KR20200057333A - 안정성과 면역원성이 증대된 동물용 백신보조제 조성물 - Google Patents
안정성과 면역원성이 증대된 동물용 백신보조제 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 신규한 백신보조제 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 본 발명은 안정성과 면역원성이 증대된 동물용 백신보조제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 백신보조제는 W/O 에멀젼 백신보조제로서, HLB 값이 9 이상인 비이온성 친수성 계면활성제, 비이온성 친유성 계면활성제, 미네랄오일 및/또는 안정화제를 포함한다.
Description
본 발명은 신규한 백신보조제 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 안정성과 면역원성이 증대된 동물용 백신보조제 조성물에 관한 것이다.
질병의 예방 또는 치료하기 위한 백신을 동물에 투여하는 경우, 백신이 갖는 효력이 중요하지만, 백신의 효력을 저하시킬 수 있는 다양한 체내 환경이 고려되어야 한다. 이를 위해, 백신을 에멀젼 (emulsion), 리포좀 (liposome), 나노파티클 (nanoparticle) 등을 이용하여 함께 전달하는 기술이 개발되었으며, 최근에는 면역자극에 대한 백신보조제 (애주번트, adjuvant), 및 수용체 (receptor)를 이용한 작용제 등이 개발되고 있다 (Seth A 등, Non-Carrier Nanoparticles Adjuvant Modular Protein Vaccine in a Particle-Dependent Manner. PloS one. 2015;10). 면역보조제 또는 면역증강제로서 애주번트는 다양한 방법으로 제조될 수 있으며 백신 제조 시 많이 사용되고 있다. 일반적으로 백신조성물의 전체 중량의 약 30 ~ 40%가 항원, 약 60 ~ 70%가 백신보조제로 구성되며, 백신보조제는 재현성이 우수한 제조방법에 의해 제공될 수 있어야 한다. 이처럼, 백신보조제는 특정 항원을 구성하지 않으나, 면역원성을 높이고 항원의 생체 내 반감기를 증가시키는 제제를 의미하며, 안정성과 효능이 가장 중요하며, 안전성과 경제성 또한 중요한 요소이다.
다양한 바이러스가 동물의 감염성질환의 원인이 되고 있다. 예를 들어, 조류에서 전염성 질환을 일으키는 바이러스로서, 뉴캐슬병바이러스 (ND, Newcastle disease virus), 조류독감바이러스 (Avian influenza virus (H9N2)), 닭전염성기관지염바이러스 (Infectious Bronchitis virus), 또는 산란저하증바이러스 (Egg drop syndrome virus) 등이 대표적이다.
백신보조제로서 사용되는 오일 에멀젼으로는, 3단계의 유제공정단계를 통해 제조되는 높은 점성을 지닌 프로이트 완전 애주번트 (Freund’s adjuvant)가 특히 동물 백신의 제조에 널리 사용되어 왔다. 오일 에멀젼의 작용 기전은 잘 알려져 있지는 않지만 알루미늄염의 작용 기전과 유사할 것으로 여겨지며, 1회 접종으로 알루미늄염 애주번트보다 항원을 오래 유출시키고 보다 더 높은 면역 반응을 유도하는 것으로 알려졌다. 또한 림프구 침윤과 수지상세포 및 대식세포의 항원표현기능도 향상시키는 것으로 보인다. 이후 동물용 백신조성물에 주로 사용되는 유중수 (W/O, water in oil) 에멀젼으로서, SEPPIC사의 MONTANIDE (상표명) ISA70 및 ISA71이 개발되어 시판 중이다. 유중수 에멀젼은 지속적인 유제 상태를 가지며 높은 수준의 지속적인 면역반응을 유도하나, 점도가 높고 주사하기가 어려운 것이 단점이다. 이러한 단점을 극복하기 위해 삼중 에멀젼 또는 수중 유중수 에멀젼이 개발되었다. 이들 에멀젼은 유중수 에멀젼과 비교하여 점도를 낮추었지만 안정성이 낮고 생산하기가 어려운 문제가 있다. 또한 보관 시 에멀젼의 상분리 (phase separation)가 일어나지 않도록 적절하게 유화하는 것이 중요하다. 최근에 개발된 수중유 에멀젼 형태의 MF-59는 알루미늄염보다 항체 생산능력이 우수하고 체액성 면역반응과 세포성 면역반응을 모두 유도하는 것으로 보고되고 있어 HIV, HSV 등의 백신에 유용하고, 동물과 인간모두에게 안전한 것으로 평가되고 있다.
또한, Darkerol 6 VR, Marcol 52, Marcol 82, Sontex 55, vestain A50B, Whitetrex 307과 같은 정제된 미네랄오일이 백신 생산에 이용되고 있으나, 최근에는 땅콩류, 참기름 등의 식물성 오일과 상어의 간유 등 동물성 오일도 에멀젼 애주번트로서 개발되고 있다.
계면활성제의 친수성과 친유성을 나타내는 값으로서, HLB (Hydrophile Lipophile Balance) 값이 사용되고 있다. HLB 값 = 20 × 친수기의 분자량/전분자량으로 정의되어, HLB 값은 0 ~ 20의 범위에 있으며, 값이 클수록 친수성이 강한 것을 나타낸다. 일반적으로, HLB 값 1 ~ 3은 소포제, 3 ~ 7은 W/O형 유화제, 7 ~ 9는 습윤제, 8 ~ 18은 O/W형 유화제, 11 ~ 15는 세정제, 15 ~ 20은 가용화제로 적합한 것으로 알려졌다.
본 발명자들은 보다 더 안정적이고 면역원성이 증강된 백신보조제를 개발하고자 노력하였다. 그 결과, W/O 에멀젼 백신보조제를 제조함에 있어서, HLB 값이 9 이상인 비이온성 친수성 계면활성제, 비이온성 친유성 계면활성제, 미네랄오일 및 안정화제를 함께 사용하고, 백신보조제의 수상비율을 증가시킴에 의해, 현저히 우수한 특성을 갖는 동물용 백신보조제를 제조하여 본 발명을 완성하였다.
Seth A, Ritchie FK, Wibowo N, Lua LHL, Middelberg APJ. Non-Carrier Nanoparticles Adjuvant Modular Protein Vaccine in a Particle-Dependent Manner. PloS one. 2015;10.
이와 같이, 본 발명은 동물용 백신보조제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 동물용 백신보조제를 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 동물용 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 동물용 백신조성물로 동물을 면역화 하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 미네랄오일 대 계면활성제가 50 ~ 90 : 50 ~ 10, 바람직하게는 70 ~ 95 : 30 ~ 5, 보다 더 바람직하게는 80 : 20로 포함되고, 수상비율이 30 이상인 것인, 유중수 (W/O) 에멀젼 백신보조제를 제공한다. 이와 관련된 일 구현예에서, 상기 미네랄오일 대 계면활성제는 바람직하게는 90 : 10일 수 있다. 이와 관련된 다른 일 구현예에서, 본 발명의 백신보조제는 미네랄오일, 비이온성 친수성 계면활성제로서 HLB 값이 9 내지 13인 계면활성제, 비이온성 친수성 계면활성제로서 HLB 값이 14 초과인 계면활성제, 비이온성 친유성 계면활성제; 및 안정화제로 사용되는 계면활성제를 포함한다. 바람직하게는, 상기 미네랄오일은, MARCOL 52® (Esso, France), MARCOL 82® (Esso, France), DRAKEOL 6VR® (Penreco), Castor Oil, 스쿠알렌 (Squalan), 폴리데센 (Polydecene), Sontax 55, Vestain A50B 및 Whitertrex 307으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상이 포함된다. 바람직하게는, 상기 비이온성 친수성 계면활성제로서 HLB 값이 9 내지 13인 계면활성제는 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 (ethoxylated fatty acid monoester of sorbitan) (특히, 5 에톡실기) (예를 들어, Tween81®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노올레이트 ( ethoxylated sorbitan monooleate), 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 에스테르 (ethoxylated fatty acid diesters of sorbitan), 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 트리에스테르 (ethoxylated fatty acid triesters of sorbitan) (특히, 20 에톡실기) (예를 들어, Tween85®와 같은 에톡시레이티드 소르비탄 트리올레이트 (ethoxylated sorbitan trioleate), Tween65®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 트리스테아레이트 (ethoxylated sorbitan tristearate), 에톡시레이티드 지방 알콜 (ethoxylated fatty alcohols) (특히, 5 ~ 10 에톡실기) (예를 들어, Brij76®, Brij56®, Brij96®), 에톡시레이티드 지방산 (ethoxylated fatty acids) (특히, 5 ~ 10 에톡실기) (예를 들어, Simulsol 2599®, Myrj45®), 에톡시레이티드 캐스터 오일 (ethoxylated castor oil) (특히, 25 ~ 35 에톡실기) (예를 들어, Arlatone650®, ArlatoneG®)으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상이 포함된다. 바람직하게는, 상기 비이온성 친수성 계면활성제로서 HLB 값이 14 초과인 계면활성제는, 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 모노에스테르 (ethoxylated fatty acid monoesters of sorbitan) (특히, 20 에톡실기) (예를 들어, Tween20®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노라우레이트, Tween40®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노팔미테이트 (ethoxylated sorbitan monopalmitate), Tween60®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노스테아레이트 (ethoxylated sorbitan monostearate), Tween80®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노올레이트 (ethoxylated sorbitan monooleate), 에톡시레이티드 지방 알콜 (ethoxylated fatty alcohols) (특히, 15 ~ 30 에톡실기) (예를 들어, Brij78®, Brij98®, Brij721®), 에톡시레이티드 지방산 (ethoxylated fatty acids) (특히, 15 ~ 30 에톡실기) (예를 들어, Myrj49®, Myrj51®, Myrj52®, Myrj53®), 비이온성 블록공중합체 (non-ionic block copolymers) (예를 들어, LutrolF127®, LutrolF68®와 같은 폴리옥시에틸렌/폴리옥시프로필렌코폴리머 (polyoxyethylene/polyoxypropylenecopolymer) (POE-POP))로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함한단. 바람직하게는, 상기 비이온성 친유성 계면활성제는 소르비탄 지방산 에스테르 (fatty acid esters of sorbitan) (예를 들어, Span20®와 같은 소르비탄 모노라우레이트 (sorbitan monolaurate), Span40®와 같은 소르비탄 모노팔미테이트 (sorbitan monopalmitate), Span60®와 같은 소르비탄 모노스테아레이트 (sorbitan monostearate), Span65®와 같은 소르비탄 트리스테아레이트 (sorbitan tristearate), Span80®와 같은 소르비탄 모노올레이트 (sorbitan monooleate), Span85®와 같은 소르비탄 트리올레이트 (sorbitan trioleate), Arlacel987®와 같은 소르비탄 모노이소스테아레이트 (sorbitan monoisostearate), Crill6®와 같은 소르비탄 이소스테아레이트), 만나이드 지방산 에스테르 (fatty acid esters of mannide) (예를 들어, Montanide80®), 만나이드 모노올레이트 (mannide monooleate) (예를 들어, ArlacelA®), 만나이드 디올레이트 (mannide dioleate), 만나이드 트리올레이트 (mannide trioleate), 만나이드 테트라올레이트 (mannide tetraoleate)), 만나이드의 에톡시레이티드 지방산 에스테르 (ethoxylated fatty acid esters of mannide) (2,3 or 4-에톡실기) (예를 들어, Montanide 888®, Montanide 103®, 에톡실레이티드 만나이드 모노올레이트 (ethoxylated mannide monooleate), 에톡실레이티드 만나이드 디올레이트 (ethoxylated mannide dioleate), 에톡시레이티드 마나이드 트리올레이트 (ethoxylated mannide trioleate), 에톡시레이티드 만나이드 테트라올레이트 (ethoxylated mannide tetraoleate)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함한다. 바람직하게는, 상기 안정화제로 사용되는 계면활성제는 레시틴 (lecithin), 스테아릭산 (stearic acid), 스테아릴 알콜 (stearyl alcohol), 콜레스테롤 (cholesterol), 옥타노익산 (octanoic acid), 콜레스테릴 리놀레이트 (cholesteryl linoleate), 콜레스테릴 올레이트 (cholesteryl oleate), 말미틱산 (palmitic acid), 라우릭산 (lauric acid), 트리톤 X-100, 트리콘 X-102, 옥틸 B-D-글루코피라노시드 (octyl B-D-glucopyranoside)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 상기 면역보조제 및 항원단백질을 포함하는 백신조성물을 제공한다. 이와 관련된 일 구체예에서, 상기 항원단백질은 조류인플루엔자 (AI) 바이러스 항원, 뉴캐슬병 (ND) 바이러스 항원, 닭전염성기관지염바이러스 (Infectious Bronchitis virus), 또는 닭산란율저하증 (EDS) 바이러스일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이와 관련된 또 다른 일 구현예에서, 본 발명의 백신조성물은 백신보조제 대 항원단백질이 50 ~ 70 : 30 ~ 50 (w/w)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 또한 본 발명의 동물용 백신조성물을 백신의 투여가 필요한 동물에 투여하여 동물을 면역화 하는 방법을 제공한다.
본 발명의 백신보조제는 면역원성이 우수하고, 항원량 및 방출 지속성이 우수하고 조절가능하다. 또한, 본 발명의 백신보조제는 21 cP의 점도를 가지며 백신 에멀젼의 점도는 20 ~ 40 cP이다. 안정성이 우수하여 가혹조건에서 6주이상 안정한 것으로 나타났다.
도 1의 본 발명의 백신보조제의 함량을 달리하여 제조한 백신조성물로부터 항원단백질의 방출률을 분석한 결과이다.
도 2는 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 사용하여 SPF 닭에 대한 면역원성 시험을 수행한 결과이다.
도 3은 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 사용하여 임상 농가의 닭에 대한 면역원성 시험을 수행한 결과이다.
도 4는 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 이용하여 마우스를 접종하는 실험을 계략적으로 나타낸 것이다.
도 5은 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물로 마우스를 면역화 하고 백신의 효능을 분석한 결과이다.
도 6은 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 사용한 세포성 면역시험 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 사용하여 SPF 닭에 대한 면역원성 시험을 수행한 결과이다.
도 3은 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 사용하여 임상 농가의 닭에 대한 면역원성 시험을 수행한 결과이다.
도 4는 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 이용하여 마우스를 접종하는 실험을 계략적으로 나타낸 것이다.
도 5은 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물로 마우스를 면역화 하고 백신의 효능을 분석한 결과이다.
도 6은 본 발명의 백신보조제를 포함하는 백신조성물을 사용한 세포성 면역시험 결과를 나타낸 것이다.
본 발명은 안정성과 면역원성이 증가된 백신조성물을 제공하기 위한 백신보조제로서, 미네랄오일과 계면활성제를 포함하는 백신보조제를 제공한다. 본 발명에서 미네랄오일은 MARCOL 52® (Esso, France), MARCOL 82® (Esso, France), DRAKEOL 6VR® (Penreco), Castor Oil, 스쿠알렌 (Squalan), 폴리데센 (Polydecene), Sontax 55, Vestain A50B 또는 Whitertrex 307로부터 선택되며, 계면활성제는 비이온성 친수성 계면활성제는 친수성-친유성 (HLB) 값이 9 내지 13인 계면활성제로서, 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 모노에스테르 (ethoxylatedfatty acid monoester of sorbitan) (특히, 5 에톡실기) (예를 들어, Tween81®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노올레이트 (ethoxylated sorbitan monooleate), 소르비탄의 에톡시레이티드 디에스테르 (ethoxylated fatty acid diesters of sorbitan), 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 트리에스테르 (ethoxylated fatty acid triesters of sorbitan) (특히, 20 에톡실기) (예를 들어, Tween85®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 트리올레이트 (ethoxylated sorbitan trioleate), Tween65®와 같은 에톡시레이티드 소르비탄 트리스테아레이트 (ethoxylated sorbitan tristearate), 에톡시레이티드 지방 알콜 (ethoxylated fatty alcohols) (특히, 5 ~ 10 에톡실기) (예를 들어, Brij76®, Brij56®, Brij96®), 에톡시레이티드 지방산 (ethoxylated fatty acids) (특히, 5 ~ 10 에톡실기) (예를 들어, Simulsol2599®, Myrj45®), 에톡실레이티드 캐스터 오일 (ethoxylated castor oil) (특히, 25 ~ 35 에톡실기) (예를 들어, Arlatone650®, ArlatoneG®)로부터 선택된 하나 이상의 계면활성제를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에서 사용되는 비이온성 친수성 계면활성제는 친수성-친유성 (HLB) 값이 14 초과의 계면활성제로서 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 모노에스테르 (ethoxylated fatty acid monoesters of sorbitan) (특히, 20 에톡실기) (예를 들어, Tween20®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노라우레이트 (ethoxylated sorbitan monolaurate), Tween40®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노팔미테이드 (ethoxylated sorbitan monopalmitate), Tween60®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노스테아레이트 (ethoxylated sorbitan monostearate), Tween80®과 같은 에톡시레이티드 소르비탄 모노올레이트 (ethoxylated sorbitan monooleate)), 에톡시레이티드 지방 알콜 (ethoxylated fatty alcohols) (특히, 15 ~ 30 에톡실기) (예를 들어, Brij78®, Brij98®, Brij721®), 에톡시레이티드 지방산 (ethoxylated fatty acids) (특히, 15 ~ 30 에톡실기) (예를 들어, Myrj49®, Myrj51®, Myrj52®, Myrj53®), 비이온성 블록코폴리머 (non-ionic blockcopolymers) (예를 들어, 폴리옥시에틸렌/폴리옥시프로필렌코폴리머 (polyoxyethylene/polyoxypropylenecopolymer) (POE-POP), 예컨대, LutrolF127®, LutrolF68®)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함 할 수 있다. 또한, 본 발명에서 사용될 수 있는 비이온성 친유성 계면활성제로는 소르비탄의 지방상 에스테르 (fatty acid esters of sorbitan) (예를 들어, Span20®와 같은 소르비탄 모노라우레이트 (sorbitan monolaurate), Span40®과 같은 소르비탄 모노팔미테이트 (sorbitan monopalmitate), Span60®과 같은 소르비탄 모노스테아레이트 (sorbitan monostearate), Span65®와 같은 소르비탄 트리스테아레이트 (sorbitan tristearate), Span80®과 같은 소르비탄 모노올레이트 (sorbitan monooleate), Span85®과 같은 소르비탄 트리올레이트 (sorbitan trioleate), Arlacel987®와 같은 소르비탄 모노이소스테아레이트 (sorbitan monoisostearate), Crill6®와 같은 소르비탄 이소스테아레이트 (sorbitan isostearate), 만나이드의 지방산 에스테르 (fatty acidesters of mannide) (예를 들어, Montanide80®, 만나이드 모노올레이트 (mannide monooleate) (예컨대, ArlacelA®), 만나이드 디올레이트 (mannide dioleate), 만나이드 틀리올레이트 (mannide trioleate), 만나이드 테트라올레이트 (mannide tetraoleate)), 만나이드의 에톡시레이티드 지방산 에스테르 (ethoxylated fatty acid esters of mannide) (2, 3 또는 4-에톡실기) (예를 들어, Montanide 888®, Montanide 103®, 에톡시레이티드 만나이드 모노올레이트 (ethoxylated mannide monooleate), 에톡시레이티드 만나이드 디올레이트 (ethoxylated mannide dioleate), 에톡시레이티드 만나이드 트리올레이트 (ethoxylated mannide trioleate), 에톡시레이티드 만나이드 테트라올레이트 (ethoxylated mannide tetraoleate))로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 계면활성제가 사용될 수 있다. 다른 계면활성제로 안정화제로서 포함되며, 레시틴 (Lecithin), 스테아르산 (Stearic acid), 스테아릴알콜 (Stearyl alcohol), 콜레스테롤 (Cholesterol), 옥타노익산 (Octanoic acid), 콜레스테릴 리놀레이트 (Cholesteryl Linoleate), 콜레스테릴 올레이트 (Cholesteryl Oleate), 팔미틱산 (Palmitic acid), 라우릭산 (Lauric acid), Triton X-100, Triton X-102, 및 옥틸 B-D-글루코피라노시드 (OctylB-D-Glucopyranoside)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
이하, 실시예에 기초하여 본 발명을 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 도면 및 청구범위를 포함하는 상세한 설명에 기술된 내용으로부터 본 기술이 속하는 분야의 전문가가 용이하게 변형 또는 치환할 수 있는 것은 본 발명의 권리범위에 포함됨은 물론이다.
제조예:
제조예 1: 백신보조제의 제조
유상 (oil phase)인 미네랄 오일로서, 화이트 미네랄 오일 (White Mineral Oil, Penreco) 또는 유동 파라핀 (Liquid Paraffin)과 계면활성제 (ethoxylated sorbitan trioleate, Croda) 를 HLB (Hydrophilic Lipophilic Balance)에 맞추어 고전단믹서 (high shear mixer) (PRIMIX HOMO MIXER Mark II )를 이용하여 수분간 혼합하였다. 다음, 수상 (water phase)과 유상의 양친매성 계면활성제로서 소르비탄 모노이소스테아레이트 (sorbitan monoisostearate, Croda), 안정화제 옥타노익산 (octanoic acid)을 추가한 후 고전단믹서를 이용하여 다시 수분간 혼합하여 유중수형의 백신보조제를 제조하였다. 본 제조예에 따라 제조된 백신보조제은, 미네랄오일 : HLB가 9 내지 13인 비이온성 친수성 계면활성제; HLB가 14 초과인 비이온성 친수성 계면활성제; 비이온성 친유성 계면활성제 및 안정화제로서 첨가되는 계면활성제의 비율이, 1 ~ 95 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 0.1 ~ 2이 되도록 하였다. 본 실시예에서 미네랄오일은 MARCOL 52®, MARCOL 82®, DRAKEOL 6VR, Castor Oil, 또는 스쿠알렌이 사용되었으며, 비이온성 친수성 계면활성제로서에톡시레이티드 소르비탄 모노스테아레이트 (ethoxylated sorbitan monostearate), 에톡시레이티드 소르비탄 모노올레이트 (ethoxylated sorbitan monooleate), 에톡시레이티드 지방 알콜 (ethoxylated fatty alcohol), 또는 폴리옥시에틸렌/폴리옥시프로필렌코폴리머 (polyoxyethylene/polyoxypropylenecopolymer)가 사용되었다. 또한, 비이온성 친유성 계면활성제로는, 소르비탄 모노스테아레이트 (sorbitan monostearate), 소르비탄 트리스테아레이트 (sorbitan tristearate), 소르비탄 모노올레이트 (sorbitan monooleate), 소르비탄 트리올레이트 (sorbitan trioleate), 또는 소르비탄 모노이소스테아레이트 (sorbitan monoisostearate)가 사용되었으며, 안정화제로서 레시틴 (Lecithin), 옥타노익산 (Octanoic acid), 팔미틱산 (Palmitic acid), Triton X-100 또는 Triton X-102가 사용되었다.
제조예 2: 백신조성물의 제조
수상인 항원 (antigen)과 유상인 백신보조제를 혼합하여 백신조성물을 제조하였다. 먼저, 비커 (500 ㎖)에 상기에서 제조한 유상의 백신보조제를 50 ~ 70 (w/w)로 가한 후, 믹서를 이용하여 1,000 ~ 3,000 rpm으로 교반하면서, 수상인 조류인플루엔자 (Avian influenza virus H9N2, 국립수의과학검역원) 바이러스 항원, 뉴캐슬병 (Newcastle disease La Sota, 국립수의과학검역원 또는 rNDV-mF, 한림대학교 박만성 교수 연구실) 바이러스 항원 또는 닭산란율저하증 (Egg drop syndrome virus K11, 국립수의과학검역원) 바이러스 항원을 50 ~ 30 (w/w) 비율로 천천히 첨가하였다. 항원을 가한 후, 준비한 믹서를 사용하여 고전단 rpm, 7,000 ~ 10,000 rpm으로 수분간 교반하여 균질화 하여 유중수 (Water-in-Oil) 에멀션 형태의 백신조성물을 제조하였다. 비교를 위한 대조군으로서, 오일 애주번트인 Montanide ISA70 (Seppic사 제조, 프랑스)를 사용하고 상기 항원과 교반하여 동일하게 백신조성물을 제조하였다. 아래 표 1 (오일 백신보조제를 포함 백신조성물의 제조 (중량%))은 본 발명의 백신보조제와 시판중인 백신보조제를 조류인플루엔자 바이러스 항원 또는 뉴캐슬병 바이러스 항원과 혼합하여 제조한 백신조성물에서 이들 성분의 상대적 함량을 나타낸 것이다.
| 성분 | 비교예1 | 비교예2 | 비교예3 | 제조예1 | 제조예2 | 제조예3 | 제조예4 | |
| A 백신보조제 |
실험군 | - | - | - | 50 | 60 | 65 | 70 |
| ISA70 | 50 | 60 | 70 | - | - | - | - | |
| B 항원 |
AI 바이러스 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| ND 바이러스 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | |
| 희석액 | ~ 100 | ~ 100 | ~ 100 | ~ 100 | ~ 100 | ~ 100 | ~ 100 | |
*상기에서 실험군은 본 발명에 따라 제조예에서 제조한 백신보조제를 의미하고, ISA70는 시판 중인 백신보조제이다. AI는 조류인플루엔자, ND 뉴캐슬병을 의미한다.
제조예 3: 에멀젼 형성의 확인
백신보조제 에멀젼은 유중수 (W/O) 타입으로서, 투명한 비커에 증류수를 넣고, 에멀전을 몇 방울 떨어뜨린 후 육안 관찰하여 에멀젼 형성을 확인하였다. 즉, 증류수에 떨어뜨렸을 때 증류수와 섞이지 않고 상층에 떠있는 것으로써 W/O 타입임을 확인하였다. 현미경 (Motic, Motic-AE-31, 400X)을 사용하여 에멀젼의 균질도를 관찰하였으며, 그 결과 입자의 크기가 1 ㎛ 이내로 측정되었고, 균일하게 분포하는 것으로 나타났다.
제조예 4: 백신조성물의 안정성 확인
에멀젼 형태의 본 발명의 백신조성물의 장기보관 안성성을 평가하였다. 이를 위해, 오일유출, 침전, 물유출 및 층분리 발생 여부를 37℃, 또는 4℃ 및 37℃를 순환하는 온도순환조건에서 8주 동안 관찰하였으며, 그 결과를 표 2 (백신조성물의 안정성 시험)에 나타냈다.
| 조건 | 4℃ | 37℃ | 온도순환 | ||||||
| 오일유출 | 물유출 | 층분리 | 오일유출 | 물유출 | 층분리 | 오일유출 | 물유출 | 층분리 | |
| 비교예 1 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 |
| 비교예 2 | 변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 |
| 비교예 3 | 변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 | 불안정 |
| 실시예 1 | 변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
불안정 | 불안정 | 불안정 |
| 실시예 2 | 변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
| 실시예 3 | 변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
| 실시예 4 | 변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
변화 없음 |
그 결과, 상기 표 2에서 보는 바와 같이 안정화제를 포함하는 본 조성물의 경우에는 오일 유출, 침전 현상이 발생하지 않고 안정하였다. 따라서 본 발명에 의한 조성물이 장기간 보관에 있어 보관 안정성을 지니고 있음을 확인할 수 있다.
실시예
실시예 1: 안전성 시험
6 ~ 8 주령 SPF 닭 (남덕 SPF사에서 입수)에 대해 상기 제조예에서 제조한 (본 발명의 백신보조제 : 항원을 7 : 3의 비율로 함유) 백신 2수분 (1 ㎖)을 1회 근육접종하고 14일간 관찰하였다. 대조군은 같은 양의 PBS를 투여하였다. 그 결과 아래 표 3에 나타낸 것과 같이, 본 발명의 백신보조제를 투여한 그룹에서 사망 등 어떠한 임상적인 징후를 관찰할 수 없었다.
| 그룹 | 임상 징후 (양성 마리수/시험 마리수) |
| 실험군 | 0/5 |
| 대조군 | 0/5 |
6 ~ 8 주령 SPF 닭에 상기와 같은 백신 1 수분 (0.5 ㎖)을 근육 접종하고 2주 후 동일 방법으로 접종하여 14일간 관찰하였다. 그 결과 아래 표 4에 나타낸 것과 같이, 특별한 임상적 징후를 관찰 할 수 없었다.
| 그룹 | 임상 징후 (양성 마리수/시험 마리수) |
| 실험군 | 0/5 |
| 대조군 | 0/5 |
이러한 결과는 본 발명의 백신보조제가 안전성에 어떠한 문제가 없음을 뒷받침한다.
실시예 2: 백신조성물의 항원방출 속도 및 점도 시험
본 발명에 따라 유중수 (W/O) 에멀전으로 제조된 조류 불활성화(Avian inactivated) 백신조성물로부터 항원 (조류인플루엔자 (AI) 바이러스 항원, 뉴캐슬병 (ND) 바이러스 항원 ) 또는 단백질이 방출되는 속도를 확인하기 위하여 in vitro 항원 방출시험을 실시하였다. 희석액이 든 비커에 백신조성물을 일정량 넣고 일정한 속도로 교반해주면서 시간별로 샘플링하여 희석액 내로 방출된 항원의 양을 단백질 정량 키트를 이용하여 측정하였다. 도 1에 나타낸 것과 같이, 백신보조제 조성 (계면활성제 또는 안정화제의 종류 및 조성비)에 따라 항원의 방출되는 속도가 다른 것으로 나타났다. 백신조성물은 상기 제조예에 따라 제조한 백신조성물이며 저함량, 중함량 및 고함량은 백신조성물 중 계면활성제 중량에 대해 백신보조제를 각각 10 %, 4 % 및 1 % 함유하였다. 이러한 결과는 본 발명의 백신보조제가 그 조성에 따라 항원방출 지연을 효과적으로 조절할 수 있음을 나타낸다.
본 발명에 따른 다양한 조성의 백신보조제를 함유하여 유중수 (W/O) 에멀전으로 제조된 조류 불활성화 백신조성물의 점도를 Brookfield 점도계를 제조자의 지시에 따라 사용하여 측정한 결과, 백신조성물이 항원 대 백신보조제의 함량 비에 따라 22.2 ~ 67.9 cP의 다양한 점도를 갖는 것으로 확인되었다. 특히 항원 대 백신보조제의 비율이 3:7인 경우, 시판 중인 백신보조제 (ISA70)을 동일한 비율로 제조한 것의 점도가 38.2 cP인 것과 비교할 때, 낮은 점도를 갖는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 본 발명의 백신보조제가 낮은 점도를 갖는 백신조성물의 제조에 이용될 수 있으며, 이는 주사용이성 및 접종부위 이상육 발생률을 크게 낮출 수 있음을 제시한다.
실시예 3: 백신조성물의 면역원성 시험
(3-1) SPF 닭에서의 면역원성 시험
본 발명에 따른 백신보조제 및 양성대조군으로서 ISA70을 포함하는 백신을 상기 제조예 따라 제조한 후, SPF 닭에 1차 근육내로 접종하고 접종 후 3주 후에 채혈하여 혈구응집억제반응 (HI, hemagglutination inhibition assay) 역가를 확인하였다. 음성대조군으로서 PBS를 접종하였다. 그 결과를 도 2에 나타냈다. 도 2에서 WIO1 내지 WIO4는 각각 아래와 같은 조성을 갖도록 상기 제조예에 따라 제조하였다. 그 결과, 도 2에서 확인되는 것과 같이, 본 발명에 따른 백신보조제를 포함하는 백신이 우수한 면역원성을 갖는 것으로 나타났다. 특히, WIO3가 가장 우수한 것으로 나타났다.
| 성분 | WIO1 | WIO2 | WIO3 | WIO4 |
| 미네랄오일 (Drakeol 6VR) | to 100 | to 100 | to 100 | to 100 |
| 비이온성 친수성 계면활성제(에톡시레이티드 소르비탄 트리올레이트 (ethoxylated sorbitan trioleate)) | 10 | 8 | 8 | 6 |
| 비이온성 친유성 계면활성제 (소르비탄 모노이소스테아레이트 (Sorbitan monoisostearate)) | 1 | 1.6 | 4 | 6 |
| 안정화제 (옥타노익산 (Octanoic acid)) | 2 | 2 | 2 | 2 |
(3-2) 임상 농가 닭에 대한 면역원성 시험
상기 (3-1)에서 가장 우수한 것으로 판단된 WIO3를 CAvant WO-A1로 명명하고 이를 포함하는 백신의 면역원성을 임상 농가의 닭을 이용하여 확인하였다. 국내 (충청북도 소재) 농가의 14 주령, 1,193 ~ 1,267 g, 암탉 20마리에 대해 본 발명의 WO-A1 양성대조군으로서 시판 중인 ISA70 (Seppic사 제조, 프랑스)을 포함하는 백신조성물을 상기 제조예에 따라 제조하여 준비하였다. 항원으로서 뉴캐슬바이러스 항원 및 조류인플루엔자항원을 사용하였다. 사전채혈 한 후, 1차 접종, 1차 접종 후 2주 후 2차 접종한 후 14주간 무접종대조군 (음성대조군)과 비교 관찰하였다. 백신조성물은 1두분 (0.5 ㎖)를 근육접종하였다. 그 결과, 도 3에 나타낸 것과 같이, 본 발명의 백신보조제를 함유하는 백신조성물이 뉴캐슬병 및 조류인플루인자 바이러스 둘 모두에서 우수한 HI 역가를 나타냈다.
(3-3) 마우스에 대한 면역원성 시험
항원단백질과 백신보조제 (WO-A1 또는 ISA70)의 효능평가를 위해 마우스 (5주령 암컷 BALB/c 마우스, 한일실험동물)에 1차 및 2차 2주 간격으로 항원단백질을 접종한 후 2차 접종 후 4주간 인플루엔자 바이러스 (influenza A virus) H5N2 strain (A/bird/Korea/w81/2005) (출처 충북대학교 의과대학 최영기 교수 연구실) 의 1 LD50 감염에 대해 마우스의 체중과 생존율을 비교하였다. 실험을 위해, (i) PBS 대조군, (ii) 항원단백질 본 발명에 따른 백신보조제 (WO-A1)를 혼합한 그룹 및 (iii) 항원단백질에 시판 중인 백신보조제 (ISA70)를 혼합한 3개 그룹을 준비하였다. 각 그룹 당 마우스는 5마리로 구성하였으며 백신에 의한 항체형성을 측정하기 위해 ELISA 측정을 위한 그룹을 별도로 5마리씩 구성하였다. 항원단백질의 접종은 정제된 M2HA2 단백질 (서열번호:1, 바이오프로젠사 합성)을 2주 간격으로 근육투여 하였다. 항원단백질의 투여 용량은 15 ㎍으로 설정하였다. 항원과 백신보조제의 혼합은 항원 3, 백신보조제 7의 비율 (w/w)로 제조한 혼합물을 3방향 코크 (3-way stopcock)과 실린지를 이용하여 15분간 수행하였다. 총 접종용량은 100 ㎕였으며 마지막 접종 후 4주 뒤에 바이러스로 감염시켰다. 인플루엔자바이러스 H5N2 균주 1 LD50 용량의 바이러스를 이용하였으며, 마우스를 마취 (Avertin, Sigma, 400 ㎕) 시킨 후 비강을 통하여 접종하였다. 바이러스 감염 이후 마우스의 상태를 모니터링하며 체중을 측정하였다. 동물윤리실험위원회의 방침에 따라 바이러스 감염 이후 25% 이상의 체중감소를 보인 개체는 안락사한 뒤 치사한 것으로 처리하였다. 그 결과 도 4에 나타낸 것과 같이, 인플루엔자바이러스 H5N2 균주 1 LD50 감염에 대한 마우스의 생존율이 대조군 및 시판중인 백신보조제를 함유한 백신조성물과 비교하여 크게 향상되었으며, 이들 백신조성물과 비교하여 체중감소가 없는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 본 발명의 백신보조제의 첨가에 의해 항원단백질의 백신능이 향상된 것을 뒷받침한다.
바이러스 접종 직전 마우스에서 항체가를 측정한 결과, 본 발명의 백신보조제 및 시판 중인 백신보조제를 혼합하여 접종한 그룹에서 항원단백질 (M2HA2)를 단독으로 접종한 그룹과 비교하여 보다 더 높은 항체가가 형성된 것이 확인되었다.
실시예
4: 마우스 관련 세포성 면역 시험
항원단백질 (M2HA2 단백질)에 의해 T 면역세포가 반응하여 면역작용에 관여하였는지를 알아보기 위해 각 그룹 마우스 (5주령 암컷 BALB/c 마우스, 체중 20g 한일실험동물)의 비장 내 비장세포를 분리하고, 항원단백질로 자극해 T-면역세포 반응실험을 수행하였다. BD (상표명) ELISPOT 세트를 이용하였다. 정제된 IFN-r 항체 (입수처: 시그마알드리치)와 정제된 IL-4 항체 (입수처: 시그마알드리치)를 PBS에 1:200으로 희석하여 100 ㎕/well로 분주하여 코팅하였다. 다음날 비장을 분리하여 비장세포를 얻어내고, ACK 용해 완충액 (입수처: 써모 피셔 사이언티픽)을 이용하여 적혈구 세포를 제거하여 한 다음 RPMI 배지로 부유시켜 각 개체로부터 얻은 비장세포를 100 ㎕/well로 분주하였다. 상기 언급한 자극제들을 3 ㎍/100 ㎕의 농도로 RPMI 배지 (10% FBS)에 동일하게 희석한 다음 100 ㎕/well로 분주하였다. 24시간 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에 보관한 뒤 검출 항체와 스트렙타비딘 (streptabidin)-HRP를 반응시켰다. 다음, 이를 AEC 완충액 (입수처: 시그마알드리치)을 이용하여 발색시켜 IFN-r와 IL-4로 인해 발생된 점의 개수를 측정하였다. 양성 대조군인 미토겐 (mitogen) 자극제 (입수처 시그마알드리치, 1 ㎍/well)와 음성 대조군 (배지만 함유)을 통해, 실험이 올바르게 진행되었음을 확인하였다. IFN-r와 IL-4가 생성되어 발색으로 인한 점의 생성이 확인되었으며, 이는 항원단백질과 애주번트가 T 면역세포의 활성화 면역작용에 기여한 것을 뒷받침한다.
실시예
5: 가속 안정성 시험
본 발명에 따라 제조한 백신보조제 (WO-A1)와 항원의 비율에 따라 W/O 형태로 제조된 백신조성물의 안정성이 변화하는 것을 확인하였다. 먼저, 본 발명의 백신보조제와 시판 중인 ISA70의 백신보조제와 항원을 각각 7:3 및 6:4의 비율로 함유하는 백신을 제조하여 준비하였다. 상기 준비한 백신에 대한 장기 보관 및 안정성을 확인하기 위해, 37℃, 및 4℃에서 37℃ 가속 안정성을 시험 조건에서 6주간 안정성을 관찰하였다. 그 결과 아래 표 6에 나타낸 것과 같이, 본 발명의 백신보조제를 함유하는 백신이 시판 중인 백신보조제 (ISA70) (양성대조군)을 함유하는 백신과 비교하여 우수한 안정성을 갖는 것을 확인하였다.
| 37℃ | 온도 변화 (4℃에서 37℃) | |||||||
| 백신보조제 : 항원 | 오일유출 | 침전 | 물유출 | 층분리 | 오일유출 | 침전 | 물유출 | 층분리 |
| 양성대조군 7:3 | ○ | ○ | - | - | ○ | ○ | - | ○ |
| 양성대조군 6:4 | ○ | ○ | ○ | - | ○ | ○ | ○ | ○ |
| 본 발명 7:3 | ○ | - | - | - | ○ | - | - | - |
| 본 발명 6:4 | ○ | ○ | - | - | ○ | ○ | - | - |
- : 변화 없음; ○: 성상변화, 6주간 관찰
본 발명에 따른 백신보조제와 항원을 포함하는 백신 조성물을 동물에 투여한 결과 증가된 생존력 및 항체가를 나타내는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명은 동물용 백신조성물 제조에 있어서 면역원성 강화를 위해 널리 이용될 수 있을 것이다.
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<130> CVA18P02KR
<160> 1
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> M2+H5HA2 protein
<400> 1
Thr Cys Ala Thr Thr Ala Thr Thr Ala Ala Cys Ala Gly Ala Ala Gly
1 5 10 15
Thr Thr Gly Ala Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys Ala Cys Gly
20 25 30
Thr Ala Ala Thr Gly Ala Ala Thr Gly Gly Gly Ala Ala Thr Gly Thr
35 40 45
Ala Ala Gly Thr Gly Thr Thr Cys Thr Gly Ala Thr Thr Cys Thr Thr
50 55 60
Cys Thr Gly Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys Gly Thr Thr Thr
65 70 75 80
Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr
85 90 95
Thr Ala Thr Cys Gly Thr Cys Gly Thr Cys Thr Thr Ala Ala Ala Thr
100 105 110
Ala Thr Gly Gly Thr Cys Thr Thr Ala Ala Ala Ala Gly Ala Gly Gly
115 120 125
Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Thr
130 135 140
Gly Thr Thr Cys Cys Ala Gly Ala Ala Thr Cys Thr Ala Thr Gly Ala
145 150 155 160
Gly Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr Ala Thr Ala Gly Ala Cys Ala
165 170 175
Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Ala Ala Thr Cys Thr Gly Cys Thr
180 185 190
Gly Thr Cys Gly Ala Thr Gly Thr Cys Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly
195 200 205
Ala Thr Cys Ala Thr Thr Thr Thr Gly Thr Cys Ala Thr Thr Ala Thr
210 215 220
Thr Gly Ala Ala Cys Thr Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr Thr Cys
225 230 235 240
Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Thr Gly Gly Thr Ala Gly Ala Thr Gly
245 250 255
Gly Thr Thr Gly Gly Thr Ala Thr Gly Gly Ala Thr Ala Cys Cys Ala
260 265 270
Cys Cys Ala Thr Ala Gly Cys Ala Ala Cys Gly Ala Gly Cys Ala Gly
275 280 285
Gly Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Ala Cys Gly Cys Thr Gly
290 295 300
Cys Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala Cys
305 310 315 320
Thr Cys Ala Ala Ala Ala Gly Gly Cys Ala Ala Thr Ala Gly Ala Thr
325 330 335
Gly Gly Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Ala Ala Thr Ala Ala Ala Gly
340 345 350
Thr Cys Ala Ala Cys Thr Cys Gly Ala Thr Cys Ala Thr Thr Gly Ala
355 360 365
Cys Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Cys Thr Cys Ala Ala
370 375 380
Thr Thr Thr Gly Ala Gly Gly Cys Cys Gly Thr Thr Gly Gly Ala Ala
385 390 395 400
Gly Gly Gly Ala Ala Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Thr
405 410 415
Ala Gly Ala Ala Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Thr Ala Gly Ala Gly
420 425 430
Ala Ala Thr Thr Thr Ala Ala Ala Cys Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala
435 440 445
Thr Gly Gly Ala Ala Gly Ala Cys Gly Gly Ala Thr Thr Thr Cys Thr
450 455 460
Ala Gly Ala Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Thr Ala Thr
465 470 475 480
Ala Ala Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Gly
485 490 495
Thr Thr Cys Thr Cys Ala Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala
500 505 510
Gly Ala Gly Ala Ala Cys Thr Cys Thr Ala Gly Ala Cys Thr Thr Thr
515 520 525
Cys Ala Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Ala Ala Thr Gly Thr Cys Ala
530 535 540
Ala Gly Ala Ala Cys Cys Thr Thr Thr Ala Cys Gly Ala Cys Ala Ala
545 550 555 560
Gly Gly Thr Cys Cys Gly Ala Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Thr Thr
565 570 575
Ala Gly Gly Gly Ala Thr Ala Ala Thr Gly Cys Ala Ala Ala Gly Gly
580 585 590
Ala Gly Cys Thr Thr Gly Gly Thr Ala Ala Cys Gly Gly Thr Thr Gly
595 600 605
Thr
Claims (15)
- 미네랄오일 : 계면활성제가 70 ~ 90 : 30 ~ 10 포함되고, 수상의 비율이 30 이상인 것인, 유중수 (W/O) 에멀젼 백신보조제.
- 제1항에 있어서, 상기 미네랄오일 대 계면활성제가 90 : 10인 것인, 유중수 에멀젼 백신보조제.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 미네랄오일이 MARCOL 52® (Esso, France), MARCOL 82® (Esso, France), DRAKEOL 6VR® (Penreco), Castor Oil, 스쿠알렌 (Squalan), 폴리데센 (Polydecene), Sontax 55, Vestain A50B 및 Whitertrex 307으로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 유중수 에멀젼 백신보조제.
- 제3항에 있어서, 상기 계면활성제가 비이온성 친수성 계면활성제로서, 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 모노에스테르 (ethoxylatedfatty acid monoester of sorbitan), 에톡시레이티드 소르비탄 모노라우레이ㅌ (ethoxylated sorbitan mono laurate), 에톡시레이티드 소르비탄 모노스테아레이트 (ethoxylated sorbitan mono stearate), 에톡시레이티드 소르비탄 모노올레이트 (ethoxylated sorbitan mono oleate), 소르비탄의 에톡시레이티드 지방산 트리에스테르 (ethoxylated fatty acid triesters of sorbitan), 에톡시레이티드 지방 알콜 (ethoxylated fatty alcohols), 에톡시레이티드 지방산 (ethoxylated fatty acids), 에톡시레이티드 캐스터 오일 (ethoxylated castor oil), 에톡시레이티드 소르비탄 모노팔미테이트 (ethoxylated sorbitan monopalmitate) 및 비이온성 블록공중합체 (non-ionic block copolymers)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것이거나;
상기 계면활성제가 비이온성 친유성 계면활성제로서, 소르비탄의 지방산 에스테르 (fatty acid esters of sorbitan), 만나이드의 지방산 에스테르 (fatty acid esters of mannide), 및 만나이드의 에톡시레이티드 지방산 (ethoxylated fatty acid esters of mannide)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것이거나; 또는
상기 계면활성제가 안정화제로서, 레시틴 (lecithin), 스테아릭산 (stearic acid), 스테라일 알콜 (stearyl alcohol), 콜레스테롤 (cholesterol), 옥타노익산 (octanoic acid), 콜레스테릴 리놀레이트 (cholesteryl linoleate), 콜레스테릴 올레이트 (cholesteryl oleate), 팔미틱산 (palmitic acid), 라우릭산 (lauric acid), 트리톤 X-100, 트리톤 X-102, 및 옥틸 B-D-글루코피라노시드 (octyl B-D-Glucopyranoside)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 것이거나; 및
상기 비이온성 친수성 계면활성제, 상기 비이온성 친유성 계면활성제 및 상기 안정화제에서 선택된 하나 이상의 계면활성제를 포함하는 것인,
유중수 에멀젼 백신보조제. - 제3항에 있어서, 상기 계면활성제가, 소르비탄의 지방상 에스테르 (fatty acid esters of sorbitan), 만나이드의 지방산 에스테르 (fatty acid esters of mannide), 및 만나이드의 에톡시레이티드 지방산 에스테르 (ethoxylated fatty acid esters of mannide)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것인, 유중수 에멀젼 백신보조제.
- 제1항 또는 제2항의 백신보조제 및 항원단백질을 포함하는 백신조성물.
- 제3항의 백신보조제 및 항원단백질을 포함하는 백신조성물.
- 제4항의 백신보조제 및 항원단백질을 포함하는 백신조성물.
- 제5항의 백신보조제 및 항원단백질을 포함하는 백신조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 항원단백질이 조류인플루엔자 (AI) 바이러스 항원, 뉴캐슬병 (ND) 바이러스 항원 또는 닭산란율저하증 (EDS) 바이러스 항원인 것인, 백신 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 항원단백질이 조류인플루엔자 바이러스 항원, 뉴캐슬병 바이러스 항원 또는 닭산란율저하증 바이러스 항원인 것인, 백신 조성물.
- 제8항에 있어서, 상기 항원단백질이 조류인플루엔자 바이러스 항원, 뉴캐슬병 바이러스 항원 또는 닭산란율저하증 바이러스 항원인 것인, 백신 조성물.
- 제9항에 있어서, 상기 항원단백질이 조류인플루엔자 바이러스 항원, 뉴캐슬병 바이러스 항원 또는 닭산란율저하증 바이러스 항원인 것인, 백신 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 백신보조제 대 항원단백질이 7:3 (w/w)인 것인, 백신 조성물.
- 제6항의 백신조성물을 면역화가 필요한 동물에 투여하는 것을 포함하여, 동물을 면역화 하는 방법.
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN117100851A (zh) * | 2023-10-23 | 2023-11-24 | 成都依思康生物科技有限公司 | 一种佐剂、疫苗组合物及其制备方法和应用 |
| WO2024133656A1 (en) * | 2022-12-22 | 2024-06-27 | Ceva Sante Animale | Oil adjuvant compositions and vaccine emulsions comprising such oil adjuvant compositions |
Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| KR19980703215A (ko) | 1995-03-28 | 1998-10-15 | 비.제이.라이츠 | 목표물 탐지용 배열체 |
-
2018
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