KR20200059902A - 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항균 효능 및 노인취 개선 효능을 갖고 피부자극이 없는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
즉, 창이자 추출물을 유효성분 또는 창이자 추출물에 레몬그라스 오일 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연물을 이용하여 산화방지 및 항균효과로 노인취 개선 효과와 이취 저해 효과를 동시에 가지면서도 피부 자극이 없는 노인취 개선용 화장료 조성물을 제공하게 된다.

Description

천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물 {Cosmetic composition for improving the odor of the elderly using natural products}

본 발명은 항균 효능 및 노인취 개선 효능을 갖고 피부자극이 없는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 노인취라고 부르는 체취는 나이가 들면서 발생하는 노화현상의 일종으로 나이가 들면서 주로 겨드랑이나 사타구니등 전신에 발생하여 어느 정도 나이가 든 연령층에게는 모두 발생하기 때문에 기피의 대상이 되는 등 심각한 고민에 빠지게 할 뿐만 아니라 삶의 질이 현저히 떨어지게 하여 중장년층부터 노년층에 이르기까지 제일 큰 관심사 중의 하나라 할 수 있다.

이와 같은 노인취는 나이가 듦에 따라 호르몬의 변화와 신진대사가 원활하지 않아 노폐물질이 많이 만들어지며, 땀샘과 피지선의 분비물의 성분변화로 저급지방산<헥사디세노산>(9-hexadecenoic acid)이 분비되며, 불포화 지방산이 분해되면서 노넨알데하이드(Nonenaldehyde, C9H16O)가 생기면 악취가 난다. 또한 분비된 물질은 항산화능력의 저하와 활성산소 및 미생물에 의한 산화반응의 활성화로 노네랄이 생성되어 노인취가 나는 것으로 알려져있다. 주로 고령층의 활동이 늘어나면서 노인들은 이를 개선하기 위해 각종 노력을 기울이고 있다. 노인냄새가 심하게 나는 부위는 머리, 목뒷부근, 가슴, 겨드랑이, 등, 귀 뒷부분에 해당되며, 상기의 부위에 9-핵사데센산의 분비가 왕성하기 때문으로 알려져 있습니다. 따라서 노인성 체취의 원인물질인 노네랄(Nonenal=C9H16O)을 제거하고 피부상재 부패균을 억제할 수 있는 천연 소재들의 개발이 필요한 실정이다.

나이가 들면서 발생하는 노인취의 발생 원인으로는 첫째, 가령에 따라 호르몬과 항산화능력의 저하로 분비되는 성분중 저급지방의 분비가 늘어나며 지속적으로 산화에 노출되면서 알데하이드형태의 악취물질이 형성되며, 둘째, 미생물(Staphylococcus epidermis (KCTC 1917) 등의 혐기성 Bacteria)에 의해 분해산물중 이취 물질이 생기게된다.

또한, 피부노화에 모공이 확장함에 따라 의해 생성된 모공의 모공충 및 세균 등에의해서도 이취의 원인이 될 수가 있다.

본 발명에서는 9-핵사데센산함유 피지분비가 늘어나고 활성산소와 붙어서 산화되어 과산화지질이 되면서 피부상재균이 과산화지질를 먹고, 분해시킴에따라 피부상재균이 2-노네날이 함유된 물질을 배설해서 땀, 체취와 섞여 노인냄새가 발생하기 때문에 노인취를 저해하는 기작은 여러 가지가 있다고 할 수 있다.

한편, 창이자(도꼬마리)는 약용식물의 일종인 도꼬마리의 열매로서 우리나라의 각지에 서식하는 대표적인 식물이고, 1년생 초본으로 키는 50 내지 100㎝로 근경을 뻗으며 가지가 많이 갈라지며 털이 있다. 8~9월에 원추상으로 달리는 꽃은 황색이다. 길이 1cm정도의 타원형인 열매는 갈고리 같은 돌기가 있고 그 속에 2개의 수과가 들어 있다. 갈고리 같은 돌기로 다른 물체에 잘 붙는다.

도꼬마리는 풍한을 없애는 약재로 축농증, 비염, 두통, 발열, 기침, 사지동통마비, 굴신이 자유스럽지 못할 때와 피부 가려움증, 중이염에 사용 되어지는 약재로서, 약리작용은 정유와 알칼로이드에 뾰족뾰족 가시가 돋아 있는 도꼬마리는 산이나 들에서 접할 수 있는 약재이며, 각종 피부질환에 좋은 것으로 알려져 있고, 실제로 피부의 가려움증과 염증반응을 없애주는 효과가 있어 한약재로 많이 사용되고 있다

본 발명자들은 국내 천연자원으로부터 노인취를 예방 또는 개선할 수 있는 소재를 탐색 하던 중, 도꼬마리열매인 창이자 추출물로부터 노인취 개선 효과가 있음을 최초로 확인하고 일련의 실험을 완성하였고 독성은 나타내지 않는 매우 안전한 물질임을 알 수 있었다.

또, 레몬그라스는 이름에서 느껴지듯이 레몬 향이 나는 허브다. 레몬그라스의 억새를 닮은 잎은 찢어서 비벼보면 레몬 향기가 난다. 이 향기의 주성분은 레몬과 같은 '시트랄(Citral)'로 정유의 70~80%를 차지한다. 레몬그라스의 정유는 약품, 향수, 비누, 린스, 캔디에 사용된다. 복통, 설사, 두통, 발열의 치료에도 쓰이는데 살균작용이 있는 것으로 알려져 있다.

레몬그라스는 한여름의 해가 잘 드는 사질토양에서 쉽게 자란다. 잎을 말려서 실내를 정화시키는 방향제인 포푸리(Potpourri)나 목욕제로 사용해도 좋다. 향료 채취 목적으로 과테말라, 브라질, 마다가스카르, 일본의 가고시마 등에서 대량으로 재배하고 있다.

KR 제10-0446114호 KR 제10-1221104호 (특허공개문헌 0003) KR 제10-2009-0125588호 (특허공개문헌 0004) KR 제10-2010-0129962호 (특허공개문헌 0005) KR 제10-2013-0086395호

본 발명은 우수한 노인취 개선 효과와 동시에 피부 자극성이 없는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 창이자 추출물 및 레몬그라스 오일을 이용하여 피부 이취개선 또는 노인취 개선 화장료 조성물을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.

본 발명은 창이자 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물을 특징으로 한다.

창이자 추출물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 10.0 중량% 함유한다.

상기 창이자 추출물에 레몬그라스 오일 추출물을 유효성분으로 포함한다.

상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 창이자 추출물은 0.01 내지 10.0 중량%, 레몬그라스 오일 추출물은 0.01 내지 0.001~10.0 중량% 함유한다.

상기 창이자 추출물은, a) 창이자를 에탄올로 추출하여 에탄올 추출물을 수득하는 단계; 및 b) 상기 에탄올 추출물에 헥산과 에칠아세테이트를 순차적으로 가하고 분획하여 추출물을 수득하는 단계;를 포함한다.

상기 a)단계는 40 내지 100℃에서 5 내지 48시간 동안 수행하며, 상기 b)단계는 아세테히트 분획물을 1 내지 5회 분획하여 수득하는 단계를 포함한다.

상기 화장료 조성물은; 영양화장수, 유연화장수, 크림, 에센스, 클렌징폼, 클렌징젤, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 콘실 스틱, 용액, 겔, 고체, 현탁액, 마이크로에멀전, 마이크로 캡슐, 미세과립구, 이온형 소낭 분산제, 비이온형 소낭분산제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화된 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물을 특징으로 한다.

본 발명에 의한 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물은 창이자 추출물은 헥사데세노산의 상화를 저해하고 레몬그라스추출물은 지방산, 지방알콜을 포함한 분비물을 억제하여 항균 효능 및 노인취 개선 효능을 갖고 피부자극이 없는 새로운 노인취 개선용 화장료로 이용할 수 있는 장점을 갖는다.

이하 실시예들을 참조하여 본 발명의 노인취 개선용 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 대하여 상세히 설명한다. 다음에 소개되는 실시예들은 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 예로서 제공되는 것이다. 따라서, 본 발명은 이하 제시되는 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 또한 명세서 전체에 걸쳐서 동일한 참조번호들은 동일한 구성요소들을 나타낸다.

본 발명은 창이자 추출물 및 레몬그라스 오일 추출물을 이용하여 항균 효능 및 노인취 개선 효능을 갖고 피부자극이 없는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 창이자 추출물로 표시되는 노인취 개선용 화장료 조성물은 헥사데세노산을 노인취의 주성분인 노네랄로의 산화를 억제하여 노네랄형성을 효과적으로 저해함으로써 우수한 노인취 개선 효과를 나타낼 수 있다.

이러한 노인취 개선용 화장료 조성물은 창이자로부터 추출된 것일 수 있으며, 예를 들어, 창이자로부터 수득한 추출물을 분획 및 정제하여 고순도의 추출물을 제공함으로써, 우수한 노인취의 예방 및 개선 효과를 동시에 나타내면서도 피부에 자극을 주지 않을 수 있다.

또한, 레몬그라스 오일은 상재균에 의한 노네랄형성을 저해하여 노인취 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 일 예에 있어, 창이자 추출물로 표시되는 노인취 개선용 조성물의 첨가량은, 항산화효과 및 항균 효과가 발현될 수 있도록 하되 제공하고자 하는 화장료 조성물의 물성을 헤치지 않으면서도 산화 저해 효과가 발현될 정도라면 특별히 한정하진 않으나, 일 구체예로, 노인취 개선용 조성물의 첨가량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10.0 중량%일 수 있으며, 보다 좋게는 0.01 내지 5.0 중량%일 수 있으며, 더욱 좋게는 0.1 내지 2.0 중량%일 수 있으나 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 레몬그라스 오일 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 10.0 중량%일 수 있으며 더욱 좋게는 0.05 내지 2.0 중량%일 수 있으나 반드시 이에 제한 되는 것은 아니다.

노인취 개선용 피부 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 또는 가용화 제형을 모두 포함하는 것일 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림 또는 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태 및 씻어내는 타입인 클렌징류로 제조될 수 있다.

적합한 노인취 개선용 화장품 제형으로서 가용화 제형으로는 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물일 수 있으며, 전달 제형으로는 수상에 유상을 분산시켜 얻은 수중유형 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구, 이온형 또는 비이온형의 소낭 분산제(리포좀)의 제형일 수 있다. 최종적인 화장품의 제형으로는 클렌징 젤, 클렌징 폼, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 폼(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 예에 따른 노인취 개선용 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 더 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 예에 따른 노인취 개선용 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 샴푸, 클렌징 폼, 바디로션, 스프레이 등의 제형을 포함한다.

한편, 앞서 언급한 바와 같이, 창이자로 부터 수득한 추출물은 분획 및 정제하여 수득한 것일 수 있는 바, 창이자로부터 추출되는 노인취 개선용 성분을 추출하는 방법에 대하여 보다 상세히 설명한다.

본 발명에 일 예에 따른 유효성분의 추출 방법은 a) 창이자를 에탄올로 추출하여 에탄올 추출물을 수득하는 단계; 및 b) 상기 에탄올 추출물에 헥산 및 에틸 아세테이트를 순차적으로 가하고 분획하여 분획물을 포함하는 에칠아세테이트 분획물을 수득하는 단계;를 포함할 수 있다.

상기 추출 방법을 통해 우수한 노인취 개선효과를 동시에 가지면서도 피부 자극성이 없는 창이자 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 일 예에 있어, a) 단계의 창이자는 야생에서 채취한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

a) 단계의 에탄올은 에탄올을 함유하고 있다면 특별히 한정하진 않으나, 순도 70 내지 100 중량%, 보다 좋게는 75 내지 100 중량%, 더욱 좋게는 95 내지 100 중량%인 에탄올을 이용하는 것이 유효성분을 보다 효과적으로 추출함에 있어 바람직하다.

에탄올의 첨가량은 특별히 한정하는 것은 아니나, 창이자의 부피에 대하여 10 부피배로 첨가하여 추출할 수 있다.

아울러, 본 발명의 일 예에 있어 a)단계는 40 내지 100℃에서 5 내지 48시간 동안, 보다 좋게는 40 내지 60℃에서 10 내지 20시간 동안 수행되는 것이 더욱 잘 추출될 수 있다.

또한, 추출횟수는 1 내지 5회 반복 추출하는 것이 바람직하고, 2 내지 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출 방법은 열수추출, 중탕 추출, 초음파 추출 및 환류 추출 등 당 업계의 통상적인 추출방법은 모두 사용될 수 있다.

상기 b)단계는 a)단계를 통해 추출된 추출물을 추출물의 물성에 따라 분획하여 1차 정제하는 단계로, 우선 헥산을 이용해 에탄올 추출물을 1차 추출함으로써 극성이 극히 낮은 비극성 불순물을 제거할 수 있다. 헥산을 이용한 분획횟수는 특별히 제한하는 것은 아니나 1 내지 5회, 보다 좋게는 2 내지 3회 반복 분획하는 것이 바람직하다.

다음으로, 에칠아세테이트를 이용하여 헥산으로 추출하고 남은 나머지 여액을 다시 분획하는데, 이로부터 본 발명에서 수득하고자 하는 추출물을 포함하는 분획물을 얻을 수 있다. 이 역시 특별히 제한하는 것은 아니나, 1 내지 5회, 보다 좋게는 2 내지 3회 반복 분획하는 것이 바람직하다.

대전시 소재 백제당한약방에서 창이자(Inula britannica) 5kg을 구입한 후 순도 95% 에탄올 50L를 가하고 추출기(KSP-248L)를 이용하여 79±2℃에서 3시간 환류 추출하였다. 수득한 추출액은 거름망 필터 후 감압 농축기(EYELA N-12)를 사용하여 에탄올을 증발시켜 창이자 에탄올 추출물 270g을 제조하였다.

다음으로, 창이자 에탄올 추출물 270g을 물 8L에 현탁하고 헥산(8L)을 가한 후 분액 여과기를 사용하여 3회 추출 후 나머지 수층을 다시 에칠아세테이트(8L)을 가하여 3회 추출하였다. 나머지 수층에 물(2L)을 추가적으로 가하고 에틸 아세테이트(8L)로 3회 추출하였다. 헥산층 및 에틸아세테이트층을 각각 농축함으로써, 헥산 분획물 90g 및 에틸아세테이트 분획물 86g을 수득하였다.

아래의 실시예에서처럼 효능 활성 시험을 통하여 창이자 추출물이 노인취개선 활성을 나타냄을 알수 있었다.

창이자 추출물의 DPPH

(1)DPPH radical 소거활성

DPPH radical 소거활성은 96-well plate에 ethanol에 녹인 150μM DPPH 용액 198 μL와 DMSO에 녹인 각 시료를 농도별로 2μL 첨가하였으며, 이때 대조군에는 시료 대신 DMSO를 2μL 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 반응시킨 후, ELISA reader를 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH 라디칼 소거활성(%)을 나타내었으며, 추출물임을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

창이자 추출물 소재의 DPPH라디칼 저해활성을 규명하기 위하여 시료와 DPPH 용액을 반응시킨 후 free radical 소거활성을 IC50 값으로 구하였다. 그 결과 아래의 소거활성 그래프 및 표 1과 같이 창이자 추출물은 농도 의존적으로 DPPH라디칼을 저해하였으며 IC₅₀ 값은 3.01 mg/ml임을 확인하였다.

즉, 창이자 추출물을 각각 0.781, 1.562, 3.125, 6.25 mg/ml을 처리하여 각각의 DPPH radical 소거활성을 측정한 결과, 창이자 추출물의 무처리구를 100%로 보았을 때, 0.781 mg/ml 처리구에서는 67.85%, 1.562 mg/ml 처리구에서는 61.26%, 3.125 mg/ml 처리구에서는 46.81%, 6.25 mg/ml처리구에서는 30.71%의 값을 나타내 농도의존적으로 DPPH radical이 소거됨을 확인하였다. 이상의 결과로부터 계산한 결과 IC₅₀값은 3.014 mg/ml 임을 확인하였다.

한편, 대조구인 Vitamin C 처리구는 각각 3.125, 6,250, 12.5, 25.0 uM을 처리하여 각각의 DPPH radical 소거활성을 조사하였다, 그 결과, 창이자 추출물 무처리구를 100%로 보았을 때, vitamin C 3.125 uM 처리구에서는 84.07 ± 3.30%, 6.25 uM 처리구에서는 56.04 ± 0.96%, 12.5 uM 처리구에서는 23.35 ± 2.89%, 25 uM 처리구에서는 3.02 ± 1.26%의 DPPH radical 소거활성을 보였다. 이상의 결과로부터 계산한 결과 IC₅₀값은 10.189 ug/ml 임을 확인하였다.

[창이자 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성 그래프]

[Vimin C의 DPPH 라디칼 소거활성 그래프]

창이자 추출물의 DPPH radical 효능(IC₅₀)

시료	창이자 추출물 (mg/ml)
농도	6.25	3.125	1.562	0.781	0
b	0.1753	0.1957	0.2358	0.3078	0.4359
	0.1698	0.2024	0.2583	0.3196	0.4403
	0.1791	0.1993	0.2526	0.3208	0.0478
b'	0.0504	0.0493	0.0492	0.0482	0.0478
b-b'	0.1249	0.1464	0.2046	0.2596	0.3881
	0.1194	0.1531	0.2091	0.2714	0.3925
	0.1287	0.1500	0.2034	0.2726	0.3796
%	32.30	37.86	52.90	67.13	100.35
	30.87	39.59	54.07	70.18	101.49
	33.28	38.79	52.59	70.49	98.16
평균	32.15	38.74	53.19	69.26	100
STDEVS	1.21	0.87	0.78	1.86	1.70
IC50	3014

피부 상재균에대한 항균력

○ 배양조건

선정한 시료의 방부력을 측정하기 위하여 Kirby-Bauer법에 의한 원판 확산법을 이용하였다. 이 방법은 일반적 항균 측정법으로써 여러 개의 원판에 기지농도의 항균물질 용액을 묻혀 시험균주가 도포된 고체 한천배지에 올려놓고 배양후 주변에 형성된 투명한 면적의 크기를 측정하는 것이다. 기준물질로는 Triclosan을 사용하였고 이때 균주로서는 Staphylococcus epidermis (KCTC 1917), Propionibacterium acnes(KCTC 3314)의 혐기성 Bacteria가 사용되었다.

Propionibacterium acnes의 배양 배지는 Reinforced Clostridial(RC) 배지(Difco. USA)를 사용하였으며, 동결 건조된 Propionibacterium acnes 는 실험 3일 전에 활성화 시켰으며, 균을 배양 배지에 접종한 후 Anaerobic Standard Incubator(MITSUBISHI, apan)에서 AnaeroGen^TM 2.5L(Oxoid, UK)을 사용하였다. Incubation Container를 밀봉하여 37℃ Incubator에서 3일간 혐기성 상태에서 배양하였다. Container내부의 혐기성(anaerobic) 상태는 Anaerobic indicator(Thermo, UK)를 사용하여 확인하였다.

아래의 표 2와 같이 호기성 균주인 Staphylococcus epidermis는 Tryptic Soy Agar(Difco. USA)를 사용하였으며, 균을 접종한 후 37℃ Incubator에서 24시간 배양하였다.

균주명	배지명	배양조건
Propionibacterium acnes	RC	37℃ (72 시간)
Staphylococcus epidermis	TSA	37℃ (24 시간)

○ 균액의 조제

약 5g의 유리 구슬이 포함된 멸균 시험관에 10ml의 희석액을 분주한다. 2-2의 조건에서 배양된 각 Agar Medium에서 4~5개의 콜로니를 취하여 10ml의 희석액에 넣고 최대 3분간 전체적으로 균질화 되도록 Vortexing을 해 준다.

이때 McFarland 탁도 0.5로 맞추어 균수가 세균은 1Х10⁷-1Х10⁸ cfu/ml가 되도록 한다.

○ Paper disc 시험

균액을 조제한 후, Staphylococcus epidermis (KCTC 1917)는 Mueller Hinton Agar(Difco USA), Propionibacterium acnes (KCTC 3314)는 Reinforced Clostridial(RC) 배지(Difco. USA)를 사용하여 평판 배지를 만든다.

이후 균액 0.5ml를 45℃로 식힌 각각의 배지 5ml에 섞은 후 기존에 만든 평판배지에 추가로 부어서 균주별 배지를 준비한다.

아래의 표 3은 균주별 배지 위에 Paper disc(ø;8mm,ADVANTEC, Japan)를 올려놓고 0.5%의 HCO60(Hydrogenated Caster Oil)을 이용해 각 농도별로 희석한 편백오일(100%,50%,20% of 5% HCO60), Lemon glass oil(100%,50%,20% of 5% HCO60), Tea tree oil(100%,50%,20% of 5% HCO60) 계지황(100%,50%), Triclosan(0.3%)을 각 40㎕씩 흡수 시켰다. 각 시료가 처리된 plate를 Incubator에서 Staphylococcus epidermis (KCTC 1917)는 37℃에서 24시간, Propionibacterium acnes (KCTC 3314)는 37℃ 혐기적 조건(Anaerobic)에서 72시간 배양 후 Filter paper disc 주위의 clear zone의 직경 크기를 측정하였다.

○ clear zone(mm)은 다음 식에 따라서 계산하였다.

W= (T-D2)

W : Clear zone(mm)

T : 시료와 저지대의 전체 지름

D :시료의 지름

STRAINS	Media	Culture Temperature	Incubation Time
P.acnes(KCTC 3314)	Reinforced Clostridial mdium	37℃	72시간
S.epidermis(KCTC1917)	Mueller Hinton medium	37℃	24시간

각 천연 물질에 대한 항균력은 원액 100%부터 20%까지의 농도별로 희석하여 진행하였으며 에센설 오일의 희석에 사용되는 HCO60의 항균력에 기인한 위양성의 결과를 방지하기 위해 각 실험마다 Control을 설정하여 실험의 정확도를 기하고자 하였다. Staphylococcus epidermis (KCTC 1917)에 대한 Paper diffusion method 시험 결과 Paper disk법을 사용한 각 균주에 대한 항균활성은 시료의 농도가 증가할수록 Clear zone의 크기가 증가 하였는데 우선 레몬그라스 오일(100%, 50%, 20%)의 경우 전반적으로 환이 생성되지 않고 배지의 색상이 변하여 추가적으로 배지 표면에 대한 미생물 시험 결과 미생물의 증식이 억제된 것으로 판명되어 항균력이 강해 전체적으로 9cm Petridish반경을 벗어난 것으로 판단된다

창이자 추출물과 레몬그라스 추출물 함유제품의 인체 노인취 개선효과

노인취 개선효과를 확인하기 위하여 50~70세 여성 10인을 대상으로 <제제예 1>의 화장품을 아침, 점심, 저녁으로 1일 3회, 8주 동안 노인취 부위에 충분히 바르게 한 후 노인취의 개선효과를 조사한 결과 표4와 같이 개선효과가 뚜렷히 나타났다.

창이자의 노인취 개선효과

구 분		1주	4주	8주
무처리		-	-	-
창이자 추출물처리	여성 -1	-	±	+
	여성 -2	-	±	+
	여성 -3	-	±	+
	여성 -4	-	±	+ +
	여성 -5	-	±	+
	여성 -6	-	±	+ +
	여성 -7	-	±	+
	여성 -8	-	±	+
	여성 -9	-	±	+ +
	여성 -10	-	±	+

참조 : 개선증상없음 “-” 약간개선증상 “±” 개선효과 있음 “+”

창이자 추출물의 인체 첩포 시험

1.시험방법

본 인체적용시험의 경우 24시간 패치 이후 3차에 걸친 판독과정으로 자극 반응을 평가하였다. 24시간 패치의 경우 일반적으로 2회 판독을 실시하나 본 시험의 경우 반응의 강도 추이를 반복적이고 지속적으로 관찰하여 Acute & delayed type의 자극과 감작을 평가함으로 단회첩포시험이 가지는 기술적 한계를 극복하기 위해 총 3회 판독을 선택하여 평가하였다. 본 시험에 사용된 방법은 단회밀폐 첩포시험으로 피부 자극 반응을 유발하는 패치부착단계와 피부 자극 및 감작을 전문가에 의한 육안평가 단계로 구분하여 시험을 수행하였다. 시료는 창이자 추출물을 0.5%(1,3BG)농도로하여 시료로 하였다.

가. 첩포부착 단계(0일차)

① 피부일차자극 패치평가를 위해 특수한 첩포(IQ series/ IQ Ultra Chamber) 를 사용하였다. IQ Ultra Chamber는 폭 68mm, 길이 142mm의 직사각형 모양의 무자극성 접착테이프 위에 불활성 polyethylene chamber가 접착테두리를 갖고 있는 이중구조이다. 패치 하나 당 2열로 구성되어 있으며 각 열당 5개씩 총 10개의 시험물질을 Loading할 수 있는 chamber가 있으며 각 chamber volume은 최대 60 microliter, 면적은 9x9mm로 구성되어 있다. 각 chamber간 간격은 열간 12mm 행간 20mm로 지정되어 있다.

② 시험시료는 Loading 한 시료가 패치 밖으로 흘러 넘치지 않을 정도인 20~25microliter를 사용하였고, 액상 시료의 경우 특별히 제공되는 필터에 적신 후 시험하였다.

③ 패치 부착은 피험자의 등 부위에 Loading한 시험시료가 시험부위에 균일하게 퍼져서 접촉될 수 있도록 하였다.

나. 육안평가 단계

① 패치 부착 24시간 후(1일차)

- 패치 부착 24시간 후 부착한 패치를 제거하고 미네랄 오일을 적신 부드러운 솜으로 시험 부위를 깨끗이 닦아낸 후 마킹 펜을 이용하여 시험부위를 표시하였다.

- 패치 제거 30분~1시간 후 2명의 전문가에 의한 시험부위의 육안평가를 실시하여 자극 정도를 평가지에 기록하였다.

② 패치 제거 24시간 후(2일차)

- 패치 제거 24시간 후 시험 부위를 전문가 2인에 의해 육안평가 하였으며 피부 자극 정도를 평가지에 기록하였다.

③ 패치 제거 48시간 후(3일차)

- 패치 제거 48시간 후 시험 부위를 전문가 2인에 의해 육안평가 하였으며 피부 자극 정도를 평가지에 기록하였다.

2. 육안평가 방법

자극반응의 평가기준은 국제접촉피부염연구그룹(ICDRG)의 판독기준을 응용하여 Frosch & Kligman이 고안한 평가법을 기준으로 사용하였으며 평가기준은 표 5에 나타내었다. 육안 평가의 객관성을 확보하기 위해 피부 자극정도는 아래 사진을 참조로 판정하였으며 그 대표 사진은 아래에 나타내었다.

피부 자극 평가기준

자극정도	Score	피부 증상 혹은 징후의 형태
±	0.5	Doubtful skin sign such as weak erythema
+	1	Slight erythema, either spotty or diffuse
++	2	Moderate uniform erythema
+++	3	Intense erythema with edema
++++	4	Intense erythema with edema & vesicles
- (negative)	-	음성 반응
IR (irritant reaction)	-	기타 여러 형태의 자극반응 ( 접착자극을 포함 )
NT (not tested)	-	자극반응의 발생 혹은 여타 이유에 의해 검사중단

[인체 패치 시험에 의한 피부 자극 반응의 대표 사진]

A B

C D

* A: 1(+) 등급, B: 2(++)등급, C: 3(+++)등급, D: 4(++++)등급

3. 피부 자극도 계산방법

판정기준에 의하여 총 3회 평가한 자극 정도는 다음 피부 자극 지수 계산 공식에 따라 평균 자극 지수를 계산하였으며 평균 자극 지수에 따른 판정기준은 Table 3.에 나타내었다. 평균 자극 지수와 표준편차를 이용한 제품에 따른 safety zone(Table 4. 참조)을 근거로 z ≤ 1.00인 평균반응지수 R 값이 표 6에 나타난 값 미만인 경우 최종 제품은 안전한 제품으로 예측할 수 있는 것으로 판정하고 그 이상인 경우 실 사용 시 피부 자극 유발 가능성이 높은 제품으로 예측하였다.

*평균 피부 자극 지수=(A x 100)/(B x C x D)

A: 매 판독 시 관찰 값의 합 - Σ(Each Score; 0.5, 1, 2, 3, 4)

B: 시험에 사용된 피부 자극 최대 평가 점수 4

C: 시험에 참여한 전체 피험자 수

D: 총 판독 차수 3

피부 자극도 판정등급

평균 피부 자극 지수	판정 등급
0.00 ~ 0.86	Slight grade
0.87 ~ 2.43	Mild grade
2.42 ~ 3.43	Moderate grade
3.44 ~	Severe grade

4. 제품 출시에 따른 일차 자극 유발 가능성 예측

화장품은 제품 자체의 내용물과 피부 간의 상호관계에 의해서만 자극이 유발되는 것이 아니라 실제 제품 사용의 행태, 사용자의 인종, 기후, 피험자 피부상태 등에 따라서 다양한 요인에 의해 피부 자극이 유발될 수 있는 가능성이 존재하기 때문에 안전성 시험을 예측 시험(Prediction test)이라 명명하고 안전성은 아무리 강조해도 지나치지 않다.

이러한 다양한 요인에 의해 유발되는 화장품에 의한 피부 자극 현상으로 인해 현재 실시되고 있는 일차 자극 패치 시험의 경우 세계적으로 통용되는 제품의 적부 판정에 대한 기준은 존재하지 않는다. 그러나 최근 연구결과에 의하면 한국여성을 대상으로 한 10년간의 패치결과를 토대로 실제 제품 사용을 고려한 safety zone을 설정하여 이를 자극 유발 가능성의 기준으로 사용해도 무방할 것으로 판단된다.

또한, 일반적으로 50명 이하의 피험자를 대상으로 하는 시험에서 단회첩포시험 판독시 총 피험자의 20%를 초과하는 빈도로 반응이 출현하는 시험제품 혹은 매회 판독시 +2 이상 자극 반응이 총 피험자의 10% 이상에서 관찰된 시험제품의 경우 유의하게 자극을 유발할 가능성이 높은 시험제품으로 예측할 수 있다.

따라서, 본 시험의 경우 safety zone(표7), 피험자 20% 초과 빈도로 자극 유발 제품, 매회 판독시 +2 이상 자극 반응이 총 피험자의 10% 이상에서 관찰되는 시험제품, 이 세가지 경우 중 하나에 해당되는 경우 자극 유발 가능성이 있는 시험제품으로 판정하였으며 이 경우인 시험제품을 '부적합'으로 판정하였다.

인체 일차자극 시험에 의한 실사용 제품을 고려한 safety zone

Product category		Safety zone
		z ≤ 1.00인 평균 반응지수 R 값
Leave -on	Toners Lotions and creams Foundations Sunscreen creams Lip products Body lotions and creams Face powders, eye shadows Eye liners, mascaras	0.87 1.12 0.97 0.83 0.98 0.94 1.02 2.96
Tissue -off	Make-up removers Packs and massage creams	1.36 1.33
Wash -off	Facial cleansers Soap and bath Shampoos, rinses and hair treatments	3.20 3.98 2.82

○ 피험자 20% 초과 빈도로 자극 유발 제품: 30 x 0.2=6.0 따라서 본 시험의 경우 6명 이상의 피험자에게서 자극이 유발된 제품

○ 매회 판독시 +2이상 자극 반응이 총 피험자의 10% 이상에서 관찰된 시험 제품

5. 결과

○ 시험제품에 의한 평균 피부 자극 지수

평가기준에 따라 평가 후 평균 자극 지수를 계산식에 따라 계산하고 판정기준에 따라 피부 자극 강도를 평가하였다. 제품에 따른 safety zone, 피험자 20% 초과 빈도로 자극 유발 제품, 매회 판독시 +2 이상 자극 반응이 총 피험자의 10% 이상에서 관찰되는 시험제품 등 3가지 기준에 따라 최종 피부 자극 유발 여부를 판정하여 제품의 적부를 최종적으로 예측하여 표 8에 나타내었다.

피부 일차 자극 판독 결과

시료명	피부 자극 반응강도의 합			피부 자극 지수	피부 자극도 판정 등급	Safety zone	피험자 20% 초과	+2 이상 10% 이상	적부 판정	기타
	1 차	2 차	3 차
창이자 추출물	0.00	0.00	0.00	0.00	Slight	적합	적합	적합	적합
D.W. (음성대조)	0.00	0.00	0.00	0.00	Slight	적합	적합	적합	적합
1% SLS (양성대조)	0.00	2.00	1.50	0.97	Mild	부적합	적합	적합	적합

한편, 본 발명의 추출물들은 목적에 따라 여러 형태로 제형화가 가능하다. 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

(제제예 1)

수렴 화장수의 제조

정제수에 부틸렌 글리콜, 글리세린, 베타인, 구연산, 구연산나트륨을 첨가하여 교반한 후 용해시킨 다음, 에탄올에 향료, 폴리옥시에틸렌(60) 경화피마자유를 넣어 용해시킨 혼합물을 서서히 교반하면서 첨가하였다. 여기에 본 발명의 창이자 추출물, 레몬그라스 오일(제조사: SRI VENKATESH AROMAS 사용)을 첨가하고 충분히 교반하여 보관실에서 숙성시켰다. 하기 표 9에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
창이자 추출물	0.5
레몬그라스오일	0.1
부틸렌 글리콜	5.0
글리세린	1.0
폴리옥시에틸렌(60) 경화 피마자유	0.5
에탄올	4.0
베타인	1.0
베타글루칸	0.5
나이아신 아마이드	2.0
구연산	0.02
구연산 나트륨	0.06
보존제	미량
향료	미량
정제수	to:100

(제제예 2)

바디로션의 제조

본 발명에서 부틸렌 글리콜, 글리세린, 카르복시비닐폴리머, 아르기닌, 알란토인, 보존제 및 정제수를 70 내지 75℃까지 교반하면서 가열하였다. 여기에 75 내지 80℃에서 교반하여 가열시킨 스쿠알란, 부틸렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트, 소르비탄 스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 글리세릴스테아레이트, 쌀겨눈 오일, 세틸알코올 및 스테아릴글리시지티네이트 혼합물을 가하여 호모게나이져로 유화시킨 후, 교반하면서 45℃정도로 냉각하면서 창이자 추출물, 레몬그라스오일, 향료를 첨가하여 혼합한 다음, 30℃까지 냉각한 후 숙성시켜 영양화장수를 제조하였다. 하기 표 10에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
창이자 추출물	1.0
레몬그라스오일	0.2
부틸렌 글리콜	5.0
글리세린	5.0
스쿠알란	8.0
쌀겨눈오일	2.0
부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트	5.0
소르비탄스테아레이트	1.5
폴리소르베이트 60	1.5
글리세릴스테아레이트 에스이	0.5
세틸알코올	2.0
스테아릴글리시레티네이트	0.2
알란토인	0.1
소듐 하이아루네이트	0.2
나이아신아마이드	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
아르기닌	0.1
보존제	미량
향료	미량
정제수	to:100

(제제예 3)

에센스의 제조

피토스테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 디세틸포스페이트, 세라마이드, 세테아레스-4 및 콜레스테롤을 70~80℃까지 교반하여 용해한 다음, 정제수, 알란토인, 글리세린,산탄검, 베타글루칸 등을 70℃까지 교반 유화하여 냉각한 다음, 45℃에서 본 발명의 창이자 추출물, 향료를 첨가하여 혼합후 30℃까지 냉각시켜 숙성시켰다. 하기 표 11에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
창이자 추출물	1.0
레몬그라스오일	0.1
알란토인	0.1
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
세라마이드	0.7
세테아레스-4	1.2
에스에이치-올리고펩타이드-1	0.00001
에스에이치-폴리펩타이드-11	0.00001
에스에이치-폴리펩타이드-1	0.00001
에스에이치-폴리펩타이드-22	0.00001
콜레스테롤	1.5
디세틸포스페이트	0.4
1,3BG	5.0
베타글루칸	0.5
농글리세린	0.5
카르복시비닐폴리머	0.2
산탄검	0.2
방부제	미량
향료	미량
정제수	to:100

(제제예 4)

노인취용 크림

본 발명의 창이자 추출물,레몬그라스오일, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 베타글루칸, 베타인, 흰목이버섯추출물, 폴리글루타믹애씨드, 카르복시비닐폴리머, 아르기닌, 알란토인, 보존제 및 정제수를 70 내지 75 ℃까지 교반하면서 가열하였다. 여기에 75 내지 80℃에서 교반하여 가열시킨 스쿠알란, 해바라기씨오일, 호호바유, 소르비탄 스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세토스테아릴 알코올, 비즈왁스, 글리세릴스테아레이트 및 코코아버터 혼합물을 가하여 호모게나이져로 유화시킨 후, 교반하면서 45℃정도로 냉각하면서 피크노제놀,나이아신아마이드,아스코빌글루코사이드, 향료를 첨가하여 혼합한 다음, 30℃까지 냉각하여 제조하였다. 하기 표 12에서 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
창이자 추출물	1.0
레몬그라스오일	0.2
부틸렌 글리콜	8.0
글리세린	5.0
스쿠알란	10.0
포도씨유	3.0
부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트	5.0
소르비탄스테아레이트	1.5
폴리소르베이트 60	1.0
글리세릴스테아레이트	0.5
스테아릴글리시지네이트	0.2
코코아버터	2.0
비즈왁스	1.0
세토스테아릴알코올	3.0
아스코빌글루코사이드	0.5
알란토인	0.1
소듐 하이아루네이트	0.2
나이아신아마이드	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
아르기닌	0.1
보존제	미량
향료	미량
정제수	to:100

(제제예 5)

노인취용 클렌져

본 발명의 창이자 추출물,레몬그라스오일, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 미리스틱애씨드, 라우릭 애씨드, 알란토인, 보존제 및 정제수를 70 내지 75 ℃까지 교반하면서 가열하였다. 여기에 KOH를 가하여 호모게나이져로 유화시킨 후, 교반하면서 45℃정도로 냉각하면서 유비퀴논, 향료를 첨가하여 혼합한 다음, 30℃까지 냉각하여 제조하였다.

원료	함량(w/w%)
창이자 추출물	1.0
레몬그라스오일	0.2
디소듐코코암포디아세테이트	10
라우릭애씨드	8.0
미리스틱애씨드	5.0
포타슘하이드록사이드	10.0
라우라마이드디이에이	3.0
유비퀴논	0.1
몬터레이소나무껍질추출물	1.5
향료	1.0
알란토인	0.5
페녹시에탄올	0.2
디포타슘글리시리제이트	2.0
디소듐이디티에이	1.0
1,2 헥산디올	1.5
정제수	to:100

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예를 설명하였으나, 본 발명은 다양한 변화와 변경 및 균등물을 사용할 수 있으며, 상기 실시예를 적절히 변형하여 동일하게 응용할 수 있음이 명확하다. 따라서 상기 기재 내용은 하기 특허청구범위의 한계에 의해 정해지는 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

Claims (8)

1. 창이자 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.
   
2. 제 1항에 있어서,
   상기 창이자 추출물에 레몬그라스 오일 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.
   
3. 제 1항에 있어서,
   창이자 추출물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 10.0 중량% 함유하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.
   
4. 제 2항에 있어서,
   상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 창이자 추출물은 0.01 내지 10.0 중량%, 레몬그라스 오일 추출물은 0.01 내지 0.001~10.0 중량% 함유하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.
   
5. 제 1항 및 제 2항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 창이자 추출물은,
   a) 창이자를 에탄올로 추출하여 에탄올 추출물을 수득하는 단계; 및
   b) 상기 에탄올 추출물에 헥산과 에칠아세테이트를 순차적으로 가하고 분획하여 추출물을 수득하는 단계;를 포함하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.
   
6. 제 5항에 있어서,
   상기 a)단계는 40 내지 100℃에서 5 내지 48시간 동안 수행하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.
   
7. 제 5항에 있어서,
   상기 b)단계는 아세테히트 분획물을 1 내지 5회 분획하여 수득하는 단계를 포함하는 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.
   
8. 제 1항 및 제 2항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은;
   영양화장수, 유연화장수, 크림, 에센스, 클렌징폼, 클렌징젤, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 콘실 스틱, 용액, 겔, 고체, 현탁액, 마이크로에멀전, 마이크로 캡슐, 미세과립구, 이온형 소낭 분산제, 비이온형 소낭분산제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화된 천연물을 이용한 노인취 개선용 화장료 조성물.