KR20200060675A

KR20200060675A - 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물

Info

Publication number: KR20200060675A
Application number: KR1020190102844A
Authority: KR
Inventors: 최학주; 나상훈; 김훈수
Original assignee: (주)코코베리
Priority date: 2019-08-22
Filing date: 2019-08-22
Publication date: 2020-06-01

Abstract

본 발명은 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 천연 조성물로서, 구체적으로는 딸기 입과 줄기를 이용하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물에 관한 발명이다.
본 발명은 딸기의 줄기와 잎을 증류수에 넣고 끓이는 과정(1과정),
상기의 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물을 넣어 가온을 한 후 발효한 발효조성물을 수득하는 과정(2과정)을,
포함한 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 딸기의 줄기 잎 혼합물 100중량부에 증류수 200~2000중량부를 혼합하여 30분 내지 2시간 동안을 끓이는 과정,
상기의 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물 100~500ppm(parts per million)을 혼합하여 30~48시간을 발효하여 발효물을 형성하는 과정으로 수행되는 것을 특징으로 하는 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 방법에 의하여 제조된 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제공한다.

Description

미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물{a fermented composite with the function of whitening, antioxidation and wrinkle care}

본 발명은 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 천연 조성물로서, 구체적으로는 딸기 입과 줄기를 이용하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물에 관한 발명이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리화학적인 변화가 일어나며 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 프리라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화 될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 즉, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다.

특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐(collagen), 히알루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan) 및 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증반응과 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발 및 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 프리라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 프리라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생되어 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

노화에는 프리라디칼 뿐만 아니라 MMP라는 효소가 관여하는데 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 자외선 조사에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다.

따라서 노화방지 및 주름제거를 가진 물질들에 관한 연구가 활발히 진행되었으나, 기존의 화학물질들은 독성, 저활성, 용도의 한계성 및 과량복용에 따른 부작용 등의 여러 가지 문제로 사용에 제한을 받고 있어 부작용 가능성이 적은 소재를 개발하려는 일환으로 천연 식물에서의 유효 성분 추출하는 연구가 활발하다. 하지만 천연물 경우에도 안전성, 안정성 변색 가능성 등의 측면에서 화장품이나 의약품에 유효농도 이상으로 사용하는 데는 많은 문제점이 있으며, 만족할 만한 효과를 내지 못하는 실정이다.

유근피(Ulmus davidiana var japonica)는 느릅나무 뿌리의 껍질로 느릅나무 추출물을 이용한 면역억제제(한국등록특허 제10-0247567호), 항종양, 항염증 조성물(한국등록특허 제10-0065297호), 미백화장료 조성물(한국등록특허 제10-0348822호), 화장용 세정제 조성물(한국등록특허 제10-0163118호) 및 식용 음료 등에 대한 연구가 있으며, 유근피 추출물의 주름개선 효과 및 콜라겐 합성촉진 효과에 대해서는 본 발명자들에 의해 연구한 바가 있다. (한국등록특허 제10-0439939호)

불가사리 중에서 아므르 불가사리(Asterina amurensis) 또는 별 불가사리(Asterina pectinifera) 등의 추출물은 미백 및 자외선 차단효과(한국공개특허 제2011-0044485호) 및 항산화, 주름개선효과, 항여드름 및 항염증효과(한국공개특허 제2009-0025422호) 등 기능성 식품소재 및 기능성 화장품소재로 활용하기 위한 연구가 이루어 지고 있다.

또한 한국등록특허 제0987518호는 대두추출물 및 엽산을 포함하는 배지에 바실러스 서브틸리스를 접종하여 통성혐기적 조건에서 발효시키고, 발효 후 분자량 500 kDa 이하의 물질을 제거하여 제조된 고분자물질을 유효성분으로 포함하는 콜라겐 생합성 촉진 효과를 갖는 화장료 조성물을 개시하고 있고, 한국 공개특허 제2010-0020124호는 단일 균주에 의한 콩 발효물에 비해 비타민과 영양성분이 뛰어난 복합 김치유산균에 의한 콩 발효물을 유효성분으로 하는 주름개선에 효과적인 화장료 조성물을 개시하고 있으며, 한국 공개특허 제2011-0041178호는 발아콩과깨의 혼합물을 백국균, 황국균, 고초균 등으로 발효시킨 발효물을 유효성분으로 하는 주름개선에 효과적인 화장료 조성물을 개시하고 있다.

상기한 종래기술 및 선행기술은 천연의 재료를 이용하여 주름개선에 효과적인 면은 있으나, 미백 및 항산화에 효능이 미흡한 점이 있는바,

본 발명은 미백 및 항산화에 효능이 있으면서도 주름개선에 효과적인 딸기의 줄기와 잎을 발효하여 수득한 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 상기한 요구 및 문제점을 해결하기 위하여,

딸기의 줄기와 잎을 증류수에 넣고 끓이는 과정(1과정),

상기의 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물을 넣어 가온을 한 후 발효한 발효조성물을 수득하는 과정(2과정)을,

포함한 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 딸기의 줄기 잎 혼합물 100중량부에 증류수 200~2000중량부를 혼합하여 30분 내지 2시간 동안을 끓이는 과정,

상기의 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물 100~500ppm(parts per million)을 혼합하여 30~48시간을 발효하여 발효물을 형성하는 과정으로 수행되는 것을 특징으로 하는 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 상기한 방법에 의하여 제조된 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물은 종래기술에 비하여 미백 및 항산화에 효능이 현저히 높으면서도 주름개선에도 매우 효과적인 기능을 발휘하게 된다.

특히 본 발명에 따른 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물은 단순히 딸기 줄기 잎을 알코올 추출한 것에 비하여 현저히 미백 및 항산화에 효능이 있고 주름개선에도 현저히 높은 효과가 나타나게 된다.

도 1 내지 9는 본 발명에 따른 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물의 미백 항산화 및 주름개선 기능의 실험 결과를 보여주는 도면.

이하 본 발명을 도면을 참고하여 상세히 설명하고자 한다.

본 발명의 기술적 특징은 딸기의 줄기와 잎을 이용하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물 및 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하는 점에 있다.

본 발명의 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물은 경구 투여 용도 및 피부 피복에 의한 용도로 모두 사용이 가능하다.

본 발명은 딸기의 줄기와 잎을 증류수에 넣고 끓이는 과정을 수행한다.(1과정)

본 발명에서 사용하는 딸기는 통상의 쌍떡잎식물 이판화군 장미목 장미과의 여러해살이풀을 의미하며, 재배종 야생종을 모두 포함하는 개념이다.

한국에서 볼 수 있는 야생종 딸기에는 같은 속의 흰땃딸기(Fragaria nipponica)·땃딸기(F. yezoensis) 등이 있고, 유연종으로는 뱀딸기(Duchesnea charysantha)·좀딸기(Potentilla centigrana)·겨울딸기(Rubus buergeri)·수리딸기(R. corchorefolius)·산딸기(R. crateagifolius)·맥도딸기(R. longisepalus)·곰딸기(R. phoenicolasius)·멍석딸기(R. parvifolius)·멍덕딸기(R. idaeus)·거지딸기(R. sorbifolius)·복분자딸기(R. coreanus)·함경딸기(R. arcticus)·장딸기(R. hirsutus)·검은딸기(R. croceacantha)·가시딸기(R. hongnoensis)·줄딸기(R. oldhamii)·섬딸기(R. ribesioideus)·오엽딸기(R. japonicus)·단풍딸기(R. palmatus) 등이 있다.

재배종에는 촉성·반촉성·노지(露地)·억제 등의 재배형이 있고, 또 가공용으로 특별히 재배하기도 한다. 촉성재배는 12월부터 수확하는데, 특수한 품종을 선정하여 꽃눈분화를 촉진시키기 위해 고랭지에서 육묘(育苗)하거나 한랭사(寒冷紗)로 덮고 육묘하기도 한다.

본 발명은 바람직하게는 상기한 딸기의 줄기 또는/및 잎을 세척하여 준비한 딸기의 줄기 잎 혼합물 100중량부에 증류수 200~2000중량부를 혼합하여 30분 내지 2시간 동안을 끓이는 과정을 수행한다.

더욱 바람직하게는 딸기의 줄기 잎 혼합물 100중량부에 증류수 1000중량부를 혼합하여 1시간 동안을 끓이는 과정을 수행한다.

본 발명은 상기한 딸기의 줄기 잎 혼합물에 천연 강화 조성물을 혼합하여 추후 수득되는 발효 조성물의 주름개선 기능을 현저히 상승시키는 기능을 수행하는 점에 특징이 있다.

본 발명은 상기한 딸기의 줄기 잎 혼합물 100중량부를 기준으로 천연 강화 조성물을 5 ~ 15 중량부 혼합하는 것이 바람직하다.

본 발명의 상기한 천연 강화 조성물은 삼초, 황백, 황기, 방기, 천오두, 어성초, 금은화, 백지, 교맥, 백선피를 혼합하여 추출한 조성물을 의미한다.

상기한 천연 강화 조성물은 삼초 100중량부에 황백 80~120중량부, 황기 80~120중량부, 방기 80~120중량부, 천오두 80~120중량부, 어성초 80~120중량부, 금은화 80~120중량부, 백지 80~120중량부, 교맥 80~120중량부, 백선피 80~120중량부를 혼합하여 추출한 조성물을 의미한다.

상기한 천연 강화 조성물을 추출하는 방법으로는 상기의 혼합한 원재료 100 중량부에 70~85%[질량%] 에탄올 800~1000중량부를 넣고, 2~4시간 동안 환류 추출 하고 여액을 rotary evaporator를 이용하여 감압, 농축하는 방법으로 추출할 수 있으며 원재료 100중량부를 기준으로 천연 강화 조성물을 약 50~150중량부 정도를 수득할 수 있다.

본 발명은 상기에서 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물을 넣어 가온을 한 후 발효한 발효조성물을 수득하는 과정을 수행한다.(2과정)

본 발명은 바람직하게는 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물 100~500ppm(parts per million)을 혼합하여 30~48시간, 바람직하게는 36~40시간을 발효하여 발효물을 형성하는 과정을 수행한다.

본 발명의 상기한 균혼합물은 유산균, 효모균, 고초균, 상황버섯 균사체를 혼합하여 조성한 것을 의미한다.

바람직하게는 유산균 100중량부에 효모균 50~200중량부, 고초균 50~200중량부, 상황버섯 균사체 50~200중량부를 혼합하여 조성한 것을 의미한다.

본 발명은 상기와 같이 발효하여 형성한 발효물을 여과하는 과정을 수행하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 조성한다.(3과정)

또한 본 발명은 딸기의 줄기와 잎을 이용하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 천연 조성물 및 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 천연 조성물을 제조하는 방법을 제공할 수 있다.

본 발명은 딸기 잎과 줄기 100 중량부에 70~90% 에탄올 100~2,000 중량부를 넣어 2~4시간 동안 환류추출을 한 후 여과액을 rotary vacuum evaporator로 감압 농축하였다. 농축된 용액을 freeze dryer로 동결 건조하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 천연 조성물(SLSE)을 수득하게 된다.

본 발명은 아래의 실시예를 통하여 형성한 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물(FSLSE) 및 천연조성물(SLSE)을 실험하여 아래와 같은 결과를 도출하였다.

<실시예>

1. 발효조성물 및 대비조성물 수득

(1) 딸기 잎과 줄기 120 g에 물을 1200g을 넣고 1시간 동안 끓이는 과정을 수행한 것에 유산균, 효모균, 고초균, 상황버섯 균사체를 균등한 무게로 혼합한 균혼합물 0.3 g을 넣고 30도씨에서 38시간 발효한 후 필터링을 하여 추출물을 수득하였다.

이와 같이 수득한 추출물을 3시간 동안 환류 추출을 한 후 여과액을 rotary vacuum evaporator로 감압 농축하였다. 이와 같이 농축된 용액을 freeze dryer로 동결 건조하여 얻어낸 딸기 잎, 줄기 추출물 (Fermented strawberry leaf+stem extract 이하, FSLSE) 30.5g을 수득하고 초저온 냉동고 (-80℃)에서 보관하였다. 이 후 실험에 필요한 농도로 증류수에 희석해 사용하였다.(발효 후 시료)

(2) 딸기 잎과 줄기 120 g에 80% 에탄올 2,000 ㎖를 넣어 3시간 동안 환류추출을 한 후 여과액을 rotary vacuum evaporator로 감압 농축하였다. 농축된 용액을 freeze dryer로 동결 건조하여 얻어낸 딸기 잎, 줄기 추출물을 27.5 g (수율 22.9%)을 초저온 냉동고 (-80℃)에서 보관하였다. 이 후 실험에 필요한 농도로 증류수에 희석해 사용하였다.(발효 전 시료, 천연 조성물(SLSE, 대비조성물))

2. 실험방법

1) 세포 배양

B16F10 세포는 American Type Culture Collection(ATCC, U.S.A.)에서 구매하였으며, 10% fetal bovine serum(FBS)에 1% penicillin/streptomycin이 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 조건이 유지되는 세포배양기에서 배양하였고 2-3일 주기로 계대 배양하여 실험을 진행하였다.

2) 세포 생존율 측정

96-well plate에 B16F10 세포를 5×10⁴ cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양 하였다 실험을 하기 전에 새로운 배양액으로 교체하였고, FSLSE를 각각 25, 50, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하여 다시 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 10 ㎕의 EZ-Cytox 용액을 첨가하여 세포배양기에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 450 ㎚에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다.

3) 육안적 평가

6-well plate에 B16F10 세포를 3×10⁴ cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양 하였다 실험을 하기 전에 새로운 배양액으로 교체하였으며, FSLSE를 각각 25, 50, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후 37℃, 5% CO₂ incubator에서 1시간 배양한 다음 IBMX 100 uM를 처리하였다. 이후 37℃, 5% CO₂ incubator에서 48 시간 배양하였다. 배양 후 세포를 PBS로 세척하고 1,200 rpm에서 5분간 원심분리하여 육안적 평가를 진행하였다

4) 멜라닌 생성량 측정

6-well plate에 B16F10 세포를 3×10⁴ cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양 하였다 실험을 하기 전에 새로운 배양액으로 교체하였으며, FSLSE를 각각 25, 50, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리한 후 37℃, 5% CO₂incubator에서 1시간 배양한 다음 IBMX 100 uM를 처리하였다. 이후 37℃, 5% CO₂ incubator에서 48 시간 배양하였다. 배양 후 각 well를 PBS로 세척한 후 1 N NaOH 용액 400 ㎕을 첨가하고 60℃에서 1 시간 동안 용해한 후 405 ㎚에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 멜라닌 생성량을 백분율로 표시하였다.

5) DPPH radical 소거능 측정

발효 전 시료(SLSE)와 발효 후 시료(FSLSE)의 최종 농도가 1, 10, 100, 1,000 ㎍/㎖의 농도로 될 수 있게 희석시켰으며, 에탄올에 용해시킨 0.2 mM의 DPPH 용액 150 ㎕와 발효 전과 발효 후 시료를 각각 100 ㎕씩 혼합하여 37℃에서 30분간 반응 시켰다. 반응 후 517 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 대조군에는 증류수를 넣었으며 DPPH 용액의 대조군으로써는 에탄올을 넣어 보정값을 얻었다. DPPH 라디칼 소거능은 아래의 [표 1]식에 따라 계산하였다.

소거능 (%) = (	대조군의 흡광도 - 시료 첨가군의 흡광도	) × 100
	대조군의 흡광도

7) ABTS radical 소거능 측정

발효전 시료와 발효 후 시료(FSLSE)의 최종 농도가 1, 10, 100, 1,000 (㎍/㎖)의 농도로 될 수 있게 희석시켰으며, ABTS 용액은 7.4 mM ABTS (2,2-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid))와 2.6 mM potassium persulphate를 제조한 후, 암소에 하루 동안 방치하여 양이온 (ABTS*?*+)을 형성시킨 다음 732 ㎚에서 흡광도를 측정하여 흡광도 값이 1.5 이하가 나오도록 희석하고, 희석된 ABTS*?*+ 용액 150 ㎕와 FSLSE를 각각 5 ㎕ 혼합하고, 실온에서 10분간 반응시킨 후, 732 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 대조군에는 증류수를 넣었으며 대조군에 대한 ABTS 라디칼 소거능은 아래의 [표 2]식에 따라 계산하였다.

소거율 (%) = (1-	시료 첨가군의 흡광도	)× 100
	대조군의 흡광도

8) Elastase 저해활성 측정

발효전 시료와 발효 후 시료(FSLSE)의 최종 농도가 1, 10, 100, 1,000 (㎍/㎖)의 농도로 될 수 있게 희석시켰으며, 50 mM Tris-HCl buffer (pH 8.6)에 elastase와 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide을 각 농도에 맞게 용해시켜 준비하였다. FSLSE 40 ㎕에 2.5 U/㎖ 농도의 elastase을 40 ㎕씩 가하고 0.5 ㎎/㎖ 농도의 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide을 80 ㎕씩 첨가하여 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 445 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. Elastase 저해활성은 아래의 [표 3]식에 따라 계산하였다.

9) Collagenase 저해활성 측정

발효 전과 발효 후 시료(FSLSE)의 최종 농도가 1, 10, 100, 1,000 (㎍/㎖)의 농도로 될 수 있게 희석시켰으며, 4 mM CaCl₂가 첨가된 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.5)에 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg을 용해시켜 준비하였다. FSLSE 100 ㎕에 0.3 ㎎/㎖ 농도의 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg을 250 ㎕씩 가하고 0.2 ㎎/㎖ 농도의 collagenase를 150 ㎕씩 첨가하여 실온에서 20분간 반응시킨 후, 6% citric acid 500 ㎕와 ethyl acetate 1.5 ㎖을 첨가하여 320 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다. Collagenase 저해활성은 아래의 [표 4]식에 따라 계산하였다.

10) 통계처리

실험 결과는 SPSS 24.0의 independent two-sample t-test를 사용하여 통계처리 하였고 p<0.05, p<0.01 및 p<0.001 수준에서 그 유의성을 검정하였다.

3. 실험결과

(1) 세포생존율

세포생존율을 측정한 결과, 대조군을 1000±02%로 나타냈을 때, 발효 전 시료는 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖ 농도에서 각각 1036±04%, 1004±05%, 1059±11%, 1013±06%로 나타났으며, 발효 후 시료는 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖ 농도에서 각각 1034±07%, 997±06%, 1023±08%, 1032±04%로 나타나 발효 전, 후 시료 모두 세포에 대한 독성이 나타나지 않았다(도 1)

(2) 육안적 평가

육안적 평가를 측정한 결과, 발효 전 시료는 100 ㎍/㎖ 농도부터 육안적으로 구분할 수 있는 미백효능이 나타났으며, 발효 후 시료(FSLSE) 50 ㎍/㎖ 농도부터 미백효능이 나타났다(도 2)

(3) 멜라닌 생성량

멜라닌 생성량을 측정한 결과, 정상군을 277±06%, 대조군을 1000±05%로 나타냈을 때, 발효 전 시료는 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖ 농도에서 각각 862±15%, 839±03%, 614±18%, 510±16%로 나타났으며, 발효 후 시료는 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖ 농도에서 각각 859±02%, 706±09%, 551±10%, 465±15%로 나타나 발효 전, 후 시료 모두 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p<005, ** : p<001, *** : p<0001) 감소가 나타났다(도 3)

(4) DPPH radical 소거능

DPPH radical 소거능을 측정한 결과, 발효 전 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 31±22%, 151±28%, 916±07%, 915±05%로 나타났으며, 발효 후 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 42±19%, 182±24%, 915±07%, 917±05%로 나타나 발효 전, 후 시료 모두 농도 의존적인 DPPH라디컬 소거능의 증가가 나타났다(도 4)

(5) ABTS radical 소거능

ABTS radical 소거능을 측정한 결과, 발효 전 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 13±06%, 107±06%, 931±05%, 963±01%로 나타났으며, 발효 후 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 03±06%, 123±11%, 958±02%, 959±01%로 나타나 발효 전, 후 시료 모두 농도 의존적인 ABTS라디컬 소거능의 증가가 나타났다(도 5)

(6) Elastase 저해활성

Elastase 저해활성을 측정한 결과, 발효 전 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 2.2±1.3%, 14.6±0.7%, 45.5±0.7%, 65.1±2.7%로 나타났으며, 발효 후 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 5.8±0.9%, 23.0±1.4%, 52.2±1.0%, 73.4±0.4%로 나타나 발효 전, 후 시료 모두 농도 의존적인 elastase 저해활성의 증가가 나타났다(도 6).

(7) Collagenase 저해활성

Collagenase 저해활성을 측정한 결과, 발효 전 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 66±04%, 172±05%, 427±05%, 648±01%로 나타났으며, 발효 후 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 각각 79±01%, 216±03%, 469±02%, 720±05%로 나타나 발효 전, 후 시료 모두 농도 의존적인 collagenase 저해활성의 증가가 나타났다(도 7)

4. 결론

(1) 발효 전 시료와 발효 후 시료의 미백, 항산화, 주름개선 효능을 객관적으로 비교검증하기 위해 B16F10 세포에 IBMX를 처리하여 멜라닌생성량을 증가시킨 후 육안적 평가 및 멜라닌 생성량을 확인하였고 항산화 및 주름개선 효능 측정 결과 다음과 같은 결론을 얻었다(도 8, 도 9)

(2) 세포 생존율을 측정한 결과, 발효 전과 후 시료는 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖ 농도에서 99% 이상의 세포생존율이 나타났다.

(3) 육안적 평가 및 멜라닌 생성량을 측정한 결과, 발효 전 시료는 100 ㎍/㎖, 발효 후 시료는 50 ㎍/㎖의 농도부터 육안적으로 구분 가능한 미백효능이 나타났으며, 발효 전과 후 시료의 모든 농도에서 대조군에 비하여 유의성 있는 멜라닌 생성량의 감소가 나타났다.

(4) 항산화 효능을 측정한 결과, 발효 전과 후 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 농도의존적인 DPPH 및 ABTS radical 소거능의 증가가 나타났다.

(5) 주름개선 효능을 측정한 결과, 발효 전과 후 시료는 1, 10, 100, 1000 ㎍/㎖ 농도에서 농도의존적인 elastase 및 collagenase 저해활성의 증가가 나타났다.

(6) 결론

모든 결과를 종합해 볼 때, 발효 전과 후 시료는 99% 이상의 세포생존율을 통해 안전성이 확인되었으며, 육안적 평가 및 멜라닌 생성량 측정을 통해 유의적인 미백 효능을 검증하였다. 또한, 농도의존적인 항산화 및 주름개선 효능도 확인하였으며, 발효 후 시료는 모든 효능에 대해 발효 전 시료보다 우수한 효능이 확인이 되었다.

본 발명은 상기한 기능과 효능으로 이루어진 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물 및 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명은 천연 생물을 이용하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 천연 조성물을 생산, 제조, 판매, 유통, 연구하는 산업에 매우 유용하다.

또한 본 발명은 딸기의 줄기와 잎을 이용하여 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 천연 조성물을 생산, 제조, 판매, 유통, 연구하는 산업에 매우 유용하다.

Claims

딸기의 줄기와 잎을 증류수에 넣고 끓이는 과정(1과정),
상기의 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물을 넣어 가온을 한 후 발효한 발효조성물을 수득하는 과정(2과정)을,
포함한 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법.
제1항에 있어서,
딸기의 줄기 잎 혼합물 100중량부에 증류수 200~2000중량부를 혼합하여 30분 내지 2시간 동안을 끓이는 과정,
상기의 끓인 딸기 줄기 잎 혼합액에 균혼합물 100~500ppm(parts per million)을 혼합하여 30~48시간을 발효하여 발효물을 형성하는 과정으로 수행되는 것을 특징으로 하는 미백 항산화 및 주름개선 기능이 있는 발효 조성물을 제조하는 방법.