KR20200068416A

KR20200068416A - 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20200068416A
Application number: KR1020180155381A
Authority: KR
Inventors: 이남호; 조연정; 현주미; 김상숙; 박경진; 강석범
Original assignee: 제주대학교 산학협력단; 대한민국(농촌진흥청장)
Priority date: 2018-12-05
Filing date: 2018-12-05
Publication date: 2020-06-15
Anticipated expiration: 2038-12-05
Also published as: KR102688902B1

Abstract

감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물은 과산화수소 처리에 의해 유발되는 피부세포보호 효과를 가지며 HaCaT에서 FLG의 발현 및 HA 생성 촉진을 통한 보습 효과가 있다. 따라서, 상기 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 피부 보습 또는 피부 세포 보호용 화장료 조성물로 이용이 가능하다.

Description

감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition using unripe citrus unshiu extract containing citrus bio-gel}

본 발명은 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부세포 보호 및 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 기타 물리적, 화학적인 외부 환경의 자극으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 하지만, 피부는 신체의 가장 바깥쪽에 위치하기 때문에 태양에 의한 자외선, 기온변화로 인한 수분 부족과 같은 환경적 요인들에 노출되는데, 아무리 외부로부터의 바이러스 침투를 막아내는 피부일지라도 과도한 환경적 스트레스는 피부 자극을 유발하게 된다.

피부는 외부에서부터 순서대로 표피, 진피, 피하 조직의 3개 층으로 크게 구분되며, 표피는 인체 내부의 수분증발을 방지하는 중요한 역할을 한다. 표피의 각질층은 피부에서도 가장 외측에 존재하면서 피부 밖으로 수분과 전해질이 소실되는 것을 억제함으로써 피부의 건조를 막고 피부가 정상적인 생화학적 대사를 할 수 있는 환경을 제공한다. 또한 외부의 물리적 손상과 화학물질로부터 인체를 보호하거나 세균, 바이러스 등이 피부로 침범하는 것을 방지하는 중요한 역할을 한다. 정상 피부에서의 수분은 체내에 70%, 각질층에 20-30% 함유되어 있어 피부의 탄력성 및 유연성을 지탱해준다. 또한, 자연보습인자(NMP; Natural Moisturizing Factor)와 피지는 각질층에 존재하며 각질층의 수분 밸런스를 유지하는데 도움을 준다. NMF와 피지의 양이 균형이 잘 이루어진다면 피부는 촉촉함과 부드러운 상태를 유지한다.

상기 표피는 각질층, 과립층, 유극층, 기저층으로 이뤄지는데, 건강한 사람의 각질층에는 필라그린(Filaggrin, FLG) 단백질을 전구체로 하여 천연보습인자(Natural Moisturing Factor, NMF)가 생성되어 피부의 수분 유지를 돕는다. 상기 필라그린(filaggrin, filament aggregating protein)은 프로 필라그린(profilaggrin)이 분해됨으로써 생성되는 히스티딘이 풍부한 양이온 단백질로 각질형성세포 내에서 케라틴 필라멘트를 응집하여 피부장벽에 중요한 역할을 담당한다. 또한, 피부는 천연보습인자(natural moisturizing factor)를 갖고 있어 적절한 보습상태를 유지하며 주위 환경과 균형을 이루고 있다.

상기 필라그린은 케라틴, 인볼루크린(involucrin), 로시크린(locicrin) 등의 단백질과 함께 각질층(stratum corneum)의 형성에 중요한 역할을 하는 단백질이다. 주로 케라틴과의 결합으로 필라멘트의 형성에 관여하고, 각질층이 생성되는 과정에서 프로 필라그린(profilaggrin)에서, 필라그린(filaggrin), 천연보습인자(natural moisturizing factor; NMF) 등의 형태로 가공된다. 최종적으로는 천연보습인자를 이루게 되는데 이는 각질층의 20-30%(건조중량기준)를 이루게 되고, 수분을 흡수하는 성질이 뛰어나 각질층의 수분을 조절하는 습윤제(humectant)의 역할을 하게 된다. 이런 각질층에서의 수분 함유량은 각질층 형성에 중요한 여러 가지 효소들의 정상적으로 활동하는데 필수적인 요소이다. 따라서 필라그린의 발현 양의 감소는 피부장벽의 기능과 보습에 변화를 가져오게 되고 여러 가지 병변으로 이어지게 된다. 특히 정상적인 피부장벽의 형성은 외부의 자극에 대한 방어에 있어서 중요한 역할을 하게 된다.

이외에, 세포외 연결 조직에 존재하면서 피부를 구성하는 글리코사미노글리칸의 한종인 히알루론산 역시 수분 증발을 막는 장벽의 역할을 한다. 상기 히알루론산을 구성하는 아미노당은 수용성이기 때문에 효과적으로 수분과 결합하여 각질층의 수분을 유지하여 피부가 건조되는 것을 억제한다.

따라서, 피부의 보습을 유지하고 피부세포를 보호하기 위해서는 생성된 활성산소종에 의한 손상을 억제하여 피부 세포를 보호하여야 하며, 각질세포 단백질과 천연보습인자의 생성을 촉진하여 피부의 수분을 유지할 수 있어야 한다.

대한민국 특허공개공보 제10-2016-0104054호

본 발명의 목적은 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 포함하는 피부 보습 또는 피부 세포 보호용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 포함하는 피부 보습 또는 피부 세포 보호용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어 "감귤 바이오겔"은 감귤 착즙액에 미생물을 배양해 만든 물질을 말한다. 감귤 바이오겔은 조직이 균일하면서 틈새가 많아 새로운 물질과 결합할 수 있는 좋은 조건을 갖추고 있어 다양한 소재를 결합하여 기능성 화장품, 약품 재료로 산업화할 수 있는 장점이 있다.

상기 미생물은 글루콘아세토박터 속 (Gluconacetobater sp.) gel_SEA623-2(KACC91526P) 균주일 수 있다. 상기 SEA623-2 균주는 25~35℃, pH 2.5~7.0 조건에서 전배양하여 감귤과즙 배지에 접종할 수 있으며, 더욱 구체적으로 26~30℃, pH 3.5~5.0 범위에서 전배양할 수 있다.

상기 감귤과즙 배지는 산도가 pH 2.5~5.0 범위일 수 있으며, 구체적으로 pH 2.5~4.0 범위에 있는 것을 사용할 수 있다. 또한 상기 감귤과즙 배지는 당도가 9~13 brix 범위에 있는 것을 사용할 수 있다.

또한, 상기 감귤 과즙 배지로서 감귤 착즙액 뿐만 아니라, 감귤의 착즙 후 생성되는 감귤박에 당분해효소를 처리하고 발효시켜 얻은 발효액을 사용할 수 있으며, 상기 발효액 역시 산도가 pH 2.5~5.0 범위인 것을 사용할 수 있으며, 구체적으로 pH 3.0~4.0 범위에 있는 것을 사용할 수 있다. 또한 상기 발효액은 당도가 9~13 brix 범위에 있는 것을 사용할 수 있다.

본 발명의 용어 "감귤 미숙과"는 8월 15일부터 한달간 출하되는 온주밀감(Citrus unshiu) 미숙과를 이른다. 보통 감귤이라고 하면 온주밀감을 가리키며, 운향과에 속하는 과수로 온주귤이라고도 한다. 높이는 3~5 m이고 가지가 퍼지며 가시가 없다. 잎은 어긋나고 타원형으로 가장자리가 밋밋하거나 물결 모양 잔 톱니가 있다. 열매는 작은 공 모양으로 지름은 5~8 cm이며 노란빛을 띤 붉은색으로 익는다. 한국에서 가장 흔히 심으며 재배종으로는 조생종, 중생종, 만생종 등 10여 종류가 있다.

본 발명의 상기 감귤 미숙과 추출물은 물 또는 유기용매를 첨가하여 가용 추출한 용매추출물일 수 있고, 추출하는 데 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 본 발명에서 상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득될 수 있다. 또한, 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 구체적으로, 물, 저급알코올, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물은 감귤 미숙과를 용매추출 한 후, 이를 감귤 바이오겔에 혼합하고 용해시킨 추출물일 수 있다.

본 발명의 감귤 미숙과 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

1) 감귤 미숙과 과피 및 과육에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 상기 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;

3) 상기 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 감귤 미숙과 추출물을 제조하는 단계; 및

4) 상기 단계 3)의 감귤 미숙과 추출물을 감귤 바이오겔에 혼합하여 용해시키는 단계.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 감귤 미숙과 과피 및 과육은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 단계 1)에서 이에 제한되지는 않으나, 감귤 미숙과 과피 및 과육 이외에 잎 또는 가지를 모두 포함하여 추출하는 것일 수 있다.

상기 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 상기 알코올로는 C₁ 내지 C₄ 저급 알코올을 이용할 수 있고, 저급 알코올로는 에탄올을 이용할 수 있다. 추출방법으로는 진탕추출, 속슬렛(Soxhlet) 추출 또는 환류 추출을 이용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 용매를 건조된 감귤 미숙과 분량에 10 내지 30배 부피비(w/v)로 첨가하여 추출할 수 있다. 추출온도는 20℃ 내지 100℃일 수 있고, 구체적으로 20℃ 내지 40℃일 수 있고, 보다 구체적으로 실온일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48시간일 수 있으며, 구체적으로 15 내지 30시간 일 수 있으며, 더욱 구체적으로, 24시간일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회일 수 있으며, 구체적으로, 3 내지 4회 반복 추출할 수 있으며, 보다 구체적으로 3회 반복 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 4)의 감귤 바이오겔은 건조된 미숙과 추출물 분량에 5 내지 20 배의 중량비(w/w)로 첨가하여 혼합할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서, 상기 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물은 과산화 수소에 노출된 세포의 손상을 저해하고 독성을 저해(inhibition)하는 작용을 통해 피부 세포 보호 활성을 나타낼 수 있다.

또한, 상기 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물은 피부 장벽을 형성하고 수분증발을 방지 및 수분 유지에 관여하는 필라그린과 히알루론산 생성을 증가시켜 보습 효과를 가진다.

본 발명의 화장료 조성물은 전체 조성물 중량에 대하여 0.001 내지 100 중량％의 상기 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 포함할 수 있으며, 구체적으로는 0.01 내지 50 중량％의 상기 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 통상적으로 허용되는 성분들을 제한없이 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 구체적으로, 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

도 1은 HaCaT 세포배양 시스템에서 MTT assay를 통해 확인한 세포생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 과산화수소로 유도된 손상에 대한 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물의 세포보호 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 HaCaT 세포배양 시스템에서 WST-1 assay를 통해 확인한 세포생존율을 나타낸 그래프이다.
도 4는 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물의 농도에 따른 각질세포 단백질인 FLG의 발현량 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물의 농도에 따른 천연보습인자인 HA의 생성량 측정 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물 제조

실시예 1-1. 감귤 바이오겔 제조

감귤 바이오겔은 글루콘아세토박터 속(Gluconacetobater sp). gel_SEA623-2(KACC91526P) 균주를 이용하여 생산하였다. 상기 감귤 바이오겔을 생산하기 위하여, 당도 10 brix, 산도 pH 3.5의 온주밀감 착즙액(10%(v/v))을 포함하는 배지에 글루콘아세토박터 속 SEA623-2 균주를 1×10⁵ cell/ml 로 접종하였고, 25℃에서 20일간 호기성 조건에서 정치배양하였다. 그 결과, 상기 SEA623-2 균주의 초기 겔 생성 속도가 매우 뛰어나서 배양 2일부터 겔 막이 형성되기 시작하였으며, 20일 경과 후 생성된 감귤 바이오겔을 회수하여 사용하였다.

실시예 1-2. 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물 제조

감귤 미숙과 과피 및 과육은 제주특별자치도 국립특작과학원 감귤연구소에서 제공받아 준비하였다. 건조 및 분쇄된 감귤 미숙과 과피 및 과육 100 g을 70%(v/v) 에탄올(EtOH) 2 L에 넣고 실온에서 24 시간동안 교반하였다. 침출시킨 시료를 감압 여과 장치를 이용하여 여액만 취하였으며, 이와 같은 방법으로 분리한 잔사에 대하여 동일한 조건으로 2회 더 반복 실시하였다. 이후 여과하여 얻어진 여액은 40℃ 이하의 수욕 상에서 회전 농축기(rotary evaporator)로 농축한 후 건조하여 70% 에탄올 추출물 38.6 g을 수득하였다. 상기 수득한 70% 에탄올 추출물 1 g을 감귤 바이오겔 10 g에 혼합하여 용해시켜 실험에 사용하였다.

실시예 2. 세포배양

Immortalised human keratinocyte cell line인 HaCaT cell은 Korean Cell Line Bank (KCLB)로부터 분양받아 실험에 사용하였다. 1% penicillin/streptomycin (100 U/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin)과 10% fetal bovine serum (FBS)이 함유된 dulbecco's modified eagle’s medium (DMEM) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 조건으로 배양하였으며, 3일 간격으로 계대 배양을 시행하였다.

실시예 3. 과산화수소로 유도된 피부손상 억제 효과 측정

상기 실시예 1에서 얻은 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물의 과산화수소에 의한 피부세포손상 억제 효과를 확인하기 위하여, 상기 실시예 2에서 배양한 HaCaT 세포에 과산화수소를 처리하여 피부세포 손상을 유도하였고 시료의 세포보호 효과를 확인하기 위하여 시료를 처리한 뒤 MTT (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide) assay를 수행하여 세포독성을 평가하였다.

실시예 3-1. 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물의 세포독성 평가

실험에 사용될 시료의 농도를 정하기 위해 HaCaT 세포에 대하여 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물의 세포독성을 확인하였다. 세포를 96웰 플레이트에 3.0×10⁴cells/well로 분주하여 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기에서 24시간씩 배양하였다. FBS가 함유되지 않은 배지에 농도별로 시료를 처리하여 세포 배양 상등액을 교환한 후, 24시간 배양시키고 500 μg/mL의 농도로 MTT 용액을 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기에서 3시간 반응시켰다. 살아있는 세포와 반응하여 생긴 formazan 침전물에 DMSO를 가하여 용해시키고 microplate reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 넣지 않은 경우를 무처리군, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물 시료를 넣은 경우를 실험군으로 비교하여 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물의 농도별 세포독성을 측정하였다(도 1).

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물 0.0125~0.05 %(w/w) 농도에서 각질 세포(HaCaT cell)에 세포독성이 거의 없는 것을 확인하였다.

실시예 3-2. 과산화수소로 유도된 HaCaT 세포의 손상에 대한 세포보호 효과 측정

HaCaT 세포를 96웰 플레이트에 3.0×10⁴cells/well로 분주하여 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기에서 24시간씩 배양하였다. 세포 배양 상등액을 제거한 후, 세포에 손상을 주기 위해 과산화수소를 처리하여 세포 배양기에서 30분간 배양하였다. 상기 배양한 세포를 DPBS로 2회 세척하고 FBS가 함유되지 않은 배지에 시료를 세포 독성이 나타나지 않은 범위의 농도로 처리하여 24시간 배양한 뒤 MTT assay를 수행하였다. 과산화수소를 넣지 않은 경우를 무처리군, 시료를 넣지 않은 경우를 대조군으로 하였다. 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 넣은 것을 실험군으로 하고 대조군과 비교하여 시료의 농도별 세포보호 효과를 확인하였다(도 2).

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 과산화수소 처리에 의해 감소된 세포 생존이 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물 처리에 의해 회복되는 것을 확인하였다. 따라서, 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물이 과산화수소에 의해 유도된 피부 세포 손상을 억제하여 피부 세포 보호 효과가 있는 것을 확인하였다.

실시예 4. 피부보습 효과 측정

상기 실시예 1에서 얻은 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물의 피부보습 효과를 확인하기 위하여, 상기 실시예 2에서 배양한 HaCaT 세포에 대한 시료의 세포독성을 확인하였고 배양한 세포와 세포 배양 상등액을 이용해 필라그린(FLG, Filaggrin)의 발현량 및 히알루론산(HA, Hyaluronic acid)의 생성량을 확인하였다.

실시예 4-1. WST-1 방법에 의한 세포독성 평가

HaCaT 세포를 24웰 플레이트에 1.0×10⁵cells/well로 분주하여 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기에서 24시간씩 배양하였다. 세포 배양 상등액을 농도별로 시료를 처리한 배지로 교환한 후, 24시간 배양시키고 WST-1 용액을 well 당 10%(v/v) 첨가하여 세포 배양기에서 1시간 반응시켰다. 살아있는 세포와 반응하여 생긴 수용성 formazan 침전물을 microplate reader를 이용하여 440 nm에서 흡광도를 측정하였다. 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물을 넣지 않은 경우를 control, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물을 넣은 경우를 실험군으로 비교하여 감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물의 농도별 세포독성을 측정하였다(도 3).

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물 0.25~1 %(w/w) 농도에서 각질 세포(HaCaT cell)에 세포독성이 거의 없는 것을 확인하였다.

실시예 4-2. HaCaT 세포에서 FLG의 발현량 측정

상기 실시예 4-1에서 WST-1 용액을 처리한 웰 플레이트에 남아있는 배양액을 제거하고 phosphate buffered saline (PBS)로 2회 세척한 후, 0.5% EDTA를 처리하였다. 37℃에서 10분간 배양한 뒤, 세포를 걷어내고 원심분리하였다. 이후 얻어진 pellet에 PBS를 처리하고 -80℃와 실온에서 얼렸다 녹였다를 반복하여 세포를 깨었다. 이후 필라그린(FLG)의 생성량을 human filaggrin ELISA kit (Cusabio biotech co., LTD.)를 이용하여 수행하였으며, microplate reader를 이용하여 520 nm에서 흡광도를 측정하고 정량화하였다. 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물을 처리하지 않은 경우를 control, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물을 처리한 경우를 실험군으로 비교하여 시료의 농도별 필라그린(FLG, Filaggrin) 발현량을 측정하였다(도 4).

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물 처리에 의해 각질세포 단백질인 필라그린(FLG, Filaggrin) 발현이 증가하는 것을 확인하여, 피부의 수분 유지 효과가 증대된다는 것을 알 수 있었다.

실시예 4-3. HaCaT 세포에서 HA의 생성량 측정

상기 실시예 4-1에서 WST-1 용액을 처리하기 전의 세포 배양 상등액을 걷은 후 HA의 생성량을 human hyaluronic ELISA kit (Cusabio biotech co., LTD.)를 이용하여 수행하였으며, microplate reader를 이용하여 520 nm에서 흡광도를 측정하고 정량화하였다. 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물을 처리하지 않은 경우를 control, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물을 처리한 경우를 실험군으로 비교하여 시료의 농도별 HA 생성량을 측정하였다(도 5).

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 감귤 바이오겔을 포함한 감귤 미숙과 추출물 처리에 의해 천연보습인자인 히알루론산(HA, Hyaluronic acid) 생성이 증가하는 것을 확인하여 상기 추출물에 의해 피부 보습 효과가 있다는 것을 알 수 있었다.

Claims

감귤 바이오겔을 포함하는 감귤 미숙과 추출물을 포함하는 피부 보습 또는 피부 세포 보호용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 에탄올로 추출한 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
감귤 바이오겔은 건조된 감귤 미숙과 추출물에 5 내지 20 배의 중량비(w/w) 혼합한 것인, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것인, 화장료 조성물.