 분자 물질(molecular entity)일 수 있다. 특정 구체예에서, 페이로드는 치료적 모이어티이다. 이러한 구체예에서, 상기 항체 접합체는 치료적 모이어티를 그의 분자 표적에 표적화하는데 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 페이로드는 표지 모이어티이다. 이러한 구체예에서, 항체 접합체는 폴리펩티드의 표적에 대한 결합을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 페이로드는 세포 독성 모이어티이다. 이러한 구체예에서, 항체 접합체는 세포의 파괴 또는 제거를 개시하기 위해 세포 독성 모이어티를 병에 걸린 세포, 예를 들어 암 세포에 표적화하는데 사용할 수 있다. 당업자에게 명백한 다른 분자적 페이로드를 포함하는 접합체는 본원에 기재된 접합체의 범위 내에 있다.
특정 구체예에서, 항체 접합체는 표지, 염료, 중합체, 수용성 중합체, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜의 유도체, 광 가교제(photocrosslinker), 세포 독성 화합물, 방사성 핵종(radionuclide), 약물, 친화성 표지, 광친화성 표지, 반응성 화합물, 수지, 제2 단백질 또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 유사체(analog), 항체 또는 항체 단편, 금속 킬레이터, 보조 인자(cofactor), 지방산, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, DNA, RNA, 안티센스 폴리뉴클레오티드, 펩티드, 수용성 덴드리머(water-soluble dendrimer), 사이클로덱스트린, 억제성 리보 핵산, 생체적합물질(biomaterial), 나노 입자, 스핀 라벨(spin label), 형광단(fluorophore), 금속 함유 모이어티(metal-containing moiety), 방사성 모이어티(radioactive moiety), 신규 작용기(novel functional group), 다른 분자와 공유적(covalently) 또는 비공유적으로 상호 작용하는 기(group), 광 케이지(photocaged) 모이어티, 광 이성질화성 모이어티(photoisomerizable moiety), 비오틴, 비오틴의 유도체, 비오틴 유사체, 중원자를 포함하는 모이어티(moiety incorporating a heavy atom), 화학적 절단성 기(chemically cleavable group), 광 절단성 기(photocleavable group), 연장된 측쇄(elongated side chain), 탄소 결합 당(carbon-linked sugar), 산화 환원 활성제(redox-active agent), 아미노 티오산(amino thioacid), 독성 모이어티(toxic moiety), 동위 원소 표지된 모이어티(isotopically labeled moiety), 생물물리학적 프로브(biophysical probe), 인광성 기(phosphorescent group), 화학 발광 기(chemiluminescent group), 전자 치밀 기(electron dense group), 자성 기(magnetic group), 삽입 기(intercalating group), 발색단(chromophore), 에너지 전달제(energy transfer agent), 생물학적 활성제, 검출 가능한 표지, 소분자 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 페이로드를 가질 수 있다. 한 구체예에서, 페이로드는 표지, 염료, 중합체, 세포 독성 화합물, 방사성 핵종, 약물, 친화성 표지, 수지, 단백질, 폴리펩티드, 폴리펩티드 유사체, 항체, 항체 단편, 금속 킬레이터, 보조 인자, 지방산, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, DNA, RNA, 펩티드, 형광단 또는 탄소 결합 당이다. 다른 구체예에서, 페이로드는 표지, 염료, 중합체, 약물, 항체, 항체 단편, DNA, RNA 또는 펩티드이다.
4. 링커(linker)
특정 구체예에서, 항체는 항체 아미노산 및 페이로드 기와 반응할 수 있는 하나 이상의 링커로 페이로드에 연결될 수 있다. 상기 하나 이상의 링커는 당업자에게 명백한 임의의 링커일 수 있다.
용어 "링커"는 본원에서 일반적으로 화학 반응의 결과로서 형성되고 전형적으로 공유 결합인 기(group) 또는 결합(bond)을 지칭하기 위해 사용된다.
유용한 링커는 본원에 기재된 것들을 포함한다. 특정 구체예에서, 링커는 당업자에게 공지된 임의의 2가 또는 다가 링커이다. 유용한 2가 링커는 알킬렌, 치환된 알킬렌, 헤테로알킬렌, 치환된 헤테로알킬렌, 아릴렌, 치환된 아릴렌, 헤테로아릴렌 및 치환된 헤테로아릴렌을 포함한다. 특정 구체예에서, 링커는 C1-10 알킬렌 또는 C1-10 헤테로알킬렌이다. 일부 구현예에서, C1-10 헤테로알킬렌은 PEG이다.
특정 구체예에서, 링커는 가수분해적으로(hydrolytically) 안정적이다. 가수분해적으로 안정적인 연결은 특별히 이에 제한되지는 않으나 장기간, 아마도 무한한 기간 동안 생리학적 조건 하에서, 유용한 pH 값에서 상기 연결이 물에서 실질적으로 안정적이며 물과 반응하지 않는 것을 의미한다. 특정 구체예에서, 링커는 가수분해적으로 불안정하다. 가수분해적으로 불안정하거나 분해가능한(degradable) 결합은 물 또는 예를 들어 혈액을 포함한 수용액에서 결합이 분해될 수 있음을 의미한다. 효소적으로 불안정하거나 분해 가능한 결합은 하나 이상의 효소에 의해 결합이 분해될 수 있음을 의미한다.
당업계에서 이해되는 바와 같이, PEG 및 관련 중합체는 중합체 골격 또는 중합체 골격과 중합체 분자의 하나 이상의 말단 작용기 사이의 링커 기(linker group)에서 분해성(degradable) 결합을 포함할 수 있다. 예를 들어, PEG 카복실산 또는 활성화된 PEG 카복실산과 생물학적 활성 물질의 알코올 기의 반응에 의해 형성된 에스테르 연결은 일반적으로 생리학적 조건 하에서 가수 분해되어 상기 물질을 방출한다.
다른 가수분해성 결합은 카보네이트 결합(carbonate linkage); 아민과 알데히드의 반응으로 인한 이민 결합(imine linkage); 알코올을 포스페이트 기와 반응시켜 형성된 포스페이트 에스테르 결합; 히드라지드(hydrazide)와 알데히드의 반응 생성물인 히드라존(hydrazone) 결합; 알데히드와 알코올의 반응 생성물인 아세탈(acetal) 결합; 포르메이트(formate)와 알코올의 반응 생성물인 오쏘에스테르(orthoester) 결합; 특별히 이에 제한되지는 않으나, PEG와 같은 중합체의 말단의 아민기를 포함하는, 아민기 및 펩티드의 카복실기에 의해 형성된 펩티드 결합; 및 특별히 이에 제한되지는 않으나, 중합체 말단의 포스포라미디트(phosphoramidite) 기를 포함하는 포스포라미디트 기, 및 올리고뉴클레오티드의 5' 히드록시기에 의해 형성된 올리고뉴클레오티드 결합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
다양한 상이한 절단성(cleavable) 링커가 당업자에게 공지되어 있다. 미국 등록특허공보 제4,618,492호; 제4,542,225호, 및 제4,625,014호를 참고한다. 이들 링커 기로부터 작용제(agent)의 방출을 위한 메커니즘은, 예를 들어 광 불안정성 결합의 조사(irradiation of a photolabile bond) 및 산-촉매 가수 분해(acid-catalyzed hydrolysis)를 포함한다. 예를 들어, 미국 등록특허공보 제4,671,958호는 환자의 보체 시스템의 단백질 분해 효소에 의해 생체 내 표적 부위에서 절단되는 링커를 포함하는 면역 접합체에 대한 설명을 포함한다. 링커의 길이는 폴리펩티드와 이에 연결된 분자 사이의 원하는 공간 관계에 따라 미리 결정되거나 선택될 수 있다. 다양한 방사선 진단 화합물(radiodiagnostic compound), 방사선 치료 화합물(radiotherapeutic compound), 약물, 독소 및 기타 작용제를 폴리펩티드에 부착시키는 것으로 보고된 수많은 방법의 관점에서, 당업자는 주어진 작용제를 폴리펩티드에 부착하기에 적합한 방법을 결정할 수 있다.
상기 링커는 광범위한 분자량 또는 분자 길이를 가질 수 있다. 더 크거나 더 작은 분자량의 링커는 폴리펩티드와 연결된 물질(entity) 사이에 원하는 공간 관계(spatial relationship) 또는 구조(conformation)를 제공하기 위해 사용될 수 있다. 더 길거나 더 짧은 분자 길이를 갖는 링커는 또한 폴리펩티드와 연결된 물질 사이에 원하는 공간 또는 유연성(flexibility)을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 유사하게, 특정 형태(shape) 또는 구조(conformation)를 갖는 링커는 폴리펩티드가 그의 표적에 도달하기 전 또는 후에 특정 형태 또는 구조를 폴리펩티드 또는 연결된 물질에 부여하기 위해 이용될 수 있다. 링커의 각 말단에 존재하는 작용기는 원하는 조건 하에서 폴리펩티드 또는 페이로드의 방출을 조절하도록 선택될 수 있다. 폴리펩티드와 연결된 물질 사이의 공간 관계의 이러한 최적화는 분자에 새로운 특성, 조절된 특성 또는 원하는 특성을 제공할 수 있다.
일부 구체예에서, 본원은 하기를 포함하는 아령 구조(dumbbell structure)를 갖는 수용성 이작용성(bifunctional) 링커를 제공한다: a) 중합체 골격의 적어도 제1 말단 상의 아지드, 알킨, 히드라진, 히드라지드, 히드록실아민, 또는 카보닐-함유 모이어티; 및 b) 중합체 골격의 제2 말단 상의 적어도 제2 작용기. 제2 작용기는 제1 작용기와 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 구체예에서, 제2 작용기는 제1 작용기와 반응성이 아니다. 일부 구체예에서, 분지형 분자 구조의 하나 이상의 아암(arm)을 포함하는 수용성 화합물이 제공된다. 예를 들어, 상기 분지형 분자 구조는 수지상 구조일 수 있다.
일부 구체예에서, 상기 링커는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate, SPDP), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)펜타노네이트(SPP), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)부타노에이트(SPDB), N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)-2-술포-부타노에이트(술포-SPDB), N-숙신이미딜 요오도아세테이트(SIA), N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(SIAB), 말레이미드 PEG NHS, N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)시클로헥산카르복실레이트(SMCC), N-술포숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)시클로헥산카르복실레이트(술포-SMCC) 또는 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 17-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5,8,11,14-테트라옥소-4,7,10,13-테트라아자헵타데칸-1-오에이트(CX1-1)로 이루어진 군에서 선택되는 링커 전구체로부터 유래된다. 특정 구체예에서 상기 링커는 링커 전구체 N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)시클로헥산카르복실레이트(SMCC)로부터 유래된다.
일부 구체예에서, 링커는 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드 및 펜타펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 링커 전구체로부터 유래된다. 이러한 구체예에서, 상기 링커는 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 예시적인 디펩티드는 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌(af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-리신(fk 또는 phe-lys); 페닐알라닌-호모리신(phe-homolys); 및 N-메틸-발린-시트룰린(Me-val-cit)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 예시적인 트리펩티드는 글리신-발린-시트룰린(gly-val-cit), 글리신-글리신-글리신(gly-gly-gly) 및 글리신-(메톡시에톡시에틸)세린-발린(gly-val-citalanine OMESerValAla)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
일부 구체예에서, 상기 링커는 자기-희생(self-immolative) 스페이서를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 자기-희생 스페이서는 p-아미노벤질을 포함한다. 일부 구체예에서, p-아미노벤질 알콜은 아미드 결합을 통해 아미노산 단위에 부착되고, 벤질 알콜과 페이로드 사이에 카르바메이트(carbamate), 메틸카르바메이트, 또는 카보네이트가 형성된다(Hamann 등 (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103). 일부 구체예에서, 상기 링커는 p-아미노벤질옥시카보닐(PAB)을 포함한다. 자기-희생 스페이서의 다른 예는 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(미국 등록특허공보 제7,375,078호; Hay 등 (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237) 및 오쏘(ortho)- 또는 파라-아미노벤질아세탈과 같은 PAB 기와 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 치환 및 비치환된 4-아미노부티르산 아미드(Rodrigues 등 (1995) Chemistry Biology 2:223), 적절하게 치환된 비시클로 [2.2.1] 및 비시클로 [2.2.2] 고리 시스템(Storm 등 (1972) J. Amer. Chem. Soc. 94 : 5815) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드(Amsberry 등. (1990) J. Org. Chem. 55:5867)과 같은 아미드 결합 가수 분해 시 고리화를 겪는 스페이서가 사용될 수 있다. 글리신 잔기의 α-탄소에 약물을 연결시키는 것은 접합체에 유용할 수 있는 자기-희생 스페이서의 다른 예이다(Kingsbury 등 (1984) J. Med. Chem.　27:1447).
특정 구체예에서, 링커 전구체는 더 큰 링커를 형성하기 위해 조합될 수 있다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 링커는 디펩티드 발린-시트룰린 및 p-아미노벤질옥시카보닐을 포함한다. 이들은 citValCit--PAB 링커라고도 불린다.
특정 구체예에서, 상기 페이로드는 항체 아미노산 기와 반응할 수 있는 하나 이상의 링커 기를 갖는 링커에 연결될 수 있으며, 이는 본원에서 링커-페이로드로 지칭된다. 하나 이상의 링커는 당업자에게 명백하거나 본원에 기재된 임의의 링커일 수 있다.
예를 들어, 후술되는 링커 전구체 (A) 내지 (L)과 같은 추가의 링커가 본원에 개시되어 있다.
5. 항체 특이성(antibody specificity)
접합체는 인간 엽산 수용체 알파에 선택적으로 결합하는 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 인간 엽산 수용체 알파(인간 FOLR1)의 세포 외 도메인에 선택적으로 결합한다.
일부 구체예에서, 항체는 인간 FOLR1의 동족체(homolog)에 결합한다. 일부 측면에서, 항체는 원숭이, 마우스, 개, 고양이, 랫트, 소, 말, 염소 및 양으로부터 선택된 종으로부터의 인간 FOLR1의 동족체에 결합한다. 일부 측면에서, 동족체는 시노몰구스 원숭이 동족체다. 일부 측면에서, 동족체는 마우스 또는 뮤린 유사체(analog)이다.
일부 구체예에서, 항체는 본 개시에서 제공된 공통 서열(consensus sequence)에 의해 정의된 하나 이상의 CDR 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 본 개시 내용에 제공된 예시적인 CDR, VH 또는 VL 서열 또는 그의 변이체를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 변이체는 보존적 아미노산 치환을 갖는 변이체이다.
일부 구체예에서, 항체는 아미노산 잔기의 수와 관련하여 특정 길이를 갖는 하나 이상의 CDR을 갖는다. 일부 구체예에서, 항체의 코티아 CDR-H1은 길이가 6, 7, 또는 8개의 잔기이다. 일부 구체예에서, 항체의 카밧 CDR-H1은 길이가 4, 5 또는 6개의 잔기이다. 일부 구체예에서, 항체의 코티아 CDR-H2는 길이가 5, 6 또는 7개의 잔기이다. 일부 구체예에서, 항체의 카밧 CDR-H2는 길이가 16, 17 또는 18개의 잔기이다. 일부 구체예에서, 항체의 카밧/코티아 CDR-H3은 길이가 13, 14, 15, 16 또는 17개의 잔기이다.
일부 측면에서, 항체의 카밧/코티아 CDR-L1은 길이가 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개의 잔기이다. 일부 측면에서, 항체의 카밧/코티아 CDR-L2는 길이가 6, 7, 또는 8개의 잔기이다. 일부 측면에서, 항체의 카밧/코티아 CDR-L3은 길이가 8, 9 또는 10개의 잔기이다.
일부 구체예에서, 항체는 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 경쇄는 카파 경쇄이다. 일부 측면에서, 경쇄는 람다 경쇄이다.
일부 구체예에서, 항체는 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgA이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgD이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgE이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgM이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG1이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG2이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG3이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG4이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgA1이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgA2이다.
일부 구체예에서, 항체는 항체 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 Fv 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 Fab 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 F(ab')2 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 Fab' 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 scFv(sFv) 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 scFv-Fc 단편이다.
일부 구체예에서, 항체는 단일클론 항체다. 일부 구체예에서, 항체는 다중클론 항체이다.
일부 구체예에서, 항체는 키메라 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 인간화 항체이다. 일부 구체예에서, 항체는 인간 항체이다.
일부 구체예에서, 항체는 친화도 성숙된 항체이다. 일부 측면에서, 항체는 본 개시에서 제공된 예시적 서열로부터 유래된 친화도 성숙된 항체이다.
본원에 제공된 항체는 암을 비롯한 다양한 질환 및 상태의 치료에 유용할 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 제공된 항체는 고형 종양의 암의 치료에 유용할 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 항체는 결장직장암의 치료에 유용할 수 있다.
5.1 CDR-H3 서열
일부 구체예에서, 항체는 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VH 서열의 CDR-H3 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-H3 서열은 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열의 CDR-H3 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 255를 포함하거나, 이로 이루어지거나 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 294를 포함하거나, 이로 이루어지거나 또는 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열을 포함한다.
5.2 예시적인 CDR을 포함하는 V H 서열
일부 구체예에서, 항체는 본 개시에서 제공되는 하나 이상의 예시적인 CDR-H 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이루어진 하나 이상의 CDR-H 서열 및 그의 변이체를 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, CDR-H 서열은 서열번호: 308-366으로부터 선택된 VH 서열에 제공된 하나 이상의 CDR-H 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이루어진다.
5.2.1. 예시적인 카밧 CDR을 포함하는 V H 서열
일부 구체예에서, 항체는 본 개시 내용에 제공된 하나 이상의 예시적인 카밧 CDR-H 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이루어진 하나 이상의 카밧 CDR-H 서열 및 그의 변이체를 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.1.1. 카밧 CDR-H3
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 여기서 CDR-H3 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VH 서열의 카밧 CDR-H3 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 카밧 CDR-H3 서열은 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열의 카밧 CDR-H3 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 255를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 294를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.1.2. 카밧 CDR-H2
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 여기서 CDR-H2 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VH 서열의 카밧 CDR-H2 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 카밧 CDR-H2 서열은 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열의 카밧 CDR-H2 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 181-239로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 196을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어지는 카밧 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 235를 포함하거나, 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.1.3. 카밧 CDR-H1
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 여기서 CDR-H1 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VH 서열의 카밧 CDR-H1 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 카밧 CDR-H1 서열은 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열의 카밧 CDR-H1 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 63-121로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 78을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 117를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 포함하는 카밧 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.1.4. 카밧 CDR-H3 + 카밧 CDR-H2
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H3 서열, 및 서열번호: 181-239로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 카밧 CDR-H3 서열 및 카밧 CDR-H2 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 카밧 CDR-H3 및 카밧 CDR-H2는 모두 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.2.1.5. 카밧 CDR-H3 + 카밧 CDR-H1
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H3 서열, 및 서열번호: 63-121로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 카밧 CDR-H3 서열 및 카밧 CDR-H1 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 카밧 CDR-H3 및 카밧 CDR-H1은 모두 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.2.1.6. 카밧 CDR-H1 + 카밧 CDR-H2
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 63-121로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열, 및 서열번호: 181-239로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 카밧 CDR-H1 서열 및 카밧 CDR-H2 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 카밧 CDR-H1 및 카밧 CDR-H2는 모두 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.2.1.7. 카밧 CDR-H1 + 카밧 CDR-H2 + 카밧 CDR-H3
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 63-121로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열, 서열번호: 181-239로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열, 및 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 카밧 CDR-H1 서열, 카밧 CDR-H2 서열 및 카밧 CDR-H3 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 카밧 CDR-H1, 카밧 CDR-H2 및 카밧 CDR-H3은 모두 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.2.2. 예시적인 코티아 CDR을 포함하는 V H 서열
일부 구체예에서, 항체는 본 개시에서 제공되는 하나 이상의 예시적인 코티아 CDR-H 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 하나 이상의 코티아 CDR-H 서열 및 그의 변이체를 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.2.1. 코티아 CDR-H3
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 여기서 CDR-H3 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VH 서열의 코티아 CDR-H3 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 코티아 CDR-H3 서열은 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열의 코티아 CDR-H3 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 255를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 서열번호: 294를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.2.2. 코티아 CDR-H2
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 여기서 CDR-H2 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VH 서열의 코티아 CDR-H2 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 코티아 CDR-H2 서열은 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열의 코티아 CDR-H2 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 122-180으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 137을 포함하거나 이로 이루어지거나 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 176을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.2.3. 코티아 CDR-H1
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 여기서 CDR-H1 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VH 서열의 코티아 CDR-H1 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 코티아 CDR-H1 서열은 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열의 코티아 CDR-H1 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 4-62로부터 선택된 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 19를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 58을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1 서열을 포함하는 VH 서열을 포함한다.
5.2.2.4. 코티아 CDR-H3 + 코티아 CDR-H2
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H3, 및 서열번호: 122-180로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열을 포함하는, VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 코티아 CDR-H3 서열 및 코티아 CDR-H2 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 코티아 CDR-H3 및 코티아 CDR-H2는 모두 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.2.2.5. 코티아 CDR-H3 + 코티아 CDR-H1
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H3, 및 서열번호: 4-62로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1 서열을 포함하는, VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 코티아 CDR-H3 서열 및 코티아 CDR-H1 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 코티아 CDR-H3 및 코티아 CDR-H1은 둘 다 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.2.2.6. 코티아 CDR-H1 + 코티아 CDR-H2
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 4-62로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1, 및 서열번호: 122-180로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열을 포함하는, VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 코티아 CDR-H1 서열 및 코티아 CDR-H2 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 코티아 CDR-H1 및 코티아 CDR-H2는 둘 다 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.2.2.7. 코티아 CDR-H1 + 코티아 CDR-H2 + 코티아 CDR-H3
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 4-62로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1, 서열번호: 122-180로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열, 및 서열번호: 240-298로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H3 서열을 포함하는, VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 코티아 CDR-H1 서열, 코티아 CDR-H2 서열 및 코티아 CDR-H3 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 코티아 CDR-H1, 코티아 CDR-H2 및 코티아 CDR-H3은 모두 서열번호: 308-366으로부터 선택된 단일의 예시적인 VH 서열로부터 온 것이다.
5.3. V H 서열
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 308-366에 제공된 VH 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이로 이루어진다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 308-366으로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 323을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 362를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VH 서열을 포함한다.
5.3.1. V H 서열의 변이체(variants of V H sequences)
일부 구체예에서, 본원에 제공된 VH 서열은 본 개시에서 제공되는 예시적인 VH 서열의 변이체를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이로 이루어진다.
일부 측면에서, VH 서열은 본 개시에서 제공되는 예시적인 VH 서열의 변이체를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, VH 서열은 본 개시에서 제공되는 임의의 예시적인 VH 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.5% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다.
일부 구체예에서, VH 서열은 20개 이하, 19개 이하, 18개 이하, 17개 이하, 16개 이하, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 아미노산 치환을 갖는 본 개시 내용에 제공된 임의의 예시적인 VH 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 구성된다. 일부 측면에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
5.4. CDR-L3 서열
일부 구체예에서, 항체는 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VL 서열의 CDR-L3 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L3 서열은 서열번호: 367-369에 제공된 VL 서열의 CDR-L3 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 305-307로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 305를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 306를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 307을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함한다.
5.5. 예시적 CDR을 포함하는 V L 서열
일부 구체예에서, 항체는 본 개시에서 제공되는 하나 이상의 예시적인 CDR-L 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 하나 이상의 CDR-L 서열 및 이의 변이체를 포함하는 VL 서열을 포함한다.
5.5.1. CDR-L3
일부 구체예에서, 항체는 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 서열을 포함하고, 여기서 CDR-L3 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VL 서열의 CDR-L3 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이로 구성된다. 일부 측면에서, CDR-L3 서열은 서열번호: 367-369에 제공된 VL 서열의 CDR-L3 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 305-307로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 305를 포함하거나 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 306을 포함하거나 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서 항체는 서열번호: 307를 포함하거나 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다.
5.5.2. CDR-L2
일부 구체예에서, 항체는 CDR-L2 서열을 포함하는 VL 서열을 포함하고, 여기서 CDR-L2 서열은 본원에 제공된 예시적인 항체 또는 VL 서열의 CDR-L2 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, CDR-L2 서열은 서열번호: 367-369에 제공된 VL 서열의 CDR-L2 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 302-304로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 302를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 303를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 304를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다.
5.5.3. CDR-L1
일부 구체예에서, 항체는 CDR-L1 서열을 포함하는 VL 서열을 포함하고, 여기서 CDR-L1 서열은 본원에 제공된 예시적 항체 또는 VL 서열의 CDR-L1 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, CDR-L1 서열은 서열번호: 367-369에 제공된 VL 서열의 CDR-L1 서열이다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 299-301로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 299를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 300을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다.
5.5.4. CDR-L3 + CDR-L2
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 305-307로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열 및 서열번호: 302-304로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L3 서열 및 CDR-L2 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, CDR-L3 및 CDR-L2는 모두 서열번호: 367-369로부터 선택된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다.
5.5.5. CDR-L3 + CDR-L1
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 305-307로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열 및 서열번호: 299-301로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L3 서열 및 CDR-L1 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, CDR-L3 및 CDR-L1은 모두 서열번호: 367-369로부터 선택된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다.
5.5.6. CDR-L1 + CDR-L2
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 299-301로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열 및 서열번호: 302-304로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L1 서열 및 CDR-L2 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, CDR-L1 및 CDR-L2는 모두 서열번호: 367-369로부터 선택된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다.
5.5.7. CDR-L1 + CDR-L2 + CDR-L3
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 299-301로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열, 서열번호: 302-304로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열, 및 서열번호: 305-307로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L1 서열, CDR-L2 서열 및 CDR-L3 서열은 모두 본 개시에서 제공된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3은 모두 서열번호: 367-369로부터 선택된 단일의 예시적인 VL 서열로부터 온 것이다.
5.6. V L 서열
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 367-369에 제공된 VL 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이로 구성된다.
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 367-369로부터 선택된 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 367을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 368을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 서열번호: 369를 포함하거나 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VL 서열을 포함한다.
5.6.1. V L 서열의 변이체
일부 구체예에서, 본원에 제공된 VL 서열은 본 개시에서 제공되는 예시적인 VL 서열의 변이체를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다.
일부 측면에서, VL 서열은 본 개시에서 제공되는 예시적인 VL 서열의 변이체를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이로 구성된다. 일부 측면에서, VL 서열은 본 개시에서 제공되는 임의의 예시적인 VL 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.5% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다.
일부 구체예에서, VL 서열은 20개 이하, 19개 이하, 18개 이하, 17개 이하, 16개 이하, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 아미노산 치환을 갖는 본 개시 내용에 제공된 임의의 예시적인 VL 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 구성된다. 일부 측면에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
5.7. 쌍(Pairs)
5.7.1. CDR-H3 - CDR-L3 쌍
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H3 서열 및 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-H3 서열은 VH의 일부이고 CDR-L3 서열은 VL의 일부이다.
일부 측면에서, CDR-H3 서열은 서열번호: 240-298을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열이고, CDR-L3 서열은 서열번호: 305-307을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H3 - CDR-L3 쌍은 서열번호: 305 및 서열번호: 255; 및 서열번호: 305 및 서열번호: 294로부터 선택된다.
일부 측면에서, CDR-H3 - CDR-L3 쌍은 서열번호: 306 및 서열번호: 255; 및 서열번호: 306 및 서열번호: 294로부터 선택된다.
일부 측면에서, CDR-H3 - CDR-L3 쌍은 서열번호: 307 및 서열번호: 255; 및 서열번호: 307 및 서열번호: 294로부터 선택된다.
5.7.2. CDR-H1 - CDR-L1 쌍
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H1 서열 및 CDR-L1 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-H1 서열은 VH의 일부이고 CDR-L1 서열은 VL의 일부이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 4-62를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1 서열이고, CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 63-121을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열이고, CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이다.
5.7.3. CDR-H2 - CDR-L2 쌍
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H2 서열 및 CDR-L2 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-H2 서열은 VH의 일부이고 CDR-L2 서열은 VL의 일부이다.
일부 측면에서, CDR-H2 서열은 서열번호: 122-180을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열이고, CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 181-239를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열이고, CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이다.
5.7.4. V H - V L 쌍
일부 구체예에서, 항체는 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다.
일부 측면에서, VH 서열은 서열번호: 308-366을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VH 서열이고, VL 서열은 서열번호: 367-369를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 VL 서열이다.
일부 측면에서, VH - VL 쌍은 서열번호: 367 및 서열번호: 323; 및 서열번호: 367 및 서열번호: 362로부터 선택된다.
일부 측면에서, VH - VL 쌍은 서열번호: 368 및 서열번호: 323; 및 서열번호: 368 및 서열번호: 362 로부터 선택된다.
일부 측면에서, VH - VL 쌍은 서열번호: 369 및 서열번호: 323; 및 서열번호: 369 및 서열번호: 362 로부터 선택된다.
5.7.4.1. V H - V L 쌍의 변이체
일부 구체예에서, 본원에 제공된 VH - VL 쌍은 본 개시에서 제공되는 예시적인 VH 및/또는 VL 서열의 변이체를 포함한다.
일부 측면에서, VH 서열은 본 개시에서 제공되는 예시적인 VH 서열의 변이체를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다. 일부 측면에서, VH 서열은 본 개시에서 제공되는 임의의 예시적인 VH 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.1% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다.
일부 구체예에서, VH 서열은 20개 이하, 19개 이하, 18개 이하, 17개 이하, 16개 이하, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 아미노산 치환을 갖는 본 개시 내용에 제공된 임의의 예시적인 VH 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 구성된다. 일부 측면에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
일부 측면에서, VL 서열은 본 개시에서 제공되는 예시적인 VL 서열의 변이체를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 필수적으로 이로 구성된다. 일부 측면에서, VL 서열은 본 개시에서 제공되는 임의의 예시적인 VL 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.5% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진다.
일부 구체예에서, VL 서열은 20개 이하, 19개 이하, 18개 이하, 17개 이하, 16개 이하, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 아미노산 치환을 갖는 본 개시 내용에 제공된 임의의 예시적인 VL 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 구성된다. 일부 측면에서, 상기 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
5.8. 6개의 CDR 모두를 포함하는 항체
일부 구체예에서, 항체는 CDR-H1 서열, CDR-H2 서열, CDR-H3 서열, CDR-L1 서열 및 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 측면에서, CDR 서열은 VH의 일부(CDR-H의 경우) 또는 VL의 일부(CDR-L의 경우)이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 4-62을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1이고; CDR-H2 서열은 서열번호: 122-180을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열이고; CDR-H3 서열은 서열번호: 240-298을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열이고; CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이고; CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304를 포함하거나, 이로 이루어지거나 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이고; CDR-L3 서열은 서열번호: 305-307을 포함하거나, 이로 이루어지거나 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 19를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1 서열이며; CDR-H2 서열은 서열번호: 137을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열이고; CDR-H3 서열은 서열번호: 255를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열이며; CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이고; CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이고; CDR-L3 서열은 서열번호: 305-307을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 58을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H1 서열이고; CDR-H2 서열은 서열번호: 176을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 코티아 CDR-H2 서열이고; CDR-H3 서열은 서열번호: 294를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열이고; CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이고; CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이고; CDR-L3 서열은 서열번호: 305-307을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 63-121을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열이고; CDR-H2 서열은 서열번호: 181-239를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열이고; CDR-H3 서열은 서열번호: 240-298을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열이고; CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이고; CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이고; CDR-L3 서열은 서열번호: 305-307을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 78을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열이고; CDR-H2 서열은 서열번호: 196을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열이고; CDR-H3 서열은 서열번호: 255를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열이며; CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이고; CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이고; CDR-L3 서열은 서열번호: 305-307을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열이다.
일부 측면에서, CDR-H1 서열은 서열번호: 117을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H1 서열이고; CDR-H2 서열은 서열번호: 235를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 카밧 CDR-H2 서열이고; CDR-H3 서열은 서열번호: 294를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-H3 서열이고; CDR-L1 서열은 서열번호: 299-301을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L1 서열이고; CDR-L2 서열은 서열번호: 302-304를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L2 서열이고; CDR-L3 서열은 서열번호: 305-307을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 또는 이로 필수적으로 이루어진 CDR-L3 서열이다.
6. 생식 계열(germline)
일부 구체예에서, 엽산 수용체 알파에 특이적으로 결합하는 항체는 특정 생식 계열 유전자에 의해 코딩되는 가변 영역 또는 이의 변이체를 포함하는 항체이다. 본원에 제공된 예시적인 항체는 중쇄 가변 영역 생식 계열 유전자 VH1-18, VH3-33, VH2-5, VH2-70, 및 VH4-30-4 또는 이의 변이체; 및 경쇄 가변 영역 생식 계열 유전자 Vκ1-5, Vκ3-11, Vκ2-20, Vκ1-33 및 Vκ1-16, 또는 그의 변이체에 의해 코딩되는 가변 영역을 포함한다.
당업자는 본원에 제공된 CDR 서열이 다른 가변 영역 생식 계열 유전자 또는 이의 변이체에 의해 암호화된 가변 영역과 조합될 때 유용할 수 있음을 인식할 것이다. 특히, 본원에 제공된 CDR 서열은 상기 언급된 가변 영역 생식 계열 유전자와 구조적으로 유사한 가변 영역 생식 계열 유전자 또는 이의 변이체에 의해 코딩되는 가변 영역과 조합될 때 유용할 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 본원에 제공된 CDR-H 서열은 VH1, VH2, VH3 또는 VH4 패밀리로부터 선택된 가변 영역 생식 계열 유전자, 또는 그의 변이체에 의해 코딩된 가변 영역과 조합될 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 제공된 CDR-L 서열은 Vκ1, Vκ2 또는 Vκ3로부터 선택된 가변 영역 생식 계열 유전자, 또는 그의 변이체에 의해 코딩된 가변 영역과 조합될 수 있다.
7. 친화도(Affinity)
일부 구체예에서, KD로 나타낸 바와 같은 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 약 10-5 M 미만, 약 10-6 M 미만, 약 10-7 M 미만, 약 10-8 M 미만, 약 10-9 M 미만, 약 10-10 M 미만, 약 10-11 M 미만, 또는 약 10-12 M 미만이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-11 M 이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-10 M이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-9 M이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-7 M 내지 10-8 M이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-8 M 내지 10-11 M이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-8 M 내지 10-10 M이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-9 M 내지 10-11 M이다. 일부 구체예에서, 상기 항체의 친화도는 약 10-9 M 내지 10-10 M이다.
일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고 KD로 표시되는 바와 같이, 인간 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 약 0.36Х10-9 M 내지 약 2.21Х10-9 M이다. 일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고 KD로 표시되는 바와 같이, 인간 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 약 8.55Х10-10 M 내지 약 1.70Х10-8 M이다. 일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고 KD로 표시되는 바와 같이, 인간 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 약 5.71Х10-10 M 내지 약 2.58Х10-8 M이다. 일부 구체예에서, 인간 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 하기 실시예에서 인간 엽산 수용체 알파에 대해 보고된 대략의 KD 값 중 임의의 것이다.
일부 구체예에서, 항체는 적어도 약 104 M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 적어도 약 105 M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 적어도 약 106 M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 적어도 약 107 M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 적어도 약 108　M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 적어도 약 109 M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 104 M-1Хsec-1 내지 약 1010 M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 105 M-1Хsec-1 내지 약 1010 M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 106 M-1Хsec-1 내지 약 1010　M-1Хsec-1의 ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 107 M-1Хsec-1 내지 약 1010　M-1Хsec-1의 ka를 갖는다.
일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고, 인간 엽산 수용체 알파와 회합(association)할 때, 항체는 약 4.44Х105　M-1Хsec-1 내지 약 1.61Х105 M-1Хsec-1의 Ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고, 인간 엽산 수용체 알파와 회합할 때, 항체는 약 2.90Х105 M-1Хsec-1 내지 약 9.64Х109 M-1Хsec-1의 Ka를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 인간 엽산 수용체 알파와 회합할 때, 하기 실시예에서 인간 엽산 수용체 알파에 대해 보고된 대략의 임의의 ka 값의 ka를 갖는다.
일부 구체예에서, 항체는 약 10-5 sec-1 이하의 Kd를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 10-4 sec-1 이하의 Kd를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 10-3 sec-1 이하의 Kd를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 10-2 sec-1 내지 약 10-5 sec-1의 Kd를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 10-2　sec-1 내지 약 10-4 sec-1의 Kd를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 약 10-3　sec-1 내지 약 10-5 sec-1의 Kd를 갖는다.
일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고, 인간 엽산 수용체 알파로부터 해리할 때, 항체는 약 8.66Х10-4 sec-1 내지 약 1.08Х10-2 sec-1의 kd를 갖는다. 일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고, 인간 엽산 수용체 알파로부터 해리할 때, 항체는 약 2.28Х10-4 sec-1 내지 약 4.82Х101 sec-1의 kd를 갖는다. 일부 구체예에서, 항체는 인간 엽산 수용체 알파로부터 해리할 때, 하기 실시예에서 인간 엽산 수용체 알파에 대해 보고된 대략의 임의의 kd 값의 Kd를 갖는다.
일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고 KD로 표시되는 시노몰구스 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 약 0.19Х10-9 M 내지 약 2.84Х10-9 M이다. 일부 구체예에서, 시노몰구스 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 하기 실시예에서 시노몰구스 엽산 수용체 알파에 대해 보고된 대략의 임의의 KD 값이다.
일부 구체예에서, 25oC에서의 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되고 KD에 의해 나타낸 바와 같이 마우스 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 약 0.5Х10-9　M 내지 약 9.07Х10-8 M 이다. 일부 구체예에서, 마우스 엽산 수용체 알파에 대한 항체의 친화도는 하기 실시예에서 마우스 엽산 수용체 알파에 대해 보고된 대략의 임의의 KD 값이다.
일부 측면에서, KD, ka 및 kd는 25oC에서 결정된다. 일부 구체예에서, KD, ka 및 kd는 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정된다. 일부 실시 양태에서, KD, ka 및 kd는 본원에 제공된 실시예에 기재된 방법에 따라 결정된다.
8. 에피토프 빈(Epitope Bins)
일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 308-366 중 어느 하나를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항체는 상기 VH-VL 쌍 중 임의의 것을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항체는 서열번호: 308-366 중 어느 하나를 포함하는 항체와 에피토프 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구체예에서, 항체는 상기 VH-VL 쌍 중 어느 하나를 포함하는 항체와 에피토프 결합에 대해 경쟁한다.
9. 글리코실화 변이체(Glycosylation Variants)
특정 구체예에서, 항체는 글리코실화되는 정도가 증가, 감소 또는 제거되도록 변경될 수 있다. 폴리펩티드의 글리코실화는 전형적으로 "N-연결(N-linked)" 또는 "O-연결(O-linked)"이다.
"N-연결된" 글리코실화는 탄수화물 모이어티(carbohydrate moiety)가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착되는 것을 지칭한다. 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌의 트리펩티드 서열(여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 모이어티의 아스파라긴 측쇄로의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드에서 이들 트리펩티드 서열 중 어느 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성한다.
"O-연결된" 글리코실화는 5-히드록시프롤린 또는 5- 히드록시리신도 사용될 수 있지만, N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 자일로스와 같은 당 중 하나를 히드록시아미노산, 가장 일반적으로 세린 또는 트레오닌에 부착하는 것을 지칭한다.
항체에 N-연결된 글리코실화 부위를 첨가 또는 결실하는 것은 하나 이상의 상기 기재된 트리펩티드 서열이 생성 또는 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 달성될 수 있다. O-연결된 글리코실화 부위의 첨가 또는 결실은 항체의 서열 내에서 또는 (경우에 따라) 항체의 서열에 대한 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 첨가, 결실 또는 치환에 의해 달성될 수 있다.
10. Fc 변이체(Fc variants)
특정 구체예에서, 아미노산 변형은 본원에 제공된 항체의 Fc 영역으로 도입되어 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다. 특정 구체예에서, Fc 영역 변이체는 전부는 아니지만 일부 효과기 기능을 보유한다. 이러한 항체는, 예를 들어 생체 내에서 항체의 반감기가 중요하지만 특정 효과기 기능이 불필요하거나 유해한 용도에 유용할 수 있다. 효과기 기능의 예는 보체-의존적 세포 독성(CDC) 및 항체-지시된 보체-매개 세포 독성(antibody-directed complement-mediated cytotoxicity, ADCC)을 포함한다. 변경된 효과기 기능을 갖는 다수의 치환 또는 치환 또는 결실은 당업계에 공지되어 있다.
일부 구체예에서, Fc는 CH3 서열 중 하나 이상에서 하나 이상의 변형을 포함한다. 일부 구체예에서, Fc는 CH2 서열 중 하나 이상에서 하나 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, Fc는 V262E, V262D, V262K, V262R, V262S, V264S, V303R, 및 V305R로 이루어진 군에서 선택된 하나 또는 변형을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, Fc는 단일 폴리펩티드이다. 일부 구체예에서, Fc는 다중 펩티드, 예를 들어 2개의 폴리펩티드이다. Fc 영역에서의 예시적인 변형은 예를 들어 2017년 6월 14일에 출원된 국제 특허출원 PCT/US2017/037545에 기재되어 있다.
CDC 및/또는 ADCC 활성의 변경은 시험관 내 및/또는 생체 내 분석을 사용하여 확인할 수 있다. 예를 들어, FcγR 결합을 측정하기 위해 Fc 수용체(FcR) 결합 분석을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하기 위한 1차 세포(primary cell)인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Ann. Rev. Immunol., 1991, 9:457-492, 그 전문이 참고로 포함됨]에 요약되어 있다.
관심있는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관 내 분석의 비제한적인 예가 미국 등록특허공보 제5,500,362호 및 제5,821,337호; Hellstrom 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1986, 83:7059-7063; Hellstrom 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1985, 82:1499-1502; 및 Bruggemann 등, J. Exp. Med., 1987, 166:1351-1361(이들 문헌 각각의 전문이 참고로서 포함됨)에 제공된다. 이러한 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 Clynes 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1998, 95:652-656(그 전문이 참고로서 포함됨)에 기재된 바와 같이 동물 모델을 사용하여 생체 내에서 평가될 수 있다.
C1q 결합 분석은 또한 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인하기 위해 수행될 수 있다. C1q 결합 분석의 예는 WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에 기술된 것들을 포함하며, 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함된다.
보체 활성화 분석은 예를 들어 Gazzano-Santoro 등, J. Immunol. Methods, 1996, 202:163-171; Cragg 등, Blood, 2003, 101:1045-1052; 및 Cragg 및 Glennie, Blood, 2004, 103:2738-2743(이들 각각은 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된 것을 포함한다.
FcRn 결합 및 생체 내 제거(반감기 결정)는 또한 예를 들어 Petkova 등, Intl. Immunol., 2006, 18:1759-1769(전체 내용이 참고로 포함됨)에 기재된 방법을 사용하여 측정될 수 있다.
11. 변형된 아미노산(modified amino acids)
항체 접합체가 변형된 아미노산을 포함하는 경우, 변형된 아미노산은 기술자에 의해 적합한 것으로 간주되는 임의의 변형된 아미노산일 수 있다. 특정 구체예에서, 변형된 아미노산은 링커 전구체 또는 페이로드 전구체에 공유 결합을 형성하는데 유용한 반응기를 포함한다. 특정 구체예에서, 변형된 아미노산은 비천연 아미노산이다. 특정 구체예에서, 반응기는 아미노, 카르복시, 아세틸, 히드라지노, 히드라지도, 세미카르바지도, 설파닐, 아지도 및 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 변형된 아미노산은 또한 예를 들어 WO 2013/185115 및 WO 2015/006555에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.
특정 구체예에서, 아미노산 잔기는 하기 화학식 중 어느 하나에 따른 것이다:
Figure pct00075
,
Figure pct00076
또는
Figure pct00077
.
당업자는 항체가 일반적으로 L-아미노산으로 구성되는 것임을 인식할 것이다. 그러나, 비천연 아미노산의 경우, 본원의 방법 및 조성물은 기술자에게 위치-특이적 부위(site-specific position)에 L-비천연 아미노산, D-비천연 아미노산 또는 라세미 비천연 아미노산을 사용할 수 있는 능력을 제공한다. 특정 구체예에서, 본원에 기재된 비천연 아미노산은 천연 아미노산의 D-버전 및 천연 아미노산의 라세미 버전을 포함한다.
상기 화학식에서, 물결 선은 항체의 나머지 폴리펩티드 사슬에 연결된 결합을 나타낸다. 이러한 비천연 아미노산은 천연 아미노산이 동일한 폴리펩티드 사슬에 통합되는 것처럼 폴리펩티드 사슬에 통합될 수 있다. 특정 구체예에서, 비천연 아미노산은 화학식에 나타낸 바와 같이 아미드 결합을 통해 폴리펩티드 사슬에 통합된다.
상기 화학식에서, R은 아미노산 잔기가 천연 아미노산 잔기와 동일하지 않는 한 제한 없이 임의의 작용기를 나타낸다. 특정 구체예에서, R은 소수성 기, 친수성 기, 극성 기, 산성 기, 염기성 기, 킬레이트 기, 반응기, 치료적 모이어티 또는 표지 모이어티일 수 있다. 특정 구체예에서, R은 R1NR2R3, R1C(=O)R2, R1C(=O)OR2, R1N3, R1C(≡CH)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이들 구체예에서, R1은 결합, 알킬렌, 헤테로알킬렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌으로 이루어진 군에서 선택된다. R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬 및 헤테로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 비천연적으로 코딩된 아미노산은 20개의 보통의 아미노산에서 발견되지 않는 작용기(아지도, 케톤, 알데히드 및 아미노 옥시기를 포함하나, 이에 제한되지 않음)와 효율적이고 선택적으로 반응하여 안정한 접합체를 형성하는 측쇄 작용기를 포함한다. 예를 들어, 아지도 작용기를 함유하는 비천연적으로 코딩된 아미노산을 포함하는 항원-결합 폴리펩티드는 알킨 모이어티를 함유하는 중합체(폴리(에틸렌글리콜)을 포함하나 이에 제한되지 않음) 또는 대안적으로 제2 폴리펩티드와 반응하여 Huisgen [3 + 2] 고리첨가 생성물을 형성하는 아지드 및 알킨 작용기의 선택적 반응으로부터의 안정한 접합체를 형성할 수 있다.
본 발명에 사용하기에 적합하고 수용성 중합체와의 반응에 유용한 예시적인 비천연적으로 코딩된 아미노산은 카보닐, 아미노옥시, 히드라진, 히드라지드, 세미카르바지드(semicarbazide), 아지드, 및 알킨 반응기를 갖는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 구체예에서, 비천연적으로 코딩된 아미노산은 사카라이드(saccharide) 모이어티를 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 N-아세틸-L-글루코사미닐-L-세린, N-아세틸-L-갈락토사미닐-L-세린, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-트레오닌, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-아스파라긴 및 O-만노사미닐-L-세린을 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 또한 아미노산과 사카라이드 사이의 자연발생적 N- 또는 O-결합이, 자연에서 일반적으로 발견되지 않는 공유 결합(covalent linkage)으로 대체되는 예를 포함하고, 이에 제한되지는 않으나 알켄, 옥심, 티오에테르, 아미드 등을 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 또한 2-데옥시-글루코스, 2-데옥시갈락토스 등과 같은 자연 발생 단백질에서 흔히 발견되지 않는 사카라이드를 포함한다.
본원에 제공된 다수의 비천연적으로 코딩된 아미노산은, 예를 들어 시그마-알드리치(St. Louis, Mo., USA), 노바 바이오 켐(EMD 바이오 사이언스 부서, Darmstadt, Germany), 또는 펩 테크(Burlington, Mass., USA)로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 상업적으로 입수할 수 없는 것들은 본원에 제공된 바와 같이 또는 당업자에게 공지된 표준 방법을 사용하여 임의로 합성된다. 유기 합성 기술에 대해서는, 예를 들어, Fessendon 및 Fessendon의 유기 화학(1982, Second Edition, Willard Grant Press, Boston Mass.); Advanced Organic Chemistry by March(Third Edition, 1985, Wiley and Sons, New York); 및 Carey 및 Sundberg의 Advanced Organic Chemistry (Third Edition, Parts A and B, 1990, Plenum Press, New York)을 참고한다. 또한, 미국 공개특허공보 제2003/0082575호 및 제2003/0108885호(본원에 참고로서 포함됨)을 참고한다.
많은 비천연(unnatural) 아미노산은 티로신, 글루타민, 페닐알라닌 등과 같은 천연 아미노산을 기초로 하며, 본 발명에 사용하기에 적합하다. 티로신 유사체는 파라-치환된 티로신, 오쏘-치환된 티로신 및 메타 치환된 티로신을 포함하나, 이에 제한되지는 않으며, 여기서 치환된 티로신은 케토 기(아세틸 기를 포함하나 이에 제한되지는 않음), 벤조일 기, 아미노 기, 히드라진, 히드록시아민, 티올 기, 카르복시기, 이소프로필 기, 메틸 기, C6-C20 직쇄 또는 분지형 탄화수소, 포화 또는 불포화 탄화수소, O-메틸기, 폴리에테르 기, 니트로 기, 알키닐기 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 다중 치환된 아릴 고리가 또한 고려된다. 본 발명에 사용하기에 적합할 수 있는 글루타민 유사체는 α-히드록시 유도체, γ-치환된 유도체, 사이클릭 유도체 및 아미드 치환된 글루타민 유도체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 사용하기에 적합할 수 있는 페닐알라닌 유사체의 예로는 파라-치환된 페닐알라닌, 오쏘-치환된 페닐알라닌 및 메타-치환된 페닐알라닌을 포함하나, 이에 제한되지는 않으며, 상기 치환기는 히드록시기, 메톡시기, 메틸기, 알릴기, 알데히드, 아지도, 요오도, 브로모, 케토기(아세틸기를 포함하나, 이에 한정되지 않음), 벤조일, 알키닐기 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 사용하기에 적합할 수 있는 비천연 아미노산의 구체적인 예는 p-아세틸-L-페닐알라닌, O-메틸-L-티로신, L-3-(2-나프틸)-알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcβ-세린, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아지도-메틸-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, L-포스포세린, 포스포노세린, 포스포노티로신, p-요오도-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌 및 p-프로파질옥시(propargyloxy)-페닐알라닌 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 사용하기에 적합할 수 있는 다양한 비천연 아미노산의 구조의 예는 예를 들어 "비 천연 아미노산의 생체 내 혼입"이라는 명칭의 WO 2002/085923에 제공된다. 추가 메티오닌 유사체에 대해서는 문헌 [Kiick 등(2002) Incorporation of azides into recombinant proteins for chemoselective modification by the Staudinger ligation, PNAS 99:19-24]를 참고한다.
본 발명에 사용하기에 적합한 많은 비천연 아미노산은 상업적으로 입수 가능하며, 예를 들어 시그마(Sigma) (미국) 또는 알드리치(Milwaukee, Wis., USA)로부터 상업적으로 입수 가능하다. 상업적으로 입수할 수 없는 것은 본원에 제공된 바와 같이 또는 다양한 문헌에 제공된 바와 같이, 또는 당업자에게 공지된 표준 방법을 사용하여 임의로 합성된다. 유기 합성 기술에 대해서는, 예를 들어, Fessendon 및 Fessendon의 유기 화학(1982, Second Edition, Willard Grant Press, Boston Mass.); Advanced Organic Chemistry by March (Third Edition, 1985, Wiley and Sons, New York); 및 Carey 및 Sundberg의 Advanced Organic Chemistry (Third Edition, Parts A and B, 1990, Plenum Press, New York)를 참고한다. 비천연 아미노산의 합성을 설명하는 추가의 문헌에는, 예를 들어, "비 천연 아미노산의 생체 내 혼입"이라는 명칭의 WO 2002/085923; Matsoukas 등 (1995) J. Med. Chem., 38, 4660-4669; King, F. E. & Kidd, D. A. A. (1949) A New Synthesis of Glutamine and of γ-Dipeptides of Glutamic Acid from Phthylated Intermediates. J. Chem. Soc., 3315-3319; Friedman, O. M. & Chatterrji, R. (1959) Synthesis of Derivatives of Glutamine as Model Substrates for Anti-Tumor Agents. J. Am. Chem. Soc. 81, 3750-3752; Craig, J. C. 등 (1988) Absolute Configuration of the Enantiomers of 7-Chloro-4 [[4-(diethylamino)-1-methylbutyl]amino]quinoline (Chloroquine). J. Org. Chem. 53, 1167-1170; Azoulay, M., Vilmont, M. & Frappier, F. (1991) Glutamine analogues as Potential Antimalarials, Eur. J. Med. Chem. 26, 201-5; Koskinen, A. M. P. & Rapoport, H. (1989) Synthesis of 4-Substituted Prolines as Conformationally Constrained Amino Acid Analogues. J. Org. Chem. 54, 1859-1866; Christie, B. D. & Rapoport, H. (1985) Synthesis of Optically Pure Pipecolates from L-Asparagine. Application to the Total Synthesis of (+)-Apovincamine through Amino Acid Decarbonylation and Iminium Ion Cyclization. J. Org. Chem. 1989:1859-1866; Barton 등 (1987) Synthesis of Novel a-Amino-Acids and Derivatives Using Radical Chemistry: Synthesis of L- and D-a-Amino-Adipic Acids, L-a-aminopimelic Acid and Appropriate Unsaturated Derivatives. Tetrahedron Lett. 43:4297-4308; 및, Subasinghe 등 (1992) Quisqualic acid analogues: synthesis of beta-heterocyclic 2-aminopropanoic acid derivatives and their activity at a novel quisqualate-sensitized site. J.　Med. Chem. 35:4602-7을 참고한다. 또한, 2003년 12월 22일자로 출원된 제10/744,899호 및 2002년 12월 22일자로 출원된 제60/435,821호인 "단백질 어레이"라는 명칭의 특허 출원들을 참고한다.
유용한 비천연 아미노산의 특정 예로는 p-아세틸-L-페닐알라닌, O-메틸-L-티로신, L-3-(2-나프틸)알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAc b-세린, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-메틸-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, L-포스포세린, 포스포노세린, 포스포노티로신, p-요오도-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌 및 p-프로파질옥시-페닐알라닌을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 추가의 유용한 예는 N-아세틸-L-글루코사미닐-L-세린, N-아세틸-L-갈락토사미닐-L-세린, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-트레오닌, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-아스파라긴 및 O-만노사미닐-L-세린을 포함한다.
특정 구체예에서, 비천연 아미노산은 p-아세틸-페닐알라닌, p-에티닐(ethynyl)-페닐알라닌, p-프로파질옥시페닐알라닌, p-아지도-메틸-페닐알라닌 및 p-아지도-페닐알라닌으로부터 선택된다. 특히 유용한 비천연 아미노산 중 하나는 p-아지도 페닐알라닌이다. 이 아미노산 잔기는 예를 들어 알키닐기를 갖는 화합물과의 Huisgen [3+2] 고리첨가 반응(소위 "클릭(click)" 화학 반응)을 촉진하는 것으로 당업자에게 공지되어 있다. 이 반응은 당업자가 비천연 아미노산의 위치-특이적 부위에서 항체에 쉽고 빠르게 접합할 수 있게 한다.
특정 구체예에서, 제1 반응기는 알키닐 모이어티(비천연 아미노산 p-프로파질옥시페닐알라닌을 포함하지만, 이에 제한되지는 않으며, 여기서 프로파질 기는 또한 때때로 아세틸렌 모이어티로도 지칭됨)이고, 제2 반응기는 아지도 모이어티이며, [3+2] 고리 첨가 화학이 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 제1 반응기는 (이에 제한되지는 않으나, 비천연 아미노산 p-아지도-L-페닐알라닌의) 아지도 모이어티이고, 제2 반응기는 알키닐 모이어티이다.
상기 화학식에서, 각각의 L은 2가 링커를 나타낸다. 2가 링커는 당업자에게 공지된 임의의 2가 링커일 수 있다. 일반적으로, 2가 링커는 비천연 아미노산의 작용성 모이어티 R(functional moiety R) 및 동족(cognate) 반응기(예를 들어, 알파 탄소)에 공유 결합을 형성할 수 있다. 유용한 2가 링커는 결합, 알킬렌, 치환된 알킬렌, 헤테로알킬렌, 치환된 헤테로알킬렌, 아릴렌, 치환된 아릴렌, 헤테로아릴렌 및 치환된 헤테로아릴렌이다. 특정 구체예에서, L은 C1-10 알킬렌 또는 C1-10 헤테로알킬렌이다.
본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용된 비천연 아미노산은 하기 4 가지 특성 중 하나 이상을 갖는다: (1) 비천연 아미노산의 측쇄 상의 하나 이상의 작용기는 20개의 일반적인, 유전적으로 코딩된 아미노산(즉, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린)의 화학적 반응성에 직교하거나, 비천연 아미노산을 포함하는 폴리펩티드에 존재하는 자연 발생 아미노산의 화학적 반응성에 적어도 직교하는 적어도 하나의 특성 및/또는 활성 및/또는 반응성을 가진다; (2) 도입된 비천연 아미노산은 20개의 일반적인, 유전적으로 코딩된 아미노산에 대해 실질적으로 화학적으로 불활성(inert)이다; (3) 비천연 아미노산은 폴리펩티드에, 바람직하게는 자연-발생 아미노산에 상응하는 안정성으로 또는 전형적인 생리학적 조건 하에서, 안정적으로 통합될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 이러한 통합은 생체 내 시스템을 통해 일어날 수 있다; 및 (4) 비천연 아미노산은 바람직하게는 (물론 생물학적 특성의 파괴가 변형/전환(modification/transformation)의 목적이 아닌 한) 비천연 아미노산을 포함하는 폴리펩티드의 생물학적 특성을 파괴하지 않는 조건 하에서, 또는 전환이 약 4 내지 약 8의 pH의 수용성 조건 하에서 발생할 수 있거나, 비천연 아미노산의 반응성 위치가 친전자성 부위일 때, 옥심 작용기 또는 시약과 반응함으로써 옥심 기로 전환될 수 있는 작용기를 포함한다. 임의의 수의 비천연 아미노산이 폴리펩티드에 도입될 수 있다. 비천연 아미노산은 또한 보호되거나 마스킹된 옥심(protected or masked oxime), 또는 보호된 기의 탈보호 혹은 마스킹된 기의 탈마스킹(unmasking) 후 옥심기로 전환될 수 있는 보호된 혹은 마스킹된 기를 포함할 수 있다. 비천연 아미노산은 또한 보호된 또는 마스킹된 카보닐 또는 디카보닐 기를 포함할 수 있으며, 이는 보호된 기의 탈보호 혹은 마스킹된 기의 탈마스킹 후 카보닐 또는 디카보닐 기로 전환될 수 있으며, 이에 의해 히드록실아민 또는 옥심과 반응하여 옥심기가 형성될 수 있다.
추가의 구체예에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용될 수 있는 비천연 아미노산은 광활성화 가능한(photoactivatable) 가교제, 스핀-표지된 아미노산, 형광 아미노산(fluorescent amino acid), 금속 결합 아미노산, 금속 함유 아미노산, 방사성 아미노산, 신규 작용기를 갖는 아미노산, 다른 분자와 공유 또는 비공유적으로 상호 작용하는 아미노산, 광 케이지 및/또는 광 이성질화성 아미노산, 비오틴 또는 비오틴 유사체를 포함하는 아미노산, 당 치환된 세린과 같은 글리코실화된 아미노산, 다른 탄수화물 변형된 아미노산, 케토-함유 아미노산, 알데히드 함유 아미노산, 폴리에틸렌 글리콜 또는 다른 폴리 에테르를 포함하는 아미노산, 중원자 치환 아미노산, 화학적으로 절단성인 아미노산 및/또는 광 절단성 아미노산, 이에 제한되지 않으나 약 5개 초과 또는 약 10개 초과의 탄소을 함유하는 폴리에테르 또는 긴 사슬 탄화수소를 포함하나, 이에 제한되지는 않는, 천연 아미노산과 비교하여 연장된 측쇄를 갖는 아미노산, 탄소-연결된 당-함유 아미노산, 산화 환원-활성 아미노산, 아미노티오산 함유 아미노산, 및 하나 이상의 독성 모이어티를 포함하는 아미노산을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
일부 구체예에서, 비천연 아미노산은 사카라이드 모이어티를 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 N-아세틸-L-글루코사미닐-L-세린, N-아세틸-L-갈락토사미닐-L-세린, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-트레오닌, N-아세틸-L-글루코사미닐-L-아스파라긴 및 O-만노사미닐-L-세린을 포함한다. 이러한 아미노산의 예는 또한 아미노산과 사카라이드 사이의 자연 발생적 N- 또는 O-연결이 자연에서 일반적으로 발견되지 않는 공유 결합으로 대체된 예를 포함하지만, 이에 제한되지는 않으며, 알켄, 옥심, 티오에테르, 아미드 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 아미노산의 예는 또한 2-데옥시-글루코스, 2-데옥시갈락토스 등과 같은 자연 발생 단백질에서 흔히 발견되지 않는 사카라이드를 포함한다.
특정 구체예에서, 비천연 아미노산은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
또는 그의 염. 이러한 비천연 아미노산은 염의 형태일 수 있거나, 비천연 아미노산 폴리펩티드, 중합체, 다당류 또는 폴리뉴클레오티드에 도입될 수 있고, 임의로 번역 후 변형될 수 있다.
특정 구체예에서, 변형된 아미노산은 화학식 51-62 중 어느 하나에 따른 것이다:
Figure pct00081
또는 그의 염.
특정 구체예에서, 비천연 아미노산은 상기 화합물 30, 53, 56, 59, 60, 61 및 62로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 비천연 아미노산은 화합물 30이다. 특정 구체예에서, 비천연 아미노산은 화합물 56이다. 일부 구체예에서, 비천연 아미노산은 화합물 61이다. 일부 구체예에서, 비천연 아미노산은 화합물 62이다.
12. 항체 접합체의 제조
12.1. 항원 준비
항체의 단리에 사용되는 FOLR1 단백질은 온전한 FOLR1 또는 FOLR1의 단편일 수 있다. 온전한 FOLR1 단백질 또는 FOLR1의 단편은 단리된 단백질 또는 세포에 의해 발현된 단백질의 형태일 수 있다. 항체 생성에 유용한 다른 형태의 FOLR1은 당업자에게 명백할 것이다.
12.2. 단일클론 항체
단일클론 항체는, 예를 들어 Kohler 등, Nature, 1975, 256:495-497(전문이 참고로서 포함됨)에 의해 처음으로 기술된 하이브리도마 방법 및/또는 재조합 DNA 방법(예를 들어, 그 전문이 참고로서 포함되는, 미국 등록특허공보 제4,816,567호를 참고한다)을 사용하여 수득될 수 있다. 단일클론 항체는 또한 예를 들어 파지 또는 효모-기반 라이브러리를 사용하여 얻을 수 있다. 예를 들어, 미국 등록특허공보 제8,258,082호 및 제8,691,730호을 참고하며, 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함된다.
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물은 면역화에 사용되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도하기 위해 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관 내 면역화될 수 있다. 이어서 림프구를 적합한 융합제(fusing agent), 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다. Goding J.W., Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 3rd ed. (1986) Academic Press, San Diego, CA을 참고하며, 이 문헌은 전문이 참고로서 포함된다.
하이브리도마 세포는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에 분주되고 성장한다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼 라제(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase, HGPRT 또는 HPRT)가 없는 경우, 하이브리도마의 배양 배지는 전형적으로 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 것이며, 이 물질들은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방해한다.
유용한 골수종 세포는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생성 세포에 의한 안정적인 고수준의 항체 생산을 지원하며, HAT 배지의 존재 또는 부재와 같은 민감한 배지 조건인 세포이다. 이들 중에서, 바람직한 골수종 세포주는 MOP-21 및 MC-11 마우스 종양(캘리포니아 주 샌디에고, Salk Institute Cell Distribution Center에서 입수 가능)으로부터 유래된 것과 같은 뮤린 골수종 세포 및 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포(미국 록빌, the American Type Culture Collection에서 입수 가능)이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종 골수종 세포주는 또한 인간 단일클론 항체의 생산을 위해 기술되어 있다. 예를 들어, Kozbor, J.　Immunol., 1984, 133:3001를 참고하며, 그 전문이 참고로서 포함된다.
원하는 특이성, 친화성 및/또는 생물학적 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포의 동정 후, 선택된 클론은 제한 희석 절차에 의해 서브 클로닝되고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다. 위의 Goding을 참고한다. 이러한 목적에 적합한 배양 배지는 예를 들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양(ascites tumors)으로서 생체 내에서 성장할 수 있다.
단일클론 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여(예를 들어, 단일클론 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 서열 분석될 수 있다. 따라서, 하이브리도마 세포는 원하는 특성을 갖는 항체를 코딩하는 DNA의 유용한 공급원으로서 작용할 수 있다. 일단 분리되면, DNA는 발현 벡터에 배치될 수 있고, 이어서 박테리아(예를 들어, 대장균), 효모(예를 들어, 사카로마이세스 또는 피키아 종), COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 달리 항체를 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포로 형질 감염되어, 단일클론 항체를 생산한다.
12.3. 인간화 항체
인간화 항체는 비-인간 단일클론 항체의 구조 부분의 대부분 또는 전부를 상응하는 인간 항체 서열로 대체함으로써 생성될 수 있다. 결과적으로, 항원-특이적 변수, 또는 CDR만이 비-인간 서열로 구성된 하이브리드 분자가 생성된다. 인간화 항체를 얻는 방법은 예를 들어, Winter 및 Milstein, Nature, 1991, 349:293-299; Rader 등, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1998, 95:8910-8915; Steinberger 등, J. Biol. Chem., 2000, 275:36073-36078; Queen 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 86:10029-10033; 및 미국 등록특허공보 제5,585,089호, 제5,693,761호, 제5,693,762호, 및 제6,180,370호(이들 각각은 그 전문이 참고로서 포함된다)에 기술된 것을 포함한다.
12.4. 인간 항체
인간 항체는 당업계에 공지된 다양한 기술, 예를 들어 형질전환 동물(transgenic animals, 예를 들어, 인간화된 마우스)을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, Jakobovits 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90:2551; Jakobovits 등, Nature, 1993, 362:255-258; Bruggermann 등, Year in Immuno., 1993, 7:33; 및 미국 등록특허공보 제5,591,669호, 제5,589,369호 및 제5,545,807호를 참고하며, 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함된다. 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리로부터 유래될 수 있다(예를 들어, Hoogenboom 등, J. Mol. Biol., 1991, 227:381-388; Marks 등, J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597; 및 미국 등록특허공보 제5,565,332호 및 제5,573,905호를 참고한다; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함됨). 인간 항체는 또한 시험관 내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, 미국 등록특허공보 제5,567,610호 및 제5,229,275호를 참고한다; 이들 각각은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨). 인간 항체는 또한 효모 기반 라이브러리로부터 유래될 수 있다(예를 들어, 그 전문이 본원에 참고로 포함된 미국 등록특허공보 제8,691,730호를 참고한다).
12.5. 접합
항체 접합체는 표준 기술에 의해 제조될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체는, 항체로부터 페이로드로의 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 페이로드 전구체와 접촉하여 항체-페이로드 접합체를 형성한다. 특정 구체예에서, 항체는, 항체로부터 링커로의 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 링커 전구체와 접촉한다. 생성된 항체-링커는, 항체-링커로부터 페이로드로의 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 페이로드 전구체와 접촉하여 항체-링커-페이로드 접합체를 형성한다. 특정 구체예에서, 페이로드 전구체는, 페이로드로부터 링커로의 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 링커 전구체와 접촉한다. 생성된 페이로드-링커는 페이로드-링커로부터 항체로의 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 항체와 접촉하여 항체-링커-페이로드 접합체를 형성한다. 항체 접합체를 제조하기 위해 적합한 링커가 본원에 개시되어 있고, 접합을 위한 예시적인 조건이 하기 실시예에 기재되어있다.
일부 구체예에서, 항-FOLR1 접합체는 본원에 개시된 바와 같은 항-FOLR1 항체를 (A) 내지 (L) 중 임의의 구조를 갖는 링커 전구체와 접촉시킴으로써 제조된다:
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
일부 구체예에서, (A)-(L)로 나타낸 상기 링커 전구체의 입체 화학은 아래 나타낸 화학식 (A1)-(L1) 및 (A2)-(L2)에 도시된 바와 같이 왼쪽에서 오른쪽으로 각각의 키랄 중심에 대한 R 및 S 표기법으로 식별된다:
Figure pct00085
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
13. 벡터, 숙주 세포 및 재조합 방법
구체예는 또한 항-FOLR1 항체를 코딩하는 단리된 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주세포, 및 항체를 생산하는 재조합 기술의 제공에 관한 것이다.
항체의 재조합 생산을 위해, 항체를 코딩하는 핵산(들)을 분리하여 추가 클로닝(즉, DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제 가능한 벡터에 삽입할 수 있다. 일부 측면에서, 핵산은 예를 들어 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 등록특허공보 제 5,204,244호에 기재된 바와 같은 상동 재조합에 의해 생성될 수 있다.
많은 다른 벡터가 당업계에 공지되어있다. 벡터 성분은 예를 들어 미국 등록특허 제5,534,615호(그 전문이 참고로서 포함됨)에 기술된 바와 같은, 신호 서열, 복제 기점(origin of replication), 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 일반적으로 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
적합한 숙주 세포의 예시적인 예가 하기에 제공된다. 이들 숙주 세포가 제한되는것을 의미하지는 않는다.
적합한 숙주 세포는 임의의 원핵 세포(예를 들어, 박테리아 세포), 하등 진핵 세포(예를 들어, 효모 세포) 또는 고등 진핵 세포(예를 들어, 포유 동물 세포) 세포를 포함한다. 적합한 원핵 생물은 그람 음성 또는 그람 양성 유기체와 같은 진정세균(eubacteria), 예를 들어, 대장균(E. coli), 엔테로박터(Enterobacter), 에르위니아(Erwinia), 클렙시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 살모넬라(S. 티피무리움), 세라티아(S. marcescans), 시겔라(Shigella), 바실리(B. subtilis 및 B. licheniformis), 슈도모나스(P.　aeruginosa), 및 스트렙토마이세스와 같은 장내세균과(Enterobacteriaceae)를 포함한다. 하나의 유용한 대장균 클로닝 숙주는 대장균 294(E.coli 294)이지만, 대장균 B, 대장균 X1776 및 대장균 W3110과 같은 다른 균주도 적합하다.
원핵 생물에 더하여, 사상 진균 또는 효모와 같은 진핵 미생물(eukaryotic microbe) 역시 항-FOLR1 항체-암호화 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 일반적인 베이커 효모(baker's yeast)는 일반적으로 사용되는 하등 진핵 숙주 미생물이다. 그러나, 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda, e.g., SF9), 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 클루이로마이세스(Kluyveromyces; K.　락티스(K.　lactis), K. 프라길리스(K.　fragilis), K. 불가리쿠스(K.　bulgaricus), K. 위커아미(K.　wickeramii), K. 왈티(K.　waltii), K. 드로소필라룸(K.　drosophilarum), K. 써모톨레란스(K.　thermotolerans), 및 K. 마르시아누스(K.　marxianus)), 야로위아(Yarrowia), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 칸디다(Candida; C. 알비칸), 트리코데르마 레이시아(Trichoderma reesia), 뉴로스포라 크레사(Neurospora crassa), 슈반니오미세스(Schwanniomyces; S. 오시덴탈리스 (S. occidentalis)), 및 페니실리움, 톨리포클라듐(Tolypocladium), 및 아스페르질루스(Aspergillus; A. 니둘란스 (A. nidulans) 및 A. 니거 (A. niger))와 같은 사상진균과 같은, 수 많은 다른 속, 종, 및 균주가 이용 가능하고 유용하다.
유용한 포유동물 숙주 세포는 COS-7 세포, HEK293 세포; 베이비 햄스터 신장(BHK) 세포; 차이니즈 햄스터 난소(CHO); 마우스 세르톨리(sertoli) 세포; 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76) 등을 포함한다.
본 발명의 항-FOLR1 항체를 생성하는데 사용된 숙주 세포는 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 함의 F10(Ham's F10), 최소 필수 배지(Minimal Essential Medium, MEM), RPMI-1640 및 둘베코 수정된 이글배지(DMEM)와 같은 시판되는 배지는 숙주 세포 배양에 적합하다. 또한, Ham 등, Meth. Enz., 1979, 58:44; Barnes 등, Anal. Biochem.,　1980, 102:255; 및 미국 등록특허공보 제4,767,704호, 제4,657,866호, 제4,927,762호, 제4,560,655호, 및 제5,122,469호, 또는 WO 90/03430 및 WO 87/00195에 기술된 임의의 배지가 사용될 수 있다. 전술한 각각의 참고 문헌은 그 전체가 참고로 포함된다.
이들 배지 중 임의의 것에는 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자(예를 들어, 인슐린, 트랜스페린 또는 표피 성장 인자), 염(예를 들어, 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘 및 포스페이트), 완충제(예를 들어, HEPES), 뉴클레오티드(예를 들어, 아데노신 및 티미딘), 항생제, 미량 원소(일반적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로 정의됨) 및 포도당 또는 동등한(equivalent) 에너지 원으로 보충될 수 있다. 기타 다른 필요한 보충제는 또한 당업자에게 알려된 적절한 농도로 포함될 수 있다.
온도, pH 등과 같은 배양 조건은 발현을 위해 선택된 숙주 세포와 함께 이전에 사용된 조건이며, 당업자에게 명백할 것이다.
재조합 기술을 사용할 때, 항체는 세포 내, 주변 세포질 공간에서 생산될 수 있거나, 또는 배지로 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포 내에서 생성되는 경우, 제 1 단계로서, 숙주 세포 또는 용해된 단편인 미립자 파편(particulate debris)은 예를 들어 원심 분리 또는 한외 여과에 의해 제거된다. 예를 들어, Carter 등(Bio/Technology, 1992, 10:163-167)에는 대장균의 주변 세포질 공간으로 분비되는 항체를 분리하는 절차가 기술되어 있다. 간단히 말해서, 세포 페이스트를 약 30 분에 걸쳐 아세트산 나트륨(pH 3.5), EDTA 및 페닐메틸술포닐플루오라이드(PMSF)의 존재 하에서 녹인다. 세포 파편은 원심 분리로 제거할 수 있다.
일부 구체예에서, 항체는 무-세포 시스템에서 생산된다. 일부 측면에서, 무-세포 시스템은 전문이 참고로 포함된 Yin 등, mAbs, 2012, 4:217-225에 기술된 시험관 내 전사 및 번역 시스템이다. 일부 측면에서, 무-세포 시스템은 진핵 세포 또는 원핵 세포로부터의 무-세포 추출물을 이용한다. 일부 측면에서, 원핵 세포는 대장균이다. 항체의 무-세포 발현은, 예를 들어, 항체가 불용성 응집체로서 세포에 축적되거나 주변 세포질 발현으로부터의 수율이 낮은 경우에 유용할 수 있다. 무-세포 시스템에서 생성된 항체는 세포의 공급원에 따라 비-당화(aglycosylated)될 수 있다.
항체가 배지로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액은 일반적으로 시판되는 단백질 농도 필터, 예를 들어 Amicon® 또는 Millipore® Pellcon® 한외여과 장치를 사용하여 먼저 농축된다. PMSF와 같은 단백질 분해 효소 억제제는 단백질 분해를 억제하기 위해 임의의 상기 단계에 포함될 수 있고, 항생제는 우발적인 오염 물질의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조된 항체 조성물은, 예를 들어 히드록시라파타이트(hydroxylapatite) 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있으며, 친화성 크로마토그래피가 특히 유용한 정제 기술이다. 친화성 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소형에 의존한다. 단백질 A를 사용하여 인간 γ1, γ2 또는 γ4 중쇄에 기초한 항체를 정제할 수 있다(Lindmark 등, J. Immunol. Meth., 1983, 62:1-13, 전체 내용이 참고로 포함됨). 단백질 G는 모든 마우스 이소형 및 인간 γ3에 유용하다(Guss 등, EMBO J., 1986, 5:1567-1575, 전체 내용이 참고로 포함됨).
친화성 리간드가 부착된 매트릭스는 대부분 아가로스이지만, 다른 매트릭스도 이용 가능하다. 조절 공극 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠과 같이 기계적으로 안정적인 매트릭스는 아가로스로 달성할 수 있는 것보다 빠른 유속과 짧은 처리 시간을 허용한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, BakerBond ABX® 수지가 정제에 유용하다.
단백질 정제를 위한 다른 기술, 예를 들어 이온-교환 컬럼에서의 분획, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 세파로스® 상의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE 및 암모늄 설페이트 침전이 또한 이용 가능하고, 당업자에 의해 적용될 수 있다.
임의의 예비 정제 단계(들)에 이어서, 관심 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물은 일반적으로 저염 농도(예를 들어, 약 0 내지 약 0.25M 염)에서 수행되는, 약 2.5 내지 약 4.5의 pH에서 용리 완충액을 사용하는 저 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용될 수 있다.
14. 약제학적 조성물 및 투여 방법
본원에 제공된 항체 접합체는 당업계에 이용 가능한 방법 및 본원에 개시된 방법을 사용하여 약제학적 조성물로 제제화될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 항체 접합체는 적절한 약제학적 조성물로 제공될 수 있고 적합한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다.
본원에 제공된 방법은 본원에 제공된 하나 이상의 항체 접합체 및 하나 이상의 적합하고 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물의 투여를 포함한다. 이와 관련하여, 용어 "약제학적으로 허용되는"은 동물에서의 사용, 보다 구체적으로는 인간에서의 사용에 대하여 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 일반적으로 인정되는 다른 약전에 등재된 것을 의미한다. 용어 "담체"는 희석제, 보조제(예를 들어, 프로인드 보조제(완전 및 불완전)), 부형제 또는 치료제와 투여되는 비히클을 포함한다. 이러한 약제학적 담체는 땅콩 유, 대두유, 미네랄 오일, 참기름 등과 같은, 석유 기원, 동물 기원, 채소 기원 또는 합성 기원의 것들을 포함하는 물 및 오일과 같은 멸균 액체일 수 있다. 약제학적 조성물이 정맥 내 투여될 때 물이 담체로서 사용될 수 있다. 식염수 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 또한 특히 주사액을 위한 액체 담체로서 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 담체의 예는 Martin, E.W., Remington's Pharmaceutical Sciences에 기재되어 있다.
실제 임상에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 또는 항체 접합체는 당업계에 공지된 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 예시적인 투여 경로는 흡입, 동맥 내, 피 내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 비강, 비경구, 폐 및 피하 경로를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 또는 항체 접합체는 비경구 투여된다.
비경구 투여용 조성물은 에멀젼 또는 멸균 용액일 수 있다. 비경구 조성물은 예를 들어 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 및 주사 가능한 유기 에스테르(예를 들어, 에틸 올레에이트)를 포함할 수 있다. 이들 조성물은 또한 습윤제, 등장화제, 유화제, 분산제 및 안정화제를 함유할 수 있다. 멸균은 예를 들어 박테리아 필터, 방사선 또는 가열에 의해 여러 방식으로 수행될 수 있다. 비경구 조성물은 또한 멸균수 또는 임의의 다른 주사용 멸균 배지에 사용 시 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 제조될 수 있다.
일부 구체예에서, 본원에 제공된 조성물은 약제학적 조성물 또는 단일 단위 투여 형태이다. 본원에 제공된 약제학적 조성물 및 단일 단위 투여 형태는 예방적 또는 치료적 유효량의 하나 이상의 예방적 또는 치료적 항체 접합체를 포함한다.
약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적 부형제를 포함할 수 있다. 임의의 적합한 약제학적 부형제가 사용될 수 있고, 당업자는 적합한 약제학적 부형제를 선택할 수 있다. 적합한 부형제의 비 제한적 예에는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 초크(chalk), 실리카겔, 소듐스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등이 포함된다. 특정 부형제가 약제학적 조성물 또는 투여 형태에 포함되기에 적합한지 여부는 투여 형태가 대상체에게 투여되는 방식 및 투여 형태 내의 특정 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는, 당업계에 잘 알려진 다양한 요인에 의존한다. 원하는 경우, 조성물 또는 단일 단위 투여 형태는 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 따라서, 아래에 제공된 약제학적 부형제는 예시적인 것이며, 제한적인 것은 아니다. 추가의 약제학적 부형제로는, 예를 들어 Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe 등 (Eds.) 6th Ed.(2009)(전문이 본원에 참고로서 포함됨)에 기술되어 있는 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 소포제를 포함한다. 임의의 적합한 소포제가 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 소포제는 알코올, 에테르, 오일, 왁스, 실리콘, 계면활성제 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 소포제는 미네랄 오일, 식물성 오일, 에틸렌 비스 스테아르아미드, 파라핀 왁스, 에스테르 왁스, 지방 알코올 왁스, 장쇄 지방 알코올, 지방산 비누, 지방산 에스테르, 실리콘 글리콜, 플루오로실리콘, 폴리에틸렌 글리콜-폴리프로필렌 글리콜 공중합체, 폴리디메틸실록산-실리콘 옥사이드, 에테르, 옥틸 알코올, 카프릴 알코올, 소르비탄 트리올레에이트, 에틸 알코올, 2-에틸-헥산올, 디메티콘(dimethicone), 올레일 알코올, 시메티콘, 및 이들의 조합로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 공용매(cosolvent)를 포함한다. 공용매의 예시적인 예는 에탄올, 폴리(에틸렌) 글리콜, 부틸렌 글리콜, 디메틸아세트아미드, 글리세린 및 프로필렌 글리콜을 포함한다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 완충제를 포함한다. 완충제의 예시적인 예에는 아세테이트, 보레이트, 카보네이트, 락테이트, 말레이트, 포스페이트, 시트레이트, 히드록시드, 디에탄올아민, 모노에탄올아민, 글리신, 메티오닌, 구아 검 및 모노소듐 글루타메이트가 포함된다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 담체 또는 충전제를 포함한다. 담체 또는 충전제의 예시적인 예는 락토스, 말토덱스트린, 만니톨, 소르비톨, 키토산, 스테아르산, 잔탄 검 및 구아 검을 포함한다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 계면 활성제를 포함한다. 계면 활성제의 예시적인 예로는 d-알파 토코페롤, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 세트리미드, 세틸피리디늄 클로라이드, 도큐세이트 소듐, 글리세릴 베헤네이트, 글리세릴 모노올레에이트, 라우르산, 마크로골 15 히드록시스테아레이트, 미리스틸 알코올, 인지질, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 폴리옥실글리세라이드, 소듐 라우릴 설페이트, 소르비탄 에스테르 및 비타민 E 폴리에틸렌(글리콜) 숙시네이트를 포함한다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 케이킹 방지제를 포함한다. 케이킹 방지제의 예시적인 예는 칼슘 포스페이트(삼염기), 히드록시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스 및 산화 마그네슘을 포함한다.
약제학적 조성물과 함께 사용될 수 있는 다른 부형제는 예를 들어 알부민, 항산화제, 항균제, 항진균제, 생체 흡수성 중합체, 킬레이트제, 제어 방출제, 희석제, 분산제, 용해 증강제(dissolution enhnacer), 유화제, 겔화제, 연고기제(ointment base), 침투 증강제, 방부제, 가용화제, 용매, 안정화제 및 당을 포함한다. 이들 물질 각각의 특정 예는 예를 들어 the Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe 등 (Eds.) 6th Ed.(2009), The Pharmaceutical Press(전문이 참고로서 포함됨)에 기재되어 있다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 용매를 포함한다. 일부 측면에서, 용매는 식염수, 예컨대 멸균 등장 식염수 또는 덱스트로스 용액이다. 일부 측면에서, 용매는 주사용수(water for injection)이다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 미립자 형태, 예를 들어 마이크로 입자 또는 나노 입자이다. 마이크로 입자 및 나노 입자는 중합체 또는 지질과 같은 임의의 적합한 물질로부터 형성될 수 있다. 일부 측면에서, 마이크로 입자 또는 나노 입자는 미셀, 리포좀 또는 폴리머좀이다.
일부 구체예에서, 물은 일부 항체의 분해를 촉진할 수 있기 때문에 본원은 항체 접합체를 포함하는 무수(anhydrous) 약제학적 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공한다.
본원에 제공된 무수 약제학적 조성물 및 투여 형태는 무수 또는 저 수분 함유 성분 및 저 수분 또는 저습 조건을 사용하여 제조될 수 있다. 락토스, 및 1 차 또는 2 차 아민을 포함하는 1종 이상의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물 및 투여 형태는 제조, 포장 및/또는 저장 동안 수분 및/또는 습도와의 실질적인 접촉이 예상되는 경우 무수일 수 있다.
무수 약제학적 조성물은 그 무수 성질이 유지되도록 제조 및 저장될 수 있다. 따라서, 무수 조성물은 적합한 제형 키트(formulary kit)에 포함될 수 있도록 물에 노출되는 것을 방지하는 것으로 알려진 물질을 사용하여 포장될 수 있다. 적합한 포장의 예는 용봉된(hermetically sealed) 포일, 플라스틱, 단위 용량 용기(예를 들어, 바이알), 블리스터 팩 및 스트립 팩을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 제공된 락토스 비함유 조성물(Lactose-free composition)은, 당업계에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 미국 약전(USP) SP(XXI)/NF(XVI)에 열거된 부형제를 포함할 수 있다. 일반적으로, 락토스 비함유 조성물은 활성 성분, 결합제/충전제 및 윤활제를 약제학적으로 적합하고 허용되는 양으로 포함한다. 예시적인 락토스 비함유 투여 형태는 활성 성분, 미세결정질 셀룰로스, 예비 젤라틴화 전분(pre gelatinized starch) 및 마그네슘 스테아레이트를 포함한다.
또한 항체 또는 항체 접합체가 분해되는 속도를 감소시키는, 하나 이상의 부형제를 포함하는 약제학적 조성물 및 투여 형태가 제공된다. 본원에서 "안정화제"로 지칭되는 이러한 부형제는 산화 방지제, 예컨대 아스코르브 산, pH 완충제 또는 염 완충제를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
14.1. 비경구 투여 형태
특정 구체예에서, 비경구 투여 형태가 제공된다. 비경구 투여 형태는 피하, 정맥 내(정맥 주사(bolus injection) 포함), 근육 내 및 동맥 내를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 이러한 투여는 전형적으로 오염 물질에 대한 대상체의 자연 방어를 우회하기 때문에, 비경구 투여 형태는 전형적으로 피험자에게 투여하기 전에 멸균되거나 멸균될 수 있다. 비경구 투여 형태의 예는 주사를 위한 용액(solution ready for injection), 주사를 위한 약제학적으로 허용되는 비히클에 용해 또는 현탁될 준비된 건조 제품, 주사를 위한 현탁액, 및 에멀젼을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
비경구 투여 형태를 제공하는데 사용될 수 있는 적합한 비히클은 당업자에게 잘 알려져 있다. 예로는 주사용수 USP; 비제한적인 예로 염화나트륨 주사제, 링거 주사제(Ringer's injection), 덱스트로스 주사제, 덱스트로스 및 염화나트륨 주사제, 및 락티드 링거 주사제(lactated Ringer's injection)와 같은 수성 비히클; 비제한적인 예로 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜과 같은 수혼화성(water miscible) 비히클; 및 비제한적인 예로 옥수수 오일, 면실유, 땅콩 오일, 참기름, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트 및 벤질 벤조에이트와 같은 비-수성 비히클을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 개시된 하나 이상의 항체의 용해도를 증가시키는 부형제는 또한 비경구 투여 형태에 포함될 수 있다.
14.2. 투여량 및 단위 투여 형태(Dosage and Unit Dosage Forms)
인간 치료법에서, 의사는 예방적 또는 치료적 처치에 따라 그리고 연령, 체중, 상태 및 치료될 대상에 특정한 다른 요인들에 따라 그가 가장 적절하다고 생각하는 약용량(posology)을 결정할 것이다.
특정 구체예에서, 본원에 제공된 조성물은 약제학적 조성물 또는 단일 단위 투여 형태이다. 본원에 제공된 약제학적 조성물 및 단일 단위 투여 형태는 예방적 또는 치료적 유효량의 하나 이상의 예방적 또는 치료적 항체를 포함한다.
장애 또는 이의 하나 이상의 증상의 예방 또는 치료에 효과적인 항체 접합체 또는 조성물의 양은 질환 또는 상태의 성질 및 심각성, 및 항체가 투여되는 경로에 따라 달라질 것이다. 빈도 및 투여량은 또한 투여되는 특정 요법(예를 들어, 치료제 또는 예방제), 장애, 질환 또는 상태의 중증도, 투여 경로 및 대상체의 연령, 체중, 반응 및 대상의 과거 병력에 의존적인 각 대상체에 특이적인 인자에 따라 달라질 수 있다. 시험관 내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 유효량을 추정할 수 있다.
특정 구체예에서, 조성물의 예시적인 투여량은 대상체 또는 시료 중량의 킬로그램 당 밀리그램 또는 마이크로그램 양의 항체(예를 들어, 킬로그램 당 약 10 마이크로그램 내지 킬로그램 당 약 50 밀리그램, 킬로그램 당 약 100 마이크로그램 내지 킬로그램 당 약 25 밀리그램, 또는 킬로그램 당 약 100 마이크로그램 내지 킬로그램 당 약 10 밀리그램)을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체에서 장애, 또는 이의 하나 이상의 증상을 예방, 치료, 관리 또는 개선하기 위해 투여된 항체의 중량을 기준으로, 본원에 제공된 항체 접합체의 용량은 대상체 체중의 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, 또는 15 mg/kg 또는 그 이상이다. 또 다른 구체예에서, 상기 조성물 또는 대상체에서 장애, 또는 이의 하나 이상의 증상을 예방, 치료, 관리 또는 개선하기 위해 본원에 제공된 조성물의 투여량은 0.1 mg 내지 200 mg, 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 50 mg, 0.1 mg 내지 25 mg, 0.1 mg 내지 20 mg, 0.1 mg 내지 15 mg, 0.1 mg 내지 10 mg, 0.1 mg 내지 7.5 mg, 0.1 mg 내지 5 mg, 0.1 내지 2.5 mg, 0.25 mg 내지 20 mg, 0.25 내지 15 mg, 0.25 내지 12 mg, 0.25 내지 10 mg, 0.25 mg 내지 7.5 mg, 0.25 mg 내지 5 mg, 0.25 mg 내지 2.5 mg, 0.5 mg 내지 20 mg, 0.5 내지 15 mg, 0.5 내지 12 mg, 0.5 내지 10 mg, 0.5 mg 내지 7.5 mg, 0.5 mg 내지 5 mg, 0.5 mg 내지 2.5 mg, 1 mg 내지 20 mg, 1 mg 내지 15 mg, 1 mg 내지 12 mg, 1 mg 내지 10 mg, 1 mg 내지 7.5 mg, 1 mg 내지 5 mg, 또는 1 mg 내지 2.5 mg이다.
투여량은 적합한 스케줄에 따라, 예를 들어, 매주 1회, 2회, 3회 또는 매번 투여될 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 일부 경우에 본원에 개시된 범위 밖의 항체 접합체의 용량을 사용하는 것이 필요할 수 있다. 또한, 임상의(clinician) 또는 치료 의사(treating physician)는 대상체 반응과 관련하여 치료를 중단, 조정 또는 종료하는 방법과 시기를 알고 있을 것이다.
당업자가 용이하게 알게 되는 바와 같이, 상이한 질병 및 상태에 대해 상이한 치료학적 유효량을 적용할 수 있다. 유사하게, 이러한 장애를 예방, 관리, 치료 또는 개선하기에 충분한 양이지만, 본원에 제공된 항체와 관련된 부작용을 야기하기에는 불충분하거나 또는 감소시키기에 충분한 양도 본원에 기재된 투여량 및 투여 빈도 스케줄에 포함된다. 또한, 대상체에게 본원에 제공된 조성물의 다중 용량(multiple dosage)을 투여 할 때, 모든 용량이 동일할 필요는 없다. 예를 들어, 대상체에게 투여되는 투여량은 조성물의 예방적 또는 치료적 효과를 개선하기 위해 증가될 수 있거나 특정 대상체가 겪고 있는 하나 이상의 부작용을 감소시키기 위해 감소될 수 있다.
특정 구체예에서, 치료 또는 예방은 하나 이상의 유지 용량이 뒤잇는 본원에 제공된 하나 이상의 로딩 용량(loading dose)의 항체 접합체 또는 조성물로 개시될 수 있다.
특정 구체예에서, 본원에 제공된 항체 접합체 또는 조성물의 용량은 대상체의 혈액 또는 혈청에서 항체의 정상 상태 농도(steady-state concentration)를 달성하기 위해 투여될 수 있다. 정상 상태 농도는 당업자에게 이용 가능한 기술에 따른 측정에 의해 결정될 수 있거나 또는 키, 체중 및 연령과 같은 대상체의 물리적 특성에 기초할 수 있다.
특정 구체예에서, 동일한 조성물의 투여가 반복될 수 있고 각 투여는 1일, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일, 30일, 45일, 2개월, 75일, 3개월, 또는 6개월 이상 분리될 수 있다. 다른 구체예에서, 동일한 예방제 또는 치료제의 투여가 반복될 수 있고, 각 투여는 1일, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일, 30일, 45일, 2개월, 75일, 3개월, 또는 6개월 이상 분리될 수 있다.
14.3. 병용 요법 및 제제
특정 실시 양태에서, 본원에 개시된 하나 이상의 화학 요법제(chemotherapeutic agent)와 조합하여 본원에 제공된 임의의 항체 접합체를 포함하는 조성물 및 치료적 제제, 및 이러한 조합물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다. 화학 요법제의 예는 엘로티닙(타쎄바 ®, 제넨테스/OSI 팜.), 보르테조밉(벨케이드®, 밀레니엄 팜.), 풀베스트란트(파슬로덱스®, 아스트라제네카), 수텐(SU11248, 화이자), 레트르졸(페마라®, 노바티스), 이매티닙 메실레이트(글리벡®, 노바티스), PTK787/ZK 222584(노바티스), 옥살리플라틴(엘록사틴®, 사노피), 5-FU(5-플루오로우라실), 류코보린, 라파마이신(시롤리무스, 라파뮨®, 와이어스), 라파티닙(타이커브®, GSK572016, 갈락소 스미스 클라인), 로나파닙(SCH 66336), 소라페닙(BAY43-9006, 바이엘 연구소), 및 제피티닙(이레사®, 아스트라제네카), AG1478, AG1571(SU 5271; 수겐), 티오테파 및 사이토산® 사이클로포스파미드와 같은 알킬화제; 부술판, 임프로술판 및 피포술판과 같은 알킬 술포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온(carboquone), 메투르도파(meturedopa) 및 우레도파(uredopa)와 같은 아지리딘(aziridines); 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르 아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민(trimethylomelamine)을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸라멜라민(methylamelamines); 아세토게닌(특히, 불라타신(bullatacin) 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴(callystatin); CC-1065(이의 아도젤레신(adozelesin), 카르젤레신(carzelesin) 및 바이젤레신(bizelesin) 합성 유사체를 포함); 크립토파이신(cryptophycins; 특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 도라스타틴(dolastatin); 듀오카르마이신(duocarmycin; 합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 에류테로빈(eleutherobin); 판크라티스타틴(pancratistatin); 사크로딕티인(sarcodictyin); 스폰지스타틴(spongistatin); 클로람부실, 클로마파진(chlomaphazine), 클로로포스파미드(chlorophosphamide), 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민(mechlorethamine), 메클로르에타민 옥사이드 히드로클로라이드(mechlorethamine oxide hydrochloride), 멜팔란(melphalan), 노벰비킨(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파미드(trofosfamide), 우라실 머스타드(uracil mustard)와 같은 나이트로젠 머스타드; 카무스틴, 클로로족틴(chlorozotocin), 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님누스틴(ranimnustine)과 같은 니트로우레아(nitrosurea); 엔디인 항생제(enediyne antibiotics)(예를 들어, 칼리케아미신(calicheamicin), 특히 운시알라마이신(uncialamycin), 칼리케아미신 감말(calicheamicin gammall) 및 칼리케아미신 오메갈(calicheamicin omegall)(Angew Chem. Intl. Ed. Engl.(1994) 33:183-186); 디메니신(dynemicin) A를 포함하는 디메니신; 클로드로네이트(clodronate)와 같은 비스포스포네이트(bisphosphonates); 에스페르아미신(esperamicin); 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단(neocarzinostatin chromophore) 및 관련 크로모단백질 엔디인 항생제 발색단(related chromoprotein enediyne antibiotic chromophores)), 아클라시노마이신(aclacinomysins), 악티노마이신(actinomycin), 오스라마이신(authramycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신(bleomycins), 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 캄미노마이신(caminomycin), 카르치노필린(carzinophilin), 크로모미시니스(chromomycinis), 닥티노마이신(dactinomycin), 도노루비신(daunorubicin), 데토루비신(detorubicin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신(6-diazo-5-oxo-L-norleucine), 아드리아마이신®(독소루비신), 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신(2-pyrrolino-doxorubicin) 및 데옥시독소루비신), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 이다루비신(idarubicin), 마르셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신(mitomycin) C와 같은 미토마이신, 미코페놀산(mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycins), 페플로마이신(peplomycin), 포르피로마이신(porfiromycin), 퓨로마이신(puromycin), 퀘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토니그린(streptonigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 튜베르시딘(tubercidin), 우베니메스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin)과 같은 항생제; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU)과 같은 항-대사물질(anti-metabolites); 데노프테린(denopterin), 메토트렉세이트, 플라지에놀라이드 B(pladienolide B), 테프로테린(pteropterin), 트리메트렉세이트(trimetrexate)와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈(fludarabine), 6-멀캅토퓨린(6-mercaptopurine), 티암니프린(thiamniprine), 티오구아닌(thioguanine)과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘(6-azauridine), 카르모푸르(carmofur), 시타라빈(cytarabine), 디데옥시우리딘(dideoxyuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 플록스우리딘(floxuridine)과 같은, 피리미딘 유사체; 카루스테론(calusterone), 드로모스타놀론 프로피오네이트(dromostanolone propionate), 에피티오스탄올(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane), 테스토락톤(testolactone)과 같은 안드로겐; 아미노글루티마이드(aminoglutethimide), 미토탄(mitotane), 트리로스탄(trilostane)과 같은 항-아드레날(anti-adrenals); 프로리닉산(frolinic acid)과 같은 엽산 보충제(folic acid replenisher); 아세글라톤(aceglatone); 알도포스파미드 글리코시드(aldophosphamide glycoside); 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 에닐우라실(eniluracil); 암사크린(amsacrine); 베스트라부실(bestrabucil); 바이센트린(bisantrene); 에다트렉세이트(edatraxate); 데포파민(defofamine); 데메콜신(demecolcine); 디아지쿠온(diaziquone); 엘포르미틴(elformithine); 엘립티늄 아세테이트(elliptinium acetate); 에포티론(epothilone); 에토글루시드(etoglucid); 질산 갈륨(gallium nitrate); 히드록시우레아(hydroxyurea); 렌티난(lentinan); 로니다이닌(lonidainine); 마이탄신(maytansine) 및 안사미토신(ansamitocins)과 같은 메이탄시노이드; 미토구아존(mitoguazone); 미토산트론(mitoxantrone); 모피단몰(mopidanmol); 니트라에린(nitraerine); 펜토스타틴(pentostatin); 페나멧(phenamet); 피라루비신(pirarubicin); 로소산트론(losoxantrone); 포도필린산(podophyllinic acid); 2-에틸히드라지드; 프로카바진(procarbazine); PSK® 폴리사카라이드 콤플렉스(JHS 천연물, Eugene, Oreg.); 라조산(razoxane); 리조신(rhizoxin); 시조푸란(sizofuran); 스피로게르마늄(spirogermanium); 테누아진산(tenuazonic acid); 트리아지쿠온(triaziquone); 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A(verracurin A), 로리딘 A(roridin A) 및 안구이딘(anguidine)); 우레탄; 빈데신(vindesine); 다카르바진(dacarbazine); 만노무스틴(mannomustine); 미토브로니톨(mitobronitol); 미토락톨(mitolactol); 피포브로만(pipobroman); 가시토신(gacytosine); 아라비노시드("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파(thiotepa); 탁소이드(taxoids), 예를 들어, 탁솔®(파클리탁셀; 브리스톨-마이어 스큅 종양학, 프린스턴, N.J.), 아브락산®(무-크레모포어(Cremophor-free)), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형(American Pharmaceutical Partners, 샴버그, Ill.), 및 탁소텔®(도세탁셀; Rhone-Poulenc Rorer, 앤토니, 프랑스); 클로람부실(chloranmbucil); 젬자®(젬시타빈); 6-티오구아닌; 멀캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴(vinblastine); 에토포시드(VP-16); 이포스파미드(ifosfamide); 미토산트론(mitoxantrone); 빈크리스틴(vincristine); 나벨빈®(비노렐빈); 노반트론(novantrone); 테니포시드(teniposide); 에다트렉세이트(edatrexate); 도노마이신(daunomycin); 아미노프테린(aminopterin); 카페시타빈(젤로다®); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라아제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 및 상기 중 임의의 건의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 및 유사체을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제와 조합하여 본원에 제공된 임의의 항체 접합체를 포함하는 조성물 및 치료적 제제, 및 이러한 조합물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 PD-1 또는 PD-L1 경로의 소분자 차단제를 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 PD-1 또는 PD-L1 활성을 억제하는 항체를 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 CA-170, BMS-8, BMS-202, BMS-936558, CK-301, 및 AUNP12로 이루어진 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 아벨루맙(avelumab), 니볼루맙(nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), 아테졸리주맙(atezolizumab), 더발루맙(durvalumab), AMP-224(글락소 스미스 클라인), MEDI0680/AMP-514(아스트라제네카), PDR001(노바티스), 세미플리맙(cemiplimab), TSR-042(테사로), 티즐레리주맙(Tizlelizumab)/BGB-A317(베이진, Beigene), CK-301(Checkpoint Therapeutics), BMS-936559(브리스톨-마이어 스큅), 캄렐리주맙(camrelizumab), 신틸리맙(sintilimab), 토리팔리맙(toripalimab), 제놀림주맙(genolimzumab), 및 A167(Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 MGA012(Incyte/MacroGenics), PF-06801591(화이저/머크 KGaA), LY3300054(일라이 릴리), FAZ053(노바티스), PD-11(노바티스), CX-072(CytomX), BGB-A333(베이진), BI 754091(베링거 인겔하임), JNJ-63723283(존슨앤존슨/얀센), AGEN2034(Agenus), CA-327(Curis), CX-188(CytomX), STI -A1110(Servier), JTX-4014(Jounce),(LLY) AM0001(Armo Biosciences), CBT-502(CBT Pharmaceuticals), FS118(F-Star/Merck KGaA), XmAb20717(Xencor), XmAb23104(Xencor), AB122(Arcus Biosciences), KY1003(Kymab), RXI-762(RXi)로 이루어진 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 PRS-332(Pieris Pharmaceuticals), ALPN-202(Alpine Immune Science), TSR-075(Tesaro/Anaptys Bio), MCLA-145(Merus), MGD013(Macrogenics), MGD019(Macrogenics)로 이루어진 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 PD-1 또는 PD-L1 억제제는 예를 들어, WO 2016/077397, WO 2018/156777, 및 국제특허출원 PCT/US2013/034213(2018년 5월 23일 출원)에 기술된 항-PD1 모노-특이적(mono-specific) 또는 이중특이적(bi-specific) 항체로부터 선택된다.
본원에 개시된 항체 접합체와 병용하여 투여되는 작용제는 항체 접합체의 투여 직전, 병행 또는 직후에 투여될 수 있다. 본 개시의 목적을 위해, 이러한 투여 요법은 추가의 치료적 활성 성분과 "병용된(in combination with)" 항체 접합체의 투여로 간주된다. 구체예는 본원에 개시된 항체 접합체가 본원에 개시된 화학 요법제, PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제 중 하나 이상과 함께 제형 화된 약제학적 조성물을 포함한다.
15. 치료적 적용(Therapeutic applications)
치료적 적용을 위해, 본원에 제공된 항체 접합체는 당업계에 공지된 것들 및 상기 논의된 것들과 같은 약제학적으로 허용되는 투여 형태로 포유 동물, 일반적으로 인간에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 항체 접합체는 일정 기간에 걸쳐, 근육 내, 복강 내, 뇌척수 내(intra-cerebrospinal), 피하, 관절 내, 활액 내, 척수강 내 또는 종양 내 경로에 의해 볼루스(bolus)로서 또는 정맥 내로 지속적으로 주입(continuous injection)함으로써 인간에게 정맥 내 투여될 수 있다. 항체 접합체는 또한 국소적 및 전신 치료 효과를 발휘하기 위해 종양 주위(peritumoral), 병변 내 또는 병변 주변(perilesional) 경로에 의해 적절하게 투여된다. 복강 내 경로는 예를 들어 난소 종양의 치료에 특히 유용할 수 있다.
본원에 제공된 항체 접합체는 엽산 수용체 알파(FOLR1)를 포함하는 임의의 질환 또는 상태의 치료에 유용할 수 있다. 일부 구체예에서, 질환 또는 상태는 엽산 수용체 알파의 과발현에 의해 진단될 수 있는 질환 또는 상태이다. 일부 구체예에서, 질환 또는 상태는 항-엽산 수용체 알파 항체로의 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 질환 또는 상태이다. 일부 구체예에서, 질환 또는 상태는 암이다.
임의의 적합한 암은 본원에 제공된 항체 접합체로 치료될 수 있다. 예시적인 적합한 암은 예를 들어 급성 림프모구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL), 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 부신피질 암종(adrenocortical carcinoma), 항문 암(anal cancer), 맹장 암(appendix cancer), 성상 세포종(astrocytoma), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), 뇌종양(brain tumor), 담관암(bile duct cancer), 방광암(bladder cancer), 골암(bone cancer), 유방암(삼중 음성 유방암 또는 TNBC 포함), 기관지 종양(bronchial tumor), 원발 기원 불명 암종(carcinoma of unknown primary origin), 심장 종양(cardiac tumor), 자궁 경부암(cervical cancer), 척색종(chordoma), 결장암(colon cancer), 결장 직장암(colorectal cancer), 두개 인두종(craniopharyngioma), 관암종(ductal carcinoma), 배아 종양(embryonal tumor), 자궁 내막암(endometrial cancer), 뇌실막세포종(ependymoma), 식도암(esophageal cancer), 감각신경모세포종(esthesioneuroblastoma), 나팔관 암종(fallopian tube carcinoma), 섬유성 조직구종(fibrous histiocytoma), 유잉 육종(Ewing sarcoma), 눈암(eye cancer), 생식 세포 종양(germ cell tumor), 담낭암(gallbladder cancer), 위암(gastric cancer), 위장관 카르시노이드 종양(gastrointestinal carcinoid tumor), 위장관 기질 종양(gastrointestinal stromal tumor), 임신융모질환(gestational trophoblastic disease), 신경아교종(glioma), 두경부암(head and neck cancer), 간세포 암(hepatocellular cancer), 조직구증(histiocytosis), 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma), 하인두암(hypopharyngeal cancer), 안구 내 흑색종(intraocular melanoma), 섬 세포 종양(islet cell tumor), 카포시 육종(Kaposi sarcoma), 신장암(kidney cancer), 랑게르한스 세포 조직구증(Langerhans cell histiocytosis), 후두암(laryngeal cancer), 입술 및 구강암(lip and oral cavity cancer), 간암(liver cancer), 소엽성 상피내암(lobular carcinoma in situ), 폐암(lung cancer), 마크로글로불린혈증(macroglobulinemia), 악성 섬유성 조직구종(malignant fibrous histiocytoma), 흑색종(melanoma), 메르켈 세포 암종(Merkel cell carcinoma), 중피종(mesothelioma), NUT 유전자가 관여하는 잠복 원발성, 중간선 관암종을 가지는 전이성 편평성 목 암(metastatic squamous neck cancer with occult primary, midline tract carcinoma involving NUT gene), 구강암(mouth cancer), 다발성 내분비 신생물 증후군(multiple endocrine neoplasia syndrome), 다발성 골수종(multiple myeloma), 균상식육종(mycosis fungoides), 골수이 형성 증후군(myelodysplastic syndrome), 골수이형성/골수증식성 신생물(myelodysplastic/myeloproliferative neoplasm), 비강 및 부비동 암(nasal cavity and par nasal sinus cancer), 비인두암(nasopharyngeal cancer), 신경모세포종(neuroblastoma), 비소 세포 폐암(NSCLC), 입인두 암(oropharyngeal cancer), 골육종(osteosarcoma), 난소암(ovarian cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 유두종증(papillomatosis), 부신경절종(paraganglioma), 부 갑상선암(parathyroid cancer), 음경 암(penile cancer), 인두 암(pharyngeal cancer), 갈색 세포종(pheochromocytomas), 뇌하수체 종양(pituitary tumor), 흉막 폐모세포종(pleuropulmonary blastoma), 원발 중추 신경계 림프종(primary central nervous system lymphoma), 원발 복막암종(primary peritoneal carcinoma), 전립선 암(prostate cancer), 직장암(rectal cancer), 신장 세포 암(renal cell cancer), 신우요관암(renal pelvis and ureter cancer), 망막 모세포종(retinoblastoma), 막대모양 종양(rhabdoid tumor), 침샘 암(salivary gland cancer), 시자리 증후군(Sezary syndrome), 피부암(skin cancer), 소세포 폐암(small cell lung cancer), 소장 암(small intestine cancer), 연조직 육종(soft tissue sarcoma), 척수 종양(spinal cord tumor), 위암(stomach cancer), T-세포 림프종(T-cell lymphoma), 기형종 종양(teratoid tumor), 고환암(testicular cancer), 인후암(throat cancer), 흉선종 및 흉선 암종(thymoma and thymic carcinoma), 갑상선암(thyroid cancer), 요도암(urethral cancer), 자궁암(uterine cancer), 질암(vaginal cancer), 외음부 암(vulvar cancer) 및 윌름스 종양(Wilms tumor)을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 제공된 항체 접합체로 치료되는 질환은 위암, 결장 직장암, 신장 세포 암종, 자궁 경부암, 비소 세포 폐암종, 난소암, 자궁암, 난관 암(fallopian tube carcinoma), 원발 복막암종, 자궁 체부 암종(uterine corpus carcinoma), 자궁내막 암종, 전립선 암, 유방암, 두 경부암, 뇌 암종, 간암, 췌장암, 중피종 및/또는 상피기원의 암(a cancer of epithelial origin)이다. 특정 구체예에서, 질환은 결장 직장암이다. 일부 구체예에서, 질환은 난소암이다. 일부 구체예에서, 질환은 유방암이다. 일부 구체예에서, 질환은 삼중 음성 유방암(TNBC)이다. 일부 구체예에서, 질환은 폐암이다. 일부 구체예에서, 질환은 비소 세포 폐암(NSCLC)이다. 일부 구체예에서, 질환은 두 경부암이다. 일부 구체예에서, 질환은 신장 세포 암종이다. 일부 구체예에서, 질환은 뇌 암종이다. 일부 구체예에서, 질환은 자궁 내막암이다.
16. 진단적 적용
일부 구체예에서, 본원에 제공된 항체 접합체는 진단적 적용에 사용된다. 예를 들어, 항-FOLR1 항체 접합체는 FOLR1 단백질에 대한 분석에 유용할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 접합체는 다양한 세포 및 조직에서 FOLR1의 발현을 검출하는데 사용될 수 있다. 이들 분석은 예를 들어 암과 같은 질병에 대한 진단 및/또는 예후 예측을 하는데 유용할 수 있다.
일부 진단적 및 예후적 응용에서, 항체 접합체는 검출 가능한 모이어티로 표지될 수 있다. 적합한 검출 가능한 모이어티는 방사성 동위 원소, 형광 표지 및 효소-기질 표지를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 다른 구체예에서, 항-FOLR1 항체 접합체는 표지될 필요가 없으며, 항체 접합체의 존재는 항-FOLR1 항체 접합체에 특이적으로 결합하는 표지된 항체를 사용하여 검출될 수 있다.
17. 친화성 정제 시약
본원에 제공된 항체 접합체는 친화성 정제 시약(affinity purification agents)로서 사용될 수 있다. 이 공정에서, 항체 접합체는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수지 또는 여과지와 같은 고체상에 고정될 수 있다. 엽산 수용체 알파 단백질(또는 이의 단편)을 정제하기 위하여, 엽산 수용체 알파 단백질(또는 이의 단편)을 포함하는 시료를 고정화된 항체 접합체와 접촉시킨 후, 고정화된 항체에 결합된 엽산 수용체 알파 단백질을 제외한 시료에서 실질적으로 모든 물질을 제거할 적합한 용매로 지지체를 세척한다. 마지막으로, 항체로부터 엽산 수용체 알파 단백질을 방출할 pH 5.0인 글리신 완충액과 같은 다른 적합한 용매로 지지체를 세척한다.
18. 키트
일부 구체예에서, 본원에 제공된 항-FOLR1 항체 접합체는 키트 형태, 즉 절차를 수행하기 위한 지시 사항과 함께 미리 결정된 양으로 시약의 패키지된 조합의 형태로 제공된다. 일부 구체예에서, 절차는 진단 검정이다. 다른 구체예에서, 절차는 치료적 절차이다.
일부 구체예에서, 키트는 항-FOLR1 항체 접합체의 재구성을 위한 용매를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FOLR1 항체 접합체는 약제학적 조성물의 형태로 제공된다.
실시예
실시예 1: 항-FOLR1 항체의 생성 및 1차 스크리닝
상보성 결정 영역(CDR)을 표적으로 하는 돌연변이 유발 프라이머와 함께 표준 중첩 연장 PCR 프로토콜을 사용하여 항체 Fab 라이브러리를 구축하였다. Heckman 및 Pease, Nat. Protoc., 2007, 2:924-932; Stafford 등, 2014, Protein Eng. Des. Sel. 27:97-109를 참고하며, 이들 두 문헌 모두 전문이 본원에 참고자료로서 포함된다. 표준 리보솜 디스플레이 프로토콜을 사용하여 신규한 항체에 대한 선별을 수행하였다. 그 전문이 본원에 참고자료로서 포함되는, Dreier 및 Pl
Figure pct00093
ckthun, 2011, Methods Mol Biol 687:283-306를 참고한다.
리보솜 디스플레이로부터의 초기 항체 리드(initial antibody leads)는, 트라스투주맙 HC를 기본 주형으로 사용한 중첩 PCR(overlapping PCR)에 의해 구축된 나이브(naive) 인간 라이브러리로부터 유래되었다. CDR H1 및 H2는 Lee 등, J. Mol. Biol. 2004, 340:1073-1093에 기재된 것과 동일한 설계로 인티그레이티드 DNA 테크놀로지(Integrated DNA Technologies)로부터 구입한 올리고뉴클레오티드를 사용하여 무작위화되었다. 이 설계에서, CDR H1 및 H2는 천연 인간 항체의 관찰된 아미노산 분포와 밀접하게 일치한다. 아미노산 무작위화(amino acid randomization)를 위해 삼량체 포스포르아미다이트 혼합물(trimer phosphoramidite mixtures, TRIMs)을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 사용하여 CDR H3을 다양화시켰다. 상기 TRIM 올리고는 Yagodkin A 등, Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 2007, 26:473-97에 기술된 바와 같이 합성하였다. 구체적으로, TRIM을 함유하는 6개의 분리된 올리고뉴클레오티드를 사용하여 6개의 분리된 H3 루프 길이(13-18; Zemlin 등에서 밝혀진 바와 같음)를 만들어 인간 레퍼토리(repertoire)에서 관찰되는 가장 일반적인 루프 길이와 일치시켰다. 이들 루프 길이는 함께, Zemlin 등, J. Mol. Biol. 2003, 334:733-749에서 보고된 바와 같이, 인간 IgG에서의 자연발생 루프 길이 편차(naturally-occurring loop length variation)의 대략 54.5%를 포함한다. 각 아미노산의 빈도 분포는 Zemlin 등에 의해 보고된 바와 같이, 인간 IgG의 CDR H3에서 관찰된 아미노산의 분포와 밀접하게 일치하도록 설계되었다. 전체적으로, 상기 라이브러리는 Zhai 등, J Mol Biol. 2011, 412:55-71에 기술된 바와 같이, 항체 안정성 및 항체의 폴딩(folding)을 개선하기 위해 해당 분야에 공지된 천연 인간 항체 변이와 밀접하게 일치한다. 중쇄(HC) 라이브러리는 Stafford 등, Protein Eng Des Sel 2014, 27:97-109에 의해 기술된 바와 같이, 선별 과정에 걸쳐 불변의, 변형되지 않은 트라스투주맙 경쇄(LC)와 짝을 이뤘다.
친화도 성숙된 항체 리드(예를 들어, 아래의 SRP 1848 항체)는, 유로핀스 MWG 오페론(Eurofins MWG Operon)으로부터 구입한 "약하게 무작위화된(soft-randomized)" 올리고뉴클레오티드를 사용한 중첩 PCR에 의해 구축된, 2 개의 리드를 향해 편향된, 초점화된 라이브러리(focused library)로부터 유래되었다. 약한 무작위화(Soft-randomization)는 모 아미노산 서열(parent amino acid sequence)이 다른 아미노산들보다 ~30%의 시간만큼 더 자주 코딩되도록 뉴클레오티드의 편향된 분포(biased distribution)가 각각의 약하게 무작위화된 코돈(soft-randomized codon)에 사용되는 과정이다. 다른 아미노산들은 각 위치에서 코딩되지만, 더 낮은 퍼센트로 코딩된다. 각각의 약하게 무작위화된 위치에서, 모 뉴클레오티드(parental nucleotide)의 70%가 다른 3개의 뉴클레오티드의 10%와 혼합된다. 라이브러리의 경우, CDR H1, H2 및 H3을 동시에 약하게 무작위화하고, 표준 리보솜 디스플레이 프로토콜에 의해 선별하였다. 초기 리드의 선별과 같이, 친화도 성숙된 항체는 Stafford 등, Protein Eng Des Sel 2014, 27:97-109에 기술된 바와 같이, 선별 과정을 거쳐 불변의 변형되지 않은 트라스투주맙 LC와 짝을 이뤘다.
표준 리보솜 디스플레이 프로토콜을 사용하여 신규한 항체에 대한 선별을 수행하였다. 본원에 그 전문이 참고로서 포함되는, Dreier 및 Pl
Figure pct00094
ckthun, Methods Mol. Biol., 2003, 687:283-306, Clifton, NJ을 참고한다. Fab 리보솜 디스플레이 선별은 공개된 프로토콜에 따라 수행되었다. 그 전문이 참고로서 포함되는 두 문헌, Stafford 등, 2014, Protein Eng. Des. Sel. 27:97-109; Hanes 및 Pl
Figure pct00095
ckthun, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1997, 94:4937-4942을 참고한다. 복수의 선별 라운드 후, RT-PCR 아웃풋으로부터의 DNA를 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 무-세포 발현에 최적화된 벡터로 클로닝하였다. 그 전문이 참고로서 포함되는 Yin 등, mAbs, 2012, 4:217-225을 참고한다. 스크리닝 동안 정제 및 시험을 간소화하기 위해 모든 작제물은 HIS- 및 FLAG- 태깅하였다.
선별 작업 흐름에 의해 생성된 항체 변이체의 라이브러리를 대장균에 형질전환시키고, 항생제(카나마이신)가 있는 한천 플레이트에서 성장시켰다. 개별 콜로니를 액체 배지(liquid broth, TB + 카나마이신)에서 성장시키고, 회전환 증폭(rolling circle amplification, RCA)을 통한 DNA 증폭의 주형으로 사용하였다. 이어서, 변이체는 Yin 등, mAbs, 2012, 4:217-225에 기술된 바와 같이, 무-세포 단백질 합성 반응에서 발현시켰다.
간략하게, 무-세포 추출물을 실온(20oC)에서 30분 동안 50μM 요오도아세트아미드로 처리하고, 항체 조립을 위해 존재하며 라이브러리에서 달리하지는 않는 2.5 ug/mL 트라스투주맙 LC에 더하여, 무-세포 성분(그 전문이 참고로서 포함되는 Cai 등, Biotechnol Prg, 2015, 3:823-831 참고) 및 HC 변이체에 대한 10%(v/v) RCA DNA 주형(대략 10 μg/mL DNA)을 포함하는 예비 혼합물에 첨가하였다. 60 마이크로 리터의 무-세포 반응물을 96 웰 플레이트에서 650 rpm으로 진탕기에서 12 시간 동안 30oC 인큐베이션하였다. 다양한 선별 활동(selection campaign)의 예측된 다양성에 따라 400 내지 1500 개의 콜로니가 선별되었다.
합성 후, 각 반응물을 3% 소 태아 혈청(FBS)을 가지는 PBS(pH 7.4)로 1:50으로 희석하였고, 발현된 변이체는 CHO-hFOLR1 세포(인간 FOLR1을 재조합적으로 발현하는 중국 햄스터 난소세포)에 결합하는 세포-기반 ELISA를 통해 기능적 활성에 대해 시험하였다. 간략하게, 분석 전날 384-웰 플레이트에 CHO-대조군 또는 CHO-hFOLR1 세포를 분주하였다. 분석 당일, 세포를 암실에서 15분 동안 20 uL의 PBS 중의 4% 파라포름알데히드로 고정시키고, PBS로 세척한 다음, 실온에서 30분 동안 PBS 중의 30% FBS로 차단하였다. 관심있는 항체 변이체(1:50으로 희석된 무-세포 반응)를 고정된 CHO-hFOLR1 세포에 결합시키도록 하고, 이차 항체(예를 들어, HRP-접합된 항-인간 Fc 또는 항-FLAG)로 검출한 후 화학 발광 기질(Pierce ELISA SuperSignalTM Substrate)으로 검출하였다. 화학 발광은 Molecular Devices SpectraMax® M5 플레이트 리더로 정량화하였다. 세포-기반 ELISA 신호/잡음 비에 기초하여, 탑 히트(top hits)를 선택하고, 그들의 뉴클레오티드를 서열분석하였다. 결합 활성 및 서열 분석에 기초하여, 추가 스케일-업 및 특성화를 위한 변이체의 서브 세트를 선택하였다.
ELISA-기반 스크리닝으로부터의 탑 리드(tod leads)를 배양하고, 제조사의 지시에 따라 QIAprep® 96 터보 미니프렙 키트(Qiagen)를 사용하여 플라스미드 미니프렙을 수행하였다. 10 μg/mL의 미니프렙된 DNA를 4 mL의 무-세포 반응물에 첨가하고, 30°C에서 650 rpm으로 12시간 동안 밤새 인큐베이션하였다. 공통된 트라스투주맙 LC를 갖는 IgG 변이체의 경우, 7.5ug/mL의 HC 변이체 DNA 및 2.5ug/mL의 공통된 트라스투주맙 LC를 반응에 첨가하였다.
정화된 무-세포 반응(clarified cell-free reaction)으로부터 발현된 변이체를 반자동 고처리량 배치 정제 방법을 사용하여 고정화된 금속 이온 친화성 크로마토 그래피(IMAC) 정제를 통해 정제하였다. 간략하게, 50 μL/웰의 IMAC 수지(Ni Sepharose High Performance, GE Healthcare)가 IMAC 결합 완충액(50 mM 트리스 pH 8.0, 300 mM NaCl, 10 mM 이미다졸)으로 평형화된 96-웰 플레이트 포맷에서 정제를 수행하고, 1 mL 무-세포 반응물과 함께 15분 동안 배양한 후, IMAC 결합 완충액에서 2회 세척하였다. 이어서, His-태그된 항체 변이체를 200 μL IMAC 용출 완충액(50 mM 트리스 pH 8.0, 300 mM NaCl, 500 mM 이미다졸)를 사용하여 용출시키고, 96-웰 Zeba 플레이트(7 kD MWCO, 써멀 피셔)를 사용하여 PBS로 완충액을 교환하였다. 제조사의 지시에 따라, 허셉틴(Herceptin) 표준 곡선에 대한 LabChip GXII(Perkin Elmer)를 사용하여 고처리량 모세관 전기영동을 통해 정제된 항체를 정량화하였다.
예시적인 친화도-성숙된 항체는 하기 표 5에 보고되어 있다.
친화도 성숙된(SRP 1848) 항체
항체 VH 서열번호 VL 서열번호
1 SRP1848-A01 308 트라스투주맙 367
2 SRP1848-A02 309 트라스투주맙 367
3 SRP1848-A04 310 트라스투주맙 367
4 SRP1848-A06 311 트라스투주맙 367
5 SRP1848-A07 312 트라스투주맙 367
6 SRP1848-A08 313 트라스투주맙 367
7 SRP1848-A09 314 트라스투주맙 367
8 SRP1848-A10 315 트라스투주맙 367
9 SRP1848-B01 316 트라스투주맙 367
10 SRP1848-B03 317 트라스투주맙 367
11 SRP1848-B04 318 트라스투주맙 367
12 SRP1848-B05 319 트라스투주맙 367
13 SRP1848-B06 320 트라스투주맙 367
14 SRP1848-B07 321 트라스투주맙 367
15 SRP1848-B09 322 트라스투주맙 367
16 SRP1848-B10 323 트라스투주맙 367
17 SRP1848-B11 324 트라스투주맙 367
18 SRP1848-C01 325 트라스투주맙 367
19 SRP1848-C03 326 트라스투주맙 367
20 SRP1848-C04 327 트라스투주맙 367
21 SRP1848-C05 328 트라스투주맙 367
22 SRP1848-C07 329 트라스투주맙 367
23 SRP1848-C10 330 트라스투주맙 367
24 SRP1848-D02 331 트라스투주맙 367
25 SRP1848-D03 332 트라스투주맙 367
26 SRP1848-D04 333 트라스투주맙 367
27 SRP1848-D05 334 트라스투주맙 367
28 SRP1848-D07 335 트라스투주맙 367
29 SRP1848-D09 336 트라스투주맙 367
30 SRP1848-D10 337 트라스투주맙 367
31 SRP1848-E01 338 트라스투주맙 367
32 SRP1848-E02 339 트라스투주맙 367
33 SRP1848-E03 340 트라스투주맙 367
34 SRP1848-E05 341 트라스투주맙 367
35 SRP1848-E06 342 트라스투주맙 367
36 SRP1848-E07 343 트라스투주맙 367
37 SRP1848-F01 344 트라스투주맙 367
38 SRP1848-F02 345 트라스투주맙 367
39 SRP1848-F04 346 트라스투주맙 367
40 SRP1848-F05 347 트라스투주맙 367
41 SRP1848-F06 348 트라스투주맙 367
42 SRP1848-F07 349 트라스투주맙 367
43 SRP1848-F08 350 트라스투주맙 367
44 SRP1848-F09 351 트라스투주맙 367
45 SRP1848-F10 352 트라스투주맙 367
46 SRP1848-F11 353 트라스투주맙 367
47 SRP1848-G01 354 트라스투주맙 367
48 SRP1848-G03 355 트라스투주맙 367
49 SRP1848-G04 356 트라스투주맙 367
50 SRP1848-G06 357 트라스투주맙 367
51 SRP1848-G07 358 트라스투주맙 367
52 SRP1848-G09 359 트라스투주맙 367
53 SRP1848-G10 360 트라스투주맙 367
54 SRP1848-G11 361 트라스투주맙 367
55 SRP1848-H01 362 트라스투주맙 367
실시예 2: SCFVS의 제조
단일쇄 항체는 VH 도메인 및 VL 도메인 사이에 링커 서열을 갖는 VHVL 또는 VLVH 배향으로 제조된다. 전형적으로 scFv 링커는 각각 15개, 20개, 25개 또는 30개 잔기의 링커에 대해 n = 3, 4, 5 또는 6인 (GGGGS)n 반복으로 구성된다. 무-세포 발현의 경우, N-말단 Met가 추가되지만, 포유 동물 발현의 경우, 리더 펩티드가 추가된다. scFv의 C-말단에 생체 내 반감기를 연장시키기 위해 Fc 서열이 첨가될 수 있으며, scFv를 직접 사용할 수도 있다. 선택적 링커 서열은 scFv와 Fc 사이에 통합될 수 있다. 예시적인 scFv-Fc 링커 서열은 AAGSDQEPKSS(서열번호: 378)이다. 정제 및 분석 개발을 용이하게 하기 위해 C-말단 친화도 태그를 임의로 추가할 수 있다. 예시적인 친화성 태그는 C-말단 FlagHis 태그 GSGDYKDDDDKGSGHHHHHH(서열번호: 376)이다. 정지 코돈은 전형적으로 서열의 끝에 삽입된다. 예시적인 scFv는 N-말단 Met 잔기, VH 도메인, GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호: 377) 링커, VL 도메인, AAGSDQEPKSS(서열번호: 378) 링커, Fc 도메인, FlagHis 태그, 그리고 정지 코돈을 포함할 수 있다.
실시예 3: 친화성 및 동역학적 결합 분석
(GE Life Sciences의 아민 커플링 키트로부터의) 아민 커플링 화학을 사용하여 항-Fc 다중클론 항체를 CM5 칩(GE Life Sciences)에 고정시켰다. 고정화 단계는 1x HBS-EP+ 완충액(GE Life Sciences; 사용 전에 희석된 10x 스톡)에서 25 μL/분의 유속으로 수행하였다. N-히드록시숙신이미드(NHS, 0.05 M) 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드(EDC, 0.2 M)의 혼합물로 센서 표면을 7분 동안 활성화시켰다. 항-Fc 다중클론 항체를, 10 mM 아세트산 나트륨(pH 4.5) 중 25 μg/mL의 농도로 모든 4개의 플로우 셀(flow cell)에 걸쳐 7분 동안 주입하였다. 에탄올아민(1M, pH 8.5)을 7분 동안 주입하여 남아있는 활성화된 기(group)를 차단하였다. 포획 항체의 평균 12,000 반응 단위(RU)를 각 플로우 셀에 고정시켰다.
오프-비율(Off-rate) 및 동역학적 결합 실험을 1x HBS-EP+ 완충액을 사용하여 25oC에서 수행하였다. 플로우 셀 2, 3, 및 4에서 10 μL/분의 유속으로 12초 동안 5-10 μg/mL의 농도로 시험 항체 및 대조 항체를 항-Fc 표면 상에 주입한 후, 30초 동안 동일한 유속으로 완충액 세척을 하였다. 항체 시료의 동역학적 특성 분석은 단일 농도의 항원(오프-비율을 매기기 위하여) 또는 항원의 1:2 일련의 희석(동역학적 특성화) 및 0 nM 항원의 1회 주입으로 수행되었다. 항-Fc 표면에서 리간드(항체)를 포획한 후, 분석물(인간 FOLR1-HIS)을 180초 동안 50, 25, 12.5, 6.25 및 0 nM에 결합시킨 후, 50 μL/분의 유속에서 600 초의 해리 단계(dissociation phase)를 거쳤다. 각각의 리간드 포획 및 분석물 결합 사이클 사이에서, 30 μL/분에서 30초 동안 10 mM 글리신 pH 2.0을 2회 주입하여 재생(regeneration)을 수행한 후, 30초 완충액 세척 단계를 수행하였다.
데이터는 1:1 랭뮤어 결합 모델(Langmuir binding model)을 사용하여, 비아코어(Biacore) T200 평가 소프트웨어에 피팅하였다. KD(친화도, nM)는 회합 및 해리 상(association and dissociation phases)의 피트(fit)로부터 계산된 운동 속도 상수(kinetic rate constants)의 비로서 결정되었다.
실시예 4: 유세포 분석기-기반의 세포 결합 분석
발현 수준이 >250 nM인 변이체를 형광이용 세포분류(fluorescence-activated cell sorting, FACS) 세포-결합 분석에서 시험하였다. 세포 표면에서 인간(CHO-hFOLR1), 시노몰구스(CHO-cFOLR1) 또는 마우스(CHO-mFOLR1) 표적 분자 FOLR1을 안정적으로 발현시키도록 CHO 세포를 형질 감염하였다. CHO 모 세포(parental CHO cells)를 백그라운드 결합 수준을 결정하기 위한 음성 대조군으로 사용하였다. CHO 모 세포 및 안정적으로 형질감염된 CHO-hFOLR1, CHO-cFOLR1 및 CHO-mFOLR1 세포를 10% 열-불활성화된 소태아혈청(Corning, Cellgro-Mediatech), 1% 페니실린/스트렙토마이신(Corning, Cellgro-Mediatech) 및 2 mmol/L-글루타맥스(Life Technology)가 보충된 햄의 F-12: 고 포도당 DMEM(50:50)(Ham's F-12: high glucose DMEM(50:50), Corning, Cellgro-Mediatech)에서 배양하였다.
형광-표지된 CHO 모 세포 및 비-표지된 CHO-hFOLR1 세포의 혼합물을 다음과 같이 제조하였다. CHO 모 세포를 PBS로 2회 세척하고, 1nM 셀트레이스TM 오레곤 그린488®(CellTraceTM Oregon Green488®, Life Technologies)을 포함하는 PBS에서 37oC에서 30분 동안 배양하였다. 이어서, 표지된 CHO 모 세포를 햄의 F-12 배지로 2회 세척하고, FACS 완충액(1% 소 혈청 알부민을 함유한 PBS)로 2회 세척하였다. 표지되지 않은 CHO-hFOLR1 세포를 유사하게 세척하고 제조하였다. 표지된 CHO 모 세포 및 비-표지된 CHO-hFOLR1 세포를 1:1 비로 합치고 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에 웰 당 50 μL(웰당 200,000 세포)로 분주하였다. 세포를 FACS 완충액에 연속적으로 희석된 50 μL의 시험 항체(즉, 항-FOLR1 변이체)와 혼합하고 60분 동안 얼음 위에서 배양하였다. 세포를 FACS 완충액으로 세척하고, 2.5 μg/mL R-피코에리트린-접합된 염소 항-인간 IgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)를 함유하는 100 μL FACS 완충액과 함께 얼음 위에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하고, 어두운 곳에서 얼음 위에서 10분 동안 PBS(Santa Cruz Biotechnology; Dallas, TX) 중의 2% 파라 포름알데히드로 고정시키고, BD LSR II 유세포 분석기(BD Biosciences; San Jose, CA)를 사용하여 분석하였다. FlowJo® 소프트웨어(FlowJo, LLC; Ashland, OR)를 사용하여 데이터를 분석하여 평균 형광 강도를 측정하였다. 결합 상수는, 힐 슬로프를 이용한 하나의 위치에 특이적인 결합(one site - specific binding with Hill slope)에 대한 비선형 회귀 방정식을 사용하는 통계 소프트웨어인 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism, GraphPad Software; La Jolla, CA)을 사용하여 계산하였다. CHO 모 세포에 대한 비특이적 항체 결합을 측정하는 것과 더불어, 이차 항체를 단독으로 대조군으로서 사용하였다.
CHO-cFOLR1 및 CHO-mFOLR1 세포에서 세포 결합을 평가하기 위해 이 절차를 반복 하였다.
실시예 5: 세포-사멸 분석(CELL-KILLING ANALYSIS)
항체의 내재화를 표적 양성 세포에 대한 이차 항체 세포 사멸 분석으로 평가하였다. FOLR1-양성 KB 세포를 ATCC로부터 수득하였고, FOLR1-양성 Igrov1 세포는 NIH로부터 입수하였다. 세포를 10% 열-불활성화된 소태아혈청(Corning, Cellgro-Mediatech, 매너서스, 버지니아), 1% 페니실린/스트렙토마이신(Corning, Cellgro-Mediatech, 매너서스, 버지니아) 및 2 mmol/L-글루타맥스(Thermo Fisher Scientific, 월섬, 매사추세츠)가 보충된 햄의 F-12: 고 포도당 DMEM (50:50) (Corning, Cellgro-Mediatech)에 유지시켰다. 부착 세포를 칼슘 및 마그네슘이 없는 행크스 밸런스드 염 용액(HBSS)으로 2 회 세척하고, HYQ®TASETM(하이클론; Thermo Fisher Scientific, 월섬, 매사추세츠)로 수확하고, Vi-CELL 세포 생존능 분석기(Beckman Coulter, 인디애나폴리스, 인디애나)로 계수하였다. 총 625개의 세포를 384-웰의 평평한 바닥 백색 폴리스티렌 플레이트의 각 웰에 분주하였다. 리드 항체를 상기 세포 배양 배지에서 4배 개시 농도로 제제화하였고, MultiScreenHTS 96-웰 필터 플레이트(Millipore; 빌레리카, 매사추세츠)를 통해 여과하였다. 시험 항체의 연속 희석액(200nM에서 시작하여 1:3 연속 희석)을 처리 웰에 첨가하고, 이어서 절단성(cleavable) 링커를 통해 헤미아스텔린(hemiasterlin)에 접합된 항-인간 Fc 나노바디를 20 nM의 고정된 최종 농도로 각 웰에 첨가하였다. 분석 플레이트를 분석 전에 120 시간 동안 37oC, CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 세포 생존능 측정을 위해, 30 μL의 Cell Titer-Glo® 시약(Promega Corp. 매디슨, WI)을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 제품 지침에 따라 처리하였다. ENVISION® 플레이트 리더(Perkin-Elmer; 월섬, MA)에서 상대 발광을 측정하였다. 비-처리 세포를 대조군으로 사용하여 상대 발광 판독값을 생존율(percent viability)로 전환시켰다. 로그패드 프리즘(GraphPad v 5.0, 소프트웨어; 샌디에고, 캘리포니아)을 사용하여 로그(억제제) vs. 반응-가변 슬로프(response-variable slope), 4개 파라미터 피트(4 parameter fit)를 사용하는 비선형 회귀 분석을 데이터에 적용(fit)하였다. 데이터는 항체 용량 대 상대 세포 생존능(ATP 함량) %로 표현되었다.
실시예 6: 하이브리도마의 생성
면역적격 마우스(C57BL/6)를 인간 FOLR1을 과발현하는 마우스 MC38 세포로 면역화하였다. 혈청에서 FOLR1-특이적 항체가 검출되었고, 비장을 수확하고 P3X 세포와 융합시켜 이전에 기술된 것과 유사한 하이브리도마(Aragen Biosciences, Morgan Hill, CA)를 생성하였다. 이들 각각의 전문이 본원에 참고로서 포함되는, Chronopoulou 등, 2014, Methods Mol Biol 1131:47-70, 및 Kim 등, 2014, Methods Mol Biol 1131:31-45를 참고한다. QIAGEN RNeasy 미니 키트(카탈로그 번호. 74104)를 사용하여 하이브리도마 세포로부터 총 RNA를 추출하고 Clontech SMARTer RACE cDNA 증폭키트(카탈로그 번호. 634923)(Lake Pharma, 벨몬트, CA)를 사용하여 cDNA로 전환하였다. 양성 클론을 겔 전기 영동으로 식별하고, 인비트로젠 TOPO 키트를 사용하여 클로닝하고, 표준 생거(Sanger) 방법을 사용하여 시퀀싱하였다. m6D1에 대한 CDR을 표준 방법론을 이용하여 인간 항체 프레임 워크 VH1-18, VH3-33, VH2-5, VH2-70, VH4-30-4, Vk1-5, Vk3-11, Vk2-30, Vk1-33, 및 Vk1-16에 이식하여 인간화 항체를 생성하였다. 그 전문이 본원에 참고로서 포함되는 Kuramochi 등, 2014, Methods Mol Biol 1060:123-137을 참고한다. 이러한 이식된 것들 중에서, h6D1-HC3/LC4(VH3-33/Vk3-11 이식) 및 h6D1-HC3/LC5(VH3-33/Vk1-5 이식) IgG는 무-세포에서 발현되고 가장 높은 친화력으로 유지되었을 때, 최상의 수율을 제공하였다. HC3/LC4 및 HC3/LC5 인간화 변이체 둘 다는, 그 전문이 본원에 참고로서 포함되는 Stafford 등, 2014, Protein Eng Des Sel 4:97-109에 기술된 바와 같이, 경쇄 불변성을 유지하면서 약한 무작위화(soft randomization)에 의해 중쇄 CDR을 표적화하는(상기 기재된 바와 같은) Fab-기반 리보솜 디스플레이에 의해 친화도 성숙되었다.
인간화 마우스 항체의 친화도 성숙으로 특정 항체를 생성하였다. 예시적인 항체 후보들은 하기 표 6에 보고되어 있다.
친화도-성숙된 인간화 항체(SRP2060).
항체 VH 서열번호 VL 서열번호
56 SRP2060-E10 363 H6D1-LC4 368
57 SRP2060-E05 364 H6D1-LC4 368
58 SRP2060-B01 365 H6D1-LC5 369
59 SRP2060-A06 366 H6D1-LC5 369
실시예 7: 예시적인 항-FOLR1 항체의 특성
표 7 내지 9는 본원에 기재된 예시적인 항체를 사용하여 얻은 결과를 보여준다.
표 7은 트라스투주맙 중쇄(HC) 프레임 워크 상에 구축된 나이브 Fab TRiM 리보솜 디스플레이 라이브러리로부터 수득된 초기 항체 리드의 친화도-성숙으로부터 단리된 항체로 얻은 결과를 보여준다.
표 8은 표 7에 나열된 동일한 항체에 대해 얻은 동역학적 결합 결과를 보여준다.
표 9는 인간화된 마우스 클론 후보로부터 단리된 항체로부터 얻은 결과를 보여준다.
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
실시예 8: 난소암, 자궁내막암, NSCLC 및 TNBC 세포주에서의 FOLR1 발현
난소암 및 자궁내막암, 삼중 음성 유방암(TNBC) 및 비소세포 폐암(NSCLC)에서 높은 수준의 FolRα가 발견되었다. 보고된 FolRα mRNA 발현 수준에 기초하여, 난소암, 자궁내막암, TNBC 및 NSCLC 세포주의 패널을 후보 ADC 분자의 in vitro 시험을 위해 선택하였다. 세포 표면에서 발현된 FolRα 수용체의 수를 측정하기 위해, Alexa647이 접합된 항체 1848-H01(Y180/F404)을 FACS 세포 결합 분석에 사용하였고, FolRα 카피 수는, 정량 비드(Bangs Laboratories로부터의 Simply Cellular anti-human IgG beads)로 측정된, 접합된 항체의 항체 결합능(Antibody Binding Capacity, ABC)에 기초하여 결정하였다. 표 10에 나타낸 바와 같이, 난소암, 자궁내막암, TNBC 및 NSCLC 세포의 FolRα 카피 수는 세포 당 35,000 내지 4,000,000 수용체의 범위였다.
다양한 세포주에서의 FolRα 카피 수
질환명 세포주 세포당 FolRα 카피수
난소암 OVKATE 3,590,356
Igrov1 1,375,828
OVMANA 1,224,753
OVSAHO 842,703
OVISE 678,472
CAOV3 336,900
OVCAR3 196,426
OV90 97,717
자궁 내막암 MFE-280 434,941
HEC-1-A 220,690
EFE-184 128,166
HEC-1-B 176,400
Ishikawa 194,128
SNG-M 61,961
NUGC-4 35,395
폐암 H2342 1,419,355
H1651 918,800
H2110 347,447
H441 251,390
H226 85,164
H2405 68,182
H358 40,058
H2052 37,677
A549 35,078
H1770 33,781
TNBC HCC1143 255,813
HEC-251 113,270
HCC1599 65,624
MDA-MB-468 61,588
MDA-MB-231 50,005
HCC38 40,712
HCC1187 34,936
HCC1937 23,097
실시예 9: 난소암 및 자궁내막암, TNBC 및 NSCLC 조직에서의 FOLR1 발현
난소암 및 자궁내막암, TNBC 및 NSCLC를 대표하는 환자 시료에서 FolRα 발현의 확산(prevalence)을 확인하기 위해, 면역조직화학(IHC) 염색을 4가지 적응증에 대한 환자 시료를 함유하는 시판되는 조직 마이크로어레이(TMA)에서 수행하였다. 제조사의 권장 프로토콜과 함께 상용 FolRα IHC 분석 키트(Biocare; Cat. # IPI4006K G10)를 사용하여 FolRα 발현에 대해 TMA(Biomax; Biomax; Cat # BC11115b, EMC1021, BR1001, 및 BC041115c)를 염색하였다. 슬라이드를 이미지화하고 염색된 종양 코어는 염색 스코어링하였다. FolRα에 대한 양성 염색은 난소암 시료의 ~ 80%, 자궁내막암 시료의 ~ 60%, TNBC 시료의 ~ 30% 및 NSCLC 시료의 ~ 50%에서 관찰되었다; 이는 이들이 FolRα-표적 치료제에 적합한 적응증일 수 있음을 시사한다. 난소 시료 및 자궁내막 시료에서의 FolRα의 상대적 발현 수준이 표 11에 요약되어 있다.
난소암 시료 및 자궁내막암 시료에서의 FolRα 발현 수준의 요약
슬라이드의 적응증/ Cat#(Biomax US) 질환 코어의 전체 # 염색 강도
0 1+ 2+ 3+
인접한 정상 조직을 가진 난소암 조직 마이크로어레이, 100 케이스(cases )/100 코어(cores)
(BC11115b)		 97 21 19 29 25
자궁 내막암 조직 마이크로어레이, 102 케이스/102 코어(EMC1021) 90 26 37 15 12
실시예 10: 항체-약물 접합체(ADC) 평가
FOLR1의 세포 외 도메인(또는 "FolRα-ECD")에 대한 비아코어 친화도에 기초하여, HC F404 부위에 통합되는 파라-아지도메틸-L-페닐알라닌(pAMF)과의 스케일-업을 위한 9개의 항체를 선별하였다. 시험을 위해 선별된 9 개의 항체는 1848-A01, 1848-H01, 1848-A08, 1848-B04, 1848-D02, 1848-A07, 1848-B10, 1848-G10, 및 1848-G04였다. 항체 1848-D02는 잘 발현되지 않았으므로 추가 조사에 사용되지 않았다. 나머지 8개의 항체를 비-절단성 마이탄신(non-cleavable maytansine)에 접합시켜 하기와 같은 접합체 M의 구조를 갖는 항체-약물 접합체(ADC)를 형성하였다:
Figure pct00103
접합체 M
후보 항체-약물 접합체를 KB, Igrov1, HeLa 및 JEG3을 포함한 FolRα-발현 세포에서의 세포 사멸에 대해 시험하였다. 표 12는 KB 세포 및 JEG3 세포에 대한 후보 접합체의 시험관 내 세포 독성 활성의 요약을 제공한다.
항-FOLR1 항체-약물 접합체의 시험관 내 세포 독성 활성
항체 [IgG], μg/mL KB 세포에서의 사멸 JEG3 세포에서의 사멸
EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%)
1848-A01 1100 0.16 96 83* 94*
1848-A07 1021 0.17 96 80* 96*
1848-A08 1358 0.17 95 74* 95*
1848-B04 1257 0.3 98 113* 85*
1848-B10 802 0.23 98 43* 82*
1848-D02 1208 비시험 비시험 비시험 비시험
1848-G04 1415 0.31 94 38* 93*
1848-G10 1746 0.26 92 NC NC
1848-H01 1723 0.24 93 NC NC
* 예상됨
NC = 계산 불가능
KB 및 JEG3 세포에 대한 세포 사멸 활성에서 ADC 간에 유의한 차이는 없었다(표 12). 따라서, 비아코어 친화도(표 8) 및 서열 다양성의 최대화에 기초하여, 생체 내(in vivo) 연구를 위해 비-절단성 마이탄신에 접합되어 2개의 약물-항체 비(drug-antibody ratio of two, DAR2)로 접합체 M의 구조를 형성한 4개의 리드(1848-A01, 1848-A07, 1848-B04, 1848-G10)를 선택하였다. 또한, DAR2를 갖는 ADC는 JEG3 세포에서 약한 세포 독성 활성을 보였다.
항-FolRα 리드의 세포 사멸 활성에 대한 약물-항체 비율(DAR)의 효과를 연구하기 위해, 세포 사멸 분석에서 DAR2를 갖는 ADC를 또한 대략 DAR4 ADC로 비-절단성 마이탄신에 접합된 이차 DAR2 항-인간 IgG 나노 바디와 조합하였다. 이 분석에서, 1848-B10 ADC는 JEG3 세포 및 Igrov1 세포에서 이차 나노바디와 조합될 때 최상의 세포사멸 활성을 나타냈다(데이터는 나타내지 않음). 이 결과에 기초하여, 다른 4개의 리드(1848-A01, 1848-A07, 1848-B04, 1848-G10) 외에 DAR2인 1848-B10 ADC를 생체 내 연구에 추가하여 ADC 후보를 평가하였다. 생체 내 효능 연구 시험 결과에서, DAR2인 1848-B10 ADC만이 KB 모델에서 약한 종양 억제를 나타냈다(데이터는 제시되지 않음).
그 결과,1848-B10을 추가 ADC 연구를 위한 리드 항체 중 하나로 선별하였다.
실시예 11: 탑(top) FOLR1 항체 리드의 효능 스크리닝
DAR2인 접합체 M을 함유하는 ADC는 높은 수준의 FolRα를 발현하는 KB 세포에 대해 강력한 시험관 내 활성을 가졌다. 그러나, 상기 ADC는 보다 중간 수준의 FolRα을 발현하는 JEG3 세포 및 Igrov1 세포에서는 시험관 내 활성이 불량하였으며, KB 모델에서는 낮은 생체 내 활성을 보였다. JEG3 세포 및 Igrov1 세포에서의 FolRα 발현의 패턴 및 수준은 환자 종양에서의 발현을 더욱 대표하는 반면, KB 세포에서의 ADC 리드의 평가는 상이한 리드의 속성을 구별시키지는 못하는 것으로 보인다. FolRα는 리소좀에 도달하지 않고 빠른 내재화 및 재순환을 겪는다; 따라서, FolRα를 표적으로 하는 ADC의 활성을 향상시키기 위해, 엔도솜 구획에서 약물을 방출할 수 있는 링커를 갖는 것이 유용할 것이다. 또한, 원발성 난소 종양 및 Igrov1 이종 이식편에서의 FolRα 발현은 불균질(heterogenous)하며(Ab 등. 2015. Molecular Cancer Therapeutics 14(7):1605-1613), 이는 방관자 활성(bystander activity)을 갖는 ADC가 이들 종양에서 잠재적으로 더 높은 활성을 가질 수 있음을 시사한다. FolRα-표적 ADC의 설계를 표적의 생물 활성뿐만 아니라 난소암에서의 발현 수준 및 패턴에 맞게 조정하기 위해, 스크리닝 전략에서 몇 가지 변화를 구현하였다. KB 모델을 1 차 스크리닝에 사용하고, 리드의 활성을 시험관 내 및 생체 내 Igrov1 세포에서 시험하여 상이한 리드를 평가하고 비교하였다.
FolRα ADC 변이체의 초기 스크리닝은 높은 수준의 FolRα를 발현하는 KB 종양에서 수행하였다. 이 연구는 동일한 링커-탄두(linker-warhead)(아래의 접합체 P) 및 접합 부위(Y180/F404)에 접합된 4가지 다른 항-FolRα 항체의 항-종양 효과를 평가하고자 했다. KB 자궁경부 암 세포를 무흉선 누드 마우스에 피하 이식하고, 표 13에 열거된 단일 용량의 2.5 mg/kg FolRα ADC 변이체로 처리하였다. 종양이 ~ 150 mm3에 도달하였을 때, ADC 변이체를 투여하였다.
Figure pct00104
접합체 P
시험된 ADC 변이체
ADC 분자 항체 접합 위치 접합체 형태 DAR
비히클(오직 PBS) -- -- -- NA
1 1848-B10 HC-Y180, F404 P 3.8
2 1848-A07 HC-Y180, F404 P 3.9
3 1848-B04 HC-Y180, F404 P 3.8
4 1848-H01 HC-Y180, F404 P 3.8
동물 체중의 >20% 감소로 정의된, 유의한 체중 감량의 부재에 의해 입증되는 바와 같이 임의의 시험 물품에서 독성이 관찰되지 않았다(도 6). 도 7a 및 7b는 KB 종양 성장 및 비히클 대조군이 연구 종료점(>1000 mm3)에 도달했을 때인 25일에서의 종양 크기에 대한 치료 효과를 보여준다. 결과는 ADC 분자 1(1848-B10 FolRα 항체, Y180/F404, 접합체 P) 및 ADC 분자 4(1848-H01 FolRα 항체, Y180/F404, 접합체 P)는 대조군과 비교하여 KB 종양 성장을 유의하게 억제하였던 반면, 다른 2개의 ADC 변이체는 어떠한 항-종양 활성도 나타내지 않았다. 31일에 연구가 끝날 무렵, ADC 분자 1과 4 사이에는 유의한 차이가 없었다(도 8). 따라서, 1848-B10 및 1848-H01 항-FolRα 항체를 함유하는 ADC를 추가 특성화 및 시험을 위해 조사하였다.
실시예 12: 항체-약물 접합체를 위한 약물-항체 비율
증가한 DAR(2-6)과 절단성(cleavable) 링커를 갖는 ADC를 평가하여 이들 특징을 변화시키는 것이 분자의 활성을 향상시킬지 여부를 결정하였다. FolRα 표적화 ADC의 생체 내 효능을 증가시키기 위해, 1848-B10 항체를 각각의 항체에 통합되는 2, 4, 또는 6개의 파라-아지도메틸-페닐알라닌(pAMF) 잔기와 함께 발현시키고 비절단성 마이탄신에 접합시키고(접합체 M, 실시예 10), 절단성 헤미아스텔린에 접합시켜(접합체 P, 실시예 11) DAR = 2, 4 또는 6인 ADC를 생성하였다.
FolRα 양성 세포(KB, Igrov1 및 JEG3)에 대한 In vitro 세포 사멸은 중간 수준의 FolRα 발현를 갖는 Igrov1 세포에서 접합체 P의 항체 1848-B10 접합체가 접합체 M의 1848-B10 접합체보다 더 강력함을 보여주었다(표 14). 또한, DAR을 4로 증가시키면 DAR2 버전에 비해 효능이 크게 개선된 ADC가 생성되는 반면, DAR6 ADC는 DAR4에 비해 세포 사멸 활성이 약간 더 개선되었다. 이들 데이터에 기초하여, DAR4인 절단성 헤미아스텔린 접합체(접합체 P)가 FolRα ADC에 대한 최적의 접합체 형식인 것으로 결정하였다.
Figure pct00105
실시예 13: ADC의 서로 다른 위치 쌍의 활성 비교 연구
본 연구는 동일한 FolRα 항체(1848-B10) 및 링커-탄두(접합체 P)를 사용하여 3개의 상이한 접합 위치 쌍(Y180/F404, Y180/K42, 및 F404/K42)의 항-종양 효과를 비교하고자 하였다. 3개의 ADC의 시험관 내 세포 사멸 활성은 KB 및 Igrov1 세포에서 매우 유사하였다(표 15).
시험된 ADC의 시험관 내 세포 사멸 활성(접합체 P)
ADC 분자 항체 접합 위치 접합체 형태 DAR KB 세포에서의 EC50(nM) Igrov1 세포에서의 EC50(nM)
11 α-GFP HC-Y180, F404 P 3.58 NK NK
12 1848-B10 HC-Y180, LC-K42 P 3.93 0.21 0.085
1 1848-B10 HC-Y180, F404 P 3.82 0.21 0.083
9 1848-B10 HC-F404, LC-K42 P 3.90 0.19 0.061
생체 내 효능 시험을 위해, KB 자궁경부암 세포를 무흉선 누드 마우스에 피하 이식하고, 표 15에 열거된 단일 용량의 2.5mg/kg FolRα ADC 변이체로 처리하였다. 종양이 ~150 mm3에 도달하였을 때 ADC를 투여하였다. 동물 체중의 >20% 감소로 정의된, 유의한 체중 감소가 없었던 것으로 입증된 바와 같이 임의의 시험 물품에서 독성이 관찰되지 않았다(도 9). 도 10a 및 10b는 KB 종양 성장 및 연구가 종료되기 전이며, 비히클-처리된 종양이 연구 종료점(>1000 mm3)에 도달하였을 때인 21일째에서의 종양 크기에 대한 치료 효과를 도시한 것이다. 결과는, 항-GFP ADC 대조군(ADC 분자 11)이 비히클과 유사하게 행동하였던 반면, 상이한 접합 위치를 갖는 3개의 FolRα ADC 변이체(ADC 분자 1, 12 및 9) 모두가 비히클 대조군과 비교하여 초기에 종양 퇴행을 유도하고 종양 성장을 상당히 지연시켰음을 보여준다(도 10a 및 10b).
36 일에 연구가 끝날 무렵, ADC 분자 12는 종양 성장을 계속 억제하며 이 군에서 대부분의 종양에 가장 우수한 반응 지속을 나타낸 반면, ADC 분자 1 및 9에 대해서는 종양 재성장이 관찰되었다(도 10a). 통계 분석에 따르면 ADC 분자 12는 ADC 분자 9(p=0.0297) 및 ADC 분자 1(p=0.0470)과 비교하여 훨씬 더 효과적이다(도 11). 결론적으로, Y180/K42 접합 위치는 KB 종양에서 최고의 효능 및 반응 지속을 가져왔다.
실시예 14: ADC 설계를 위한 리드 항-FOLR1 항체의 선별을 위한 연구
항-FolRα ADC에 대한 잠재적 리드 항체를 평가하기 위해, DAR4인 접합체 P를 형성하도록 접합된 FolRα 탑 리드(top lead) 선별을 시험관 내에서 스크리닝하였다. 탑 항체 리드에 대한 시험관 내 세포 사멸 활성은 KB 및 Igrov1 세포에서 매우 유사하며, 결과는 표 16에 요약되어 있다.
리드 ADC의 시험관 내 세포 사멸 활성(접합체 P)
ADC 분자 시료 접합 위치 DAR KB Igrov1 A549
EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%)
1 1848-B10 Y180/F404 3.82 0.21 98 0.083 76 NK NK
2 1848-A07 Y180/F404 3.76 0.18 97 0.084 61 NK NK
3 1848-B04 Y180/F404 3.84 0.16 97 0.081 68 NK NK
4 1848-H01 Y180/F404 3.84 0.12 96 0.028 76 NK NK
4개의 탑 리드 항체에 대해 DAR4인 동일한 접합체 P를 KB 모델에서의 생체 내 효능 연구에서 스크리닝하였다(도 7 및 8). 이들 연구의 결과에 기초하여, 1848-B10 및 1848-H01을 추가 특성화를 위한 탑 항체 리드로서 선별하였다. 1848-B10 및 1848-H01의 서열 및 상응하는 CDR이 표 32에 제시되어 있다. 탑 항체 리드에 대한 추가 특성이 표 17에 요약되어 있다.
리드 항체의 속성
속성 1848-B10, Y180/F404 1848-H01, Y180/F404
KD(비아코어) 1.4 nM 1 nM
KD(FACS 세포결합),(CHO-h-FOLRα) 4.5 nM 3.7 nM
교차반응성, 사이노(Cyno)(CHO-c-FOLRα) 3.3 nM 3.8 nM
열안정성(DSC) 66.6°C, 85.9°C 66.8°C, 83.4°C
마우스 PK(ADC, DAR 분석 안함)* 11.2 일;6.94 mL/kg/일 14.3 일; 5.46 mL/kg/일
사이노 PK(네이키드 항체)* 대부분 항체에서 유사; T1/2 = 13.6 일 대부분 항체에서 유사; T1/2 = 8.5 일
사이노에서의ADA(네이키드 항체)* 매우 낮은 ADA 반응 모든 동물에서 관찰된 ADA 반응, T1/2에 영향을 끼침, 한 동물에서 제2 용량 후 AUC 없음
ADC 세포사멸(Igrov1), 접합체 = P 0.26 nM, 63%　스판(span) EC50 < 0.09 nM, 스판 > 70%
(10번의 독립적인 실험에서의 평균)
ADC 세포사멸(OVCAR3), 접합체 = P EC50 = 0.03　nM,
스판 = 71%
KB 모델 및 임상적 Igrov1 모델에서의 다중 리드의 효능 비히클 군(E4)과 비교하여 약한 종양 억제 비히클 군(E4)과 비교하여 현저한 종양 억제
DSC: 시차주사 열량측정법
* 대체물(Surrogate) ADCs:(1) 1848-B10, Y180/K42,(2) 1848-H01, Y180/K42
실시예 15: 절단성 헤미아스텔린을 위한 최적의 링커의 선택
상이한 절단 특성을 갖는 다중 링커를 갖는 헤미아스텔린을 생성하였다. 항체 1848-B10을 몇몇 후보 링커 변이체에 접합시키고, 생성된 ADC를 시험관 내 세포 독성 검정에서 시험하였다(표 18). 후보 링커 변이체 중에서, ValCit 대신에 ValAla인 단백질 분해 서열을 갖는 접합체 P의 대안은 우수한 세포 사멸 활성을 나타내었고(아래 접합체 Q), 확장성(scalability) 및 합성 효율 면에서 잠재적인 이점을 제공하였다.
Figure pct00106
접합체 Q
절단성 헤미아스텔린 링커-약물 변이체의 in vitro 세포독성 비교
ADC 분자 항체 접합체 형태 DAR Igrov1 A549
EC50(nM) 스판 (%) EC50(nM) 스판(%)
12 1848-B10, Y180/K42 P 3.74 0.12 78 NK NK
16 1848-B10, Y180/K42 Q 3.6 0.32 66 NK NK
다수의 후보 ADC 변이체의 시험관 내 세포독성 활성이 표 19에 요약되어 있다. ADC 분자 4는 상이한 실험들에 걸쳐 0.03-0.66 nM 범위의 EC50 및 69-96 % 범위의 스판(Span)과 함께 일관된 세포 사멸을 보여 주었다.
KB 및 Igrov1 세포주에서의 in vitro 세포 독성 연구 요약
세포주 1848-H01, Y180/F404, 접합체 P(ADC 분자　4) 1848-H01, Y180/F404, 접합체 Q(ADC 분자　20) 1848-B10, Y180/F404, 접합체 P(ADC 분자　1) 1848-B10, Y180/F404, 접합체 Q(ADC 분자　17)
EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%)
KB 0.66 78 0.45 83
0.12 96 0.21 98
Igrov1 0.11 69 0.26 63
0.03 76 0.08 76
0.31 72 0.21 71
0.16 62 0.24 42
0.12 68 0.21 53
0.06 70 0.13 54
0.08 80 0.13 70
0.09 81 0.23 70
0.02 74 0.11 73
또한, 별도의 연구에서, 항체 1848-B10 Y180/F404 및 접합체 R(아래)을 사용하여 항체-약물 접합체를 합성하였다:
Figure pct00107
접합체 R
접합체 R은 헤미아스텔린 탄두에 연결된 DBCO 아디포일 ValGlu(DBCO adipoyl ValGlu)를 포함한다. 접합체 R과 함께 1848-H01 HC-Y180/F404를 포함하는 ADC(ADC 분자 22)는 Igrov1 모델에서 ADC 분자 4와 유사한 생체 내 활성뿐만 아니라(도 14a 및 14b), ADC 분자 4와 유사한 시험관 내 세포 사멸 활성을 보여 주었다(데이터 미도시). 따라서, 이들 결과는 항체 1848-B10 HC-Y180/F404가 FolRα를 표적으로 하는 ADC에서 대안적인 링커 탄두와 함께 사용될 수 있음을 나타낸다.
실시예 16: 최적의 ADC 리드 선별
본 연구에서는 항체, 접합 위치, 및 링커 탄두를 포함하는 FolRα ADC 분자의 상이한 측면을 평가하고자 하였다. Igrov1 난소암 세포를 SCID 베이지 마우스(SCID Beige mice)에 피하 이식하고, 표 20에 열거된 단일 용량의 2.5mg/kg FolRα ADC 변이체로 처리하였다. 종양이 ~150 mm3에 도달하였을 때 ADC를 투여하였다.
효능 스크리닝에서 테스트한 ADC
ADC 분자 항체 접합 위치 접합체 형태 DAR Igrov1 세포 사멸
EC50(nM) 스판(%)
1 1848-B10 Y180/F404 P 3.82 0.09 76
17 1848-B10 Y180/F404 Q 3.74 0.21 71
12 1848-B10 K42/Y180 P 3.72 0.12 78
16 1848-B10 K42/Y180 Q 3.6 0.32 66
4 1848-H01 Y180/F404 P 3.84 0.03 76
18 1848-H01 K42/Y180 P 3.87 0.14 70
19 1848-H01 K42/Y180 Q 3.61 0.23 52
동물 체중의 >20% 감소로 정의된, 유의한 체중 감량의 부재에 의해 입증되는 바와 같이 임의의 시험 물품에서는 어떠한 독성도 관찰되지 않았다(도 12). 도 13a 및 13b는 Igrov1 종양 성장 및 비히클 대조군으로 처리된 종양이 연구 종료점(~1000 mm3)에 도달하였을 때인 치료 후 24일째의 최종 종양 크기에 대한 치료 효과를 보여준다. 시험된 7개의 FolRα ADC 변이체 중 ADC 분자 4는 비히클 대조군과 비교하여 종양 성장을 유의하게 억제하였다(도 13a, 13b). 이 결과는 Igrov-1 종양에서 1848-H01, Y180/F404, 및 SC239 각각이 항-FolRα 항체, 접합 위치 및 링커 탄두의 최적 조합인 것을 나타낸다.
실시예 17: FOLR 이소폼에 대한 ADC 변이체의 교차 반응성
엽산 수용체는 인간에서 hFolRα, hFolRβ 및 hFolRγ(각각 FOLR1, FOLR2 및 FOLR3)로 불리는 3 개의 이소폼(isoform)을 갖는다. hFolRα 및 hFolRβ는 GPI 앵커(GPI anchor)를 통해 원형질 막에서 발현되는 반면, FolRγ는 분비된다. 정상 조직에서 FolRα는 일반적으로 극성 상피 세포(polarized epithelial cells)의 정단 표면(apical surface)에서 발현되는 반면, hFolRβ는 정상 골수세포형성(myelopoiesis)의 후기 단계 및 태반, 비장 및 흉선에서 발현된다. 골수단핵구 계통(myelomonocytic lineage)의 정상적인 발달에서, hFolRβ는 단핵구에서는 상대적으로 낮은 수준으로 CD14와 공발현되는 분화 마커로 보이지만, CD34+ 정상 조혈 전구체에서는 그렇지 않다. hFolRγ는 비장, 흉선 및 골수의 림프구 세포에서 낮은 수준으로 분비된다. 3개의 FR 이소폼은 FolRα와 높은 정도의 상동성을 가지며, FolRα는 FolRβ 및 FolRγ 각각에 대해 72% 및 71% 서열 동일성을 공유한다. 따라서, FolRα에 대한 리드 항체 1848-B10 및 1848-H01의 특이성 및 FolRβ 및 FolRγ를 발현하는 세포와의 교차 반응성의 정도를 결정하는 것이 유용하다.
3종의 엽산 수용체 이소폼(hFolRα, hFolRβ 및 hFolRγ)을 안정적으로 발현하는 293T 세포를 생성하고, FACS 분석에서 항체 1848-B10 및 1848-H01에 대한 결합을 테스트하였다. 이 분석에서, 1848-B10와 달리, 1848-H01은 FolRβ에 매우 약한 결합을 보였으나(도 15), FolRγ에는 그렇지 않았다(미 도시). FolRβ 발현 세포에 대한 1848-H01 결합은 156 nM의 친화도를 가졌으며, Bmax는 FolRα에 대한 Bmax에 비해 단지 20%였다. FolRα 및 FolRβ 이소폼을 발현하는 293T 세포에서의 상응하는 ADC 분자 4 및 1의 세포독성 활성의 평가는, ADC 분자 4가 FolRα 발현 세포의 <10 nM의 EC50과 비교하여 ~100 nM의 EC50으로, 10 nM 초과의 농도에서 FolRβ를 발현하는 세포에 대해 약하지만 특이적인 세포독성 효과를 가짐을 보여주었다(도 16).
실시예 18
조혈 세포(hematopoietic cell)에서의 ADC 변이체의 결합 및 세포 독성 활성
ADC 분자 1 및 4가 조혈 세포의 생존능에 영향을 미치는지 여부를 결정하기 위해, 단리된 PBMC(n = 4 공여자)로부터의 T 세포, B 세포 및 단핵구에서 FolR 발현을 결정하고 항체 1848-H01 및 1848-B10의 면역 세포 상의 FolRβ에 대한 결합을 평가하였다. 이종성(공여자 가변) FolRα 발현은 단핵구에서 검출되었지만, 이 발현은 일시적이고 배양 1일 이후에 사라진 반면(데이터는 나타내지 않음), FolRβ는 단핵구의 소집단에서 지속적으로 발현되었다(데이터는 나타내지 않음). FolRβ 발현이 단핵구 세포에서 검출 가능하였지만, 항체 1848-B10 및 1848-H01 어느 것도 이들 단핵구에 결합하는 것으로는 관찰되지 않았다(데이터는 나타내지 않음). 또한, CD14 단핵구를 ADC 분자 1 및 4 처리 후의 생존능에 대해 분석하였고, 잠재적 세포 독성을 다루었다. 음성 세포 결합과 관련하여, ADC 변이체는 단핵구/대식세포의 생존능에 영향을 미치지 않았으며, 이는 인간에서 PB 단핵구에 대한 임상적 영향이 없음을 시사한다(데이터는 제시되지 않음).
FolRβ는 M1 대식세포에서 약하게 발현되고, M2 대식세포 및 이들의 서브 세트에서는 높게 발현된다. 따라서 단리된 대식세포에 결합하는 능력에 대해 항체 1848-H01 및 1848-B10를 평가하였다. 그러나, M1 또는 M2 대식세포에서 FolRβ 발현이 확인되었지만, 항체는 M1 또는 M2 대식세포에 어떠한 결합도 나타내지 않았다. 이러한 상호작용의 결여를 확인하기 위해, 상응하는 ADC 분자(1, 4)를 극성 대식세포(10,000 세포, 인큐베이션 기간 = 3일)에서의 세포사멸 활성에 대해 평가하였다. 결합 결여와 일치하여, ADC 변이체는 다수 공여체로부터의 대식세포에 대한 어떠한 세포 독성 활성도 나타내지 않았다(데이터는 나타내지 않음).
따라서, ADC 변이체는 인간 공여자로부터 단리된 단핵구 및 대식세포에 대한 최소 결합 및 세포 독성 영향을 갖는 것으로 입증되었다.
실시예 19: 항체-약물 접합체의 추가적인 특성화
항-FolRα 항체를 포함하는 리드 항체-약물 접합체(ADC)를 평가하고 특성화하였다. 측정 및 분석된 특성은 임상적으로 관련된 모델에서의 리드 ADC의 발현 및 정제 프로파일, 접합 효율 및 ADC의 시험관 내 및 생체 내 활성을 포함하였다. 항-FolRα 리드 ADC의 특성은 표 21에 요약되어 있다.
리드 항-FolRα ADC의 특성
특성 ADC 분자 4 ADC 분자 20
MALDI에의한 DAR 3.73 3.81
접합 효율 93% 95%
ADC 세포사멸 Igrov1: EC50 = 0.08nM. 스판 = 80% Igrov1: EC50 = 0.13 nM, 스판 = 70%
전임상in vivo 효율 5 mpk 용량 이상에서 완전한 종양 성장 억제 10 및 15 mpk에서 완전한 종양 억제, 5 mpk에서 약한 종양 억제
실시예 20: 용량 범위 효능 연구
ADC 분자 4 및 20의 용량-반응 관계를 Igrov-1 종양에서 평가하였다. 이 연구는 (1) 헤미아세텔린-기반 링커 탄두(접합체 P, Q)에 접합된 어떠한 FolRα ADC 변이체가 우수한지를 평가하고; (2) 이들 FolRα ADC 변이체의 항-종양 활성을 비교 분자(comparator molecule)(ADC 분자 21)와 비교하고,(3) 확인된 보다 효과적인 FolRα ADC 변이체의 최소 및 최대 유효 용량을 결정하고자 하였다. 모든 시험 물품은 표 22에 기재되어 있다.
용량 범위 연구에서 테스트된 ADC
ADC 분자 항체 접합 위치 접합체 형태 DAR
비히클(오직 PBS) NA NA NA NA
4 1848-H01 Y180/F404 P 3.73
20 1848-H01 Y180/F404 Q 3.76
21 Mov19-술포-SPDB-DM4 3.3
확립된 Igrov1 난소 종양을 갖는 SCID 베이지 마우스를 2.5mg/kg 내지 15mg/kg 범위의 용량으로, 4개 용량의 ADC 분자 4 또는 20으로 1회 처리하였다. 비교를 위해, 벤치마크 군을 5mg/kg의 비교기 ADC 분자(ADC 분자 21)로 1회 처리하였다. 유의미한 체중 감소(동물 체중의 >20% 감소로 정의됨)가 없는 것으로 입증된 바와 같이 어떠한 시험 물품에서도 독성이 관찰되지 않았다(도 17). 도 18a, 18b, 및 18c는 Igrov1 종양 성장 및 비히클 대조군 처리된 종양이 연구 종료점(>1000 mm3)에 도달하였을 때인 처리 후 21일까지의 개별 종양 크기에 대한 치료 효과를 보여준다. 21일째의 종양 크기의 비교(비히클 대조군과 비교)는 낮은 p 값에 기초하여 5 mg/kg 및 10 mg/kg 용량의 ADC 분자 4가 동등한 용량의 ADC 분자 20 또는 비교기 ADC 분자 21보다 효과적임을 나타낸다(도 18c). 최고 용량(15 mg/kg)에서, ADC 분자 4 및 20은 비히클 대조군과 비교하여 유사한 p 값으로 강력한 항-종양 활성을 나타냈다(도 18c). 용량에 의해 분류된 종양 성장 곡선의 병행(side by side) 비교는, 낮은 용량에서의 ADC 분자 4의 우수한 활성에 기초하여, ADC 분자 4가 ADC 분자 20보다 더 강력하다는 것을 보여주었다(도 19a 내지 19d). 10 mg/kg ADC 분자 20에서 처리 후 26일까지의 종양 정체가 관찰된 것 대비 5mg/kg ADC 분자 4에서 처리 후 26일까지의 종양 정체가 관찰되었다(도 19b, 19c). 종양 퇴행(Tumor regression)이 15 mg/kg ADC 분자 20에서 시작하여 유도된 것에 비하여 10 mg/kg ADC 분자 4에서 시작하여 유도되었다(도 19c, 19d). 또한, ADC 분자 4는, 5, 10 및 15 mg/kg의 ADC 분자 20과 5 mg/kg의 비교기 ADC 분자 21과 비교하여 종양 성장이 300 mm3에 도달하는 것을 상당히 지연시켰다(도 20).
종합하면, 이들 결과는 ADC 분자 4가 Igrov1 종양에서 ADC 분자 20 및 ADC 분자 21보다 상당히 더 효과적임을 입증한다. ADC 분자 4의 최소 유효 용량은 5 mg/kg에서 관찰되었으며, 15 mg/kg은 반응 지속 시간이 가장 긴 최대 유효 용량이었다.
실시예 21: 카보플라틴(CARBOPLATIN)과의 병용 치료에서의 ADC 변이체의 효능
난소암에 대한 표준 화학 요법제인 카보플라틴과 조합하여 ADC 분자 4의 효능을 Igrov1 종양에서 평가하였다. 확립된 Igrov1 종양(평균 종양 크기 150 mm3)을 갖는 동물을 매7일 마다 60 mg/kg 카보플라틴의 존재 또는 부재 하에 2.5　mg/kg ADC 분자 4의 단일 용량을 2회 처리하였다(q7dx2). 도 21a는 비히클 대조군 처리된 종양의 평균이 연구 종료점(~ 1200 mm3)에 도달하였을 때인 처리 후 29일까지 Igrov1 종양 성장에 대한 처리의 효과를 보여준다. 29일째의 최종 종양 크기 및 종양 성장 억제(TGI)의 분석은 단일 작용제 ADC 분자 4 및 카보플라틴이 비히클 대조군과 비교하여 각각 50% 및 70% 범위의 TGI를 갖는 중간 정도의 활성을 나타냄을 보여주었다(도 21b 및 21c). ADC 분자 4와 카보플라틴의 조합은 카보플라틴 단독과 비교하여 효능을 유의하게 개선시켰지만, 단일 작용제 ADC 분자 4와 비교하여 유의미하게 다르지는 않았다(도 21a). 병용 처리된 동물에서의 최종 평균 종양 크기는 단일 작용제 카보플라틴-처리된 동물과 비교하여 상당히 작았다 (414 mm3 대 842mm3, p = 0.0011)(도 21b). 또한, 병용 처리 군에서의 TGI는 단일 작용제 카보플라틴 군과 비교하여 79% 대 47%로 더 높았다(p = 0.0008)(도 21c).
결론적으로, ADC 분자 4가 단일 작용제 카보플라틴과 비교하여 카보플라틴과 조합될 때 상당한 추가 이점이 관찰되었다. 이 관찰은 유사한 용량의 ADC 분자 4 및 카보플라틴으로 투여된 동일한 모델을 사용하는 2개의 추가의 독립적인 연구에서 일관되게 재현되었다(데이터는 나타내지 않음).
실시예 22: 난소 종양 모델에서의 ADC 변이체의 효능
ADC 분자 4의 효능을 인간 난소 세포주 OVCAR3 종양 모델에서 평가하였다. 100 - 200 mm3 범위의 확립된 OVCAR3 종양을 갖는 동물을 단일 용량의 2.5 또는 5 mg/kg의 ADC 분자 4로 처리하였다. 도 22a 및 22b는 OVCAR3 종양 성장 및 비히클 대조군 처리된 종양의 평균이 >1500 mm3에 도달했을 때인 처리 후 31일에서의 최종 종양 크기에 대한 처리의 효과를 보여준다. 2.5 mg/kg ADC 분자 4의 처리는 처리 후 약 12일까지 종양 정체를 초래한 반면, 5 mg/kg ADC 분자 4는 처리 후 20일 경에 관찰되는 재성장으로 종양 퇴행을 유도하였다(도 22a). 31일째의 최종 종양 크기를 분석한 결과는, 2.5 및 5 mg/kg의 ADC 분자 4의 처리 모두가 비히클 대조군과 비교하여 각각 60% 및 89% 종양 성장 억제(TGI)를 나타내며 상당히 효과적임을 나타내었다(도 22b).
실시예 23: 자궁내막 환자로부터 유래된 이종이식 모델에서의 ADC 변이체의 효능
FolRα에 대한 바이오틴화된(biotinylated) 마우스 단일클론 항체를 사용한 이종이식 조직의 면역조직화학 분석으로 자궁내막암 환자 유래의 이종 이식(PDX) 모델에서 FolRα 발현 수준을 평가하였다. ADC 분자 4의 효능은 이들 PDX 모델의 서브세트에서 평가하였으며, 음성(negative), 낮은(+), 중간(++) 및 높은(+++) FolRα 발현을 가지는 모델을 포함하였다. 확립된(~ 100-200 mm3) PDX 종양을 갖는 동물은, 군 평균이 >1,000 mm3 이거나, 또는 처리 후 45일째까지, 정맥 내(IV) 주사를 통해 매주 10 mg/kg ADC 분자 4를 받거나(n = 3), 처리되지 않았다(대조군, n=2-3). 처리 후 14일 전에 종양이 1,000 mm3에 도달하였다면, 종료점을 2,000 mm3으로 연장하였다.
통계적으로 유의한 효능이 시험된 FolRα 양성 모델의 약 50%에서 관찰되었고, 종양 성장 억제(TGI)는 대략 50% 내지 100% 초과(이는 처리 시작 시 종양 크기 미만의 퇴행을 나타낸다)의 범위를 보였다. 한편, 음성 FolRα 발현을 갖는 모든 PDX 모델에서 유의한 활성이 관찰되지 않았다. ADC 분자 4의 항-종양 활성의 정도는 FolRα 발현 수준과 긍정적인 상관 관계가 있는 것으로 나타났다(예를 들어, FolRα 수준이 높은 PDX 종양은 ADC 분자 4 처리에 대한 반응에서 더 높은 TGI를 나타냄). 도시된 데이터(도 23)는 효능을 나타내는 일부 모델을 대표하는 것이다: (도 23a) FolRα-음성 발현을 갖는 PDX 모델; (도 23b) FolRα+ 발현을 갖는 PDX 모델; (도 23c 및 도 23d) FolRα++ 발현을 갖는 PDX 모델; (도 23e 및 도 23f) FolRα+++ 발현을 갖는 PDX 모델. TGI 백분율(대조군 종양의 마지막 날에 결정) 및 상응하는 p 값이 그래프에 표시되어 있다. TGI의 통계 분석은 짝이 없는 t 테스트(unpaired t test)를 사용하여 수행하였다. 5% 미만의 확률(p <0.05)을 유의한 것으로 간주하였다. 모든 그래프는 평균±SEM으로 표시된다.
실시예 24: 아벨루맙(avelumab)과의 병용 치료에서의 ADC 변이체의 효능
PD-L1 억제제인 아벨루맙(임상 등급)과 조합된 ADC 분자 4의 효능을 확립된 MC38-FolRα 종양을 갖는 동물에서 평가하였다. 결과는 도 24 및 25에 도시되어 있다. 도 24a 및 25a는 지시된 용량의 ADC 분자 4, 아벨루맙 또는 이 둘의 조합에 반응한 MC38-hFolRα 종양 성장 곡선을 도시한다. IACUC 프로토콜에 기초한 종양 크기 제한에 도달하였기 때문에, 단일 작용제 처리 군에서의 동물의 >50%가 안락사될 때까지의 성장 곡선을 나타내었다. 도 24b는 대조군 종양의 평균이 > 1,200 mm3일 때인 12일째에의 개별 종양 크기의 산점도(scatter plot)이다. 비히클 대조군과의 비교를 위한 통계 분석은 Dunnett의 다중 비교 테스트와 함께 일원(one-way) ANOVA를 사용하여 수행하였다. 5% 미만의 확률(p <0.05)을 유의한 것으로 간주하였다. 도 25b는 지시된 용량의 ADC 분자 4, 아벨루맙 또는 이 둘의 조합으로의 처리에 반응하여 생존한 동물의 분율을 나타내는 카플란-마이어 곡선(Kaplan-Meier curve)이다. 모든 그래프는 평균 또는 개별 값 ± SEM으로 표시되어 있다.
도 24에 도시된 바와 같이, 두 용량 모두(IV 주사를 통한 1회 10 mg/kg 또는 15 mg/kg)의 단일 작용제 ADC 분자 4 또는 아벨루맙(복강 내 q3dx3 투여)은 초기에 약 7일까지 종양 정체를 초래한 반면, 병용 치료는 종양 퇴행을 유도하였다(도 24a). 12일째의 종양 크기의 분석은 비히클 대조군과 비교하여 모든 처리 군에서 종양 성장의 유의한 억제를 보여주었다(도 24b). 지속적인 모니터링은 15마리 동물 중 14마리에서의 완전한 퇴행(예를 들어, 명백한(palpable) 종양이 없음)에 의해 입증된 바와 같이 아벨루맙과 조합된 ADC 분자 4가 단일 작용제 단독과 비교하여 항-종양 활성을 현저하게 향상시켰음을 보여주었다(도 24b).
도 25에 나타낸 바와 같이, 10 mg/kg ADC 분자 4 + 아벨루맙 군에서의 한 동물에서 종양 재성장이 관찰되었고, 최대 종양 크기에 도달하여 59일에 안락사하였다(도 25a). 또한, 정상 체중 증가 및 처리 후 112일까지 종양 재성장 없이 (단일 작용제보다 3-4배 긴 중간 생존(median survival)에 해당함), 건강한 동물의 상당히 연장된 생존에 기초하여, 병용 치료는 치료 효과 또는 완전한 완화를 보여주었다(도 25b).
실시예 25: SCID 베이지 마우스에서의 ADC 변이체의 약동학적 특성
KB 및 Igrov1 종양 모델에서의 우수한 효능을 나타내는 후보 FolRα ADC 변이체의 비-구획적(non-compartmental) 약동학적 파라미터를 비-종양을 포함하는 SCID 베이지 마우스에서 평가하였다. 단일 5 mg/kg IV 볼러스(bolus)를 투여하고, 샘플링하고, 상이한 마우스로부터 수집하여 약동학(PK) 파라미터에 대한 시점(time-point)을 얻었다. FolRα ADC 변이체는 뮤린(murine) FolRα에 결합하지 않으므로, 항원-매개 PK 효과는 예상되지 않는다. 시험된 대상과 결과 요약이 표 23에 나타나있다.
SCID 베이지 마우스에서의 FolRα ADC 변이체의 약동학적 파라미터
파라미터 단위 ADC 분자 4 ADC 분자 20 ADC 분자 21
용량 mg/kg 5 5 5
연구기간 일 21 21 21
T1/2 일 6.36 5.48 7.59
C0 μg/mL 122 125 115
Cmax ± SE μg/mL 118 ± 5 123 ± 10 113 ± 4
AUC(0-all) ± SEM 일* μg/mL 476 ± 22 543 ± 22 447 ± 8
AUC(0-∞) 일* μg/mL 523 580 510
CL mL/일/kg 9.57 8.63 9.8
VSS mL/kg 79.7 62.2 95.2
제거 반감기(elimination half-life, T1/2)는 농도-시간 곡선의 로그-선형 플롯의 회귀 분석으로부터 결정하였다. 구체적으로, ADC 분자 4의 T1/2, CL 및 Vss는 각각 6.36, 9.57 및 79.7이었다. 또한, ADC 분자 4에 대한 Cmax는 118 ± 5 μg/mL인 것으로 측정되었다.
일반적으로, 시험된 모든 FolRα ADC 변이체의 약동학적 특성은 유사하였고, 유사한 PK 프로파일 값을 나타냈다(도 26). 또한, 모든 시험 물품의 뮤린 약동학적 프로파일은 다른 FDA-승인된 단일클론 IgG 항체의 것과 유사한 PK 프로파일을 나타냈다.
실시예 26: 시노몰구스 원숭이에서의 ADC 리드 항체의 약동학적 특성
반복 용량 연구에서 K42/Y180 접합 위치를 갖는 항체 1848-B10 및 1848-H01의 비-구획적 약동학(PK) 파라미터를 시노몰구스 원숭이(각 항체 용량에 대해 n=3)에서 평가하였다. 두 10mg/kg IV 용량을 1일 및 15일에 투여하고, 시료를 분석하여 PK 파라미터 및 항-약물 항체(ADA) 반응을 결정하였다. 이들 2개의 항체는 인간 표적과 유사한 친화도로 사이노(cyno) FolRα에 결합하므로, 항원-매개 PK 효과가 예상될 것이다. 표 24에 요약된 바와 같이, 두 항체에 대한 PK 프로파일은 유사하다.
시노몰구스 원숭이에서의 리드 항-FolRα 항체의 약동학적 파라미터
치료 말단
t 1/2( Terminal t1/2) 		C 0 AUC (0-last) AUC (0-∞) 제거 V SS
(일) (μg/mL) (일* μg/mL) (일* μg/mL) (mL/일/kg) (mL/kg)
1848-B10, K42/Y180
(용량 1)		 평균 9.73 263 1100 1700 6.02 78.8
SE 1.01 8 95 171 0.59 8.4
1848-B10, K42/Y180
(용량 2)		 평균 13.1 241 1670 2110 4.74 83.2
SE 2.3 14 120 40 0.09 15.5
1848-H01, K42/Y180
(용량 1)		 평균 6.54 267 1010 1310 7.83 67.3
SE 0.51 8 60 130 0.83 2.0
1848-H01, K42/Y180
(용량 2)		 평균 8.08 220 1370 1530 6.60 71.3
SE 2.51 25 30 110 0.47 12.1
항체 1848-H01(K42/Y180)에 대한 평균 약동학적 파라미터는 용량 1 및 2 후에 유사하였다. 용량 1 및 2 후의 평균 혈장 제거율은 각각 7.83 및 6.60 mL/일/kg이고, 분포 부피는 각각 67 및 71 mL/kg이었다. 용량 1 및 2에 대한 평균 말단 반감기는 각각 6.5 및 8.0일이었다. 1848-B10(K42/Y180)에 대한 평균 약동학적 파라미터는 용량 1 및 용량 2 후에 유사하였다. 용량 1 및 2 후의 혈장 제거율은 각각 6.02 및 4.74 mL/일/kg이었다. 용량 1 및 2에 대한 평균 말단 반감기 값은 각각 9.7일 및 13일이었다. 분포 부피(Distribution volume)는 대략 80 mL/kg이었다.
처리된 동물로부터의 혈청 시료를 또한 항-약물 항체의 개발을 위해 분석하였다(데이터는 나타내지 않음). ADA 분석은 두 항체 모두에 대해 15일(1차 투여 후)에 유의한 반응을 보이지 않았지만, 28일 및 43일(15일에 2 차 투여 후)에 몇몇 동물에서 ADA가 검출되었다.
실시예 27: 시노몰구스 원숭이에서의 ADC 후보의 약동학적 분석
암컷 시노몰구스 원숭이에게 1일 및 22일에 1, 3, 10 및 30 mg/kg의 용량으로 비히클-대조군 또는 ADC 분자 4를 IV 서방성 볼러스 용량(IV slow bolus dose)으로 투여하였고(n=3/군), 43일까지 관찰하였다. 독성역학 프로파일 평가(toxicokinetic profile evaluation)(총 항체, ADC 및 유리 약물 (I) 이화대사산물)를 위해 모든 군으로부터 여러 시점에서 혈청 및 혈장을 수집하였다. 독성역학 분석은 ADC의 순환 수준, 총 항체 및 유리 약물 (I)을 평가함으로써 모든 용량에서 ADC 분자 4의 노출을 확인하였다. ADC, 총 항체 및 유리 약물 (I)의 평균 Cmax 및 AUC 값은 대략적인 용량 비례 방식으로 ADC 분자 4의 용량 수준의 증가에 따라 증가하였으며, 일반적으로 1일 및 22일에 유사하였다. ADC의 반감기(T1/2)는 1.7일 내지 2일 초과의 범위이고, Cmax는 투여량에 따라 29-560㎍/mL의 범위였다.
실시예 28: ADC 후보로부터 방출된 이화대사산물(catabolite) 확인
본원에 기재된 항-FolRα ADC는 엔도솜 또는 리소좀 내에서 가공되어 대사산물인 유리 약물 (I)의 방출을 초래하여 주변 세포에 침투하여 방관자 활성(bystander activity)을 유발할 수 있는 것으로 예측된다. 접합체 P 및 Q로부터 방출된 유리 약물은 하기에 나타낸 구조(I)의 화합물일 것으로 예측된다:
Figure pct00108
(I)
유리 약물 (I)의 생성은 ADC 분자 1 및 ADC 분자 17로 처리된 배양된 세포(미도시) 및 투여 후 상이한 시점에서 수확된 종양으로 Igrov1 종양에서 확인되었다. 종양을 균질화하고 아세토니트릴에서 추출하였고, 용매 추출 분획을 LC/MS로 분석하였다. ADC 분자 1 및 ADC 분자 17로 처리된 동물에서, 이화대사산물 C1은 종양 시료에서 발견되었지만 처리된 마우스의 혈장에서는 발견되지 않았다(도 27). C1의 LC/MS 프로파일은 예측된 이화대사산물 유리 약물 (I)의 프로파일과 일치하였고, 그 구조는 질량 분광분석계 분석에 의해 확인되었다(미도시). 유리 약물 (I)은 시험한 세포주에 따라 0.5-20 nM 범위의 EC50을 나타내며, 시험관 내에서 세포 독성 활성을 갖는 것으로 나타났다(표 26, 모든 세포주에 대한 데이터가 제시되지는 않음).
실시예 29: ADC 후보의 생체 내 안정성
ADC 분자 4의 생체 내 안정성을, 5mg/kg의 단일 용량의 ADC 후 마우스의 누드 계통에서 측정하였다. 다양한 시점에서 혈장을 수집하고 ELISA로 총 IgG를 분석하였다. 친화성 포획에 이어 LC-MS로 순환 ADC의 DAR 분석을 측정하였다. 데이터는 DAR 값이 연구과정 동안 변하지 않음을 보여준다(도 28). 관찰된 분해 피크는 또한 실행하는 동안 변하지 않으며 본래의 스톡에서 볼 수 있는 것과 비슷한 양으로 존재한다.
실시예 30: 혈장에서의 ADC 후보의 안정성
ADC 분자 4 및 20의 안정성을 시노몰구스 및 인간 혈장에서 시험하여 2개의 링커-약물, 접합체 P 및 Q의 안정성을 비교하였다. 이들 ADC를 PBS, 인간 및 시노몰구스 혈장에서 50 μg/mL로 이중(duplicate)으로 인큐베이션하였다. 시료를 60분, 1일, 3일, 7일, 14일 및 21일의 시점 동안 인큐베이션하였다. ELISA에 의한 총 IgG 및 친화성 포획 및 LC-MS를 갖는 ADC의 DAR 분석을 사용하여 분자의 안정성을 평가하였다. 도 29에 나타낸 데이터는 ADC 분자 4 및 20의 시험관 내 안정성이 인간 및 사이노(cyno) 혈장 둘 다에서 유사하며, DAR4는 21일까지 유지됨을 보여준다. 두 분자는 또한 항체의 C-말단에서인 것으로 예상되는, 절단(clipping)의 발생을 보였으며, 이는 인큐베이션 후 1일부터 관찰되었다. 이러한 절단은 중쇄의 C-말단의 2개의 리신 잔기의 절단(cleavage)일 가능성이 높고 분자의 안정성 또는 활성에 영향을 미치지 않을 가능성이 높다. IgG 분자의 CHO 생산 동안 유사한 절단이 일반적으로 관찰된다.
실시예 31: ADC 후보와 비교기 ADC(comparator ADC)의 비교
본원에 기재된 ADC 후보의 비교기는 IMGN853이다. IMGN853(미르베툭시맙 소라브탄신, mirvetuximab soravtansine)은 절단성(술포-SPDB) 링커를 통해 튜불린-붕괴 마이탄시노이드, DM4에 연결된 FolRα-결합 항체를 함유하는 항체-약물 접합체이다. 항체 및 링커 성분의 선택을 포함한 IMGN853의 설계는 난소 및 비소세포 폐암 환자의 종양 시료에서의 FolRα 발현 수준을 대표하는, FolRα 발현 수준을 갖는 전임상 모델에서의 항-종양 활성의 최적화에 기초하였다. 비록 IMGN853이 이의 화학적 성질을 기반으로 임상에서 유망해 보이지만, 분자의 안정성, 안전성 및 활성에 영향을 미치는 몇몇 잠재적인 부채(potential liabilities)가 있을 수 있다. 따라서, IMGN853 대체물(surrogate)(ADC 분자 21) 및 ADC 분자 4의 특성 및 전임상 효과를 평가하기 위한 분석이 하기에 기재되어 있다.
IMGN853과 비교하여 ADC 분자 4의 특이성을 평가하기 위해, ADC 분자 4의 세포 독성 활성을 IMGN853에 대해 매우 근접한 대체물(closely-approximating surrogate)과 비교하였다. 상기 대체물을 CHO 세포에서 일시적으로 발현시키고 술포-SPDB-DM4에 접합시켜 ADC 분자 21을 생성하였다. 양성 FolRα 발현인 세포(Igrov1 및 OVCAR3) 및 FolRα 발현에 대해 음성인 세포(A549)에서 경쟁자로서 과량의 비-접합된 "네이키드(naked)" 항체의 존재 하에 두 ADC 분자의 세포 독성 활성을 비교하였다. ADC 분자 4의 경우, Igrov1 세포에 대한 세포 사멸 활성이 비-접합 항체의 존재 하에서 약 800 배 감소하여(0.053 nM의 EC50에서 33 nM보다 큰 EC50으로), ADC 분자 4의 세포 사멸 활성이 세포 표면 상의 FolRα 항원의 존재에 특이적임을 나타내었다. 이는 FolRα 항원에 대한 결합에 대해 네이키드 항체가 ADC와 경쟁하기 때문이다. 네이키드 항체의 첨가는 Igrov1 세포에서 EC50을 오직 약 3배만큼 이동시켰기 때문에, ADC 분자 21의 세포 사멸 활성은 세포 표면상의 FolRα 항원의 존재에 완전히 의존하지는 않는다. OVCAR3 세포에서도 유사한 결과가 관찰되었다(도 30a, 30b). FolRα 음성 A549 세포에서, 강력한 비특이적 세포 사멸이 ADC 분자 21에 대해 관찰되었지만, 비특이적 세포 사멸은 ADC 분자 4에 대해서는 관찰되지 않았다(도 30c). 이들 데이터에 기초하여, ADC 분자 4는 FolRα 양성 세포에서만 강력하고 특이적인 세포 사멸을 나타내는 반면, ADC 분자 21은 FolRα 항원에 대한 ADC 결합과 관련이 없는 비특이적 세포 사멸을 나타낸다는 결론을 내릴 수 있다. 결과는 표 25에 요약되어 있다.
FolRα 양성 및 음성 세포에서의 ADC 분자 4 및 ADC 분자 21의 특이적 세포 독성 활성
시험한 시료 Igrov1 OVCAR3 A549
EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%)
ADC 분자 4 0.053 66 0.58 53 NK NK
ADC 분자 4 + 0.5uM 1848-H01 >33 NC >33 NC NK NK
ADC 분자 21 3.9 87 7.9 100 7.4 79
ADC 분자 21 + 0.5uM Mov19 ~ 11 80 10 99 7 81
NC = 계산 불가능
NK = 사멸 없음
ADC 분자 4는 FolRα-양성 Igrov1 세포에 대한 특이적 세포 사멸 활성을 가졌지만, A549 FolRα- 음성 세포에 대해서는 어떠한 활성도 갖지 않았다. 대조적으로, ADC 분자 21은 음성- 및 양성-FolRα 세포주 모두에 대해 세포 독성 활성을 가졌으며, 이는 배양 및 생체 내에서의 환원 조건 하에서의 술포-SPDB 링커의 잠재적 불안정성에 의해 야기될 수 있는, 혹은 세포 내로의 ADC의 음세포작용(pinocytosis)으로 인한 특이성의 결여를 시사한다. ADC 분자 4 및 ADC 분자 21로부터 방출된 유리 약물은 각각 구조(I) 및(II)의 화합물이며, 이는 하기에 예시되어 있다:
Figure pct00109
(I)
Figure pct00110
(II)
시험관 내 세포 독성 연구에서, 방출된 유리 약물 (I) 및 (II)는 유사한 세포 독성 활성을 가졌다(표 26). 이 연구에서 한 가지 중요한 관찰은 ADC 분자 4가 이에 접합된 이론적으로 4개의 유리 약물 모이어티 (I)보다 10배 더 강력하다는 것인데, 이는 상기 접합체가 유리 약물 (I)보다 표적 세포에 대해 높은 수준의 특이적 살해를 유발한다는 것을 나타낸다.
Igrov1 및 A549 세포에서의 세포 독성 활성
분자 Igrov1 A549
EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%)
ADC 분자 4 0.06 70 NK NK
ADC 분자 21 4.4* 85 9* 71
유리 약물 (I) 2.4 92 11 81
유리 약물 (II) 4.9 90 7.7 81
* 불완전 적정에 따른 추정 EC50
NC = 계산 불가능
NK = 사멸 없음
유리 약물 (I)의 약동학적 프로파일을 평가하기 위해, 암컷 스프라그-돌리 래트(Sprague-Dawley rats, 평균 체중 250g)에 유치 목정맥 카테터(indwelling jugular vein catheter)를 통해 IV 볼러스 투여(N = 용량 수준 당 3 마리의 동물)로 0.4mg/kg 또는 1mg/kg 용량을 제공하였다. 투여 후 0, 0.83, 1, 2, 8, 24, 32, 48 및 72 시간에 혈액 시료를 수집하였다. 유리 약물 (I) 및 (II)의 수준을 LC-MS/MS로 측정하고 비-구획적 약동학적 분석을 Phoenix WinNonlin 버전 6.4(Pharsight Corporation)를 사용하여 수행하였다. 표 27은 이 연구에서 수집한 PK 데이터를 제공한다. 유리 약물 (I)의 PK는 (I)의 농도가 2 시간에서 8 시간으로 증가한 이후에 검출할 수 없었기 때문에 추정될 수 없었다. 이 연구의 결과는 투여 후 24 시간에서 (I)를 검출할 수 없기 때문에(데이터는 나타내지 않음), 유리 약물 (I)의 제거(clearance)는 유리 약물 (II) 보다 빠르다는 것을 시사한다. 또한, 2회 용량의 유리 약물 (I)의 투여는 동물의 체중에 영향을 미치지 않는 반면, 0.4 mg/kg의 유리 약물 (II)로 처리시 점진적인 체중 감소가 관찰되었다(도 31).
유리 약물 (I) 및(II)에 대한 약동학적 데이터
화합물 ID 용량 수준 말단 t1/2(hr) Cmax ± SE(ng/mL) C0(ng/mL) AUC0-last ± SE(hr*ng/mL) AUC0-inf(hr*ng/mL) 제거(L/hr/kg) VSS(L/kg)
유리 약물 (I) 0.1 mg/kg 데이터 불충분 5.82 ± 0.69 6.81 11.0 ± 2.1 데이터 불충분 데이터 불충분 데이터 불충분
유리 약물 (I) 0.4 mg/kg 데이터 불충분 12.8 ± 2.1 15.5 23.9 ± 2.6 데이터 불충분 데이터 불충분 데이터 불충분
유리 약물 (II) 0.1 mg/kg 22.4 9.31 ± 2.19 10.7 96.9 ± 11.0 129 0.775 15.8
유리 약물 (II) 0.4 mg/kg 44.3 53.3 ± 19 62.5 211 ± 70 242 1.66 44.1
표 28은 ADC 분자 4 및 이의 대사산물인 유리 약물 (I)의 속성을 요약 한 것이다.
ADC 분자 4 및 유리 약물 (I)의 속성
속성/특성 ADC 분자 4에 대한 결과
DAR 분석을 통한 마우스에서 ADC 분자 4의 PK T1/2: 6.38 일;
제거율(Clearance rate) ~ 9.5 mL/kg/일;
21일까지 DAR4 유지
DAR 분석을 통한 인간 및 사이노 혈장에서의 ADC 분자 4의 안정성 21일까지 DAR4 유지
랫트에서의 유리 약물 (I) 대 유리 약물 (II)의 PK 유리 약물 (I)은 (II)보다 제거(clearance)가 빠름
활성의 특이성 ADC 분자 4는 FolRα을 발현하지 않는 세포주에서는 비활성임
실시예 32: ADC 후보 대 비교기 ADC에서의 약물 연결의 안정성 비교
ADC 분자 4 및 비교기 ADC 분자 21의 안정성을 시노몰구스 원숭이 및 인간 혈장 및 PBS에서 평가한 후, 방출된 이화대사산물인 유리 약물 (I) 및(II)를 각각 정량화하였다(실시예 29 참고). 도 32에 요약된 데이터에 기초하면, ADC 분자 4에 대한 약물 연결은 ADC 분자 21에 대한 것보다 더 안정한 것으로 보인다. ADC 분자 21은 인간 및 사이노 혈장에서 빠르게 절단되어 혈장 첨가 후 15-30분 내에 유리 약물 (II)이 검출되는 것으로 보인다. 그리고, 유리 약물 (II)은 시간이 지남에 따라 더 많은 대사를 경험하는 것으로 보인다. 대조적으로, 유리 약물 (I)은 ADC 분자 4를 혈장에 첨가한 후 15-30 분 내에 검출되지 않는다. 유리 약물 (I)의 수준은 혈장에서 4일 동안 인큐베이션하는 동안 매우 서서히 증가하지만, PBS에서는 그렇지 않다. 이러한 점은 혈장에서 보다 안정적인 약물 연결을 시사한다.
실시예 33: 유출 펌프(Efflux pump)에 대한 ADC 이화대사산물의 비교
투과성 당 단백질 1(Permeability glycoprotein 1, PgP; 다중약물 저항성 단백질 1(MDR1)이라고도 함)은 세포 밖으로 이물질을 펌핑하고 다양한 세포 독성 약물의 세포 내 농도를 감소시키는 세포막 단백질이다. PgP 활성은 시험관 내 및 생체 내에서 둔화된 화학요법-유도된 세포 독성을 초래한다. 암 세포는 종종 PgP의 상향 조절(upregulation)로 인해 약물에 내성이 되며, 일부 경우에는 이러한 상향 조절이 약물 자체에 의해 매개된다. 시스플라틴-내성 세포주 모델에서 유리 약물 (I) 및 (II)(실시예 29)의 PgP 민감성을 비교하는 검정을 수행하였다.
유리 약물 (I)이 구체적으로 일부 난소 암 세포주에서 시스플라틴-저항성을 담당하는 P-당 단백질(PgP)의 기질인지 평가하기 위해(Stordal 등, 2012. PLoS One 7(7)), 유리 약물 세포 사멸 활성을 PgP 과발현 MES-SA/MX2 세포주 및 MES-SA 모 세포에서 조사하였다. PgP-과발현 MES-SA/MX2 세포에서 유리 약물 (I), 유리 약물 (II) 및 대조 유리 약물 (MMAE, "III"으로 표시)의 세포 사멸 활성은 MES-SA 모 세포에서의 이들의 활성과 비교하여 상이한 수준으로 감소하였다. 상기 MES-SA/MX2 세포를 PgP 억제제 GF120918(5 μM)로 또한 처리하여 관찰된 세포 사멸 감소가 세포 표면 상의 PgP의 존재에 의한 것인지 여부를 추가로 조사하였다. PgP 억제제의 존재 하에서, 유리 약물의 세포 사멸 활성은 MES-SA 모 세포주와 동일한 수준으로 역전되어, MES-SA/MX2 세포에서의 PgP 과발현이 유리 약물 내성의 주된 이유임을 나타내었다.
MEA-SA/MX2 세포에서 양성 대조군 유리 약물 (III)의 세포 사멸 EC50은 PgP 억제제 GF120918의 존재 및 부재 하에 111 배 변화를 나타내었으며, 이는 유리 약물 (III)이 PgP에 대해 매우 좋은 기질임을 나타냈다. MEA-SA/MX2 세포에서 PgP 억제제의 존재 및 부재 하에 세포 사멸 EC50의 8배 변화 만이 관찰되었다는 사실에 기초할 때, 유리 약물 (I)은 PgP에 대한 불량한 기질이다. PgP에 대한 기질로서, 유리 약물 (II)은 또한 유리 약물 (I)과 비교하여 상대적으로 열악하지만, 세포 사멸 EC50의 17 배 변화가 관찰 되었기 때문에 유출 펌프에 의한 수송에 보다 민감하다(표 29, 도 33).
Igrov1 및 A549 세포에서의 세포 독성 활성
시험 약물 MEA-SA MEA-SA/MX2
GF120918 없음 GF120918 없음 GF120918 EC50 변화(shift)
EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%) EC50(nM) 스판(%)
유리 약물 (I) 6 100 50 100 6.4 99 8
유리 약물 (II) 1.9 100 28 100 1.7 98 17
유리 약물 (III) 0.75 100 111 100 1 99 111
상기 데이터는 유리 약물 (I)이 유리 약물 (II)과 비교하여 유출 펌프에 의한 막을 가로지르는 능동 수송에 더 약한 기질임을 시사한다. 결과적으로, 유리 약물 (I)은 암 세포에서 펌프 아웃(pump out)될 가능성이 적어 독소의 세포 보유력을 향상시키고, 따라서 비교기 ADC 분자 21과 비교하여 ADC 분자 4의 세포 독성을 개선시켰다. PgP 매개 약물 유출(PgP mediated drug efflux)은 ADC에 대한 일반적인 내성 메커니즘이며, 임상에서는 백금제 및 PARP 억제제에 대한 내성의 주요 메커니즘 중 하나이다. 따라서, PgP에 대한 유리 약물 (I)의 불량한 기질능(poor substrate capacity)이 백금-저항성 및 잠재적 PARP-저항성 암을 표적으로 하는 유망한 탄두를 만든다.
실시예 34: 종양 및 혈장에서의 이화대사산물의 축적
ADC 분자 4의 약물-연결(drug-linkage)은 비교기 ADC 분자 21의 것보다 더 안정한 것으로 보이지만, 종양 세포 내에서 ADC 분자 4로부터의 유리 약물 (I)의 효과적인 방출은 그의 세포 독성에 중요하다. ADC 분자 4 및 21로부터의 탄두 방출을 평가하기 위해, 상기 2개의 ADC 분자로 처리된 Igrov1 종양을 갖는 마우스에서 유리 약물 (I) 및 (II)의 종양 및 혈장 수준을 측정하였다. 도 34에 나타낸 바와 같이, ADC 분자 4로부터의 유리 약물 (I)의 방출 및 종양 축적은 ADC 분자 21로부터의 유리 약물 (II)의 방출 및 종양 축적과 유사하거나 약간 더 우수하였다. 이 데이터는 두 탄두의 유사한 세포 독성과 함께 ADC 분자 4의 세포 독성 활성이 적어도 비교기 ADC 분자 21의 세포 독성 활성과 유사할 것이라는 것을 시사한다.
요약하면, 실시예 29 내지 32에 기술된 데이터는 확장된 치료 지수(TI)가 방출된 탄두의 속성(유리 약물 (I) 대 유리 약물 (II)) 및 ADC 분자 4 전체의 구조(architecture) 모두에서 기인할 수 있음을 시사한다. 유리 약물 (I) 및 (II)는 유리 약물로서 투여될 때 시험관 내 세포 독성 활성에서 유사할 뿐만 아니라, ADC로서 투여될 때 종양에서의 축적 역시 유사하다. 유리 약물 (II) 대비 유리 약물 (I)의 훨씬 약한 PgP 기질 능력(substrate capability)은 종양이 유출에 기초하여 내성을 발달시킴에 따라 ADC 분자 4가 원래의 활성의 대부분을 유지할 것임을 예측한다. ADC 분자 4의 프로테아제-절단성 방출 메커니즘(protease-cleavable release mechanism)은 비교기 ADC 분자 21의 이황화 방출 메커니즘보다 더 큰 안정성 및 종양 특이성을 갖는다. 이는 FolRα를 발현하는 세포에 대해 동시에 더 높은 특이성을 부여한다. 더 빠른 제거(clearance) 및 이화대사산물(I)의 더 높은 내약성과 함께 ADC 분자 4의 더 큰 안정성은 또한 ADC 분자 4에 대해 개선된 안전성 프로파일을 부여한다. 이 모든 것은 ADC 분자 4가 ADC 분자 21 대체물(surrogate ADC Molecule 21)에서 측정된 비교기 ADC IMGN853보다 더 높은 TI를 가질 수 있음을 나타낸다.
실시예 35: 후보 항체로의 돌연변이 도입
V262E 돌연변이를 항체 변이체 1848-H01(Y180/F404)에 도입하여 이 돌연변이가 변이체의 수율을 증가시킬지 여부를 조사하였다. V262E 돌연변이의 도입은 정제된 단백질의 품질의 변화없이(데이터는 나타내지 않음) ProA 정제 후 수율에서 약 70% 증가(170mg/L의 모 역가(parent titer)와 비교하여 350mg/L)를 가져왔다. 접합체 P(실시예 11) 및 접합체 Q(실시예 15)에 접합된 V262E 돌연변이 단백질의 특성을 ADC의 접합 효율 및 시험관 내 활성에 대해 모접합체(parental conjugate) ADC 분자 4와 비교하였다. 표 30에 나타낸 바와 같이, 접합 효율 및 DAR은 유사하였지만, V262E 돌연변이의 도입은 Igrov1 세포에서의 P 접합체의 시험관 내 세포독성 활성을 약간 감소시켰고, Igrov1 세포에서의 Q 접합체의 시험관 내 세포독성 활성은 크게 감소시켰다.
V262E 돌연변이가 있거나 없는 ADC 분자의 비교
ADC 분자 항체 접합체 접합 위치(들) DAR 접합된 % 세포 사멸(Igrov1)
EC50(nM) 스판(%)
4 1848-H01 P Y180/F404 3.73 93% 0.083 80
20 1848-H01 Q Y180/F404 3.81 95% 0.13 70
23 1848-H01 V262E P Y180/F404 3.57 89% 0.088 72
24 1848-H01 V262E Q Y180/F404 3.76 94% 0.19 56
ADC 분자 4에 대한 P 접합체의 약동학적 특성 및 생체 내 안정성 및 생체 내 효능의 비교는 ADC의 PK가 두 가지 버전 사이에서 유사하였던 반면(표 31, 도 36), 돌연변이된 P 접합체(ADC 분자 23)의 생체 내 활성은 ADC 분자 4의 것보다 약간 낮았음을 보여주었다(도 35a). 21일에서의 종양 크기의 통계적 분석은 ADC 분자 4로의 처리 만이 비히클에 비해 상당히 작은 종양을 초래하였지만, ADC 분자 4 및 ADC 분자 23 군의 종양 크기는 통계적으로 서로 다르지 않았다는 것을 보여주었다(도 35b). 이에 기초할 때, ADC 분자 23은 FolRα의 표적화를 위한 개발 및 추가 조사를 위한 대체 ADC로 적합하다.
V262E가 있거나 없는 ADC 분자의 약동학적 특성
ADC 분자 SP 항체 접합체 접합 위치(들) 말단 t1/2(hr) C0(μg/mL) Cmax ± SE(μg/mL) AUC0-last ± SE(일 * μg/mL) AUC0-inf ± SE(일 * μg/mL) 제거(mL/일/kg) Vss(mL/kg)
4 8193 1848-H01 P Y180/F404 6.36 122 118 ± 5 476 ± 22 523 9.57 79.7
23 8675 1848-H01 V262E P Y180/F404 5.70 115 113 ± 11 599 ± 34 636 7.87 60.5
실시예 36: 서열
표 32는 본원에 언급된 서열을 제공한다.
Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
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Figure pct00118
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Figure pct00121
Figure pct00122
Figure pct00123
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
등가물(Equivalents)
전술한 개시는 독립적인 유용성을 갖는 다수의 별개의 발명을 포함할 수 있다. 이들 각각의 본 발명이 바람직한 형태(들)로 개시되었지만, 본원에 개시되고 예시된 이의 특정 구체예(embodiment)는 수많은 변형이 가능하기 때문에 제한적인 의미로 고려되지 않아야 한다. 본 발명의 주제는 본원에 개시된 다양한 요소, 특징, 기능 및/또는 특성의 모든 신규하고 명백하지 않은 조합 및 하위 조합을 포함한다. 하기 청구범위는 특히 신규하고 명백하지 않은 것으로 간주되는 특정 조합 및 하위 조합을 지시한다. 특징, 기능, 요소 및/또는 특성의 다른 조합 및 하위 조합으로 구현된 발명은 본 출원, 본 출원을 우선권 주장하는 출원, 또는 관련 출원에서 청구될 수 있다. 다른 발명 또는 동일한 발명에 관한 것이든, 그리고 원래의 청구 범위와 비교하여 범위가 더 넓거나, 좁거나, 동일하거나, 범위가 다른 그러한 청구범위는 또한 본 개시의 발명의 주제 내에 포함된 것으로 간주된다.
본 명세서 또는 도면에 기술된 임의의 구체예의 하나 이상의 특징은 본 발명의 범위를 벗어남이 없이 본 명세서 또는 도면에 기술된 임의의 다른 구체예의 하나 이상의 특징과 조합될 수 있다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고로 포함된 것으로 표시한 것처럼 본원에 참고로 포함된다. 전술한 발명은 이해의 명확성을 위해 예시 및 실시예로서 일부 상세하게 설명되었지만, 본 발명의 교시에 비추어 볼 때 첨부된 청구 범위의 사상이나 범위를 벗어나지 않으면서 특정한 변경 및 수정이 가능하다는 것이 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
<110> SUTRO BIOPHARMA, INC. <120> ANTI- FOLATE RECEPTOR ALPHA ANTIBODY CONJUGATES AND THEIR USES <130> IPA200286-US <150> US 62/560,064 <151> 2017-09-18 <160> 382 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 257 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Human folate receptor alpha (hFOLR1) <400> 1 Met Ala Gln Arg Met Thr Thr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Val Trp Val 1 5 10 15 Ala Val Val Gly Glu Ala Gln Thr Arg Ile Ala Trp Ala Arg Thr Glu 20 25 30 Leu Leu Asn Val Cys Met Asn Ala Lys His His Lys Glu Lys Pro Gly 35 40 45 Pro Glu Asp Lys Leu His Glu Gln Cys Arg Pro Trp Arg Lys Asn Ala 50 55 60 Cys Cys Ser Thr Asn Thr Ser Gln Glu Ala His Lys Asp Val Ser Tyr 65 70 75 80 Leu Tyr Arg Phe Asn Trp Asn His Cys Gly Glu Met Ala Pro Ala Cys 85 90 95 Lys Arg His Phe Ile Gln Asp Thr Cys Leu Tyr Glu Cys Ser Pro Asn 100 105 110 Leu Gly Pro Trp Ile Gln Gln Val Asp Gln Ser Trp Arg Lys Glu Arg 115 120 125 Val Leu Asn Val Pro Leu Cys Lys Glu Asp Cys Glu Gln Trp Trp Glu 130 135 140 Asp Cys Arg Thr Ser Tyr Thr Cys Lys Ser Asn Trp His Lys Gly Trp 145 150 155 160 Asn Trp Thr Ser Gly Phe Asn Lys Cys Ala Val Gly Ala Ala Cys Gln 165 170 175 Pro Phe His Phe Tyr Phe Pro Thr Pro Thr Val Leu Cys Asn Glu Ile 180 185 190 Trp Thr His Ser Tyr Lys Val Ser Asn Tyr Ser Arg Gly Ser Gly Arg 195 200 205 Cys Ile Gln Met Trp Phe Asp Pro Ala Gln Gly Asn Pro Asn Glu Glu 210 215 220 Val Ala Arg Phe Tyr Ala Ala Ala Met Ser Gly Ala Gly Pro Trp Ala 225 230 235 240 Ala Trp Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Leu Leu Trp Leu Leu 245 250 255 Ser <210> 2 <211> 257 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <220> <221> misc_feature <223> Cynomolgus folate receptor alpha <400> 2 Met Ala Gln Arg Met Thr Thr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Val Trp Val 1 5 10 15 Ala Val Val Gly Glu Ala Gln Thr Arg Thr Ala Arg Ala Arg Thr Glu 20 25 30 Leu Leu Asn Val Cys Met Asn Ala Lys His His Lys Glu Lys Pro Gly 35 40 45 Pro Glu Asp Lys Leu His Glu Gln Cys Arg Pro Trp Lys Lys Asn Ala 50 55 60 Cys Cys Ser Thr Asn Thr Ser Gln Glu Ala His Lys Asp 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Met Thr Val Gln Leu Leu Leu Leu Val Met Trp Met 1 5 10 15 Ala Glu Cys Ala Gln Ser Arg Ala Thr Arg Ala Arg Thr Glu Leu Leu 20 25 30 Asn Val Cys Met Asp Ala Lys His His Lys Glu Lys Pro Gly Pro Glu 35 40 45 Asp Asn Leu His Asp Gln Cys Ser Pro Trp Lys Thr Asn Ser Cys Cys 50 55 60 Ser Thr Asn Thr Ser Gln Glu Ala His Lys Asp Ile Ser Tyr Leu Tyr 65 70 75 80 Arg Phe Asn Trp Asn His Cys Gly Thr Met Thr Ser Glu Cys Lys Arg 85 90 95 His Phe Ile Gln Asp Thr Cys Leu Tyr Glu Cys Ser Pro Asn Leu Gly 100 105 110 Pro Trp Ile Gln Gln Val Asp Gln Ser Trp Arg Lys Glu Arg Ile Leu 115 120 125 Asp Val Pro Leu Cys Lys Glu Asp Cys Gln Gln Trp Trp Glu Asp Cys 130 135 140 Gln Ser Ser Phe Thr Cys Lys Ser Asn Trp His Lys Gly Trp Asn Trp 145 150 155 160 Ser Ser Gly His Asn Glu Cys Pro Val Gly Ala Ser Cys His Pro Phe 165 170 175 Thr Phe Tyr Phe Pro Thr Ser Ala Ala Leu Cys Glu Glu Ile Trp Ser 180 185 190 His Ser Tyr Lys Leu Ser Asn Tyr Ser Arg Gly Ser Gly Arg Cys Ile 195 200 205 Gln Met Trp Phe Asp Pro Ala Gln Gly 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His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 465 470 475 480 Leu Ser Pro Gly Lys 485

Claims (54)

  1. 하나 이상의 페이로드(payload) 모이어티에 위치 특이적으로 연결된, 엽산 수용체 알파(FOLR1)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 항체 접합체로서,
    상기 항체는 카밧(Kabat), 코티아(Chothia), 또는 EU 번호 체계에 따른, HC-F404, HC-K121, HC-Y180, HC-F241, HC-221, LC-T22, LC-S7, LC-N152, LC-K42, LC-E161, LC-D170, HC-S136, HC-S25, HC-A40, HC-S119, HC-S190, HC-K222, HC-R19, HC-Y52, 또는 HC-S70로 이루어진 군에서 선택된 위치에서의 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함하는, 항체 접합체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 하나 이상의 비천연 아미노산은 p-아세틸-L-페닐알라닌, O-메틸-L-티로신, -3-(2-나프틸)알라닌, 3-메틸-페닐알라닌, O-4-알릴-L-티로신, 4-프로필-L-티로신, 트리-O-아세틸-GlcNAcβ-세린, L-도파, 플루오르화 페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, p-아지도-L-페닐알라닌, p-아지도-메틸-L-페닐알라닌, 화합물 56, p-아실-L-페닐알라닌, p-벤조일-L-페닐알라닌, L-포스포세린, 포스포노세린, 포스포노티로신, p-요오드-페닐알라닌, p-브로모페닐알라닌, p-아미노-L-페닐알라닌, 이소프로필-L-페닐알라닌, 및 p-프로파질옥시-페닐알라닌으로 이루어진 군에서 선택되는, 항체 접합체.
  3. 제2항에 있어서, 상기 하나 이상의 비천연 아미노산의 잔기가 가수분해적으로 안정한 링커를 통하여 페이로드 모이어티에 연결되는, 항체 접합체.
  4. 제2항에 있어서, 하나 이상의 비천연 아미노산의 잔기가 절단성(cleavable) 링커를 통하여 페이로드 모이어티에 연결되는, 항체 접합체.
  5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비천연 아미노산 잔기가 화합물 (30)의 잔기 또는 화합물 (56)의 잔기인, 항체 접합체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 페이로드 모이어티가 마이탄신(maytansine), 헤미아스텔린(hemiasterlin), 아마니틴(amanitin), 및 오리스타틴(auristatin)으로 이루어진 군에서 선택되는, 항체 접합체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 페이로드 모이어티가 DM1, 헤미아스텔린, 아마니틴, MMAF, 및 MMAE로 이루어진 군에서 선택되는, 항체 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는
    (i) 서열번호: 58 및 117 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 176 및 235 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 294를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (ii) 서열번호: 19 및 78 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 137 및 196 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 255를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (iii) 서열번호: 4 및 63 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 122 및 181 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 240을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (iv) 서열번호: 5 및 64 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 123 및 182 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 241을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (v) 서열번호: 6 및 65 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 124 및 183 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 242를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (vi) 서열번호: 7 및 66 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 125 및 184 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 243을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (vii) 서열번호: 8 및 67 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 126 및 185 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 244를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (viii) 서열번호: 9 및 68 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 127 및 186 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 245를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (ix) 서열번호: 10 및 69 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 128 및 187 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 246을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (x) 서열번호: 11 및 70 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 129 및 188 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 247을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xi) 서열번호: 12 및 71 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 130 및 189 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 248을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xii) 서열번호: 13 및 72 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 131 및 190 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 249를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xiii) 서열번호: 14 및 73 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 132 및 191 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 250을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xiv) 서열번호: 15 및 74 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 133 및 192 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 251을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xv) 서열번호: 16 및 75 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 134 및 193 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 252를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xvi) 서열번호: 17 및 76 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 135 및 194 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 253을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xvii) 서열번호: 18 및 77 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 136 및 195 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 254를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xviii) 서열번호: 20 및 79 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 138 및 197 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 256을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xix) 서열번호: 21 및 80 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 139 및 198 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 257을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xx) 서열번호: 22 및 81 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 140 및 199 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 258을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxi) 서열번호: 23 및 82 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 141 및 200 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 259를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxii) 서열번호: 24 및 83 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 142 및 201 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 260을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxiii) 서열번호: 25 및 84 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 143 및 202 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 261을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxiv) 서열번호: 26 및 85 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 144 및 203 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 262를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxv) 서열번호: 27 및 86 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 145 및 204 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 263을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxvi) 서열번호: 28 및 87 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 146 및 205 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 264를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxvii) 서열번호: 29 및 88 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 147 및 206 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 265를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxviii) 서열번호: 30 및 89 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 148 및 207 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 266을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxix) 서열번호: 31 및 90 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 149 및 208 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 267을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxx) 서열번호: 32 및 91 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 150 및 209 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 268을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxi) 서열번호: 33 및 92 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 151 및 210 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 269를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxii) 서열번호: 34 및 93 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 152 및 211 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 270을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxiii) 서열번호: 35 및 94 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 153 및 212 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 271을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxiv) 서열번호: 36 및 95 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 154 및 213 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 272를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxv) 서열번호: 37 및 96 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 155 및 214 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 273을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxvi) 서열번호: 38 및 97 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 156 및 215 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 274를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxvii) 서열번호: 39 및 98 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 157 및 216 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 275를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxviii) 서열번호: 40 및 99 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 158 및 217 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 276을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xxxix) 서열번호: 41 및 100 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 159 및 218 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 277을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xl) 서열번호: 42 및 101 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 160 및 219 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 278을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xli) 서열번호: 43 및 102 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 161 및 220 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 279를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xlii) 서열번호: 44 및 103 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 162 및 221 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 280을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xliii) 서열번호: 45 및 104 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 163 및 222 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 281을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xliv) 서열번호: 46 및 105 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 164 및 223 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 282를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xlv) 서열번호: 47 및 106 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 165 및 224 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 283을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xlvi) 서열번호: 48 및 107 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 166 및 225 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 284를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xlvii) 서열번호: 49 및 108 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 167 및 226 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 285를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xlviii) 서열번호: 50 및 109 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 168 및 227 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 286을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (xlix) 서열번호: 51 및 110 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 169 및 228 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 287을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (l) 서열번호: 52 및 111 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 170 및 229 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 288을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (li) 서열번호: 53 및 112 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 171 및 230 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 289를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (lii) 서열번호: 54 및 113 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 172 및 231 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 290을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (liii) 서열번호: 55 및 114 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 173 및 232 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 291을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (liv) 서열번호: 56 및 115 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 174 및 233 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 292를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (lv) 서열번호: 57 및 116 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 175 및 234 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 293을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (lvi) 서열번호: 59 및 118 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 177 및 236 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 295를 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (lvii) 서열번호: 60 및 119 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 178 및 237 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 296을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH;
    (lviii) 서열번호: 61 및 120 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 179 및 238 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 297을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH; 또는
    (lix)서열번호: 62 및 121 중 하나를 포함하는 CDR-H1; 서열번호: 180 및 239 중 하나를 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호: 298을 포함하는 CDR-H3를 포함하는 VH
    를 포함하는, 항체 접합체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 (a) 서열번호: 300을 포함하는 CDR-L1, 서열번호: 303을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호: 306을 포함하는 CDR-L3를 포함하는 VL; 또는 (b) 서열번호: 301을 포함하는 CDR-L1, 서열번호: 304를 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호: 307을 포함하는 CDR-L3를 포함하는 VL을 포함하는, 항체 접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는
    (i) VH 영역이 서열번호: 362 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (ii) VH 영역이 서열번호: 323 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (iii) VH 영역이 서열번호: 308 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (iv) VH 영역이 서열번호: 309 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (v) VH 영역이 서열번호: 310 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (vi) VH 영역이 서열번호: 311 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (vii) VH 영역이 서열번호: 312 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (viii) VH 영역이 서열번호: 313 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (ix) VH 영역이 서열번호: 314 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (x) VH 영역이 서열번호: 315 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xi) VH 영역이 서열번호: 316 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xii) VH 영역이 서열번호: 317 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xiii) VH 영역이 서열번호: 318 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xiv) VH 영역이 서열번호: 319 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xv) VH 영역이 서열번호: 320 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xvi) VH 영역이 서열번호: 321 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xvii) VH 영역이 서열번호: 322 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xviii) VH 영역이 서열번호: 324 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xix) VH 영역이 서열번호: 325 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xx) VH 영역이 서열번호: 326 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나, 또는
    (xxi) VH 영역이 서열번호: 327 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxii) VH 영역이 서열번호: 328 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxiii) VH 영역이 서열번호: 329 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxiv) VH 영역이 서열번호: 330 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxv) VH 영역이 서열번호: 331 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxvi) VH 영역이 서열번호: 332 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxvii) VH 영역이 서열번호: 333 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxviii) VH 영역이 서열번호: 334 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxix) VH 영역이 서열번호: 335 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxx) VH 영역이 서열번호: 336 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxi) VH 영역이 서열번호: 337 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxii) VH 영역이 서열번호: 338 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxiii) VH 영역이 서열번호: 339 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxiv) VH 영역이 서열번호: 340 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxv) VH 영역이 서열번호: 341 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxvi) VH 영역이 서열번호: 342 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxvii) VH 영역이 서열번호: 343 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxviii) VH 영역이 서열번호: 344 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xxxix) VH 영역이 서열번호: 345 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xl) VH 영역이 서열번호: 346 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xli) VH 영역이 서열번호: 347 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xlii) VH 영역이 서열번호: 348 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xliii) VH 영역이 서열번호: 349 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xliv) VH 영역이 서열번호: 350 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xlv) VH 영역이 서열번호: 351 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xlvi) VH 영역이 서열번호: 352 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xlvii) VH 영역이 서열번호: 353 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xlviii) VH 영역이 서열번호: 354 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (xlix) VH 영역이 서열번호: 355 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (l) VH 영역이 서열번호: 356 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (li) VH 영역이 서열번호: 357 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (lii) VH 영역이 서열번호: 358 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (liii) VH 영역이 서열번호: 359 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (liv) VH 영역이 서열번호: 360 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (lv) VH 영역이 서열번호: 361 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 367 또는 이의 변이체이거나,
    (lvi) VH 영역이 서열번호: 363 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 368 또는 이의 변이체이거나,
    (lvii) VH 영역이 서열번호: 364 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 368 또는 이의 변이체이거나,
    (lviii) VH 영역이 서열번호: 365 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 369 또는 이의 변이체이거나, 또는
    (lix) VH 영역이 서열번호: 366 또는 이의 변이체이고, VL 영역이 서열번호: 369 또는 이의 변이체인,
    항체 접합체.
  11. 제10항에 있어서, 상기 항체는 카밧(Kabat) 또는 카밧의 EU 번호 체계에 따른, HC-F404, HC-Y180, 및 LC-K42로 이루어진 군에서 선택되는 위치에 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함하는, 항체 접합체.
  12. 제11항에 있어서, 상기 항체는 위치 HC-F404에 비천연 아미노산을 포함하는, 항체 접합체.
  13. 제11항에 있어서, 상기 항체는 위치 HC-F404 및 HC-Y180에 비천연 아미노산을 포함하는, 항체 접합체.
  14. 제11항에 있어서, 상기 항체는 위치 HC-F404 및 LC-K42에 비천연 아미노산을 포함하는, 항체 접합체.
  15. 제11항에 있어서, 상기 항체는 위치 HC-Y180 및 LC-K42에 비천연 아미노산을 포함하는, 항체 접합체.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 비천연 아미노산 중 하나 또는 둘 다가 파라-아지도메틸페닐알라닌 및 p-아지도-메틸-L-페닐알라닌으로 이루어진 군에서 선택되는, 항체 접합체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 접합체는 접합체 P의 구조를 가지는, 항체 접합체:
    Figure pct00127

    여기서, n은 1 내지 6의 정수이다.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 접합체는 접합체 M의 구조를 가지는, 항체 접합체:
    Figure pct00128

    여기서, n은 1 내지 6의 정수이다.
  19. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 접합체는 접합체 Q의 구조를 가지는, 항체 접합체:
    Figure pct00129

    여기서, n은 1 내지 6의 정수이다.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호: 362의 VH 영역 또는 7개 이하의 아미노산 치환을 가지는 이의 변이체; 및 서열번호: 367의 VL 영역 또는 7개 이하의 아미노산 치환을 가지는 이의 변이체를 포함하는, 항체 접합체.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호: 323의 VH 영역 또는 7개 이하의 아미노산 치환을 가지는 이의 변이체; 및 서열번호: 367의 VL 영역 또는 7개 이하의 아미노산 치환을 가지는 이의 변이체를 포함하는, 항체 접합체.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환인, 항체 접합체.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 불변 영역 도메인을 더 포함하는, 항체 접합체.
  24. 제23항에 있어서, 상기 불변 영역은 서열번호: 370, 371, 및 372로부터 선택되는 서열을 포함하는, 항체 접합체.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체인, 항체 접합체.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM인, 항체 접합체.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간화 또는 인간 항체인, 항체 접합체.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 비당화된( aglycosylated), 항체 접합체.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 항체 단편인, 항체 접합체.
  30. 제29항에 있어서, 상기 항체 단편은 Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, scFv(sFv) 단편, 및 scFv-Fc 단편으로부터 선택되는, 항체 접합체.
  31. 제30항에 있어서, 상기 항체는 scFv 단편인, 항체 접합체.
  32. 제31항에 있어서, 상기 scFv 단편은 서열번호: 379-380으로부터 선택되는 서열을 포함하는, 항체 접합체.
  33. 제30항에 있어서, 상기 항체는 scFv-Fc 단편인, 항체 접합체.
  34. 제33항에 있어서, 상기 scFv-Fc 단편은 서열번호: 381 또는 서열번호: 382를 포함하는, 항체 접합체.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 25℃의 온도에서 인간 엽산 수용체와 회합(association)할 때, 약 2.90Х105 M-1Хsec-1 내지 약 9.64Х109 M-1Хsec-1의 ka를 가지는, 항체 접합체.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 25℃의 온도에서 인간 엽산 수용체로부터 해리할 때, 약 2.28Х10-4 sec-1 내지 약 4.82Х101 sec-1 의 kd를 가지는, 항체 접합체.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 25℃의 온도에서 인간 엽산 수용체에 결합될 때, 약 2.26Х10-11 M 내지 약 7.20Х10-9 M의 KD를 가지는, 항체 접합체.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 시노몰구스 엽산 수용체에 특이적으로 결합하는, 항체 접합체.
  39. 제38항에 있어서, 상기 항체는 25℃의 온도에서 시노몰구스 엽산 수용체에 결합될 때, 약 0.19Х10-9 M 내지 약 2.84Х10-9 M의 KD를 가지는, 항체 접합체.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 마우스 엽산 수용체에 특이적으로 결합하는, 항체 접합체.
  41. 제40항에 있어서, 상기 항체는 25℃의 온도에서 마우스 엽산 수용체에 결합될 때, 약 0.5Х10-9 M 내지 약 9.07Х10-8 M의 KD를 가지는, 항체 접합체.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 항체 접합체 및 상기 항체 접합체의 사용 설명서(instructions)를 포함하는, 키트.
  43. 제42항에 있어서, 상기 항체 접합체는 동결건조된, 키트.
  44. 제43항에 있어서, 동결 건조된 항체의 재구성(reconstitution)을 위한 유체를 더 포함하는, 키트.
  45. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 항체 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  46. 유효량의 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 항체 접합체, 또는 제45항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는,
    질병 또는 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 질병 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법.
  47. 유효량의 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 항체 접합체, 또는 제45항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는,
    질병 또는 상태의 진단을 필요로 하는 대상체에서 질병 또는 상태를 진단하는 방법.
  48. 제46항 또는 제47항에 있어서, 질환 또는 상태가 암인, 방법.
  49. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 상태가 유방암인, 방법.
  50. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 상태가 삼중 음성 유방암(triple-negative breast cancer, TNBC)인, 방법.
  51. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 상태가 난소암인, 방법.
  52. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 상태가 폐암인, 방법.
  53. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 상태가 비소세포 폐암(NSCLC)인, 방법.
  54. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 상태가 자궁내막암인, 방법.
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Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3472197A1 (en) 2016-06-15 2019-04-24 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies with engineered ch2 domains, compositions thereof and methods of using the same
KR20200051802A (ko) 2017-09-18 2020-05-13 서트로 바이오파마, 인크. 항-엽산 수용체 알파 항체 접합체 및 이의 용도
US20220047716A1 (en) * 2018-09-17 2022-02-17 Sutro Biopharma, Inc. Combination therapies with anti-folate receptor antibody conjugates
WO2020227105A1 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
CA3134918A1 (en) * 2019-05-03 2020-11-12 John Lee Anti-bcma antibody conjugate, compositions comprising the same, and methods of making and using the same
EP3980080A1 (en) * 2019-06-10 2022-04-13 Sutro Biopharma, Inc. Immunomodulator antibody drug conjugates and uses thereof
US12534465B2 (en) 2019-06-10 2026-01-27 Sutro Biopharma, Inc. 5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamino compounds and antibody conjugates thereof
US20220259202A1 (en) 2019-06-17 2022-08-18 Sutro Biopharma, Inc. 1-(4-(aminomethyl)benzyl)-2-butyl-2h-pyrazolo[3,4-c]quinolin-4-amine derivatives and related compounds as toll-like receptor (tlr) 7/8 agonists, as well as antibody drug conjugates thereof for use in cancer therapy and diagnosis
US12351850B2 (en) 2020-04-30 2025-07-08 Sutro Biopharma, Inc. Methods of producing full-length antibodies using E. coli
BR112022024691A2 (pt) 2020-06-03 2022-12-27 Merck Patent Gmbh Conjugados anticorpo biespecífico - fármaco direcionados a egfr e muc1 e usos dos mesmos
WO2022103983A2 (en) 2020-11-11 2022-05-19 Sutro Biopharma, Inc. Fluorenylmethyloxycarbonyl and fluorenylmethylaminocarbonyl compounds, protein conjugates thereof, and methods for their use
WO2022128716A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Merck Patent Gmbh Pharmaceutical composition comprising a bispecific anti-muc1/egfr antibody-drug conjugate
CN117396231A (zh) 2021-04-30 2024-01-12 新基公司 使用抗BCMA抗体药物缀合物（ADC）与γ分泌酶抑制剂（GSI）的组合的组合疗法
EP4340876A1 (en) 2021-05-19 2024-03-27 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor conjugate combination therapy with bevacizumab
US20240408228A1 (en) 2021-12-01 2024-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor conjugate cancer therapy
MX2024010956A (es) * 2022-03-09 2024-09-17 Astrazeneca Ab Moleculas de union contra fra.
IL314828A (en) * 2022-03-11 2024-10-01 Mablink Bioscience Antibody-drug conjugates and their uses
TW202448517A (zh) * 2023-02-16 2024-12-16 瑞典商阿斯特捷利康公司 用治療性結合分子治療癌症的組合療法
WO2024211306A1 (en) 2023-04-03 2024-10-10 Sutro Biopharma, Inc. Rf1 ko e. coli strains
US12319747B2 (en) 2023-07-03 2025-06-03 Medicovestor, Inc. Methods of using anti-SP17 immunotherapeutics
WO2025080711A1 (en) 2023-10-13 2025-04-17 Sutro Biopharma, Inc. Dual payload antibody drug conjugates
US12364777B2 (en) 2023-10-20 2025-07-22 Medicovestor, Inc. Homodimeric antibodies for use in treating cancers and methods of use
US12116410B1 (en) 2023-12-26 2024-10-15 Medicovestor, Inc. Methods of manufacturing dimeric antibodies
US12240900B1 (en) 2024-02-02 2025-03-04 Medicovestor, Inc. Nucleic acids, vectors, and cells that encode antibodies and other proteins that bind folate receptor alpha
US12258396B1 (en) 2024-02-02 2025-03-25 Medicovestor, Inc. Methods of using immunotherapeutics that bind folate receptor alpha
US12378314B1 (en) 2024-02-02 2025-08-05 Medicovestor, Inc. Proteins that bind folate receptor alpha including fully-human antibodies
WO2025195447A1 (zh) * 2024-03-22 2025-09-25 北京桦冠生物技术有限公司 结合folr1蛋白的抗体、抗体药物偶联物及其用途
WO2025250825A1 (en) 2024-05-30 2025-12-04 Sutro Biopharma, Inc. Anti-trop2 antibodies, compositions comprising anti-trop2 antibodies and methods of making and using anti-trop2 antibodies

Family Cites Families (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4289872A (en) 1979-04-06 1981-09-15 Allied Corporation Macromolecular highly branched homogeneous compound based on lysine units
US4671958A (en) 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4625014A (en) 1984-07-10 1986-11-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cell-delivery agent
US4542225A (en) 1984-08-29 1985-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5229490A (en) 1987-05-06 1993-07-20 The Rockefeller University Multiple antigen peptide system
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
DE68925971T2 (de) 1988-09-23 1996-09-05 Cetus Oncology Corp Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
GB8827305D0 (en) 1988-11-23 1988-12-29 British Bio Technology Compounds
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
JP3571337B2 (ja) 1992-02-11 2004-09-29 セル ジェネシス，インコーポレーテッド 遺伝子標的現象による同型遺伝子接合
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
DE69312700T2 (de) 1992-04-14 1998-02-19 Cornell Res Foundation Inc Makromoleküle auf basis von dendritischen polymeren und verfahren zur herstellung
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5455258A (en) 1993-01-06 1995-10-03 Ciba-Geigy Corporation Arylsulfonamido-substituted hydroxamic acids
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5534615A (en) 1994-04-25 1996-07-09 Genentech, Inc. Cardiac hypertrophy factor and uses therefor
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5863949A (en) 1995-03-08 1999-01-26 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
DK0821671T3 (da) 1995-04-20 2001-04-23 Pfizer Arylsulfonylhydroxamsyrederivater som MMP- og TNF-inhibitorer
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
ES2183905T3 (es) 1995-12-20 2003-04-01 Hoffmann La Roche Inhibidores de metaloproteasa de matriz.
JP4471404B2 (ja) 1996-02-13 2010-06-02 アストラゼネカ ユーケイ リミテッド Ｖｅｇｆインヒビターとしてのキナゾリン誘導体
ATE211134T1 (de) 1996-03-05 2002-01-15 4-anilinochinazolin derivate
EP0818442A3 (en) 1996-07-12 1998-12-30 Pfizer Inc. Cyclic sulphone derivatives as inhibitors of metalloproteinases and of the production of tumour necrosis factor
HUP9903014A3 (en) 1996-07-18 2000-08-28 Pfizer Phosphinate derivatives having matrix metalloprotease inhibitor effect and medicaments containing the same
US6153609A (en) 1996-08-23 2000-11-28 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
US6130237A (en) 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
GB9718972D0 (en) 1996-09-25 1997-11-12 Zeneca Ltd Chemical compounds
AU5131998A (en) 1997-01-06 1998-08-03 Pfizer Inc. Cyclic sulfone derivatives
ES2202796T3 (es) 1997-02-03 2004-04-01 Pfizer Products Inc. Derivados de acidos arilsulfonilaminohidroxamicos.
JP2000507975A (ja) 1997-02-07 2000-06-27 ファイザー・インク Ｎ−ヒドロキシ−β−スルホニルプロピオンアミド誘導体類及びそれらのマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害薬としての使用
BR9807678A (pt) 1997-02-11 2000-02-15 Pfizer Derivados de ácidos arilsulfonil-hidroxâmicos
WO1998035985A1 (en) 1997-02-12 1998-08-20 The Regents Of The University Of Michigan Protein markers for lung cancer and use thereof
EP0973540B1 (en) 1997-02-25 2005-11-02 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
ID23668A (id) 1997-08-08 2000-05-11 Pfizer Prod Inc Turunan asam ariloksiarilsulfonilamino hidroksamat
GB9725782D0 (en) 1997-12-05 1998-02-04 Pfizer Ltd Therapeutic agents
GB9801690D0 (en) 1998-01-27 1998-03-25 Pfizer Ltd Therapeutic agents
ATE279430T1 (de) 1998-03-05 2004-10-15 Chiron Corp Verfahren zur verbesserung der serum halbwertszeit von biologisch aktiven molekülen
JP4462654B2 (ja) 1998-03-26 2010-05-12 ソニー株式会社 映像素材選択装置及び映像素材選択方法
PA8469401A1 (es) 1998-04-10 2000-05-24 Pfizer Prod Inc Derivados biciclicos del acido hidroxamico
PA8469501A1 (es) 1998-04-10 2000-09-29 Pfizer Prod Inc Hidroxamidas del acido (4-arilsulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxilico
ES2213985T3 (es) 1998-11-05 2004-09-01 Pfizer Products Inc. Derivados de hidroxiamida de acido 5-oxo-pirrolidin-2-carboxilico.
US6281211B1 (en) 1999-02-04 2001-08-28 Euro-Celtique S.A. Substituted semicarbazides and the use thereof
DK1553097T3 (da) 1999-02-10 2010-12-13 Astrazeneca Ab Quinazolinderivat som angiogeneseinhibitor og mellemprodukter dertil
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
PL203782B1 (pl) 1999-11-05 2009-11-30 Astrazeneca Ab Pochodne chinazoliny,sposoby ich wytwarzania,ich kompozycje farmaceutyczne oraz ich zastosowania
DE122008000002I1 (de) 2000-02-15 2008-04-17 Sugen Inc Pyrrol substituierte indolin-2-on protein kinase inhibitoren
DK1360288T3 (da) 2000-12-18 2011-06-14 Dyax Corp Fokuserede biblioteker af genetiske pakker
DK2322631T3 (en) 2001-04-19 2015-01-12 Scripps Research Inst Methods and compositions for the production of orthogonal tRNA-aminoacyl-tRNA syntetasepar
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP1446438A2 (en) 2001-11-07 2004-08-18 Nektar Therapeutics Al, Corporation Branched polymers and their conjugates
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
CN107213469A (zh) 2003-11-06 2017-09-29 西雅图基因公司 能够与配体偶联的单甲基缬氨酸化合物
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CN1942483B (zh) 2004-04-13 2012-09-26 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗p型选凝素抗体
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US8431558B2 (en) 2004-11-01 2013-04-30 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modification of biomolecules
DK2083856T3 (da) * 2007-08-15 2011-01-24 Circassia Ltd Peptider til desensibilisering mod allergener
JP5933894B2 (ja) 2007-09-14 2016-06-15 アディマブ， エルエルシー 合理的に設計された、合成抗体ライブラリおよびその使用
US8519122B2 (en) 2010-02-12 2013-08-27 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modification of biomolecules
EP3604264A1 (en) 2010-04-27 2020-02-05 SynAffix B.V. Fused cyclooctyne compounds
CN103534233B (zh) 2011-03-25 2016-08-24 生命科技公司 用于标记靶分子的杂双官能酯
US20130251783A1 (en) 2011-09-14 2013-09-26 Universitat Heidelberg Liposomes containing permeation enhancers for oral drug delivery
EP2793947B1 (en) 2011-12-23 2021-02-03 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
ES2718478T3 (es) 2012-06-08 2019-07-02 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden restos de aminoácidos no naturales de localización específica, métodos para su preparación y métodos para su uso
CA2893378A1 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-folr1 antibody
US20140363451A1 (en) 2013-05-14 2014-12-11 Immunogen, Inc. Anti-FOLR1 Immunoconjugate Dosing Regimens
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
MY174670A (en) * 2013-10-08 2020-05-06 Immunogen Inc Anti-folr1 immunoconjugate dosing regimens
US10315080B2 (en) * 2014-08-25 2019-06-11 Parsons Xtreme Golf, LLC Golf club heads and methods to manufacture golf club heads
MX2016016490A (es) * 2014-06-20 2017-07-28 Bioalliance Cv Conjugados de farmaco-anticuerpo anti-receptor de folato alfa (fra) y metodos de uso de los mismos.
RU2017102928A (ru) 2014-07-21 2018-08-21 Акцо Нобель Кемикалз Интернэшнл Б.В. Гранулы с регулируемым высвобождением, имеющие водостойкую оболочку
US9772108B2 (en) * 2014-10-31 2017-09-26 Worcester Polytechnic Institute Methods and systems for clean-up of hazardous spills
US10822414B2 (en) 2014-11-11 2020-11-03 Sutro Biopharma, Inc. Anti-PD-1 antibodies, compositions comprising anti-PD-1 antibodies and methods of using anti-PD-1 antibodies
CN114716506A (zh) 2015-01-30 2022-07-08 苏特罗生物制药公司 用于偶联和治疗的哈米特林（hemiasterlin）衍生物
CA2943962C (en) * 2015-11-05 2024-01-16 The Toronto-Dominion Bank Securing data via multi-layer tokens
SG11201806419RA (en) * 2016-01-27 2018-08-30 Sutro Biopharma Inc Anti-cd74 antibody conjugates, compositions comprising anti-cd74 antibody conjugates and methods of using anti-cd74 antibody conjugates
WO2018071597A1 (en) 2016-10-12 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor antibodies, compositions comprising anti-folate receptor antibodies and methods of making and using anti-folate receptor antibodies
EP3585813A1 (en) 2017-02-22 2020-01-01 Sutro Biopharma, Inc. Pd-1/tim-3 bi-specific antibodies, compositions thereof, and methods of making and using the same
KR20200051802A (ko) 2017-09-18 2020-05-13 서트로 바이오파마, 인크. 항-엽산 수용체 알파 항체 접합체 및 이의 용도

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